Submitted by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-08-21T19:55:09Z No. of bitstreams: 1 TeseRAT.pdf: 1727135 bytes, checksum: b87fbc21ecbb31231523f49768c99fd8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-08-21T19:55:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRAT.pdf: 1727135 bytes, checksum: b87fbc21ecbb31231523f49768c99fd8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-08-21T19:55:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRAT.pdf: 1727135 bytes, checksum: b87fbc21ecbb31231523f49768c99fd8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-21T19:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseRAT.pdf: 1727135 bytes, checksum: b87fbc21ecbb31231523f49768c99fd8 (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The nucleus of the solitary tract (NTS), the primary site of peripheral osmoreceptor and cardiovascular afferences, is suggested to receive important inhibitory signals involved in the control of water and sodium intake. However, it is not known which neurotransmitters are involved in the transmission of this information. Central gabaergic, serotonergic and adrenergic mechanisms are involved in the control of sodium and water intake and immunohistochemical studies have shown that these receptors are present in the NTS. Therefore, in the present study, we investigated the effects of muscimol (a GABAA receptor agonist), DOI (a serotonergic 5-HT2A/2C receptor agonist), methysergide (a serotonergic 5-HT1/2 receptor antagonist) and moxonidine (α2 adrenergic/imidazoline receptor agonist) injected into the NTS on water and 0.3 M NaCl intake induced by intragastric load of 2 M NaCl (a cellular dehydration protocol), by intracerebroventricular (icv) angiotensin II (ANG II) or by sodium depletion (furosemide + 24 h diet deficient in sodium, a extracellular dehydration protocol). Holtzman rats (290-310 g, n=3-20) had stainless steel cannulas implanted bilaterally into the NTS and into the lateral ventricle (LV). Bilateral injection of muscimol (0.25 and 0.5 nmol/100 nl), and DOI (2.5 μg/100 nl) reduced water intake induced by intragastric load of 2 M NaCl (2 ml/rat) and water intake induced by icv ANG II (50 ng/100nl) without changing 0.3 M NaCl intake. Bilateral injection of DOI reduced water intake induced by icv ANG II. However, DOI produced no changes in the 0.3 M NaCl and water intake induced by sodium depletion. Injections of methysergide (2 μg/100 nl) produced no changes in the water and 0.3 M NaCl intake induced by intragastric load of 2 M NaCl, icv ANG II or sodium depletion. The pre-treatment with methysergide blocked the effect of DOI on water intake induced by intragastric load of 2 M NaCl. Besides that, bilateral injections of moxonidine (0.5 and 5 nmol/100 nl) produced no changes on water intake induced by intragastric load of 2 M NaCl. The results suggest that gabaergic, serotonergic, but not adrenergic, receptors in the NTS are part of a mechanism involved in the inhibitory control of water intake induced by cellular dehydration. Our results also suggest that serotonergic receptors into the NTS participate in the control of water intake induced by icv injection of ANG II. / O núcleo do trato solitário (NTS), sítio primário das aferências cardiovasculares e dos osmorreceptores periféricos, recebe importantes sinais inibitórios envolvidos no controle da ingestão de água e sódio. Porém, não se sabe quais os neurotransmissores envolvidos na transmissão dessas informações. Mecanismos gabaérgicos, serotoninérgicos e adrenérgicos centrais estão envolvidos no controle da ingestão de água e sódio e estudos de imunohistoquímica mostraram que estes receptores estão presentes no NTS. Portanto, no presente estudo, investigamos os efeitos de muscimol (agonista de receptores gabaérgicos GABAA), DOI (agonista de receptores serotoninérgicos 5-HT2A/2C), metisergida (antagonista de receptores serotoninérgicos 5-HT1/2) e moxonidina (agonista de receptores adrenérgicos/imidazólicos α2) injetados no NTS na ingestão de água e NaCl 0,3 M induzida por sobrecarga intragástrica de NaCl 2 M (um protocolo de desidratação intracelular), por angiotensina II (ANG II) intracerebroventricular (icv) ou por depleção de sódio (furosemida + 24 h com dieta deficiente em sódio, um protocolo de desidratação extracelular). Ratos Holtzman (290-310 g), n=3-20 (por grupo), tiveram cânulas de aço inoxidável implantadas bilateralmente no NTS e no ventrículo lateral (VL). Injeções bilaterais de muscimol (0,25 e 0,5 nmol/100 nl) e DOI (2,5 μg/100 nl) no NTS reduziram a ingestão de água induzida por sobrecarga intragástrica de NaCl 2 M (2 ml/rato) sem alterações na ingestão de NaCl 0,3 M. Injeções bilaterais de DOI no NTS reduziram a ingestão de água induzida por ANG II icv. No entanto, injeções bilaterais de DOI no NTS não alteraram a ingestão de NaCl 0,3 M e água induzida por depleção de sódio. Injeções bilaterais de metisergida (2 μg/100 nl) no NTS não produziram alterações na ingestão de água e de NaCl 0,3 M induzidas por sobrecarga intragástrica de NaCl 2 M, ANG II icv ou depleção de sódio. O pré-tratamento com metisergida bloqueou o efeito de DOI na ingestão de água induzida por sobrecarga intragástrica de NaCl 2 M. Além disso, injeções bilaterais de moxonidina (0,5 e 5 nmol/100 nl) no NTS não alteraram a ingestão de água e de NaCl 0,3 M induzida por sobrecarga intragástrica de NaCl 2 M. Os resultados sugerem que os receptores gabaérgicos e serotoninérgicos, mas não os adrenérgicos do NTS fazem parte de um mecanismo envolvido no controle inibitório da ingestão de água induzida por desidratação intracelular. Nossos resultados também sugerem que receptores serotoninérgicos do NTS participam do controle da ingestão de água induzida por injeção icv de ANG II.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6524.pdf: 836310 bytes, checksum: 7abc8c7790ee59b230df28eb660ac2b7 (MD5) Previous issue date: 2009-12-17 / Universidade Federal de Sao Carlos / Lipopolysaccharide (LPS), an endotoxin derived from gram-negative bacteria wall, triggers a conjunct of systemic and behavioral responses grouped under the name of sickness behavior. Several works show the inhibition of ingestive behavior in animals with activated immune system by systemic LPS. The aim of this work was demonstrate that LPS inhibit sodium appetite in lower doses than those that cause lethal effects and that LPS inhibitory action on sodium appetite involves α2 adrenergic mechanisms. Were produced three works where we show the LPS effects on sodium appetite, on arterial pressure and in different kinds of thirst. In the first work, we showed that LPS inhibited sodium appetite and only higher doses produced thirst inhibition, besides reduced urinary volume and natriuresis, without alterations on cardiovascular parameters in FURO/CAP-treated rats. LPS abolished intracellular thirst e reduced urinary volume and natriuresis in 2M NaCl gavage-treated animals. LPS also reduced thirst in FURO-treated animals. These results suggest that LPS has a preferential effect on sodium appetite and on thirst intracellular thirst. In the second work we showed that LPS reduce sodium appetite and that this inhibition is abolished by previous treatment with yohimbine ip, an α2 adrenoceptor antagonist in sodium depleted rats. Yohimbine when combined with LPS produced hypotension in sodium depleted rats. LPS reduced gastric empty in sodium depleted rats and this effect wasn‟t abolished by previous treatment with yohimbine. The systemic effects do not explain the inhibition on sodium appetite and we can suggest that LPS exert an inhibitory effect on sodium appetite probably mediated by central α2 adrenoceptors. In the third work we confirmed that LPS inhibit sodium appetite and that central α2 adrenergic ways mediated this response because RX-821002, an α2 adrenoceptor antagonist injected icv, abolished sodium appetite inhibition induced by systemic LPS in sodium depleted rats without produced alterations in cardiovascular parameters. All results exposed with these three works suggest that LPS inhibit sodium appetite and this inhibition is mediated by central α2 adrenoceptors. / Lipopolissacarídeo (LPS), uma endotoxina derivada da parede da bactéria gram-negativa, desencadeia um conjunto de respostas sistêmicas e comportamentais, que se agrupam sob a denominação de comportamento de doença (sickness behavior). Grande número de trabalhos mostra a inibição de comportamento ingestivo no animal que tem ativação do sistema imune induzido por injeção sistêmica de LPS. O objetivo deste trabalho foi demonstrar que o LPS inibe o apetite ao sódio em doses menores daquelas que causam os efeitos letais desta endotoxina e que a ação inibitória do LPS sobre o apetite ao sódio envolve mecanismos adrenérgicos α2. Foram produzidos três trabalhos onde mostramos os efeitos do LPS no apetite ao sódio, na pressão arterial e em diferentes tipos de sede. No primeiro trabalho mostramos que LPS inibiu o apetite ao sódio e apenas as doses mais altas produziram inibição na sede, além de reduzir volume urinário e natriurese, sem alterar os parâmetros cardiovasculares em ratos tratados com o protocolo FURO/CAP. LPS aboliu sede intracelular e reduziu volume urinário e natriurese em ratos que receberam gavagem de NaCl 2M. A sede também foi reduzida pelo tratamento com LPS em ratos tratados com FURO apenas. Esses resultados sugerem que o LPS tem efeito preferencial sobre o apetite ao sódio e sobre a sede intracelular. No segundo trabalho mostramos que LPS reduz o apetite ao sódio e que essa inibição é abolida se há tratamento prévio com ioimbina ip, um antagonista de receptores adrenérgicos α2 em ratos depletados de sódio. Esse mesmo antagonista quando associado com LPS produz hipotensão em ratos depletados de sódio. LPS diminuiu a taxa de esvaziamento gástrico em animais depletados de sódio e esse efeito não foi abolido pelo prévio tratamento com ioimbina. Devido ao fato desses efeitos sistêmicos do LPS não explicarem a inibição no apetite ao sódio podemos sugerir que o LPS exerce um efeito inibitório no apetite ao sódio provavelmente mediado por receptores adrenérgicos α2 centrais. No terceiro trabalho confirmamos que o LPS inibe o apetite ao sódio e que vias centrais noradrenérgicas α2 centrais medeiam essa inibição pois o RX-821002, um antagonista de receptores adrenérgicos α2, injetado icv, também aboliu a inibição no apetite ao sódio induzida pelo LPS sistêmico em ratos depletados de sódio sem produzir alterações nos parâmetros cardiovasculares. Esse conjunto de resultados expostos por meio destes três trabalhos sugere que o LPS inibe o apetite ao sódio e essa inibição é mediada por receptores adrenérgicos α2 de origem central.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2885.pdf: 1014245 bytes, checksum: f9caee9a0cfd9bbc23af2760d02bb6a9 (MD5) Previous issue date: 2009-12-07 / Universidade Federal de Minas Gerais / Previous studies have shown the importance of serotonergic GABAergic and aadrenergic mechanisms of the lateral parabraquial nucleus (LBPN) in the control of sodium intake. The importance of the central nucleus of the amygdala (CeA) for sodium intake induced by different protocols was also demonstrated. Considering the studies showing reciprocal connections between these two structures, the objective of the present study was to investigate if the increase of sodium and water intake produced by the blockade of serotonergic mechanism, or the activation of GABAergic receptors or α2-adrenoceptors in the LPBN would depend on the CeA integrity. Male Holtzman rats with bilateral CeA lesions and bilateral stainless steel cannulas implanted in the LPBN were used to study the possible involvement of the CeA: 1) in water and 0.3 M NaCl intake produced by injections of the diuretic furosemide (FURO) combined with the angiotensin converting enzyme inhibitor captopril (CAP) subcutaneously (sc); 2) in the increase of 0.3 M NaCl intake induced by the blockade of serotonergic mechanisms or activation of the α2-adrenoceptors of the LPBN in rats treated with FURO + CAP sc; 3) in 0.3 M NaCl intake induced by the activation of GABAergic receptorss of the LPBN in satiated and normovolemic rats. Additionally, the pharmacological blockade of the CeA neurons with bilateral injections of GABAA receptor agonist muscimol was performed in order to test if the effects of CeA electrolytic lesions after the blockade of the inhibitory mechanisms of the NPBL were due to destruction of CeA neurons or destruction of fibers of passage. CeA lesionedrats had a decrease in daily water intake in comparison to sham-lesioned rats during the whole period of test, while the reduction of daily 0.3 M sodium intake occurred after the eighth day of lesions. Animals with bilateral lesions of the CeA also showed a reduction in body weight when compared to sham lesioned-rats. Bilateral lesions of the CeA did not affect FURO+CAP induced-water (9.2 1.6 ml/2 h vs. sham lesion: 12.8 0.7 ml/2 h) and 0.3 M NaCl intake (6.5 3.5 ml/2 h vs. sham lesion: 5.2 0.9 ml/2 h). Bilateral lesions of the CeA (3 days) completely abolished the ingestion of water (0.1 0.05 ml/4 h vs. sham lesion: 8.2 3.5 ml/4 h) and 0.3 M NaCl (0.1 0.1 ml/4 h vs. sham lesion: 16.1 5.4 ml/4 h) induced by bilateral injections of muscimol (0.5 nmol/0.2 μl) into the LPBN in satiated rats. Bilateral lesions of the CeA (5 to 18 days) also abolished the increase in 0.3 M NaCl (11,7 2,8 ml/2 h e 11,7 2,8 ml/2 h vs. sham lesion: 31,5 4,2 ml/2 h e 18,3 ± 3,1 ml/2 h) and water intake (6,7 1,8 ml/2 h e 13,8 2,7 ml/2 h vs. sham lesion: 19,9 3,2 ml/2 h e 22,4 2,5 ml/2 h) produced respectively by bilateral injections of moxonidine (0.5 nmol/0.2 μl) or methysergide (4 μg/0.2 μl) into the LPBN in FURO + CAP treated-rats. Bilateral injections of muscimol (0.5 nmol) into the CeA abolished water (0.1 0.02 ml/4 h vs. saline: 8.8 3.2 ml/4 h) and 0.3 M NaCl intake (0.1 0.04 ml/4h vs. saline: 19.1 6.4 ml/4 h) induced by bilateral injections of muscimol (0.5 nmol/0.2 μl) in the NPBL in satiated animals. Bilateral injections of muscimol (0.25 nmol/0.2 μl) in the CeA abolished the increase of water (3.3 2.3 ml/2 h vs. saline: 26.4 6.7 ml/2 h) and 0.3 M NaCl intake (2.8 1.6 ml/2 h vs. saline: 29.7 7.2 ml/2 h) produced by the bilateral injections of moxonidine (0.5 nmol/0.2 μl) into the NPBL. The present results show that CeA is essential for sodium and water intake after the blockade of LPBN inhibitory mechanisms. The suggestion is that CeA facilitatory mechanisms for sodium intake might be activated after the blockade of LPBN inhibitory mechanisms which might drive rats to ingest sodium. Therefore, if LPBN inhibitory mechanisms were acting normally, they may limit sodium intake because they inhibit CeA facilitatory signals for sodium intake. / Estudos anteriores demonstraram a importancia dos mecanismos serotoninergicos, GABAergicos e adrenergicos do nucleo parabraquial lateral (NPBL) na regulacao da ingestao de sodio hipertonico. Tambem ja foi demonstrada a importancia do nucleo central da amigdala (CeA) para a ingestao de sodio hipertonico induzida por diferentes protocolos. Considerando-se os estudos mostrando conexoes reciprocas entre essas duas estruturas, o objetivo do presente estudo foi investigar se o aumento da ingestao de sodio hipertonico produzido pelo bloqueio serotoninergico ou ativacao GABAergica ou adrenergica no NPBL dependeria da integridade do CeA. Em ratos com lesoes bilaterais do CeA e com canulas de aco inoxidavel implantadas bilateralmente no NPBL, foi estudado o possivel envolvimento do CeA: 1) na ingestao de agua e NaCl 0,3 M produzida pelo tratamento subcutaneo com o diuretico furosemida (FURO) combinado com o inibidor da enzima conversora de angiotensina captopril (CAP); 2) no aumento da ingestao de NaCl 0,3 M produzido pelo bloqueio de receptores serotoninergicos ou ativacao dos receptores adrenergicos α2 do NPBL em ratos tratados com FURO + CAP sc; 3) na ingestao de NaCl 0,3 M induzida pela ativacao de receptores GABAergicos do NPBL em ratos saciados e normovolemicos. Adicionalmente, foi realizado o bloqueio farmacologico dos neuronios do CeA com injecoes bilaterais de muscimol, agonista de receptor GABAA, para verificar se os efeitos das lesoes eletroliticas do CeA apos o bloqueio dos mecanismos inibitorios do NPBL eram devido a destruicao de neuronios do CeA ou destruicao de fibras de passagem. Em animais com lesoes bilaterais do CeA a ingestao diaria de agua foi menor quando comparada aos animais com lesoes ficticias ao longo de todo periodo experimental, enquanto que a ingestao diaria de NaCl 0,3 M foi reduzida a partir do oitavo dia apos as lesoes. Esses animais apresentaram uma reducao no peso corporal persistente por todo periodo experimental comparado com o grupo com lesoes ficticias. As lesoes bilaterais do CeA nao afetaram a ingestao de agua (9,2 1,6 ml/2 h vs. lesoes ficticias: 12,8 0,7 ml/2 h) e NaCl 0,3 M (6,5 3,5 ml/2 h vs. lesoes ficticias 5,2 0,9 ml/2 h) induzida por FURO + CAP sc. As lesoes bilaterais do CeA (3 dias) aboliram a ingestao de NaCl 0,3 M (0,1 0,1 ml/4 h vs. lesoes ficticias: 16,1 5,4 ml/4 h) e de agua (0,1 0,05 ml/4 h vs. lesoes ficticias: 8,2 3,5 ml/4 h) induzida pelas injecoes bilaterais de muscimol (0,5 nmol/0,2 μl) no NPBL de ratos saciados. As lesoes bilaterais do CeA (5 a 18 dias) tambem aboliram o aumento da ingestao de NaCl 0,3 M (11,7 2,8 ml/2 h e 11,7 2,8 ml/2 h vs. lesoes ficticias: 31,5 4,2 ml/2 h e 18,3 ± 3,1 ml/2 h) e agua (6,7 1,8 ml/2 h e 13,8 2,7 ml/2 h vs. lesoes ficticias: 19,9 3,2 ml/2 h e 22,4 2,5 ml/2 h) induzidos, respectivamente, pelas injecoes bilaterais de moxonidina (0,5 nmol/0,2 μl) ou metisergida (4 μg/0,2 μl) em ratos previamente tratados com FURO+CAP sc. Injecoes bilaterais de muscimol (0,5 nmol/0,2 μl) no CeA aboliram a ingestao de agua (0,1 0,02 ml/4 h vs. salina: 8,8 3,2 ml/4 h) e NaCl 0,3 M (0,1 0,04 ml/4h vs. salina: 19,1 6,4 ml/4 h) induzidas pela injecao bilateral de muscimol (0,5 nmol/0,2 μl) no NPBL em animais saciados, como tambem as injecoes bilaterais de muscimol (0,25 nmol/0,2 μl) no CeA aboliram o aumento da ingestao de agua (3,3 2,3 ml/2 h vs. salina: 26,4 6,7 ml/2 h) e NaCl 0,3 M (2,8 1,6 ml/2 h vs. salina: 29,7 7,2 ml/2 h) produzido pela injecao bilateral de moxonidina (0,5 nmol/0,2 μl) no NPBL em animais tratados com FURO + CAP sc. Esses resultados demonstram que o CeA e essencial para a ingestao de sodio e agua que ocorre apos o bloqueio dos mecanismos inibitorios do NPBL. A sugestao e que mecanismos facilitatorios para a ingestao de sodio presentes no CeA seriam ativados apos o bloqueio dos mecanismos inibitorios do NPBL o que estimularia os animais a ingerirem sodio. Portanto, se estiverem atuando normalmente, os mecanismos inibitorios do NPBL limitariam a ingestao de sodio porque inibiriam os sinais facilitatorios para ingestao de sodio produzidos pelo CeA.

Sodium and water intake are important regulatory components of the hidromineral balance. In this context, human body regulates hidromineral imbalance through the neuro-immune-endocrine and behavioral response. Gonadal hormones are important players for the modulation of ingestive behaviors. The present study aimed to investigate the influence of male and female gonadal hormones in cerebral ECA2/ANG-(1-7)/Mas axis over the control of water sodium intake in rats. In this experiment, ovariectomized female rats were treated with estradiol benzoate (20μg/animal/day, sc; OVXE) or vehicle (sunflower oil; OVXV). Male rats underwent bilateral orchiectomy (ORQX) or sham surgery (SHAM). Guide cannulae were implanted into the right lateral ventricle for intracerebroventricular administration (icv) of drugs. We used angiotensin-converting enzyme type 2 (ACE2) activator, DIZE (diminazene of aceturate, 40 nmol / 2μl , icv ) or the antagonist of Ang-(1-7) Mas recetor, D-Ala7-ANG-(1-7) (A779, 10 nmol / 2μl, icv). The vehicle for both drugs was artificial cerebrospinal fluid (aCFS) administered in the same volume. For induction of thirst and sodium appetite, animals were subjected to hydrossaline depletion by administration of furosemide (20 mg / kg, sc) and access to distilled water and low sodium diet (corn ) for 24 hours. After microinjection of drugs, water and 0.3 M NaCl were reoffered and the ingested volume were recorded at the following 15, 30 , 60, 90 , 120, 180, 240 min and 24 h. Two-way analysis of variance was performed, followed by Bonferroni posthoc test when appropriate. The level of significance was p < 0.05. In females treated with vehicle or DIZE, sodium and water intake, as well as sodium preference index (SPI) did not differ between groups. However, OVXV ingested less water than OVXE when both were treated with A779 (p < 0.05). Twenty-four hours after reintroduction of fluids intake sodium ingestions was higher in OVXV than in OVXE when both received A779 (p<0.05). Similarly, OVXV rats showed greater preference for sodium when compared to OVXE, if both received icv injection of A779. Males ORQX microinjected with aCFS ingested more water than SHAM+aCSF. However, at 30 min, SHAM+DIZE male rats presented higher water intake when compared to their respective control. Up to 15 min after reintroduction of fluids, ORQX rats ingested less sodium than SHAM rats, regardless DIZE administration (p < 0.05). Water intake as well as SPI did not differ between groups in males undergoing A779 administrarion. However sodium intake was lower in ORQX+A779 than in ORQX+aCFS (p < 0.05) at 30, 60 , 90, 120 , 180 and 240 min after fluid presentation. Thus, we conclude that estrogen seems to exert inhibitory influences on sodium intake independent ECA2/ANG (1-7)/Mas activity. On the other hand, the male gonadal hormones act by raising intake for the regulation of salt intake shaft in the proposed protocol. / Os comportamentos de ingestão de sódio e água constituem importantes componentes regulatórios do equilíbrio hidroeletrolítico. Neste contexto, o organismo humano regula seu déficit hidromineral através de uma resposta neuroimunoendócrina e comportamental comandada majoritariamente pelo sistema nervoso central (SNC). Reconhecidamente, os hormônios gonadais representam importantes fatores moduladores dos comportamentos ingestivos. O presente estudo objetivou estudar a influência dos hormônios gonadais masculinos e femininos no eixo ECA2/ANG(1-7)/Mas sobre o controle da ingestão de água e NaCl 0,3 M em ratos e ratas. Neste experimento, fêmeas ovariectomizadas foram tratadas com benzoato de estradiol (20μg/animal/dia, s.c.; OVXE), ou com veículo (óleo de girassol; OVXV). Machos foram submetidos à orquiectomia bilateral (ORQX) ou cirurgia fictícia (SHAM). Por meio de cirurgia estereotáxica, cânulas-guia foram implantadas no ventrículo lateral direito para administração intracerebroventricular (icv) das drogas utilizadas. Foram utilizados o ativador da enzima conversora de angiotensina tipo 2 (ECA2), DIZE (Aceturato de Diminazeno, 40 nmol / 2 μL, i.c.v.) ou o antagonista do receptor Mas de ANG (1-7), o D-Ala7-ANG(1-7) (A779, 10 nmol / 2 μL, i.c.v.). O veículo para ambas as drogas foi líquido cerebro-espinhal artificial (LCEa), administrado nos animais controle em igual volume. Para indução da sede e apetite por sódio, os animais foram submetidos a depleção hidrossalina por administração de um diurético de alça (furosemida, 20 mg / kg, s.c.) e acesso à água destilada e dieta pobre em sódio (fubá de milho) por 24 horas. Após a microinjeção das drogas, água e de NaCl 0,3 M foram reapresentados e registrados os volumes ingeridos nos tempos 15, 30, 60, 90, 120, 180, 240 min e 24 h. Foram realizadas análises de variância de duas vias seguidas do pós-teste de Bonferroni, quando necessário. O nível de significância foi de p < 0,05. Os dados demonstraram que, em fêmeas tratadas com DIZE ou veículo, a ingestão de água, NaCl 0,3 M e o índice de preferência ao sódio (IPS) não diferiram entre os grupos. Porém, fêmeas OVXV ingeriram menos água quando comparadas às femeas OVXE, quando ambas foram tratadas com A779 (p < 0,05). Vinte e quatro horas após a reapresentação de fluidos, a ingestão de NaCl 0,3 M foi maior em ratas OVXV que nas OVXE, quando ambas receberam A779 (p < 0,05). No mesmo sentido, ratas OVXV apresentaram maior preferência por sódio que as OVXE, ambas tratadas com A779. Machos ORQX microinjetados com LCEa ingeriram mais água quando comparados aos animais do grupo SHAM+LCEa. Todavia, aos 30 min, os machos SHAM+DIZE apresentaram maior ingestão de água quando comparado ao seu respectivo controle. Até 15 min após a reapresentação de fluidos, a ingestão de NaCl 0,3 M em ratos ORQX foi menor em comparação aos ratos SHAM independente do tratamento com DIZE (p<0,05), o IPS não diferiu entre os grupos. Os dados referentes a ingestão de água e ao IPS em machos submetidos ao tratamento icv com A779, revelam não haver diferença entre os grupos estudados, porém para ingestão de NaCl 0,3 M, os ratos ORQX+A779 demonstraram menor ingestão quando comparados aos animais ORQX+LCEa (p<0,05) nos tempos 30, 60, 90, 120, 180 e 240 min. Assim, podemos concluir que o estrógeno parece exercer influencia inibitória na ingestão de sódio independente da atividade do eixo ECA2/ANG(1-7)/Mas. Por outro lado, os hormônios gonadais masculinos atuam elevando a ingestão hidrossalina para a regulação do eixo no protocolo proposto.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6708.pdf: 2113975 bytes, checksum: 30511a391fdfda439671c285b41c07c1 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / The central nucleus of the amygdala (CeA) and the lateral parabrachial nucleus (LPBN) are important areas for the control of sodium appetite. The functional integrity of the CeA is critical to sodium and water intake when LPBN the inhibitory mechanisms are deactivated. Therefore, the aims of this study were to investigate the role of different neurotransmitters of the CeA in the control of sodium and water intake induced by a) sodium depletion and b) after blockade of LPBN inhibitory mechanisms. Male Holtzman rats with stainless steel guide cannula implanted bilaterally only in CeA or both into the CeA and LPBN were used. Sodium (0.3 M NaCl) intake was evaluated in satiated, hyperosmotic and sodium-depleted rats. In sodium-depleted animals, bilateral administration of &#945;2- adrenergic/imidazoline receptor agonist moxonidine (10 nmol) into CeA reduced 0.3 M NaCl and water intake. Moreover, bilateral injections of muscimol (0.25 nmol) into CeA reduced sodium intake without change water intake. Oxytocin receptors activation or its blockade in the CeA, blockade of muscarinic cholinergic receptor or activation of 5HT2A/2C serotonergic receptor into the CeA did not change 0.3 M NaCl or water intake in sodium-depleted animals. Bilateral injections of opioid receptor antagonist naloxone (40 &#956;g) into the CeA did not significantly change 0.3 M NaCl and water intake in sodium-depleted animals. However, sodium and water intake induced by bilateral injections of muscimol (0.5 nmol) into the LPBN in satiated animals were completely abolished after bilateral injections of naloxone (40 &#956;g) into CeA. Furthermore, paradoxical sodium intake observed in rats that received oral gavage with 2 M NaCl (2 ml/rat) combined with bilateral injections of moxonidine (0.5 nmol) in LPBN was also blocked by bilateral naloxone (40 &#956;g) into the CeA. 0.3 M NaCl and water intake induced by bilateral muscimol injections (0.5 nmol) into LPBN in satiated animals were abolished by blocking AT1 angiotensin receptors (losartan - 20 &#956;g) in CeA. In sodium-depleted animals, bilateral injections of losartan (20 &#956;g) into the CeA significantly reduced water intake but did not affect sodium intake. Bilateral injections of the aldosterone antagonist RU 28318 (50 ng) did not change sodium and water intake induced by sodium depletion. Present results suggest that ocitocinergic, cholinergic muscarinic, 5-HT2A/2C serotonergic receptors and aldosterone receptors of the CeA do not participate in the control of 0.3 M NaCl intake induced by sodium depletion. Moreover, present results suggest that GABAergic and &#945;2-adrenergic receptors of the CeA have an inhibitory role for sodium appetite in this situation. Although opioids and angiotensinergic mechanisms of the CeA apparently do not contribute to sodium depletion-induced sodium intake, opioidergic and angiotensinergic mechanisms in CeA are essential for sodium intake when the LPBN inhibitory mechanisms are blockade by LPBN muscimol injection. In addition, opioidergic mechanisms in CeA are also essential for the paradoxical sodium intake by hyperosmotic animals when the inhibitory mechanisms are attenuated by LPBN moxonidine. Therefore, the activation of opioidergic and angiotensinergic receptors of the CeA is required for sodium intake observed after removal or attenuation of LPBN inhibitory mechanisms. / O núcleo central da amígdala (CeA) e o núcleo parabraquial lateral (NPBL) são regiões importantíssimas para o controle da ingestão sódio e água. A integridade funcional do CeA é fundamental para a ingestão de sódio e água quando ocorre redução da atividade dos mecanismos inibitórios do NPBL. Portanto, os objetivos do presente estudo foram investigar a participação de alguns neurotransmissores no CeA no controle da ingestão de sódio e água induzida a) por desidratação extracelular e b) após o bloqueio dos mecanismos inibitórios do NPBL. Para tanto foram utilizados ratos Holtzman com cânulas guia de aço inoxidável implantadas bilateralmente apenas no CeA ou bilateralmente no CeA e no NPBL. A ingestão de NaCl 1,8% foi avaliada em animais saciados, hiperosmóticos ou com depleção de sódio. Em animais depletados de sódio, a administração bilateral do agonista de receptores adrenérgicos &#945;2/imidazólicos moxonidina (10 nmol), assim como a de muscimol (0,25 nmol) no CeA reduziram a ingestão de NaCl 1,8%. A ativação ou bloqueio dos receptores de ocitocina, o bloqueio de receptores muscarínicos, ativação de receptores serotenérgicos 5-HT2A/2C, ou ainda o bloqueio de receptores de aldosterona no CeA não modificaram a ingestão de sódio e água. Contudo, injeções bilaterais de losartan (20 &#956;g) no CeA reduziram a ingestão de água, mas não modificaram a ingestão de sódio em animais depletados. Já a ingestão de sódio e água induzidas por muscimol (0,5 nmol) no NPBL em animais saciados foram abolidas após bloqueio de receptores AT1 de angiotensina com administração de losartan no CeA. Administração bilateral de naloxona (40 &#956;g) no CeA não modificou a ingestão de NaCl 1,8% e de água em animais desidratados. No entanto, a ingestão de sódio e água induzidas por injeções bilaterais de muscimol (0,5 nmol) no NPBL em animais saciados foram completamente bloqueadas após injeções bilaterais de naloxona no CeA. Além disso, a ingestão paradoxal de NaCl 0,3 M observada em ratos hiperosmóticos após o tratamento bilateral de moxonidina no NPBL também foi bloqueada pelas injeções de naloxona no CeA. Os presentes resultados sugerem que receptores ocitocinérgicos, colinérgicos muscarínicos, serotoninérgicos 5-HT2 e receptores de aldosterona no CeA não participam do controle da ingestão de NaCl 1,8% induzida por depleção de sódio. Por outro lado, os presentes resultados sugerem que receptores GABAérgicos e receptores adrenérgicos &#945;2 no CeA apresentam um papel inibitório para o apetite ao sódio nessa situação. Embora os mecanismos opióides e angiotensinérgicos no CeA aparentemente não contribuam para a ingestão de sódio induzida pela depleção de sódio, os mecanismos opióides e angiotensinérgicos no CeA são essenciais para a ingestão de sódio observada quando os mecanismos inibitórios do NPBL são desativados pela ação do muscimol nessa área. Além disso, os mecanismos opióides no CeA também são essenciais para a ingestão paradoxal de sódio em animais hiperosmóticos quando os mecanismos inibitórios são atenuados pela ação da moxonidina no NPBL. Portanto, a ativação de receptores opióides e de receptores angiotensinérgicos no CeA é necessária para a ingestão de sódio observada após a remoção ou atenuação dos mecanismos inibitórios NPBL.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissRBD.pdf: 921826 bytes, checksum: 40bd9588528375b232a2fdf78d110ff9 (MD5) Previous issue date: 2006-08-24 / The hypothesis of a synergy between two hormones responsible for sodium conservation, aldosterone and angiotensin II (ANG II), explains the expression of a characteristic of sodium appetite, hypertonic NaCl intake, in a hypovolemic animal. Hypertonic NaCl intake can be induced in normovolemic rats that received a combined treatment of mineralocorticoid and ANG II at individual doses not sufficient to induce sodium intake (paradigmatic synergy test). Considering the motivation to specific sodium intake another characteristic of sodium appetite, the objective of the present dissertation was to find out a role for the interaction between mineralocorticoid and ANG II on the specificity of sodium appetite. Sprague-Dawley Holtzman rats (&#8773; 300 g b.w.) were housed with access to water and one or more palatable (0.01 M KCl, 0.05 mM CaCl2, 0.15 M NaHCO3, 0.15 M NaCl) or hypertonic (0.50 M NaCl) mineral solutions for ingestion. In two-bottle tests, a bottle contained water and another bottle contained either 0.01 M KCl, 0.15 M NaHCO3, 0.15 M NaCl or 0.50 M NaCl. In five-bottle tests, a bottle contained water and each one of the remaining four bottles contained either 0.01 M KCl, 0.05 mM CaCl2, 0.15 M NaHCO3 or 0.15 M NaCl, respectively. In sodium depletion tests, intact rats received each a 10 mg sc. injection of furosemide or vehicle followed by 24 h access to sodium deficient food and water. Then, food was removed and mineral solutions and water were offered for recording their intake (sodium appetite test). In the paradigmatic synergy test, the animals received daily single sc injection of 2.5 mg of deoxycorticosterone acetate (DOCA) or sunflower oil (vehicle) for three days and a left lateral cerebroventricular injection of 50 ng of ANG II four hours after the last DOCA or oil injection. Fluid intake record began immediately after ANG II injection and food removal. The daily intake record showed no preference for any solution or water when animals had access to five bottles. Sodium depletion induced a preferential sodium intake, with higher NaCl than NaHCO3 intake, in either two- or five-bottle sodium appetite tests. DOCA alone enhanced the daily 0.15 M NaCl and NaHCO3 intake, but did not alter KCl or 0.50 M NaCl intake in two-bottle tests. In the paradigmatic tests with normovolemic animals, ANG II combined to oil induced the ingestion of all three palatable mineral solutions (KCl, NaHCO3, NaCl) and water, in two-bottle tests, and preference for NaHCO3 in five-bottle tests. DOCA pretreatment enhanced only sodium solution intake, particularly NaCl intake, induced by ANG II in two-bottle tests (0.15 M NaCl: DOCA/ANG II = 24.5 ± 6.7 ml/120 min. vs. OIL/ANG II = 9.2 ± 1.8 ml/120 min.; 0.15 M NaHCO3: DOCA/ANG II = 17.0 ± 1.8 ml/120 min. vs. OIL/ANG II = 14.6 ± 2.1 ml/120 min.; 0.01 M KCl: DOCA/ANG II = 9.8 ± 1.9 ml/120 min. vs. 11.9 ± 1.2 ml/120 min.), and enhanced by 80 % the total sodium solution intake in the beginning of the five-bottle test. The combined effect of DOCA with ANG II on the induction of 0.50 M NaCl intake in a two-bottle test was replicated in our animals. The results from the paradigmatic synergy test are coherent with results from sodium appetite tests, suggesting that the mineralocorticoid may turn the effect of ANG II on mineral intake more selective to sodium intake. Thus, the combined ANG II and mineralocorticoid action could contribute to the expression of two characteristics of sodium appetite, not only the acceptance of hypertonic sodium solutions, but also the selective sodium intake. / A hipótese do sinergismo entre dois hormônios responsáveis pela conservação de sódio, a aldosterona e a ANG II, explica uma característica do apetite ao sódio, a ingestão de NaCl hipertônico em um animal hipovolêmico. Ingestão de NaCl hipertônico pode ser induzida em ratos normovolêmicos que receberam um tratamento combinado de mineralocorticóide e ANG II, em doses individuais insuficientes para induzir a ingestão de sódio (teste paradigmático do sinergismo). Sendo a motivação para uma ingestão específica de sódio uma outra característica do apetite ao sódio, o objetivo desta dissertação foi o de procurar um papel para a interação entre mineralocorticóide e ANG II na especificidade do apetite ao sódio. Foram utilizados ratos Sprague-Dawley Holtzman (&#8773; 300 g p.c.) ambientados com livre acesso a bebedouros com água e uma ou mais soluções minerais palatáveis (KCl 0,01 M, CaCl2 0,05 mM, NaHCO3 0,15 M, NaCl 0,15 M) ou hipertônica (NaCl 0,50 M). Em testes de dois bebedouros, um dos bebedouros continha água e o outro, solução de KCl 0,01 M, NaHCO3 0,15 M, NaCl 0,15 M ou NaCl 0,50 M. Em testes de cinco bebedouros, um dos bebedouros continha água e cada um dos demais uma solução de KCl 0,01 M, CaCl2 0,05 mM, NaHCO3 0,15 M ou NaCl 0,15 M. Testes com dois ou cinco bebedouros foram empregados em animais depletados de sódio e no teste paradigmático do sinergismo. Nos testes de depleção de sódio, os animais receberam injeção sc de 10 mg de furosemida ou veículo, seguida de acesso a uma dieta hipossódica e água por vinte e quatro horas. Em seguida, o alimento foi removido e foram oferecidas soluções minerais para registro da ingestão das mesmas e de água (teste do apetite ao sódio). No teste paradigmático do sinergismo, os animais receberam injeção sc de 2,5 mg de acetato de desoxicorticosterona (DOCA) ou óleo de girassol (veículo) uma vez ao dia, durante três dias, e uma injeção de 50 ng de ANG II (ou salina) no ventrículo lateral esquerdo, quatro horas após a última injeção de DOCA ou óleo. Passou-se a registrar a ingestão de líquidos imediatamente após a injeção de ANG II e remoção da ração. O registro da ingestão diária mostrou que não houve preferência por nenhuma solução ou água durante o período de ambientação com cinco bebedouros. A depleção de sódio induziu ingestão preferencial de sódio no teste do apetite ao sódio, sendo a ingestão de NaCl 0,15 M maior do que a de NaHCO3 tanto nos testes de dois como de cinco bebedouros. O tratamento com apenas DOCA aumentou a ingestão diária de NaCl 0,15 M e de NaHCO3 sem alterar a ingestão diária de KCl e de NaCl 0,50 M, em testes de dois bebedouros. No teste paradigmático com ratos normovolêmicos, a ANG II combinada ao óleo promoveu ingestão das três soluções minerais palatáveis (KCl, NaHCO3, NaCl) e de água em testes de dupla escolha, e preferência ao NaHCO3 no teste com cinco bebedouros. O pré-tratamento com DOCA potenciou o efeito da ANG II apenas sobre a ingestão das soluções sódicas, mais evidente para NaCl, no teste com dois bebedouros (NaCl 0,15 M: DOCA/ANG II = 24,5 ± 6,7 ml/120 min. vs. ÓLEO/ANG II = 9,2 ± 1,8 ml/120 min.; NaHCO3 0,15 M: DOCA/ANG II = 17,0 ± 1,8 ml/120 min. vs. ÓLEO/ANG II = 14,6 ± 2,1 ml/120 min.; KCl 0,01 M: DOCA/ANG II = 9,8 ± 1,9 ml/120 min. vs. 11,9 ± 1,2 ml/120 min.), além de aumentar em 80 % a ingestão total de soluções sódicas no início do teste com cinco bebedouros. O efeito da indução de ingestão de NaCl 0,50 M pela combinação de DOCA com ANG II em testes de dois bebedouros foi replicado nos nossos animais. Os resultados do teste paradigmático do sinergismo são coerentes com os testes do apetite ao sódio, sugerindo que o mineralocorticóide possa tornar mais seletivo o efeito da ANG II sobre a ingestão mineral. Assim, uma interação entre ANG II e mineralocorticóide poderia contribuir para a expressão de duas características do apetite ao sódio, não apenas a aceitação de soluções hipertônicas de NaCl, mas também a ingestão seletiva de sódio.