Orientador: Roberta Okamoto / Coorientador: Leonardo Perez Faverani / Banca: Francisley Ávila Souza / Banca: Carlos Ferreira dos Santos / Resumo: Introdução: A hipertensão está associada a doenças cardiovasculares, mas também com alterações na qualidade óssea. A hipertensão, portanto, pode ser um fator de risco para a osseointegração. Estudos pré-clínicos sugerem que o losartan, um bloqueador dos receptores da angiotensina II amplamente utilizado para tratar a hipertensão, tem um efeito benéfico na consolidação do enxerto. No entanto, o efeito da hipertensão e do losartan na osteointegração permanece desconhecido. Material e Métodos: Aqui utilizamos ratos ratas espontaneamente hipertensivos (SHR) e ratos Wistar albinus normotensos que receberam losartan (30 mg / kg, p.o.) ou não tratados. Após uma semana, mini-implantes de titânio foram inseridos na tíbia. Sessenta dias após a implantação, a estabilidade do implante foi avaliada pela medição de torque de remoção considerada o ponto final primário. A tomografia computadorizada micro e a análise histomorfométrica foram parâmetros secundários. Resultados: o Losartan aumentou o torque de remoção no grupo SHR hipertenso para os níveis dos controles Wistar. Enquanto os parâmetros corticais da osseointegração permaneceram inalterados, losartan aumentaram a formação do osso medular. A micro tomografia computorizada revelou maior volume ósseo por volume de tecido e espessura trabecular nos ratos SHR tratados com losartan. A análise histomorfométrica mostrou ainda que o losartan aumentou significativamente a espessura do osso recém-formado na área medular em ratos SHR hipertensos. O losartan não alterou significativamente os parâmetros de osseointegração em ratos normotensos. Conclusões: Os dados apresentados sugerem que o antagonista dos receptores da angiotensina II losartan aumenta os parâmetros medulares da osseointegração no modelo da tíbia de ratos espontaneamente hipertensos. / Abstract: Background: Hypertension is associated with cardiovascular diseases but also with alterations in bone quality. Hypertension therefore might be a risk factor for osseointegration. Preclinical studies suggest that losartan, an angiotensin II receptor blocker widely used to treat hypertension, has a beneficial effect in graft consolidation. However, the effect of hypertension and losartan on osseointegration remains unknown. Methods: Here we used spontaneously hypertensive rats (SHR) and normotensive Wistar albinus rats receiving losartan (30 mg/kg, p.o.) or left untreated. After one week, titanium miniscrews were inserted into the tibia. Sixty days after implantation, implant stability was evaluated by removal torque measurement considered the primary endpoint. Micro computed tomography and histomorphometric analysis were secondary endpoints. Results: Losartan increased the removal torque in the hypertensive SHR group to levels of the Wistar controls. While the cortical parameters of osseointegration remained unchanged, losartan increased medullary bone formation. Micro computed tomography revealed a higher bone volume per tissue volume and trabecular thickness in the SHR rats treated with losartan. Histomorphometric analysis further showed that losartan significantly increased the thickness of newly formed bone in medullary area in hypertensive SHR rats. Losartan did not significantly alter the parameters of osseointegration in normotensive rats. Conclusions: The data presente... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Mais estudos sobre ações neuromoduladoras das angiotensinas no Sistema Renina Angiotensina (SRA) poderiam melhorar a compreensão de muitas funções e distúrbios do sistema nervoso central. A via de sinalização de PTEN/PI3K/AKT/mTOR que pode ser ativada pela Angiotensina-(1-7) desempenha um papel essencial na regulação do crescimento, metabolismo e sobrevivência das células. Este estudo teve como objetivo identificar e descrever a(s) via(s) metabólica(s) angiotensinérgica(s) principal(is) no hipocampo de camundongos (Mus musculus); Estudar a regulação da cascata de sinalização PTEN/PI3K/Akt/mTOR a partir da ativação com a Ang-(1-7) e realizar ensaios de inibição com o antagonista do receptor Mas. Analisamos também a expressão das enzimas chave da cascata de mTOR, com foco na enzima PTEN. Inicialmente foi realizada a identificação da via metabólica angiotensinérgica no hipocampo de camundongos através do estudo da atividade proteolítica angiotensinérgica com o extrato hipocampal de camundongos Swiss para identificar as enzimas e peptídeos formados a partir de AngI e/ou inibidores em HPLC. Para o estudo da regulação da cascata de sinalização PTEN/PI3K/Akt/mTOR a partir da ativação/inibição do SRA os experimentos foram realizados em células imortalizadas de neuroblastoma denominadas SH-SY5Y e western blotting para determinação dos níveis de PTEN e S6k (total e fosforilada). Nossos resultados mostraram que a caracterização do perfil do sistema angiotensinérgico hipocampal gerou resultados preliminares, em que a partir de AngI, o principal peptídeo formado foi a Ang-(1-7) e, em menor quantidade, a Ang II. Concluímos então que a AngII pode estar sendo formada por carboxipeptidades de forma geral e a Ang-(1-7) pode estar sendo formada por endopeptidases. Além disso, a Ang-(1-7) provoca a diminuição da expressão da PTEN total, bem como, a diminuição da fosforilação da PTEN, e nesse caso, a diminuição da fosforilação significa geração de mais proteína desfosforilada e aumento da atividade fosfatase resultando em efeitos neuroprotetores. Esses resultados nos permitiram observar que em células SH-S5SY, o mecanismo pelo qual a Ang-(1-7) ativa mecanismos neuroprotetores pode estar relacionado com a ativação da enzima PTEN. / Further studies on neuromodulatory actions of angiotensins in the Renin Angiotensin System (RAS) could improve understanding of many central nervous system functions and disorders. The PTEN/PI3K/AKT/mTOR signaling pathway that can be activated by Angiotensin-(1-7) plays an essential role in regulating cell growth, metabolism and survival. The aim of this study was to identify and describe the main angiotensinergic metabolic pathway(s) in the hippocampus of mice (Mus musculus); Study the regulation of the PTEN/PI3K/Akt/mTOR signaling cascade from activation with Ang-(1-7) and perform inhibition assays with the Mas receptor antagonist. We also analyzed the expression of the key enzymes of the mTOR cascade, focusing on the enzyme PTEN. Identification was initially performed of the angiotensinergic metabolic pathway in the mouse hippocampus was performed by studying the angiotensinergic proteolytic activity with the hippocampal extract of Swiss mice to identify the enzymes and peptides formed from AngI and/or inhibitors in HPLC. For the study of PTEN/PI3K/Akt/mTOR signaling cascade regulation from the activation/inhibition of RAS the experiments were performed on immortalized neuroblastoma cells called SH-SY5Y and western blotting for determination of PTEN and S6k levels (total and phosphorylated). Our results showed that the characterization of the profile of the hippocampal angiotensinergic system generated preliminary results, in which from AngI, the main peptide formed was Ang-(1-7) and, to a lesser extent, Ang II. We conclude that AngII may be formed by carboxypeptids in general and Ang-(1-7) may be formed by endopeptidases. In addition, Ang-(1-7) causes a decrease in total PTEN expression, as well as a decrease in PTEN phosphorylation, in which case the decrease in phosphorylation means generation of more dephosphorylated protein and increased phosphatase activity resulting In neuroprotective effects. These results allowed us to observe that in SH-S5SY cells, the mechanism by which Ang-(1-7) activates neuroprotective mechanisms may be related to the activation of the PTEN enzyme. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Orientador: Sandra Helena Penha Oliveira / Banca: Edilson Ervolino / Banca: Valeria Marçal Felix De Lima / Banca: Carlos Ferreira dos Santos / Banca: Carla Renata Sipert / Resumo: Introdução: A associação do Diabetes Mellitus (DM) e a doença periodontal (DP) compromete a resposta inflamatória e o metabolismo ósseo, tornando-se uma das principais complicações geradas por estas patologias. O sistema renina-angiotensina local (SRA) tem sido encontrado em tecidos periodontais, sugerindo que este sistema pode contribuir com a resposta inflamatória e com a destruição periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da renina sobre a resposta inflamatória de camundongos normoglicêmicos e diabéticos submetidos à periodontite induzida. Métodos: O diabetes foi induzido em dose única por estreptozotocina (200mg/kg) em camundongos Balb/c. Para indução da DP, camundongos normoglicêmicos e diabéticos, tratados ou não com Alisquireno (50mg/kg) (Alisk), receberam uma ligadura por meio de fio de seda ao redor do primeiro molar inferior que foi mantido durante 14 dias. Mandíbulas foram removidas para análises histomorfométricas e o tecido gengival foi coletado para avaliar a expressão gênica de componentes do SRA (angiotensinogênio (Agt), renina (Ren), enzima conversora de angiotensina 1 e 2 (Eca e Eca2), receptores de angiotensina 1 e 2 (ATR1 e ATR2), e receptor de angiotensina 1-7 (MasR), além de marcadores do reparo tecidual (Col1a1, Col2a1, Col3a1, fibronectina (Fn), fator de transformação beta (TGF-β) por RT-qPCR em tempo real. A análise imuno-histoquímica (IHC) teve como objetivo detectar e localizar os componentes do SRA no tecido gengival. Ensaios imunoe... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: The association of Diabetes Mellitus (DM) and Periodontal disease ( PD ) compromises inflammatory response and bone metabolism, becoming one of the main complications generated by these pathologies. The local renin - angiotensin system (RAS) has bee n found in periodontal tissues, suggesting that this system may contribute to the inflammatory response and to the periodontal destruction. The objective of this study was to evaluate the role of renin on the inflammatory response and bone metabolism of no rmoglycemic and diabetic mice submitted to induced periodontitis. Methods: Diabetes was induced using a single dose of streptozotocin (200mg / kg) in Balb/c mice. For PD induction, normoglycemic and diabetic mice were treated or not with Aliskiren (50mg/kg) (Alisk), and received a silk ligature around the lower first mandibular molar which was maintained for 14 days. Mandibles were harvested for histomorphometric analysis and gingival tissue was collected to evaluate the gene expression of RAS components (an giotensinogen (Agt), renin (Ren), angiotensin converting enzyme 1 and 2 (Eca and Eca2), angiotensin 1 and 2 receptor (ATR1 and ATR2), and angiotensin 1 - 7 receptor (MasR), besides tissue repair markers (Col1a1, Col2a1, Col3a1, fibronectin (Fn), and t ransf orming growth factor beta (TGF - β) by real - time RT - qPCR. Immunohistochemical analysis (IHC) aimed to detect and localize the components of RAS on gingival tissue. Immunoenzymatic assays (ELISA) were us... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A prevalência do sobrepeso e da obesidade está aumentando rapidamente no mundo e está presente em indivíduos de todas as faixas etárias, incluindo em crianças, e seus efeitos deletérios tendem a se prolongar até a vida adulta. Um dos modelos experimentais utilizados para se estudar os efeitos da obesidade é a dieta da cafeteria, com alimentos ricos em calorias. O acúmulo de gordura corporal tem sido implicado em distúrbios da função reprodutiva feminina. Resultados prévios evidenciaram uma instalação da puberdade precoce, alterações no ciclo reprodutivo e nas concentrações plasmáticas dos hormônios envolvidos no controle da reprodução e, em conseqüência, redução na ovulação e ciclos anovulatórios em mulheres e ratas que apresentam sobrepeso ou são obesas. A Angiotensina II (Ang II) tem sido relacionada com alterações patológicas associadas à obesidade e está envolvida no controle da reprodução feminina. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi investigar uma possível participação da Ang II, através da administração intraperitoneal (ip) diária a partir do desmame do antagonista losartan do receptor AT1 de Ang II sobre parâmetros reprodutivos, incluindo a instalação da puberdade, o ciclo estral, o comportamento sexual, a ovulação e o perfil dos esteróides gonadais, do hormônio luteinizante (LH) e da prolactina ao longo da tarde do proestro em ratas submetidas à ingestão da dieta da cafeteria a partir do desmame. Para avaliar os efeitos da dieta da cafeteria sobre o metabolismo, realizamos a medida do peso das gorduras retroperitoneal e perigonadal, das concentrações de triglicerídeos e colesteróis total, HDL (lipoproteína de alta densidade) e LDL (lipoproteína de baixa densidade) e realizamos um teste intravenoso (iv) de tolerância à glicose (ivGTT). O presente estudo confirmou dados obtidos em outros protocolos experimentais sobre a antecipação na data da instalação da puberdade e a redução na ovulação de fêmeas obesas, provavelmente induzida pela ausência dos picos de progesterona e do LH. Essas fêmeas apresentaram aumento de gorduras corporais, resistência à insulina, elevadas concentrações de triglicerídeos e LDL e redução no HDL. A administração crônica de losartan evitou a redução na ovulação verificada nas fêmeas do grupo cafeteria, assim como dos picos de LH e de progesterona na tarde do proestro. O losartan parece evitar parcialmente a instalação da puberdade precoce e prolonga ainda mais a fase de diestro 2 do ciclo estral induzidas pela dieta da cafeteria. O comportamento sexual das ratas não foi alterado pelo antagonista do receptor AT1 de Ang II. Esses resultados sugerem que a associação da administração precoce do antagonista losartan de Ang II em ratas submetidas à dieta da cafeteria a partir do desmame, previne a obesidade, da resistência à insulina e do aumento de triglicerídeos e colesterol LDL. O bloqueio dos receptores de Ang II ainda parece contribuir para a antecipação da puberdade e do prolongamento do ciclo estral observado nas fêmeas submetidas à dieta da cafeteria e contribui para inibir os efeitos da dieta sobre o pico pré-ovulatório de LH e de progesterona. / The prevalence of overweight and obesity is increasing rapidly in the world and encompasses individuals of all ages, including children, and its deleterious effects tend to extend to adulthood. One of the experimental models used to study the obesity effects is the cafeteria diet offered to rodents with the objective to develop obesity by the intake of foods rich in calories. Studies have shown that the intake of hypercaloric diets like cafeteria diet induces body fat storage, insulin resistance and improvement of triglycerides and cholesterol levels. Fat pad storage has been implicated in female reproductive disfunctions. Previous results evidenced a precocious onset of puberty, alterations in reproductive cycle and in plasma levels of hormones involved in the control of reproduction as well as a reduction on ovulation and anovulatory cycles in obese or overweight women and female rats. The Angiotensin II (Ang II) has been related to deleterious alterations associated with obesity and studies shown an involvement of Ang II in the control of female reproduction. In this manner, the objective of this work was to investigate a possible participation of Ang II, through the diary intraperitoneal (ip) administration from weaning of the AT1 receptor antagonist losartan, on the effect of the intake of cafeteria diet offered in early life on reproductive parameters, including the onset of puberty, estrous cycle, sexual behavior, ovulation rates and the profile of the gonadal steroids, luteinizing hormone (LH) and prolactin through the proestrous afternoon in female rats. To verify the effects of the cafeteria diet on the metabolism, we measure the retroperitoneal and perigonadal fat pad weights, the triglycerides and total cholesterol, HDL (high density lipoprotein) and LDL (ligh density lipoprotein) and we realized an intravenous (iv) glucose tolerance test (ivGTT). The present study confirmed data obtained in other experimental protocols on the earlier onset of puberty and a reduction of ovulation rates in female rats submitted to cafeteria diet, probably due to the absence of the preovulatory surge on proestrous afternoon of progesterone and of LH observed in this group. These females presented higher fat pads weights, insulin resistance, elevated levels of triglycerides and LDL and reduced levels of HDL. Losartan administration avoided the reduction in ovulation verified in females of cafeteria group, as well as the LH surge on proestrous afternoon. Losartan seems to prevent partially the precocious onset of puberty and promotes and additional increase in the phase 2 of diestrous induced by cafeteria diet. Sexual behavior of female rats was not altered by the antagonist of AT1 receptor of Ang II. These results suggest that the association of precocious administration of antagonist losartan of Ang II in female rats submitted to cafeteria diet since weaning, inhibits the occurrence of fat pad storage, of insulin resistance and of the improvement of triglycerides and cholesterol LDL levels. The Ang II seems to contribute to the earlier onset of puberty and to the prolongation of the estrous cycle of female submitted to cafeteria diet and the administration of losartan revert the inhibitory effects of the cafeteria diet on preovulatory LH and progesterone surges and, in consequence, the ovulation rates of these female rats is reestablished.

Made available in DSpace on 2015-05-27T13:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 696.pdf: 818532 bytes, checksum: afaf9db7453cd20cf3e35ea9351aef66 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / INTRODUÇÃO: Alguns fatores de risco (FR) clássicos para hipertensão arterial sistêmica (HAS) podem ser modulados por genes, o que subestima o impacto destes na etiopatogenia da HAS. Indivíduos que apresentam hipertensão reativa (HR) no teste ergométrico (TE) têm um risco maior de HAS que os normorreatores (NRs). A associação de polimorfismos nos genes do angiotensinogênio (AGT) e da enzima conversora da angiotensina (ECA) com HAS é controversa. O papel de tais polimorfismos na HR ainda não foi estudado. OBJETIVO: Avaliar a associação entre polimorfismos nos genes do AGT e da ECA com HR no TE e com HAS e analisar o papel da HR como marcador clínico para a HAS. MÉTODO: Trata-se de uma coorte histórica. Aninhada a essa, foi descrita uma série de casos de HR com um grupo de comparação interno. Hiperreatores (HRs) e NRs foram acompanhados por um tempo médio de 3,5 anos e a incidência de HAS foi avaliada entre os grupos. RESULTADOS: Os polimorfismos pesquisados não se constituíram FR para a HR nem para HAS. A incidência cumulativa de HAS nos HRs (21,6por cento) foi significativamente maior que aquela dos NRs (8,7por cento). Os hipertensos não diferiram dos normotensos em relação ao sexo, cor da pele, história familiar de HAS, DM e hipertrigliceridemia. Hipercolesterolemia foi significativamente mais freqüente nos hipertensos que nos normotensos. O risco de HAS foi crescente com o aumento da idade e do IMC. A prevalência de HR foi 12,6por cento. HRs não diferiram dos NRs em relação ao sexo, cor da pele, DM, hipercolesterolemia e hipertrigliceridemia. Apenas a idade, antecedentes familiares de HAS e o IMC apresentaram-se estatisticamente distintos. Na análise multivariada, apenas a idade e o IMC permaneceram associados com HR e com HAS. CONCLUSÕES: Entre os FR clássicos, apenas a idade e o IMC se associaram independentemente com HR e HAS. Os polimorfismos I/D do gene da ECA e M235T do gene AGT não apresentaram associação com HR ou HAS. Não foi observada associação independente da HR com HAS

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:40:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341907.pdf: 2941980 bytes, checksum: 8c52d8ea4e77e367bfc2b8274c8299dd (MD5) Previous issue date: 2016 / O sistema renina-angiotensina é descrito classicamente como um sistema responsável pelo controle do balanço hidroeletrolítico e da pressão arterial, sendo o principal efetor a angiotensina II que ativa os receptores para angiotensina II do tipo 1 (AT1). Recentemente, foi descrita a presença de todos os componentes do RAS no sistema nervoso central (SNC), ampliando a busca por possíveis funções fisiológicas e farmacológicas do sistema no SNC. No presente estudo foi investigado o envolvimento do receptor AT1, através do uso de seu antagonista seletivo losartana, sobre as alterações comportamentais associadas ao envelhecimento e à doença de Parkinson (DP). Além disso, foi investigada uma possível interação proteína-proteína entre os receptores AT1 e os receptores A2A para adenosina no SNC. Inicialmente observamos que o tratamento crônico durante 22 dias com a losartana (50 mg/kg, i.p.) foi capaz de reverter os prejuízos relacionados ao envelhecimento observados em camundongos C57Bl/6 com 13 meses de idade nos testes do escore neurológico de severidade (ENS), labirinto em Y e localização de objetos. Não foram observadas diferenças significativas nos níveis dos receptores AT1 e AT2 no córtex pré-frontal dos camundongos com 3 ou 13 meses de idade. Considerando o envelhecimento como um fator de risco para o desenvolvimento de doenças neurodegenerativas, investigamos os possíveis efeitos neuroprotetores do tratamento com losartana (50 mg/kg, i.p.) durante 22 dias em camundongos C57Bl/6 de 6 meses de idade administrados com MPTP (1 mg por narina) pela via intranasal, um modelo animal da DP. O pré-tratamento com losartana foi capaz de prevenir a morte de neurônios dopaminérgicos na via nigroestriatal bem como as alterações comportamentais induzidas pela administração do MPTP nos testes do ENS, labirinto em Y e localização de objetos. Não foram observadas alterações nos níveis dos receptores AT1 e AT2 no estriado dos animais tratados com MPTP ou losartana. Em adição, através de uma série de experimentos de biologia molecular com a técnica de transferência de energia por ressonância bioluminescente e ensaio de ligação por proximidade, demonstramos pela primeira vez a ocorrência de heterodímeros dos receptores metabotrópicos AT1 e A2A em células HEK-293-T e no estriado de camundongos. Por fim, demonstramos que a administração de doses sub-efetivas de losartana e KW-6002 (antagonista seletivo dos receptores A2A para adenosina) apresentam efeitos sinérgicos, reduzindo a frequência de movimentos involuntários mandibulares induzidos pela reserpina (1 mg/kg, s.c.) em camundongos Swiss adultos. Em conjunto, os resultados do presente estudo fornecem novas evidências do envolvimento dos receptores AT1 sobre os prejuízos comportamentais observados no envelhecimento e na DP. Além disso, o heterodímero dos receptores AT1/A2A caracterizado no presente estudo pode representar um novo alvo farmacológico para o tratamento de diversas doenças do SNC.<br> / Abstract : The classic renin-angiotensin system (RAS) is mainly associated with cardiovascular functions and body water regulation, with angiotensin II as its major effector acting through angiotensin II type AT1 receptor (AT1). It was recently disclosed the presence of all RAS components in the central nervous system (CNS), highlighting the putative physiological and pharmacological functions of RAS in the CNS. In this study, we investigated the involvement of the AT1 receptor using the selective antagonist losartan on the behavioral changes associated with aging and Parkinson's disease (PD) in mice. Moreover, a possible protein-protein interaction between the AT1 receptor and adenosine A2A receptors in the CNS was investigated. Initially we found that chronic treatment during 22 days with losartan (50 mg / kg, i.p.) was able to reverse the age-related behavioral deficits observed in C57BL/6 mice with 13 months-old of age in the neurological severity score (NSS), Ymaze and object location tests. No significant differences were observed in AT1 and AT2 receptors levels in the prefrontal cortex of mice with 3 or 13 months of age. Since aging is a major risk factor to the development of neurodegenerative diseases, we investigated possible neuroprotective effects of losartan (50 mg / kg, i.p.) treatment during 22 days in C57BL/6 mice with 6 months of age. The neurotoxin MPTP was administered by the intranasal route in a dose of 1 mg per nostril, used as an animal model of PD. The pre-treatment with losartan was able to prevent the dopaminergic neuronal death in the nigrostriatal pathway as well as the behavioral impairments induced by MPTP administration evaluated in NSS, Y-maze and object location tests. No changes in the striatal levels of AT1 and AT2 receptors was observed following the treatments with MPTP and losartan. In addition, through a series of molecular biology studies using bioluminescence resonance energy transfer and proximity ligation assays, we demonstrated for the first time the occurrence of heterodimers of metabotropic AT1 and A2A receptors in HEK-293-T cells and in the striatum of mice. Finally, we demonstrated that the coadministration of sub-effective doses of losartan and KW-6002 (a selective A2A receptor antagonist) induced synergistic effects by reducing the vacuous chewing movements induced by reserpine (1 mg / kg, s.c.) in Swiss adult mice. Altogether, these results provide new evidence of the role of AT1 receptors on the behavioral impairments associated with aging and PD. Furthermore, the AT1/A2A receptor heterodimer characterized in this study may represent a novel target for pharmacological treatment of various CNS disorders.

A prevalência do sobrepeso e da obesidade está aumentando rapidamente no mundo e está presente em indivíduos de todas as faixas etárias, incluindo em crianças, e seus efeitos deletérios tendem a se prolongar até a vida adulta. Um dos modelos experimentais utilizados para se estudar os efeitos da obesidade é a dieta da cafeteria, com alimentos ricos em calorias. O acúmulo de gordura corporal tem sido implicado em distúrbios da função reprodutiva feminina. Resultados prévios evidenciaram uma instalação da puberdade precoce, alterações no ciclo reprodutivo e nas concentrações plasmáticas dos hormônios envolvidos no controle da reprodução e, em conseqüência, redução na ovulação e ciclos anovulatórios em mulheres e ratas que apresentam sobrepeso ou são obesas. A Angiotensina II (Ang II) tem sido relacionada com alterações patológicas associadas à obesidade e está envolvida no controle da reprodução feminina. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi investigar uma possível participação da Ang II, através da administração intraperitoneal (ip) diária a partir do desmame do antagonista losartan do receptor AT1 de Ang II sobre parâmetros reprodutivos, incluindo a instalação da puberdade, o ciclo estral, o comportamento sexual, a ovulação e o perfil dos esteróides gonadais, do hormônio luteinizante (LH) e da prolactina ao longo da tarde do proestro em ratas submetidas à ingestão da dieta da cafeteria a partir do desmame. Para avaliar os efeitos da dieta da cafeteria sobre o metabolismo, realizamos a medida do peso das gorduras retroperitoneal e perigonadal, das concentrações de triglicerídeos e colesteróis total, HDL (lipoproteína de alta densidade) e LDL (lipoproteína de baixa densidade) e realizamos um teste intravenoso (iv) de tolerância à glicose (ivGTT). O presente estudo confirmou dados obtidos em outros protocolos experimentais sobre a antecipação na data da instalação da puberdade e a redução na ovulação de fêmeas obesas, provavelmente induzida pela ausência dos picos de progesterona e do LH. Essas fêmeas apresentaram aumento de gorduras corporais, resistência à insulina, elevadas concentrações de triglicerídeos e LDL e redução no HDL. A administração crônica de losartan evitou a redução na ovulação verificada nas fêmeas do grupo cafeteria, assim como dos picos de LH e de progesterona na tarde do proestro. O losartan parece evitar parcialmente a instalação da puberdade precoce e prolonga ainda mais a fase de diestro 2 do ciclo estral induzidas pela dieta da cafeteria. O comportamento sexual das ratas não foi alterado pelo antagonista do receptor AT1 de Ang II. Esses resultados sugerem que a associação da administração precoce do antagonista losartan de Ang II em ratas submetidas à dieta da cafeteria a partir do desmame, previne a obesidade, da resistência à insulina e do aumento de triglicerídeos e colesterol LDL. O bloqueio dos receptores de Ang II ainda parece contribuir para a antecipação da puberdade e do prolongamento do ciclo estral observado nas fêmeas submetidas à dieta da cafeteria e contribui para inibir os efeitos da dieta sobre o pico pré-ovulatório de LH e de progesterona. / The prevalence of overweight and obesity is increasing rapidly in the world and encompasses individuals of all ages, including children, and its deleterious effects tend to extend to adulthood. One of the experimental models used to study the obesity effects is the cafeteria diet offered to rodents with the objective to develop obesity by the intake of foods rich in calories. Studies have shown that the intake of hypercaloric diets like cafeteria diet induces body fat storage, insulin resistance and improvement of triglycerides and cholesterol levels. Fat pad storage has been implicated in female reproductive disfunctions. Previous results evidenced a precocious onset of puberty, alterations in reproductive cycle and in plasma levels of hormones involved in the control of reproduction as well as a reduction on ovulation and anovulatory cycles in obese or overweight women and female rats. The Angiotensin II (Ang II) has been related to deleterious alterations associated with obesity and studies shown an involvement of Ang II in the control of female reproduction. In this manner, the objective of this work was to investigate a possible participation of Ang II, through the diary intraperitoneal (ip) administration from weaning of the AT1 receptor antagonist losartan, on the effect of the intake of cafeteria diet offered in early life on reproductive parameters, including the onset of puberty, estrous cycle, sexual behavior, ovulation rates and the profile of the gonadal steroids, luteinizing hormone (LH) and prolactin through the proestrous afternoon in female rats. To verify the effects of the cafeteria diet on the metabolism, we measure the retroperitoneal and perigonadal fat pad weights, the triglycerides and total cholesterol, HDL (high density lipoprotein) and LDL (ligh density lipoprotein) and we realized an intravenous (iv) glucose tolerance test (ivGTT). The present study confirmed data obtained in other experimental protocols on the earlier onset of puberty and a reduction of ovulation rates in female rats submitted to cafeteria diet, probably due to the absence of the preovulatory surge on proestrous afternoon of progesterone and of LH observed in this group. These females presented higher fat pads weights, insulin resistance, elevated levels of triglycerides and LDL and reduced levels of HDL. Losartan administration avoided the reduction in ovulation verified in females of cafeteria group, as well as the LH surge on proestrous afternoon. Losartan seems to prevent partially the precocious onset of puberty and promotes and additional increase in the phase 2 of diestrous induced by cafeteria diet. Sexual behavior of female rats was not altered by the antagonist of AT1 receptor of Ang II. These results suggest that the association of precocious administration of antagonist losartan of Ang II in female rats submitted to cafeteria diet since weaning, inhibits the occurrence of fat pad storage, of insulin resistance and of the improvement of triglycerides and cholesterol LDL levels. The Ang II seems to contribute to the earlier onset of puberty and to the prolongation of the estrous cycle of female submitted to cafeteria diet and the administration of losartan revert the inhibitory effects of the cafeteria diet on preovulatory LH and progesterone surges and, in consequence, the ovulation rates of these female rats is reestablished.

Submitted by DAYANE PRISCILLA DE SOUZA QUEIROZ BARBOSA (dqueiroz227@gmail.com) on 2018-07-24T13:22:58Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO CORRIGIDA_DAYANE QUEIROZ_FINAL.pdf: 1529893 bytes, checksum: 30b2c37b998d53fa979be1010debfbb3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-07-24T19:46:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barbosa_dpsq_dr_araca_int.pdf: 1529893 bytes, checksum: 30b2c37b998d53fa979be1010debfbb3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-24T19:46:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barbosa_dpsq_dr_araca_int.pdf: 1529893 bytes, checksum: 30b2c37b998d53fa979be1010debfbb3 (MD5) Previous issue date: 2018-06-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A associação do Diabetes Mellitus (DM) e a doença periodontal (DP) compromete a resposta inflamatória e o metabolismo ósseo, tornando-se uma das principais complicações geradas por estas patologias. O sistema renina-angiotensina local (SRA) tem sido encontrado em tecidos periodontais, sugerindo que este sistema pode contribuir com a resposta inflamatória e com a destruição periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da renina sobre a resposta inflamatória de camundongos normoglicêmicos e diabéticos submetidos à periodontite induzida. Métodos: O diabetes foi induzido em dose única por estreptozotocina (200mg/kg) em camundongos Balb/c. Para indução da DP, camundongos normoglicêmicos e diabéticos, tratados ou não com Alisquireno (50mg/kg) (Alisk), receberam uma ligadura por meio de fio de seda ao redor do primeiro molar inferior que foi mantido durante 14 dias. Mandíbulas foram removidas para análises histomorfométricas e o tecido gengival foi coletado para avaliar a expressão gênica de componentes do SRA (angiotensinogênio (Agt), renina (Ren), enzima conversora de angiotensina 1 e 2 (Eca e Eca2), receptores de angiotensina 1 e 2 (ATR1 e ATR2), e receptor de angiotensina 1-7 (MasR), além de marcadores do reparo tecidual (Col1a1, Col2a1, Col3a1, fibronectina (Fn), fator de transformação beta (TGF-β) por RT-qPCR em tempo real. A análise imuno-histoquímica (IHC) teve como objetivo detectar e localizar os componentes do SRA no tecido gengival. Ensaios imunoenzimáticos (ELISA) foram utilizados para avaliar a produção de proteína C-reativa (CRP), CXCL2 e CCL8 no tecido gengival.Resultados: Observamos a indução da doença periodontal pela perda óssea e processo inflamatório induzido 14 dias após. O tratamento com Alisk diminui a resposta inflamatória e previniu a perda óssea induzida pela DP em camundongos normoglicêmicos e diabéticos. O mRNA para Ren foi indectetável no tecido gengival, sugerindo que os efeitos observados foram de renina sistêmica. DP aumentou a expressão de Agt, Eca em camundongos normoglicêmicos e diabéticos. A expressão de AT2R foi pronunciadamente maior apenas em camundongos normoglicêmicos com DP. O tratamento com Alisk reduziu a expressão gênica desses componentes de SRA, principalmente em camundongos diabéticos. Componentes SRA foram expressos em todas as camadas do epitélio, com marcação moderada dos componentes do tecido conjuntivo adjacentes, incluindo fibroblastos, células endoteliais e células de infiltrado inflamatório. Possivelmente a renina sistêmica exacerba a resposta inflamatória tanto em animais normoglicêmicos quanto em diabéticos, apresentando produção elevada de CRP, CXCL2 e CCL8 na presença de DP.O tratamento com Alisk reduziu a produção desses marcadores inflamatórios principalmente em camundongos diabéticos.Col1a1, Col1a2, Col3a1 e Fn foram aumentados em ambos os animais com DP, enquanto que a expressão de TGF-β foi reduzida. O tratamento com Alisk reduziu a expressão de Col1a1, Col1a2, e Fn, no entanto, aumentou a expressão de TGF-β. Conclusão: Os resultados aqui apresentados sugerem que a renina sistêmica exacerba a resposta inflamatória, contribuindo com a severidade da DP induzida, além de modular os principais componentes da matriz extracelular no tecido gengival. Finalmente, antagonizar a renina pode ser uma ferramenta importante, no futuro, para prevenir a perda óssea e principalmente a inflamação induzida pela periodontite . / Background: The association of Diabetes Mellitus (DM) and Periodontal disease ( PD ) compromises inflammatory response and bone metabolism, becoming one of the main complications generated by these pathologies. The local renin - angiotensin system (RAS) has bee n found in periodontal tissues, suggesting that this system may contribute to the inflammatory response and to the periodontal destruction. The objective of this study was to evaluate the role of renin on the inflammatory response and bone metabolism of no rmoglycemic and diabetic mice submitted to induced periodontitis. Methods: Diabetes was induced using a single dose of streptozotocin (200mg / kg) in Balb/c mice. For PD induction, normoglycemic and diabetic mice were treated or not with Aliskiren (50mg/kg) (Alisk) , and received a silk ligature around the lower first mandibular molar which was maintained for 14 days. Mandibles were harvested for histomorphometric analysis and gingival tissue was collected to evaluate the gene expression of RAS components (an giotensinogen (Agt), renin (Ren), angiotensin converting enzyme 1 and 2 (Eca and Eca2), angiotensin 1 and 2 receptor (ATR1 and ATR2) , and angiotensin 1 - 7 receptor (MasR) , besides tissue repair markers (Col1a1, Col2a1, Col3a1, fibronectin (Fn), and t ransf orming growth factor beta (TGF - β) by real - time RT - qPCR. Immunohistochemical analysis (IHC) aimed to detect and localize the components of RAS on gingival tissue. Immunoenzymatic assays (ELISA) were used to evaluate the production of CXCL2, CCL8 and CRP on gingival tissue. Results: We observed the induction of periodontal disease by bone loss and inflammatory process 14 days later. Alisk treatment decrease d the inflammatory response and prevents PD - induced bone loss in normoglycemic and diabetic mice. The mRNA for Ren was indectable o n gingival tissue, suggesting that the effects were due to systemic renin. PD increased of Agt, Eca e xpression in normoglycemic and diabetic mice. AT2R expression was markedly increased only in normoglycemic mice with PD. Alisk tre atment reduced the gene expression of these RAS components, especially in diabetic mice. SRA components were expressed in all layers of the epithelium, with moderate labeling on adjacent connective tissue components, including fibroblasts, endothelial cell s and inflammatory infiltrate cells. Systemic renin exacerbate d the inflammatory response in both normoglycemic and diabetic models, presenting high production of CRP, CXCL2 , and CCL8 in the presence of PD. Alisk treatment reduced th ese inflammatory respon se mainly in diabetic mice. Col1a1, Col1a2, Col3a1 , and Fn were increased in both PD models, whereas TGF - β expression was reduced. Treatment with Alisk reduced the expression of Col1a1, Col1a2, and Fn, however, increased expression of TGF - β . Conclusion: Th e results suggest that systemic renin can exacerbate the inflammatory response, contributing to the severity of induced - PD, and can modulate the main components of the extracellular matrix on gingival tissue. Finally , antagonizing renin may be an important tool in the future to prevent bone loss and mainly inflammation in induced - periodontitis. / 15/03965-2

A prevalência do sobrepeso e da obesidade está aumentando rapidamente no mundo e está presente em indivíduos de todas as faixas etárias, incluindo em crianças, e seus efeitos deletérios tendem a se prolongar até a vida adulta. Um dos modelos experimentais utilizados para se estudar os efeitos da obesidade é a dieta da cafeteria, com alimentos ricos em calorias. O acúmulo de gordura corporal tem sido implicado em distúrbios da função reprodutiva feminina. Resultados prévios evidenciaram uma instalação da puberdade precoce, alterações no ciclo reprodutivo e nas concentrações plasmáticas dos hormônios envolvidos no controle da reprodução e, em conseqüência, redução na ovulação e ciclos anovulatórios em mulheres e ratas que apresentam sobrepeso ou são obesas. A Angiotensina II (Ang II) tem sido relacionada com alterações patológicas associadas à obesidade e está envolvida no controle da reprodução feminina. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi investigar uma possível participação da Ang II, através da administração intraperitoneal (ip) diária a partir do desmame do antagonista losartan do receptor AT1 de Ang II sobre parâmetros reprodutivos, incluindo a instalação da puberdade, o ciclo estral, o comportamento sexual, a ovulação e o perfil dos esteróides gonadais, do hormônio luteinizante (LH) e da prolactina ao longo da tarde do proestro em ratas submetidas à ingestão da dieta da cafeteria a partir do desmame. Para avaliar os efeitos da dieta da cafeteria sobre o metabolismo, realizamos a medida do peso das gorduras retroperitoneal e perigonadal, das concentrações de triglicerídeos e colesteróis total, HDL (lipoproteína de alta densidade) e LDL (lipoproteína de baixa densidade) e realizamos um teste intravenoso (iv) de tolerância à glicose (ivGTT). O presente estudo confirmou dados obtidos em outros protocolos experimentais sobre a antecipação na data da instalação da puberdade e a redução na ovulação de fêmeas obesas, provavelmente induzida pela ausência dos picos de progesterona e do LH. Essas fêmeas apresentaram aumento de gorduras corporais, resistência à insulina, elevadas concentrações de triglicerídeos e LDL e redução no HDL. A administração crônica de losartan evitou a redução na ovulação verificada nas fêmeas do grupo cafeteria, assim como dos picos de LH e de progesterona na tarde do proestro. O losartan parece evitar parcialmente a instalação da puberdade precoce e prolonga ainda mais a fase de diestro 2 do ciclo estral induzidas pela dieta da cafeteria. O comportamento sexual das ratas não foi alterado pelo antagonista do receptor AT1 de Ang II. Esses resultados sugerem que a associação da administração precoce do antagonista losartan de Ang II em ratas submetidas à dieta da cafeteria a partir do desmame, previne a obesidade, da resistência à insulina e do aumento de triglicerídeos e colesterol LDL. O bloqueio dos receptores de Ang II ainda parece contribuir para a antecipação da puberdade e do prolongamento do ciclo estral observado nas fêmeas submetidas à dieta da cafeteria e contribui para inibir os efeitos da dieta sobre o pico pré-ovulatório de LH e de progesterona. / The prevalence of overweight and obesity is increasing rapidly in the world and encompasses individuals of all ages, including children, and its deleterious effects tend to extend to adulthood. One of the experimental models used to study the obesity effects is the cafeteria diet offered to rodents with the objective to develop obesity by the intake of foods rich in calories. Studies have shown that the intake of hypercaloric diets like cafeteria diet induces body fat storage, insulin resistance and improvement of triglycerides and cholesterol levels. Fat pad storage has been implicated in female reproductive disfunctions. Previous results evidenced a precocious onset of puberty, alterations in reproductive cycle and in plasma levels of hormones involved in the control of reproduction as well as a reduction on ovulation and anovulatory cycles in obese or overweight women and female rats. The Angiotensin II (Ang II) has been related to deleterious alterations associated with obesity and studies shown an involvement of Ang II in the control of female reproduction. In this manner, the objective of this work was to investigate a possible participation of Ang II, through the diary intraperitoneal (ip) administration from weaning of the AT1 receptor antagonist losartan, on the effect of the intake of cafeteria diet offered in early life on reproductive parameters, including the onset of puberty, estrous cycle, sexual behavior, ovulation rates and the profile of the gonadal steroids, luteinizing hormone (LH) and prolactin through the proestrous afternoon in female rats. To verify the effects of the cafeteria diet on the metabolism, we measure the retroperitoneal and perigonadal fat pad weights, the triglycerides and total cholesterol, HDL (high density lipoprotein) and LDL (ligh density lipoprotein) and we realized an intravenous (iv) glucose tolerance test (ivGTT). The present study confirmed data obtained in other experimental protocols on the earlier onset of puberty and a reduction of ovulation rates in female rats submitted to cafeteria diet, probably due to the absence of the preovulatory surge on proestrous afternoon of progesterone and of LH observed in this group. These females presented higher fat pads weights, insulin resistance, elevated levels of triglycerides and LDL and reduced levels of HDL. Losartan administration avoided the reduction in ovulation verified in females of cafeteria group, as well as the LH surge on proestrous afternoon. Losartan seems to prevent partially the precocious onset of puberty and promotes and additional increase in the phase 2 of diestrous induced by cafeteria diet. Sexual behavior of female rats was not altered by the antagonist of AT1 receptor of Ang II. These results suggest that the association of precocious administration of antagonist losartan of Ang II in female rats submitted to cafeteria diet since weaning, inhibits the occurrence of fat pad storage, of insulin resistance and of the improvement of triglycerides and cholesterol LDL levels. The Ang II seems to contribute to the earlier onset of puberty and to the prolongation of the estrous cycle of female submitted to cafeteria diet and the administration of losartan revert the inhibitory effects of the cafeteria diet on preovulatory LH and progesterone surges and, in consequence, the ovulation rates of these female rats is reestablished.

O sistema renina-angiotensina (SRA) circulante é um sistema endócrino que promove a produção de angiotensina (Ang) II, a qual exerce seus efeitos pela interação com receptores específicos. O conceito clássico do SRA circulante está sendo modificado, pois tem sido demonstrada a existência de sistemas locais capazes de gerar angiotensinas de forma independente do SRA circulante em vários tecidos e órgãos. Trabalhos recentes sugerem a existência de alguns componentes do SRA em tecido gengival e fibroblastos gengivais de diferentes espécies. Porém, não são encontrados na literatura achados inequívocos sobre a presença de importantes componentes do SRA, tais como renina e angiotensinogênio, no tecido gengival de rato. Portanto, os objetivos do presente trabalho foram: 1) estudar a expressão e localização de componentes do SRA no tecido gengival de rato e 2) estudar in vitro a funcionalidade do SRA local em homogenato de tecido gengival de rato quanto à formação de Ang II e outros peptídeos vasoativos a partir de precursores de Ang II. Transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RTPCR) foi utilizada para avaliar a expressão de RNAm. Análise imunohistoquímica foi utilizada para detecção e localização de renina no tecido gengival de rato. Um método fluorimétrico padronizado com o tripeptídeo Hipuril-Histidina-Leucina (Hip-His-Leu) foi usado para medir a atividade da ECA em homogenatos de tecido gengival de rato. A técnica de cromatografia líqüida de alto desempenho (HPLC) foi usada para analisar os produtos formados após a incubação de homogenatos de tecido gengival de rato com Ang I ou tetradecapeptídeo substrato de renina (TDP). RT-PCR revelou a expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio, ECA e receptores de Ang II (AT1a, AT1b e AT2) em tecido gengival; em fibroblastos cultivados de tecido gengival foi observada expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio e receptor AT1a. A técnica de imunohistoquímica demonstrou a existência de renina em vasos de tecido gengival de rato. Atividade da ECA foi detectada por meio do ensaio fluorimétrico (4,95±0,89 nmol His-Leu/g.min). Quando Ang I foi usada como substrato, análises de HPLC mostraram a formação de Ang 1-9 (0,576±0,128 nmol/mg.min), Ang II (0,066±0,008 nmol/mg.min) e Ang 1-7 (0,111±0,017 nmol/mg.min), enquanto que os mesmos peptídeos (0,139±0,031; 0,206±0,046 e 0,039±0,007 nmol/mg.min, respectivamente) e Ang I (0,973±0,139 nmol/mg.min) foram formados quando TDP foi usado como substrato. Adicionalmente, análises de HPLC revelaram a ausência de enzimas que degradam Ang II em homogenatos de tecido gengival de rato. Em conclusão, os resultados apresentados neste trabalho mostram claramente a existência de um SRA local em tecido gengival de rato, que é capaz de gerar Ang II e outros peptídeos vasoativos in vitro. Estudos adicionais são necessários para elucidar o papel deste sistema local no tecido gengival de rato. / Systemic renin-angiotensin system (RAS) promotes the plasmatic production of angiotensin (Ang) II, which acts through the interaction with specific receptors. The concept of this classic circulating RAS has been modified since there is growing evidence that local systems in various tissues and organs are capable of generating angiotensins independently of the circulating RAS. Recent works suggest the existence of some RAS components in the gingival tissue and cultured gingival fibroblasts of different species, but there is paucity of data in the literature regarding the unequivocal existence of crucial RAS components, such as renin and angiotensinogen, in the rat gingival tissue. Therefore, the aims of the present work were to: 1) study the expression and localization of RAS components in the rat gingival tissue and 2) evaluate the in vitro production of Ang II and other peptides catalyzed by rat gingival tissue homogenates incubated with different precursors of Ang II. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to assess mRNA expression. Immunohistochemical (IHC) analysis aimed to detect and localize renin in the rat gingival tissue. A standardized fluorimetric method with the tripeptide Hippuryl-Histidyl-Leucine (Hip-His-Leu) was used to measure tissue ACE activity in rat gingival tissue homogenates. High performance liquid chromatography (HLPC) was used to analyze the products formed after the incubation of rat gingival tissue homogenates with Ang I or tetradecapeptide renin substrate (TDP). RT-PCR revealed the mRNA expression for renin, angiotensinogen, ACE and Ang II receptors (AT1a, AT1b and AT2) in the rat gingival tissue; cultured gingival fibroblasts expressed renin, angiotensinogen and AT1a receptor. IHC demonstrated the existence of renin in vessels of the rat gingival tissue. ACE activity was detected by the fluorimetric assay (4.95±0.89 nmol His-Leu/g.min). When Ang I was used as the substrate, HPLC analyses showed the formation of Ang 1-9 (0.576±0.128 nmol/mg.min), Ang II (0.066±0.008 nmol/mg.min) and Ang 1-7 (0.111±0.017 nmol/mg.min) whereas these same peptides (0.139±0.031; 0.206±0.046 and 0.039±0.007 nmol/mg.min, respectively) and Ang I (0.973±0.139 nmol/mg.min) were formed when TDP was the substrate. Additionally, HPLC revealed absence of Ang II degrading enzymes in rat gingival tissue homogenates. In conclusion, the results presented here clearly show the existence of a local RAS in the rat gingival tissue, which is capable of generating Ang II and other vasoactive peptides in vitro. Further studies are required to elucidate the role of this system in the rat gingival tissue.