Submitted by Vinicius Panciera Tagliavini (viniciustagliavini@gmail.com) on 2018-04-21T17:38:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Vinícius Panciera Tagliavini.pdf: 3064208 bytes, checksum: 4c9144ee7408032982fc3216adac6c5a (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-04-23T17:37:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tagliavini_vp_me_bot.pdf: 3064208 bytes, checksum: 4c9144ee7408032982fc3216adac6c5a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-23T17:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tagliavini_vp_me_bot.pdf: 3064208 bytes, checksum: 4c9144ee7408032982fc3216adac6c5a (MD5) Previous issue date: 2018-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os parasitos do filo Myxozoa são endoparasitas obrigatórios que infectam peixes, anfíbios, répteis, mamíferos, aves aquáticas em diversas regiões do mundo, com mais de 2180 espécies descritas, estando entre os mais importantes patógenos de peixes, porém, pouco se conhece deste parasito em peixes do Brasil. Neste estudo foram realizadas coletas entre março e setembro de 2016, na qual foram coletados 30 exemplares de curimba (Prochilodus lineatus) e dezessete exemplares de lambari (Astyanax altiaparanae), oriundos do rio Batalha, em dois locais de coleta, um ponto de coleta no município de Reginópolis e outro ponto no município de Agudos, estado de São Paulo. Foram utilizadas análises morfológicas (microscopia de luz, histologia e análise ultraestrutural), técnicas de biologia molecular (PCR e sequenciamento) na descrição de duas espécies de Henneguya Duas espécies foram documentadas neste estudo, uma delas foi encontrada infectando o filamento primário da brânquia de P. lineatus e é descrita neste estudo como Henneguya prochilodus e outra espécie encontrada infectando o filamento secundário da brânquia de A. altiparanae, a qual foi proposto uma descrição expandida da Henneguya chydadea Barassa et al. (2003), previamente descrita utilizando análises morfológicas e histopatologia. Análise filogenética do gene 18S rDNA foi realizada para avaliar a relação filogenética dessas duas espécies de Henneguya com outras espécies de mixosporídeos da América do Sul e de outras regiões do mundo. / The Myxozoa parasites are obligate endoparasites that infect fish, amphibians, reptiles, mammals, waterfowl in several regions of the world, with more than 2180 described species, being among the most important fish pathogens, but little is known of this parasite in fish from Brazil. In this study were collected from March to September 2016, where 30 specimens of Curimba (Prochilodus lineatus) and seventeen specimens of lambari (Astyanax altiaparanae) from the Batalha River, in two collection sites, a collection point in the municipality of Reginópolis and another point in the municipality of Agudos, state of São Paulo. Morphological analyzes (light microscopy, histology and ultrastructural analysis), molecular biology techniques (PCR and sequencing) were used to describe two species of Henneguya. Two species were documented in this study, one of which was found infecting the primary filament of the gill of P. lineatus and is described in this study as Henneguya prochilodus and another species found infecting the secondary filament of the gill of A. altiparanae, which has been proposed an expanded description of Henneguya chydadea Barassa et al. (2003), previously described using morphological analysis and histopathology. Phylogenetic analysis of the 18S rDNA gene was performed to evaluate the phylogenetic relationship of these two species of Henneguya with other species of myxosporids from South America and other regions of the world. / Capes: 20400004

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:07:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3030_1.pdf: 2847320 bytes, checksum: 14db1ce74509f0bb0a52ad42a62e58dd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O conceito de uma taxonomia integrativa é uma ferramenta que utiliza marcadores moleculares de DNA, caracteres ecológicos e caracteres morfológicos, a fim de auxiliar na identificação da biodiversidade global. Os gêneros de Desmodoridae estão dispostos em seis subfamílias, por apresentarem características muito diferentes. Sendo assim, um estudo de taxonomia integrativa foi assim proposto para melhor entender a diversidade da família. Um novo gênero e uma nova espécie, Spirodesma magdae nov. gen. nov. sp., foram descritas, apresentando como características principais anfídeos uniespiral com fovea anfideal circular e cavidade bucal com três dentes de tamanho iguais. Com base em evidências morfológicas e moleculares, foram testadas as relações filogenéticas entre táxons representativos das 6 subfamílias. A análise de distância genética (neighbor-joining) mostrou que Desmodoridae é uma unidade genética coesa, porém subdivida em dois agrupamentos mais similares entre si. Apesar da coesão genética de Desmodoridae, as análises moleculares de máxima parcimônia (MP) e de inferência Bayesiana (IB) indicaram que a família parece ser polifilético. Molgolaimus demani e Prodesmodora spp., são grupos irmãos e parecem não pertencer a família Desmodoridae. Spirinia e Metachromadora se comportaram como grupos monofiléticos, entretanto este último parece não pertencer a subfamília Spiriniinae. Acanthopharynx se mostrou monofilético e grupo irmão de Desmodora communis, porém ambos se mostraram distantes genético-evolutivamente de D. pontica e D. ovigera. Xyzzors sp. parece fazer parte de Desmodoridae. Pelas análises moleculares, Stilbonematinae se mostrou polifilética devido à posição de Robbea hypermnestra, Eubostrichus topiarius e E. parasitiferus; entretanto a análise filogenética (MP) por meio dos dados morfológicos apresentou Stilbonematinae como monofilético. A análise de MP por dados morfológicos mostrou que das seis subfamílias de Desmodoridae, apenas três podem ser ditas como monofiéticas, Stilbonematinae, Molgolaiminae e Prodesmodorinae. Ainda se faz necessário compreender a evolução dos caracteres morfológicos e estabelecer quais apresentam sinais filogenéticos, uma vez que os dados moleculares se mostraram mais eficazes para o estudo da diversidade e evolução de Desmodoridae do que os caracteres morfológicos aqui utilizados

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-30T16:59:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação- Raphael Santana.pdf: 1198352 bytes, checksum: 2ddd13ab9df70bdaf76d80dd5d481f49 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T16:59:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação- Raphael Santana.pdf: 1198352 bytes, checksum: 2ddd13ab9df70bdaf76d80dd5d481f49 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / FACEPE / Actinobactérias são bactérias Gram-positivas formadoras de filamentos ramificados que se destacam pela produção de metabólitos secundários, como antimicrobianos, antitumorais, fitohormônios e corantes naturais. Diante disso, este trabalho teve o objetivo de determinar o potencial biotecnológico de actinobactérias da coleção UFPEDA contra Candida spp. Para avaliação da atividade biotecnológica, 32 actinobactérias foram testadas contra sete isolados clínicos de Candida spp. utilizando diferentes meios de cultura para o crescimento (ALA, ISP-4, AY, ISP-3) e temperaturas (37 ºC ou 45 ºC). No ensaio primário, foi evidenciada atividade apenas quando as actinobactérias foram cultivadas em meio ISP-3 a temperatura de 37 ºC. Dessas, apenas 2 linhagens (6,25 %) apresentaram atividade antifúngica com halo de inibição variando entre 11 mm e 18 mm. As duas linhagens produtoras de metabólitos secundários com atividades antifúngicas não apresentaram diferença estatística, por isso foi selecionada a linhagem G24 por apresentar um pigmento na cor vermelha para dar seguimento às análises. A fermentação da linhagem (G24) foi realizada para avaliar atividade antifúngica, biomassa e pH, durante 5 dias, utilizando diferentes meios (MPE, M1 e ISP-3),sendo tais parâmetros monitorados a cada 24 horas. O melhor meio para produção de metabólitos secundários foi ISP-3 fermentado durante 48 h em pH 7.0, sendo evidenciados halos de inibição de 13 a 18 mm e biomassa de 0,1 g/mL de meio. Estabelecidas às condições, foi realizada a extração do princípio bioativo, sendo evidenciada atividade apenas para biomassa quando extraído em acetato de etila. A concentração mínima inibitória (CMI) do extrato bruto variou de 125 μg/mL a 62,5 μg/mL para Candida spp testadas. Análise Cromatográfica do Extrato Bruto as frações semi-purificadas foram analisadas por cromatografia em camada delgada (CCD) sendo evidenciadas duas frações, uma com atividade antifúngica e outra um corante natural. As características morfológicas do isolado G24 foram analisadas por microscopia óptica, sendo observados esporos verticilados pertencente ao gênero Streptomyces. O gene 16S rDNA foi amplificado e enviado para sequenciamento, sendo identificada como Streptomyces sp. Diante destes resultados, podemos concluir que a linhagem (Streptomyces sp), isolado da rizosfera de Caesalpinia pyramidalis tul, do bioma Caatinga, apresenta uma significativa atividade antifúngica e necessita de estudos espectroscópios para caracterização do composto bioativo e do corante. / Actinobacteria are forming Gram-positive bacteria of branched filaments that stand out for the production of secondary metabolites such as antibiotics, antitumor, phytohormones and naturias dyes. Given this, this study aimed to determine the biotechnological potential of actinomycetes of UFPEDA collection against Candida spp. To evaluate the biotechnological activity, 32 actinomycetes were tested against seven clinical isolates of Candida spp., Using different culture media (ALA, ISP-4, AY, ISP-3) and temperatures (37 ° C and 45 ° C). In the primary test, activity was detected only when the actinomycetes were grown in ISP-medium 3 to a temperature of 37 ° C. Of these, only 2 strains (6.25%) showed antifungal activity with inhibition zone ranging between 11 mm and 18 mm. Fermentation of strain (G24) was used to evaluate antifungal activity, biomass and pH for 5 days, using different media (MPE M1 and ISP-3), these parameters being monitored every 24 hours. The best medium for production of secondary metabolites ISP-3 was fermented for 48 h at pH 7.0, being evidenced inhibition zones 13 to 18 mm and biomass of 0.1 g / ml medium. Established conditions, the extraction of bioactive principle has been performed and demonstrated activity only when biomass extracted into ethyl acetate. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the crude extract ranged from 125 mg / mL to 62.5 mg / mL for Candida spp tested. In chemical prospecting, semi-purified fractions were analyzed by thin layer chromatography (TLC) was evidenced two fractions, one with antifungal activity and one with a natural dye. The morphological characteristics of isolated G24 were analyzed by optical microscopy, observed verticilados spores belonging to the genus Streptomyces. The 16S rDNA gene was amplified and sent to sequencing, being identified as Streptomyces sp. Given these results, we can conclude that the line (G24) (Streptomyces sp), isolated from the rhizosphere of Caesalpinia pyramidalis tul, the Caatinga biome, presents a significant antifungal activity and requires spectroscopes studies to characterize the bioactive compound and the dye.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4416_1.pdf: 690757 bytes, checksum: 6e1d8fd2843b82ae7a0a60b516bd6c3c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram analisadas vinte linhagens de Beauveria bassiana isoladas de diferentes regiões e hospedeiros, quanto ao perfil de DNA, através da análise da região ITS do rDNA, de RAPD e Intron, para avaliação da diversidade genética e auxílio na caracterização. A região ITS1-5.8s-ITS2 do rDNA foram digeridas com as enzimas Eco RI, Dra I, Msp I e Hae III, onde a Eco RI e Dra I não apresentaram sítio de restrição e a Hae III e Msp I não apresentaram polimorfismo entre as linhagens, confirmando a espécie estudada. Para RAPD foram selecionados cinco primers OPX17, OPW4, OPW7, OPW19, 0PW20, que produziram um total de 442 bandas. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística pelo programa NTSYS.PC e construída uma matriz de similaridade utilizando o coeficiente de Jaccard, que gerou um dendrograma através do método de agrupamento UPGMA. A similaridade foi em torno de 70%. A análise do dendrograma mostrou a formação de quatro grupos, onde não houve correlação com o hospedeiro ou origem geográfica, embora duas linhagens isoladas de Nezara viridula e duas de Deois flavopicta tenham mostrado maior nível de similaridade. Os dados obtidos pela análise de Intron, mostraram o aparecimento de cinco grupos

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Coccidiodomycosis is a systemic infection, predominantly pulmonary, caused by the geophilic and dimorphic fungi, Coccidioides immitis and Coccidioides posadasii. In Brazil, coccidioidomycosis is associated with semi-arid areas in the Northeastern region of this country, which is considered one of the endemic areas of this disease in South America. These pathogens are morphologically indistinguishable species, but they exhibit molecular differences. Different molecular techniques have been described for the characterization of these species. The nuclear ribosomal DNA (rDNA) from Coccidioides spp. has been described as an important molecular marker for the identification, taxonomy and phylogeny. Currently, there are still shortages of maps for epidemiological approaches in order to direct the correlation between populations of Coccidioides spp. and the outbreaks of coccidiomycosis. Given the above, this study aimed at performing the molecular identification of 18 clinical and environmental isolates of C. posadasii, from Northeastern Brazil, maintained in the fungal collection of the Specialized Medical Mycology Center (CEMM), through PCR, as well as, to analyze the genetic diversity of these isolates by sequencing of 18S-28S regions of nuclear rDNA. The identification of the isolates was performed through PCR, using specific primers Coi9-1F and Coi9-R. The sequencing of the 18S-28S rDNA regions was performed through the method of chain termination by dideoxynucleotides, using the kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). The results confirmed the identification of all strains included in this study as belonging to the species C. posadasii. The phylogenetic tree based on 18S-28S rDNA region of C. posadasii from CEMM and Coccidioides spp. from Genbank. reveals the formation of a unique cluster encompassing the following strains CEMM 05-2-063, CEMM 05-2-064, CEMM 05-2-066 and CEMM 05-2-065, in a properly sustained branch, which apparently seems to group these isolates according to their geographical origin. The strains of C. posadasii showed lower genetic divergence in the ITS1 and ITS2 regions, when compared to strains of C. immitis. Analyses did not detect differences between strains of clinical origin and those of environmental origin. Further studies involving the analysis of fast evolving markers, such as microsatellites, can provide evidences to determine whether the groups found in this study are derived from a lineage of clonal reproduction. / A coccidioidomicose à uma infecÃÃo sistÃmica, predominantemente pulmonar, causada pelos fungos dimÃrficos e geofÃlicos, Coccidioides immitis e Coccidioides posadasii. No Brasil, a coccidioidomicose està associada a locais situados na zona semi-Ãrida da regiÃo Nordeste, considerada uma das Ãreas endÃmicas da doenÃa na AmÃrica do Sul. Estes patÃgenos consistem em espÃcies morfologicamente indistinguÃveis, mas que exibem diferenÃas moleculares peculiares. O DNA ribossÃmico nuclear (rDNA) de Coccidioides spp. tem sido apontado como importante marcador molecular utilizado na identificaÃÃo, taxonomia e filogenia. Atualmente, ainda hà escassez de mapas de abordagens epidemiolÃgicas para direcionar a correlaÃÃo entre as populaÃÃes de Coccidioides spp. com os surtos de coccidioidomicose. Diante do exposto, este estudo teve por objetivo, realizar a identificaÃÃo molecular de 18 isolados clÃnicos e ambientais de C. posadasii, oriundos do Nordeste brasileiro, mantidos na Micoteca do Centro Especializado em Micologia MÃdica (CEMM), atravÃs da tÃcnica de PCR, bem como, analisar a diversidade genÃtica destes isolados por meio do seqÃenciamento das regiÃes 18S-28S do rDNA nuclear. A identificaÃÃo dos isolados foi realizada por PCR utilizando os primers especÃficos Coi9-1F e Coi9-R. O sequenciamento das regiÃes 18S-28S rDNA foi realizado pelo mÃtodo da terminaÃÃo da cadeia pelo didesoxinucleotÃdeo, usando-se o kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). Os resultados confirmaram a identificaÃÃo de todas as cepas incluÃdas neste estudo, como pertencentes à espÃcie C. posadasii. A Ãrvore filogenÃtica, baseada na regiÃo 18S-28S rDNA de C. posadasii do CEMM, juntamente com sequÃncias de Coccidioides spp. depositadas no Genbank. revela a formaÃÃo de um cluster exclusivo englobando as cepas CEMM 05-2-063, CEMM 05-2-064, CEMM 05-2-065 e CEMM 05-2-066, em um ramo adequadamente sustentado, que aparentemente parece agrupar estes isolados segundo sua origem geogrÃfica. As cepas de C. posadasii apresentaram menor Ãndice de divergÃncia genÃtica nas regiÃes ITS1 e ITS2, quando comparadas Ãs cepas de C. immitis A anÃlise nÃo detectou diferenÃas entre as cepas de origem clÃnica e as de origem ambiental. Estudos posteriores envolvendo a anÃlise de marcadores de evoluÃÃo mais rÃpida, os microssatÃlites, podem fornecer evidÃncias para determinar se os agrupamentos encontrados neste estudo sÃo resultantes de uma linhagem de reproduÃÃo clonal.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:06:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6313_1.pdf: 1481990 bytes, checksum: 994600fb8e4272b6f803e8477c45a54d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Pseudomonas aeruginosa é uma bacteria Gram-negativa ubíqua e oportunista. Na rotina hospitalar, os marcadores fenotípicos nem sempre revelam a diversidade das bactérias distribuídas nos diversos setores, assim, aplicamos três métodos moleculares baseados na amplificação por PCR do locus de rDNA e tDNA para caracterizar a diversidade genética de linhagens de P. aeruginosa isoladas em um hospital público em Recife-PE, Brasil. O rDNA-PCR detectou 15% de variabilidade genética, contra 23% do tDNA-PCR e 23% do Duplex-PCR. O setor com maior diversidade genética foi a Unidade de Tratamento Intensivo do hospital, o qual apresentou quatro genótipos bacterianos diferentes. A ocorrência de linhagens de P. aeruginosa pertencentes ao mesmo genótipo e mesmo perfil de resistência a múltiplas drogas (MDR), em diferentes setores do hospital, sugere que há infecção cruzada entre pacientes. Os dados apresentados pelo rDNA-PCR, tDNA-PCR e Duplex-PCR, em associação ao perfil de susceptibilidade antimicrobiana provêem valiosas informações epidemiológicas para o controle de infecções hospitalares causadas por P. aeruginosa

Defective chromatin remodeling proteins are associated with both germline and acquired human disease. PHF6 is encoded by an X-linked gene that is predominantly expressed in the brain and thymus. Structurally, PHF6 contains nuclear and nucleolar localization sequences as well as two ZaP domains, which bind dsDNA. Germline mutations in PHF6 are the cause of BFLS, an XLID, while somatic PHF6 mutations have been identified in T-ALL, AML, and CML. Indeed, screening of a pediatric cohort of nine T-ALL patients revealed a novel H329Q mutation. In a further clinical analysis, T-ALL onset occurred in a 9-year old male BFLS patient with an R342X mutation, suggesting that BFLS might be a cancer predisposition syndrome. To better understand its protein function, recombinant PHF6 was co-immunoprecipitated for a mass spectrometry based proteomic screen. Notably, PHF6 co-purified with multiple constituents of the NuRD complex, an important transcriptional regulator during embryogenesis and lineage commitment with particularly well characterized responsibilities during lymphogenesis. PHF6-NuRD localization was restricted to the nucleoplasm, however PHF6 also co-purified with several ribosomal and splicing proteins. When examined further, PHF6 was found to be recruited to the nucleolus by an RNA-mediated interaction and co-localized within the subnucleolar FC and DFC compartments. ChIP-qPCR revealed that PHF6 binds to transcribed regions of rDNA, resulting in the repression of rRNA. These data thus present a model of PHF6 acting as a tumour suppressor by mediating both nucleoplasmic and nucleolar transcriptional events.

Chez les eucaryotes, les gènes d’ARNr 45S sont présents en un grand nombre de copies organisées dans des régions chromosomiques appelées NOR pour « Nucleolus Organizer Region ». Cependant, seule une fraction de ces gènes est activement exprimée et leur activation/répression est majoritairement contrôlée par des mécanismes épigénétiques. Parmi les facteurs requis pour l’expression de ces gènes, se trouve la nucléoline, une protéine majeure du nucléole. Chez A. thaliana, la protéine NUC1 est nécessaire pour le maintien de la méthylation et le control de l’expression de variants spécifiques des gènes d’ARNr. De manière intéressante, contrairement aux animaux et aux levures, le génome des plantes possède un deuxième gène codant la nucléoline : NUC2. Au cours de cette étude, nous avons montré que les deux gènes NUC1 et NUC2 sont nécessaires pour la survie de la plante. L’étude de plantes mutées pour le gène NUC2 a révélé que cette protéine est impliquée dans l’organisation et l’expression des ADNr mais par des mécanismes antagonistes à ceux de son homologue NUC1. En effet, l’absence de la NUC2 induit une hyperméthylation des ADNr ainsi qu’une réorganisation spatiale et une variation du nombre de copie des différents variants des gènes d’ARNr. Par ailleurs, la protéine NUC1 se lie aux gènes actifs alors que la protéine NUC2 est associée à la chromatine condensée en périphérie du nucléole. En parallèle, nous avons montré que l’expression des ADNr est affectée en réponse à la chaleur et que le gène NUC2 est fortement induit. L’ensemble de ces données suggèrent un potentiel rôle de la NUC2 dans la répression des gènes d’ARNr au cours du développement et en réponse au stress. / In eukaryotes, 45S rRNA genes are highly repeated and localize in chromosomal regions known as NOR for “Nucleolus Organizer Regions”. However, only a small proportion of these genes is transcriptionally active and their activation and/or repression depends on epigenetic mechanisms. One of the factors involved in rDNA expression is nucleolin, a major nucleolar protein. In A. thaliana, nucleolin protein NUC1 is required to maintain rDNA methylation and control expression of specific rDNA variants. Interestingly, in contrast to animals and yeast, plants encode a second nucleolin gene: NUC2. Here, we show that NUC1 and NUC2 genes are both required for plant survival. Analysis of nuc2 mutant plants reveals that NUC2 protein is required for rDNA organization and expression but with mechanisms antagonistic to those described for its homologue NUC1. In fact, loss of NUC2 induces rDNA hypermethylation and a spatial reorganization of rRNA genes with changes in copy numbers of rDNA variants. Moreover, NUC1 protein binds transcriptionally active rRNA genes while NUC2 protein associates with condensed chromatin in the periphery of the nucleolus. Furthermore, we show that rRNA gene expression is affected in response to heat shock and that the NUC2 gene is strongly induced. Altogether, our results suggest a potential role of NUC2 protein in rDNA repression during development and/or in response to stress.

Presented diploma thesis is focused on use of DGGE to analysis and identification of selected microorganisms. PCR-DGGE is a method that allows direct characterization of the microbial community in the natural environment without necessity of cultivation. A literature review is devoted to the principle of the method, current applications and its limitations too. In experimental part microbial DNA was isolated and used as a template for PCR reaction. Microbial DNA was then amplified using the universal eukaryotic primers that target the D1/D2 domain of the 26S subunit of ribosomal DNA. To improve specificity and sensitivity of detection nested PCR was chosen using outer and inner primer pairs. Generated amplicons (250 bp) were consequently separated by DGGE. The analysis of selected microorganisms by DGGE technique was performed after optimization of electrophoresis conditions (in particular the denaturing gradient extent and separation time). Despite the optimization, mutual differentiation among individual yeast strains was not possible since each reference strain was represented by several bands in the same positions. In conclusion DGGE profile obtained from wine musts is discussed. Present bands suggest the major presence of non-Saccharomyces yeasts, yeast-like strain A. pullulans is present in the minority and Saccharomyces yeasts are probably present too. The technique remains open for further optimization, particularly as regards the conditions of polymerase chain reaction.

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