Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:06:42Z : No. of bitstreams: 1 borges_jc_dr_jabo.pdf: 527084 bytes, checksum: 74a9732f86335b470c5edaba6623feba (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Efeitos deletérios dos radicais livres causam a lipoperoxidação da membrana plasmática dos gametas feminino e masculino e dos embriões cultivados in vitro, sendo responsável por perda da produção in vitro de embriões e redução da fertilidade in vivo. O estudo foi realizado com objetivo de investigar o efeito protetor do diluidor de sêmen contendo antioxidante submetido à criopreservação e avaliado por testes complementares (teste de termo resistência, hiposmótico e fluorescência), pela inseminação artificial e fertilização in vitro. Ejaculados de cinco touros foram agrupados nos seguintes tratamentos: 1 – Diluidor Tris – gema (controle – Dil C); 2 – Diluidor Tris –gema + Trolox 200mM (antioxidante-Dil T). Amostras com os diluidores com concentração final de 25 x 106 espermatozóides/ palheta foram envasadas em palhetas de 0,25 mL. Em uma fazenda localizada no Mato Grosso do Sul – MS, foram inseminadas 300 novilhas Nelore, e para cada touro realizou-se 60 inseminações artificiais (palhetas descongeladas em 35°C por 20 seg). Oócitos com citoplasma homogêneo e cumulus compacto de ovário de vacas de abatedouro foram selecionados e maturados em grupos de 25 por gota em 100μl de meio TCM 199 com SFB, FSH, hCG e estradiol, piruvato de sódio e amicacina, por 24 horas, sob óleo mineral, e foram cultivados com 5% CO2 e 95% umidade em ar, a 38,5ºC. Depois da maturação, os oócitos foram colocados em gotas com TALP contendo BSA, PHE e 10μg/ml de heparina com 1x 106 espermatozóides móveis por ml. Quatro palhetas (duas – DC e duas – DT) do mesmo touro e ejaculado foram descongeladas e cada palheta foi processada por um método de separação espermática para recuperação do sobrenadante: método de lavagem (duas centrifugações de 36xg por 5 min em 2ml de TL-sêmen) e gradiente de Percoll (45 e 90%, submetido a centrifugação a 500xg por 30 min)... / Deleterious effects of free radicals cause lipoperoxidation of the plasmatic membrane of female and male gametes and in vitro cultured embryos, being responsible for losses in in vitro production of embryos and reduction in in vivo fertility. The objective of this study was to investigate the protective effects of semen extender containing antioxidant submitted to cryopreservation and evaluated by artificial insemination, in vitro fertilization and complementary tests (hyposmotic, fluorescence, and thermal resistance tests). Ejaculates from 5 bulls were treated with Tris egg yolk extender (control-CE) alone or supplemented with 200ml Trolox in the extender (antioxidant-AE). The samples with the extenders with a final concentration of 25 x 106 spermatozoa/ml were placed into 0.25 ml straws. Three hundred Nelore heifers from a cattle farm in Mato Grosso do Sul - MS, were separated into 5 groups of 60 animals. For artificial insemination, the straws were thawed at 35°C for 20 sec and the females in each group were inseminated with semen of the same bull, using 30 female for each semen extender treatment. For in vitro fertilization, oocytes with homogeneous cytoplasm and compact cumulus, collected from ovaries of slaughtered cows were selected and maturated in groups of 25 in droplets of 100μl TCM 199 medium with FCS, FSH, hCG and estradiol, sodium pyruvate and amicacin, for 24 hours, under mineral oil, in atmosphere of 5% CO2 and 95% humidity in air, at 38.5ºC. After maturation, the oocytes were placed in droplets with TALP containing BSA, PHE and 10μg/ml of heparin with 1x 106 motile spermatozoa/ml...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-17Bitstream added on 2014-06-13T20:26:15Z : No. of bitstreams: 1 leao_km_dr_botfmvz.pdf: 386064 bytes, checksum: b28e7cb954d9efa0cb24da2fd791dd16 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Em eqüinos existe um grande interesse em se desenvolver e aprimorar técnicas de inseminação artificial que possibilitam a obtenção de bons índices de fertilidade utilizando um baixo número de espermatozóides. O presente trabalho teve como objetivos avaliar: 1) a viabilidade, in vitro, do sêmen congelado de garanhões após a diluição em fluido folicular pré-ovulatório de éguas; 2) a população espermática no oviduto de éguas, utilizando diferentes técnicas de inseminação; 3) a fertilidade de éguas após a utilização de diferentes técnicas de inseminação artificial, utilizando um baixo número de espermatozóides; 4) a reação inflamatória na cavidade peritoneal após as inseminações intrafoliculares e intraperitoneais; 5) averiguar o efeito da presença de espermatozóides dentro do folículo pré-ovulatório, na capacidade de fertilização do oócito. No experimento 1 foram realizadas análises laboratoriais da viabilidade espermática, de sêmen congelado de garanhões sem diluição (GI), diluído em Kenney (GII) e diluído em fluido folicular (GIII). Observou-se que porcentagem de espermatozóides com membrana plasmática íntegra não diferiu significativamente entre os grupos (p>0,05). Também não foi observado diferença estatística (p>0,05) entre os grupos na porcentagem de espermatozóides vivos com membrana acrossomal íntegra. A motilidade total foi significativamente inferior (p<0,05) no grupo em que o sêmen foi diluído em fluido folicular (GIII) apenas no primeiro momento, logo após a diluição (T0). A motilidade progressiva foi significativamente maior (p<0,05) no grupo diluído com Kenney (GII) do que nos demais grupos em T0 e três horas após (T3). A velocidade espermática ao longo de uma trajetória média (VAP) foi significativamente maior (p<0,05) em GIII do que em GI nos momentos T0, após uma (T1) e duas horas (T2) da diluição. / The objective of the present study was to evaluated the viability, in vitro, of stallion frozen semen after dilution in mare's pre-ovulatory follicular fluid; assess sperm population in mares's oviduct using differents artificial insemination techinics; verify the fertility of of differents artificial insemination techinics in mares with low sperm number; assess if mares develop an inflamatory reaction in the peritoneal cavity after intraperitoneal and intrafollicular insemination and to verify if the presence of sperm in pre-ovulatory follicle could interfere on oocyte fertilization capacity. In experiment 1, frozen-thawed semen viability was evaluated without dilution (GI) and after dilution with Kenney or Mare's pre-ovulatory follicular fluid. The percentage of sperm with plasmatic membrane integrity was not different between the groups (p>0,05). No statistical difference (p>0,05) was observed between the groups in percentage of live sperm with intact acrosome. Total motility (MT) was significantly lower (p<0,05) in follicular fluid group (GIII) just in the first moment (T0). Progressive motility was significantly higher (p<0,05) in group diluted with Kenney (GII) than the other groups in T0 and 3 hours after (T3). Average path velocity (VAP) was significantly higher (p<0,05) in GIII than GI in moments T0, T1 and T2. Straight line velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL) and Beat cross frequence (BCF) were significantly lower (p<0,05) in GI in moments T0, T1 and T2, when compared with GIII. No statistical difference (p>0,05) were observed in amplitud of lateral head (ALH), straightness (STR) and percentage of sperm with linear (LIN) and rapid (RAP) movement between GI and GIII in any moment. In T3 no statistical difference was observed (p>0,05) between all groups in any motility parameters analyzed.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-17 / A sexagem de espermatozoides, para a obtenção de doses de sêmen com alta percentagem de gametas portadores do cromossomo X ou Y, torna ainda mais relevante o papel da inseminação artificial na maximização do progresso genético entre gerações, na produtividade e retorno econômico em algumas atividades pecuárias, na reprodução assistida em mamíferos e no aconselhamento genético da espécie humana. Várias são as técnicas descritas na tentativa de separar os espermatozoides por sexo, porém todas ainda estão em processo de adequação e nenhuma oferece 100% de acuidade. Baseando–se na hipótese que durante o processo de espermatogênese existem proteínas que se expressam diferentemente na membrana de espermatozoides portadores do cromossomo X ou Y, a técnica por separação utilizando anticorpos sexo-específicos vem sendo bastante estudada. Dessa forma este trabalho objetivou em estudar as proteínas de membrana expressas nos espermatozoides sexados e não sexados / The sexing of sperm, to obtain doses of semen with a high percentage of gametes carrying the X or Y chromosome, even more relevant the role of artificial insemination in maximizing the genetic progress between generations, productivity and economic returns in some farming activities; in assisted reproduction in mammals, and in genetic counseling of the human species. Several techniques are described in an attempt to separate the sperm by sex, but all are still in process and no fitness offers 100% accuracy. Based on the hypothesis that during the process of spermatogenesis there are proteins that are differently expressed in the sperm membrane carrying the X or Y chromosome the separation technique using sex-specific antibodies have been extensively studied. Thus this work aimed to study membrane proteins expressed in sexed sperm and not sexed

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-11-10T11:57:43Z : No. of bitstreams: 1 000789914.pdf: 1497556 bytes, checksum: 733d284c8aacfd301e7a417adb15a971 (MD5) / A vesiculite seminal possui grande relevância na clínica reprodutiva devido à dificuldade de tratamento, elevados índices de recidiva, risco de contaminação de fêmeas com agentes patogênicos, inutilização de animais e baixos índices de fertilidade. O tratamento local tem sido apontado por diversos autores como a melhor alternativa terapêutica, porém nenhum estudo avaliou seus efeitos na qualidade e longevidade seminal. Nesse sentido, os objetivos do presente estudo incluíram: investigar quais são as principais bactérias envolvidas na enfermidade e os principais fatores de risco para os garanhões; avaliar e comparar o efeito do tratamento local de vesiculite seminal quanto aos índices de cinética e morfologia espermática, integridade de membrana plasmática, porcentagem de leucócitos e contagem de unidades formadoras de colônias (UFC) de amostras seminais frescas, refrigeradas e congeladas e o teor de óxido nítrico no plasma seminal, antes (M0), após uma semana (M1) e um mês (M2) da terapia. Os resultados obtidos permitiram inferir que a vesiculite seminal foi mais prevalente em animais adultos e idosos, a evolução da enfermidade ocorreu de forma crônica em todos os animais selecionados, a monta natural constituiu um fator predisponente para o surgimento da doença, a coloração amarelada do sêmen e a dificuldade na ejaculação são sinais indicativos de alteração da glândula e a bactéria mais prevalente envolvida na etiopatogenia da infecção foi a Pseudomonas aeruginosa. De maneira geral, o tratamento local levou a uma melhora da qualidade seminal após uma semana (M1), no sêmen a fresco, refrigerado e congelado, quanto aos índices de cinética espermática e integridade de membrana plasmática (p<0,05). No sêmen a fresco promoveu redução do volume seminal, incremento da concentração espermática, redução da porcentagem de leucócitos e de UFC/mL no M1 em relação aos demais momentos ... / Seminal vesiculitis has great relevance in reproductive clinic due to the difficulty of treatment, high rates of recurrence, risk of female contamination with pathogenic agents, retirement of animals and low fertility rates. Local treatment has been reported as the best therapeutic alternative, although no other studies have evaluated its effects on seminal quality and longevity. The aims of this study included: to investigate what are the main bacteria involved in the disease and the risk factors for stallions; to evaluate and to compare the effect of local treatment of seminal vesiculitis on the sperm kinetic parameters, morphology and viability (plasma membrane integrity), percentage of leukocytes and counting colony forming units (CFU) of fresh, cooled and frozen semen samples and the content of nitric oxide in the seminal plasma, before (M0) and after one week (M1) and one month (M2) therapy. The results allow us to infer that the seminal vesiculitis was more prevalent in adults and aged animals, the evolution of the disease appeared chronically in all selected animals, natural breeding was a risk factor for onset of the disorder, the bege coulor of semen and ejaculatory dysfunction were signs indicative of abnormalities in the gland and the most common bacteria involved in the pathogenesis of the infection was Pseudomonas aeruginosa. In general, the local treatment produced an improvement in semen quality after a week (M1) in fresh, cooled and frozen semen on the kinetic parameters and sperm viability (p<0.05). In fresh semen promoted reduction in the volume of ejaculate, sperm concentration increased, reducing the percentage of leukocytes and CFU/mL in M1 compared to the other moments (p<0.05). In frozen semen promoted reduction of lipid peroxidation and of ROS content in M1 compared to other moments (p<0.05). The cooled semen for 24 hours at 5°C and 15°C demonstrated similar efficiency in the pre and post-treatment ...

A inseminação artificial em caninos representa uma atividade importante no manejo reprodutivo desta espécie. O uso de sêmen resfriado, preservado por um determinado espaço de tempo, com a conservação da viabilidade espermática torna-se indispensável. Para a preservação a 4ºC torna-se necessário o conhecimento de curvas de resfriamento mais adequadas para um determinado diluente a ser utilizado. No presente experimento foram utilizados 11 cães adultos, dos quais foram colhidos 5 ejaculados de cada e que após exame imediato avaliando aspecto, volume, motilidade, vigor, concentração, HOST (teste hiposmótico), IME (integridade de membrana) e formas patológicas, foram submetidos a diluição com tris-gema. Após a diluição os ejaculados foram novamente avaliados quanto à motilidade, vigor, HOST e IME. Foram iniciados dois procedimentos de refrigeração dos ejaculados fracionados, um a uma velocidade de -0,1ºC/minuto e outro a -0,3ºC/minuto. Vinte quatro e quarenta e oito horas após foram avaliados motilidade e vigor nas duas amostras. Os exames de HOST e IME foram realizados após quarenta e oito horas de resfriamento. Diferenças quanto à qualidade do sêmen dos diferentes cães foram encontradas. Quanto as diferentes velocidade de resfriamento não foram observadas diferenças. Foram constatadas diferenças na qualidade do sêmen recém diluído e após o resfriamento, porém a qualidade do sêmen se manteve inalterada entre vinte e quatro e quarenta e oito horas após o resfriamento. / The artificial insemination in canines represents an important activity in reproductive management of this species. The use of chilled semen, preserved for a determined amount of time, with conserved spermatic viability has become a necessity. For the preservation at 4o C it has become necessary to know the most adequate chilling curve for the chosen extender. In this experiment, 11 adult dogs were used, who each contributed 5 ejaculates which were immediately examined for volume, motility, vigor, concentration, HOST (hyposmotic test), IME (membrane integrity) and pathological forms, and then diluted with tris-egg yolk. The ejaculates were mixed with extender then evaluated for motility, vigor, HOST and IME. Two cooling procedures were started on the fractionate ejaculates, one at a velocity of -0.1oC per minute and the other at -0.3oC per minute. Twenty-four and fortyeight hours later the two samples were evaluated for motility and vigor. The HOST and IME exams were performed forty-eight hours after chilling. Differences in semen quality were found between the different dogs. There were no differences with the two cooling rates. Differences were found in semen quality right after dilution and after the colling process; however semen quality shows no difference between twenty-four and forty-eight hours after chilling.

Em experimento conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos da concentração da dose de sêmen e o horário da inseminação artificial a tempo pré-fixado, foram utilizadas 516 fêmeas bovinas. Os animais, das raças Aberdeen Angus (Bos taurus) e Braford (Bos taurus 5/8 x Bos indicus 3/8) eram constituídos de 270 novilhas e 246 vacas multíparas. Os animais foram submetidos a um protocolo de sincronização de estros e ovulação através de implante vaginal contendo 250 mg de Acetato de Medroxiprogesterona (MAP) associado a duas aplicações de Benzoato de Estradiol (BE), sendo a primeira de 2 mg IM por ocasião da inserção do implante e a segunda de 1 mg IM vinte e quatro horas após a retirada do mesmo. Quando da remoção do implante foram administrados 500 mcg de Cloprostenol Sódico. As inseminações foram efetuadas às 48, 54 ou 60 horas após a retirada do implante, utilizando para cada momento duas concentrações distintas de espermatozóides viáveis, 10 e 20 milhões por dose. Verificou-se que as fêmeas (em especial as novilhas) inseminadas às 48 horas com 20 milhões de sptz/dose apresentaram índice de prenhez significativamente maior do que as inseminadas no mesmo momento com 10 milhões sptz/dose. As vacas inseminadas com 10 milhões de sptz às 60h apresentaram melhor taxa de prenhez (p<0,05) quando comparadas às inseminadas com 10 milhões de sptz às 48h. O percentual de prenhez encontrado nas vacas foi significativamente maior que o das novilhas, assim como o verificado nas fêmeas Aberdeen Angus, comparadas às Braford. A taxa de prenhez de novilhas inseminadas a tempo fixo pode ser incrementada utilizando-se maior número de espermatozóides viáveis por dose inseminante. / The objective of this study was to analyse the effects of semen concentration and moment of fixed timed insemination on pregnancy rates in 516 beef cattle females of the Aberdeen Angus (Bos taurus) and Braford (Bos taurus 5/8 x Bos indicus 3/8) breeds. The females were constituted of 270 heifers and 246 multiparous cows. The animals were all submitted to a synchronization program consisting of vaginal implants of 250mg of medroxiprogesterone acetate (MPA) associated to application of 2mg IM of estradiol benzoate (EB).After 7 days the implants were removed and 500 mg of cloprostenol were injected at the time. After 24hs of implant removal 1mg IM of EB was injected. The inseminations were done 48, 54 and 60 hours after the removal of the implants and semen with 10 and 20 million viable spermatozoa per dosis was used. The females (specially the heifers) of the group inseminated 48 hours after implant removal and using semen with 20 million viable sptz showed a significant higher percentage of pregnancy than the inseminated 48 hours using 10 million viable sptz. The cows inseminated at 60 hours with 10 million sptz showed higher pregnancy rates (p<0,05) than cows inseminated at 48 hours with 10 million sptz. The total pregnancy rate achieved on the cows was significantly higher than on the heifers. The females of the A. Angus group had higher pregnancy rates than the females of the Braford breed. The pregnancy rate of heifers fixed-timed inseminated can be increased using a higher semen concentration.

Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado a fim de avaliar o efeito da utilização, combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados. As amostras foram avaliadas, pela motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e pela integridade e funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu- Crio® apresentou as maiores médias, nas análises de motilidade total (55,53%) e progressiva (17,25%), após o descongelamento. O diluente Botu-Crio® ,isoladamente, apresentou também os melhores resultados quando foram realizadas as análises de integridade (CFDA/PI) e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico. / During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to some deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), their freezing rates and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on the total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates were analyzed. The total and progressive motility of fresh and postthawing semen samples were evaluated by the patterns assays. The function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. The integrity of plasmatic membrane was evaluated using CFDA/PI fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combined used between Botu-Crio® and automated curves showed better results in total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed better results in order to preserve the membrane integrity and function.

Os Triglicerídeos são essenciais para o metabolismo espermático e um alto nível deste está associado com boa qualidade do sêmen. O nível de ácidos graxos poliinsaturados (PUFA) é considerado um elemento crítico para a capacitação espermática e está associada à motilidade espermática e com maior fluidez de membrana. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da alimentação suplementar de garanhões, com óleo de arroz comercial (Gama-Horse, HT Nutri ®, Brasil), em parâmetros espermáticos. Quatro garanhões com idades variando entre 6 e 30 anos foram utilizados. Os animais tiveram o mesmo manejo durante os 190 dias de tratamento. O experimento foi dividido em três períodos: pré-tratamento (PT) - 30 dias para a estabilização das reservas espermáticas; tratamento (TR) - 80 dias de suplementação com 200 ml de óleo arroz contendo 34% ácido linolêico, 1% ácido linolênico, 1% gama-oryzanol e 660mg/Kg vitamina E; controle (CN) - 80 dias sem suplementação de óleo de arroz. Ejaculados foram coletados duas vezes por semana com uma vagina artificial. As avaliações do sêmen foram realizadas imediatamente após a colheita, sendo avaliados volume, concentração, motilidade total, funcionalidade (HOST) e integridade (CFDA / PI) da membrana e potencial antioxidante total (TRAP). Uma amostra de sangue foi obtida cada 15 dias para avaliar testosterona e estradiol plasmáticos. Para avaliar o efeito da suplementação de óleo de arroz no sêmen os dados dos últimos 20 dias a partir da TR com os últimos 20 dias a partir da CN foram analisados com ANOVA, com uma significância estatística de P < 0,05. A suplementação do óleo de arroz aumentou a concentração (P < 0,01) (TR: 226 x 106/mL; NC: 172 x 106/mL), motilidade total (P < 0,01) (TR: 59%; NC: 42%), HOST (P < 0,02) (TR: 73%; NC: 69%) e TRAP (P < 0,01) (TR: 1,9 nmol Trolox / mg de proteína; CN: 0,98 nmol Trolox / mg de proteína). Não foram observadas diferenças entre os períodos TR e CN em volume, integridade de membrana, testosterona e estradiol. A suplementação oral com o óleo de arroz comercial contendo PUFA e gama-oryzanol aumentou o potencial antioxidante total do sêmen. Além disso, foi detectado uma maior funcionalidade de membrana, provavelmente devido a defesa antioxidante evitando peroxidação lipídica da membrana espermática ou a uma melhoria da fluidez da membrana. / Triglycerides are essential for sperm metabolism and a high level of triglycerides is associated with good semen quality. The level of polyunsaturated fatty acids (PUFA) is considered a critical feature for capacitation and is associated with sperm motility and with increased membrane fluidity. The aim of this experiment was to evaluate the effects of the supplementary feeding of stallions, with commercial rice oil (Gama- Horse, HT Nutri®, Brazil), on sperm parameters. Four stallions with ages ranging between 6 and 30 years were used. The animals had the same management during the 190 days of trial. The experiment was divided in three periods: pre-treatment (PT) - 30 days to sperm reserves stabilization; treatment (TR) - 80 days supplementation with 200 mL rice oil containing 34% linoleic acid, 1% linolenic acid, 1% gamma oryzanol and 660mg/Kg vitamin E; control (CN) - 80 days without rice oil supplementation. Ejaculates were collected twice a week with an artificial vagina. Semen exams were performed immediately after collection, being evaluated volume, concentration, total motility, functionality (HOST) and integrity (CFDA/PI) of membrane and total antioxidant potential (TRAP). A blood sample was obtained each 15 days to evaluate plasma testosterone and estradiol. To evaluate the effect of the rice oil supplementation the semen data from the last 20 days from TR with the last 20 days from CN were analyzed with ANOVA, with a statistical significance from 0.05. The supplementation of rice oil increased concentration (P < 0.01) (TR: 226 x 106/mL; CN: 172 x 106/mL), total motility (P < 0.01) (TR: 59%; CN: 42%), HOST (P < 0.02) (TR: 73%; CN: 69%) and TRAP (P < 0.01) (TR: 1.9 nmol Trolox/mg of protein; CN: 0.98 nmol Trolox/mg of protein). No differences among periods TR and CN were observed in volume, membrane integrity, testosterone and estradiol. Oral supplementation with the commercial rice oil containing PUFA and gamma-oryzanol increased the total antioxidant potential of the semen. In addition, a higher membrane functionality and motility was detected, probably due to antioxidant protection avoiding lipid peroxidation of sperm membrane or to a improved membrane fluidity.

Submitted by ANELISE RIBEIRO PERES (ane.medvet@hotmail.com) on 2018-09-18T23:21:32Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO definitivo_ANELISE.pdf: 1833795 bytes, checksum: 8953d732ef286f330a73fc84245f9111 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-09-19T16:44:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 peres_ar_dr_jabo.pdf: 1833795 bytes, checksum: 8953d732ef286f330a73fc84245f9111 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-19T16:44:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 peres_ar_dr_jabo.pdf: 1833795 bytes, checksum: 8953d732ef286f330a73fc84245f9111 (MD5) Previous issue date: 2018-07-27 / Na bovinocultura de corte, a alimentação corresponde ao maior custo associado à produção de carne. A avaliação do consumo alimentar residual (CAR) tem sido uma ferramenta importante para direcionar a seleção de bovinos de corte e otimizar economicamente esta atividade. No entanto, alguns estudos mostram uma diminuição da motilidade, do perímetro escrotal, uma menor taxa de prenhez e parto em animais eficientes para CAR. Uma estratégia para solucionar tais problemas é a suplementação ácidos graxos poliinsaturados (AGPs) que não apenas aumentam a densidade energética da dieta, mas também atuam na melhoria do desempenho reprodutivo. No entanto, o ideal é que tais características de seleção para CAR e efeito da suplementação com AGPs sejam passadas à prole, assim o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito paterno da seleção para consumo alimentar residual (CAR) e da suplementação dos touros com AGs para a PIVE, o acúmulo de lipídio embrionário e a expressão de genes. Animais classificados em baixo CAR e alto CAR foram utilizados no experimento. O delineamento experimental obedeceu a um esquema fatorial 2 x 2 (CAR x Suplementação), a análise estatística foi realizada pelo programa JPM (versão 5.0.1, SAS Institute). Após a amostragem, os animais foram separados aleatoriamente em dois grupos: com suplementação de AGs protegido e com suplementação controle (sem AGs protegido). O experimento foi composto por quatro tratamentos, o sêmen dos touros foi congelado (4 tratamentos), sendo 6 animais suplementados com AGs protegido (3 baixo CAR e 3 alto CAR) e 6 animais com suplementação controle, sem AGs (3 baixo CAR e 3 alto CAR). O sêmen foi utilizado para produção in vitro de embriões; os blastocistos foram reservados para análise da quantificação de lipídios e os blastocistos expandidos para análise da expressão gênica. A quantificação de lipídios foi avaliada utilizando o corante Sudan Black B 1% e as imagens foram analisadas pelo programa Image J (National Institutes of Health, USA). A análise de expressão gênica dos embriões foi feita pela técnica de qPCR utilizando o sistema de micro-fluídica Biomark HD (Fluidigm®, South San Francisco, CA, USA). Não houve diferença na produção in vitro de embriões oriundos de animais CAR- ou CAR+, nem entre os tratamentos suplementados com AGs. Embriões de touros CAR+ apresentaram maior conteúdo lipídico quando comparado com o grupo CAR-. Os genes que apresentaram diferença associados à dieta foram o HMOX1, SREBF1 e o GPX4. Os referentes ao perfil CAR que diferiram foram o PLAC8, PPARGC1A e o NFE2L2. Os relacionados com a interação entre dieta e CAR que apresentaram diferença foram o RPLP0, ATF4, H3F3A, HSF1, HMGCS1, SLC2A5, NANOG, REST e o GPX4. Conclui-se que a dieta e a seleção para CAR dos touros afetou a expressão gênica dos embriões produzidos in vitro utilizando o sêmen desses animais. / In beef cattle, feed corresponds to the highest cost associated with meat production. The evaluation of the selection for residual feed intake (RFI) has been an important tool to direct the selection of beef cattle and economically optimize this activity. However, some studies show a decrease in motility, scrotal perimeter, a lower pregnancy and calving rate in efficient animals for RFI. One strategy to solve such problems is polyunsaturated fatty acid (PUFA) supplementation that not only increases the energy density of the diet, but also improves reproductive performance. However, the ideal is that these characteristics of selection for RFI and effect of the supplementation with PUFA are passed to offspring, so the aim of this work was to evaluate the paternal effect of selection for residual feed intake and supplementation of bulls with fatty acids for in vitro produced embryos (IVPE), accumulation of embryonic lipid and gene expression. Animals classified under low RFI and high RFI were used in the experiment. The experimental design was based on a 2 x 2 factorial scheme (RFI x Supplementation), the statistical analysis was performed by the JPM program (version 5.0.1, SAS Institute). The animals were randomly divided into two groups: with protected fatty acids supplementation and with control supplementation (without protected fatty acids). The experiment was composed of four treatments, the semen of the bulls was frozen (4 treatments), 6 animals were supplemented with protected fatty acids (3 low RFI and 3 high RFI) and 6 animals with control supplementation, without protected fatty acids (3 low RFI and 3 high RFI). The semen was used for IVPE; blastocysts were reserved for analysis of lipid quantification and expanded blastocysts for analysis of gene expression. The quantification of lipids was evaluated using the Sudan Black B 1% dye and the images were analyzed by program Image J (National Institutes of Health, USA). The gene expression analysis of the embryos was done by the qPCR technique using the Biomark HD microfluidic system (Fluidigm®, South San Francisco, CA, USA). There was no difference in the in vitro production of embryos from RFI- or RFI+ animals, there was also no difference between treatments (supplementation). Embryos from RFI+ bulls presented higher intracytoplasmic lipid content than embryos from RFI- bulls. The genes that showed differences associated with the diet were HMOX1, SREBF1 and GPX4. The RFI associated genes that differed were PLAC8, PPARGC1A and NFE2L2. Those related to the interaction between diet and RFI that presented difference were RPLP0, ATF4, H3F3A, HSF1, HMGCS1, SLC2A5, NANOG, REST and GPX4. In conclusion, the diet and the selection for RFI of the bulls affected the gene expression of the embryos produced in vitro using the semen of these animals.

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Maria Inês Lenz Souza / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: César Roberto Esper / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: Várias pesquisas foram desenvolvidas visando a melhoria da congelabilidade do sêmen ovino. Contudo, ainda não houve progressos significativos na fertilidade do sêmen congelado após a inseminação artificial cervical. Diversos sistemas de análise computadorizada do movimento espermático (CASA) têm sido propostos e aplicados na tentativa de quantificar características específicas do movimento espermático, podendo ainda determinar a presença e a cinética das subpopulações de espermatozóides. Muitos testes para avaliar a função espermática foram desenvolvidos, permitindo analisar simultaneamente diferentes aspectos da função espermática. Análise da função mitocondrial oferece uma maneira de acessar a motilidade espermática. Foram objetivos otimizar o sistema CASA na avaliação do sêmen congelado; determinar parâmetros da cinética espermática que expressem analogia com as características da avaliação das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial (IP, FITC-PSA e JC-1; MITO; R-123) e utilizar conjuntamente os parâmetros fornecidos pelo sistema CASA e pelas sondas fluorescentes para agrupar as amostras de maneira qualitativa. Vinte e seis amostras de sêmen congelado de diferentes carneiros foram estudadas pelo CASA obtendo-se para os parâmetros VCL, VAP, VSL, ALH, BCF, LIN, STR, ELONG dados médios e individuais para cada espermatozóide e por sondas fluorescentes para a avaliação simultânea da integridade de membrana plasmática, reação acrossomal e potencial de membrana mitocondrial. Estatisticamente aplicou-se a análise exploratória de técnicas multivariadas obtendo-se três fatoriais sendo o primeiro fator F1 positivo e alto para as variáveis VAP, VSL, STR e LIN, que é interpretado com um fator relacionado à progressividade. Para o segundo fator F2, associam as variáveis VCL, ALH e MT, que representam um fator de deslocamento...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Many researches were developed to improve the ram semen criopreservation. However, no significant advances in the fertility rates with the frozen semen were observed with cervical artificial insemination. Several computer-assisted motility assessments (CASA) systems have been considered and applied in the attempt to quantify specific characteristics of the sperm motion and still them being able to determine the spermatozoa presence and subpopulations kinematics. A large number of sperm functions evaluation had been developed, making it possible to analyze different aspects of the sperm function simultaneously. Analysis of the mitochondrial function offers a way to have access the sperm motility. The aim of this study was to optimize the CASA system in the evaluation of the ram frozen semen; determine parameters of the sperm kinematics that express analogy with the characteristics of the evaluation of plasmatic, acrossomal and mitochondrial membranes (PI, FITC-PSA and JC-1; MITO; R-123) and use CASA parameters together with the fluorescent probes to group samples in a qualitative way. Twenty and six frozen semen samples of different rams were evaluated by CASA system for mean and individual sperm motion parameters VCL, VAP, VSL, ALH, BCF, LIN, STR, ELONG and for fluorescent probes leads for the simultaneous evaluation of the integrity of plasmatic, acrossomal membranes and membrane mitochondrial potential. The statistic applied was multivariate analysis getting to three different factorials. The first factor was positive and high (F1 factor) for variables VAP, VSL, STR and LIN, that were interpreted with the forward displacement. For F2 factor, there were associate variables VCL, ALH and MT that represent the displacement. The F3 factor, whose interpretation has to do with available energy, was associated with variables BCF, MITO and ELONG...(Complete abstract, click electronic address below) / Doutor