Este estudo analisa a expressão dos subtipos de receptores da somatostatina (SSTR) em 39 adenomas secretores de GH. Em 19 pacientes acromegálicos, a resposta clínica, laboratorial e radiológica ao análogo da somatostatina (AS) octreotide-LAR foi comparada à expressão dos SSTR. O SSTR mais freqüentemente expresso foi o SSTR5, seguido pelos SSTR3, SSTR2, SSTR1 e SSTR4. O SSTR1 e SSTR2 foram mais expressos nos pacientes que normalizaram GH e IGF-I. Houve correlação positiva entre o grau de redução tumoral e a expressão dos SSTR1, SSTR2 e SSTR3. Portanto, AS específicos para os SSTR´s poderão contribuir para o tratamento de acromegálicos resistentes aos AS atualmente disponíveis / This study aimed to analyze the expression of somatostatin receptor subtypes (SSTR) in 39 GH-secreting pituitary adenomas. In 19 acromegalics the clinical, laboratorial and radiological responses to the somatostatin analog (SA) octreotide-LAR were compared to SSTR´s expression. The most expressed SSTR was SSTR5, followed by SSTR3, SSTR2, SSTR1 and SSTR4. SSTR1 and SSTR2 were more expressed in patients who achieved GH and IGF-I normalization. There was a positive correlation between the degree of tumor reduction with SSTR1, SSTR2 and SSTR3 expression. Therefore, the development of specific SA could contribute to treatment improvement in resistant acromegalics patients to available SA

O desenvolvimento de moléculas radiomarcadas com alta especificidade para um órgão ou tumor tem contribuído para a obtenção de um diagnóstico de precisão em medicina nuclear.Um caso particular são os peptídeos radiomarcados para a localização de tumores neuroendócrinos como os derivados sintéticos da somatostatina.Atualmente, o DTPA-octreotideo-111In é o radiofármaco mais utilizado com o propósito de visualizar tumores que expressem receptores para somatostatina. Contudo, o uso do indio-111 como radionuclídeo oferece limitações em relação a sua disponibilidade (produto de ciclotron), suas características físicas como meia-vida (67 horas) e emissor de fótons de média energia (171 keV e 245 keV) que não favorecem a obtenção de imagens tipo SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography). As propriedades físicas favoráveis do tecnécio-99m (99mTc) fazem dele o radioisótopo mais adequado para substituir o indio-111 (111In) na marcação desses peptídeos. Este trabalho avaliou a preparação e marcação do reagente liofilizado HYNIC-Tyr3-octreotato (HYNIC-octreotato) com 99mTc, baseado em metodologia descrita na literatura, utilizando tricina e EDDA (ácido etilenodiaminadiacetico) como coligantes. Foram estudados os parâmetros de marcação (tempo de incubação, temperatura, volume e atividade do pertecnetato de sódio) e estabilidade do liofilizado. Adicionalmente, estudou-se a influência de pré-congelamento com nitrogênio (N2) líquido na estabilidade do liofilizado, bem como a influência de manitol na pureza radioquímica e biodistribuição do complexo. Os estudos de estabilidade revelaram que o método de liofilização utilizado, empregando o pré-congelamento com nitrogênio líquido possibilitou a obtenção de um reagente liofilizado com estabilidade de 4 meses quando armazenado sob refrigeração. A estabilidade do reagente liofilizado obtido sem pré-congelamento com nitrogênio líquido foi semelhante à obtida com o pré-congelamento.Os estudos de marcações determinaram as melhores condições de marcação, para as quais se obteve pureza radioquímica maior que 90%.A presença de manitol na formulação não influenciou na formação do complexo HYNIC-Octreotato-99mTc, conforme avaliação realizada por CLAE e estudos cintilográficos de distribuição do composto em coelhos.Estudos de biodistribuição invasivos realizados em camundongos Nude com tumor (células AR42J de tumor pancreático) e camundongos Swiss normais, bem como estudos cintilográficos realizados em coelhos e camundongos Nude revelaram cinética de distribuição rápida, acúmulo renal e captação tumoral significativa do peptídeo radiomarcado. Os resultados dos estudos de marcação com 99mTc, produção de reagente liofilizado e biodistribuição sugerem que o radiofármaco HYNIC-octreotato-99mTc apresenta potencial para aplicação em diagnóstico de tumores neuroendócrinos em medicina nuclear. / The development of radiolabeled molecules with high specificity for an organ or tumor has been contributed to the precise diagnostic in nuclear medicine. Somatostatin labeled derivatives constitutes a particular example of labeled peptide applied in the localization of neuroendocrine tumors. Nowadays, the 111In-DTPA-octreotideo is the radiopharmaceutical applied in diagnostic procedures for the visualization of tumors with high expression of somatostatin receptors. However, the 111-indium is a radionuclide that presents some limitations related to availability (cyclotron production), half-life (67 hours) and the emission of medium energy photons (171 keV e 245 keV), not favorable to the acquisition of images in SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography). The favorable physical properties of the 99m-technetium (99mTc) make this radionuclide the more favorable to substitute the 111-indium on peptide labeling procedures. This work studied the preparation and labeling of a lyophilized kit of HYNIC-Tyr3-octreotate (HYNIC-octreotate) with 99mTc, base on previously described procedures and using tricine and EDDA (ethylendiaminediacetic acid) as coligands. It was studied the labeling parameters (incubation time, temperature, volume and perthecnetate activity) and the stability of the lyophilized preparation. Additionally, it was studied the influence of the pre-freezing using liquid nitrogen in the stability of the lyophilized preparation, as well as the influence of manitol in the labeling yield and biological distribution of the complex. The stability studies showed that the lyophilization using liquid nitrogen pre-freezing resulted in a lyophilized preparation with stability over 4 month when stored under refrigeration. The stability of the lyophilized preparation obtained without liquid nitrogen pre-freezing was similar.The labeling studies determined the best labeling conditions, resulting in a radiochemical yield superior than 90%. The use of manitol in the formulation did not influence the formation of the complex 99mTc-HYNIC-Octreotate, as evidenced in HPLC and in the scintigraphic studies of the complex biodistribution in rabbits. Invasive biodistribution studies using xenographed Nude mice (pancreatic tumor cells AR42J) and healthy Swiss mice, and scintigraphic studies in rabbits showed the fast kinetic distribution, renal uptake and significative tumoral uptake of the labeled peptide. The results of labeling studies with 99mTc, the production of the lyophilized kit and the biodistribution studies suggest that the 99mTc-HYNIC-Octreotate is a potential radiopharmaceutical to be applied in the diagnostic of neuroendocrine tumors in nuclear medicine.

O desenvolvimento de moléculas radiomarcadas com alta especificidade para um órgão ou tumor tem contribuído para a obtenção de um diagnóstico de precisão em medicina nuclear.Um caso particular são os peptídeos radiomarcados para a localização de tumores neuroendócrinos como os derivados sintéticos da somatostatina.Atualmente, o DTPA-octreotideo-111In é o radiofármaco mais utilizado com o propósito de visualizar tumores que expressem receptores para somatostatina. Contudo, o uso do indio-111 como radionuclídeo oferece limitações em relação a sua disponibilidade (produto de ciclotron), suas características físicas como meia-vida (67 horas) e emissor de fótons de média energia (171 keV e 245 keV) que não favorecem a obtenção de imagens tipo SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography). As propriedades físicas favoráveis do tecnécio-99m (99mTc) fazem dele o radioisótopo mais adequado para substituir o indio-111 (111In) na marcação desses peptídeos. Este trabalho avaliou a preparação e marcação do reagente liofilizado HYNIC-Tyr3-octreotato (HYNIC-octreotato) com 99mTc, baseado em metodologia descrita na literatura, utilizando tricina e EDDA (ácido etilenodiaminadiacetico) como coligantes. Foram estudados os parâmetros de marcação (tempo de incubação, temperatura, volume e atividade do pertecnetato de sódio) e estabilidade do liofilizado. Adicionalmente, estudou-se a influência de pré-congelamento com nitrogênio (N2) líquido na estabilidade do liofilizado, bem como a influência de manitol na pureza radioquímica e biodistribuição do complexo. Os estudos de estabilidade revelaram que o método de liofilização utilizado, empregando o pré-congelamento com nitrogênio líquido possibilitou a obtenção de um reagente liofilizado com estabilidade de 4 meses quando armazenado sob refrigeração. A estabilidade do reagente liofilizado obtido sem pré-congelamento com nitrogênio líquido foi semelhante à obtida com o pré-congelamento.Os estudos de marcações determinaram as melhores condições de marcação, para as quais se obteve pureza radioquímica maior que 90%.A presença de manitol na formulação não influenciou na formação do complexo HYNIC-Octreotato-99mTc, conforme avaliação realizada por CLAE e estudos cintilográficos de distribuição do composto em coelhos.Estudos de biodistribuição invasivos realizados em camundongos Nude com tumor (células AR42J de tumor pancreático) e camundongos Swiss normais, bem como estudos cintilográficos realizados em coelhos e camundongos Nude revelaram cinética de distribuição rápida, acúmulo renal e captação tumoral significativa do peptídeo radiomarcado. Os resultados dos estudos de marcação com 99mTc, produção de reagente liofilizado e biodistribuição sugerem que o radiofármaco HYNIC-octreotato-99mTc apresenta potencial para aplicação em diagnóstico de tumores neuroendócrinos em medicina nuclear. / The development of radiolabeled molecules with high specificity for an organ or tumor has been contributed to the precise diagnostic in nuclear medicine. Somatostatin labeled derivatives constitutes a particular example of labeled peptide applied in the localization of neuroendocrine tumors. Nowadays, the 111In-DTPA-octreotideo is the radiopharmaceutical applied in diagnostic procedures for the visualization of tumors with high expression of somatostatin receptors. However, the 111-indium is a radionuclide that presents some limitations related to availability (cyclotron production), half-life (67 hours) and the emission of medium energy photons (171 keV e 245 keV), not favorable to the acquisition of images in SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography). The favorable physical properties of the 99m-technetium (99mTc) make this radionuclide the more favorable to substitute the 111-indium on peptide labeling procedures. This work studied the preparation and labeling of a lyophilized kit of HYNIC-Tyr3-octreotate (HYNIC-octreotate) with 99mTc, base on previously described procedures and using tricine and EDDA (ethylendiaminediacetic acid) as coligands. It was studied the labeling parameters (incubation time, temperature, volume and perthecnetate activity) and the stability of the lyophilized preparation. Additionally, it was studied the influence of the pre-freezing using liquid nitrogen in the stability of the lyophilized preparation, as well as the influence of manitol in the labeling yield and biological distribution of the complex. The stability studies showed that the lyophilization using liquid nitrogen pre-freezing resulted in a lyophilized preparation with stability over 4 month when stored under refrigeration. The stability of the lyophilized preparation obtained without liquid nitrogen pre-freezing was similar.The labeling studies determined the best labeling conditions, resulting in a radiochemical yield superior than 90%. The use of manitol in the formulation did not influence the formation of the complex 99mTc-HYNIC-Octreotate, as evidenced in HPLC and in the scintigraphic studies of the complex biodistribution in rabbits. Invasive biodistribution studies using xenographed Nude mice (pancreatic tumor cells AR42J) and healthy Swiss mice, and scintigraphic studies in rabbits showed the fast kinetic distribution, renal uptake and significative tumoral uptake of the labeled peptide. The results of labeling studies with 99mTc, the production of the lyophilized kit and the biodistribution studies suggest that the 99mTc-HYNIC-Octreotate is a potential radiopharmaceutical to be applied in the diagnostic of neuroendocrine tumors in nuclear medicine.

Made available in DSpace on 2016-08-19T18:16:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Bruno.pdf: 2654529 bytes, checksum: 8a96ae87802691862664f63085d257f5 (MD5) Previous issue date: 2012-03-12 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / Pituitary tumors represent 15% of intracranial neoplasms and are usually benign. The treatment primary is surgical resection with exception for prolactinomas because dopamine agonists are very effective in the treatment these tumors. If surgery does not lead to healing, it is necessary other therapeutic strategy in a attempt to control hormone levels and tumor size reduction. The radiotherapy and medical treatment with somatostatin analogs and agonist dopamine are often used. The study aimed to analyze the presence, distribution and frequency of somatostatin receptor and dopamine receptor (DR2) in pituitary adenomas, and compared their mRNA expression and protein expression. We studied 38 patients with pituitary adenomas. The GH-secreting adenomas showed immunoreactivity more frequent SST2 and SST3 present in 100% of the tumors followed SST5, SST4 and SST1 respectively. Clinically nonfunctioning adenomas SST3 receptor was most widely distributed, present in 13 of 14 tumors followed SST2, SST4, SST1 and SST5 respectively. The mRNA expression of SST2 and SST5 receptor was present in all pituitary adenomas with higher expression of SST2. The DR2 receptor was present and 85% of samples analyzed. In conclusion, the high expression of SST2 in somatotropinomas support the possibility of the use of octreotide as an adjunct therapy in the treatment of acromegalic patients. Patients with clinically nonfunctioning adenomas showed expression of somatostatin receptor and dopamine which indicates the possibility of treating these patients with the somatostatin analogues and / or dopamine agonists. / Os tumores hipofisários correspondem por cerca de 15% das neoplasias intracranianas e são geralmente benignos. O tratamento primário mais comumente utilizado é a cirurgia com exceção para os prolactinomas, devido a eficácia do tratamento com a utilização de agonistas dopaminérgicos. Caso o resultado cirúrgico não leve a ressecção da doença, faz-se necessário o uso de outras modalidades terapêuticas, na tentativa de controlar os níveis hormonais e crescimento tumoral. A radioterapia e o tratamento medicamentoso com os análogos da somatostatina e/ou os agonistas dopaminérgicos são frequentemente utilizados como tratamento adjuvante. O presente estudo teve por objetivo analisar a presença, distribuição e frequência dos receptores da somatostatina e da dopamina (DR2) em adenomas hipofisários e comparar as suas expressões do mRNA e proteicas, através de testes por qPCR em tempo real e por imunohistoquímicos. Foram analisados 38 pacientes diagnosticados com adenomas hipofisários. Os adenomas secretores de GH apresentaram imunoreatividade mais frequente dos receptores SST2 e SST3, presentes em 100% dos tumores, seguidos pelos receptores SST5, SST4 e SST1, respectivamente. Nos adenomas clinicamente não funcionantes o receptor mais amplamente distribuído foi o SST3, presente em 13 dos 14 tumores seguidos pelo SST2, SST4, SST1 e SST5 respectivamente. A expressão do mRNA dos receptores SST2 e SST5 estava presente em todos os adenomas hipofisários estudados, com maior expressão do subtipo SST2. A expressão do mRNA do receptor DR2 foi encontrada em aproximadamente 85% das amostras analisadas. Em conclusão, a elevada expressão do SST2 nos somatotropinomas reforça a possibilidade do uso do octreotide como terapia complementar no tratamento dos pacientes acromegálicos. Os pacientes com adenomas clinicamente não funcionantes apresentaram expressão dos receptores da somatostatina e da dopamina o que indica a possibilidade de tratamento destes pacientes com os análogos da somatostatina e/ou agonistas dopaminérgicos.

Introdução: A acromegalia é uma doença rara, caracterizada pela produção aumentada de hormônio do crescimento, causada geralmente por um adenoma hipofisário, ocasionando uma série de comorbidades como apneia do sono e resistência insulínica que acarretam um aumento na mortalidade e redução da expectativa de vida. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto da terapêutica da apneia do sono com um dispositivo de pressão positiva contínuas nas vias aéreas (CPAP) e avaliar o impacto desta terapêutica na resistência insulínica pela realização do clamp euglicêmico hiperinsulinêmico (CEH). Pacientes: De 156 acromegálicos regularmente atendidos na unidade de Neuroendocrinologia do HC-FMUSP, foram selecionados 12 indivíduos com apneia do sono de moderada a grave em uso de análogos da somatostatina (AS). Método: Os pacientes foram randomizados em dois grupos com seis integrantes. O grupo A iniciou o tratamento com CPAP, e o grupo B, um adesivo dilatador nasal com efeito de placebo. A avaliação basal incluiu a polissonografia, determinação do GH, IGF-1, HbA1c, ácidos graxos livres, lípides, CEH, bem como os índices de resistência periférica à insulina (HOMA, HOMA2 e QUICKI). Após 3 meses de tratamento, os pacientes foram reavaliados pelos mesmos exames, sendo trocado o tratamento entre os grupos e feita nova avaliação, após mais 90 dias. Resultados: Analisando os resultados finais de todos os pacientes que fizeram uso do CPAP, foi observada uma redução significante na resistência periférica à insulina, verificada pelo índice de sensibilidade derivado do clamp (ISCLAMP, pré e pós- CPAP, 3,83 versus 6,11, p=0,032). Esta redução não foi observada no grupo que fez uso do adesivo nasal (ISCLAMP, pré e pós-adesivo, 5,53 versus 5,19, p=0,455). Não houve diferença significante nos níveis de lípides, HbA1c nem nos índices de resistência periférica à insulina. Conclusão: O tratamento da apneia do sono moderada a grave com CPAP, em pacientes acromegálicos em uso de AS, levou a uma redução da resistência periférica à insulina aferida pelo CEH, dado não observado por meio dos índices HOMA, HOMA2 e QUICKI / Introduction. Acromegaly is a rare disease, characterized by the production of high GH levels usually by pituitary adenoma leading to comorbidities as sleep apnea and insulin resistance, bringing increase of mortality and life span reduction. Objective: This study aims to assess the impact of treatment of sleep apnea with a continuous positive air pressure device (CPAP) on the insulin resistance by performing the hyperinsulinemic euglycemic clamp (HEC). Patients: From 156 acromegalic patients regularly attended on Neuroendocrine Unit of the Hospital das Clínicas, University of São Paulo Medical School, 12 subjects on somatostatin analogs (SA) harboring moderate to severe sleep apnea were selected. Methods: Patients were randomized in two groups of six subjects. Group A started treatment with CPAP while group B started treatment using a nasal dilator adhesive with placebo effect. Basal assessment included polysomnography, determination of GH, IGF-1, HbA1c, free fat acids, lipids assays, HEC as well as insulin resistance indexes (HOMA, HOMA2 and QUICKI). Patients were reevaluated after three months of treatment by the same tests and then the treatment was switched between groups with new assessment 90 days later. Results: A significant reduction on insulin resistance determined by the clamp derived sensibility index was observed after assessing the final data of all patients on CPAP (SICLAMP, pre and post CPAP, 3,83 versus 6,11, p=0,032). This reduction was not seen in the nasal dilator adhesive group (SICLAMP, pre and post adhesive, 5,53 versus 5,19, p=0,455). There was no significant difference on lipids, HbA1c or on peripheral insulin resistance indexes. Conclusion: CPAP treatment of acromegalic patients on AS with moderate to severe sleep apnea leaded to significant reduction on peripheral insulin resistance assessed by the HEC. HOMA, HOMA2 and QUICK did not detect this data

Introdução: A doença de Cushing apresenta elevada morbimortalidade. Seu tratamento de escolha é a cirurgia transesfenoidal que possui resultados satisfatórios em cerca de 70% dos casos. Na doença persistente ou recorrente, reabordagem cirúrgica, radioterapia e adrenalectomia bilateral podem ser realizadas, porém, essas opções apresentam como desvantagens o desenvolvimento de hipopituitarismo e a dependência de terapia de reposição. Até o momento, nenhuma droga tem se mostrado eficaz no tratamento do corticotrofinoma. Os esquemas terapêuticos mais eficazes são os inibidores da esteroidogênese que não atuam no tumor hipofisário. Objetivos: avaliar o efeito do octreotide e da cabergolina administrados isoladamente e em associação nas concentrações urinárias de cortisol e plasmáticas de ACTH em pacientes com corticotrofinomas; correlacionar esse efeito com a expressão tumoral dos receptores SSTR2, SSTR5 e DRD2; correlacionar a expressão tumoral desses receptores através de RT-PCR quantitativa e imunohistoquímica; avaliar se o uso prévio dessas drogas altera a expressão desses receptores. Casuística e Métodos: grupo controle composto por 11 pacientes (10 mulheres e 1 homem) entre 21 e 43 anos sem tratamento prévio à neurocirurgia e um grupo tratado formado por 11 pacientes (2 homens e 9 mulheres) entre 22 e 53 anos que receberam o seguinte tratamento antes da cirurgia: coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático, seguida da introdução de octreotide 100 g, subcutâneo, 8/8h durante 30 dias e nova coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático. Em seguida, iniciou-se a cabergolina 0,5 mg via oral 3 vezes na semana durante 30 dias com nova coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático. A seguir, o octreotide era associado por mais 30 dias com nova coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático. Resultados: Os valores de cortisol urinário apresentaram queda significante após o uso de cabergolina isolada (P = 0,016) e em associação ao octreotide (P = 0,012). A eficácia do tratamento combinado não foi maior que a da cabergolina isolada. Os valores de ACTH plasmático não revelaram diferença significante durante o tratamento e não se correlacionaram com os valores de cortisol. A média de expressão do mRNA do gene DRD2 foi maior no grupo tratado (1,170 ± 0,417) quando comparada ao grupo controle (0,776 ± 0,252) (P = 0,036). Houve dissociação entre os conteúdos de mRNA e da proteína desse receptor. Não foi possível analisar a expressão do mRNA do gene SSTR5, pois o tratamento das amostras com DNAse causou degradação do RNA. A imunorreatividade para SSTR5 esteve presente em todos os pacientes e não foi alterada pelo tratamento prévio. Não houve diferença estatística na expressão do gene SSTR2 entre os grupos controle (1,253 ± 0,511) e tratado (1,267 ± 0,386) bem como diferença significante da imunoexpressão do SSTR2 entre os grupos. Houve correlação entre os conteúdos de mRNA e da proteína desse receptor (P = 0,021). Não houve correlação entre a expressão dos receptores analisados e a resposta ao octreotide e à cabergolina isoladamente ou em associação. Conclusões: a cabergolina isolada representa opção terapêutica na doença de Cushing persistente ou recorrente. A associação de octreotide na dose estudada por 30 dias não foi mais eficiente em reduzir o cortisol urinário. A resposta a essas drogas não está relacionada à expressão dos receptores SSTR2, SSTR5 e DRD2 / Introduction: The Cushings disease presents high morbimortality. Its treatment of choice is transsphenoidal surgery which has satisfactory results in about 70% of cases. In persistent or recurrent disease, a second transsphenoidal surgery, radiotherapy and bilateral adrenalectomy can be carried through, however, these options present disadvantages as development of hypopituitarism and lifelong dependence on hormone replacement therapy. Presently, no drug has shown efficacy in corticotrophinomas treatment. The most efficient agents are the inhibitors of steroidogenesis which have no effect at pituitary tumor. Objectives: To evaluate isolated octreotide and cabergoline effects and their association on plasma ACTH and urinary cortisol in Cushings disease patients, to correlate this effect with tumoral expression of SSTR2, SSTR5 and DRD2 receptors; to correlate tumoral expression of these receptors by quantitative RT-PCR and immunohistochemistry; to evaluate whether these drugs modifies these receptors expression. Patients and methods: control group with 11 patients (10 women and 1 man) between 21 and 43 years who underwent pituitary surgery with no prior treatment and a treated group with 11 patients (2 men and 9 women) between 22 and 53 years that received the following treatment before surgery: : after three baseline urinary cortisol samples and one plasma ACTH sample, patients received octreotide 100 g, subcutaneous 8/8h for 30 days collecting three urinary cortisol samples and one plasma ACTH. After that, cabergoline was introduced 0,5 mg 3x/week for 30 days collecting three urinary cortisol samples and one plasma ACTH sample. Then, octreotide was associated to cabergoline for another 30 days followed by three urinary cortisol and one plasma ACTH sample. Results: Urinary cortisol concentrations significantly decreased after isolated and combined cabergoline use (P = 0,016 and P = 0,012, respectively). Combined treatment efficacy was not greater than isolated cabergoline administration. Plasma ACTH did not change statistically during treatment and did not correlate with urinary cortisol. The average of DRD2 gene expression was higher in control group (0,776 ± 0,252) in relation to treated group (1,170 ± 0,417) (P = 0,036). It had dissociation between mRNA and protein contents of this receptor. SSTR5 gene mRNA expression was not analyzed due to RNA degradation after DNAse tissue treatment. SSTR5 immunoreactivity was present in all patients and it was not modified by previous treatment. No statistic difference was observed between SSTR2 gene expression in control group (1,253 ± 0.511) and in treated group (1,267 ± 0,386). There was no significant difference in SSTR2 immunoexpression between groups. It had correlation between the mRNA and protein contents of this receptor (P = 0.021). No significant relationship was found between hormonal response to isolated and combined therapy and receptors mRNA expression levels. Conclusions: cabergoline represents therapeutical option in persistent or recurrent Cushings disease. Octreotide-cabergoline association in the studied dosage and for the period of 30 days was not more efficient in eliciting urinary cortisol reduction. The responsiveness to these drugs did not correlate to SSTR2 and DRD2 mRNA expression

Introdução: A doença de Cushing apresenta elevada morbimortalidade. Seu tratamento de escolha é a cirurgia transesfenoidal que possui resultados satisfatórios em cerca de 70% dos casos. Na doença persistente ou recorrente, reabordagem cirúrgica, radioterapia e adrenalectomia bilateral podem ser realizadas, porém, essas opções apresentam como desvantagens o desenvolvimento de hipopituitarismo e a dependência de terapia de reposição. Até o momento, nenhuma droga tem se mostrado eficaz no tratamento do corticotrofinoma. Os esquemas terapêuticos mais eficazes são os inibidores da esteroidogênese que não atuam no tumor hipofisário. Objetivos: avaliar o efeito do octreotide e da cabergolina administrados isoladamente e em associação nas concentrações urinárias de cortisol e plasmáticas de ACTH em pacientes com corticotrofinomas; correlacionar esse efeito com a expressão tumoral dos receptores SSTR2, SSTR5 e DRD2; correlacionar a expressão tumoral desses receptores através de RT-PCR quantitativa e imunohistoquímica; avaliar se o uso prévio dessas drogas altera a expressão desses receptores. Casuística e Métodos: grupo controle composto por 11 pacientes (10 mulheres e 1 homem) entre 21 e 43 anos sem tratamento prévio à neurocirurgia e um grupo tratado formado por 11 pacientes (2 homens e 9 mulheres) entre 22 e 53 anos que receberam o seguinte tratamento antes da cirurgia: coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático, seguida da introdução de octreotide 100 g, subcutâneo, 8/8h durante 30 dias e nova coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático. Em seguida, iniciou-se a cabergolina 0,5 mg via oral 3 vezes na semana durante 30 dias com nova coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático. A seguir, o octreotide era associado por mais 30 dias com nova coleta de três amostras de cortisol urinário e ACTH plasmático. Resultados: Os valores de cortisol urinário apresentaram queda significante após o uso de cabergolina isolada (P = 0,016) e em associação ao octreotide (P = 0,012). A eficácia do tratamento combinado não foi maior que a da cabergolina isolada. Os valores de ACTH plasmático não revelaram diferença significante durante o tratamento e não se correlacionaram com os valores de cortisol. A média de expressão do mRNA do gene DRD2 foi maior no grupo tratado (1,170 ± 0,417) quando comparada ao grupo controle (0,776 ± 0,252) (P = 0,036). Houve dissociação entre os conteúdos de mRNA e da proteína desse receptor. Não foi possível analisar a expressão do mRNA do gene SSTR5, pois o tratamento das amostras com DNAse causou degradação do RNA. A imunorreatividade para SSTR5 esteve presente em todos os pacientes e não foi alterada pelo tratamento prévio. Não houve diferença estatística na expressão do gene SSTR2 entre os grupos controle (1,253 ± 0,511) e tratado (1,267 ± 0,386) bem como diferença significante da imunoexpressão do SSTR2 entre os grupos. Houve correlação entre os conteúdos de mRNA e da proteína desse receptor (P = 0,021). Não houve correlação entre a expressão dos receptores analisados e a resposta ao octreotide e à cabergolina isoladamente ou em associação. Conclusões: a cabergolina isolada representa opção terapêutica na doença de Cushing persistente ou recorrente. A associação de octreotide na dose estudada por 30 dias não foi mais eficiente em reduzir o cortisol urinário. A resposta a essas drogas não está relacionada à expressão dos receptores SSTR2, SSTR5 e DRD2 / Introduction: The Cushings disease presents high morbimortality. Its treatment of choice is transsphenoidal surgery which has satisfactory results in about 70% of cases. In persistent or recurrent disease, a second transsphenoidal surgery, radiotherapy and bilateral adrenalectomy can be carried through, however, these options present disadvantages as development of hypopituitarism and lifelong dependence on hormone replacement therapy. Presently, no drug has shown efficacy in corticotrophinomas treatment. The most efficient agents are the inhibitors of steroidogenesis which have no effect at pituitary tumor. Objectives: To evaluate isolated octreotide and cabergoline effects and their association on plasma ACTH and urinary cortisol in Cushings disease patients, to correlate this effect with tumoral expression of SSTR2, SSTR5 and DRD2 receptors; to correlate tumoral expression of these receptors by quantitative RT-PCR and immunohistochemistry; to evaluate whether these drugs modifies these receptors expression. Patients and methods: control group with 11 patients (10 women and 1 man) between 21 and 43 years who underwent pituitary surgery with no prior treatment and a treated group with 11 patients (2 men and 9 women) between 22 and 53 years that received the following treatment before surgery: : after three baseline urinary cortisol samples and one plasma ACTH sample, patients received octreotide 100 g, subcutaneous 8/8h for 30 days collecting three urinary cortisol samples and one plasma ACTH. After that, cabergoline was introduced 0,5 mg 3x/week for 30 days collecting three urinary cortisol samples and one plasma ACTH sample. Then, octreotide was associated to cabergoline for another 30 days followed by three urinary cortisol and one plasma ACTH sample. Results: Urinary cortisol concentrations significantly decreased after isolated and combined cabergoline use (P = 0,016 and P = 0,012, respectively). Combined treatment efficacy was not greater than isolated cabergoline administration. Plasma ACTH did not change statistically during treatment and did not correlate with urinary cortisol. The average of DRD2 gene expression was higher in control group (0,776 ± 0,252) in relation to treated group (1,170 ± 0,417) (P = 0,036). It had dissociation between mRNA and protein contents of this receptor. SSTR5 gene mRNA expression was not analyzed due to RNA degradation after DNAse tissue treatment. SSTR5 immunoreactivity was present in all patients and it was not modified by previous treatment. No statistic difference was observed between SSTR2 gene expression in control group (1,253 ± 0.511) and in treated group (1,267 ± 0,386). There was no significant difference in SSTR2 immunoexpression between groups. It had correlation between the mRNA and protein contents of this receptor (P = 0.021). No significant relationship was found between hormonal response to isolated and combined therapy and receptors mRNA expression levels. Conclusions: cabergoline represents therapeutical option in persistent or recurrent Cushings disease. Octreotide-cabergoline association in the studied dosage and for the period of 30 days was not more efficient in eliciting urinary cortisol reduction. The responsiveness to these drugs did not correlate to SSTR2 and DRD2 mRNA expression

Introdução: A acromegalia é uma doença rara, caracterizada pela produção aumentada de hormônio do crescimento, causada geralmente por um adenoma hipofisário, ocasionando uma série de comorbidades como apneia do sono e resistência insulínica que acarretam um aumento na mortalidade e redução da expectativa de vida. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto da terapêutica da apneia do sono com um dispositivo de pressão positiva contínuas nas vias aéreas (CPAP) e avaliar o impacto desta terapêutica na resistência insulínica pela realização do clamp euglicêmico hiperinsulinêmico (CEH). Pacientes: De 156 acromegálicos regularmente atendidos na unidade de Neuroendocrinologia do HC-FMUSP, foram selecionados 12 indivíduos com apneia do sono de moderada a grave em uso de análogos da somatostatina (AS). Método: Os pacientes foram randomizados em dois grupos com seis integrantes. O grupo A iniciou o tratamento com CPAP, e o grupo B, um adesivo dilatador nasal com efeito de placebo. A avaliação basal incluiu a polissonografia, determinação do GH, IGF-1, HbA1c, ácidos graxos livres, lípides, CEH, bem como os índices de resistência periférica à insulina (HOMA, HOMA2 e QUICKI). Após 3 meses de tratamento, os pacientes foram reavaliados pelos mesmos exames, sendo trocado o tratamento entre os grupos e feita nova avaliação, após mais 90 dias. Resultados: Analisando os resultados finais de todos os pacientes que fizeram uso do CPAP, foi observada uma redução significante na resistência periférica à insulina, verificada pelo índice de sensibilidade derivado do clamp (ISCLAMP, pré e pós- CPAP, 3,83 versus 6,11, p=0,032). Esta redução não foi observada no grupo que fez uso do adesivo nasal (ISCLAMP, pré e pós-adesivo, 5,53 versus 5,19, p=0,455). Não houve diferença significante nos níveis de lípides, HbA1c nem nos índices de resistência periférica à insulina. Conclusão: O tratamento da apneia do sono moderada a grave com CPAP, em pacientes acromegálicos em uso de AS, levou a uma redução da resistência periférica à insulina aferida pelo CEH, dado não observado por meio dos índices HOMA, HOMA2 e QUICKI / Introduction. Acromegaly is a rare disease, characterized by the production of high GH levels usually by pituitary adenoma leading to comorbidities as sleep apnea and insulin resistance, bringing increase of mortality and life span reduction. Objective: This study aims to assess the impact of treatment of sleep apnea with a continuous positive air pressure device (CPAP) on the insulin resistance by performing the hyperinsulinemic euglycemic clamp (HEC). Patients: From 156 acromegalic patients regularly attended on Neuroendocrine Unit of the Hospital das Clínicas, University of São Paulo Medical School, 12 subjects on somatostatin analogs (SA) harboring moderate to severe sleep apnea were selected. Methods: Patients were randomized in two groups of six subjects. Group A started treatment with CPAP while group B started treatment using a nasal dilator adhesive with placebo effect. Basal assessment included polysomnography, determination of GH, IGF-1, HbA1c, free fat acids, lipids assays, HEC as well as insulin resistance indexes (HOMA, HOMA2 and QUICKI). Patients were reevaluated after three months of treatment by the same tests and then the treatment was switched between groups with new assessment 90 days later. Results: A significant reduction on insulin resistance determined by the clamp derived sensibility index was observed after assessing the final data of all patients on CPAP (SICLAMP, pre and post CPAP, 3,83 versus 6,11, p=0,032). This reduction was not seen in the nasal dilator adhesive group (SICLAMP, pre and post adhesive, 5,53 versus 5,19, p=0,455). There was no significant difference on lipids, HbA1c or on peripheral insulin resistance indexes. Conclusion: CPAP treatment of acromegalic patients on AS with moderate to severe sleep apnea leaded to significant reduction on peripheral insulin resistance assessed by the HEC. HOMA, HOMA2 and QUICK did not detect this data

A filamina A (FLNA) é uma proteína de citoesqueleto com diversas funções, dentre as quais estão motilidade celular e ancoragem de receptores de membrana. A alteração de sua expressão foi anteriormente descrita em diversos tipos de neoplasia. Em tumores hipofisários, demonstrou-se que sua expressão se correlacionou à expressão de receptores de dopamina tipo 2 (DRD2) em prolactinomas, e com a sinalização intracelular do receptor de somatostatina tipo 2 (SSTR2) após ativação por agonista, em somatotropinomas. Neste estudo, avalariam-se a expressão da FLNA, DRD2, SSTR2 e SSTR5 em diversos tumores hipofisários: prolactinomas, somatotropinomas, corticotropinomas e adenomas clinicamente não funcionantes (ACNF). Avaliou-se também a correlação entre a expressão da FLNA e resposta aos tratamentos medicamentosos, com agonista dopaminérgico (AD) ou com ligantes do receptor de somatostatina (LRS), e entre FLNA e as características de invasividade e/ou agressividade tumorais. Houve correlação entre a expressão de FLNA e a expressão de DRD2 e, entre FLNA e a resposta ao AD, nos ACNFs. Nos corticotropinomas, houve correlação entre a expressão da FLNA e critérios de invasividade tumoral. Portanto, o papel da FLNA nos tumores hipofisários pode depender do tipo celular implicado. Além disso, o envolvimento da FLNA nos mecanismos de resistência aos medicamentos utilizados nos tumores hipofisários, AD ou LRS, não deve estar relacionado apenas à sua ação na ancoragem e reciclagem dos receptores DRD2 e SSTRs, mas também à sua ação na motilidade celular, propiciando caratecterísticas de invasividade / Filamin A (FLNA) is a cytoskeletal protein with a variety of functions, including cell motility and membrane receptor anchorage. Changes in FLNA expression has already been described in several types of neoplasia. In pituitary tumors, its expression has been shown to correlate with the expression of dopamine type 2 receptors (DRD2) in prolactinomas and with intracellular somatostatin type 2 receptor (SSTR2) signaling after agonist activation in somatotropinomas. The expression of FLNA, DRD2, SSTR2 and SSTR5 in different pituitary tumors: prolactinomas, somatotrophinomas, corticotrophinomas and clinically nonfunctioning adenomas (CNFA) were evaluated. We also correlate FLNA expression to sensibility to drug treatments with dopamin agonists (DA) or somatostatin receptor ligands (SRL), and to tumor invasiveness and/or aggressiveness. Positive correlation between FLNA expression and DRD2 expression and between FLNA and DA response were found in CNFA. In corticotrophinomas, there was correlation between FLNA expression and tumor invasiveness. Therefore, the role of FLNA in pituitary tumors seems to depend on the cell type involved. Additionally, FLNA involvement in the mechanisms of drug (DA or SRL) resistance in pituitary tumors could not be related only to its action in the anchoring and recycling of DRD2 and SSTR receptors, but also to its action on cellular motility and invasiveness

A filamina A (FLNA) é uma proteína de citoesqueleto com diversas funções, dentre as quais estão motilidade celular e ancoragem de receptores de membrana. A alteração de sua expressão foi anteriormente descrita em diversos tipos de neoplasia. Em tumores hipofisários, demonstrou-se que sua expressão se correlacionou à expressão de receptores de dopamina tipo 2 (DRD2) em prolactinomas, e com a sinalização intracelular do receptor de somatostatina tipo 2 (SSTR2) após ativação por agonista, em somatotropinomas. Neste estudo, avalariam-se a expressão da FLNA, DRD2, SSTR2 e SSTR5 em diversos tumores hipofisários: prolactinomas, somatotropinomas, corticotropinomas e adenomas clinicamente não funcionantes (ACNF). Avaliou-se também a correlação entre a expressão da FLNA e resposta aos tratamentos medicamentosos, com agonista dopaminérgico (AD) ou com ligantes do receptor de somatostatina (LRS), e entre FLNA e as características de invasividade e/ou agressividade tumorais. Houve correlação entre a expressão de FLNA e a expressão de DRD2 e, entre FLNA e a resposta ao AD, nos ACNFs. Nos corticotropinomas, houve correlação entre a expressão da FLNA e critérios de invasividade tumoral. Portanto, o papel da FLNA nos tumores hipofisários pode depender do tipo celular implicado. Além disso, o envolvimento da FLNA nos mecanismos de resistência aos medicamentos utilizados nos tumores hipofisários, AD ou LRS, não deve estar relacionado apenas à sua ação na ancoragem e reciclagem dos receptores DRD2 e SSTRs, mas também à sua ação na motilidade celular, propiciando caratecterísticas de invasividade / Filamin A (FLNA) is a cytoskeletal protein with a variety of functions, including cell motility and membrane receptor anchorage. Changes in FLNA expression has already been described in several types of neoplasia. In pituitary tumors, its expression has been shown to correlate with the expression of dopamine type 2 receptors (DRD2) in prolactinomas and with intracellular somatostatin type 2 receptor (SSTR2) signaling after agonist activation in somatotropinomas. The expression of FLNA, DRD2, SSTR2 and SSTR5 in different pituitary tumors: prolactinomas, somatotrophinomas, corticotrophinomas and clinically nonfunctioning adenomas (CNFA) were evaluated. We also correlate FLNA expression to sensibility to drug treatments with dopamin agonists (DA) or somatostatin receptor ligands (SRL), and to tumor invasiveness and/or aggressiveness. Positive correlation between FLNA expression and DRD2 expression and between FLNA and DA response were found in CNFA. In corticotrophinomas, there was correlation between FLNA expression and tumor invasiveness. Therefore, the role of FLNA in pituitary tumors seems to depend on the cell type involved. Additionally, FLNA involvement in the mechanisms of drug (DA or SRL) resistance in pituitary tumors could not be related only to its action in the anchoring and recycling of DRD2 and SSTR receptors, but also to its action on cellular motility and invasiveness