Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As infeccoes respiratorias virais sao causas comuns de morbi-mortalidade em adultos e idosos. Recentemente descrito, o metapneumovirus foi associado a infeccoes respiratorias em criancas, ocorrendo com maior frequencia ate seus cinco anos de idade. Investigacoes recentes o identificaram tambem em adultos e imunocomprometidos. Nesta conjuntura conduziu-se em São Paulo um estudo com coleta sistematizada e consecutiva por tres anos (06/2001 a 09/2003) em tres populacoes distintas (adultos do Pronto Atendimento, transplantados renais e profissionais de Saúde) apresentando sintomas respiratorios. Cento e oitenta e cinco pacientes com resultados negativos para outros virus por outros metodos (influenza A e S, Parainfluenza 1,2 e 3, RSV, adenovirus, coronavirus e enterovirus) foram investigados quanto a presenca de metapneumovirus por uma RT-PCR otimizada em laboratorio. Vinte e quatro pacientes (12,97 por cento) apresentaram amplificacao especifica para o virus, caracterizada pelo fragmento de 347pb amplificado pelos iniciadores correspondentes ao gene F. O virus foi detectado nos meses de junho a setembro dos tres anos investigados. Houve maior frequencia na deteccao em 2003. As frequencias observadas ao final do estudo nos profissionais de Saúde, adultos do Pronto Atendimento e pacientes transplantados renais foram 10,75 por cento (10/92), 18,96 por cento (11/59), e 8,82 por cento (3/34) respectivamente. Verificou-se uma tendencia associativa entre contato com paciente e infeccao por hMPV nos profissionais de Saúde. Foi encontrada associacao entre infeccao e adultos acima de 51 anos (p=0,006). Os pacientes transplantados apresentaram sintomatologia menos expressiva. Nao foi possivel atribuir uma sintomatologia especifica a infeccao por hMPV / Viral respiratory infections are common morbi-mortality causes in adults and in the elderly. Recent advances in viral diagnostics, such as RT-PCR, allowed for the detection of a plethora of new viruses, until then uncharacterized. The recently described human metapneumovirus was associated with respiratory infections by van den Hoogen and coworkers while investigating samples from children without etiologic causes attributable. Researchers worldwide detected the virus in samples from children and recently in adult’s samples as well. Following this approach our study was aimed at adults over eighteen presenting with acute respiratory infections from June/2001 to September/2003. Three groups were enrolled: patients from an out-patient attendance, health care workers and renal transplant recipients. All samples were submitted to routine diagnostics screening through direct fluorescence assay provided by Light Diagnostics for seven different viruses and negative results were set up for RT-PCR with primers selected to hMPV´s F gene. Twenty four out of 185 patients (12.97%) were considered positive after amplification of a 347bp fragment. The virus was detected from June to September in the 2001-02 period, peaks were higher in 2003 and began earlier, as discussed below. Furthermore an association was found between infection and age (p=0,006) for the whole cohort. Out-patient attendance cases exhibited a higher detection frequency (18.92%/11:59), particularly in 2003. Health care workers and ambulatory patients had 10.75% (10:92) and 8.82% of infections attributed to hMPV. A weak tendency was found regarding infection and patient contact in the health care workers population. Transplant infections were less symptomatic than the other groups evaluated. No characteristic symptomatology could be associated with hMPV infection by this study. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Objetivo: Detectar a prevalência da hepatite C nas unidades de diálise em Maceió. Métodos: 569 pacientes com Doença Renal Crônica (DRC) em programa regular de hemodiálise (HD) em 6 clínicas de diálise foram incluídos. A análise laboratorial constou da pesquisa do anticorpo do vírus da hepatite C (anti-HCV) ELISA-3ª (ensaio imunoenzimático de 3ª geração) nos pacientes. Nos casos positivos para o anti-HCV, foi realizada a transcrição reversa seguida da amplificação do c-DNA em cadeia RT-PCR (HCV-RNA). Resultados: Detectaram-se 66/569 pacientes com sorologia positiva, o que corresponderia a uma prevalência de 11,6%, porém, quando realizamos a RT-PCR nos pacientes com anti-HCV positivo, o percentual da viremia encontrada é de 39,5% (26/66). Conclusões: O anti-HCV, por sua sensibilidade e baixo custo, deve ser realizado entre os portadores de DRC como teste para screening e que a RT-PCR, por ser um exame de maior especificidade, deve ser usado para a confirmação de resultados positivos e verificação de falsopositivos encontrados no ELISA-3ª. / Purpose: The objective of this study was to detect the prevalence of hepatitis C in the units of dialysis in Maceió. Methods: 569 patients with Doença Renal Crônica (DRC) in regular program of hemodiálise (HD) in 6 clinics of dialysis had been enclosed. The laboratorial analysis consisted of the research of the antibody of the virus of hepatitis C (anti-HCV) ELISA-3ª (imuno-enzymatic assay of 3ª generation) in the patients. In the positive cases for anti-HCV, reversa followed of the amplification of cDNA in chain RT- PCR was carried through the transcription (HCV-RNA). Results: 66/569 patients with positive sorologia had detected themselves, what she would correspond to a prevalence of 11,6%, however, when we carry through the RT-PCR in the patients with anti-HCV positive, the percentage of the joined viremia is of 39,5% (26/66). Conclusions: We conclude that the RT-PCR, for being an examination of bigger especificidade, must be used for the confirmation of positive results and verification of false-positives found in the ELISA-3ª. However, anti-HCV, by its sensitivity and low cost, must be carried through enters the DRC carriers as test for screening. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 136.pdf: 882256 bytes, checksum: 9ae92b0a5f442228c4bb16e69b70145b (MD5) Previous issue date: 2006 / Neste estudo foram utilizadas 70 amostras de tecido encefálico congelado de animais,com o diagnóstico positivo para vírus da raiva pela imunofluorescência direta (IFD) e pelo teste biológico (TB), enviados ao Banco de Germoplasma do Laboratório de Biologia Animal (LBA)da Empresa de Pesquisa Agropecuária do Estado do Rio de Janeiro (PESAGRO RIO). Estas amostras foram provenientes de diversos municípios do estado do Rio de Janeiro. Das 70 amostras analisadas 50 foram utilizadas para testar um protocolo de RT-PCR e 33 utilizadas naanálise genética do vírus da raiva circulantes no estado do Rio de Janeiro.O protocolo testado de amplificação genômica, precedida de transcrição reversa (RTPCR)para o gene da nucleoproteína de vírus da raiva e vírus relacionados ao vírus da raiva, teve como objetivo a utilização desta metodologia em laboratórios onde são realizadas investigações para a detecção de vírus da raiva. Foram utilizadas 50 amostras de tecido encefálico de animais (44 bovinos, 5 eqüinos e 1 quiróptero). Nas 50 amostras analisadas pela RT-PCR se observou os amplicons de 606 pb, correspondendo a região da nucleoproteína (N) investigada e demonstraram a especificidade do protocolo. Houve concordância nas três provas de diagnósticas utilizadas. Uma amostra negativa na prova de imunofluorescência direta, apresentou positividade tanto na prova biológica e quanto na RT-PCR. Trinta e três amostras isoladas de 27 bovinos, 05 eqüinos e 01 quiróptero, foram analisadas com base no seqüenciamento direto de amplicons de 514 pb da região codificadora danucleoproteína (N). As seqüências foram verificadas quanto ao seu parentesco genético e evolucionário. Os dados indicam que não existem diferenças genéticas significativas entre as amostras isoladas de diferentes hospedeiros e regiões geográficas do estado do Rio de Janeiro, durante os últimos seis anos. Os resultados indicam, provavelmente, que a variabilidade observada ocorre em virtude de modificações sinônimas. Apesar da estabilidade genética do gene da nucleoproteína (N) é importante um continuo esforço de monitoração da diversidade dos genes das amostras de campo de vírus da raiva, pois modificações genéticas podem acarretar eventuais falhas vacinais. / In this study were used 70 samples of animal frozen encephalic tissue, with positive diagnosis for Rabies Virus by Direct Immunofluorescence (DIF) and by biological test, sent to Germoplasm Bank of Animal Biology Laboratory (ABL) belonged to the Empresa de Pesquisa Agropecuária do Estado do Rio de Janeiro (PESAGRO – RIO). These samples were provenient of many countys of Rio de Janeiro State. From 70 analyzed samples, 50 were used to test an RT-PCR protocol and 33 were used in the genetic analysis of circulating Rabies Virus in Rio de Janeiro State. The genomic amplification preceded of Reverse Transcription (RT-PCR) protocol tested for the Rabies Virus and Rabies related viruses nucleoprotein gene had as purpose the use of this methodology in laboratories where are made investigations for the detection of Rabies Virus. A total of 50 samples of animal encephalic tissue were used (44 cattle, 05 horses and 01 bat). In the 50 samples analysed by RT-PCR was observed amplicons of 606 bp, corresponding to the investigated nucleoprotein region and showing the protocol specificity. There was an agreement in the three diagnostic probes used. One sample, negative for the direct immunofluorescence, presented positivity for both biological probe and RT-PCR. A total of 33 samples isolated of 27 cattle, 05 horses and 01 bat were analyzed based on the direct sequencing of the 514 bp amplicons, provenient of the nucleoprotein (N) coding region. The sequences had their genetic and evolutionary relationship studied. Data indicate that there are no significant genetic differences among the samples isolated from different hosts and geographic regions of Rio de Janeiro State, during the last six years. The results indicate, probably, that the observed variability occur due to synonymous modifications. Although the genetic stability of the nucleoprotein (N) gene is important, a continuous effort in monitoring of the countryside Rabies Virus samples genes, because genetic modifications may cause eventual vaccine-failure.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:34:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 101.pdf: 12703986 bytes, checksum: b3d8bcb5c201aa863f8d9d57acdab347 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A utilização e a manutenção dos recursos hídricos são temas que apresentam uma importância crescente nas discussões mundiais, devido à preocupação com a futura escassez de água dentro dos padrões de qualidade aceitáveis para o consumo. Entre os maiores problemas na utilização da água, destaca-se a sua poluição por resíduos biológicos e químicos, tornando as águas contaminadas um importante meio de transmissão de várias doenças, entre estas, as gastroenterites de etiologia viral. Este estudo teve como objetivo implementar e analisar uma metodologia para concentração de astrovirus humano (HAstV) em águas ambientais, associada a métodos moleculares de detecção, caracterização e quantificação. Foi realizado um estudo experimental com amostras de diferentes matrizes aquáticas, incluindo água de rio, mar, consumo e esgoto (efluente e afluente) para avaliação da metodologia empregada e dois estudos de campo com um total de 100 amostras ambientais (48 provenientes de uma Estação de Tratamento de Esgoto [ETE] e 52 de água de rio). Foi utilizado o método de concentração por adsorção/eluição com membrana carregada negativamente seguido de ultrafiltração associada à detecção por reação em cadeia pela polimerase precedida da transcrição reversa (RT-PCR) e a quantificação pela PCR em tempo real quantitativa (qPCR). A caracterização molecular do vírus detectado foi realizada por sequenciamento parcial do genoma da segunda fase aberta de leitura. Experimentalmente, a taxa de recuperação variou de 2,4 por cento a 65 por cento entre os diferentes tipos de amostras de água. No estudo de campo, foram detectados 16 por cento de HAstV no total de amostras ambientais, 17,3 por cento em amostras de águas de igarapés e 16,7 por cento na ETE. Uma amostra de rio foi caracterizada como HAstV-1 [...] / The use and maintenance of water resources are issues that present increasing significance in world debates, due to concern with the future scarcity of water acceptable for consuming according to quality standards. Among the major problems of water use, the more important is the pollution by biological and chemical wastes, which makes contaminated water a significant transmission route of several diseases, as gastroenteritis of viral etiology. This study aimed to implement and analyze a methodology for human astrovirus (HAstV) concentration from environmental waters, associated with molecular methods of detection, characterization and quantification. An experimental research was performed with different aquatic sources samples, including river water, seawater, potable water and sewage (inflow and outflow) to evaluate the methodology used, and two field’s research with a total of 100 environmental samples (48 from a Sewage Treatment Plant [STP] and 52 from river water). A method of concentration by adsorption/elution into an electronegative membrane followed by ultrafiltration combined to reverse transcriptase – polymerase chain reaction (RT-PCR) and real time PCR (qPCR) quantification was utilized. The molecular characterization of the detected virus was performed by genome partial sequencing of the second open reading frame (ORF-2). Experimentally, the recovery rate ranged from 2.4% to 65% among the different matrices of water samples. In field research, 16% of HAstV were detected of the total environmental samples, 17,3% from river water samples, and 16,7% from STP. One river water sample was characterized as HAstV-1. The qPCR method exhibited an 18 copies/reaction sensibility and the comparative analysis of the results showed a low detection (2%) in comparison with RT-PCR (15%). The association of the methods used proved the presence of HAstV in environmental waters, being an important tool for water quality assessment, for viral particle removal efficiency assessment in different treatment water methods and to elucidate the epidemiology HAstV waterborne outbreaks

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:10:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 97.pdf: 1747812 bytes, checksum: ac9891f962a8dc55e948eb9245ec6dc5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 97.pdf: 1747812 bytes, checksum: ac9891f962a8dc55e948eb9245ec6dc5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Os enterovírus estão entre os mais comuns vírus humanos e são de grande interesse devido à ampla variedade de infecções que podem causar. A vigilância das Paralisias Flácidas Agudas (PFAs) e o diagnóstico laboratorial dos enterovírus são partes críticas da iniciativa da Organização Mundial de Saúde para erradicação mundial da poliomielite, assim como a necessidade de disponibilizar técnicas rápida para o diagnóstico diferencial destes vírus. A caracterização dos enterovírus é importante para a investigação da diversidade de vírus co-circulantes, para determinar a correlação entre dados celulares e bioquímicos durante a infecção,para relacionar o tipo de sintoma clínico com o sorotipo enteroviral, incluindo a investigação de vias de transmissão de enterovírus durante épocas de surtos. Além disso, a caracterização dos enterovírus é de extrema relevância para distinguir as infecções provocadas pelos Poliovirus dos enterovírus não-pólio no contexto do Programa de Erradicação da Poliomielite da OMS. O presente estudo teve como objetivo principal identificar, através da técnica de RT-PCR e seqüenciamento nucleotídico, a presença de enterovírus diretamente das amostras de primeira passagem de cultura celular a fim de diminuir o custo e o tempo de liberação do diagnóstico. Para isso, foram analisadas 221 amostras de casos suspeitos de PFA, inoculadas em primeira passagem de cultura de células RD. Destas, 17 foram positivas para enterovírus. A comparação da técnica com a indicada pela OMS mostrou alta sensibilidade e especificidade, indicando que a nova metodologia pode ser seguramente empregada como forma de garantia de um diagnóstico mais rápido. / The enterovirus are among the most common human viruses, and are of great interest because of the wide variety of infections that can cause. The surveillance of Acute Flaccid Paralysis (AFP) and laboratory diagnosis of enterovirus are critical parts of the initiative of the World Health Organization (WHO) to eradicate polio worldwide, as well as the availability of rapid completion of techniques are needed for the differential diagnosis of these viruses. The characterization of enterovirus is important for the research of the diversity of virus co-circulating, to determine the correlation between cellular and biochemical data during infection, relate to the type of clinical symptoms with the serotype enteroviral, including investigation of routes of transmission of enterovirus during times of outbreaks. Moreover, the characterization of enterovirus is of extreme importance to distinguish Poliovirus infections caused by the enterovirus non pólio in the context of the Program for the Eradication of Poliomyelitis of WHO. The aim of this study is to identify, through RT-PCR and nucleotide sequencing, the presence of enterovírus genome directly from first passage of cell culture in order to reduce the cost and time of release of diagnosis. For that, were analyzed 221 samples of suspected cases of FAP, inoculated in first passage of RD cell culture. Seventeen samples were positive for enterovirus. The comparison this technique with the indicated by the WHO showed high sensitivity and specificity, indicating that the new method can be safely employed as a way of ensuring a faster diagnosis.

Made available in DSpace on 2015-06-12T13:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 462.pdf: 1936396 bytes, checksum: 04bba025d07d06eee03a3b5eb14ad34e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A tuberculose (TB) é um dos grandes problemas de saúde pública mundial devido às suas altas taxas de morbimortalidade e índices de transmissão, apesar de existir tratamento e medidas eficazes de controle da doença. O diagnóstico precoce associado a uma terapêutica adequada é essencial para a eficácia dos programas públicos de controle. As técnicas diagnósticas, baciloscopia e cultura, utilizadas de rotina para a detecção do Mycobacterium tuberculosis em amostras clínicas são falhas em sensibilidade e na demora da obtenção dos resultados, respectivamente. A cultura é considerada o método padrão-ouro para avaliar a viabilidade do bacilo em pacientes com tuberculose em vigência de tratamento específico, porém, por ser laboriosa e necessitar de pelo menos 4 semanas para o crescimento do bacilo, dificulta bastante o monitoramento clínico e a resposta do paciente às drogas tuberculostáticas. Neste contexto, os métodos moleculares vêm sendo desenvolvidos com destaque para a tecnologia da reação em cadeia da polimerase (PCR) destacando a Transcrição Reversa seguida de PCR quantitativa em tempo real (RT-qPCR) utilizando o RNA mensageiro que expressa bem a viabilidade bacilar. Neste trabalho foi analisado o desempenho da RT-qPCR utilizando como alvo o gene 85B do Mycobacterium tuberculosis na detecção e resposta ao tratamento específico da tuberculose pulmonar. Foi realizada uma padronização com diferentes concentrações dos primers e sonda desenhados por Desjardin et al, (1999). Construiu-se uma curva padrão de DNA plasmidial gerando um limite de detecção de 10pg/1x10 e-6 (7x10 e7 cópias/reação), epson = 106, R2= 0,98 por cento, e slope= -3,18. O sistema foi avaliado em 98 pacientes com suspeita de TB pulmonar apresentando uma sensibilidade de 91,07 por cento e especificidade de 97,61 por cento, quando comparado à cultura. Em 56 pacientes com tuberculose pulmonar acompanhados durante 30 dias de tratamento específico verificou-se que a RT-qPCR e a cultura apresentaram uma excelente concordância, tendo sido observado um declínio de bacilos viáveis nos dias 15 e 30 após o início da terapêutica na maioria deles. Desta forma, os resultados encontrados sugerem que a RT-qPCR é uma ferramenta que pode ser utilizada no monitoramento clínico e terapêutico, como sinalizador de resistência bacteriana e indicador do período de transmissibilidade do M. tuberculosis em pacientes com TB pulmonar submetidos a tratamento específico

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 karina_rebello_ioc_mest_2008.pdf: 6872283 bytes, checksum: a0cb112c96e6862c0ff341afeb28dbf5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / No presente trabalho foram detectadas cisteína-proteinases (CPs) em promastigotas infectivas de Leishmania (Viannia). braziliensis. A estratégia de purificação consistiu na associação do método de extração por Triton X-114 com cromatografia em coluna de Concanavalina A-Sepharose, seguida por outra de DEAE-Sephacel. No ensaio das cromatografias, observamos um pico majoritário de atividade enzimática na presença do substrato pEFLpNan (165 x 10³² \03BCM de pNan/minuto) para cerca de 10¹0 parasitas, coincidentes com o pico majoritário da proteína eluído da coluna de troca iônica. A análise por SDS-PAGE do material eluído da coluna de troca iônica mostrou quatro principais bandas de proteínas com massas moleculares relativas de 63, 43, 30 e 27 kDa. Os ensaios da atividade enzimática após eletroforese mostraram que as bandas de 63 kDa e 43 kDa, hidrolisam substratos como gelatina em pH 7,0 e são sensíveis à presença de E-64. Além disso, as duas enzimas são capazes de hidrolisar o substrato pEFLpNan: 63 kDa (2,2 ± 0,3 \03BCM de pNan/minuto) e 43 kDa (0,05 ± 0,2 \03BCM de pNan/minuto), e são inibidas por 10\03BCM E-64 (47 % e 36 % respectivamente). Os ensaios de reconhecimento imunológico utilizando um anti-soro policlonal específico contra cisteína-proteinase B [anti-CPB de L. (L.) mexicana] revelaram que as enzimas de 63 kDa são reconhecidas por este anti-soro. Os experimentos de aglutinação, citometria de fluxo e imunocitoquímica utilizando esse mesmo antisoro revelaram que homólogos de CPBs estão localizados na superfície da membrana de promastigotas. Além disso, a incubação dos promastigotas com fosfolipase C (PLC) reduziu o número de células positivas pra os homólogos de CPB. Os anti-soros anti-CRD (cross reactive determinat) e anti-CPB reconhecem bandas de 63kDa e 43 kDa do sobrenadante das células tratadas com PLC em ensaios de immunoblotting sugerindo que isoformas destas proteínas são ancoradas por glicosilfostatidilinositol (GP (GPI) à membrana plasmática. Também observamos que os homólogos de CPBs são presos a membrana por âncora GPI e se concentram em plataformas lipídicas. Nós observamos que as proteínas homólogas a CPB não permanecem estáveis na superfície da membrana quando os parasitas são mantidos em culturas sucessivas, assim como a atividade enzimática total sobre o substrato pEFLpNan é alterada. Mostramos ainda através da técnica RT-PCR em tempo real um aumento da transcrição de cpb de L. (V.) braziliensis quando os parasitas foram submetidos a culturas sucessivas. De uma forma geral os dados apresentados suportam a hipótese de que o parasita estudado apresentam CPs de membrana ativas, além de homólogos de CPB intracelulares. / It was detected cysteine-pro teinases (CPs) in infective Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes . The purification strategy c onsisted of an association of Triton X-114 extraction method with chromatography in Concanavalin A-Sepharose column, followed by chromatography in DEAE-Sephacell column. In the assay pf chromatographic fractions, we observed a peak of enzymatic activity against the pEFLpNan substrate (165 x 10 -32 μM of pNan/minute) in over 10 10 parasites, coincident with the ma jor protein peak eluted from the column. SDS-PAGE analysis of the material eluted from the ionic exchange column showed four main protein bands with relative molecular mass of 63 , 43, 30 and 27 kDa. Gelatin-SDS-PAGE assays indicated that the 43kDa and the 63kDa bands can hydrolyze gelatin at neutral pH and are sensitive to E-64. Also, both enzymes can hydrolyze pEFLpNan substrate: 63 kDa (2,2 ± 0,3 μM of pNan/minute) and 43 kDa (0,05 ± 0,2 μM of pNan/minute) bei ng both inhibited by E-64 (47 % and 36 % inhibition, respectively) . Immunological recognition assays , with a specific polyclonal antibody against CPB from L. (L.) mexicana , showed that bands of 63 kDa and 43 kDa are recognized in the fractions of the ionic exchange column. Aggl utination, flow cytometry and immunocytochemistry assays performed with an ti-CPB antiserum revealed that homologous of CPB are located on the promastigote membrane surface. Moreover, the incubation of promastigotes with phospholipase C reduced th e number of CPBs homologues-positive cells. Both anti-cross-reacting determinant (CRD) a nd anti-CPB antisera recognized 63kDa and 43kDa bands in the supernatant of phospholipase C-treat ed cells, suggesting that isoforms of these proteins are attached to the plasma membra ne by glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchors. Also, our data suggest that GPI-anchored CPBs are present in the detergent - resistant lipid rafts. We observed that the CPB homologues do not remain stable on the membrane surface when the parasites are maintained under successive cultur es; also, the total enzymatic activity over the substrate pEFLpNan is altered. We add itionally showed by real-time RT-PCR that L. (V). braziliensis cpb genes are active and their relative expression is increased throughout the successive cultures. Thus, the presented data support the hypothesis of that studied parasite presents CPs of membrane active, beyond homologous of intracellular CPB.

ROCHA, Moisés dos Santos. Análise da cadeia produtiva dos óleos de gordura residuais com foco nos agentes coletadores de resíduos urbanos: Estudo de caso de Fortaleza. 2010. 167f. Dissertação(Mestrado em Logística e Pesquisa Operacional)-Centro de Tecnologia,Universidade Federal do Ceará,2010. / Submitted by Winne Gomes da Silva (winnegomez87@gmail.com) on 2012-06-15T12:39:57Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_msrocha.pdf: 1421719 bytes, checksum: 5cb4703d1948401e8ed94aa2e8325c3b (MD5) / Approved for entry into archive by Nirlange Queiroz(nirlange@gmail.com) on 2012-06-20T11:54:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_msrocha.pdf: 1421719 bytes, checksum: 5cb4703d1948401e8ed94aa2e8325c3b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-20T11:54:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_msrocha.pdf: 1421719 bytes, checksum: 5cb4703d1948401e8ed94aa2e8325c3b (MD5) Previous issue date: 2010 / Residual fat oils (RFO), derived from oil used in housing or industrial cookery, may be an expressive component of the inputs basket in biodiesel production sector. Those oils have negative impacts on environment mainly when they are thrown out in the soil polluting the groundwater or other water resources on surface. If they are thrown out in the sewerage system there is an increase in the waste treatment costs and obstruction to sewer flows may happen in the waste pipeline. On the other hand, viewed as an input to biodiesel production, RFO generated in urban areas may also be an excellent business opportunity and policy instrument to promote social and economic improvements to deprived segments of urban population. This work reports a study which developed a methodoly to analyze the reverse productive chain of cookery oil applying it to the case of Fortaleza city, in the northeastern Brazil. It focused on the structuring of RFO productive chain in that city using both the Stated Preference technique to elicit information to guide incentive policies to RFO appropriate destination as well as the Capacitated Warehouse Location Problem (CWLP) model to choose the location of 5 RFO primary processing mills in face of 12 available locations in the city aiming to reach minimum logistics costs in that chain. After gathering RFO volumes generated in every Fortaleza district, from both residences and industrial cookery urban segments, it was considered recycling co-operatives in a case to allocate the RFO primary processing mills to be bought with public resources. It was used the Capacitated Warehouse Location Problem (CWLP) to solve the case, resulting in defining those co-operatives chosen to process their own RFO volumes and the amounts coming from other cooperatives. Several scenarios were also built to aid decision making in structuring the RFO chain in Fortaleza, considering future availability of new public resources. The study shows the Stated Preference Technique and the CWLP model are very useful in helping to solve the case study problem. / Os óleos de gordura residuais (OGR), derivados do descarte do óleo de cozinha usado na cocção de alimentos, podem vir a ampliar a cesta de insumos para a produção de biodiesel e reduzir os impactos negativos que causam, quando descartados de forma inadequada, ao meio ambiente e à rede de esgoto urbano, bem como podem também ser instrumentos de promoção de inclusão social e produtiva de segmentos urbanos ora vivendo em condições de vulnerabilidade econômica e sócio-ambiental. O presente trabalho tem como objetivo principal elaborar e aplicar, no caso da cidade de Fortaleza, uma metodologia de análise da cadeia reversa de óleos de cozinha buscando contribuir para a estruturação da rede logística no setor de produção destes resíduos, a partir da rede de catadores de resíduos recicláveis da cidade e considerando os geradores residenciais e empresariais urbanos, com vistas a fortalecer a produção de insumos para o setor do biodiesel. O estudo trata do estado da arte na produção de óleos de gorduras residuais no Brasil e no mundo para fins de produção de biocombustíveis e define a problemática logística envolvida com a cadeia produtiva do OGR em áreas urbanas para fins de utilização como insumo no setor de energia. Descreve a elaboração e aplicação de metodologia de análise da cadeia produtiva do OGR com vistas à sua estruturação no intuito de fornecer insumos ao setor de biocombustíveis. Propõe e aplica a técnica de Preferência Declarada junto aos geradores de OGR para subsidiar políticas de incentivo à transação deste resíduo para utilização no setor de produção do biodiesel. Também, propõe e aplica o modelo do Problema de Localização de Facilidades Capacitado – PLFC para localizar, de forma otimizada, cinco estações de tratamento primário de OGR adquiridas para compor a rede de catadores de materiais recicláveis da cidade em um Programa de inclusão social e produtiva de famílias cadastradas no CadÚnico, financiado pelo Ministério do Desenvolvimento Social e Combate à Fome em parceria com a Secretaria do Trabalho e Desenvolvimento Social do Governo do Estado do Ceará. Os principais resultados obtidos no estudo consubstanciam propostas de políticas e ações que podem consolidar a estruturação da cadeia de produção do OGR na cidade em estudo e fortalecer o segmento de catadores de material reciclável de Fortaleza, na perspectiva da sua sustentabilidade socioeconômica.

Nas últimas décadas houve um incremento do uso de equipamentos eletroeletrônicos, que têm vida útil determinada por vários fatores, como o porte de equipamento e o comportamento do usuário, por exemplo. Quando estes equipamentos e seus acessórios são descartados tornam-se resíduos de equipamentos eletroeletrônicos (REEE). O objetivo desta tese é selecionar variáveis a serem utilizadas como base de um modelo de previsão de demanda para os REEE. O método de pesquisa adotado foi a pesquisa exploratória combinada com a pesquisa conclusiva, utilizando abordagens de caráter qualitativo e quantitativo. A parte qualitativa utiliza como técnicas de pesquisa a revisão bibliográfica, a revisão sistemática, o grupo focado e as entrevistas. Já em relação à parte quantitativa foram utilizados questionários, ferramentas estatísticas (gráficos e coeficiente de correlação posto-ordem de Spearman) e o método AHP. Foram elaborados cinco artigos científicos, que atingindo objetivos específicos, contribuem para o objetivo geral. O primeiro artigo visava obter informações sobre métodos e ferramentas utilizados para realizar a previsão de demanda de REEE. O segundo artigo pretendia delinear o cenário atual dos REEE do ponto de vista das responsabilidades dos stakeholders no processo de logística reversa. Os riscos e oportunidades decorrentes dos REEE foram abordados no artigo 3, fornecendo informações para o cenário do ponto de vista social, ambiental e econômico. Já o artigo 4 focou nas indústrias de equipamentos eletroeletrônicos do RS e buscou informações sobre a forma de produção, a composição dos produtos e ações destas indústrias para implantação do sistema de logística reversa para os REEE. No último artigo foi definido um conjunto de 21 variáveis que influenciam na logística reversa dos REEE e foi realizada a priorização destas variáveis. Como resultado, foram selecionadas 7 variáveis: estimativa de vida útil do equipamento (1º); Disponibilização de pontos de coleta de REEE (2o); Existência de um acordo setorial (3º); Número de equipamentos vendidos (4º); Incentivos para empresas de reciclagem/gerenciadoras de REEE na região (5º); Existência de empresas de reciclagem ou gerenciadoras de REEE na região (6º); Distância dos pontos de coleta de REEE (7º). / In recent decades there has been an increase in the use of electrical and electronic equipment that have life cycles defined by several factors such as the size of the equipment and user behavior, for example. When this equipment and its accessories are disposed, they become waste electrical and electronic equipment (WEEE). The aim of this doctoral dissertation is to select variables to be used as basis for a demand forecasting model for WEEE. The research method adopted combined exploratory research and conclusive research, with a qualitative and quantitative approach. The following research techniques were used in the qualitative part: literature review, systematic review, focus group and interviews. Regarding the quantitative part, the following techniques were used: questionnaires, statistical tools (graphs and the Spearman’s rank-order correlation coefficient) and the AHP method. Five scientific articles were written, which contributed to the general objective by reaching specific objectives. The first article aimed at obtaining information on methods and tools used to carry out demand forecasting of WEEE. The second article intended to describe the current scenario of WEEE from the perspective of the stakeholders’ responsibility in the process of reverse logistics. The risks and opportunities resulting from WEEE were the theme of the third article, which provided information about the scenario from a social, environmental and economic point of view. The fourth article focused on the factories of electrical and electronic equipment of Rio Grande do Sul, and collected information on the product composition and production methods of such factories, and their actions to implement a system of reverse logistics for WEEE. The last article defined a set of 21 variables that influence the reverse logistics of WEEE, and arranged these variables in order of priority. As a result, seven variables were selected: estimate of life cycle of equipment (1st); Availability of WEEE collection points (2nd); Existence of a sector agreement (3rd); Number of equipment sold (4th); Incentives to WEEE recycling/managing companies in the area (5th); Existence of WEEE recycling or managing companies in the area (6th); Distance between WEEE collection points (7th).

A logística reversa de embalagem (LRE) e o design orientado ao território (DT) são abordagens com ênfases diferentes, mas que possuem características que se complementam. A embalagem, por exemplo, surge como uma estratégia com o potencial de comunicação do território e de sustentabilidade ambiental, premissas do DT, através da logística reversa. Este trabalho tem como principal objetivo propor diretrizes e práticas para integração entre essas duas abordagens, LRE e DT. Utilizou-se como unidade de análise um processo de produção orgânica. O método adotado foi a pesquisa-ação, contendo atividades como: (i) revisão de literatura sistematizada para identificação e análise de conceitos, diretrizes, objetivos e ações que permitisse a integração entre a LRE e o DT; (ii) identificação de oportunidades de LRE no contexto do DT a partir do mapeamento de um processo e da sugestão de ferramentas como o blueprint, o Service Failure Mode and Effect Analysis (SFMEA) e a matriz SWOT; (iii) testar as diretrizes de integração propostas em um projeto de embalagens. Dentre os principais resultados do trabalho estão a apresentação de um conjunto de diretrizes norteadoras de LRE em projetos de DT; um diagnóstico de oportunidade de LRE em um projeto de DT, no caso o dos produtores de hortaliças orgânicas; proposição de uma ferramenta para avaliação da integração entre as abordagens e o grau de formalismo presente no planejamento e na gestão da LRE, denominada RADAR DT-LRE; o replanejamento do sistema logístico e o projeto de embalagens; e a aplicação da ferramenta RADAR DT-LRE. Constatou-se que as diretrizes, objetivos e ações integradas entre LRE e DT nortearam de forma satisfatória o sistema de LRE e o projeto das embalagens no caso investigado, apresentando melhorias em relação seu ao estado inicial. As diretrizes com destaque foram: proteção e perpetuação da identidade e do patrimônio, desenvolvimento econômico, redução do impacto ambiental; melhoria da imagem da empresa/negócio e, em menor grau, infraestrutura de suporte ao sistema de logística reversa de embalagens. / The packaging reverse logistics (PRL) and the territorial design (TD) are approaches with different emphases, but that have characteristics that complement each other. The packaging, for example, appears as a strategy with the potential for territory communication and environmental sustainability - assumptions of TD - through reverse logistics. The main of this work is to propose guidelines and practices for integration between the two approaches, PRL and TD. A process of organic production was used as the analysis unit. The method adopted was the action research, containing activities such as: (i) systematic literature review to identify and analyze concepts, guidelines, objectives and actions that allow integration between the PRL and TD; (ii) identification of opportunities for PRL in the context of TD, from a process mapping and suggestion of tools such as blueprint, Service Failure Mode and Effect Analysis (SFMEA) SWOT matrix; and (iii) testing the integration guidelines proposed in a packaging project. The main results of the work are: presenting a set of guidelines for PRL in TD projects; a diagnosis of a opportunity of PRL in a TD project; proposal of a tool to evaluate the level of integration between the two approaches and the degree of formality present in the planning and in the management of PRL, called Radar TD-PRL; redesign of the logistics system and packaging design, and implementation of the tool RADAR TD-PRL. It was found that the guidelines, objectives and integrated actions between PRL and TD guided satisfactorily the PRL system and the packaging design in the investigated case, showing improvements compared to its initial state. The featured guidelines are: protection and perpetuation of identity and heritage, economic development, reduced environmental impact, improving the company's image / business, and, to a lesser extent, infrastructure support system for PRL.