Em experimento conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos da concentração da dose de sêmen e o horário da inseminação artificial a tempo pré-fixado, foram utilizadas 516 fêmeas bovinas. Os animais, das raças Aberdeen Angus (Bos taurus) e Braford (Bos taurus 5/8 x Bos indicus 3/8) eram constituídos de 270 novilhas e 246 vacas multíparas. Os animais foram submetidos a um protocolo de sincronização de estros e ovulação através de implante vaginal contendo 250 mg de Acetato de Medroxiprogesterona (MAP) associado a duas aplicações de Benzoato de Estradiol (BE), sendo a primeira de 2 mg IM por ocasião da inserção do implante e a segunda de 1 mg IM vinte e quatro horas após a retirada do mesmo. Quando da remoção do implante foram administrados 500 mcg de Cloprostenol Sódico. As inseminações foram efetuadas às 48, 54 ou 60 horas após a retirada do implante, utilizando para cada momento duas concentrações distintas de espermatozóides viáveis, 10 e 20 milhões por dose. Verificou-se que as fêmeas (em especial as novilhas) inseminadas às 48 horas com 20 milhões de sptz/dose apresentaram índice de prenhez significativamente maior do que as inseminadas no mesmo momento com 10 milhões sptz/dose. As vacas inseminadas com 10 milhões de sptz às 60h apresentaram melhor taxa de prenhez (p<0,05) quando comparadas às inseminadas com 10 milhões de sptz às 48h. O percentual de prenhez encontrado nas vacas foi significativamente maior que o das novilhas, assim como o verificado nas fêmeas Aberdeen Angus, comparadas às Braford. A taxa de prenhez de novilhas inseminadas a tempo fixo pode ser incrementada utilizando-se maior número de espermatozóides viáveis por dose inseminante. / The objective of this study was to analyse the effects of semen concentration and moment of fixed timed insemination on pregnancy rates in 516 beef cattle females of the Aberdeen Angus (Bos taurus) and Braford (Bos taurus 5/8 x Bos indicus 3/8) breeds. The females were constituted of 270 heifers and 246 multiparous cows. The animals were all submitted to a synchronization program consisting of vaginal implants of 250mg of medroxiprogesterone acetate (MPA) associated to application of 2mg IM of estradiol benzoate (EB).After 7 days the implants were removed and 500 mg of cloprostenol were injected at the time. After 24hs of implant removal 1mg IM of EB was injected. The inseminations were done 48, 54 and 60 hours after the removal of the implants and semen with 10 and 20 million viable spermatozoa per dosis was used. The females (specially the heifers) of the group inseminated 48 hours after implant removal and using semen with 20 million viable sptz showed a significant higher percentage of pregnancy than the inseminated 48 hours using 10 million viable sptz. The cows inseminated at 60 hours with 10 million sptz showed higher pregnancy rates (p<0,05) than cows inseminated at 48 hours with 10 million sptz. The total pregnancy rate achieved on the cows was significantly higher than on the heifers. The females of the A. Angus group had higher pregnancy rates than the females of the Braford breed. The pregnancy rate of heifers fixed-timed inseminated can be increased using a higher semen concentration.

Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado a fim de avaliar o efeito da utilização, combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados. As amostras foram avaliadas, pela motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e pela integridade e funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu- Crio® apresentou as maiores médias, nas análises de motilidade total (55,53%) e progressiva (17,25%), após o descongelamento. O diluente Botu-Crio® ,isoladamente, apresentou também os melhores resultados quando foram realizadas as análises de integridade (CFDA/PI) e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico. / During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to some deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), their freezing rates and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on the total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates were analyzed. The total and progressive motility of fresh and postthawing semen samples were evaluated by the patterns assays. The function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. The integrity of plasmatic membrane was evaluated using CFDA/PI fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combined used between Botu-Crio® and automated curves showed better results in total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed better results in order to preserve the membrane integrity and function.

Os Triglicerídeos são essenciais para o metabolismo espermático e um alto nível deste está associado com boa qualidade do sêmen. O nível de ácidos graxos poliinsaturados (PUFA) é considerado um elemento crítico para a capacitação espermática e está associada à motilidade espermática e com maior fluidez de membrana. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da alimentação suplementar de garanhões, com óleo de arroz comercial (Gama-Horse, HT Nutri ®, Brasil), em parâmetros espermáticos. Quatro garanhões com idades variando entre 6 e 30 anos foram utilizados. Os animais tiveram o mesmo manejo durante os 190 dias de tratamento. O experimento foi dividido em três períodos: pré-tratamento (PT) - 30 dias para a estabilização das reservas espermáticas; tratamento (TR) - 80 dias de suplementação com 200 ml de óleo arroz contendo 34% ácido linolêico, 1% ácido linolênico, 1% gama-oryzanol e 660mg/Kg vitamina E; controle (CN) - 80 dias sem suplementação de óleo de arroz. Ejaculados foram coletados duas vezes por semana com uma vagina artificial. As avaliações do sêmen foram realizadas imediatamente após a colheita, sendo avaliados volume, concentração, motilidade total, funcionalidade (HOST) e integridade (CFDA / PI) da membrana e potencial antioxidante total (TRAP). Uma amostra de sangue foi obtida cada 15 dias para avaliar testosterona e estradiol plasmáticos. Para avaliar o efeito da suplementação de óleo de arroz no sêmen os dados dos últimos 20 dias a partir da TR com os últimos 20 dias a partir da CN foram analisados com ANOVA, com uma significância estatística de P < 0,05. A suplementação do óleo de arroz aumentou a concentração (P < 0,01) (TR: 226 x 106/mL; NC: 172 x 106/mL), motilidade total (P < 0,01) (TR: 59%; NC: 42%), HOST (P < 0,02) (TR: 73%; NC: 69%) e TRAP (P < 0,01) (TR: 1,9 nmol Trolox / mg de proteína; CN: 0,98 nmol Trolox / mg de proteína). Não foram observadas diferenças entre os períodos TR e CN em volume, integridade de membrana, testosterona e estradiol. A suplementação oral com o óleo de arroz comercial contendo PUFA e gama-oryzanol aumentou o potencial antioxidante total do sêmen. Além disso, foi detectado uma maior funcionalidade de membrana, provavelmente devido a defesa antioxidante evitando peroxidação lipídica da membrana espermática ou a uma melhoria da fluidez da membrana. / Triglycerides are essential for sperm metabolism and a high level of triglycerides is associated with good semen quality. The level of polyunsaturated fatty acids (PUFA) is considered a critical feature for capacitation and is associated with sperm motility and with increased membrane fluidity. The aim of this experiment was to evaluate the effects of the supplementary feeding of stallions, with commercial rice oil (Gama- Horse, HT Nutri®, Brazil), on sperm parameters. Four stallions with ages ranging between 6 and 30 years were used. The animals had the same management during the 190 days of trial. The experiment was divided in three periods: pre-treatment (PT) - 30 days to sperm reserves stabilization; treatment (TR) - 80 days supplementation with 200 mL rice oil containing 34% linoleic acid, 1% linolenic acid, 1% gamma oryzanol and 660mg/Kg vitamin E; control (CN) - 80 days without rice oil supplementation. Ejaculates were collected twice a week with an artificial vagina. Semen exams were performed immediately after collection, being evaluated volume, concentration, total motility, functionality (HOST) and integrity (CFDA/PI) of membrane and total antioxidant potential (TRAP). A blood sample was obtained each 15 days to evaluate plasma testosterone and estradiol. To evaluate the effect of the rice oil supplementation the semen data from the last 20 days from TR with the last 20 days from CN were analyzed with ANOVA, with a statistical significance from 0.05. The supplementation of rice oil increased concentration (P < 0.01) (TR: 226 x 106/mL; CN: 172 x 106/mL), total motility (P < 0.01) (TR: 59%; CN: 42%), HOST (P < 0.02) (TR: 73%; CN: 69%) and TRAP (P < 0.01) (TR: 1.9 nmol Trolox/mg of protein; CN: 0.98 nmol Trolox/mg of protein). No differences among periods TR and CN were observed in volume, membrane integrity, testosterone and estradiol. Oral supplementation with the commercial rice oil containing PUFA and gamma-oryzanol increased the total antioxidant potential of the semen. In addition, a higher membrane functionality and motility was detected, probably due to antioxidant protection avoiding lipid peroxidation of sperm membrane or to a improved membrane fluidity.

Nesse estudo comparou-se o efeito tamponante do HEPES e Bicarbonato de Sódio em manter o pH e a viabilidade do sêmen resfriado de pôneis da raça Brasileira. As alterações no pH ocasionadas por diferentes diluições com diluente a base de leite desnatado em pó sem tampão a 5 e a 15°C também foram medidas. No experimento 1 avaliou-se o efeito da diluição e da temperatura de resfriamento sobre a motilidade, integridade de membrana, pH e atividade mitocondrial do sêmen pré e pós resfriamento. O sêmen de nove pôneis da raça Brasileira (dois ejaculados/pônei) foi diluído em diluente a base de leite desnatado (em pó) sem tampão e refrigerado a 5 ou 15°C por 48h em três diferentes diluições (1+1, 1+2, 1+3). As três diluições não alteraram os parâmetros avaliados após a diluição a fresco. A diluição 1+1 resultou em valores maiores de pH (7,63 e 7,57, respectivamente) e menor percentual de motilidade progressiva (MP) a 5 e a 15°C. O maior percentual de células íntegras (1+1=44,16; 1+2=48,16; 1+3=50,05) foi detectado a 15°C (P < 0,01), independente da diluição. A MP foi maior nas 48h de resfriamento (39,72%; P < 0,05) quando o sêmen foi diluído a 1+3 e refrigerado a 15°C. A atividade mitocondrial (P > 0,05) em função do tempo e temperatura foi similar entre as diluições. No experimento 2 avaliou-se o efeito tampão do bicarbonato de sódio e do HEPES em diluentes sobre a viabilidade de espermatozoides resfriados a 5°C durante 48h. Os diluentes testados compunham-se de leite desnatado em pó com bicarbonato de sódio (A), HEPES (B) ou diluente sem tampão (C). O sêmen de sete pôneis da raça Brasileira (três ejaculados/pônei) foi utilizado e a motilidade progressiva foi similar entre os diluentes (P > 0,05) após a diluição. Nas 24 e 48h, a MP foi, respectivamente, para A (44,76%; 25,23%), B (51,42%; 38,09%) e C (54,05%; 41,66%). A integridade da membrana plasmática foi similar após a exposição aos três diluentes. A fresco, a atividade mitocondrial foi maior (P < 0,05) no sêmen exposto ao diluente A (A=1,05nm, B=0,81nm, C=0,79nm) e após 24h A e B foram similares (0,83nm; 0,73nm), enquanto que no diluente C observou-se menor atividade (0,64nm). Nas 48h não houve diferença (A=0,72; B=0,69; C=0,63; P > 0,05). O pH do diluente e sua osmolaridade, assim como o pH do sêmen diluído foi maior no diluente A (8; 382; 7,9), intermediário (7,5; 362; 7,32) no B e menor no C (7,16; 350; 7,07). A peroxidação lipídica e a indução da peroxidação foram similares em todos os grupos. Sugere-se que, quando da utilização do sêmen a fresco, qualquer das diluições aqui testadas pode ser utilizada com segurança. O resfriamento do sêmen por 48h modifica e eleva o pH do sêmen. Os melhores resultados foram observados com o resfriamento do sêmen a 15°C por 48h e com a diluição 1+3 em um diluente a base de leite em pó desnatado sem tampão. O bicarbonato de sódio (A) reduz a MP e aumenta o pH do sêmen. O diluente sem tampão foi considerado o mais apropriado para uso imediato na IA. Tanto o diluente com HEPES, quanto o diluente sem tampão foram adequados para o resfriamento do sêmen equino a 5°C durante 48h. / This study compared the buffering effect of HEPES and sodium bicarbonate on pH and viability of Brazilian pony semen cooled at 5°C. pH changes caused by different dilutions using skim milk powder semen extender without buffer were also measured. In experiment 1, the effect of dilution and cooling temperature on semen motility, membrane integrity, mitochondrial activity and pH pre and post cooling was investigated. Ejaculates of nine Brazilian ponies (two ejaculates per pony) were diluted, of a non buffered powder milk extender and cooled at 5°C or 15°C during 48h in three different dilutions (1+1, 1+2 and 1+3). Dilutions did not change the parameters evaluated before cooling. Samples diluted 1+1 resulted in higher pH values (7.63 and 7.57, respectively) and lowest percentage of progressive motility (PM) at 5 and 15°C. All samples cooled at 15°C showed a lower incidence of abnormal spermatozoa (1+1 = 55.84%; 1+2 = 51.84%; 1+3 = 49.95%) (P < 0.01) independent of dilution. Progressive motility was higher when semen was cooled during 48h in 1+3 dilution at 15°C (39.72%; P < 0.05). Mitochondrial activity despite of time and temperature was similar (P > 0.05) among dilutions. In experiment 2, the buffer effect of sodium bicarbonate and HEPES on extenders were evaluated considering the maintenance of sperm viability after cooling at 5°C during 24 and 48h. A non-buffered milk powder extender (C = control) and the same extender buffered with Sodium Bicarbonate (A) and HEPES (B) was used. Semen from 7 Brazilian ponies (three ejaculates / pony) was used. Immediately after dilution sperm motility was evaluated and progressive motility was similar with all extenders (P > 0.05). At 24 and 48h after cooling at 5oC sperm motility was evaluated, respectively, on groups A (44.76%; 25.23%), B (51.42%; 38.09%) and C (54.05%; 41.66%). Plasma membrane integrity was similar after exposure to the three extenders. Before cooling, mitochondrial activity was higher (P <0.05) in extender A (A = 1.05nm, B = 0.81nm, C = 0.79nm). Mitochondrial activity after cooling for 24h was 0.83nm (A), 0.73nm (B) and 0.64nm (C). After 48h it decreased to 0.72nm (A), 0.69nm (B) and 0.63nm (C) (P > 0.05), respectively. The extenders pH, osmolarity and pH of diluted semen was higher in A (8; 382; 7.9), intermediate in B (7.5; 362; 7.32) and lower in C (7.16; 350; 7.07). Lipid peroxidation and its induction were similar in all groups. It was concluded that all dilution grades in fresh semen were adequate and that pH was affected and increased when semen was extended and cooled for 48h. The best results were observed when semen was diluted at 1+3 and cooled at 15°C for 48h in a non buffered powder milk extender. Sodium bicarbonate (A) reduces progressive motility and increases semen pH. The non buffered (C) semen extender was considered more appropriated for semen dilution for immediate use in artificial insemination. The non buffered and HEPES buffered semen extenders were considered appropriated for cooling equine semen at 5°C during 48h.

Dois experimentos foram conduzidos para verificar a viabilidade do uso do leite UHT como diluente para sêmen equino refrigerado. O objetivo principal deste estudo foi avaliar o uso de leite UHT nas apresentações desnatado, semidesnatado e integral como diluente de sêmen e posteriormente foi avaliada a viabilidade espermática com o uso de leite como diluente comparado a outros dois diluentes industrializados. No experimento I foram utilizados 31 ejaculados de 3 garanhões, as amostras de cada ejaculado foram diluídas em leite UHT nas apresentações integral, semidesnatado e desnatado, numa proporção de 3:1 (3 ml de diluente e 1ml de sêmen). Foram realizadas análises de viabilidade espermática com testes de motilidade espermática, vigor espermático, integridade de membrana (CFDA/PI) e funcionalidade de membrana espermática (HOST) pós-diluição, os quais foram repetidos nas amostras refrigeradas a 4ºC após 24 e 48h. Neste experimento, não foram observadas diferenças significativas entre os 3 diluentes, quanto a motilidade espermática, vigor, CFDA/PI e HOST. No entanto, houve uma diminuição na qualidade do sêmen armazenado por 48h (P < 0,01), sendo mais acentuada entre 24 e 48h de refrigeração. No experimento II foram utilizados 30 ejaculados de 3 garanhões onde, logo após a coleta do sêmen, as amostras de cada ejaculado foram diluídas com leite UHT desnatado (LD), Botusemen® (BS) e Botusemen Special® (BSP). As amostras foram examinadas a fresco, após a diluição (0h) e em resfriamento de 24h e 48h a 4°C. Foram realizados os mesmos testes de análise espermática do primeiro experimento para avaliação comparativa dos diluentes. As amostras de sêmen refrigeradas com BSP obtiveram maior porcentagem de motilidade total (51,1%) após 24h de refrigeração quando comparado aos outros dois diluentes testados, LD (45,8%) e BS (47,3%). Com base nos resultados obtidos nos dois experimentos, o leite UHT, independente da apresentação, pode ser utilizado como diluente de sêmen para as primeiras 24h de refrigeração, mantendo a viabilidade espermática adequada, sendo também de fácil acesso e manuseio. Se for necessário a manutenção do sêmen por mais de 24h, o BSP se mostrou superior em manter a qualidade do sêmen até 48h. / Two experiments were conducted to verify the feasibility of the use of UHT milk as an extender for chilled equine semen. The main objective of this study was to evaluate the use of UHT milk in skimmed, semi-skimmed and whole milk as extender for semen and subsequently assess sperm viability using milk as a diluent compared to two other industrial extenders. In the first experiment were used 31 ejaculates from 3 stallions of known fertility, samples of each ejaculate were diluted in the whole UHT milk, semi-skimmed milk and skim milk shows a ratio of 3:1 (3ml diluent and 1ml of semen). Sperm viability analyzes were performed, including sperm motility, sperm vigor, membrane integrity (CFDA/PI) functionality and sperm membrane (HOST) post-dilution tests which were repeated in the samples cooled to 4°C after 24 and 48h. In this experiment, no significant differences in sperm motility, vigor, CFDA/IP and HOST were observed among the 3 extenders. However, there was a decrease in the quality of semen stored for 48h (P < 0.01), being more pronounced between 24 and 48h of cooling. In the second experiment, 30 ejaculates from 3 stallions were used soon after collection of semen samples, each ejaculate was diluted with UHT skim milk (LD), Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSP). The samples were analyzed fresh, immediately after the dilution (0h) and after cooling for 24h and 48h at 4°C. The same tests of sperm analysis used in the first experiment for comparative evaluation of extenders were performed. Semen samples cooled with BSP obtained the highest percentage of total motility (51.1%) after 24h of cooling when compared to the two other extenders tested, LD (45.8%) and BS (47.3%). Based on the results from the two experiments, UHT milk, regardless of the presentation, can be used as a diluent of semen during the first 24h of cooling maintaining adequate sperm viability and is easy to access and handle. If maintenance of semen for more than 24h is required, the BSP was superior in maintaining the quality of semen until 48h.

O objetivo deste estudo foi testar um sistema de Polietileno para o transporte de sêmen equino refrigerado por um período de até oito horas. Foram utilizados um total de 87 ejaculados de cinco diferentes garanhões, com idade média de 10 anos, sendo três da raça Puro Sangue de Corrida e dois da raça Pônei Miniatura Brasileiro. Os garanhões foram coletados duas vezes por semana utilizando vagina artificial. Após cada coleta, o sêmen foi avaliado a fresco e diluído na proporção 1+1 (diluente + sêmen) com leite desnatado UHT e dividido em quatro alíquotas de igual volume. No grupo controle (GC) o sêmen foi analisado logo após a diluição (zero hora – 0h). Nos demais grupos o sêmen foi mantido por oito horas (8h) em três diferentes sistemas de transporte: Equitainer® (GE), Botuflex®(GB) e Sistema de Polietileno - Refrigerado (SP) ou Não-Refrigerado (SPN). Foram avaliadas a motilidade total, vigor, a integridade de membrana plasmática (CFDA/PI), funcionalidade de membrana plasmática (HOST) e morfologia espermática. No SP não ocorreu diferença estatística em todos os parâmetros avaliados, quando comparado com o GE e o GB (médias da motilidade total = 45,00%, 49,29% e 46,40%; médias do vigor = 2,04, 2,18 e 2,01; médias do CFDA/PI = 71,12%, 73,29%, 71,32; médias do HOST = 39,70%, 41,21% e 39,76%; e médias da morfologia = 80,50%, 82,29% e 81,28%, valores respectivos de cada parâmetro para SP, GE e GB), enquanto o SPN apresentou valores médios inferiores ao GE para todos os parâmetros avaliados (médias da motilidade total = 50,65% e 62,60%; médias do vigor espermático = 1,78 e 2,43; médias do CFDA/PI = 72,56% e 78,30%; médias do HOST = 43,56% e 48,87%; médias da morfologia = 77,17% e 84,82%, respectivamente para SPN e GE). Com base nos dados podemos concluir que o SP foi igual ou não diferiu dos demais sistemas estudados, já o SPN se apresentou inferior aos demais sistemas estudados neste experimento. Portanto, o uso do SP é indicado para o transporte de sêmen refrigerado por oito horas, quando comparado aos demais sistemas estudados neste trabalho. / The aim of this study was to test a polyethylene system to ship equine cooled semen. A total of 87 ejaculates from five different stallions with known fertility, mean age 10 years, were used, being three Thoroughbred and two Miniature Pony horse. The stallions were collected twice a week using an artificial vagina. After each collection the semen was diluted 1+1 (diluent+semen) with UHT skim milk and divided into four aliquots of equal volume, yielding a total of four groups. In the control group (CG) the semen was analyzed immediately after dilution (zero hour - 0h). In the other groups semen was stored for eight hours (8h) in three different transport systems: Equitainer® (EG), Botuflex® (BG) and Polyethylene System - Cooled (PS) or Non-Cooled (NPS). The total motility, vigor, plasma membrane integrity (CFDA/PI), plasma membrane functionality (HOST) and sperm morphology were evaluated. In PS did not occur a statistical difference in all parameters compared with EG and BG (averages of total motility = 45.00%, 49.29% and 46.40%, the average effect = 2.04, 2 18 and 2.01; averages CFDA / PI = 71.12%, 73.29%, 71.32; averages HOST = 39.70%, 41.21% and 39.76%, and the average of morphology = 80.50%, 82.29% and 81.28%, respective values of each parameter to PS, EG and BG), while the NPS showed lower mean values than the EG to all parameters (total motility averages = 50,65% and 62,60%, sperm vigor averages = 1,78 and 2,43; CFDA / PI averages = 72,56% and 78,30%; HOST averages = 43,56% and 48,87 %, morphology averages = 77.17% and 84.82%, respectively for NPS and EG). Based on the results we can conclude that the PS was equal or did not differ from the other systems studied, the NPS already performed lower than the other systems studied in this experiment. Therefore, the use of the SP is indicated for the transport of cooled semen for eight hours as compared to other systems studied in this work.

No presente estudo três concentrações de N-acetil-l-cisteina (NAC) foram avaliadas no diluente equino resfriado a 5°C através da motilidade do sêmen, integridade da cromatina espermática e choque hiposmótico sobre o ejaculado em diluente Kenney na proporção 1:2 com 50% de plasma seminal. O ejaculado de nove garanhões diluído na proporção 1:2 em meio Kenney foi dividido em 4 partes iguais e suplementado com 5,0, 2,5 e 0,5mM de NAC e um grupo não suplementado (0,0mM). As avaliações foram realizadas a fresco (0h), 24 e 48h de resfriamento. A análise de motilidade nos dois experimentos foi avaliada até às 24 horas. No experimento 2, a adição de 0,5 e 5,0mM de NAC resultou em áreas de dispersão da cromatina espermática similares (59,7 e 55,5μM2, respectivamente). Entretanto, a área de dispersão da cromatina no grupo não suplementado (65,3μM2) e com 2,5mM de NAC (52,8μM2) apresentou diferença (P<0,05). O percentual de células com membrana plasmática funcional foi similar entre o grupo não suplementado e o grupo suplementado com 0,5mM de NAC (39,7 e 39,8%, respectivamente), porém superior a NAC 2,5mM (34,5%) e 5,0mM (34,2%). A motilidade progressiva dos ejaculados suplementados com NAC foram similares entre si e somente o grupo NAC 0,5mM (35,2%) apresentou similaridade de células móveis com o grupo não suplementado (36,2%). Os maiores danos à cromatina espermática no sêmen equino diluído com 50% de plasma seminal mantido resfriado a 5°C ocorrem a partir de 24h de resfriamento. A adição de 2,5 e 5,0mM de NAC comprometem a motilidade e a funcionalidade de membrana espermática equina, mas não causa efeito deletério sobre a integridade do DNA. / In this study, three concentrations of N-acetyl- l-cysteine (NAC) were evaluated by sperm motility, membrane functionality (hypo-osmotic test), and sperm chromatin integrity. the hypo-osmotic test showed only 32.4% (P <0.05) of the cells having a functional membrane 12h into the cooling process, while the fresh semen (0h) was 53.5%. The percentage of motile cells decreased within 12h of cooling from 38.9 to 19.7%, with no difference between 12 and 24h of cooling. The tests of sperm chromatin dispersion and hypo-osmotic shock revealed similarities between the periods of cooling at 24 to 48h. In Experiment 2, the nine stallion ejaculates were divided into 4 equal parts, diluted in half with Kenney milk powder supplemented with 5.0, 2.5 and 0.5mM NAC and a group not supplemented (0.0mM). The evaluations were made fresh (0h), 24 and 48h after cooling. The analysis of motility was assessed in all experiments up to 24 hours. In experiment 2, the addition of 0.5 to 5.0mM NAC resulted in areas of similar sperm chromatin dispersion (59.7 and 55.5μM2, respectively). However, the area of the chromatin dispersion between non-supplemented group=0.0mM (65.3μM2) and 2.5mM NAC (52.8μM2) differ (P <0.05). The percentage of cells with plasma membrane function were similar between the supplemented with 0.5mM NAC and non-supplemented (0.0mM) groups with (39.7 and 39.8%, respectively), but higher than 2.5mM (34.5%) and 5.0mM (34.2%). Progressive motility of ejaculates supplemented with NAC were similar, but only the group with 0.5mM NAC which resulted in 35.2% of mobile cells showed similarities with the non-supplemented group (36.2%). The greatest damage to sperm chromatin in equine semen diluted with 50% seminal plasma kept cooled to 5°C was due to 24h cooling. The addition of 2.5 and 5.0mM NAC inhibits the mobility and functionality of the equine sperm membrane, but does not cause a deleterious effect on the integrity of the DNA.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-11T13:06:12Z No. of bitstreams: 1 Ana Lydia Vasco A Peixoto.pdf: 2392494 bytes, checksum: da169ddb32ab0f7830d6e65c01995e93 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T13:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Lydia Vasco A Peixoto.pdf: 2392494 bytes, checksum: da169ddb32ab0f7830d6e65c01995e93 (MD5) Previous issue date: 2007-02-12 / The antioxidant substances prevent the oxidative damages during freezing/thawing processes and incubation period caused by ROS to sperm cells, improving the sperm parameters (vigor, motility and acrosome integrity), besides avoid damages to DNA. The aim of this study was to evaluate the effect of vitamin C and Trolox addition to diluent used to ram semen cryopreservation. The ejaculates of eleven rams were harvested by artificial vagina. After macrocospic (aspect, color and viscosity) and microscopica (motility and vigor) evaluation the pool was diluted in Tris-egg yolk (Exp. 1, 2 and 3) and Fiser (Exp. 2) and supplemented with antioxidant substances: G1) Diluent (Control); G2) Diluent + 600 mM/L of vitamin C; G3) Diluent + 60 mM/L of Trolox and G4) Diluent + 600 mM/L of vitamin C + 60 mM/L of Trolox. The freezing was done by automatized method using two curves: fast(C2= –0.5 oC/minute of 25 to 5 oC, and -12.5 oC/minute of 5 to –120 oC) to the Exps. 1 and 2, and slow (C1= –0.25 oC/minute of 25 to 5 oC, and –20 oC/minute of 5 to –120 oC) to the Exp. 2, and by conventional method (90 minutes), where after the refrigeration (5 °C) the samples were placed in liquid nitrogen during 10 minutes until reaching -120 oC (Exp. 2 and 3). The straws with 100 (Exp. 1), 75 (Exp. 2 and 3) and 200 (Exp. 2) x 106 spermatozoa were transferred into the liquid nitrogen storage container (-196 oC). The semen samples were evaluated after thawing (0 min; Exp. 1, 2, and 3) and after 30 (Exp. 1 and 2) and 60 min (Exp. 1, 2 and 3) of the incubation at 37 ºC according to progressive motility, vigor, oxidative stress, acrosome and DNA integrity (Exp. 1, 2 and 3) and sperm kinetics (MT, MT, VSL,VCL, VAP, LIN, STR, ALH, and BCF; Exp. 3). In the Exp. 1, there was significant difference (p<0.05) among evaluation times (0, 30 and 60 min) in the parameters of acrosome integrity and oxidative stress for the groups supplemented with vitamin C and Trolox and the Control group (p>0.05). However, in the Exp. 2 the percentages of PM, vigor and acrosome integrity had significant difference (p<0.05) between incubation times (0 and 60 min), being that the group supplemented with Trolox (G3) presented greater cell percentages with oxidative stress (p<0.05) when compared to the vitamin C group (G2). On the Exp. 3, there was evidence that the incubation time intervened on the sperm kinetics (MT, MP, VSL, VAP, LIN and STR), acrosome integrity and oxidative stress of sperm cells, besides presenting negative correlation between acrosome integrity and oxidative stress for the G3 group(Trolox), positive correlation between acrosome integrity and progressive motility to the G2 group (vitamin C) and negative correlation between oxidative stress and LIN to the G2 group(vitamin C) after 60 minutes of incubation. However, it can be concluded that the incubation time intervenes negatively on in vitro viability of the sperm cells independent of the vitamin C and Trolox adition; using the conventional method of cryopreservation of ram semen diluted in Tris-egg yolk, the vitamin C addition provides less oxidative stress on the spermatozoa after post-thawing; Using the automatized method of cryopreservation of ram semen diluted in Fiser, it should be used the slow curve of refrigeration (0.25 ºC/min) without necessity of vitamin C (600μM/L) and Trolox (60μM/L) addition and; Based on the kinetics, acrosome integrity, and oxidative stress, the addition of ascorbic acid and Trolox do not minimizes the negative effects of the cryopreservation and the incubation of ram semen at temperature of 37 oC after thawing. / Os antioxidantes previnem os danos oxidativos durante processos de congelação/descongelação e período de incubação causados pelas ROS/RNS às células espermáticas, melhorando os parâmetros espermáticos (vigor, motilidade e integridade acrossomal), além de evitar danos ao DNA. Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito da adição de vitamina C e Trolox ao diluidor utilizado para criopreservação de sêmen ovino, utilizando o ejaculado de onze carneiros colhidos através de vagina artificial. Após avaliação macroscópica (aspecto, cor e viscosidade) e microscópica (motilidade e vigor), o pool foi diluído em Tris-gema (Exp. 1, 2 e 3) e Fiser (Exp. 2) e suplementado com antioxidantes: G1) Diluente (Controle); G2) Diluente + 600 mM/L de vitamina C; G3) Diluente + 60 mM/L de Trolox e G4) Diluente + 600 mM/L de vitamina C + 60 mM/L de Trolox. A congelação foi realizada pelo método automatizado utilizando duas curvas: Rápida (C2= –0,5 oC/minuto, de 25 oC a 5 oC, e a -12,5 oC/minuto, de 5 oC a –120 oC) para os Exp. 1 e 2 e Lenta (C1= –0,25 oC/minuto, de 25 oC a 5 oC, e a –20 oC/minuto, de 5 oC a –120 oC) apenas para o Exp. 2, e pelo método convencional (90 minutos), onde após a refrigeração (5 °C) as amostras foram colocadas em nitrogênio líquido por 10 minutos até atingirem –120 oC (Exp. 2 e 3). As palhetas foram envasadas com 100 (Exp. 1), 75 (Exp. 2 e 3) e 200 (Exp. 2) x 106 espermatozóides e, em seguida, armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). As amostras de sêmen foram avaliadas imediatamente após a descongelação (0 min; Exp. 1, 2, e 3) e depois de 30 (Exp. 1 e 2) e 60 min (Exp. 1, 2 e 3) de incubação a 37 ºC (30 e 60 minutos), quanto à motilidade progressiva (MP), vigor, estresse oxidativo, integridade de acrossoma e de DNA (Exp. 1, 2 e 3) e quanto a motilidade cinética espermática (MT, MP, VSL, VCL,VAP, LIN, STR, ALH, e BCF; Exp. 3). No Exp. 1, houve diferença significativa (p<0,05) entre os tempos de avaliação (0, 30 e 60 min) nos parâmetros de integridade de acrossoma e estresse oxidativo para os grupos tratados com vitamina C e Trolox e o grupo controle (p>0,05). Todavia, no Exp. 2 os porcentuais para MP, vigor e integridade de acrossoma diferiram (p<0,05) entre tempos de incubação (0 e 60 min), sendo que o grupo suplementado com Trolox (G3) apresentou maiores porcentuais de células com estresse oxidativo (p<0,05), quando comparado ao grupo suplementado com vitamina C (G2). Para o Exp. 3, constatou-se que o tempo de incubação interferiu na cinética espermática (MT, MP, VSL, VAP, LIN e STR), na integridade acrossomal e no grau de estresse oxidativo, além de apresentar correlação negativa entre integridade acrossomal e estresse oxidativo para o G3 (Trolox), correlação positiva entre integridade do acrossoma e MT para o G2 (vitamina C) e negativa para estresse oxidativo e LIN para o G2 (vitamina C), após 60 minutos de incubação. Contudo, pode-se concluir que o tempo de incubação interfere negativamente na viabilidade in vitro das células espermáticas independente da adição de vitamina C e Trolox; ao se utilizar o método convencional de congelação de sêmen ovino diluído em Tris-gema, a adição de vitamina C e Trolox proporciona menos estresse oxidativo às células espermáticas imediatamente após a descongelação; Ao se usar o método automatizado de congelação de sêmen ovino diluído em Fiser, deve-se utilizar a curva lenta de refrigeração (0,25 ºC/min), sem necessidade da suplementação de vitamina C (600 mM/L) e Trolox (60 mM/L) ao diluente e, Com base na avaliação da cinética, da integridade acrossomal e do estresse oxidativo, a adição de ácido ascórbico e Trolox não minimiza os efeitos negativos da criopreservação e da incubação de sêmen ovino à temperatura de 37 oC, pós-congelação.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-04-26T14:22:10Z No. of bitstreams: 1 Francisco da Silva Alves Pinheiro Neto.pdf: 921233 bytes, checksum: b1c400716d08c4c8eda9b498ec02ec89 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T14:22:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francisco da Silva Alves Pinheiro Neto.pdf: 921233 bytes, checksum: b1c400716d08c4c8eda9b498ec02ec89 (MD5) Previous issue date: 2015-04-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this study was to compare the results of different protocols of Timed Artificial Insemination (TAI) using sexed semen on reproductive effciency in Girolando cattle. Sixty two heifers were used, being clinically health with a body condition between 2,5 and 3,5, divided randomly into 03 groups: control (n = 21), FSH / LH (n = 21) and eCG (n = 20). All animals received the same hormonal treatment to synchronize estrus, consisting in placing on D0 (5:00 PM) intra-vaginal device with 750 mg progesterone (P4), and 2 mg of estradiol benzoate (EB). In D8 (5:00 PM) device were removed and 2 mL of prostaglandin (0.500 mg cloprostenol) was administered. On D9 all animals received 1 mg of estradiol benzoate (EB) (5:00 PM), and were inseminated on D11 at 5:00 PM, 60 hours after device removal. On D8, heifers were randomly assigned into 3 groups. Control group without FSH / LH and eCG; Group FSH / LH - 25 IU FSH and LH administered after device removal, Group eCG - 300 IU eCG administered after device removal. Heifers were examined by ultrasonography 35 days after AI for pregnancy diagnosis and 45 days or evaluation of embryonic death. The pregnancy rate for control groups, FSH / LH and eCG were respectively 19%, 28% and 35%. Data were analyzed by chi-square, with 5% significance level. No signicant difference was seen between-groups. When it was compared control group and eCG Group in heifers that were not cycling there was a significant difference in pregnancy rate. It is concluded that in cycling animals, eCG and FSH / LH does not interfere with pregnancy rates, however in those heifers that were not cycling or had smaller than 8 mm follicles, eCG had a favorable effect thereby increasing substantially the results. / O objetivo deste trabalho foi comparar o resultado de diferentes protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando-se sêmen sexado sobre a eficiência reprodutiva em novilhas Girolando. Foram utilizadas 62 novilhas clinicamente hígidas e com escore corporal entre 2,5 e 3,5 , divididas aleatoriamente em 03 grupos: controle (n=21), FSH/LH (n=21) e eCG (n=20). Todos os animais receberam o mesmo tratamento hormonal para sincronização do estro, consistindo na colocação de dispositivo intra-vaginal com 750 mg de progesterona (P4) no D0 às 17:00 horas e aplicação de 2 mg de benzoato de estradiol (BE). No D8 às 17:00 horas foram retirados os implantes e aplicado 2 ml de prostaglandina (0,500 mg cloprostenol). No D9 todos os animais receberam 1 mg de benzoato de estradiol (BE) ás 17:00 horas. E foram inseminadas no D11 às 5:00 horas, isto é 60 horas após retirada do implante. No D8, as novilhas foram distribuídas aleatoriamente em 3 Grupos. Grupo controle sem FSH/LH e eCG, Grupo FSH/LH – 25 UI de FSH e LH aplicados na retirada do implante, Grupo eCG – 300 UI de eCG aplicados na retirada do implante. As novilhas foram examinadas por ultrassonografia 35 dias após a IA para diagnóstico de gestação e aos 45 dias para avaliação de perda embrionária. O percentual de prenhez para os grupos Controle, FSH/LH e eCG foram respectivamente 19%, 28% e 35%. Os dados foram avaliados pelo teste do Qui-quadrado, com nível de significância de 5%. Não houve diferença significativa entre os grupos. Ao avaliarmos a taxa de prenhez entre o Grupo Controle e o Grupo eCG em novilhas que não estavam ciclando houve uma diferença significativa. Conclui-se que em animais cíclicos, a eCG e o FSH/LH não interferiram nas taxas de prenhez. Entretanto quando comparado com os animais acíclicos ou que tinham folículos menores que 8 mm, a eCG teve um efeito favorável melhorando substancialmente os resultados.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente trabalho tem como objetivo determinar o melhor mÃtodo de congelaÃÃo e envase de sÃmen humano, quando comparado o mÃtodo rÃpido com o lento e o envase em palhetas de 0,25ml com criotubos de 2ml, utilizando como variÃveis a morfologia e motilidade dos espermatozÃides antes e apÃs a criopreservaÃÃo. Trata-se de um estudo experimental, de validaÃÃo de tÃcnica laboratorial. Foi desenvolvido no Centro de ReproduÃÃo Assistida do CearÃ. Foram analisadas dezoito amostras de sÃmen de dezoito voluntÃrios. As amostras foram submetidas à anÃlise da morfologia e motilidade espermÃtica prÃvia à criopreservaÃÃo. Foi determinada ainda uma curva de motilidade espermÃtica nas primeiras trÃs horas. O meio TEST-YOLK foi utilizado como crioprotetor. Depois de adicionado o crioprotetor, o sÃmen foi dividido em partes iguais e envasado em criotubos e palhetas. Metade dos criotubos e das palhetas foi submetida a criopreservaÃÃo pelo mÃtodo rÃpido (RT e RP, respectivamente) e a outra metade pelo mÃtodo lento (LT e LP, respectivamente). Em seguida, as amostras foram descongeladas e determinadas as morfologias, bem como as motilidades logo apÃs a descongelaÃÃo e a cada hora durante trÃs horas. AnÃlise estatÃstica foi realizada pelo programa de SPSS for Windows versÃo 11.0.0. Houve uma queda, estatisticamente significante, da motilidade apÃs a criopreservaÃÃo, motilidade inicial de 58,1% e motilidades nos diferentes tratamentos de 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) e 19,2% (RP). TambÃm houve uma diminuiÃÃo significante da morfologia normal apÃs a criopreservaÃÃo, em relaÃÃo à morfologia inicial (14,2%), mas nÃo foi observada diferenÃa entre os mÃtodos (12,8%, 12,6%, 12,6% e 12,4%; RP, RT, LP e LT, respectivamente). O mÃtodo LT foi o que obteve uma curva de motilidade espermÃtica mais prÃxima da observada no sÃmen in natura. Conclui-se que o mÃtodo LT foi o que menos afetou a motilidade espermÃtica e que, apesar de ter sido observada uma piora significativa da morfologia espermÃtica apÃs a criopreservaÃÃo, nÃo houve diferenÃa entre os mÃtodos. Palavras-chaves: CriopreservaÃÃo; PreservaÃÃo do SÃmen; EspermatozÃide; ReproduÃÃo / This research has as objective determines the best freezing method and storage of human semen, when compared the fast method with the slow method and the storage in 0,25ml straws with cryotubes of 2ml, using as variables the morphology and motility of the spermatozoa before and after the cryopreservation. It is an experimental study, laboratorial technique validation. It was developed in the Assisted Reproduction Center of CearÃ. Eighteen semen samples from eighteen men were analyzed. The samples were submitted to the analysis of the morphology and motility previous the cryopreservation. It was still determined a spermatozoa motility curve in the first three hours. TEST-YOLK was used as cryoprotective media. After having added the TEST-YOLK media, the semen was divided in same parts and storage in cryotubes and straws. Half of the cryotubes and of the straws was cryopreserved by the fast method (RT and RP, respectively) and the other half by the slow method (LT and LP, respectively). The samples were thawed and analyzed the morphologies, as well as the motilities soon after the thawed and every hour for three hours. Statistical analysis was done by the SPSS program - Windows version 11.0.0. Motility of spermatozoa decrease after the cryopreservation, initial motility was 58,1% and motilities in the different treatments were 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) and 19,2% (RP). There was a significant decrease of the normal morphology after the cryopreservation, in relation to the initial morphology, but difference was not observed among the methods (RP=12,8%, RT=12,6%, LP=12,6% e LT=12,4%). The motility of LT method was closer than that obtained in the fresh semen. The method LT showed the best recovery of motile cells after freezing and thawing. There was not difference among the methods when appraised the morphology. Key-Word: Cryopreservation; Semen preservation; Spermatozoa; Reproduction.