Made available in DSpace on 2016-05-02T13:53:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amarildo Marciano Rosa-dissertacao.pdf: 2611071 bytes, checksum: dc812aaabc78398eb9057cb36f0aeba0 (MD5) Previous issue date: 2013-05-24 / This work was performed in the laboratories of animal reproduction, pharmacology and experimental surgery, university josé do rosário vellano-unifenas, in order to evaluate some aspects related to the morphological changes of cortical adrenal glands and testicles in rats treated with dexamethasone, an anti-inflammatory corticosteroid with immunosuppressive activity in the hypothalamic-pituitary-adrenal.The experiments were conducted to determine the hematological parameters, hormonal and functional morphology of the testicles and adrenal glands of wistar rats (Rattus norvegicus) submitted to dexamethasone at a dose of 40&#956;g/100g weight by 3 days and 7 days of application. The groups were formed by 40 male wistar rats, adult, with average weight of 330g were divided into groups of 10 animals, 10 control and 10 treatment for 3 days and 10 control and 10 treatment for 7 days, where the group treatment received 0.07 ml of dexamethasone intramuscularly and the control group received 0.07 ml of saline intramuscularly. Data were expressed as mean ± standard error of mean (x ± sem), analyzed and compared using the student t-test, with significance level of 5% (p <.05). Were analyzed by the statistical package graphpad instat ® _, version 3.00 (graphpad software inc., san diego, california, usa). Significant differences were found between control and dexamethasone groups in hematological parameters (p <0.05), hormonal (p <0.05) and morphological (p <.05). There was no significant difference in spermiograms. It was concluded that the use of dexamethasone was responsible for the reduction in immune response with a significant lymphopenia, hormonal suppression of cortisol production by the adrenal glands atrophy of adrenal glands, and reduction in weight of the animals, representing the same catabolic effect on body. No interference in the structure of the testicles morphofunctional significantly, nor were there significant changes in the concentration of total testosterone. / Este trabalho foi realizado nos laboratórios de Reprodução Animal, Farmacologia e Cirurgia Experimental da Universidade José do Rosário Vellano -UNIFENAS, com o objetivo de avaliar alguns aspectos relacionados às alterações morfofuncionais testiculares e da cortical da glândula adrenal em ratos tratados com dexametasona, um anti-inflamatório corticosteroide, com atividade imunossupressiva no eixo hipotálamo-hipófise-adrenal.Os experimentos foram realizados para se determinar os parâmetros hematológicos, hormonais e morfofuncionais dos testículos e glândulas adrenais de ratos wistar(Rattus norvegicus) submetidos à dexametasona, na dose de 40µg/100g de peso, por 3 dias e 7 dias de aplicação. Os grupos foram formados por 40 ratos Wistar albinos machos, adultos, com peso médio de 330g, divididos em grupos de 10 animais, sendo 10 controle e 10 tratamento, por 3 dias e 10 controle e 10 tratamento, por 7 dias, onde o grupo tratamento recebeu 0,07mL de solução de dexametasona, via intramuscular e o grupo controle recebeu 0,07ml de solução salina, via intramuscular. Os dados obtidos foram expressos por médias ± erro padrão da média (X±EPM), analisados e comparados usando o Teste t-Student, com significância de 5% ( P<0,05). Foram analisados pelo pacote estatístico GraphPad InStat®_, versão 3.00 (GraphPad Software Inc., San Diego, Califórnia, EUA). Foram encontradas diferenças significativas entre os grupos dexametasona e controle nos parâmetros hematológicos (P<0,05),hormonais(P<0,05)e morfológicos(P<0,05). Não foi evidenciada diferença significativa nos espermogramas. Concluiu-se que a utilização de dexametasona foi responsável pela redução na resposta imune com significativa linfocitopenia, supressão da produção hormonal de cortisol pelas glândulas adrenais, atrofia das glândulas adrenais e pela redução de peso dos animais, representando o efeito catabólico da mesma no organismo. Não houve interferência na estrutura morfofuncional dos testículos de forma significativa, nem houve alteração significativa na concentração detestosteronatotal.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE SAULO FERNANDES MANO DE CARVALHO.pdf: 5897981 bytes, checksum: 9ded1ddc23ddf1eb697350aee8c49480 (MD5) Previous issue date: 2010-12-15 / The purpose of this research was studied the macroscopic morphology of rhea s testis and epididymis. Were studied testis from 54 rheas, breed in captivity. In commercial slaughter, were collected testis to analyzed macroscopic measurements of testis and epididymis, consisting in length, width, thickness, circumference, volume, parenchyma and testicular capsule weight, also shape, size and blood supply. Of these parameters were calculated media and standard deviation. The testes looks like a cylinder, the testicular capsule is thin, dense and transparent, a short testicular artery arises from the A. cranialis renalis. The organs were influenced of season with reproductive and non reproductive times. In December/2006 and May/2007 the morphmetric media (x) measurements in right testes was: volume 58.70 and 14.7 mL , length 9.87 and 3.5 cm, width 2.44 and 0.6 cm, thickness 2.49 and 0.5 cm, circumference 8.02 and 2.3 cm, parenchyma weight 27.66 and 6.1 g and testicular capsule weight 1.04 and 0.3 g, respectively. In right epididymis was: volume 7.7 and 3.0 mL, length 5.8 and 1.3 cm, width 0.7 and 0.3 cm, thickness 0.6 and 0.3 cm, circumference 2.5 and 1.2 cm, parenchyma weight 6.4 and 2.8 g and capsule weight 0.4 and 0.1 g, respectively. A few of measurements, in testes and epididymis were bigger in right side than in left side (p<0.05) showing asymmetry. The medias of November/2005 were in intermediate position (p<0.05), but near the December/2006 data, probably it could be a transition phase between the rest and sexual activity (breeding season). The observations confirms sexual activity season in this specie, by spring summer. Morphologically the Rhea`s testicles and epididymis hava many points in common with other birds, but differences were observed, and has influence of seasons. The testicle and epididymis biometric characteristics were bigger in the breeding seasons. Key words: Aves, Epididymis, Morphology, Ratites, Reproduction, Seasonality, Testes / O objetivo desta pesquisa foi estudar a morfologia macroscópica de testículos e epidídimos de emas. Foram utilizados testículos de 54 emas, criadas em cativeiro. As coletas foram realizadas em novembro de 2005 (n=14), dezembro de 2006 (n=20) e maio de 2007 (n=20). Durante abate comercial foram colhidos os testículos e epidídimos e imediatamente foram aferidas as seguintes medidas do testículo e epidídimo: largura, comprimento, espessura, circunferência, volume, peso do parênquima e da túnica albugínea, também aspectos como sua forma, implantação na cavidade, relação com outros órgãos e vascularização. A partir das características estudadas calcularam-se média e desvio-padrão, sendo que as médias foram comparadas pela analise de variância. Os testículos apresentaram formato cilíndrico, túnica albugínea fina, densa e transparente, sua vascularização foi feita pela artéria testicular que é um ramo da artéria renal cranial. Nas coletas de dezembro/2006 e maio/2007 as médias das medidas macroscópicas dos testículos direitos foram: volume 58,7 e 14,7 mL, comprimento 9,87 e 3,5 cm, largura 2,4 e 0,6 cm, espessura 2,4 e 0,5 cm, circunferência 8,0 e 2,3 cm, peso do parênquima 27,6 e 6,1 g e peso da túnica albugínea 1,0 e 0,3 g, p<0,05, respectivamente. Em relação aos epidídimos as médias das medidas macroscópicas do órgão direito coletados de dezembro/2006 e maio/2007 foram: volume 7,7 e 3,0 mL, comprimento 5,8 e 1,3 cm, largura 0,7 e 0,3 cm, espessura 0,6 e 0,3 cm, circunferência 2,5 e 1,2 cm, peso do tecido 6,4 e 2,8 g e peso da cápsula 0,4 e 0,1 g, p<0,05, respectivamente. As médias observadas no mês de novembro/2005 ficaram em uma situação intermediária (p<0,05), porém quantitativamente bem mais próximas as do mês de dezembro/2006 o que pode caracterizar um período de transição. Algumas medidas do testículo e epidídimo direito foram superiores ao do esquerdo (p<0,05), caracterizando assimetria. Morfologicamente os testículos e epidídimos de emas possuem pontos em comum ao de outras aves descritas, porém diferenças foram observadas. Os testículos e epidídimos de Rhea americana apresentam influência do ambiente, com meses de atividade reprodutiva (novembro-dezembro) primavera-verão e outra de repouso sexual (maio) outono-inverno. Foram apresentadas as médias da biometria testicular e epididimária. As características da biometria testicular e epididimária apresentaram maior magnitude na estação de atividade sexual Palavras-chave: Aves, Epidídimo, Morfologia, Ratitas, Reprodução, Sazonalidade, Testículo

Objetivo: Avaliar a função gonadal de pacientes do sexo masculino com lúpus eritematoso sistêmico (LES). Métodos: 35 pacientes do sexo masculino com LES (critérios do Colégio Americano de Reumatologia) foram avaliados prospectivamente segundo características demográficas, manifestações clínicas, tratamento prévio e atual da doença, avaliação urológica, ultra-sonografia testicular com Döppler, perfil hormonal, análise do sêmen incluindo morfologia e detecção de anticorpos anti-espermatozóides, e esses pacientes foram comparados com 35 controles saudáveis pareados para idade. Resultados: Os pacientes com LES apresentaram medianas reduzidas do: volume testicular em ambos os testículos (p=0,003 e p=0,004), número total de espermatozóides (p=0,002) e número total de espermatozóides móveis em relação aos controles. Assim como, a média de volume do sêmen e a percentagem de formas normais de espermatozóides foram menores nos pacientes com LES versus controles (p=0,015 e p=0,015). Todos os pacientes com LES apresentaram alterações do sêmen e por isso foram subdivididos de acordo com a gravidade destas alterações em: grupo A com 18 pacientes (teratozoospermia) e grupo B com 17 pacientes (azoospermia ou teratozoospermia, em associação com oligozoospermia e/ou astenozoospermia. A freqüência do uso da pulsoterapia com ciclofosfamida endovenosa (PCE) após a espermarca foi maior no grupo B em relação ao grupo A (p=0,001), assim como as medianas da dose cumulativa de PCE (p=0,005), número de pulsos (p=0,005) e duração da PCE (p=0,006). Além disso, as medianas dos volumes testiculares por ultra-sonografia, em ambos os testículos, foram menores no grupo B em relação ao grupo A (p=0,001 e p=0,001). Os níveis elevados de FSH foram também maiores no grupo B em relação ao A (p=0,018). Conclusões: Pacientes com LES têm uma alta freqüência de alterações do sêmen associados a redução do volume testicular. A utilização de PCE após a espermarca foi o principal fator de uma potencial lesão testicular definitiva. / Objective: To assess gonadal function in male systemic lupus erythematosus (SLE) patients. Methods: Thirty-five consecutive male SLE patients (American College Rheumatology criteria) were prospectively evaluated for demographic, clinical features, previous and current treatment, urologic evaluation, testicular Döppler ultrasound, hormone profile, semen analysis including morphology and anti-sperm antibodies, and to compare them to 35 agematched healthy controls. Results: SLE patients had a lower median testicular volume in both testes (p=0.003 and p=0.004), total sperm count (p=0.002) and total motile sperm count (p=0.004) compared to controls. Likewise, the mean sperm volume and percentage of normal sperm forms were lower in SLE versus controls (p=0.015 and p=0.015). Since all SLE patients (100%) had semen alterations they were further subdivided according to the severity of theses abnormalities in: group A with 18 patients (teratozoospermia) and group B with 17 patients (azoospermia or teratozoospermia in combination with oligozoospermia and/or asthenozoospermia). Of note, the frequency of intravenous cyclophosphamide (IVCYC) after the first ejaculation was higher in group B than in A (p=0.001), likewise the higher median cumulative dose (p=0.005), number of pulses (p=0.005), and duration of IVCYC (p=0.006). Moreover, the medians of testicular volume measured by ultrasound in both testicles were lower in group B compared to A (p=0.001 and p=0.001). Interestingly, elevated FSH levels were higher in group B compared to A (p=0.018). Conclusions: SLE patients have a high frequency of sperm abnormalities associated with reduced testicular volume. The post-pubertal IVCYC use was the major factor of permanent potential damage to the testes.

A ocitocina (OT) é um neuropeptídio hipotalâmico, que dentre suas funções na fêmea destaca-se a contração uterina durante o parto e a ejeção do leite. No entanto, estudos vêm demonstrando importantes funções endócrinas e parácrinas no trato reprodutivo masculino. Evidenciando a possível ação conjunta entre OT e a Globulina ligadora de hormônios sexuais (SHBG). Entretanto, em cães não existem informações disponíveis quanto sua atuação. Assim, estudos direcionados aos receptores de ocitocina (OTR) e SHBG e suas funções no sistema reprodutor masculino, mais especificamente na fisiologia espermática, são de suma importância para os conhecimentos da fisiologia reprodutiva para posterior aplicação em biotecnologias reprodutivas em pequenos animais e humanos, fomentando também novas perspectivas para a utilização terapêutica da ocitocina em enfermidades reprodutivas. Portanto, o objetivo deste estudo é verificar a expressão gênica e proteica do OTR e SHBG no testículo e epidídimo de cães, correlacionando tais dados com a qualidade espermática e dosagem de testosterona. Para tal, foram coletados testículos e epidídimos de 26 cães em idade reprodutiva (1 a 5 anos). Após a orquiectomia, foi realizada a coleta dos espermatozoides provenientes da cauda do epidídimo e então, as amostras foram analisadas quanto à motilidade computadorizada do sêmen (CASA), integridade de membrana plasmática (Eosina/Nigrosina), integridade de membrana acrossomal (Fast Green / Rosa Bengala) e atividade mitocondrial (3´3 Diaminobenzidine). A imunolocalização do OTR e SHBG foi realizada através de imunoistoquímica e imunofluorescência. E a análise de expressão gênica, através da Reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT PCR). E da expressão proteica, através do Western Blotting. Foram encontradas correlações significantes e positivas entre as expressões gênicas do OTR e do SHBG, tanto no testículo como no epidídimo. Além disto, a expressão do OTR no testículo correlacionou-se positivamente com espermatozoides com membrana acrossomal íntegra e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Já o SHBG do testículo, correlacionou-se positivamente com a concentração de espermatozoides, porcentagens de células com membrana plasmática e acrossomal íntegras, motilidade, motilidade progressiva e velocidade rápida, e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Por outro lado, no epidídimo, a expressão gênica do SHBG apresentou correlação positiva com a porcentagem de células com membrana plasmática íntegra e expressão proteica de SHBG no testículo. Quanto a expressão proteica, o OTR no testículo obteve correlação positiva com testosterona e negativa com atividade mitocondrial nula, já no epidídimo, ocorreu correlação positiva com integridade de membrana acrossomal e negativa também com atividade mitocondrial nula. Em relação ao SHBG, houve correlação positiva com a expressão gênica do SHBG no epidídimo, células normais e padrões de velocidade. E na imunoistoquímica foi possível observar a imunomarcação do OTR e SHBG na musculatura lisa e células de Leydig do testículo e OTR na musculatura lisa do epidídimo. No entanto, não houve imunomarcação do SHBG no epidídimo, assim como expressão proteica. Nossos resultados demonstraram que o OTR e SHBG são expressos nos testículos e epidídimos de cães e que estão relacionados a funções espermáticas importantes, sendo essenciais para o sucesso reprodutivo / Oxytocin (OT) is a hypothalamic neuropeptide that plays important and well known roles in the female such as uterine contraction during childbirth and milk ejection. Notwithstanding, studies have shown important endocrine and paracrine functions also in the male reproductive tract, highlighted by the possible joint action between OT and sex hormone-binding globulin (SHBG). In dogs, however, there is no information available with regards to the role of these hormones in the reproductive function. Thus, studies directed to oxytocin (OTR) and SHBG receptors and their functions in the male reproductive system, specifically with regards to sperm physiology. Such knowledge is essential to understand the reproductive physiology for the subsequent use in reproductive biotechnologies in small animals and humans, especially by providing new perspectives for the therapeutic use of oxytocin in reproductive disorders. Therefore, the aim of this study is to assess the gene and protein expression of OTR and SHBG in the testis and epididymis of dogs, correlating these data with sperm quality and testosterone dosage. To this end, testis and epididymis were collected from 26 dogs in reproductive age (1 to 5 years). After orchiectomy, collection of sperm from the cauda epididymis was carried out and then the samples were analyzed for computerized motility of semen (CASA), plasma membrane integrity (eosin / nigrosine), acrosome membrane integrity (Fast Green / rose Bengal) and mitochondrial activity (3\'3 Diaminobenzidine). The immunolocalization of OTR and SHBG was performed by immunohistochemistry and immunofluorescence. Gene expression analysis was performed by real time polymerase chain reaction (qRT - PCR). The protein expression was further assessed by Western Blotting. Significant positive correlations were found between the gene expressions of OTR and SHBG in both the testis and epididymis. Furthermore, the OTR expression in testis was positively correlated to sperm with intact acrosome membrane and negatively to the percentage of cells with low mitochondrial activity. On the other hand, testicular SHBG was positively correlated with sperm concentration, percentage of sperm with intact plasma membrane and acrosome, motility, progressive motility and the percentage of RAPID sperm. Also, negative correlation was found between testicular SHBG and the percentage of cells with low mitochondrial activity. Furthermore, in the epididymis, SHBG gene expression was positively correlated to the percentage of cells with intact plasma membrane and protein expression of SHBG in the testis. In relation to the protein expression, the OTR in the testis correlated positively with blood plasma testosterone and negatively with sperm with no mitochondrial activity. In the epididymis, OTR protein expression correlated positively with sperm showing intact acrosome and negatively with cells with no mitochondrial activity. With regards to SHBG proteins expression, there was a positive correlation to SHBG gene expression in the epididymis, normal cells and some patterns of sperm velocity. In the immunohistochemistry, we observed the OTR and SHBG immunostainings in the smooth muscle and Leydig cells of the testis while, in the epididymis, the OTR immunostaining could be observed only in the smooth muscle. Interestingly, there was no immunostaining or protein expression of SHBG in the epididymis. Our results demonstrated that OTR and SHBG are expressed in the testis and epididymis of dogs and are related to important sperm functions, essential for reproductive success

O desenvolvimento testicular e a manutenção da espermatogênese são controlados por gonadotrofinas e testosterona, cujos efeitos são modulados por uma rede complexa de fatores produzidos localmente e, entre eles, os estrógenos estão em causa. Uma compreensão da dinâmica dos hormônios esteroides sexuais mostra-se importante para revelar as funções durante o desenvolvimento testicular. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo aprofundar os conhecimentos sobre a espermatogênese do Galea spixii, associando a atuação das enzimas do complexo citocromo P450: P450 aromatase e P450c17 (17-&#945;-hidroxilase/17,20-liase) importantes para a biossíntese de hormônios ligados à reprodução durante o desenvolvimento sexual pós-natal. Fragmentos de testículos de preás machos nas fases impúbere, pré-púbere, púbere e pós-púbere foram coletados no Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN, fixados em Paraformoaldeido 4% e RNAlater, e processados para Imunohistoquímica e PCR em tempo real. A expressão gênica das enzimas esteroidogênicas foram cruciais da prépuberdade para a puberdade. Durante as fases do desenvolvimento sexual a enzima P450c17 apresentou imunomarcação positiva apenas nas células de Leydig. A imunomarcação da enzima P450 aromatase foi positiva em diferentes tipos celulares ao longo do desenvolvimento sexual. A síntese de estrógenos no parênquima testicular não ficou restrita às células somáticas, as células germinativas também mostraram capacidade de converter andrógenos em estrógenos / The testis development and maintenance of spermatogenesis are controlled by gonadotropins and testosterone, whose effects are modulated by a complex factor locally produced, and the estrogens are involved. An understanding of the dynamics of sex steroid hormones shown to be important to reveal the functions during testicular development. Thus, the aimed was study the spermatogenesis of Galea spixii, associating the performance of cytochrome P450 complex: P450 aromatase and P450c17 (17-&#945;-hydroxylase / 17,20-lyase) important for the biosynthesis of hormones related to reproduction during postnatal sexual development. Fragments of testes of immature, prepubertal, pubertal and post-pubertal were collected at Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN, fixed in Paraformaldehyde 4% and RNAlater, processed for immunohistochemistry and real time PCR. The steroidogenic enzymes gene expression were significant from prepubertal to pubertal stage. Cytochrome P450c17 expression in testicular parenchyma showed a positive reaction only in Leydig cell clusters. The expression of cytochrome P450 aromatase in testicular parenchyma were different during the sexual development of Galea spixii. During sexual development was observed that estrogen synthesis was not restricted to somatic cells (Leydig cells / Sertoli cells), the germ cells have also shown to be capable to convert androgens into estrogens via aromatase

Introdução: Hexamerinas são proteínas de estocagem sintetizadas pelo corpo gorduroso de larvas de insetos e secretadas na hemolinfa, onde se acumulam. A função canônica das hexamerinas consiste em servir de reserva de aminoácidos e energia para a reconstrução de tecidos e órgãos durante a metamorfose. Este trabalho teve como objetivo a busca por evidências de funções alternativas das hexamerinas durante o ciclo de vida de abelhas A. mellifera. Resultados: Os perfis temporais de expressão das quatro hexamerinas (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c e HEX 110), verificados por meio de SDS-PAGE e western blot, corroboram sua função canônica na metamorfose. Consistente com esta função, as quatro hexamerinas foram localizadas no citoplasma das células do corpo gorduroso utilizando-se anticorpos específicos e microscopia confocal. No entanto, funções adicionais puderam ser inferidas com base nos seguintes resultados: (1) Foci das quatro hexamerinas foram localizados nos núcleos de algumas células do corpo gorduroso em metamorfose, levando à hipótese de que têm função anti-apoptótica durante este período crítico do desenvolvimento; (2) Além disso, HEX 70a e HEX 110 foram localizadas no citoplasma e núcleo de células ovarianas e testiculares, indicando função no desenvolvimento e maturação das gônadas; (3) A co-localização de um análogo de timidina (EdU) e HEX 70a nos núcleos das células dos ovaríolos, sugeriu fortemente uma função na proliferação celular. O knockdown de HEX 70a in vivo por meio de injeção de anticorpo específico prejudicou o crescimento dos ovaríolos de rainhas, reforçando a hipótese de função na proliferação celular, (4) interferiu na esclerotização da cutícula de operárias, indicando função na formação do exoesqueleto e (5) provocou a antecipação da ecdise adulta, provavelmente em resposta à ausência (ou diminuição) dos aminoácidos derivados das hexamerinas. Foram investigados também aspectos da regulação dos genes de hexamerinas. A manipulação experimental da dieta alimentar e dos títulos do hormônio juvenil (HJ) interferiram claramente na expressão dos genes de hexamerinas. A potencial ação reguladora do HJ foi reforçada pelos resultados de análises por bioinformática da região 5 UTR de cada gene de hexamerina (Martins et al., 2010) que revelaram potencial motivo de ligação à proteína Ultraspiracle (Usp), um membro do complexo receptor do HJ no DNA. Procedimentos para expressar as hexamerinas in vitro em sistema de bactérias e purificá-las estão em progresso visando a caracterização da estrutura e de interações entre as subunidades. Conclusão: Estes resultados ressaltam que as hexamerinas têm outras funções no ciclo de vida de A. mellifera, além da função já bem estabelecida de reserva de aminoácidos para a metamorfose. / Background: Insect hexamerins are storage proteins synthesized by the larval fat body and secreted into the hemolymph, where they accumulate. The canonical function of hexamerins is to provide amino acids and energy for the reconstruction of tissues and organs during pupal-to-adult development. The aim of the current study was to search for evidence of alternative roles for the hexamerins in the life cycle of the honey bee, A. mellifera. Results: The canonical role of insect hexamerins received support from our data on the temporal expression profiles of the four honey bee hexamerin subunits (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c and HEX 110), as verified by SDS-PAGE and western blot using hemolymph and fat body samples. Consistent with the canonical function, the four hexamerins were localized in the cytoplasm of fat body cells, during metamorphosis, by using specific antibodies and confocal laser-scanning microscopy. However, additional functions could be inferred by the following findings: (1) The four hexamerins were also localized in the nuclei of some fat body cells, thus tentatively suggesting an anti-apoptotic role during metamorphosis; (2) Furthermore, HEX 70a and HEX 110 were localized in the cytoplasm and nucleus of ovarian and testicular cells, pointing to a role in gonad development and maturation. Co-labeling of the thymidine analog EdU and HEX 70a in the ovariole cell nuclei, strongly suggested a role in cell proliferation; HEX 70a depletion via injection of the specific antibody in queen pupae impaired ovariole growth, thus strengthening our hypothesis on a role in cell proliferation, (3) HEX 70a depletion also impaired cuticle sclerotization, indicating a function in exoskeleton formation, and (4) led to a precocious adult ecdysis, perhaps in response to the lack (or decrease) in hexamerin-derived amino acids. We also investigated aspects of the regulation of hexamerin genes. The experimental manipulation of diet consumption and juvenile hormone (JH) titer clearly interfered in the expression of hexamerin genes. Regulation by JH was also supported by a previous bioinformatics analysis of the 5 UTR region of each hexamerin gene (Martins et al., 2010), which revealed a potential binding site for Ultraspiracle (Usp), a member of the JH receptor complex in the DNA. Experiments are in progress for in vitro expression and purification of the four hexamerins aiming to further characterize their structures and interactions. Conclusion: Taken together, these results imply in novel roles for hexamerins in the life cycle of A. mellifera in addition to their well-established role as amino acids sources for metamorphosis.

Objetivo: Avaliar a função gonadal de pacientes do sexo masculino com lúpus eritematoso sistêmico (LES). Métodos: 35 pacientes do sexo masculino com LES (critérios do Colégio Americano de Reumatologia) foram avaliados prospectivamente segundo características demográficas, manifestações clínicas, tratamento prévio e atual da doença, avaliação urológica, ultra-sonografia testicular com Döppler, perfil hormonal, análise do sêmen incluindo morfologia e detecção de anticorpos anti-espermatozóides, e esses pacientes foram comparados com 35 controles saudáveis pareados para idade. Resultados: Os pacientes com LES apresentaram medianas reduzidas do: volume testicular em ambos os testículos (p=0,003 e p=0,004), número total de espermatozóides (p=0,002) e número total de espermatozóides móveis em relação aos controles. Assim como, a média de volume do sêmen e a percentagem de formas normais de espermatozóides foram menores nos pacientes com LES versus controles (p=0,015 e p=0,015). Todos os pacientes com LES apresentaram alterações do sêmen e por isso foram subdivididos de acordo com a gravidade destas alterações em: grupo A com 18 pacientes (teratozoospermia) e grupo B com 17 pacientes (azoospermia ou teratozoospermia, em associação com oligozoospermia e/ou astenozoospermia. A freqüência do uso da pulsoterapia com ciclofosfamida endovenosa (PCE) após a espermarca foi maior no grupo B em relação ao grupo A (p=0,001), assim como as medianas da dose cumulativa de PCE (p=0,005), número de pulsos (p=0,005) e duração da PCE (p=0,006). Além disso, as medianas dos volumes testiculares por ultra-sonografia, em ambos os testículos, foram menores no grupo B em relação ao grupo A (p=0,001 e p=0,001). Os níveis elevados de FSH foram também maiores no grupo B em relação ao A (p=0,018). Conclusões: Pacientes com LES têm uma alta freqüência de alterações do sêmen associados a redução do volume testicular. A utilização de PCE após a espermarca foi o principal fator de uma potencial lesão testicular definitiva. / Objective: To assess gonadal function in male systemic lupus erythematosus (SLE) patients. Methods: Thirty-five consecutive male SLE patients (American College Rheumatology criteria) were prospectively evaluated for demographic, clinical features, previous and current treatment, urologic evaluation, testicular Döppler ultrasound, hormone profile, semen analysis including morphology and anti-sperm antibodies, and to compare them to 35 agematched healthy controls. Results: SLE patients had a lower median testicular volume in both testes (p=0.003 and p=0.004), total sperm count (p=0.002) and total motile sperm count (p=0.004) compared to controls. Likewise, the mean sperm volume and percentage of normal sperm forms were lower in SLE versus controls (p=0.015 and p=0.015). Since all SLE patients (100%) had semen alterations they were further subdivided according to the severity of theses abnormalities in: group A with 18 patients (teratozoospermia) and group B with 17 patients (azoospermia or teratozoospermia in combination with oligozoospermia and/or asthenozoospermia). Of note, the frequency of intravenous cyclophosphamide (IVCYC) after the first ejaculation was higher in group B than in A (p=0.001), likewise the higher median cumulative dose (p=0.005), number of pulses (p=0.005), and duration of IVCYC (p=0.006). Moreover, the medians of testicular volume measured by ultrasound in both testicles were lower in group B compared to A (p=0.001 and p=0.001). Interestingly, elevated FSH levels were higher in group B compared to A (p=0.018). Conclusions: SLE patients have a high frequency of sperm abnormalities associated with reduced testicular volume. The post-pubertal IVCYC use was the major factor of permanent potential damage to the testes.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Metabólitos ativos da cafeína apresentam toxicidade, podendo causar efeitos deletérios em muitos órgãos no período fetal pelo consumo materno. O estudo objetivou avaliar o papel da administração de cafeína durante a gestação em vários parâmetros importantes para a função testicular em camundongos adultos C57BL/6. Fêmeas grávidas foram divididas em: grupo controle (C), que receberam injeções de sol. salina (0,9% NaCl) e grupo cafeína (CF), que receberam diariamente injeções subcutâneas de 20 mg / kg de cafeína. Filhotes tiveram livre acesso à ração padrão desde o desmame até três meses de idade, quando foram mortos. O grupo CF apresentou uma redução no consumo alimentar (C = 4,36 0,14; CF = 3,79 0,05/g, p<0,05) e ganho de massa corporal (C = 25,73 0,14; CF = 21,08 0,41/g, p=0,0001). Ainda este grupo, apresentou alterações estruturais nos testículos da prole, como redução no peso relativo (C = 0,078 0,003; CF = 0,063 0,002/g, p=0,002), diâmetro tubular (C = 455,4 2,7; CF = 393,5 3,1/m, p=0,0001), lume tubular (C = 310,6 2,5; CF = 254,8 2,9/m, p=0.0001) e altura do epitélio seminífero (C = 144,8 0,9; CF = 138,7 1,3/m, p=0,0005) observados pela técnica de morfometria. Testosterona sérica avaliada por quimioluminescência foi reduzida (C = 6,6 2,8; CF = 0,5 0,2/ng/ml, p=0.04). Western Blotting foi utilizado para análise de expressão protéica. Houve aumento do receptor de leptina (C = 0,81 0,04; CF = 1,28 0,15/g, p=0,01), do receptor para o hormônio leteinizante (C = 0,92 0,05; CF = 0,74 0,05/g, p=0,01),da aromatase (C = 0,32 0,03; CF = 0,48 0,05/g, p=0,03) e do regulador pró apoptose (C = 0,27 0,02; CF = 0,42 0,03/g, p=0,01) enquanto o receptor para hormônio folículo estimulante (FSHR) (C = 0,76 0,06; CF = 0,56 0,04/g, p=0,02), o receptor para proteína reguladora da esteroidogênese (C = 1,009 0,065; CF = 0,584 0,060/g, p=0,0007), a proteína do fator de crescimento vascular endotelial (C = 0,33 0,08; CF = 0,05 0,01/g, p=0,009), o receptor de androgênio (C = 0,97 0,11; CF = 0,59 0,07/g, p=0,02) e o antígeno nuclear de proliferação celular (C = 0,93 0,11; CF = 0,48 0,07/g, p=0,01) foram reduzidos. Este estudo sugere que o consumo de cafeína durante a gravidez parece ser nocivo à fertilidade de animais machos, caracterizando o fenômeno de programação, o que gera alterações funcionais e estruturais nos testículos da prole adulta. / Active metabolites of caffeine present toxicity, may cause deleterious effects on many organs in the fetal period by maternal consumption. This study aimed to evaluate the role of caffeine administration during pregnancy on several parameters of adult male testis in C57BL/6 mice. Pregnant C57BL/6 female mice were divided into two groups (n = 10): Control group (C), dams were injected with the vehicle only (saline 0.9 % NaCl); Caffeine group (CF), dams received daily a subcutaneous injection of 20 mg/kg of caffeine/day (1 mg/mL saline). Pups had free access to standard chow since weaning to 3 months of age, when they were killed. Treatment of dams with caffeine did not produce any visible signs of maternal toxicity. At adulthood CF group presented a reduction in the food consumption (C = 4.36 0.14, CF = 3.79 0.05/g, p<0.05) and body weight gain (C = 25.73 0.14, CF = 21.08 0.41/ g, p=0.0001). Several alterations were seen in testis structure sighted by morphometry: testicular weight (C = 0.078 0.003, CF = 0.063 0.002/g, p=0.002), tubular diameter (C = 455.4 2.7, CF = 393.5 3.1/m, p=0.0001), tubular lumen (C = 310.6 2.5, CF = 254.8 2.9/m, p=0.0001) and epithelial height (C = 144.8 0.9; CF = 138.7 1.3/m, p=0.0005). Chemioluminesense was performed to evaluate testosterone serum levels, which was decreased (C = 6.6 2.8, CF = 0.5 0.2/ng/ml, p=0.04). Western blotting showed an increase in the protein expression of leptins receptor (C = 0.81 0.04, CF = 1.28 0.15/g, p=0.02), luteinizing hormone receptor (C = 0.92 0.05, CF = 0.74 0.05/g, p=0.01), aromatase (C = 0.32 0.03, CF = 0.48 0.05/g, p=0.03) and apoptose proteins (C = 0.27 0.02; CF = 0.42 0.03/g, p=0.002), while follicle stimulant hormone receptor (C = 0.76 0.06, CF = 0.56 0.04/g, p=0.02), steroidogenesis protein receptor (C = 1.009 0.065, CF = 0.584 0.060/g, p=0.0007), vascular-endotelial growth factor (C = 0.33 0.08, CF = 0.05 0.01/g, p=0.009), androgen receptor (C = 0.97 0.11, CF = 0.59 0.07/g, p=0.02) and proliferating cell nuclear antigen (C = 0.93 0.11; CF = 0.48 0.07/g, p=0.01) were reduced by maternal caffeine treatment. This study suggests that caffeine consumption during pregnancy appears to be detrimental to fertility in male offspring, by testicular programming, which generates disturbances in testicular function.

Este estudo teve como objetivos caracterizar modificações no tamanho testicular e concentrações sanguíneas de testosterona relacionadas à idade, avaliar a presença de espematozóides epididimários, mensurar o diâmetro dos túbulos seminíferos e determinar o grau de maturação testicular, através da presença das células germinativas mais avançadas no epitélio seminífero de machos Crioulos no período da peri-puberdade. Os animais foram castrados cirurgicamente. Foi avaliada a circunferência torácica para estimativa do peso corporal. Trinta e quatro equinos foram agrupados em quatro categorias. O grupo I (GI) com quatro potros com idade de até 14 meses. O grupo II (GII) composto por sete animais com mais de 14 meses e menos de 17 meses. No terceiro grupo (GIII) foram incluídos 14 animais com mais de 17 meses e menos de 19 meses de idade e o último grupo (GIV) composto por nove equinos com mais de 19 meses e menos de 34 meses de idade. Após a castração os testículos foram pesados e medidos. Um fragmento foi coletado para posterior avaliação histológica e verificação do diâmetro dos túbulos seminíferos, além da presença de células germinativas do epitélio seminífero em diferentes fases de desenvolvimento. Uma amostra de sangue foi coletada para posterior determinação da concentração plasmática de testosterona. O peso médio dos animais no GI aumentou de 232 kg para 321 kg nos garanhões do GIV. Não houve diferença significativa entre medidas dos testículos direito e esquerdo. O peso e volume testicular apresentaram variações mais acentuadas nos animais no GIV e diferiram significativamente em relação aos animais mais jovens. Valores plasmáticos de testosterona não diferiram entre grupos e peso corporal. O diâmetro dos túbulos seminíferos apresentou variação mais marcante nos garanhões do GIV, aumentando de 89,13 μm nos potros do GI para 168,24 μm nos garanhões do GIV. Em média, 17,5% dos túbulos seminíferos não apresentaram células germinativas no GI, decrescendo para 5,4% no GII, 5,2% no GIII e 0,8% no GIV. O número de túbulos contendo espemátides maduras e espermatozóides aumentou conforme o avanço da idade dos animais. As variações mais acentuadas no incremento do volume testicular e aumento do diâmetro dos túbulos seminíferos coincidiram com a uma elevada presença de espermatozoides nos túbulos. Em conclusão, todos os animais com 20 meses de idade ou mais alcançaram a puberdade e os primeiros espermatozóides epididimários foram encontrados em potros com 16 meses. Ao testículo atingir um volume e peso testicular de 16cm3 e 23g, respectivamente, todos os animais apresentaram espermatozoides epididimários. / The objectives of this study were to characterize age-associated changes in testicular size and blood concentrations of testosterone, as well as evaluate the presence of epididymal sperm. The testicular maturity was evaluated by measuring seminiferous tubule diameter and the presence of the most advanced germ cells in the seminiferous epithelium of colts in the peri–puberty period. The animals were surgically castrated and thorax circumference was taken to estimate the body weight. Thirty four male horses were grouped into four categories: Group I (GI) with four foals aged up to 14 months; Group II (GII) with seven animals over 14 months and less than 17 months; The third group (GIII) included 14 animals over 17 months and less than 19 months; Group (GIV) was composed of nine horses over 19 months and under 34 months of age. After castration the testes were weighed and measured. A segment was collected for subsequent histological evaluation, including measurement of the diameter of the seminiferous tubules and the presence of germ cells of the seminiferous epithelium at different stages of development. A blood sample was collected for determination of plasma testosterone. The average body weight of the animals increased significantly from 232 kg in GI to 321 kg for horses in GIV. There was no difference between measures taken on right and left testes. The testicular weight and volume was greater in animals of GIV and differed significantly compared to the younger animals. Plasma levels of testosterone did not differ between age groups. The diameter of the seminiferous tubules increased from 89.13 μm in foals of GI to 168.24 μm in horses of GIV. On average, 17.5% of the seminiferous tubules had no germ cells in animals of GI, decreasing to 5.4% in GII, 5.2% in GIII and 0.8% in GIV. The number of tubules containing mature spermatids and spermatozoa increased with age. Most significant variations in the increase of testicular volume and diameter of seminiferous tubules were associated with a high presence of spermatozoa in the tubules. In conclusion all animals with 20 months of age or more had reached puberty in the present study and the first spermatozoa appeared in 16 month old colts. All animals presented epididymal sperm when testicular volume and weight were over 16cm3 and 23g, respectively.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Metabólitos ativos da cafeína apresentam toxicidade, podendo causar efeitos deletérios em muitos órgãos no período fetal pelo consumo materno. O estudo objetivou avaliar o papel da administração de cafeína durante a gestação em vários parâmetros importantes para a função testicular em camundongos adultos C57BL/6. Fêmeas grávidas foram divididas em: grupo controle (C), que receberam injeções de sol. salina (0,9% NaCl) e grupo cafeína (CF), que receberam diariamente injeções subcutâneas de 20 mg / kg de cafeína. Filhotes tiveram livre acesso à ração padrão desde o desmame até três meses de idade, quando foram mortos. O grupo CF apresentou uma redução no consumo alimentar (C = 4,36 0,14; CF = 3,79 0,05/g, p<0,05) e ganho de massa corporal (C = 25,73 0,14; CF = 21,08 0,41/g, p=0,0001). Ainda este grupo, apresentou alterações estruturais nos testículos da prole, como redução no peso relativo (C = 0,078 0,003; CF = 0,063 0,002/g, p=0,002), diâmetro tubular (C = 455,4 2,7; CF = 393,5 3,1/m, p=0,0001), lume tubular (C = 310,6 2,5; CF = 254,8 2,9/m, p=0.0001) e altura do epitélio seminífero (C = 144,8 0,9; CF = 138,7 1,3/m, p=0,0005) observados pela técnica de morfometria. Testosterona sérica avaliada por quimioluminescência foi reduzida (C = 6,6 2,8; CF = 0,5 0,2/ng/ml, p=0.04). Western Blotting foi utilizado para análise de expressão protéica. Houve aumento do receptor de leptina (C = 0,81 0,04; CF = 1,28 0,15/g, p=0,01), do receptor para o hormônio leteinizante (C = 0,92 0,05; CF = 0,74 0,05/g, p=0,01),da aromatase (C = 0,32 0,03; CF = 0,48 0,05/g, p=0,03) e do regulador pró apoptose (C = 0,27 0,02; CF = 0,42 0,03/g, p=0,01) enquanto o receptor para hormônio folículo estimulante (FSHR) (C = 0,76 0,06; CF = 0,56 0,04/g, p=0,02), o receptor para proteína reguladora da esteroidogênese (C = 1,009 0,065; CF = 0,584 0,060/g, p=0,0007), a proteína do fator de crescimento vascular endotelial (C = 0,33 0,08; CF = 0,05 0,01/g, p=0,009), o receptor de androgênio (C = 0,97 0,11; CF = 0,59 0,07/g, p=0,02) e o antígeno nuclear de proliferação celular (C = 0,93 0,11; CF = 0,48 0,07/g, p=0,01) foram reduzidos. Este estudo sugere que o consumo de cafeína durante a gravidez parece ser nocivo à fertilidade de animais machos, caracterizando o fenômeno de programação, o que gera alterações funcionais e estruturais nos testículos da prole adulta. / Active metabolites of caffeine present toxicity, may cause deleterious effects on many organs in the fetal period by maternal consumption. This study aimed to evaluate the role of caffeine administration during pregnancy on several parameters of adult male testis in C57BL/6 mice. Pregnant C57BL/6 female mice were divided into two groups (n = 10): Control group (C), dams were injected with the vehicle only (saline 0.9 % NaCl); Caffeine group (CF), dams received daily a subcutaneous injection of 20 mg/kg of caffeine/day (1 mg/mL saline). Pups had free access to standard chow since weaning to 3 months of age, when they were killed. Treatment of dams with caffeine did not produce any visible signs of maternal toxicity. At adulthood CF group presented a reduction in the food consumption (C = 4.36 0.14, CF = 3.79 0.05/g, p<0.05) and body weight gain (C = 25.73 0.14, CF = 21.08 0.41/ g, p=0.0001). Several alterations were seen in testis structure sighted by morphometry: testicular weight (C = 0.078 0.003, CF = 0.063 0.002/g, p=0.002), tubular diameter (C = 455.4 2.7, CF = 393.5 3.1/m, p=0.0001), tubular lumen (C = 310.6 2.5, CF = 254.8 2.9/m, p=0.0001) and epithelial height (C = 144.8 0.9; CF = 138.7 1.3/m, p=0.0005). Chemioluminesense was performed to evaluate testosterone serum levels, which was decreased (C = 6.6 2.8, CF = 0.5 0.2/ng/ml, p=0.04). Western blotting showed an increase in the protein expression of leptins receptor (C = 0.81 0.04, CF = 1.28 0.15/g, p=0.02), luteinizing hormone receptor (C = 0.92 0.05, CF = 0.74 0.05/g, p=0.01), aromatase (C = 0.32 0.03, CF = 0.48 0.05/g, p=0.03) and apoptose proteins (C = 0.27 0.02; CF = 0.42 0.03/g, p=0.002), while follicle stimulant hormone receptor (C = 0.76 0.06, CF = 0.56 0.04/g, p=0.02), steroidogenesis protein receptor (C = 1.009 0.065, CF = 0.584 0.060/g, p=0.0007), vascular-endotelial growth factor (C = 0.33 0.08, CF = 0.05 0.01/g, p=0.009), androgen receptor (C = 0.97 0.11, CF = 0.59 0.07/g, p=0.02) and proliferating cell nuclear antigen (C = 0.93 0.11; CF = 0.48 0.07/g, p=0.01) were reduced by maternal caffeine treatment. This study suggests that caffeine consumption during pregnancy appears to be detrimental to fertility in male offspring, by testicular programming, which generates disturbances in testicular function.