Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 256877 bytes, checksum: d548a53fcd07f9ed376af138ca9245bb (MD5) Previous issue date: 2007-07-31 / The crab-eating fox (Cerdocyon thous), known as graxaim, lobinho, etc. belongs to the order Carnivora and family Canidae, being found at the most part of Brazil. This animal does not figure in the list of IBAMA s (Brazilian Institute of Environment and Renewable Natural Resources, 2007) threatened animals of extinguishing and even relatively abundant, little is known about its social, morphological and physiological biology, in special those related with the basic fundamentals of its reproductive physiology. The study of basic aspects of reproduction, in special the spermatogenic process, is relevant to provide informations for the development of technologies in attended reproduction. The quantitative analysis of spermatogenesis can be used to establish kinetic patterns of division and renewal of spermatogonias. It allows estimate the efficiency of the spermatogenic process, the quantification of germ cells population and its relationship with the Sertoli cells population, in some stages of the spermatogenic process development. The present work defines some testicular volumetric parameters and correlates the morphometry of testis and seminiferous tubule data with corporal weight. It also characterizes and classifies the intertubular space of crab-eating fox. In this way, it had been used six adults crab-eating fox, from the Wild Animals Selection Center (CETAS-UFV). To collect samples was chosen the testis biopsy, which is an appropriate methodology for sample collection for the study of the physiologic and reproductive pathologies in domestic and wild animals, as it provides sufficient material for histological analysis, not presenting any alteration in long term spermatogenic process. In this work, the average body weight of the crab-eating fox was 6.53 kg, of which 0.068% are allocated in testicular mass and 0.042% specifically in seminiferous tubules, which represented 87.5% of testicular parenchyma. The testicular albuginea represented 12.5% of testicular mass. The average diameter of seminiferous tubules was 236 μm, the average epithelium thickness was 629 μm, with 18 meters of seminiferous tubule per gram of testis. In relation to the testicular parenchyma, 3.88% is occupied by Leydig cells, 7.95% by conjunctive tissue, 0.12% by lymphatic vessels and 0.72% by blood vessels. The average volume of Leydig cell was 1149 μm3 and the average nuclear diameter was 8.01 μm. In crab-eating fox the Leydig cells are on average 0.0022% of body weight and its average number per gram of testis (31 million) is within the expected for mammalians, between 20 and 40 million. / O cachorro-do-mato (Cerdocyon thous), conhecido como graxaim, raposacaranguejeira, lobinho, lobete e graxaim-do-mato, pertence à ordem Carnivora e família Canidae, sendo encontrado na maior parte do território brasileiro. Este animal não figura na lista de animais ameaçados de extinção do IBAMA (Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis, 2007) e embora relativamente abundante, pouco é conhecido sobre sua biologia social e morfofisiológica, em especial quanto aos fundamentos básicos da sua fisiologia reprodutiva. O estudo de aspectos básicos da reprodução, em especial o processo espermatogênico, torna-se relevante para fornecer informações para o desenvolvimento de tecnologias de reprodução assistida. A análise quantitativa da espermatogênese pode ser utilizada no estabelecimento de padrões cinéticos, como a divisão e renovação de espermatogônias. Permite ainda estimar o coeficiente de eficiência do processo espermatogênico e quantificar a população das células germinativas e suas relações com a população das células de Sertoli em várias etapas do desenvolvimento ao longo do processo espermatogênico. O presente trabalho se propôs a definir alguns parâmetros volumétricos testiculares e correlacionar os dados de morfometria testicular e do túbulo seminífero à massa corporal, além de caracterizar e classificar o espaço intertubular do cachorro-domato. Foram utilizados seis cachorros-do-mato adultos, provenientes do Centro de Triagem de Animais Silvestres CETAS-UFV. Para a coleta das amostras foi realizada a biópsia testicular, que é uma metodologia eletiva para a coleta de material para o estudo da fisiologia e patologias reprodutivas em animais domésticos e selvagens, uma vez que fornece material suficiente para análise histológica, não apresentando quaisquer alterações sobre o processo espermatogênico em longo prazo. No presente trabalho, o peso corporal médio dos cachorros-do-mato foi de 6,53 Kg, dos quais cerca de 0,068% estão alocados em massa testicular e 0,042% especificamente em túbulos seminíferos, que representaram cerca de 87,5% do parênquima testicular .A albugínea testicular representou cerca de 12,5% da massa testicular. O diâmetro médio dos túbulos seminíferos foi de 236 μm, e a espessura média do epitélio seminífero foi de aproximadamente 62,9 μm, apresentando 18 metros de túbulo seminífero por grama de testículo. Com relação ao parênquima testicular, 3,88% é ocupado por células de Leydig, 7,95% por tecido conjuntivo, 0,12% por vasos linfáticos e 0,72% por vasos sangüíneos. O volume médio da célula de Leydig foi de 1149 μm3 e o seu diâmetro nuclear médio foi de 8,01 μm. Em cachorros-do-mato, as células de Leydig ocupam em média 0,0022% do peso corporal, com o número médio dessas células de 31 milhões por grama de testículo, que está dentro da amplitude descrita para a maioria dos mamíferos, entre 20 e 40 milhões.

Este estudo teve como objetivos caracterizar modificações no tamanho testicular e concentrações sanguíneas de testosterona relacionadas à idade, avaliar a presença de espematozóides epididimários, mensurar o diâmetro dos túbulos seminíferos e determinar o grau de maturação testicular, através da presença das células germinativas mais avançadas no epitélio seminífero de machos Crioulos no período da peri-puberdade. Os animais foram castrados cirurgicamente. Foi avaliada a circunferência torácica para estimativa do peso corporal. Trinta e quatro equinos foram agrupados em quatro categorias. O grupo I (GI) com quatro potros com idade de até 14 meses. O grupo II (GII) composto por sete animais com mais de 14 meses e menos de 17 meses. No terceiro grupo (GIII) foram incluídos 14 animais com mais de 17 meses e menos de 19 meses de idade e o último grupo (GIV) composto por nove equinos com mais de 19 meses e menos de 34 meses de idade. Após a castração os testículos foram pesados e medidos. Um fragmento foi coletado para posterior avaliação histológica e verificação do diâmetro dos túbulos seminíferos, além da presença de células germinativas do epitélio seminífero em diferentes fases de desenvolvimento. Uma amostra de sangue foi coletada para posterior determinação da concentração plasmática de testosterona. O peso médio dos animais no GI aumentou de 232 kg para 321 kg nos garanhões do GIV. Não houve diferença significativa entre medidas dos testículos direito e esquerdo. O peso e volume testicular apresentaram variações mais acentuadas nos animais no GIV e diferiram significativamente em relação aos animais mais jovens. Valores plasmáticos de testosterona não diferiram entre grupos e peso corporal. O diâmetro dos túbulos seminíferos apresentou variação mais marcante nos garanhões do GIV, aumentando de 89,13 μm nos potros do GI para 168,24 μm nos garanhões do GIV. Em média, 17,5% dos túbulos seminíferos não apresentaram células germinativas no GI, decrescendo para 5,4% no GII, 5,2% no GIII e 0,8% no GIV. O número de túbulos contendo espemátides maduras e espermatozóides aumentou conforme o avanço da idade dos animais. As variações mais acentuadas no incremento do volume testicular e aumento do diâmetro dos túbulos seminíferos coincidiram com a uma elevada presença de espermatozoides nos túbulos. Em conclusão, todos os animais com 20 meses de idade ou mais alcançaram a puberdade e os primeiros espermatozóides epididimários foram encontrados em potros com 16 meses. Ao testículo atingir um volume e peso testicular de 16cm3 e 23g, respectivamente, todos os animais apresentaram espermatozoides epididimários. / The objectives of this study were to characterize age-associated changes in testicular size and blood concentrations of testosterone, as well as evaluate the presence of epididymal sperm. The testicular maturity was evaluated by measuring seminiferous tubule diameter and the presence of the most advanced germ cells in the seminiferous epithelium of colts in the peri–puberty period. The animals were surgically castrated and thorax circumference was taken to estimate the body weight. Thirty four male horses were grouped into four categories: Group I (GI) with four foals aged up to 14 months; Group II (GII) with seven animals over 14 months and less than 17 months; The third group (GIII) included 14 animals over 17 months and less than 19 months; Group (GIV) was composed of nine horses over 19 months and under 34 months of age. After castration the testes were weighed and measured. A segment was collected for subsequent histological evaluation, including measurement of the diameter of the seminiferous tubules and the presence of germ cells of the seminiferous epithelium at different stages of development. A blood sample was collected for determination of plasma testosterone. The average body weight of the animals increased significantly from 232 kg in GI to 321 kg for horses in GIV. There was no difference between measures taken on right and left testes. The testicular weight and volume was greater in animals of GIV and differed significantly compared to the younger animals. Plasma levels of testosterone did not differ between age groups. The diameter of the seminiferous tubules increased from 89.13 μm in foals of GI to 168.24 μm in horses of GIV. On average, 17.5% of the seminiferous tubules had no germ cells in animals of GI, decreasing to 5.4% in GII, 5.2% in GIII and 0.8% in GIV. The number of tubules containing mature spermatids and spermatozoa increased with age. Most significant variations in the increase of testicular volume and diameter of seminiferous tubules were associated with a high presence of spermatozoa in the tubules. In conclusion all animals with 20 months of age or more had reached puberty in the present study and the first spermatozoa appeared in 16 month old colts. All animals presented epididymal sperm when testicular volume and weight were over 16cm3 and 23g, respectively.

Este estudo teve como objetivos caracterizar modificações no tamanho testicular e concentrações sanguíneas de testosterona relacionadas à idade, avaliar a presença de espematozóides epididimários, mensurar o diâmetro dos túbulos seminíferos e determinar o grau de maturação testicular, através da presença das células germinativas mais avançadas no epitélio seminífero de machos Crioulos no período da peri-puberdade. Os animais foram castrados cirurgicamente. Foi avaliada a circunferência torácica para estimativa do peso corporal. Trinta e quatro equinos foram agrupados em quatro categorias. O grupo I (GI) com quatro potros com idade de até 14 meses. O grupo II (GII) composto por sete animais com mais de 14 meses e menos de 17 meses. No terceiro grupo (GIII) foram incluídos 14 animais com mais de 17 meses e menos de 19 meses de idade e o último grupo (GIV) composto por nove equinos com mais de 19 meses e menos de 34 meses de idade. Após a castração os testículos foram pesados e medidos. Um fragmento foi coletado para posterior avaliação histológica e verificação do diâmetro dos túbulos seminíferos, além da presença de células germinativas do epitélio seminífero em diferentes fases de desenvolvimento. Uma amostra de sangue foi coletada para posterior determinação da concentração plasmática de testosterona. O peso médio dos animais no GI aumentou de 232 kg para 321 kg nos garanhões do GIV. Não houve diferença significativa entre medidas dos testículos direito e esquerdo. O peso e volume testicular apresentaram variações mais acentuadas nos animais no GIV e diferiram significativamente em relação aos animais mais jovens. Valores plasmáticos de testosterona não diferiram entre grupos e peso corporal. O diâmetro dos túbulos seminíferos apresentou variação mais marcante nos garanhões do GIV, aumentando de 89,13 μm nos potros do GI para 168,24 μm nos garanhões do GIV. Em média, 17,5% dos túbulos seminíferos não apresentaram células germinativas no GI, decrescendo para 5,4% no GII, 5,2% no GIII e 0,8% no GIV. O número de túbulos contendo espemátides maduras e espermatozóides aumentou conforme o avanço da idade dos animais. As variações mais acentuadas no incremento do volume testicular e aumento do diâmetro dos túbulos seminíferos coincidiram com a uma elevada presença de espermatozoides nos túbulos. Em conclusão, todos os animais com 20 meses de idade ou mais alcançaram a puberdade e os primeiros espermatozóides epididimários foram encontrados em potros com 16 meses. Ao testículo atingir um volume e peso testicular de 16cm3 e 23g, respectivamente, todos os animais apresentaram espermatozoides epididimários. / The objectives of this study were to characterize age-associated changes in testicular size and blood concentrations of testosterone, as well as evaluate the presence of epididymal sperm. The testicular maturity was evaluated by measuring seminiferous tubule diameter and the presence of the most advanced germ cells in the seminiferous epithelium of colts in the peri–puberty period. The animals were surgically castrated and thorax circumference was taken to estimate the body weight. Thirty four male horses were grouped into four categories: Group I (GI) with four foals aged up to 14 months; Group II (GII) with seven animals over 14 months and less than 17 months; The third group (GIII) included 14 animals over 17 months and less than 19 months; Group (GIV) was composed of nine horses over 19 months and under 34 months of age. After castration the testes were weighed and measured. A segment was collected for subsequent histological evaluation, including measurement of the diameter of the seminiferous tubules and the presence of germ cells of the seminiferous epithelium at different stages of development. A blood sample was collected for determination of plasma testosterone. The average body weight of the animals increased significantly from 232 kg in GI to 321 kg for horses in GIV. There was no difference between measures taken on right and left testes. The testicular weight and volume was greater in animals of GIV and differed significantly compared to the younger animals. Plasma levels of testosterone did not differ between age groups. The diameter of the seminiferous tubules increased from 89.13 μm in foals of GI to 168.24 μm in horses of GIV. On average, 17.5% of the seminiferous tubules had no germ cells in animals of GI, decreasing to 5.4% in GII, 5.2% in GIII and 0.8% in GIV. The number of tubules containing mature spermatids and spermatozoa increased with age. Most significant variations in the increase of testicular volume and diameter of seminiferous tubules were associated with a high presence of spermatozoa in the tubules. In conclusion all animals with 20 months of age or more had reached puberty in the present study and the first spermatozoa appeared in 16 month old colts. All animals presented epididymal sperm when testicular volume and weight were over 16cm3 and 23g, respectively.

A ocitocina (OT) é um neuropeptídio hipotalâmico, que dentre suas funções na fêmea destaca-se a contração uterina durante o parto e a ejeção do leite. No entanto, estudos vêm demonstrando importantes funções endócrinas e parácrinas no trato reprodutivo masculino. Evidenciando a possível ação conjunta entre OT e a Globulina ligadora de hormônios sexuais (SHBG). Entretanto, em cães não existem informações disponíveis quanto sua atuação. Assim, estudos direcionados aos receptores de ocitocina (OTR) e SHBG e suas funções no sistema reprodutor masculino, mais especificamente na fisiologia espermática, são de suma importância para os conhecimentos da fisiologia reprodutiva para posterior aplicação em biotecnologias reprodutivas em pequenos animais e humanos, fomentando também novas perspectivas para a utilização terapêutica da ocitocina em enfermidades reprodutivas. Portanto, o objetivo deste estudo é verificar a expressão gênica e proteica do OTR e SHBG no testículo e epidídimo de cães, correlacionando tais dados com a qualidade espermática e dosagem de testosterona. Para tal, foram coletados testículos e epidídimos de 26 cães em idade reprodutiva (1 a 5 anos). Após a orquiectomia, foi realizada a coleta dos espermatozoides provenientes da cauda do epidídimo e então, as amostras foram analisadas quanto à motilidade computadorizada do sêmen (CASA), integridade de membrana plasmática (Eosina/Nigrosina), integridade de membrana acrossomal (Fast Green / Rosa Bengala) e atividade mitocondrial (3´3 Diaminobenzidine). A imunolocalização do OTR e SHBG foi realizada através de imunoistoquímica e imunofluorescência. E a análise de expressão gênica, através da Reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT PCR). E da expressão proteica, através do Western Blotting. Foram encontradas correlações significantes e positivas entre as expressões gênicas do OTR e do SHBG, tanto no testículo como no epidídimo. Além disto, a expressão do OTR no testículo correlacionou-se positivamente com espermatozoides com membrana acrossomal íntegra e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Já o SHBG do testículo, correlacionou-se positivamente com a concentração de espermatozoides, porcentagens de células com membrana plasmática e acrossomal íntegras, motilidade, motilidade progressiva e velocidade rápida, e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Por outro lado, no epidídimo, a expressão gênica do SHBG apresentou correlação positiva com a porcentagem de células com membrana plasmática íntegra e expressão proteica de SHBG no testículo. Quanto a expressão proteica, o OTR no testículo obteve correlação positiva com testosterona e negativa com atividade mitocondrial nula, já no epidídimo, ocorreu correlação positiva com integridade de membrana acrossomal e negativa também com atividade mitocondrial nula. Em relação ao SHBG, houve correlação positiva com a expressão gênica do SHBG no epidídimo, células normais e padrões de velocidade. E na imunoistoquímica foi possível observar a imunomarcação do OTR e SHBG na musculatura lisa e células de Leydig do testículo e OTR na musculatura lisa do epidídimo. No entanto, não houve imunomarcação do SHBG no epidídimo, assim como expressão proteica. Nossos resultados demonstraram que o OTR e SHBG são expressos nos testículos e epidídimos de cães e que estão relacionados a funções espermáticas importantes, sendo essenciais para o sucesso reprodutivo / Oxytocin (OT) is a hypothalamic neuropeptide that plays important and well known roles in the female such as uterine contraction during childbirth and milk ejection. Notwithstanding, studies have shown important endocrine and paracrine functions also in the male reproductive tract, highlighted by the possible joint action between OT and sex hormone-binding globulin (SHBG). In dogs, however, there is no information available with regards to the role of these hormones in the reproductive function. Thus, studies directed to oxytocin (OTR) and SHBG receptors and their functions in the male reproductive system, specifically with regards to sperm physiology. Such knowledge is essential to understand the reproductive physiology for the subsequent use in reproductive biotechnologies in small animals and humans, especially by providing new perspectives for the therapeutic use of oxytocin in reproductive disorders. Therefore, the aim of this study is to assess the gene and protein expression of OTR and SHBG in the testis and epididymis of dogs, correlating these data with sperm quality and testosterone dosage. To this end, testis and epididymis were collected from 26 dogs in reproductive age (1 to 5 years). After orchiectomy, collection of sperm from the cauda epididymis was carried out and then the samples were analyzed for computerized motility of semen (CASA), plasma membrane integrity (eosin / nigrosine), acrosome membrane integrity (Fast Green / rose Bengal) and mitochondrial activity (3\'3 Diaminobenzidine). The immunolocalization of OTR and SHBG was performed by immunohistochemistry and immunofluorescence. Gene expression analysis was performed by real time polymerase chain reaction (qRT - PCR). The protein expression was further assessed by Western Blotting. Significant positive correlations were found between the gene expressions of OTR and SHBG in both the testis and epididymis. Furthermore, the OTR expression in testis was positively correlated to sperm with intact acrosome membrane and negatively to the percentage of cells with low mitochondrial activity. On the other hand, testicular SHBG was positively correlated with sperm concentration, percentage of sperm with intact plasma membrane and acrosome, motility, progressive motility and the percentage of RAPID sperm. Also, negative correlation was found between testicular SHBG and the percentage of cells with low mitochondrial activity. Furthermore, in the epididymis, SHBG gene expression was positively correlated to the percentage of cells with intact plasma membrane and protein expression of SHBG in the testis. In relation to the protein expression, the OTR in the testis correlated positively with blood plasma testosterone and negatively with sperm with no mitochondrial activity. In the epididymis, OTR protein expression correlated positively with sperm showing intact acrosome and negatively with cells with no mitochondrial activity. With regards to SHBG proteins expression, there was a positive correlation to SHBG gene expression in the epididymis, normal cells and some patterns of sperm velocity. In the immunohistochemistry, we observed the OTR and SHBG immunostainings in the smooth muscle and Leydig cells of the testis while, in the epididymis, the OTR immunostaining could be observed only in the smooth muscle. Interestingly, there was no immunostaining or protein expression of SHBG in the epididymis. Our results demonstrated that OTR and SHBG are expressed in the testis and epididymis of dogs and are related to important sperm functions, essential for reproductive success

Introdução: Hexamerinas são proteínas de estocagem sintetizadas pelo corpo gorduroso de larvas de insetos e secretadas na hemolinfa, onde se acumulam. A função canônica das hexamerinas consiste em servir de reserva de aminoácidos e energia para a reconstrução de tecidos e órgãos durante a metamorfose. Este trabalho teve como objetivo a busca por evidências de funções alternativas das hexamerinas durante o ciclo de vida de abelhas A. mellifera. Resultados: Os perfis temporais de expressão das quatro hexamerinas (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c e HEX 110), verificados por meio de SDS-PAGE e western blot, corroboram sua função canônica na metamorfose. Consistente com esta função, as quatro hexamerinas foram localizadas no citoplasma das células do corpo gorduroso utilizando-se anticorpos específicos e microscopia confocal. No entanto, funções adicionais puderam ser inferidas com base nos seguintes resultados: (1) Foci das quatro hexamerinas foram localizados nos núcleos de algumas células do corpo gorduroso em metamorfose, levando à hipótese de que têm função anti-apoptótica durante este período crítico do desenvolvimento; (2) Além disso, HEX 70a e HEX 110 foram localizadas no citoplasma e núcleo de células ovarianas e testiculares, indicando função no desenvolvimento e maturação das gônadas; (3) A co-localização de um análogo de timidina (EdU) e HEX 70a nos núcleos das células dos ovaríolos, sugeriu fortemente uma função na proliferação celular. O knockdown de HEX 70a in vivo por meio de injeção de anticorpo específico prejudicou o crescimento dos ovaríolos de rainhas, reforçando a hipótese de função na proliferação celular, (4) interferiu na esclerotização da cutícula de operárias, indicando função na formação do exoesqueleto e (5) provocou a antecipação da ecdise adulta, provavelmente em resposta à ausência (ou diminuição) dos aminoácidos derivados das hexamerinas. Foram investigados também aspectos da regulação dos genes de hexamerinas. A manipulação experimental da dieta alimentar e dos títulos do hormônio juvenil (HJ) interferiram claramente na expressão dos genes de hexamerinas. A potencial ação reguladora do HJ foi reforçada pelos resultados de análises por bioinformática da região 5 UTR de cada gene de hexamerina (Martins et al., 2010) que revelaram potencial motivo de ligação à proteína Ultraspiracle (Usp), um membro do complexo receptor do HJ no DNA. Procedimentos para expressar as hexamerinas in vitro em sistema de bactérias e purificá-las estão em progresso visando a caracterização da estrutura e de interações entre as subunidades. Conclusão: Estes resultados ressaltam que as hexamerinas têm outras funções no ciclo de vida de A. mellifera, além da função já bem estabelecida de reserva de aminoácidos para a metamorfose. / Background: Insect hexamerins are storage proteins synthesized by the larval fat body and secreted into the hemolymph, where they accumulate. The canonical function of hexamerins is to provide amino acids and energy for the reconstruction of tissues and organs during pupal-to-adult development. The aim of the current study was to search for evidence of alternative roles for the hexamerins in the life cycle of the honey bee, A. mellifera. Results: The canonical role of insect hexamerins received support from our data on the temporal expression profiles of the four honey bee hexamerin subunits (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c and HEX 110), as verified by SDS-PAGE and western blot using hemolymph and fat body samples. Consistent with the canonical function, the four hexamerins were localized in the cytoplasm of fat body cells, during metamorphosis, by using specific antibodies and confocal laser-scanning microscopy. However, additional functions could be inferred by the following findings: (1) The four hexamerins were also localized in the nuclei of some fat body cells, thus tentatively suggesting an anti-apoptotic role during metamorphosis; (2) Furthermore, HEX 70a and HEX 110 were localized in the cytoplasm and nucleus of ovarian and testicular cells, pointing to a role in gonad development and maturation. Co-labeling of the thymidine analog EdU and HEX 70a in the ovariole cell nuclei, strongly suggested a role in cell proliferation; HEX 70a depletion via injection of the specific antibody in queen pupae impaired ovariole growth, thus strengthening our hypothesis on a role in cell proliferation, (3) HEX 70a depletion also impaired cuticle sclerotization, indicating a function in exoskeleton formation, and (4) led to a precocious adult ecdysis, perhaps in response to the lack (or decrease) in hexamerin-derived amino acids. We also investigated aspects of the regulation of hexamerin genes. The experimental manipulation of diet consumption and juvenile hormone (JH) titer clearly interfered in the expression of hexamerin genes. Regulation by JH was also supported by a previous bioinformatics analysis of the 5 UTR region of each hexamerin gene (Martins et al., 2010), which revealed a potential binding site for Ultraspiracle (Usp), a member of the JH receptor complex in the DNA. Experiments are in progress for in vitro expression and purification of the four hexamerins aiming to further characterize their structures and interactions. Conclusion: Taken together, these results imply in novel roles for hexamerins in the life cycle of A. mellifera in addition to their well-established role as amino acids sources for metamorphosis.

O desenvolvimento testicular e a manutenção da espermatogênese são controlados por gonadotrofinas e testosterona, cujos efeitos são modulados por uma rede complexa de fatores produzidos localmente e, entre eles, os estrógenos estão em causa. Uma compreensão da dinâmica dos hormônios esteroides sexuais mostra-se importante para revelar as funções durante o desenvolvimento testicular. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo aprofundar os conhecimentos sobre a espermatogênese do Galea spixii, associando a atuação das enzimas do complexo citocromo P450: P450 aromatase e P450c17 (17-α-hidroxilase/17,20-liase) importantes para a biossíntese de hormônios ligados à reprodução durante o desenvolvimento sexual pós-natal. Fragmentos de testículos de preás machos nas fases impúbere, pré-púbere, púbere e pós-púbere foram coletados no Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN, fixados em Paraformoaldeido 4% e RNAlater, e processados para Imunohistoquímica e PCR em tempo real. A expressão gênica das enzimas esteroidogênicas foram cruciais da prépuberdade para a puberdade. Durante as fases do desenvolvimento sexual a enzima P450c17 apresentou imunomarcação positiva apenas nas células de Leydig. A imunomarcação da enzima P450 aromatase foi positiva em diferentes tipos celulares ao longo do desenvolvimento sexual. A síntese de estrógenos no parênquima testicular não ficou restrita às células somáticas, as células germinativas também mostraram capacidade de converter andrógenos em estrógenos / The testis development and maintenance of spermatogenesis are controlled by gonadotropins and testosterone, whose effects are modulated by a complex factor locally produced, and the estrogens are involved. An understanding of the dynamics of sex steroid hormones shown to be important to reveal the functions during testicular development. Thus, the aimed was study the spermatogenesis of Galea spixii, associating the performance of cytochrome P450 complex: P450 aromatase and P450c17 (17-α-hydroxylase / 17,20-lyase) important for the biosynthesis of hormones related to reproduction during postnatal sexual development. Fragments of testes of immature, prepubertal, pubertal and post-pubertal were collected at Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN, fixed in Paraformaldehyde 4% and RNAlater, processed for immunohistochemistry and real time PCR. The steroidogenic enzymes gene expression were significant from prepubertal to pubertal stage. Cytochrome P450c17 expression in testicular parenchyma showed a positive reaction only in Leydig cell clusters. The expression of cytochrome P450 aromatase in testicular parenchyma were different during the sexual development of Galea spixii. During sexual development was observed that estrogen synthesis was not restricted to somatic cells (Leydig cells / Sertoli cells), the germ cells have also shown to be capable to convert androgens into estrogens via aromatase

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_viviane_rohrig_rabassa.pdf: 822002 bytes, checksum: 6cb1224c07c478b2394f81620c16151f (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / The somatotropin (ST), which has its effects mediated by insulin-like growth factor I, has positive effects on gametogenesis and steroidogenesis, and can be used as an alternative treatment for infertile men. Exogenous somatotropin supplementation improves testicular development, gametogenesis and steroidogenesis, anticipating onset of puberty. However, no studies aiming to determine the mechanisms of action of this hormone on testicular function and age at puberty in healthy young boars were performed. Thus the hypothesis of this study were: 1) prepubertal male pigs receiving exogenous ST have accelerated testicular growth due to the mitogenic actions of IGF-I; 2) an increase in gametogenesis and teroidogenesis with consequent antecipation of age at puberty and 3) improvement of semen quality after the establishment of puberty. To confirm this hypothesis four experiments were performed. The Experiment 1 aimed to determine the interval between applications of porcine ST (pST), based on the determination of IGF-I. Experiment 2 aimed to measure the proliferation of testes cells in boars subjected to pST administration, as well as its effect on the metabolism. In Experiment 1, the mean concentration of serum IGF-I for pST Group was higher (P<0.05) than for Control Group, with differences between groups within the first three days after injection, determining the interval between injection to be used in the following experiments. In Experiment 2 there was a increase in the testicular weight (P=0.06) in pST Group, but a decrease in the number of seminiferous tubules and sertoli cells in this group (P<0.05). Experiment 3 aimed to determine the effect of pST administration during the prepubertal period on the metabolic profile, testicular development and anticipation of the sexual maturity. The pST Group had higher circulating concentration of testosterone after five months of age (P<0.05), which was concomitant with the onset of reproductive activity. These boars also had higher libido (P<0.05). The Experiment 4 aimed to determine the effect of pST on the semen quality after the establishment of puberty. It was observed an increase in vigor, volume, total sperm concentration and total number of inseminating doses (P<0.05). Still, the pST Group had a higher testicular weight at 12 months of age (P<0.05). In conclusion, the use of pST in young pigs is present positive effects on the testicular development, testosterone levels, libido and semen quality after the establishment of puberty. an alternative to increase reproductive efficiency, increasing the semen quality and the number of inseminating doses produced from one ejaculate. / A somatotrofina (ST), a qual tem muitos de seus efeitos mediados pelo fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I), tem efeito positivo sobre a gametogênese e a esteroidogênese, sendo utilizada como alternativa de tratamento em homens com infertilidade. Quanto ao seu efeito sobre a idade à puberdade, em humanos com deficiência endógena, a sua suplementação causa maior desenvolvimento testicular, gametogênese e esteroidogênese e antecipação da puberdade. Porém, não há estudos que determinem os mecanismos de ação deste hormônio sobre a função testicular e idade à puberdade em suínos sadios. Dessa forma as hipóteses deste estudo foram: 1) machos suínos pré-púberes recebendo ST exógena tem seu crescimento testicular acelerado, devido à ação mitogênica do IGF-I; 2) incremento na gametogênese e esteroidogênese, com consequente antecipação da idade à puberdade; e 3) melhora da qualidade espermática após o estabelecimento da puberdade. Para confirmar estas hipóteses foram realizados quatro experimentos. O Experimento 1 teve o objetivo de determinar o intervalo entre aplicações de ST suína (pST), a partir da determinação dos níveis de IGF-I. O Experimento 2 teve o objetivo de avaliar a proliferação de células testiculares em animais submetidos à administração de pST, bem como seu efeito sobre o metabolismo de leitões. No Experimento 1, os níveis séricos médios de IGF-I do Grupo pST foram superiores (P<0,05) aos do Grupo Controle, com diferença entre grupos até o 3º dia após aplicação do hormônio, determinando o intervalo entre doses a ser utilizado nos próximos experimentos. No Experimento 2 houve um aumento no peso testicular (P=0,06) no Grupo pST, porém uma diminuição do número de túbulos seminíferos e células de Sertoli neste grupo (P<0,05). O Experimento 3 teve o objetivo de determinar o efeito da administração de pST durante o período pré-puberdade sobre o perfil metabólico, desenvolvimento testicular e início do desenvolvimento sexual de suínos jovens. O grupo pST apresentou maiores níveis circulantes de testosterona a partir dos cinco meses de idade (P<0,05), o qual coincidiu com o início da atividade reprodutiva destes animais, além de apresentar maior libido (P<0,05). O Experimento 4 teve o objetivo de determinar o efeito do pST sobre a qualidade espermática após o estabelecimento da puberdade. Na avaliação da qualidade espermática foi observado aumento do vigor, volume espermático, da concentração espermática total e do número de doses inseminantes no grupo pST (P<0,05). Ainda, o grupo pST apresentou maior peso testicular aos 12 meses de idade em relação ao grupo controle (P<0,05). Concluindo, o uso de pST em suínos jovens apresenta efeitos positivos sobre o desenvolvimento testicular, níveis de testosterona, libido e qualidade espermática após o estabelecimento da puberdade.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 daniel.pdf: 186929 bytes, checksum: 3b546022c9b10042ce06a35c124600cd (MD5) Previous issue date: 2012-04-13 / The silver staining technique for AgNOR nucleolar organizer regions (NORs) is characterized by marking proteins linked to the ribosomal ribonucleic acid, evaluating cell proliferation. The aim was to study the validity of the AgNOR staining technique in the testicular cell proliferation in crossbred ovine. Was used treis pairs forty crossbred sheep testes between six and ten months old.Wilcoxon and Spearman tests were used with a significance level of 5%. The mean NORs count in cells of the gonads right and left were respectively: spermatogonia (8.77±1.14 and 9.04±0.96), spermatocyte (4.99±2.00 and 6.20±2.07, P<0.05), Leydig (8.05±2.82 and 7.89±2.29) and Sertoli cells (8.07±1.88 and 7.61±2.16; P<0.05). There was a correlation between the mean values for right and left sides for the number of NORs (P<0.05) between Leydig x spermatocytes (0.49); spermatocytes x Sertoli (0.49) and Sertoli x Leydig (0.96). The study demonstrates that the AgNOR staining technique is indicated to evaluate the cell proliferative potential in ovine testis with practical implementation and low cost. / A coloração pela prata das regiões organizadoras de nucléolos (NORs) é caracterizada por marcar proteínas ligadas ao ácido ribonucléico ribossômico, avaliando a proliferação em células normais ou neoplásicas. O objetivo do trabalho foi estudar em testículos de ovinos obtidos em matadouro a validade do uso da técnica de coloração AgNOR na proliferação de células saudáveis da linhagem espermatogênica. Utilizou-se 43 pares de testículos de ovinos mestiços entre seis e 10 meses de idade. Testes de Wilcoxon e Spearman foram empregados, com nível de 5%. As médias das NORs nas células das gônadas direita e esquerda foram respectivamente: espermatogônia (8,77±1,14 e 9,04±0,96), espermatócito (4,99±2,00 e 6,20±2,07; P<0,05), Leydig (8,05±2,82 e 7,89±2,29) e Sertoli (8,07±1,88 e 7,61±2,16; P<0,05). Houve correlação (P<0,05) entre os lados para o número de NORs: espermatócito x Leydig (0,49); espermatócito x Sertoli (0,49) e Leydig x Sertoli (0,96). Conclui-se ser válido o emprego da técnica AgNOR para avaliar o potencial proliferativo das células saudáveis em testículos de ovinos com prática execução e baixo custo.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 daniel.pdf: 186929 bytes, checksum: 3b546022c9b10042ce06a35c124600cd (MD5) Previous issue date: 2012-04-13 / The silver staining technique for AgNOR nucleolar organizer regions (NORs) is characterized by marking proteins linked to the ribosomal ribonucleic acid, evaluating cell proliferation. The aim was to study the validity of the AgNOR staining technique in the testicular cell proliferation in crossbred ovine. Was used treis pairs forty crossbred sheep testes between six and ten months old.Wilcoxon and Spearman tests were used with a significance level of 5%. The mean NORs count in cells of the gonads right and left were respectively: spermatogonia (8.77±1.14 and 9.04±0.96), spermatocyte (4.99±2.00 and 6.20±2.07, P<0.05), Leydig (8.05±2.82 and 7.89±2.29) and Sertoli cells (8.07±1.88 and 7.61±2.16; P<0.05). There was a correlation between the mean values for right and left sides for the number of NORs (P<0.05) between Leydig x spermatocytes (0.49); spermatocytes x Sertoli (0.49) and Sertoli x Leydig (0.96). The study demonstrates that the AgNOR staining technique is indicated to evaluate the cell proliferative potential in ovine testis with practical implementation and low cost. / A coloração pela prata das regiões organizadoras de nucléolos (NORs) é caracterizada por marcar proteínas ligadas ao ácido ribonucléico ribossômico, avaliando a proliferação em células normais ou neoplásicas. O objetivo do trabalho foi estudar em testículos de ovinos obtidos em matadouro a validade do uso da técnica de coloração AgNOR na proliferação de células saudáveis da linhagem espermatogênica. Utilizou-se 43 pares de testículos de ovinos mestiços entre seis e 10 meses de idade. Testes de Wilcoxon e Spearman foram empregados, com nível de 5%. As médias das NORs nas células das gônadas direita e esquerda foram respectivamente: espermatogônia (8,77±1,14 e 9,04±0,96), espermatócito (4,99±2,00 e 6,20±2,07; P<0,05), Leydig (8,05±2,82 e 7,89±2,29) e Sertoli (8,07±1,88 e 7,61±2,16; P<0,05). Houve correlação (P<0,05) entre os lados para o número de NORs: espermatócito x Leydig (0,49); espermatócito x Sertoli (0,49) e Leydig x Sertoli (0,96). Conclui-se ser válido o emprego da técnica AgNOR para avaliar o potencial proliferativo das células saudáveis em testículos de ovinos com prática execução e baixo custo.

Orientador: Patricia Fernanda Felipe Pinheiro / Resumo: Introdução: A hipótese da “programação fetal” defende que eventos ocorridos durante a vida intrauterina exerçam influência na patogênese de doenças na vida adulta. Fatores ambientais podem programar no indivíduo o surgimento precoce de doenças cardiovasculares e metabólicas. Atualmente, há um aumento no consumo de adoçantes artificiais associados a tratamentos para a perda de peso e no controle do diabetes, sendo a sacarina sódica um dos mais consumidos. Entretanto, durante a gestação e lactação, o uso de sacarina sódica é restrito, por ser permeável a placenta, interagindo com o concepto e, por compor o leite materno. Embora os efeitos do uso de adoçantes sobre o peso corpóreo e o metabolismo sejam bastante conhecidos, não há relatos de pesquisas que relacionam a programação fetal pelo uso de sacarina sódica com o desenvolvimento pós-natal do testículo. Desta forma, o presente estudo visa investigar a influência do uso da sacarina sódica e da glicose na saúde materna e reprodutiva dos descendentes machos. Material e métodos: Ratas Sprague Dawley foram alimentadas durante a prenhez e lactação com dieta padrão para roedores, água filtrada ad libitum e suplementadas com iogurte natural desnatado (Grupo Controle Iogurte, n= 9); iogurte natural desnatado adoçado com solução de glicose (Dinâmica®) a 5% (v/v) (Grupo Glicose, n= 10); iogurte natural desnatado adoçado com solução de sacarina sódica (Dinâmica®) a 0,3% (v/v) (Grupo Sacarina Sódica, n= 10). As dietas líquidas foram prep... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: The "fetal programming" hypothesis argues that events that occur during intrauterine life have an influence on the pathogenesis of diseases in adulthood. Environmental factors can program in the individual the early onset of cardiovascular and metabolic diseases. Currently, there is an increase in the consumption of artificial sweeteners associated with treatments for weight loss and diabetes control, with sodium saccharin being one of the most consumed. However, during pregnancy and lactation, the use of sodium saccharin is restricted, since it is permeable to the placenta, interacting with the conceptus, and for composing breast milk. Although the effects of the use of sweeteners on the body weight and metabolism are well known, there are no reports of researches which relate fetal programming through the use of sodium saccharin to the postnatal development of the testis. Thus, the present study aims to investigate the influence of the use of sodium saccharin and glucose on the maternal and reproductive health of male offspring. Material and methods: Dams Sprague-Dawley rats were fed during pregnancy and lactation with a standard chow for rodents, filtered water ad libitum and supplemented with low-fat plain yogurt (Yogurt Control Group, n = 9); low-fat plain yogurt sweetened with 5% (v/v) glucose solution (Dinâmica®) (Glucose Group, n = 10); low-fat plain yogurt sweetened with 0.3% (v/v) sodium saccharin solution (Dinâmica®) (Sodium Saccharin Group, n = 10). ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre