Mémoire (M.Sc.)- Université du Québec à Chicoutimi, 1985. / Document électronique également accessible en format PDF. CaQCU

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5488.pdf: 6839633 bytes, checksum: 645edb29626f001ccadeaa66eff32347 (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / Universidade Federal de Sao Carlos / The study of the phytotoxic potential of species of the Cerrado has been of great interest to researchers seeking in nature sources of substances with properties similar to those of synthetic herbicides. Serjania lethalis A. St- Hil. is a liana found in the cerrado. This is a species with known properties and rich in compounds such as saponins and catechins, with great interest to the pharmaceutical industry. This research aimed to verify the phytotoxic potential of young and mature leaves aqueous extracts of S. lethalis primarily on germination and seedling growth of grass (Panicum maximum Jacq.), which were added aqueous extracts of young and mature leaves on seeds and seedlings of guinea grass in concentrations of 10, 7.5, 5.0 and 2.5%. After this, we evaluated their effect on germination and growth variables. The results indicate that the aqueous extracts interfere with seed germination and seedling growth, but the maturation of leaves did not produce very different results for most of the variables analyzed. Fractions of aqueous and ethanolic extracts were tested on the growth of wheat coleoptile (Triticum aestivum L).In this bioassay, fractions from ethanol and aqueous extracts, obtained by column chromatography, were tested at three different concentrations (0.8, 0.4 and 0.2 mg.mL-1). It has been found that certain fractions were presented as phytotoxic, because they inhibited the growth of coleoptiles. Later, these fractions were tested about the growth of seedlings of sesame (Sesamum indicum L.), at the same concentrations, and the results showed that roots and aerial parts of seedlings had his grow the reduced. Thus, it was decided to verify such changes at the cellular level. Then the same fractions were tested about the growth of cells of metaxylem sesame (Sesamum indicum). Results showed significant reductions in the length of the cells compared to control treatment. The active fractions were fractionated by medium pressure liquid chromatography in order to isolate substances with potential phytotoxicity. Analysis of the active fractions led to the identification of three dimeric procyanidins and polymeric procyanidins (condensed tannins), and a procyanidin unregistered in the literature. It should be noted that the active substances identified were found in young leaves. To identify the substances it was used a Mass Spectrometer and a Nuclear Magnetic Resonance equipment. It was also performed an extraction of saponins from the leaves, roots and stems of S.lethalis. Therefore, it was used methanol and water, and then it was performed a pre-purification, using the technique of Solid Phase Extraction, where eluents methanol and water were used in different proportions. The fractions obtained were analyzed through a Mass Spectrometer. It was tested the phytotoxic potential of extracted saponins, throught a bioassay of coleoptile wheat growth at concentrations 0.8, 0.4 and 0.2 mg. mL-1. It was found that saponins inhibited the growth of coleoptiles, proving its phytotoxic property. This work proved the phytotoxicity of the species S. lethalis. It was also possible to identify a procyanidin present in the ethanol extract of young leaves, with no record in the literature. / O estudo do potencial fitotóxico de espécies do cerrado tem sido de grande interesse para pesquisadores que buscam na natureza fontes de substâncias com propriedades semelhantes às de herbicidas sintéticos. Serjania lethalis A. St- Hil. é uma liana encontrada no cerrado. Trata-se de uma espécie com conhecidas propriedades fitoterápicas e rica em compostos como saponinas, taninos e catequinas, de grande interesse para indústria farmacêutica. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar e comprovar o potencial fitotóxico de folhas jovens e maduras de S. lethalis, primeiramente sobre a germinação e crescimento de plântulas de capim- colonião (Panicum maximum Jacq.), onde foram adicionados extratos aquosos de folhas jovens e maduras sobre sementes e plântulas de capim-colonião nas concentrações 10; 7,5; 5,0 e 2,5%. Posteriormente foi verificado seu efeito sobre as variáveis de germinação e crescimento. Os resultados indicam que os extratos aquosos de folhas interferem na germinação de sementes e no crescimento das plântulas, porém a fase de maturação das folhas não produziu resultados muito distintos para a maioria das variáveis analisadas. Frações de extratos aquosos e etanólicos foram testadas sobre o crescimento de coleóptilos de trigo (Triticum aestivum L). Estas foram obtidas por meio de cromatografia de coluna, foram testadas em três diferentes concentrações (0,8; 0,4 e 0,2 mg.mL-1). Verificou-se que as frações Fje2, Fje3, Fje5 e Fme1 inibiram o crescimento dos coleóptilos. As mesmas frações foram testadas sobre o crescimento de plântulas de gergelim (Sesamum indicum) e os resultados apontaram redução do crescimento das raízes e da parte aérea das plântulas. Assim, foi decidido verificar se esta redução ocorria a partir de alterações a nível celular. Então as mesmas frações foram testadas sobre o crescimento de células do metaxilema de gergelim (Sesamum indicum). Os resultados mostraram reduções significativas do comprimento das células em relação ao tratamento controle. As frações ativas foram fracionadas por meio de cromatografia líquida de média pressão a fim de isolar as substâncias com potencial fitotóxico. Análises das frações ativas levaram à identificação de três procianidinas diméricas e também procianidinas poliméricas (taninos condensados), sendo uma procianidina sem registro na literatura. Ressalta-se que as substâncias ativas identificadas foram encontradas nas folhas jovens. Para identificação das substâncias foi utilizado um Espectrômetro de Massas e um equipamento de Ressonância Magnética Nuclear. Também foram feitas extrações de saponinas a partir das folhas, raízes e caules de S.lethalis. Para tanto, utilizou-se metanol e água, e em seguida foi feita uma prépurificação, utilizando-se a técnica de Extração em Fase Sólida, onde foram utilizados os eluentes metanol e água em diferentes proporções. As frações obtidas foram analisadas por meio de um Espectrômetro de Massas. Foi testado o potencial fitotóxico destas frações através de um bioensaio de crescimento de coleóptilos de trigo nas concentrações de 0,8; 0,4 e 0,2 mg. mL-1. Verificou-se que as frações contendo saponinas inibiram o crescimento dos coleóptilos, comprovando sua propriedade fitotóxica. Este trabalho comprovou a existência de substâncias fitotóxicas em folhas, raízes e caules de S. lethalis. Também foi possível identificar uma procianidina presente no extrato etanólico de folhas jovens, sem registro na literatura.

Cette thèse s’inscrit dans le cadre de la thématique du laboratoire de Pharmacognosie de l’UFR Santé, au sein de l’Université de Bourgogne. Elle vise essentiellement la recherche de molécules d’origine végétale issue de la biodiversité tropicale dotées d’une activité antitumorale et immuno-modulatoire dont principalement les saponines. Ce sont des glycosides triterpéniques ou stéroïdiques connus pour leurs nombreuses propriétés pharmacologiques. L’étude de 4 espèces végétales appartenant à 3 familles à savoir Dracaena marginata L., Dracaena fragrans Ker Gawl (Asparagaceae), Allium flavum L. (Amaryllidaceae) et Weigela stelzneri (Caprifoliaceae),a conduit à l’isolement et à la caractérisation de 26 glycosides naturels. Il s’agit de 22 saponines stéroïdiques parmi lesquelles 6 sont de structure nouvelle ainsi que 4 saponines triterpéniques dont 3 nouvelles. Les structures ont été élucidées principalement par l’utilisation de la RMN 2D ainsi que la spectrométrie de masse. 10 des 26 molécules isolées ont été testées en vue d’évaluer leurs activités cytotoxiques sur deux lignées cellulaires cancéreuses (SW480 et EMT-6), et 3 pour l’étude de la modulation de la production d’une cytokine pro-inflammatoire, l’interleukine IL-1β sur cellules PBMC stimulées par le LPS. Nos résultats montrent que 6 d’entre elles possèdent une activité cytotoxique modérée sur les deux lignées cancéreuses. En revanche, deux saponines triterpéniques de type oléanane exercent les plus fortes cytotoxicités sur les deux lignées cancéreuses comparées à celles des références internes (Etoposide et Methotrexate). De plus elles révèlent un important effet de modulation de la production de l’interleukine IL-1β sur cellules PBMC et de ce fait, un fort potentiel anti-inflammatoire. Des relations structure/activité ont été ainsi proposées. / This thesis was carried out in the Laboratory of Pharmacognosy, in health department of the University of Burgundy. The principal theme of this Laboratory is the research of natural compounds from tropical biodiversity, mainly saponins with antitumoral and immunomodulatory activities. These molecules are triterpenic or steroidic glycosides, well known for their various pharmacological activities. The study of 4 species belonging to 3 different families: Dracaena marginata L., Dracaena fragrans Ker Gawl (Asparagaceae), Allium flavum L. (Amaryllidaceae) et Weigela stelzneri (Caprifoliaceae), led to the isolation and characterization of 26 natural glycosides. Among them, 22 were steroidic saponins with 6 new structures and 4 were triterpenic saponins with 3 new structures. The spectral analysis was achieved using mainly 2D NMR and mass spectrometry. The cytotoxic activities of 10 isolated compounds were evaluated on 2 strains cancer cells (SW480 and EMT-6), and 3 compounds for studying the modulatory effect of the production of pro-inflammatory cytokine, interleukin IL-1β on PBMCs stimulated with LPS. Our results show that six of them have moderate cytotoxic activity on both cancer cell lines. However, two oleanane-type triterpene saponins exert the strongest cytotoxicity on both cancer cell lines compared to internal references (Etoposide and Methotrexate). Moreover they show a significant effect of modulating the production of interleukin IL-1β on PBMCs and thereby a strong anti-inflammatory potential. Structure / activity relationships have been proposed.

Cette thèse s'inscrit dans le cadre de la thématique du Laboratoire de Pharmacognosie de l'UFR des Sciences de santé, au sein de l'Université de Bourgogne Franche-Comté et du Laboratoire de Produits Naturels de la Faculté de Sciences, au sein de l'Universidad de Los Andes (Venezuela). Elle vise essentiellement l'isolement, purification et identification de molécules d'origine végétale avec activité biologique. Dans ce contexte, l'étude de plantes vénézuéliennes, Bursera inversa (Burseraceae), Lepechinia Bullata (Lamiaceae) et Hydrocotyle multifida (Araliaceae) avec des cultivars Pittosporum tenuifolium 'Variegatum' et Pittosporum tenuifolium 'Gold star' a conduit à l'obtention de treize glycosides naturels, un dérivé de l'acide caféique et diverses hydrocarbures à longue chaîne par les techniques de chromatographie de couche mince préparative, de chromatographie liquide à moyenne pression, chromatographie liquide haute performance, et de chromatographie liquide sous vide. Les structures ont été élucidées principalement par les techniques spectroscopiques de RMN-1 D et -2D, et de spectrométrie de masse. Il s'agit de treize saponines triterpéniques de type oléanane (parmi lesquelles neuf sont des nouveaux composés naturels) ainsi que de l'acide rosmarinique et des alcanes et esters d'acides gras à longue chaîne. / This thesis was carried out in the Laboratory of Pharmacognosy, on the Health Sciences section of Université de Bourgogne Franche-Comté (France) and also in the Laboratory of Natural Products of Sciences Faculty of Universidad de Los Andes (Venezuela). The aim of this thesis was the isolation, purification and identification of bioactive molecules from several plant species. ln this context, the study of Venezuelan species, Bursera inversa (Bùrseraceae), Lepechinia Bullata (Lamiaceae) and Hydrocotyle multifida (Araliaceae), together with the cultivars, Pittosporum tenuifolium 'Variegatum' and Pittosporum tenuifolium 'Gold star' was carried out. The study led to the isolation of thirteen natural glycosides, one caffeic acid derivative and several long chain hydrocarbons by column chromatography, preparative thin layer chromatography, medium pressure liquid chromatography, high performance chromatography and vacuum liquid chromatography. The structures were elucidate mainly by spectroscopie techniques, NMR-1 D and 2D, and mass spectrometry. The compounds were characterized as thirteen oleanane-type saponins (among them nine are new natural compounds), rosmarinic acid and several long chain alkanes and fattv acid esters / Este trabajo se presenta bajo la forma de secciones, donde en primer lugar se expone una breve introducción acerca de los géneros de interés para este estudio, como son Bursera (Burseraceae), Hydrocotyle (Araliaceae), Lepechinia (Lamiaceae) y Pittosporum (Pittosporaceae); así como los motivos que llevaron a la realización de este estudio fitoquímico. Cada género es tratado en un capítulo diferente, que abarca una revisión bibliográfica extensa (considerando los aspectos etnobotánicos, fitoquímicos y farmacológicos) del género, seguida por el procedimiento experimental llevado a cabo en cada especie analizada y por último el análisis de los resultados obtenidos.Los compuestos aislados de cultivares de Pittosporum tenuifolium estudiados: 'Variegatum' y 'Gold Star' se encuentran descritos en el primer capítulo entre los que se encuentran ocho nuevas saponinas triterpénicas tipo-oleanano: PT-PI y PT-P4 de los tallos deP. tenuifolium 'Variegatum', PT-P2 y PT-P3 de las hojas de este mismo cultivar, PT-P7 y PT-P8 de los tallos de P. tenuifolium 'Gold Star' y por último, PT-P5 y PT-P6 aisladas de los tallos de ambos cultivares. Además también se describe el compuesto ya conocido, udosaponinaF (PT-P9), identificado en los tallos de P. tenuifolium 'Variegatum' De las especie Hydrocotyle multifìda se aislaron cinco saponinas triterpénicas, descritas en el segundo capítulo, las cuales tienen al ácido oleanólico como genina. Dos de las cinco saponinas son productos naturales nuevos, HmE-P3 y HmE-P2 minoritario; las otras tres saponinas son compuestos ya conocidos, momordin I (HmE-P1), sandrosaponina X (HmE-P2 mayoritario) y hemslósido Mal (HmE-P4) En el tercer capítulo que abarca al género Bursera, incluye los resultados del estudio fitoquímico de las semillas de Bursera inversa, entre los que se puede mencionar la identificación de 45 compuestos en las semillas de esta planta. El último capítulo contiene la descripción del compuesto mayoritario, aislado de las mias de Lepechinia bullata e identificado como el ácido rosmarínico (LB-TI).

Puncturevine (Tribulus terrestris L.) is an annual plant of the Zygophyllaceae family. Its medicinal properties have long been used in traditional Chinese and Indian medicine to treat various diseases. It has been shown that active substances, among which we count steroid saponins, glycosides, flavonoids, phytosterols and alkaloids, have effects on reproduction, effects aphrodisiac, antibacterial, anti-carcinogenic, anti-oxidant, diuretic, antidiabetic, cardiovascular and many other. The aim of this work was to verify the effect of elicitors on the content of selected active ingredients in Puncturevine. The elicitor in this work was acetylsalicylic acid of three different concentrations (10-3 mol.l-1, 10-4 mol.l-1, 10-5 mol.l-1) applied by spraying. Using high performance liquid chromatography and mass spectrometry were in fruits and stems determined the content of diosgenin, protodioscin, ruscogenin. For all three compounds was observed positive effect of the elicitor on their content.

A formulação de vacinas efetivas frequentemente requer a adição de adjuvantes capazes de otimizar as respostas imunes humoral e celular. Com o objetivo principal de contribuir para o desenvolvimento de novos adjuvantes, este trabalho foi desenvolvido buscando aprofundar o conhecimento do mecanismo de ação imunoadjuvante de preparações de saponinas de Quillaja brasiliensis e suas formulações em complexos imunoestimulantes do tipo ISCOM. Como a toxicidade das saponinas é um fator crítico para seu uso em preparações vacinais, inicialmente foram realizados ensaios visando comparar a toxicidade in vitro e in vivo de saponinas extraídas de Quillaja brasiliensis com saponinas de ação imunoestimulante reconhecidas, extraídas de Quillaja saponaria (Quil A). O potencial imunoadjuvante das saponinas solúveis de Q. brasiliensis foi avaliado utilizando preparações com dois antígenos: ovalbumina (OVA) e vírus da diarreia viral bovina (BVDV). Numa etapa seguinte, a atividade imunoadjuvante de ISCOMs preparados com saponinas de Q. brasiliensis foram avaliadas em duas vias de administração. O potencial imunomodulador dessas saponinas foi verificado em experimentos de recrutamento celular in vivo e expressão de genes relacionados ao sistema imune. Os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são menos tóxicas que as de Quil A e apresentam atividade adjuvante similar, caracterizada por um perfil Th1/Th2 balanceado. Q. brasiliensis promoveu uma forte resposta imune celular do tipo Th1 caracterizada por uma robusta reação de hipersensibilidade celular tardia (DTH) e pela produção de IFN- e IL-2. A resposta imune induzida pelos ISCOMs produzidos a partir de saponinas de Q. brasiliensis foram superiores às respostas induzidas pelas saponinas solúveis. Os testes in vivo mostraram que as saponinas de Q. brasiliensis promovem um ambiente imunocompetente no local da inoculação e nos linfonodos drenantes. Esse ambiente foi caracterizado pelo intenso influxo celular (neutrófilos, células NK, células dendríticas, linfócitos T e B), além da expressão diferencial de genes relacionados à ativação do sistema imune. Em suma, os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são seguras e seus potencial adjuvante foi equivalente a saponinas com ação imunoadjuvante conhecida de Q. saponaria. / Effective vaccine formulations frequently require addition of adjuvants able to optimize the cellular and humoral immune responses. With the goal to contribute to the development of new classes of adjuvants, this work was developed in order to achieve deep knowledge on the imunoadjuvant mode of action for Quillaja brasiliensis saponins incorporated into immunostimulant complex (ISCOM). The toxicity of saponins is a critical factor for its usage as vaccine preparations. At first, in vivo and in vivo citoxicity assays were carried out to compare to the effects between saponins extracted from Quillaja brasiliensis and the immunostimulant saponins already known from Quillaja saponaria (Quil A). Imunoadjuvant potential of soluble saponins from Q. brasilienis was evaluated using preparations of two antigens: ovoalbumin (OVA) and bovine viral diarrhea (BVD). As a next step, imunoadjuvant activity of ISCOMS prepared with Q. brasiliensis saponins was evaluated using two routes of administration. The immunomodulatory potential of these saponins was tested during in vivo cell recruitment assays and gene expression related to immune system. Our results demonstrated that Q. brasilienis saponins are less toxic than those from Quil A and presenting similar adjuvant activity, characterized by a Th1/Th2 balance profile. Q.brasiliensis induced a strong Th1 cell-mediated immune responses indicated by a robust delayed type hypersensitivity (DTH) as well as IFN-у and IL-2 production. The immune response induced by ISCOMs from Q. brasiliensis saponins was higher than the one induced by soluble saponins. In vivo experiments indicated that saponins from Q. brasiliensis generate an immunocompetent environment at the injection site and draining lymph nodes. This environment was characterized by an intense cell influx (neutrophils, NK cells, dendritic cells, B and T cells) as well as differential gene expression related to immune system activation. In essence, the results showed that saponins from are safe and their adjuvant potential was equivalent to saponins with imunoadjuvant activity of Q. saponaria.

O grande acúmulo de saponinas nos frutos imaturos de erva mate permite considerá-los uma fonte de matéria prima abundante e ainda não explorada para obtenção de saponinas. As saponinas são conhecidas como tensoativos naturais, sendo utilizadas pelas suas propriedades emulsificantes e farmacológicas. O presente estudo teve como principal objetivo avaliar o uso de técnicas de extração emergentes, como Extração assistida por Ultrassom (US), Campo Elétrico Moderado (CEM) e Extração por Fluido Supercrítico (EFS) para a extração seletiva de saponinas a partir de frutos imaturos de erva mate. Foram investigadas três condições de intensidade de ultrassom (565, 423 e 282 W cm-²) e de intensidade de campo elétrico (50, 37,5 e 25 V cm-1) associadas a diferentes temperaturas de operação. A interação das intensidades de ultrassom e de campo elétrico com diferentes temperaturas foi avaliada através do método de superfície de resposta. Para as extrações por fluido super e sub crítico foram utilizadas três condições de pressão (10, 20 e 30 MPa) e posteriormente sua correlação com diferentes vazões de solvente (1,62; 2,22 e 2,78 x10-4 kg s-1) e temperatura (30, 40 e 50 °C) foi investigada através do métodos de superfície de resposta. Curvas de rendimento das extrações em função do tempo foram levantadas para as condições ótimas de campo elétrico e intensidade de ultrassom (37,5 V cm-1 e 565 W cm-², respectivamente) a 40°C. As curvas foram modeladas matematicamente, com ajuste satisfatório, por modelos cinéticos de 1ª e 2ª ordem e também por um modelo difusivo baseado na 2ª Lei de Fick. Para extração supercrítica, foi construída a curva de extração para a condição de 10 MPa e 40 °C e esta curva foi modelada matematicamente. Assim, foram estimados parâmetros relacionados à transferência de massa, importantes para a compreensão fenomenológica dos processos extrativos. Nesse estudo, a extração com CO2 supercrítico mostrou-se tecnicamente viável para a obtenção de saponinas, sendo mais seletiva em relação aos processos por campo elétrico e ultrassom. Os ensaios com ultrassom e campo elétrico conseguiram gerar extratos brutos com até 68,30 e 64,26 μgilexmg-1extrato em massa de equivalente de saponina por massa de extrato, respectivamente. Os extratos obtidos com fluido supercrítico apresentaram elevada seletividade para saponinas, gerando extratos brutos com até 100,9 μgilex mg-1 extrato de saponina por massa de extrato. A pressão de operação não apresentou efeito tanto no rendimento global de extrato quanto no de saponina. / Considering the substantial amount of saponins in unripe yerba mate fruits, they are an abundant source of raw material not exploited yet. Saponins are known as natural surfactants, being used by their emulsifier and pharmacological properties. This study aimed to evaluate emergent extraction techniques such as Ultrasound (US), Moderate Electric Field (MEF) and Supercritical Fluid Extraction (SFE) for the selective extraction of saponins from unripe fruits of yerba mate. Three power conditions (565, 423 and 282W cm-2), electric field intensities (50, 37.5 and 25 V cm-1) and pressure conditions (10, 20 and 30 MPa) were initially assayed for US, MEF and SFE respectively at 40 °C. Power and electric field intensity were found to affect the saponins yields, thus, their correlation with different temperatures were evaluated with a factorial design. At the optimal condition, US and MEF saponins yields were 6.42% and 6.83% (%gilex gextract-1). Extraction yield curves were raised for optimum conditions of electric field and ultrasound power (37.5 V cm-1 and 565 W cm-², respectively). Three different kinetic models were used to model mathematically the overall extraction curves, namely a first-order, second-order, and a mass transfer model based on Fick’s Law. The operating pressure had no effect on either the overall brute extract or saponins yield for SFE. Although the extracts obtained with supercritical fluid showed low brute extracts yields, it was highly selective for saponins yielding up to 10.09%. For supercritical extraction, the extraction curve for 10 MPa and 40 °C was assayed and the experimental data fitted by a mathematical model. Parameters related to mass transfer, important for understanding of the extractive processes, were successfully estimated. In this study, the extraction with ultrasounds, electric field and supercritical CO2 were shown to be technically viable to obtain saponins from unripe yerba mate fruits, being EFS more selective than the other technics studied.

The experiment was carried out at Itaboapaba Farm, in Silveira Martins RS, Brazil, and was conducted from March 1 up to June 30, 2006, taking 122 days. This study was composed by 20 heifers Jersey race, with average weight of 199 kg and average age of 12 months. The heifers were divided randomly into two treatments: (1) control, in which the basic diet was supplied; (2) Rumex®, in which five gram/animal of phytogenic additive based on vegetal extract were added to the commercial concentrated. The blood sample analysed was removed from the tail vein, between 2º and 3º tail vertebra. The experimental delineation was entirely casualized, with two treatments and ten repetitions. For effect of evaluation of the zootecnic variables, they were taken into account: initial average weight, final average weight, gain of daily average weight. For effect of evaluation of the biochemist variables, they were taken into account: amino aspartate transferase (AST), creatinine, urea, glucose, lactate, proteins, triacilglycerol, cholesterol, albumen, lipoprotein of high density (HDL). For effect of evaluation of the hematologic variables, they were taken into account: counting of hemácias, level of hemoglobin, percentage of hematócrito, counting of leukocytes, counting of segmented neutrófilos, counting of linfócitos, counting of monócitos and counting of eosinófilos. For effect of evaluation of the physiological variables, they were taken into account: body temperature, respiratory frequency and cardiac frequency. The control group animals gained 40.62Kg in 122 days of experiment while the animals supplemented with Rumex® gained 45.39Kg in the same period, presenting a difference of 10.51%, however not significant (P> 0.05). The levels of glucose and triacilglycerol presented significant difference of 5 and 13% respectively between the treatments, demonstrating superior average values in the Rumex®. The linfócitos presented significant difference of 18.29% between the treatments having demonstrated superior average in the Control. The other variables did not present significant difference (P> 0.05) between the treatments. The body temperature, respiratory frequency and cardiac frequency did not present significant difference (P> 0.05) between the treatments. Thus, we can conclude that the use of hytogenic additives is recommended for animals of high production that need a better exploitation the food in an energetic deficit or for animals just weaned / O experimento foi conduzido na Granja Itaboapaba localizada no município de Silveira Martins - RS, de 01 de março a 30 de junho de 2006, perfazendo um total de 122 dias. Foram utilizadas 20 novilhas da raça Jersey, com peso médio de 199 kg e idade média de 12 meses. As novilhas foram divididas aleatoriamente em dois tratamentos: (1) controle, no qual era fornecida a dieta básica; (2) Rumex®, no qual era adicionado ao concentrado comercial cinco gramas/animal de aditivo fitogênico, à base de extratos vegetais. O sangue para análise das variáveis foi retirado da veia caudal, entre a 2º e 3º vértebra caudal. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com dois tratamentos e dez repetições. Para efeito de avaliação das variáveis zootécnicas foram considerados os seguintes itens: peso médio inicial, peso médio final, ganho de peso médio diário. Para efeito de avaliação das variáveis bioquímicas foram considerados os seguintes itens: aspartato amino transferase (AST), creatinina, uréia, glicose, lactato, proteínas, triacilglicerol, colesterol, albumina, lipoproteína de alta densidade (HDL). Para efeito de avaliação das variáveis hematológicas foram considerados os seguintes itens: contagem de hemácias, nível de hemoglobina, percentual de hematócrito, contagem de leucócitos, contagem de neutrófilos segmentados, contagem de linfócitos, contagem de monócitos e contagem de eosinófilos. Para efeito de avaliação das variáveis fisiológicas foram considerados os seguintes itens: temperatura corporal, freqüência respiratória e freqüência cardíaca. Os animais do grupo controle ganharam 40,62kg em 122 dias de experimento já os animais suplementados com Rumex® ganharam 45,39kg no mesmo período, não significativa (P>0,05). Os níveis de glicose e de triacilglicerol apresentaram diferença significativa de 5 e 13% respectivamente entre os tratamentos, demonstrando valores de média superiores no Rumex®. Os linfócitos apresentaram diferença significativa (P<0,05) de 18,29% entre os tratamentos demonstrando média superior no Controle. As demais variáveis não apresentaram diferença significativa (P>0,05) entre os tratamentos. A temperatura corporal, freqüência respiratória e freqüência cardíaca não apresentaram diferença significativa (P>0,05) entre os tratamentos. Assim podemos concluir que o uso de aditivos fitogênicos é indicado para animais que necessitam um melhor aproveitamento do alimento em situações onde há um déficit de peso

O grande acúmulo de saponinas nos frutos imaturos de erva mate permite considerá-los uma fonte de matéria prima abundante e ainda não explorada para obtenção de saponinas. As saponinas são conhecidas como tensoativos naturais, sendo utilizadas pelas suas propriedades emulsificantes e farmacológicas. O presente estudo teve como principal objetivo avaliar o uso de técnicas de extração emergentes, como Extração assistida por Ultrassom (US), Campo Elétrico Moderado (CEM) e Extração por Fluido Supercrítico (EFS) para a extração seletiva de saponinas a partir de frutos imaturos de erva mate. Foram investigadas três condições de intensidade de ultrassom (565, 423 e 282 W cm-²) e de intensidade de campo elétrico (50, 37,5 e 25 V cm-1) associadas a diferentes temperaturas de operação. A interação das intensidades de ultrassom e de campo elétrico com diferentes temperaturas foi avaliada através do método de superfície de resposta. Para as extrações por fluido super e sub crítico foram utilizadas três condições de pressão (10, 20 e 30 MPa) e posteriormente sua correlação com diferentes vazões de solvente (1,62; 2,22 e 2,78 x10-4 kg s-1) e temperatura (30, 40 e 50 °C) foi investigada através do métodos de superfície de resposta. Curvas de rendimento das extrações em função do tempo foram levantadas para as condições ótimas de campo elétrico e intensidade de ultrassom (37,5 V cm-1 e 565 W cm-², respectivamente) a 40°C. As curvas foram modeladas matematicamente, com ajuste satisfatório, por modelos cinéticos de 1ª e 2ª ordem e também por um modelo difusivo baseado na 2ª Lei de Fick. Para extração supercrítica, foi construída a curva de extração para a condição de 10 MPa e 40 °C e esta curva foi modelada matematicamente. Assim, foram estimados parâmetros relacionados à transferência de massa, importantes para a compreensão fenomenológica dos processos extrativos. Nesse estudo, a extração com CO2 supercrítico mostrou-se tecnicamente viável para a obtenção de saponinas, sendo mais seletiva em relação aos processos por campo elétrico e ultrassom. Os ensaios com ultrassom e campo elétrico conseguiram gerar extratos brutos com até 68,30 e 64,26 μgilexmg-1extrato em massa de equivalente de saponina por massa de extrato, respectivamente. Os extratos obtidos com fluido supercrítico apresentaram elevada seletividade para saponinas, gerando extratos brutos com até 100,9 μgilex mg-1 extrato de saponina por massa de extrato. A pressão de operação não apresentou efeito tanto no rendimento global de extrato quanto no de saponina. / Considering the substantial amount of saponins in unripe yerba mate fruits, they are an abundant source of raw material not exploited yet. Saponins are known as natural surfactants, being used by their emulsifier and pharmacological properties. This study aimed to evaluate emergent extraction techniques such as Ultrasound (US), Moderate Electric Field (MEF) and Supercritical Fluid Extraction (SFE) for the selective extraction of saponins from unripe fruits of yerba mate. Three power conditions (565, 423 and 282W cm-2), electric field intensities (50, 37.5 and 25 V cm-1) and pressure conditions (10, 20 and 30 MPa) were initially assayed for US, MEF and SFE respectively at 40 °C. Power and electric field intensity were found to affect the saponins yields, thus, their correlation with different temperatures were evaluated with a factorial design. At the optimal condition, US and MEF saponins yields were 6.42% and 6.83% (%gilex gextract-1). Extraction yield curves were raised for optimum conditions of electric field and ultrasound power (37.5 V cm-1 and 565 W cm-², respectively). Three different kinetic models were used to model mathematically the overall extraction curves, namely a first-order, second-order, and a mass transfer model based on Fick’s Law. The operating pressure had no effect on either the overall brute extract or saponins yield for SFE. Although the extracts obtained with supercritical fluid showed low brute extracts yields, it was highly selective for saponins yielding up to 10.09%. For supercritical extraction, the extraction curve for 10 MPa and 40 °C was assayed and the experimental data fitted by a mathematical model. Parameters related to mass transfer, important for understanding of the extractive processes, were successfully estimated. In this study, the extraction with ultrasounds, electric field and supercritical CO2 were shown to be technically viable to obtain saponins from unripe yerba mate fruits, being EFS more selective than the other technics studied.

A formulação de vacinas efetivas frequentemente requer a adição de adjuvantes capazes de otimizar as respostas imunes humoral e celular. Com o objetivo principal de contribuir para o desenvolvimento de novos adjuvantes, este trabalho foi desenvolvido buscando aprofundar o conhecimento do mecanismo de ação imunoadjuvante de preparações de saponinas de Quillaja brasiliensis e suas formulações em complexos imunoestimulantes do tipo ISCOM. Como a toxicidade das saponinas é um fator crítico para seu uso em preparações vacinais, inicialmente foram realizados ensaios visando comparar a toxicidade in vitro e in vivo de saponinas extraídas de Quillaja brasiliensis com saponinas de ação imunoestimulante reconhecidas, extraídas de Quillaja saponaria (Quil A). O potencial imunoadjuvante das saponinas solúveis de Q. brasiliensis foi avaliado utilizando preparações com dois antígenos: ovalbumina (OVA) e vírus da diarreia viral bovina (BVDV). Numa etapa seguinte, a atividade imunoadjuvante de ISCOMs preparados com saponinas de Q. brasiliensis foram avaliadas em duas vias de administração. O potencial imunomodulador dessas saponinas foi verificado em experimentos de recrutamento celular in vivo e expressão de genes relacionados ao sistema imune. Os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são menos tóxicas que as de Quil A e apresentam atividade adjuvante similar, caracterizada por um perfil Th1/Th2 balanceado. Q. brasiliensis promoveu uma forte resposta imune celular do tipo Th1 caracterizada por uma robusta reação de hipersensibilidade celular tardia (DTH) e pela produção de IFN- e IL-2. A resposta imune induzida pelos ISCOMs produzidos a partir de saponinas de Q. brasiliensis foram superiores às respostas induzidas pelas saponinas solúveis. Os testes in vivo mostraram que as saponinas de Q. brasiliensis promovem um ambiente imunocompetente no local da inoculação e nos linfonodos drenantes. Esse ambiente foi caracterizado pelo intenso influxo celular (neutrófilos, células NK, células dendríticas, linfócitos T e B), além da expressão diferencial de genes relacionados à ativação do sistema imune. Em suma, os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são seguras e seus potencial adjuvante foi equivalente a saponinas com ação imunoadjuvante conhecida de Q. saponaria. / Effective vaccine formulations frequently require addition of adjuvants able to optimize the cellular and humoral immune responses. With the goal to contribute to the development of new classes of adjuvants, this work was developed in order to achieve deep knowledge on the imunoadjuvant mode of action for Quillaja brasiliensis saponins incorporated into immunostimulant complex (ISCOM). The toxicity of saponins is a critical factor for its usage as vaccine preparations. At first, in vivo and in vivo citoxicity assays were carried out to compare to the effects between saponins extracted from Quillaja brasiliensis and the immunostimulant saponins already known from Quillaja saponaria (Quil A). Imunoadjuvant potential of soluble saponins from Q. brasilienis was evaluated using preparations of two antigens: ovoalbumin (OVA) and bovine viral diarrhea (BVD). As a next step, imunoadjuvant activity of ISCOMS prepared with Q. brasiliensis saponins was evaluated using two routes of administration. The immunomodulatory potential of these saponins was tested during in vivo cell recruitment assays and gene expression related to immune system. Our results demonstrated that Q. brasilienis saponins are less toxic than those from Quil A and presenting similar adjuvant activity, characterized by a Th1/Th2 balance profile. Q.brasiliensis induced a strong Th1 cell-mediated immune responses indicated by a robust delayed type hypersensitivity (DTH) as well as IFN-у and IL-2 production. The immune response induced by ISCOMs from Q. brasiliensis saponins was higher than the one induced by soluble saponins. In vivo experiments indicated that saponins from Q. brasiliensis generate an immunocompetent environment at the injection site and draining lymph nodes. This environment was characterized by an intense cell influx (neutrophils, NK cells, dendritic cells, B and T cells) as well as differential gene expression related to immune system activation. In essence, the results showed that saponins from are safe and their adjuvant potential was equivalent to saponins with imunoadjuvant activity of Q. saponaria.