Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-02Bitstream added on 2014-06-13T19:20:47Z : No. of bitstreams: 1 gandolfo_ma_dr_botfca.pdf: 904279 bytes, checksum: 365abd9e993a166a6898dfe6598a9c8c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Para a otimização no uso de agroquímicos, vários países tem realizado avaliações periódicas em pulverizadores agrícolas. No Brasil, o reconhecimento do estado destas máquinas, pode nortear pesquisas e investimentos em orientação de uso e manutenção. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o estado de pulverizadores em uso na agricultura nacional, estudar a necessidade de implantação de inspeções periódicas em tais máquinas no Brasil e desenvolver metodologia específica para as condições brasileiras. O projeto foi financiado pela Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo (Fapesp), o que possibilitou a constituição de uma unidade móvel de avaliação. A unidade foi composta por um veículo utilitário dotado de carroceria tipo furgão, devidamente identificada com adesivos, sendo utilizada para transporte de todos os equipamentos necessários para as avaliações de campo e também dos técnicos do projeto. A metodologia de avaliação utilizada foi adaptada com base nas inspeções realizadas na Bélgica, Alemanha e Itália. Estas avaliações foram efetuadas sobre vários componentes e aspectos operacionais das máquinas, divididas em três grupos, sendo eles: idade, acoplamento e procedência do pulverizador...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-22T18:40:41Z No. of bitstreams: 1 2018_FernandaFonsêcaFerreira.pdf: 4707883 bytes, checksum: f01efd1dfdc33b16fb2d13434b522cb3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-28T17:10:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_FernandaFonsêcaFerreira.pdf: 4707883 bytes, checksum: f01efd1dfdc33b16fb2d13434b522cb3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-28T17:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_FernandaFonsêcaFerreira.pdf: 4707883 bytes, checksum: f01efd1dfdc33b16fb2d13434b522cb3 (MD5) Previous issue date: 2018-08-22 / Fundação Universidade de Brasília (FUB); Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF) e Secretaria de Educação do Distrito Federal (SEDF). / Cryptococcus neoformans é um basidiomiceto caracterizado pela presença de cápsula polissacarídica. Esse fungo é o agente patogênico da criptococose, uma doença oportunista que leva a mais de 180.000 mortes anuais. Até o presente, não foram identificadas, nesse patógeno, proteínas de reparo ao dano de DNA O6-alcilguanina (O6-alcilG), gerado pela alcilação da posição O6 de guaninas. O6-alcilG leva a erro de pareamento de bases nitrogenadas, causando mutação. Análises de bioinformática (FungiDB, UniProt, BLAST e Clustal Omega) da sequência de DNA CNAG_02105 de C. neoformans sugeriram que essa sequência poderia codificar Atl1 (Alkyltransferase-like protein), proteína de reparo a O6-alcilG. Uma vez que o hospedeiro humano não possui Atl1, uma Atl1 de C. neoformans poderia representar um alvo para fármacos de ação seletiva sobre esse fungo. Neste trabalho, buscou-se obter uma linhagem de C. neoformans mutante para o gene putativo ATL1 (CNAG_02105), com o objetivo de caracterizar seus principais atributos de virulência e fenótipos. As linhagens atl1Δ não apresentaram diferenças na termotolerância, expansão da cápsula polissacarídica, melanização da parede celular, produção de urease, desenvolvimento do ciclo sexual e virulência em Galleria mellonella quando comparadas às linhagens controle. Não foram detectadas alterações de fenótipo de crescimento de atl1Δ em condições de estresse osmótico, estresse de parede celular e estresse oxidativo. Também não foi identificada sensibilidade aumentada do mutante ao agente genotóxico hidroxiureia, à exposição à radiação UV, a fluconazol e a diferentes pHs. Por outro lado, as linhagens atl1Δ apresentaram hipersensibilidade ao agente alcilante EMS (etil metanossulfonato), mas não a MMS (metil metanossulfonato) ou ENU (etil nitrosoureia). O EMS gera O6-etilguanina, dano de DNA que é reparado pela proteína Atl1. Coletivamente, a bioinformática e as análises experimentais sugerem que CNAG_02105 codifica uma putativa Atl1 em C. neoformans. / Cryptococcus neoformans is a basidiomycete characterized by the presence of a polysaccharide capsule. This fungus is the pathogenic agent of cryptococcosis, an opportunistic disease that leads to more than 180,000 annual deaths. To date, no repair proteins to the DNA damage of O6-alkylguanine (O6-alkylG), generated by alkylation of the position O6 of guanines. O6-alkylG leads to mismatch of nitrogenous bases, causing mutation. Bioinformatics analyzes (FungiDB, UniProt, BLAST and Clustal Omega) of the C. neoformans DNA sequence CNAG_02105 suggested that this sequence could encode Atl1 (Alkyltransferase-like protein), an O6-alkylG repair protein. Since the human host does not have Atl1, an Atl1 of C. neoformans could represent a target for selective action drugs on this fungus. In this work, we aimed to obtain a C. neoformans mutant srain for the putative ATL1 gene (CNAG_02105), in order to characterize its main virulence attributes and phenotype. The strains atl1Δ did not present differences in thermotolerance, polysaccharide capsule expansion, cell wall melanization, urease production, sexual cycle development and virulence in Galleria mellonella when compared to control strains. No changes in atl1Δ growth phenotype were detected under conditions of osmotic stress, cell wall stress and oxidative stress. No increased sensitivity of the mutant to the genotoxic hydroxyurea agent, exposure to UV radiation, fluconazole and different pHs was also identified. On the other hand, the atl1Δ strains showed hypersensitivity to EMS (ethyl methanesulfonate), but not to MMS (methyl methanesulphonate) or ENU (ethyl nitrosourea). EMS generates O6-ethylguanine, DNA damage that is repaired by the Atl1 protein. Collectively, bioinformatics and experimental analyzes suggest that CNAG_02105 encodes a putative Atl1 in C. neoformans.

Made available in DSpace on 2016-02-13T01:07:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000477246-Texto+Completo-0.pdf: 2952696 bytes, checksum: 9a8e4368b83491c5888a26990b0c9ddc (MD5) Previous issue date: 2015 / The aim of this study was to evaluate dental pulp and furcal periodontal tissue responses to mineral trioxide aggregate (MTA) and to a calcium silicate-based material (Biodentine™). The lower first molars in hundred forty (140) male Wistar rats were divided into groups according to the experimental site and period (14 and 21 days) testing two materials (n=8 per group/period in pulpotomy and n=6 per group/period in furcal perforation). Groups capped and sealed with MTA or Biodentine™ were restored with silver amalgam; in an additional test group, teeth were capped and restored with Biodentine™. Teeth capped with gutta-percha and restored with silver amalgam served as a positive control and untouched teeth were negative control. Histological evaluation of pulp responses and macroscopic examination of coronal sealing were performed. Inflammation extension and intensity, degenerative events and formation of mineralized tissue barrier were assessed. In the experiment of furcal perforations, inflammation extension and intensity, bone resorption and cement formation were assessed histologically. All results underwent ANOVA and Tukey post hoc tests (p<. 05). In pulpotomy, Biodentine™ and MTA presented satisfactory results, which were characterized by a mild inflammatory response (p<. 0001) and more pronounced formation of mineralized barrier (p<. 0001) compared to teeth capped with gutta-percha. When used as a restorative material, Biodentine™ kept coronal sealing in only 37. 5% of the samples. As to furcal perforations, Biodentine™ and MTA presented satisfactory results, which were characterized by a milder inflammatory response compared to the control, regardless of the material used for coronal sealing and of the experimental period evaluated (p<. 0001). All test groups showed less bone resorption than the positive control after 21 days (p<. 05), being this difference more pronounced in teeth restored with silver amalgam. Cement repair occurred in 30% of MTA and Biodentine™ samples, and was not detected in any specimen of the positive control group. In conclusion, Biodentine™ and MTA promoted similar responses when used to pulp capping and furcal perforation sealing. On the other hand, the use of Biodentine™ as temporary restorative material did not promote efficient coronal sealing. Although further investigations are required, Biodentine™ can be considered an alternative for pulpotomy and furcal perfuration. / O objetivo deste estudo foi comparar a resposta tecidual, após pulpotomias e perfurações de furca, utilizando agregado trióxido de mineral (MTA) e o material à base de silicato tricálcico (Biodentine®). Os primeiros molares inferiores de 140 ratos Wistar machos foram utilizados em dois tempos (14 e 21 dias) e divididos em grupos conforme o experimento e materiais utilizados (pulpotomia n=8 e perfuração de furca n=6). Nos dois experimentos, grupos capeados e selados com MTA e Biodentine® foram restaurados com amálgama de prata; um grupo adicional utilizou somente Biodentine® e o controle positivo recebeu guta-percha e restauração de amálgama; dentes intactos serviram de controle negativo. No experimento de pulpotomias, realizou-se exame macroscópico e radiográfico do selamento coronário e exame histológico dos eventos inflamatórios (intensidade e extensão), degenerativos e de formação de barreira mineralizada. No experimento de perfurações de furca, foram avaliados histologicamente os eventos inflamatórios (intensidade e extensão), de reabsorção óssea e reparo de cemento. Os dados foram comparados através da análise de variância (ANOVA) e posthoc de Tukey (p<. 05). Nas pulpotomias, o Biodentine® e MTA apresentaram resultados satisfatórios, com menor resposta inflamatória (p<. 0001) e pronunciada formação de barreira mineralizada (p<. 0001) comparada aos dentes do controle positivo. O Biodentine®, utilizado como restauração, manteve o selamento coronário em apenas 37. 5% das amostras. Nas perfurações de furca, o Biodentine e MTA apresentaram resultados satisfatórios, caracterizados por uma resposta inflamatória mais suave em comparação ao controle positivo, independentemente do material utilizado para o selamento coronário e período experimental avaliado (p<. 0001). Todos os grupos testes mostraram menor reabsorção óssea do que o controle positivo após 21 dias (p<. 05), sendo esta diferença mais acentuada em dentes restaurados com amálgama de prata. A reparação de cemento ocorreu em 30% das amostras de MTA e Biodentine, e não foi detectada em qualquer amostra do grupo do controle positivo. Concluiu-se que houve respostas similares após o uso de Biodentine® e MTA no capeamento da polpa exposta e selamento de perfurações de furca. Por outro lado, o uso do Biodentine® como material restaurador provisório não promoveu selamento coronário eficiente. Embora sejam necessárias novas investigações, o Biodentine deve ser considerado como uma alternativa frente aos tratamentos propostos.

Orientador: Ulisses Rocha Antuniassi / Resumo: Para a otimização no uso de agroquímicos, vários países tem realizado avaliações periódicas em pulverizadores agrícolas. No Brasil, o reconhecimento do estado destas máquinas, pode nortear pesquisas e investimentos em orientação de uso e manutenção. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o estado de pulverizadores em uso na agricultura nacional, estudar a necessidade de implantação de inspeções periódicas em tais máquinas no Brasil e desenvolver metodologia específica para as condições brasileiras. O projeto foi financiado pela Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo (Fapesp), o que possibilitou a constituição de uma unidade móvel de avaliação. A unidade foi composta por um veículo utilitário dotado de carroceria tipo furgão, devidamente identificada com adesivos, sendo utilizada para transporte de todos os equipamentos necessários para as avaliações de campo e também dos técnicos do projeto. A metodologia de avaliação utilizada foi adaptada com base nas inspeções realizadas na Bélgica, Alemanha e Itália. Estas avaliações foram efetuadas sobre vários componentes e aspectos operacionais das máquinas, divididas em três grupos, sendo eles: idade, acoplamento e procedência do pulverizador...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-22T21:40:16Z No. of bitstreams: 1 GudsonNicolauDeMelo_DISSERT.pdf: 6372930 bytes, checksum: a507cee6e8231c1c7908d1d08e708f46 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-02-23T22:53:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GudsonNicolauDeMelo_DISSERT.pdf: 6372930 bytes, checksum: a507cee6e8231c1c7908d1d08e708f46 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-23T22:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GudsonNicolauDeMelo_DISSERT.pdf: 6372930 bytes, checksum: a507cee6e8231c1c7908d1d08e708f46 (MD5) Previous issue date: 2013-04-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / A nuclea??o de microtrincas durante aplica??o de cargas ? um problema cr?tico em estruturas de pol?meros e comp?sitos polim?ricos. Materiais com mecanismo de auto-reparo permitem que as microtrincas formadas sejam reparadas, evitando assim que ocorra propaga??o com falha catastr?fica em componentes estruturais. Uma das t?cnicas que tem sido sugerida na literatura para a promo??o de reparo de microtrincas ? a aplica??o de solventes que reagem com o pol?mero. Este trabalho tem como objetivo a obten??o de nanotubos de haloisita com agentes encapsulados que possam ser adicionados a pol?meros ep?xi para promoverem auto-reparo. A propaga??o de microtrincas no material provoca a ruptura dos nanotubos, liberando o solvente encapsulado. Dois solventes foram considerados neste estudo: dimetilsulf?xido (DMSO) e nitrobenzeno. Um procedimento de encapsulamento camada-por-camada foi apresentado utilizando os polieletr?litos, de cargas opostas, CTAB (Brometo de Cetil Trimetil Am?nio) e poliacrilato de s?dio. A verifica??o do encapsulamento se deu pelas an?lises de difra??o de raios-X (DRX), infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), an?lise t?rmica via termogravimetria (TG), adsor??o e dessor??o de nitrog?nio e microscopia eletr?nica de varredura (MEV). Foi poss?vel comprovar a introdu??o do solvente DMSO na cavidade interior dos nanotubos, o que n?o ocorreu com o nitrobenzeno, onde se verificou apenas a agrega??o da argila. Os resultados sugerem que o polieletr?lito CTAB interagiu com a haloisita formando a camada sobre os nanotubos e, portanto, promoveu o encapsulamento, o que n?o foi verificado com o poliacrilato de s?dio. / Micro cracking during service is a critical problem in polymer structures and polymer composite materials. Self-healing materials are able to repair micro cracks, thus their preventing propagation and catastrophic failure of structural components. One of the self-healing approaches presented in the literature involves the use of solvents which react with the polymer. The objective of this research is to investigate a procedure to encapsulate solvents in halloysite nanotubes to promote self-healing ability in epoxy. Healing is triggered by crack propagation through embedded nanotubes in the polymer, which then release the liquid sovent into the crack plane. Two solvents were considered in this work: dimethylsulfoxide (DMSO) and nitrobenzene. The nanotubes were coated using the layer-by-layer technique of oppositely charged polyelectrolytes: cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) and sodium polyacrylate. Solvent encapsulation was verified by X-ray diffraction (XRD), Fourier transform infrared (FTIR), analysis thermogravimetry (TGA), adsorption and desorption of nitrogen and scanning electron microscopy (SEM). The introduction of the solvent DMSO into the cavity of the nanotubes was confirmed by the techniques employed. However, was not verified with nitrobenzene only promoted clay aggregation. The results suggest that the CTAB reacted with the halloystite to form a sealing layer on the surface of the nanotubes, thus encapsulating the solvent, while this was not verified using sodium polyacrylate.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThayseAS.pdf: 421769 bytes, checksum: da81d1c89c2fb11516509aaaad4a2595 (MD5) Previous issue date: 2008-04-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Despite advances in vaccine development and therapy, bacterial meningitis (BM) remains a major cause of death and long-term neurological disabilities. As part of the host inflammatory response to the invading pathogen, factors such as reactive oxygen species are generated, which may damage DNA and trigger the overactivation of DNA repair mechanisms. It is conceivable that the individual susceptibility and outcome of BM may be in part determined by non synonymous polymorphisms that may alter the function of crucial BER DNA repair enzymes as PARP-1, OGG-1 and APE-1. These enzymes, in addition to their important DNA repair function, also perform role of inflammatory regulators. In this work was investigated the non synonymous SNPs APE-1 Asn148Glu, OGG-1 Ser326Cys,PARP-1 Val762Ala, PARP-1 Pro882Leu and PARP-1 Cys908Tyr in patients with bacterial meningitis (BM), chronic meningitis (CM), aseptic meningitis (AM) and not infected (controls). As results we found increased frequency of variant alleles of PARP-1 Val762Ala (P = 0.005) and APE-1 Asn148Glu (P=0.018) in BM patients, APE-1 Asn148Glu in AM patients (P = 0.012) and decrease in the frequency of the variant allele OGG-1 Ser326Cys in patients with CM (P = 0.013), regarding the allelic frequencies in the controls. A major incidence of individuals heterozygous and/ or polymorphic homozygous in BM for PARP-1 Val762Ala (P= 0.0399, OD 4.2, 95% IC 1.213 -14.545) and PARP-1 Val762Ala/ APE-1 Asn148Glu (P = 0.0238, OD 11.111, 95% IC 1.274 - 96.914) was observed related to what was expected in a not infected population. It was also observed a major incidence of combined SNPs in the BM patients compared with the control group (P=0.0281), giving evidences that SNPs can cause some susceptibility to the disease. This combined effect of SNPs seems to regulate the principal cytokines and other factors related to BM inflammatory response and point the importance of DNA repair not only to repair activity when DNA is damaged, but to others essential functions to human organism balance. / Apesar dos avan?os no desenvolvimento de vacinas e terapias, a meningite bacteriana (MB) continua sendo uma das principais causas de morte e seq?elas neurol?gicas causadas por uma doen?a infecciosa. Como parte da resposta inflamat?ria ao pat?geno invasor, fatores como esp?cies reativas de oxig?nio (ROS) s?o geradas, podendo causar danos no DNA e ativar seus mecanismos de repara??o. ? poss?vel que a susceptibilidade individual do hospedeiro ? MB possa ser em parte determinada por polimorfismos n?o-sin?nimos (SNPs) que possivelmente alterem a fun??o de enzimas de reparo de DNA da via BER como PARP-1, OGG-1 e APE-1. Estas enzimas, al?m da importante fun??o na corre??o de danos no DNA, tamb?m desempenham papel de reguladores inflamat?rios. Neste trabalho foram investigados os SNPs n?o-sin?nimos APE-1 Asn148Glu, OGG-1 Ser326Cys, PARP-1 Val762Ala, PARP-1 Pro882Leu e PARP-1 Cys908Tyr em pacientes com meningite bacteriana (MB), meningite cr?nica (MC), meningite ass?ptica (MA) e n?o infectados (controles). Como resultado, foi encontrado um aumento na freq??ncia dos alelos variantes de PARP-1 Val762Ala (P = 0.005) e APE-1 Asn148Glu (P=0.018) em pacientes com MB, de APE-1 Asn148Glu em pacientes com MA (P = 0.012) e diminui??o da freq??ncia do alelo variante OGG1 Ser326Cys (P = 0.013) em pacientes com MC em rela??o ?s freq??ncias al?licas observada nos controles para estes polimorfismos. Foi observado um maior n?mero de indiv?duos heterozigotos e/ou homozigotos polim?rficos para os gen?tipos polim?rficos PARP-1 Val762Ala (P= 0.0399, OD 4.2, 95% IC 1.213 -14.545) e PARP-1 Val762Ala/ APE-1 Asn148Glu (P = 0.0238, OD 11.111, 95% IC 1.274 - 96.914) no grupo MB em rela??o ao que se era esperado dentro de uma popula??o n?o-infectada. Observou-se tamb?m uma maior incid?ncia de SNPs combinados em pacientes com MB quando comparado ao grupo controle. Estas rela??es trazem evid?ncias de que os SNPs analisados causam alguma susceptibilidade ? doen?a. O efeito combinado destes SNPs parece influenciar a regula??o das principais citocinas e de outros fatores relacionados com a resposta inflamat?ria a MB, mostrando a import?ncia da ativa??o de enzimas de reparo de DNA n?o somente quando o DNA ? danificado, mas para outras fun??es essenciais ao equil?brio do organismo humano.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000408413-0.pdf: 11361316 bytes, checksum: bb7e7fffb715d7eb2eecf11d7a06367e (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The aim of this study was to evaluate and compare the healing process after surgical treatment of chemically induced lesion in the lateral edge of tongue of hamster performed with scalpel, electrocautery, CO2 and de Nd: YAG lasers radiation. Eighty hamsters of both sexes were used and evaluated at 7, 14, 21 and 28 of postoperative days by clinical, histological and histomorphometric analysis of the skeletal muscle fibers. Clinical analysis showed loss of the morphology of the tongue in all groups. In the histological analysis, it was observed that the dynamics of the healing process was faster in the scalpel group compared with the other groups. The histomorphometric observation of the skeletal muscle fibers were submitted to analysis of Variance (ANOVA - One Way) and Multiple Comparison of Tukey test, with a level of significance at p<0. 05, which showed that amount of skeletal muscle fibers formed significantly increased in the scalpel group when compared with the electrosurgery group (p<0. 01), CO2 laser radiation group (p<0. 001) and Nd: YAG laser radiation group (p<0. 01) at the 14th postoperative day. A gradual increase of skeletal muscle fibers formed during the healing process evolution was observed in all groups. Comparing the laser radiation groups, it was possible to conclude that tissue organization pattern and vascularization were faster and more intense in the Nd: YAG laser radiation group, respectively, in relation to the CO2 laser radiation group. / A presente pesquisa teve como objetivo avaliar e comparar o processo de reparação tecidual após exérese de lesão, induzida quimicamente por oleato de monoetanolamina 5% (Ethamolin®), em borda lateral de língua de hamster tratada com bisturi convencional, bisturi elétrico, radiação laser de CO2 e de Nd:YAG. Foram utilizados 80 hamsters, de ambos os sexos, os quais, foram avaliados nos períodos de sete, 14, 21 e 28 dias pós-operatórios por meio das análises clínica, histomorfológica e histomorfométrica das fibras musculares esqueléticas. A análise clínica evidenciou perda tecidual da língua nos grupos estudados. Na análise histomorfológica foi observado que a dinâmica do processo de reparação tecidual foi mais rápida no grupo bisturi convencional do que nos demais grupos. Os dados obtidos a partir da avaliação estatística da histomorfometria das fibras musculares esqueléticas foram submetidos à análise de variância (ANOVA - uma via) e ao teste de Comparações Múltiplas de Tukey, com nível de significância de p<0,05, os quais, mostraram que a densidade de fibras musculares esqueléticas neoformadas aumentou no grupo bisturi convencional quando comparado com os grupos bisturi elétrico (p<0,01), radiação laser CO2 (p<0,001) e radiação laser Nd:YAG (p<0,01), no período de 14 dias; constatou-se, ainda, que houve aumento progressivo da densidade de fibras musculares esqueléticas neoformadas durante a evolução do processo de reparo em todos os grupos estudados e, na comparação entre os grupos radiação laser de Nd:YAG e CO2, a organização tecidual foi mais rápida e a vascularização mais intensa, respectivamente.

Metarhizium anisopliae é um fungo entomopatogênico usado como agente de controle biológico devido a sua capacidade de infectar mais de 300 espécies de artrópodes. É um organismo muito utilizado como modelo de estudo de interação patógeno-hospedeiro sendo um dos focos de estudo a descrição de genes envolvidos no processo de infecção pela construção de mutantes funcionais. Esse processo pode ser facilitado pelo uso da metodologia do sistema CRISPR/Cas9 para manipulação genômica, que foi derivada do sistema imune adaptativo de procariotos que vem demonstrando potencial tecnológico em edição genética de eucariotos pela incorporação de protoespaçadores (sequencias oriundas de bacteriófagos ou plasmídeos invasores) em seus loci. CRISPR e a proteína associada à CRISPR (Cas) formam uma endonuclease guiada (Cas9) a qual tem como alvo o sítio específico do DNA invasor, provocando a clivagem da dupla fita do DNA alvo em uma sequência específica. Muitos estudos realizados pela edição gênica têm sido desenvolvidos em diferentes organismos por meio da sua adaptação em eucariotos. Com o objetivo de melhorar a eficiência na geração de mutantes em em M. anisopliae, o sistema CRISPR/Cas9 e um sistema de RNAi foram usados a fim de desenvolver novas ferramentas. As metodologias CRISPR/Cas9 e RNAi foram desenvolvidas para ter como alvo o gene reporter gfp da linhagem M. anisopliae E6 GFP+. Para realizar a edição genômica em M. anisopliae, foram gerados, por transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, fungos transgênicos estáveis que expressam a endonuclease Cas9 códon-otimizada para fungos filamentosos. Oligonucleotídeos foram projetados para ter como alvo quatro regiões diferentes na sequencia do gene gfp com o auxílio da ferramenta CRISPR RGEN tool com o objetivo de evitar o pareamento aleatório. O vetor binário utilizado foi o plasmídeo pPZP com o promotor U6-1 para a expressão do RNA guia. Para a metodologia de RNA interferente foi reproduzido o knockdown do gene repórter gfp por meio de agrotransformação do vetor pPZP::SUR::DP que contém um sistema de dois promotores em direções opostas (dual promoter Pdgp e Ptrpc) e um cassette de expressão com o gene marcador sur (resistência a sulfoniluréia) para a seleção dos transformantes. Foram clonados 420 pares de bases do gene gfp entre os promotores gerando o plasmídeo pPZP::SUR::DP::GFP. O desenvolvimento dessas duas metodologias se mostra viável para análise funcional de genes de M. anisopliae. / Metarhizium anisopliae is an entomopathogenic fungus used as a biological control agent due to its capacity to infect more than three hundred species of arthropods. It is broadly used as a model to the development of host-pathogen interaction studies, including the study of the description of the involved genes in the infection process by the construction of functional mutants. This process may be facilitated by the use of the CRISPR/Cas9 methodology to genomic manipulation, which was derived from the immune adaptive system in prokaryotes and has demonstrated technological potential in genetic of eukaryotes edition through the activity of incorporation of protospacers (sequences arising from bacteriophages or plasmids invaders) in their loci. CRISPR and CRISPR associated protein (Cas) code a guided nuclease (Cas9) that targets a specific site of the invading DNA leading to breakage of double-stranded target DNA in a specific sequence. Multiple gene editing studies have been developed in different organisms including its adaptation to eukaryotes. In order to improve the efficiency of the generation of mutants in M. anisopliae, CRISPR/Cas9 system and a RNAi system were used in order to develop new tools. Both CRISPR/Cas9 and RNAi methodologies were developed having as a target the gfp gene from M. anisopliae E6 GFP+ strain. To perform genome editing in M. anisopliae, stable transgenic fungi that express fungal codon-optimized Cas9 were generated by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Oligonucleotides were designed to target four different regions along the gfp gene by using the CRISPR RGEN tool in order to avoid off-targets. The binary vector was the pPZP plasmid with the U6-1 to RNAi expression. For RNAi analysis, gene knockdown were developed by agrotransformation with a suitable plasmid (pPZP::SUR::DP) containing dual promoters with opposite directions (Pdgp and Ptrpc) and a cassette for the expression of the selective marker (gene sur, conferring sulfonylurea resistance) for the selection of transformants. The 420 bp gfp sequence was cloned between promoters, obtaining thus the plasmid pPZP::SUR::DP::GFP. The development of these two techniques proves itself viable for functional analysis of M. anisopliae genes.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o reparo ósseo em defeitos de tamanho não crítico tratados com enxerto de matriz orgânica de osso bovino medular em bloco ou de osso cortical em microgrânulos de 0,25-1,0mm (ambos materiais Gen-Ox®- Baumer-SA Brasil). Foram confeccionados defeitos ósseos de 6mm de diâmetro por 8mm de profundidade usando trefina cirúrgica, em ambas epífises distais dos fêmures de coelhos machos Nova Zelândia, sendo 15 defeitos preenchidos com matriz óssea em bloco (grupo experimental I), 15 com matriz óssea em microgrânulos (grupo experimental II) e 15 com coágulo sanguíneo (controle). Os animais de cada grupo foram mortos 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. As epífises foram coletadas, fixadas e radiografadas usando o sistema de radiografia digital Digora e filmes periapicais convencionais. As imagens digitais (modos positivo e negativo) e as radiografias convencionais foram avaliadas por dois examinadores através de escores. Após isso, as epífises foram desmineralizadas com EDTA e incluídas em parafina. Foram obtidos cortes com 6µm de espessura que foram corados com hematoxilina e eosina e com o Tricrômico de Masson e observados em microscópio óptico. Na análise microscópica, pós 30 dias, o grupo experimental II apresentou algumas partículas de material em reabsorção por células mononucleares e também uma ligeira maior quantidade de osso trabeculado que os outros grupos. Neste período, enquanto os grupos experimentais apresentaram o defeito preenchido completa ou parcialmente com osso trabeculado, o grupo controle apresentou invaginação do tecido conjuntivo para o interior de defeito, apresentando apenas uma estreita faixa de tecido ósseo de arranjo trabecular. Após 90 dias todos os grupos mostraram intensa remodelação do osso trabeculado que foi substituído por osso lamelar. Após 180 dias, em geral, ambos os grupos experimentais e o grupo controle apresentaram um reparo semelhante. Na análise radiográfica não houve diferenças estatisticamente significantes nem intra nem interexaminadores. Também não foram observadas diferenças significantes entre os grupos em todos os períodos avaliados (p>0,05). Dessa forma, pela análise radiográfica o reparo ósseo foi similar em ambos os grupos experimentais e o controle nos períodos de 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. Apesar do reparo ser similar em ambos os grupos experimentais e o controle no período de 180 dias pela análise microscópica e em todos os períodos pela análise radiográfica, o uso da matriz óssea desmineralizada em bloco ou microgrânulos evitou a invaginação do tecido conjuntivo para o interior do defeito ósseo nas fases iniciais do reparo. / The aim of this work was to verify the osseous repair in non through-andthrough defects treated with blocks of lyophilized bovine bone organic matrix of cancellous origin or micro granules (0.25-1.0 mm) of lyophilized bovine bone organic matrix of cortical origin (both materials Gen-Ox®- Baumer SA- Brazil). An osseous defect, 6mm in diameter by 8mm in depth, was created in both distal femoral epiphyses of male New Zealand White rabbits using a trephine bur. Fifteen defects were grafted with cancellous blocks (experimental group I), fifteen with cortical micro granules (experimental group II) and fifteen were filled with blood clot (control). The rabbits of each group were sacrificed 30, 90 and 180 days after surgeries. Thereafter, the epiphyses were collected and fixed. Radiographs were taken using the Digora digital radiographic system and conventional periapical films. The radiographic digital images (positive and negative) and the conventional radiographs were evaluated using scores by two examiners. After this, the epiphyses were demineralized with EDTA and embedded in paraffin. Semi-serial 6-µm thick sections were obtained, stained with hematoxylin and eosin and Masson Trichromic and examined under a light microscope. After 30 days the experimental group II presented some particles of bone matrix in resorption by mononuclear cells and a larger amount of primary woven bone than did the other groups. Both experimental groups showed total or partial closure by woven bone while the control group exhibited migration of the connective tissue into the defect area. After 90 days the experimental and control groups showed intense remodelation of neoformed woven bone that was replaced by lamellar bone. Generally, after 180 days both experimental and control groups exhibited a similar pattern of repair. In the radiographic analysis, neither intra-examiners significant differences nor interexaminers significant differences were observed. Also no significant differences among the groups in all evaluated periods were observed (p>0.05). The osseous repair evaluated by digital and conventional radiographs was similar in both experimental groups and control groups in the periods of 30, 90 and 180 days post-surgery. Although the bone formation appeared similar in the experimental and control groups after 180 days by the histological analysis and in all periods by radiographic analysis, the use of lyophilized bovine bone organic matrix in blocks or micro granules avoided the migration of connective tissue into the defect area in the initial phases of the repair.

Entre as várias terapêuticas propostas para o tratamento da osteoporose, a administração de altas doses de fluoreto é uma alternativa que ainda apresenta controvérsia na literatura. O fluoreto se destaca por influenciar na atividade dos osteoblastos, os quais são responsáveis por mediar a síntese de moléculas que compõem o osso. No entanto, o mecanismo de ação do fluoreto em células do tecido ósseo (osteoblastos, osteócitos e osteoclastos) ainda não está bem esclarecido. Neste trabalho foram utilizados camundongos com diferentes densidades ósseas, sendo 32 da linhagem C57BL/6J (menor densidade óssea) e 32 da linhagem C3H/HeJ (maior densidade óssea) com 60 dias de vida, os quais receberam água deionizada ou água com 50 ppm de fluoreto (na forma de NaF). Realizou-se os procedimentos cirúrgicos extraindo o incisivo superior esquerdo e posteriormente os animais foram eutanasiados 7, 14, 21 e 28 dias após a extração. Imediatamente após a eutanásia, foi removida a peça com alvéolo dental esquerdo. Foram feitas análises descritiva e morfométrica das lâminas obtidas (coloração em Hematoxilina Eosina). Foi utilizada análise ANOVA a quatro critérios seguida da análise de Tukey (p<0,05). Em geral, para todos os grupos, a análise histológica mostrou neoformação óssea à partir das paredes do alvéolo e formação de ilhotas ósseas invadindo o centro dos alvéolos, substituindo o tecido conjuntivo existente. O tecido ósseo neoformado substituiu aos poucos o tecido conjuntivo ao longo dos períodos experimentais, sendo esse fenômeno ligeiramente mais evidente nos camundongos da linhagem C57BL/6J. A análise morfométrica confirmou os achados histológicos em relação à quantidade de tecido ósseo neoformado e mostrou diminuição do tecido ósseo neoformado no último período (28 dias) nos animais C3H/HeJ (grupos controle e experimental). Concluimos que o processo de reparo ósseo alveolar é semelhante nas duas linhagens estudadas, porém apresentam padrão de formação óssea diferentes entre elas. O fluoreto parece influenciar as etapas do processo de reparo alveolar nas duas linhagens, aumentando a quantidade de osso neoformado, no entanto, a linhagem de camundongos C57BL/6J é mais propensa aos efeitos do flúor. / Among the various therapeutic proposals for the osteoporosis treatment, the administration of high doses of fluoride is an alternative that still has controversies in literature. Fluoride is highlighted by influencing the activity of osteoblasts, which are responsible for mediating the synthesis of bone. But, the mechanism of action of fluoride on bone cells (osteoblasts, osteocytes and osteoclasts) is not well understood. This way, this study aims to evaluate the alveolar bone repair in rats under the effect of fluoride (NaF) administered in the water. This work were used four groups of strains C57BL/6J mice (total of 32) and C3H/HeJ (total of 32) for 60 days, which received deionized water or water with 50 ppm of fluoride. The surgical procedures were made by extracting the upper left incisor and then the animals were euthanized 7, 14, 21 and 28 days. Histological analysis (Hematoxylin Eosin staining), by light microscopy, were made. The statistical analysis were made using the statistical test one-way ANOVA complemented by Tukey\'s test (p <0.05). Generally, for all groups, the histological analysis showed a new bone formed from the alveolar walls, replacing the connective tissue. The newly formed bone tissue gradually replaces the connective tissue over time; wich was more evident in C57BL/6J mice. Morphometric analisys confirmed the histological findings of the new bone formed and showed a decrease in the new formed bone in the last period (28 days) of the C3H/HeJ animals. We concluded that the process of alveolar repair is similar when it respects to the stages of repair, however they presents different pattern of new bone formation. The fluoride influences the stages of alveolar repair in both lineages, increasing the amount of bone formed, however the mice lineage of C57BL/6J is more prone to the effects of fluoride.