O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil proteico do plasma seminal equino utilizando eletroforese bidimensional de gel de acrilamida (2D-PAGE) e determinar se algumas das proteínas presentes estavam relacionadas com a congelabilidade do sêmen. O plasma seminal foi coletado de dez garanhões, de alta e baixa congelabilidade de sêmen, provenientes do Haras Estatal da Baixa Saxônia, na cidade de Celle, na Alemanha e rotineiramente utilizados em programas de inseminação artificial. Vinte e cinco bandas proteicas foram encontradas nos géis bidimensionais (12%) e sete delas foram identificadas por MALDI-MS. Das 25 proteínas encontradas nas amostras de plasma seminal dos garanhões, duas bandas proteicas apresentaram densidade óptica superior (P<0,05) nas amostras de garanhões de alta congelabilidade o sêmen: as bandas 5 (80-85 kDa, pI 7,54), que foi identificada como CRISP3 e a 45 (18,2 kDa, pI 5,0-5,2) identificada como HSP-2. Contrariamente a banda 7 (75,4 kDa, pI 6,9 – 7,4), identificada como lactoferrina, a 15 (26,7 kDa, pI 5,51) identificada como calicreína, a 25 (25 kDa, pI 7,54) como CRISP3 e a 35 (13,9 kDa, pI 3,8 – 4,2) que foi identificada como HSP-1, apresentaram valores de densidade óptica superior (P<0,05) nos reprodutores de baixa congelabilidade do sêmen. As proteínas foram identificadas através de espectometria de massa MALDI-MS. As evidências encontradas neste experimento mostram que existem diferenças no perfil proteico dos reprodutores de alta e baixa congelabilidade do sêmen, sugerindo as proteínas CRISP3 e a HSP-2 como possíveis marcadores da alta congelabilidade de sêmen de garanhões. / The objective of this study was to evaluate protein profile of equine seminal plasma using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) and to find if any of these proteins were related to semen freezability. Seminal plasma was collected from 10 stallions of high and low semen freezability routinely used in AI programs from the State Stud of Lower Saxony and Artificial Insemination Center. Twenty five protein spots were identified from the 2 D gel (12%), seven of which were present in all samples. Of the 25 proteins found in the research stallions, two spots showed superior relative content (P<0.05) in seminal plasma samples collected from stallions with high semen freezability: the spots 5 (80-85 kDa, pI 7.54) was identified as CRISP3 and 45 (18.2 kDa, pI 5.0-5.2) was identified as HSP-2. Conversely, the spot 7 (75.4 kDa, pI 6.9 – 7.4) was identified as lactoferrin, 15 (26.7 kDa, pI 5.51) was identified as kallikrein, 25 (25 kDa, pI 7.54) was identified as CRISP3 and 35 (13.9 kDa, pI 3.8 – 4.2) was identified as HSP-1, showed superior relative protein content (P<0.05) on seminal plasma samples from stallions with low semen freezability. The proteins were identified by MALDI-MS. There were differences in the seminal plasma protein profile between stallions with high and low semen freezability. It may be suggested that CRISP3 and HSP-2 may be considered possible seminal plasma markers of high semen freezability.

A inseminação artificial intracervical superficial em ovinos é uma técnica simples, de baixo custo e eficiente no emprego do sêmen fresco. Por outro lado, particularidades do aparelho reprodutivo da fêmea ovina, a quantidade de células espermáticas que sobrevivem ao pós-congelamento bem como a capacitação precoce de espermatozóides durante o processo de criopreservação, impedem o emprego desta técnica com sêmen criopreservado, fazendo-se necessária a deposição intrauterina, com auxílio da laparoscopia. Desconhece-se a eficiência da inseminação artificial intracervical superficial em ovinos, empregando-se sêmen criopreservado e capacitado in vitro. O experimento foi realizado com objetivo de determinar as taxas de prenhez com o sêmen criopreservado e capacitado in vitro. Os animais foram divididos aleatoriamente em 5 grupos: sêmen fresco (SF); sêmen congelado cervical (SCC); sêmen congelado laparoscopia (SCL); sêmen congelado capacitado cervical (SCCC); e sêmen congelado capacitado laparoscopia (SCCL). Todas as fêmeas receberam doses inseminantes com concentração de 200x106 sptz. As inseminações ocorreram em um período de 52 a 60 horas após a retirada dos dispositivos de progesterona. Os diagnósticos de prenhez foram realizados com auxílio da ultrassonografia 30 dias após as inseminações. As taxas de prenhez observadas foram: No grupo SF 42,30% (11/26), SCC 23,07% (6/26), SCL 54,16% (13/24), SCCC 25,92% (7/27), SCCL 48,14% (13/27), não existindo diferença estatística entre os grupos experimentais. O experimento realizado mostrou que é possível obter prenhez, empregando sêmen criopreservado e capacitado in vitro, na inseminação artificial pela via cervical em ovinos. / The superficial intracervical insemination in sheep is a simple, low cost and efficient technique using fresh semen. Still, the particularities of the female tract, the amount of sperm cells wich survive and the early capacitation during the cryopreservation process, difficult the use of this technique with cryopreserved semen, maaing it's necessary to intrauterine with the aid of laparoscopy. It's unanown the efficiency of superficial intracervical insemination in ovine, using cryopreserved and in vitro capacitated semen. The experiment was carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated with cryopreserved and in vitro capacitated semen. The females were randomly distributed among five experimental groups: fresh semen (SF), frozen semen cervical (SCC), frozen semen laparoscopy (SCL), frozen semen in vitro capacitated cervical (SCCC), frozen semen in vitro capacitated laparoscopy (SCCL). All females received dosis with 00x106sptz per insemination. The inseminations were performed from to 60 hours after the withdrawal of progesterone implants. The pregnancy diagnosis was conducted by ultrasongraphy 30 days after inseminations. The observed pregnancy rates was: SF ,30% (113 6), SCC 3,07% (63 6), SCL ,16% (133 ) SCCC %, SCCL 4,1 % (133 7). our experiment showed that in sheep it's viable the superficial cervical artificial insemination using cryopreserved and in vitro capacitated semen.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a aptidão reprodutiva de cães da raça Golden Retriever afetados pela distrofia muscular. Realizou-se avaliações andrológicas em 11 cães com idades entre 10 meses e 4 anos. Destes, 7 eram afetados pela distrofia muscular e 4 sadios, utilizados como controle. Todos foram submetidos a exame clinico, análise seminal e ultra-sonografia dos órgãos reprodutores. Analisou-se também a morfologia dos testículos e seus respectivos funículos espermáticos dos cães que foram a óbito. Detectou-se as seguintes alterações nos cães afetados pela distrofia: atrofia muscular, andar rígido, pneumonia por aspiração, fragilidade do diafragma com projeção do estomago para a cavidade torácica, megaesôfago e cardiomiopatia dilatada. Em relação aos órgãos genitais dois dos cães apresentaram criptorquidismo bilateral. Os resultados das análises seminais mostraram que os cães afetados pela distrofia possuem maior quantidade de defeitos espermáticos maiores e totais. Nas avaliações ultra-sonográficas não foram identificadas diferenças entre os cães afetados pela distrofia quando comparados com cães sadios. As análises histopatológicas evidenciaram alterações morfológicas nos testículos e músculos cremáster de cães afetados pela doença. Os testículos apresentaram degeneração testicular e o músculo cremáster retração de fibras musculares com hialinizacao dos miócitos. Conclui-se então que a distrofia muscular em cães da raça Golden Retriever pode comprometer sua aptidão reprodutiva. / The aim of the present research was to evaluate the reproductive condition of Golden Retriever dogs affected by muscular dystrophy. Breeding soundness examination was performed in 11 male dogs aged between 10 months and 4 years. Seven of this total were affected by muscular dystrophy and 4 healthy dogs that served as control. All dogs were submitted to a through physical exam, seminal evaluation and ultrasound of the reproductive tract. Testicle and spermatic cord morphology of post-mortem dogs were also examined. The following alterations were observed for the affected dogs: muscular atrophy, stiff walk, aspiration pneumonia, diaphragmatic fragility with stomach projection to the torax, megaesophagus e dilated cardiomyopathy. In relation to the genital tract, two dogs presented with bilateral cryptorchidism. Semen evaluation revealed high percentage of major and total sperm defects in affected dogs. Ultrasonographic exams were similar among healthy and affected dogs. Histophatology of the testicle and cremaster muscle revealed morphologic alterations in affected dogs represented by degeneration and muscular retraction with miocyte hyalinization, respectively. In conclusion, affected Golden Retriever dogs have their reproductive performance compromised by the muscular dystrophy.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Novas exigÃncias de mercado sÃo estabelecidas e com estas, novos modelos produtivos, com menor impacto ambiental, devem ser adotados para atender as necessidades dos consumidores, sem que resulte em prejuÃzos à produtividade do sistema. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficiÃncia da bioestimulaÃÃo (Efeito Macho) pela taxa de concepÃÃo e pariÃÃo de cabras inseminadas artificialmente com sÃmen fresco. Para tanto, foram avaliadas a taxa de fertilidade e pariÃÃo de 73 cabras, pertencentes ao grupo genÃtico Saanen e seus mestiÃos com Anglonubiano, submetidas à inseminaÃÃo artificial, que tiveram o estro induzido e sincronizado pelo efeito macho. O experimento ocorreu durante os perÃodos chuvoso (marÃo-abril) e seco (agosto-setembro) de 2012. Foram coletados dados referentes Ãs variÃveis climÃticas (TA: temperatura ambiente; e UR: umidade relativa do ar) para o cÃlculo do ITU (Ãndice de temperatura e umidade). Os dados foram submetidos à anÃlise estatÃstica a 5% de probabilidade. O ITU foi mais elevado (P<0,05) para o perÃodo chuvoso, e assumiu valores acima dos ideais para caprinos, apresentando situaÃÃo de emergÃncia para o perÃodo chuvoso, e de perigo para o perÃodo seco. O efeito macho mostrou-se eficiente independente da Ãpoca do ano, resultando em 94,5% cabras em estro. A duraÃÃo do primeiro estro foi semelhante entre o perÃodo chuvoso e seco, com mÃdia geral de 23,4 horas. O intervalo entre inÃcio do efeito macho e manifestaÃÃo do estro de 11 dias, havendo uma maior manifestaÃÃo de estro (primeiro estro) logo na primeira semana para ambos os perÃodos. Em geral, 65% das cabras retornaram em estro, sendo o intervalo entre o inÃcio do efeito macho e a manifestaÃÃo do segundo estro foi maior (P<0,05) para o perÃodo chuvoso (27,8 dias), isto està relacionado ao tipo de ciclo estral, onde houve um maior (P<0,05) nÃmero de ciclos normais (20) para este perÃodo, e um elevado (P<0,05) nÃmero de ciclos curtos (15) para o perÃodo seco. A fertilidade para o perÃodo seco (57,6%) foi proporcionalmente superior ao perÃodo chuvoso (44,4%). No entanto, a taxa de pariÃÃo mostrou uma tendÃncia (P=0,57) a ser superior para o perÃodo seco. Esta menor taxa para o perÃodo chuvoso pode estar relacionado à alta variaÃÃo climÃtica observada durante o perÃodo experimental. Em geral, o segundo estro foi mais propÃcio à resultar em fertilidade, seja para o perÃodo chuvoso ou seco. Com isso, conclui-se que a inseminaÃÃo artificial de cabras com estro induzido e sincronizado pelo uso do efeito macho à um manejo que pode ser empregado para a produÃÃo de caprinos resultando em Ãndices reprodutivos satisfatÃrios. / New market requirements are established and with them, new production models it should be adopted to meet the consumers demands, without resulting in damage to system productivity, with less environmental impact. The aim this study was to evaluate the effectiveness of Male Effect by fertility rate of goats inseminated artificially. Thus, we evaluated the fertility and calving rates of 73 goats belonging to genetic group Saanen and its crossbred. This does had their estrus induced and synchronized by the male effect and it were artificially inseminated with fresh semen. The experiment took place during the rainy (March-April) and dry (August-September) seasons of 2012. We collected data on climatic variables (RT: room temperature; and RH: relative humidity) for calculating the THI (temperature and humidity index). Data were analyzed statistically at 5% probability. The THI was higher (P<0.05) in the rainy season, and it assumed values above ideal for goats, with an emergency situation to the rainy season, and dangerous situation to the dry season. The male effect was effective regardless of season, it resulting in 94.5% of estrus. The duration of the first estrus was same between the rainy and dry season, it had a mean duration of 23.4 hours. The interval between the onset of the male effect and estrus was 11 days, and there was a greater manifestation of estrus (first heat) in the first week for both seasons. Overall, 65 % of goats returned in estrus, it been the interval between the onset of the male effect and second estrus manifestation was greater (P<0.05) during the rainy season (27.8 days). This is related to the estrous cycle length, where there was a greater (P <0.05) number of normal estrus cycles (20) during rainy season, and high (P <0.05) number of short estrus cycles (15) during dry season. The fertility during the dry season (57.6 %) was proportionally greater than rainy season (44.4 %). However, the calving rate showed a trend (P = 0.57) to be higher the dry season. This lower rate during rainy season may be related to high climate variability observed during this experimental period. The second estrus was more like to result in fertility, during rainy or dry season. This indicates that the artificial insemination of goats with induced and synchronized estrus by male effect is a management can be utilized in goat production systems resulting in satisfactory reproductive rates.

nÃo hà / O presente estudo avaliou os efeitos da inclusÃo de 13% de farelo de castanha de caju (CNM) na dieta de carneiros Morada Nova nos parÃmetros seminais e proteÃnas do plasma seminal. Vinte carneiros foram distribuÃdos em dois grupos iguais: grupo castanha de caju (CNG) e grupo controle (COG). O CNG e COG receberam 13% e 0% de CNM na dieta durante 90 dias. Os grupos foram comparados para peso corporal, circunferÃncia escrotal, parÃmetros seminais e proteÃnas do plasma seminal, utilizando o MÃtodo de Shotgun Proteomics. Peso corporal e circunferÃncia escrotal aumentaram durante os 90 dias do perÃodo experimental em ambos grupos, porÃm nÃo existiu diferenÃa significativa entre CNG e COG. Contudo, apÃs 60 dias, o consumo de matÃria seca foi inferior no CNG (2,9  0,1; aos 90 dias) em relaÃÃo ao COG (3,4  0,1; aos 90 dias). Os parÃmetros seminais nÃo diferiram entre CNG e COG. A anÃlise shotgun proteomics identificou isoaspartil peptidase L asparaginase, gliceraldeÃdo 3 fosfato desidrogenase e prostaglandina H2 D isomerase com alta expressÃo no CNG quando comparado COG. Ao mesmo tempo, 12 proteÃnas do plasma seminal apresentaram baixa expressÃo no CNG, identificadas como beta galactosidase, caltrina, beta mannosidase, glutationa peroxidase, sorbitol desidrogenase, clusterina, albumina and serotransferrina. AlÃm disso, 20 proteÃnas detectadas no plasma seminal do COG foram ausentes no CNG e cinco proteÃnas foram presentes somente nos carneiros que receberam dieta hiperlipÃdica. Em conclusÃo, o presente estudo descreveu, pela primeira vez, os efeitos de uma dieta hiperlipÃdica nos parÃmetros do sÃmen fresco e do plasma seminal de carneiros. Enquanto os critÃrios seminais nÃo foram afetados, proteÃnas especÃficas do fluido seminal foram alteradas em decorrÃncia da dieta com castanha de caju. Visto os aspectos multifuncionais dessas proteÃnas, nÃs sugerimos que certos aspectos da fertilidades de carneiros podem ser alteradas se a castanha de caju for fornecida. / The present study was carried out to evaluate the effects of 13% of cashew nut meal (CNM) inclusion in the diet of Morada Nova rams on semen parameters and seminal plasma proteins. Twenty rams were distributed in two equal groups: cashew nut group (CNG) and control group (COG). The CNG and COG received 13% and 0% of CNM in the diet for 90 days. The groups were compared for live weight, scrotal circumference, seminal parameters and seminal plasma proteins, using shotgun proteomics. Body weight and scrotal circumference increased during the 90-day experimental period in both cashew nut-fed and control groups but with no differences between CNG and COG. However, after 60 days until 90 days, percentage of dry matter intake (% live weight) was inferior in CNG (2,9  0,1; at 90 days) group than COG (3,4  0,1; at 90 days). The sperm quality parameters were not different between CNG and COG.The shotgun proteomics analysis identified isoaspartyl peptidase L asparaginase, glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase and prostaglandin H2 D isomerase with higher expression in the cashew nut group as compared to animals receiving the control diet. Conversely, 12 seminal plasma proteins had lower expression in the cashew nut group, identified as beta galactosidase, caltrin, beta mannosidase, glutathione peroxidase, sorbitol dehydrogenase, clusterin, albumin and serotransferrin. Moreover, 20 proteins detected in the seminal plasma of the control animals were absent in the cashew nut fed animals and five were present only in the rams receiving the high fat diet. In conclusion, the present study describes, for the first time, the effects of a high fat diet on parameters of the fresh semen and seminal plasma proteins of rams. While sperm criteria were not affected, specific seminal fluid proteins did change as the result of cashew nut feeding. Given the multifunctional aspects of such proteins, we suggest that certain aspects of the ram fertility can be altered if cashew nut is provided.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The aim this study were (i) to map and identify proteins in seminal plasma of New Zealand white rabbits strain, using the techniques of two-dimensional electrophoresis coupled to mass spectrometry and to estimate associations between these proteins with sperm parameters and (ii) characterize expression of the nerve growth factor polypeptide beta ( -NGF) and its cognate neurotrophic receptor tyrosine kinase type 1 (NTRK1), and nerve growth factor receptor (NGFR) at gonads and sex glands in adult New Zealand white rabbits as well as the NGF concentration in seminal plasma of sexually mature animals, using RT - PCR and immunohistochemistry. Also was measured the NGF concentration in the blood and seminal plasma by ELISA. Study 1 was performed at Federal University of CearÃ, in Fortaleza-Ce. Semen samples were collected from 18 adult rabbits, using an artificial vagina. After collecting proceeded to the evaluation of semen quality parameters: total motility, individual progressive motility, sperm concentration, sperm morphology and functional tests: membrane integrity (HOST), acrosomal integrity and vitality. The seminal plasma was obtained by centrifugation of semen, and subjected to two-dimensional electrophoresis. Gels were stained with colloidal Coomassie, scanned and analyzed in PDQuest application. The individual spots were excised from the gels, digested with trypsin, and submitted to mass spectrometry (ESI-QUAD-TOF) to identification. The results were subjected to statistical analysis to verify the existence of associations between the presence and / or intensity of the spots present in the protein maps of seminal plasma with the semen quality parameters. The associations between the parameters of ejaculated sperm and the expression of seminal plasma proteins of rabbits were estimated by multiple regression models using the REG procedure of SAS statistical application (v.9.0, 2002) with STEPWISE selection. 232  69.5 spots/gel were detected with 34 spots consistently present in all gels. These 34 spots corresponded to 15% of the total number of spots, representing 32% of the optical intensity of all the spots. Mass spectrometry identified approximately 95% of the detected spots (identified: 220 spots; analyzed: 232 spots), which corresponded to 87 different proteins. The most abundant proteins were the annexins, zeta-globin, lipocalin, FAM 115 protein and a serpins cluster. Other proteins also have been identified, such as transferrin, heat shock protein, glutathione transferase and others. The NGF (protein nerve growth factor) presence also has been identified which has been reported in other species such as ovulation induction factor. This 87 proteins identified in seminal plasma of rabbits participate mainly of biological processes associated with cellular processes (65.25%), regulation (64.25%) and response to stimuli (22.9%). Significant associations were observed between the proteins identified in seminal plasma of rabbits with sperm evaluated parameters such as individual progressive motility, sperm viability, cells with morphology and functional membranes have been associated with specific proteins. Associations were observed for several proteins with the same sperm parameter. According to literature, this is first report about the proteome of seminal plasma of rabbits and its role on the seminal parameters. Knowledge of these proteins contributes to a better understanding of the regulatory mechanisms of seminal plasma on sperm function in rabbits. Study 2 was conducted at Università Degli Studi di Perugia in the city of Perugia-Pe, Italy. It was evaluated the expression of NGF protein that was previously identified during study 1. The immunoreactivity and gene expression of NGF and cognate receptors were detected in testis, prostate and seminal vesicle. The highest levels of NGF and NTRK1 transcripts were found in prostate, while intermediate expressions were found in testis. NGFR transcripts were expressed at the same level on both the testis and prostate, and were more abundant than in seminal vesicles. The widespread distribution of NGF in all glandular cells of the prostate, coupled with its high abundance of mRNA on confirm that the prostate is a major source of this neurotrophin in rabbits. In conclusion, the present data suggest that NGF is involved in developmental system and spermatogenesis of testis rabbits and that NGF can act as a potential factor for induction of ovulation, being abundantly present in seminal plasma. / Os objetivos deste estudo foram (i) mapear e identificar as proteÃnas do plasma seminal de coelhos da raÃa Nova ZelÃndia Branca, utilizando as tÃcnicas de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa e estimar associaÃÃes entre essas proteÃnas com os parÃmetros espermÃticos e (ii) caracterizar a expressÃo do fator de crescimento nervoso, poliptido beta ( -NGF), e os seus receptores cognatos neurotrÃficos da tirosina-quinase de tipo 1 (NTRK1) e receptor fator de crescimento nervoso (NGFR) nas gÃnadas e glÃndulas sexuais de coelhos da raÃa Nova ZelÃndia Branca, bem como as concentraÃÃes de NGF no plasma seminal de animais sexualmente maduros, utilizando as tÃcnicas de RT - PCR e imunohistoquÃmica. TambÃm foi dosada a concentraÃÃo da NGF no sangue e no plasma seminal atravÃs da tÃcnica de ELISA. O estudo 1 foi realizado na Universidade Federal do CearÃ, na cidade de Fortaleza-Ce. Foram coletados amostras de sÃmen de 18 coelhos adultos, utilizando- se uma vagina artificial. ApÃs a coleta procedeu-se a avaliaÃÃo dos parÃmetros qualidade seminal: motilidade, vigor, concentraÃÃo espermÃtica, morfologia espermÃtica e os testes funcionais: integridade de membrana, integridade acrossomal e vitalidade. O plasma seminal foi obtido pela centrifugaÃÃo do sÃmen, e submetido à eletroforese bidimensional. Os gÃis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo PDQuest. Os spots foram cortados individualmente dos gÃis, digeridos com tripsina, e submetidos à identificaÃÃo por espectrometria de massa (ESI- QUAD-TOF). Os resultados obtidos foram submetidos a avaliaÃÃo estatÃstica para verificar a existÃncia de associaÃÃes entre entre a presenÃa e/ou intensidade dos spots presentes nos mapas protÃicos do plasma seminal com os parÃmetros de qualidade seminal. As associaÃÃes entre os parÃmetros dos espermatozoides ejaculados e a expressÃo das proteÃnas do plasma seminal dos coelhos foram estimadas por modelos de regressÃo mÃltipla usando o procedimento REG do aplicativo estatÃstico SAS (v.9.0, 2002) com a seleÃÃo STEPWISE. Foram detectados 232  69,5 spots protÃicos por gel, com 34 spots presentes consistentemente em todos os gÃis. Esses 34 spots corresponderam a 15 % do total do nÃmero de spots, representando 32 % da intensidade Ãptica de todos os spots. A espectometria de massa identicou aproximadamente 95% dos spots detectados (220 spots de um total de 232), que corresponderam a 87 proteÃnas diferentes. As proteÃnas mais abundantes foram as anexinas, zeta-globina, lipocalinas, proteina FAM 115 e um grupamento de serpinas. Outras proteÃnas tambÃm foram identificadas, tais como: transferrina, heat shock protein, glutationa transferase, entre outras. TambÃm foi identificada apresenÃa da proteÃna fator de crescimento nervoso (NGF) que tem sido relatada em outras espÃcies como fator de induÃÃo à ovulaÃÃo. As 87 proteÃnas identificadas no plasma seminal de coelhos participam principalmente dos processos biolÃgicos associados a processos celulares (65,25 %), regulaÃÃo (64,25 %) e resposta a estÃmulos (22,9 %). Foram observadas associaÃÃes significativas entre as proteÃnas identificadas no plasma seminal de coelhos com os parÃmetros espermÃticos avaliados,tais como vigor, nÃmero de cÃlulas viÃveis, morfologia espermÃtica e cÃlulas com membranas funcionais foram associados com proteÃnas especÃficas. Foram observadas associaÃÃes de vÃrias proteÃnas com um mesmo parÃmetro espermÃtico. De acordo com a literatura, este representa o primeiro relato sobre o proteoma do plasma seminal de coelhos e seu papel sobre os parÃmetros seminais. O conhecimento dessas proteÃnas contribuirà para uma melhor compreensÃo dos mecanismos de regulaÃÃo do plasma seminal sobre a funÃÃo espermÃtica em coelhos. O estudo 2 foi conduzido na Università Degli Studi di Perugia, na cidade de Perugia-Pe, ItÃlia. Foi avaliada a expressÃo da proteÃna NGF que foi previamente identificada no estudo 1. A imunorreatividade e a expressÃo gÃnica da NGF e os seus receptores cognatos foram detectados nos testÃculos, prÃstata e vesÃcula seminal. Os nÃveis mais elevados de NGF e NTRK1 transcritos foram encontrados na prÃstata, enquanto expressÃes intermediÃrias foram encontradas no testÃculo. NGFR transcritos foram expressos nos mesmos nÃveis em ambos os testÃculos e da prÃstata e eram mais abundantes do que nas vesÃculas seminais. A distribuiÃÃo generalizada de NGF em todas as cÃlulas glandulares da prÃstata, juntamente com a sua abundÃncia de RNAm relativo, confirmam que a prÃstata à das principais fontes desta neurotrofina em coelhos. Em conclusÃo, os presentes dados sugerem que o sistema NGF està envolvido no desenvolvimento testicular e espermatogÃnese de coelhos e que o NGF pode atuar como um potencial fator de induÃÃo à ovulaÃÃo, sendo abundantemente presentes no plasma seminal.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar o perfil das principais proteÃnas do plasma seminal suÃno e suas associaÃÃes com parÃmetros seminais. Amostras de sÃmen foram coletadas de 12 cachaÃos adultos e submetidas à avaliaÃÃo dos parÃmetros seminais (motilidade total, morfologia, vitalidade e porcentagem de cÃlulas com acrossoma intacto). O plasma seminal foi obtido por centrifugaÃÃo e as proteÃnas seminais foram analisadas por eletroforese 2-D e espectrometria de massa. Foram testados modelos de regressÃo usando a soma das intensidades dos spots referentes Ãs mesmas proteÃnas como variÃveis independentes e parÃmetros seminais como variÃveis dependentes (p < 0,05). Cento e doze spots foram identificados nos gÃis do plasma seminal, equivalentes a 39 proteÃnas diferentes. As espermadesinas PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 e AWN1 representaram 45,2  8 % do total da intensidade de todos os spots detectados nos geis. Outras proteÃnas expressas no plasma seminal suÃno incluem a albumina, proteÃnas do complemento (complement factor H precursor, complement C3 precursor e adipsin/complement factor D), imunoglobulinas (IgG heavy chain precursor, imunoglobulina delta heavy chain membrane bound form, imunoglobulina gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 e CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin e fibronectin tipo 1 (FN1). Em funÃÃo das anÃlises de regressÃo, o percentual de espermatozoides com defeito na peÃa intermediÃria foi relacionado com a quantidade de âCH4 and secreted domain of swine IgMâ e FN1 (R2 = 0,58), a proteÃna IgG-binding (R2 = 0,61), o fator H do complemento (R2 = 0,61) e lactaderina (R2 = 0,45). Porcentagem percentual de defeitos de cauda tambÃm foi relacionado com âCH4 and secreted domain of swine IgMâ e FN1 (R2 =0,40), a proteÃna IgG-binding (R2 = 0,34), e lactaderina (R2 = 0,74). A motilidade espermÃtica, por sua vez, teve associaÃÃo com a intensidade dos spots identificados como lactaderina (R2 = 0,48). Em conclusÃo, descreve-se, neste trabalho, o proteoma do plasma seminal suÃno e associaÃÃes significativas entre proteÃnas especÃficas do plasma seminal e parÃmetros seminais. Tais relaÃÃes servirÃo como base para a determinaÃÃo de marcadores moleculares da funÃÃo espermÃtica na espÃcie suÃna. / The present study was conducted to identify the major seminal plasma protein profile of boars and its associations with semen criteria. Semen samples were collected from 12 adult boars and subjected to evaluation of sperm parameters (motility, morphology, vitality and percent of cells with intact acrosome). Seminal plasma was obtained by centrifugation, analyzed by 2-D SDS-PAGE and proteins identified by mass spectrometry (electrospray ionization quadrupole-time-of-flight). We tested regression models using spot intensities related to the same proteins as independent variables and semen parameters as dependent variables (p < 0,05). One hundred and twelve spots were indentified in the boar seminal plasma gels, equivalent to 39 different proteins. Spermadhesins PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 and AWN1 represented 45,2  8 % of the total intensity of all spots. Other proteins expressed in the boar seminal plasma include albumin, complement proteins (complement factor H precursor, complement C3 precursor and adipsin/complement factor D), immunoglobulins (IgG heavy chain precursor, immunoglobulin delta heavy chain membrane bound form, immunoglobulin gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 and CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal secretory glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin and fibronectin type 1 (FN1). Based on regression analysis, the percentage of sperm with midpiece defects was related to the amount of CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R = 0,58), IgG-binding protein (R = 0,61), complement factor H precursor (R = 0,61) and lactadherin (R = 0.45). The percentage of sperm with tail defects was also related to CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R = 0,40), IgG-binding protein (R = 0,34) and lactadherin (R = 0,74). Sperm motility, in turn, had association with the intensities of spots identified as lactadherin (R = 0,48). In conclusion, we presently describe the major proteome of boar seminal plasma and significant associations between specific seminal plasma proteins and semen parameters. Such relationships will serve as the basis for determination of molecular markers of sperm function in the swine species.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Esta tese de doutorado apresenta um estudo sobre a utilizaÃÃo de dois bioprodutos, o primeiro a base de extrato lÃquido da palma forrageira gigante (Opuntia ficus indica) liofilizado e o segundo a Ãgua de coco em pà ACP-104, como diluente de sÃmen de curimatà comum (Prochilodus brevis). Este estudo foi motivado pela escassez de informaÃÃes sobre o sÃmen da espÃcie, dos bioprodutos testados e pela necessidade de desenvolver um protocolo de resfriamento e criopreservaÃÃo utilizando sÃmen de curimatà comum associados aos bioprodutos à base de palma forrageira e ACP-104. A tese està apresentada em trÃs capÃtulos. O primeiro capÃtulo trata de um artigo de revisÃo contendo as biotÃcnicas empregadas na conservaÃÃo de gametas. Nele relatam-se as tÃcnicas de resfriamento, congelaÃÃo e descongelaÃÃo de sÃmen e avaliaÃÃo morfolÃgica e computadorizada de espermatozoides de curimatà comum (P. brevis). O segundo capÃtulo objetiva a criopreservaÃÃo e anÃlise morfolÃgica dos espermatozoides de curimatà comum (P. brevis) diluÃdos em soluÃÃes a base de extrato de palma forrageira gigante (O. ficus) liofilizado, ACP (Ãgua de coco em pÃ) e soluÃÃo de glicose a 5%. Neste experimento foi utilizado o programa computacional CASA (Computer-Assisted Sperm Analyser) para analisar as propriedades de trajetÃria e velocidade dos espermatozoides para cada soluÃÃo estudada. Esta pesquisa teve como objetivo principal avaliar os efeitos da criopreservaÃÃo do sÃmen de curimatà comum (P.brevis), utilizando como diluente o extrato de palma forrageira gigante (O. ficus) liofilizado (EPFL). A metodologia empregada na criopreservaÃÃo do sÃmen de curimatÃ, utilizando os diluentes ELPF 30%; ELPF 50%, ACP-104 e Glicose 5%, permitiu a obtenÃÃo de taxas de motilidade pÃs-descongelamento superiores a 60%. O melhor meio de congelaÃÃo seminal de P. brevis, nas condiÃÃes testadas à o que utiliza a associaÃÃo do ACP-104 com o DMSO 10%. A metodologia empregada na criopreservaÃÃo do sÃmen de curimatà (P. brevis), utilizando os diluentes ELPF 30%; ELPF 50%, ACP-104 e Glicose a 5%, foram adequadas, permitindo a obtenÃÃo de taxas de motilidade pÃs-descongelamento superiores a 60%. Os resultados expressivos foram aqueles obtidos quando se utilizou a associaÃÃo do ACP-104 e DMSO 10%. Os demais tratamentos podem ser considerados num programa de reproduÃÃo assistida, jà que apresentaram desempenho dentro dos padrÃes de utilizaÃÃo de sÃmen criopreservados na espÃcie Prochilodus brevis. / This thesis presents a study on the use of two bioproducts, the first base of liquid extract of giant cactus pear (Opuntia ficus indica) lyophilized and the second the coconut powder ACP-104 as diluent semen common curimatà (Prochilodus brevis). This study was motivated by the scarcity of information about the semen of species of tested bioproducts and the need to develop a protocol for cooling and cryopreservation of semen using common curimatà associated with bioproducts based on cactus pear and ACP-104. The thesis is presented in three chapters. The first chapter is a review article containing biotechnologies employed in the preservation of gametes. Report him to the techniques of cooling, freezing and thawing of semen and morphological and computerized assessment of sperm of common curimatà (P. brevis). The second chapter aims to morphological analysis and cryopreservation of sperm of common curimatà (P. brevis) diluted in solutions based on extracts of giant cactus pear (O. ficus) lyophilized, ACP (coconut milk powder) and glucose solution 5%. In this experiment the computer program CASA (Computer-Assisted Sperm Analyser) was used to analyze the properties of trajectory and speed of sperm for each solution studied. This research aimed to evaluate the effects of cryopreservation of semen from common curimatà (P.brevis), using as diluent extract giant cactus pear (O. ficus) lyophilized (EPFL). The methodology used in sperm cryopreservation of curimatà using the diluents ELPF 30%; ELPF 50%, ACP-104 and 5% dextrose, afforded the rate of post-thaw motility higher than 60%. The best way of semen freezing P. brevis, the tested conditions is what uses the association of ACP-104 with 10% DMSO. The methodology used in sperm cryopreservation of curimatà (P. brevis) using diluents ELPF 30%; ELPF 50%, ACP-104 and 5% glucose were suitable, capable of producing rates higher post-thaw motility 60%. The significant results were those obtained when using the combination of ACP-104 and 10% DMSO. The other treatments may be considered an assisted reproductive program, as presented within the performance standards for the use of cryopreserved semen in species Prochilodus brevis.

Na espécie equina, ao contrário do obtido com ruminantes, as técnicas de criopreservação de sêmen progridem lentamente, mas apesar das barreiras técnicas o emprego da inseminação artificial com sêmen congelado vem crescendo. Este experimento foi dividido em três etapas: na primeira comparou-se a utilização de diferentes diluentes e técnicas de congelação; determinação da eficiência do criotubo para envase do sêmen para a criopreservação; e na terceira determinou-se as taxas de prenhez das éguas artificialmente inseminadas com sêmen congelado envasado em criotubo. Seis garanhões foram submetidos à coleta do sêmen e doze éguas foram inseminadas artificialmente no primeiro estro da estação reprodutiva. As amostras foram diluídas em INRA82 ou Nagase, contendo 5% de glicerol, com concentração de 200 x 106 espermatozóides/ml. Parte do sêmen diluído foi envasado em palhetas (0,5ml), das quais uma parte foi imediatamente congelada. As palhetas restantes foram resfriadas previamente da temperatura ambiente (24ºC) até 5ºC antes do congelamento. As amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC por 30seg. O mesmo protocolo de congelamento com resfriamento prévio foi realizado com as amostras envasadas em criotubos, sendo estas amostras descongeladas a 50ºC por 100seg em banho-maria. A eficiência in vivo do sêmen criopreservado, foi determinada através da inseminação artificial. O diagnóstico de prenhez foi realizado 20 dias após a inseminação artificial através de exame ultrassonográfico. Após a análise dos dados verificou-se que não houve diferença significativa entre os diluentes testados na motilidade progressiva e vigor dos espermatozóides. As médias da motilidade espermática após o aquecimento das amostras foram de: 43,32% e 26,66%, para o sêmen diluído com INRA82 submetido ao resfriamento ou não antes do congelamento, respectivamente, e para o sêmen diluído com Nagase revelou motilidade espermática de 41,08% e 24,44%, respectivamente. De acordo com esses resultados, os grupos experimentais submetidos ao resfriamento prévio apresentaram taxas de motilidade espermática superiores aos grupos que foram congelados diretamente. Não se verificou diferenças quanto ao vigor, motilidade e defeitos espermáticos entre os diluentes testados e os tipos de envase. As éguas inseminadas com criotubo apresentaram taxa de prenhez de 50% (3/6), já com as éguas do grupo controle (palheta) observou-se 16,66% (1/6), provando a viabilidade do congelamento do sêmen envasado em criotubo. / In the horse industry, unlike obtained with catle, the development of sperm cryopreservation techniques are very slow but despite the technical barriers the artificial insemination with frozen semen is growing. This experiment was divided into three steps. The first one compared the use of different diluents and freezing techniques. The other two stages were the use of cryogenic tubes for filling the semen and the determination of mare pregnancy rates that were artificially inseminated with frozen semen packaged in cryogenic tubes. Six stallions were submitted to semen collection and twelve mares were artificially inseminated at first estrus of the breeding season. The samples were diluted in INRA82 or Nagase, containing 5% glycerol, with a concentration of 200 x 106 sperm / ml. A fraction of the diluted semen was stored in straws (0.5 ml), some of those straws were immediately frozen. The remaining straws were cooled from room temperature (24ºC) to 5º C before freezing. The samples were thawed in a water bath at 37° C during 30sec. The same protocol with cooling prior to freezing was performed with samples filled into cryogenic tubes, and these samples were thawed in a water bath at 50° C during 100seg. The in vivo efficiency of cryopreserved semen was determined through artificial insemination. The diagnosis of pregnancy was performed after 20 days by ultrasound examination. After analyzing the data it was found that there was no significant difference in sperm motility and vigor among the tested diluents. Motility was INRA82: 43.32% / 26.66% and Nagase: 41.08% / 24.44%, when the semen was previously cooled or frozen directly, respectively. According to these results, the experimental groups subjected to cooling prior freezing showed better motility rates than the groups that were frozen directly. There were no differences regarding the vigor, motility and sperm defects among the diluents and the semen containers. The mares inseminated with cryotubes showed 50% (3/6) pregnancy rate, and 16.66% (1/6) pregnancy rate was observed in the group of mares inseminated with straws.

A inseminação artificial intracervical superficial em ovinos é uma técnica simples, de baixo custo e eficiente no emprego do sêmen fresco. Por outro lado, particularidades do aparelho reprodutivo da fêmea ovina, a quantidade de células espermáticas que sobrevivem ao pós-congelamento bem como a capacitação precoce de espermatozóides durante o processo de criopreservação, impedem o emprego desta técnica com sêmen criopreservado, fazendo-se necessária a deposição intrauterina, com auxílio da laparoscopia. Desconhece-se a eficiência da inseminação artificial intracervical superficial em ovinos, empregando-se sêmen criopreservado e capacitado in vitro. O experimento foi realizado com objetivo de determinar as taxas de prenhez com o sêmen criopreservado e capacitado in vitro. Os animais foram divididos aleatoriamente em 5 grupos: sêmen fresco (SF); sêmen congelado cervical (SCC); sêmen congelado laparoscopia (SCL); sêmen congelado capacitado cervical (SCCC); e sêmen congelado capacitado laparoscopia (SCCL). Todas as fêmeas receberam doses inseminantes com concentração de 200x106 sptz. As inseminações ocorreram em um período de 52 a 60 horas após a retirada dos dispositivos de progesterona. Os diagnósticos de prenhez foram realizados com auxílio da ultrassonografia 30 dias após as inseminações. As taxas de prenhez observadas foram: No grupo SF 42,30% (11/26), SCC 23,07% (6/26), SCL 54,16% (13/24), SCCC 25,92% (7/27), SCCL 48,14% (13/27), não existindo diferença estatística entre os grupos experimentais. O experimento realizado mostrou que é possível obter prenhez, empregando sêmen criopreservado e capacitado in vitro, na inseminação artificial pela via cervical em ovinos. / The superficial intracervical insemination in sheep is a simple, low cost and efficient technique using fresh semen. Still, the particularities of the female tract, the amount of sperm cells wich survive and the early capacitation during the cryopreservation process, difficult the use of this technique with cryopreserved semen, maaing it's necessary to intrauterine with the aid of laparoscopy. It's unanown the efficiency of superficial intracervical insemination in ovine, using cryopreserved and in vitro capacitated semen. The experiment was carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated with cryopreserved and in vitro capacitated semen. The females were randomly distributed among five experimental groups: fresh semen (SF), frozen semen cervical (SCC), frozen semen laparoscopy (SCL), frozen semen in vitro capacitated cervical (SCCC), frozen semen in vitro capacitated laparoscopy (SCCL). All females received dosis with 00x106sptz per insemination. The inseminations were performed from to 60 hours after the withdrawal of progesterone implants. The pregnancy diagnosis was conducted by ultrasongraphy 30 days after inseminations. The observed pregnancy rates was: SF ,30% (113 6), SCC 3,07% (63 6), SCL ,16% (133 ) SCCC %, SCCL 4,1 % (133 7). our experiment showed that in sheep it's viable the superficial cervical artificial insemination using cryopreserved and in vitro capacitated semen.