Orientador: Gil Guerra Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-29T05:42:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Scolfaro_MarciaRibeiro_D.pdf: 14734881 bytes, checksum: deb593e73bb78c3c7756ecfcf443971b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Justificativa: A Disgenesia Gonadal Parcial (DGP) é um distúrbio da diferenciação sexual caracterizado por testículos disgenéticos bilaterais, derivados dos duetos de Müller e criptorquidismo em pacientes com cariótipo 46,XY. Entretanto, os critérios histológicos diagnósticos são pouco utilizados. Objetivo: Avaliar as alterações histológicas das gônadas de crianças com DGP. Casuística e Metodologia: Entre 1996 e 1998, 13 crianças com DGP foram avaliadas em nosso serviço. O diagnóstico clínico de DGP baseou-se na presença de cariótipo 46,XY, ambigüidade genital, altas concentrações séricas de FSH e baixas de hormônio anti-Mülleriano, e baixa produção de testosterona após teste de estímulo com gonadotrofina coriônica humana, sem acúmulo dos seus precursores, e presença de derivados dos duetos de Müller. Foram realizadas biópsias de 22 das 26 gônadas (a idade na época da biópsia foi de 11 meses a 10 anos). Foi realizada a análise hist01ógica microscópica convencional para avaliar o diâmetro tubular médio, o indice de fertilidade tubular e o número de células de Sertoli por corte tubular. Resultados: Todas as 26 gônadas estavam localizadas fora das saliências labioescrotais. Os achados histológicos variaram desde apenas uma redução no tamanho tubular até achados de uma gônada "em fita". Cinco das 22 gônadas grosseiramente lembravam gônadas "em fita". O diâmetro tubular médio estava gravemente reduzido (> 30% de redução em relação ao normal para pacientes da mesma idade) em 4 gônadas, marcadamente reduzido (10% - 30%) em 11, levemente reduzido « 10%) em uma e normal em outra gônada. O indice de fertilidade tubular, expresso em % de túbulos que contêm pelo menos uma célula germinativa,estava gravementereduzido « 30% dos valores normais) em 9 gônadas, marcadamente reduzido (50% - 30%) em duas, e normal em 6 gônadas. O número de células de Sertoli por corte tubular estava elevado em 16 gônadas e normal em uma. Túbulos finos rodeados por tecido fibroso foram ocasionalmente observados. Conclusão: Os achados histológicos confirmaram o diagnóstico clínico de DGP em todos os pacientes desta amostra. Devido a variabilidade da análise histológica gonadal, um estudo morfométrico cuidadoso torna-se necessário para o estabelecimento do diagnóstico de DGP / Abstract: Background: Partial Gonadal Dysgenesis (pGD) is a sexual differentiation disorder characterized by bilateral dysgenetic testes, persistent Müllerian structures, and cryptorchidism in individuaIs with 46,XY karyotype. However, the histologic criteria for the diagnosis of PGD are poorly established. Objective: To determine gona dal histology in children with PGD. Patients and methods: Between 1996 and 1998, 13 patients with PGD were evaluated on our service. The clinical diagnosis of PGD was based on a 46,XY karyotype, sex ambiguity, high levels of FSH and low levels of AMH, a decreased testosterone response to hCG stimulation without accumulation of testosterone precursors, and the presence of Müllerian structures. Biopsies were performed for 22 of 26 gonads (patient age at the time of biopsy, 11 months to 10 years). Conventional microscopy was used to evaluate mean tubular diameter, tubular fertile index and number of Sertoli cells per tubular profile. Results: Ali 26 gonads were located outside of the labioscrotal folds. Their histologic features varied from only a reduction in tubular size to features of a streak gonad. Five of the 22 gonads grossly resembled a streak gonad. The mean tubular diameter was severely reduced (> 30% reduction relative to the normal tubular diameter for the patient's age) in 4 gonads, markedly reduced (10% - 30%) in 11, slightly reduced « 10%) in one, and normal in one gonad. The tubular fertile index, expressed in percentage of tubular profiles containing germ cells,was severely reduced « 30%of normal values)in 9 gonads, markedly reduced (50% -30%) in 2 gonads, and normal in 6 gonads. The number of Sertoli cells per tubular profile was elevated in 16 gonads and normal in one gonad. Thin tubules surrounded by fibrous tissue were occasionally observed. Conclusion: The histologic findings confirmed the clinical diagnosis of PGD in every patient in the present series. However, gonadal histology is variable, and careful morphometric evaluation may be necessary to establish the diagnosis / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

En los tejidos de mamífero los glicerofosfolípidos (GPL) se presentan en tres subclases dependiendo de si la cadena hidrofóbica que se une a la posición sn-1 del esqueleto de glicerol es un ácido graso, un alcohol graso, o un aldehído graso unidos a través de una unión éster, 1-O-alquil-éter, o 1-alc-1’enil-éter, respectivamente, estando la posición sn-2 ocupada por un ácido graso (las subclases fosfatidil-, plasmanil- o plasmenil- de GPL respectivamente). En la clase triglicéridos (TG) es posible encontrar subclases similares: los bien conocidos triacilgliceroles (TAG), con tres ácidos grasos esterificados al glicerol, y los TG con una unión éter (TUE), esto es, un alcohol graso o un aldehído graso en la posición sn-1 del glicerol y ácidos grasos en las posiciones sn-2 y sn-3 del glicerol (1-O-alquil- y 1-O-alc-1’-enil-, 2,3-diacil-sngliceroles, aquí abreviados como alquil-DAG y alquenil-DAG, respectivamente). En general es escaso y fragmentario el conocimiento actual sobre las características de las subclases individuales de GPL y de TG, y cómo se relacionan entre sí en células y tejidos animales, especialmente en lo que concierne a los TUE. El objetivo de este trabajo de tesis fue el de reunir información sobre la bioquímica de estas subclases, abarcando aspectos de su contenido y composición en distintas áreas del sistema reproductor masculino. Tomando a la rata como modelo, en el testículo y en el epidídimo se estudiaron los cambios de estas subclases durante el desarrollo postnatal y, en el adulto, los efectos que sobre ellas produce el estrés térmico. En espermatozoides se determinó la distribución entre la cabeza y la cola de las subclases de GPL, y los efectos que sobre estas últimas ejercen la capacitación y la reacción acrosomal inducidas in vitro. Durante el desarrollo postnatal, en el testículo aumentaron los contenidos de todas las subclases de GPL de colina y de etanolamina (CGP y EGP, respectivamente), que se enriquecieron en ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) de 20 y 24 carbonos. En función de la edad postnatal, en ellas disminuyó la proporción de ácido araquidónico (20:4n-6) y aumentó notoriamente la de ácido docosapentaenoico (22:5n-6). En el adulto los dos plasmalógenos, en especial la plasmeniletanolamina, fueron muy ricos en 22:5n-6. Un cambio en el mismo sentido se produjo durante la diferenciación celular desde espermatocitos en paquiteno a espermátidas redondas, con una relación entre 22:5n-6 y 20:4n-6 cercana a 1 en fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina, y muy superior a 1 en los correspondientes plasmalógenos, en especial plasmeniletanolamina. Ambas células espermatogénicas contuvieron los 1-O-alquil GPL plasmanilcolina y plasmaniletanolamina, la primera potencial precursora del lípido bioactivo PAF y la segunda precursora de la abundante plasmeniletanolamina. Los TUE sufrieron incrementos en su concentración por gramo de tejido en dos etapas clave de la primera onda de espermatogénesis: los días postnatales 21 y 45 (PN 21 y PN45), en los que se sabe que un número importante de los primeros espermatocitos primarios y de las primeras espermátidas, respectivamente, mueren por apoptosis. La exposición transitoria e intermitente de los testículos a la hipertermia (15 min a 43 ºC, una vez por día durante 5 días consecutivos) llevó a la pérdida selectiva de espermatocitos primarios y espermátidas jóvenes durante las primeras 1-2 semanas después del tratamiento, recomenzando luego la espermatogénesis a partir de las espermatogonias supervivientes. En este lapso, disminuyeron tanto las células como sus subclases lipídicas características, recuperándose ambas luego con la recuperación de la espermatogénesis. Las especies de los GPL de colina y de etanolamina ricas en 20:4n-6 reaparecieron antes que las ricas en 22:5n-6, a semejanza de lo que ocurrió en el desarrollo normal, pues primero reaparecieron los espermatocitos y luego las espermátidas. Durante las primeras semanas posttratamiento, cuando los túbulos seminíferos exhibieron una gran pérdida de células germinales con supervivencia de las células de Sertoli, sobre todo en la primera y segunda semanas, los niveles de TAG y de TUE, así como de ésteres de colesterol, aumentaron varias veces, para volver a disminuir luego. Atribuimos este aumento transitorio a la actividad fagocítica de las células de Sertoli. En el tejido epididimal normal del animal adulto estuvieron presentes las tres subclases de GPL. Con respecto a los lípidos neutros, además de grandes cantidades de TAG, se hallaron las dos subclases de TUE, alquil-DAG y alquenil-DAG, en cantidades mayores que el tejido testicular. En ambos tejidos los primeros predominaron sobre los segundos. Otra diferencia notable fue que en los lípidos del tejido epididimal coexistieron PUFA de 20 y 22 carbonos de las series n-6 (20:4n-6, 22:5n-6) y n-9 (22:3n-9, 22:4n-9). Al día postnatal 30, aún con escasa diferenciación y sin espermatozoides en sus conductos, el epidídimo contenía niveles de plasmeniletanolamina con niveles de PUFA n-9 más altos que las demás subclases. Con el avance del desarrollo, estos PUFA se incrementaron en las demás subclases, primero en la fosfatidilcolina (P49- P55) y luego en la plasmanil y en la plasmenicolina (P55-adultez). Por su parte los TUE epididimales se incrementaron notablemente el día posnatal 49, en coincidencia con el hecho de que poco antes (P45) había llegado a su lumen una oleada transitoria de células germinales desde el testículo, que en pocos días fueron reemplazadas por los primeros espermatozoides. Dado que los espermatozoides de rata se enriquecen progresivamente en plasmenilcolina con 22:4n-9 a medida que maduran en el epidídimo, esperábamos encontrarla en mayor concentración en alguno de los segmentos epididimales. Sin embargo, en las tres regiones epididimales el porcentaje de plasmeniletanolamina fue mayor que el de plasmenilcolina. La pequeña región del corpus fue la que exhibió la más alta concentración (μg por gramo de tejido) de plasmeniletanolamina y de su precursora la plasmaniletanolamina, además de alquil-DAG y alquenil-DAG, todos ellos ricos en PUFA n-9. La plasmeniletanolamina del corpus podría ser la precursora de la plasmenilcolina y ésta ser transferida a los espermatozoides en tránsito. Los mecanismos involucrados deben aún establecerse. Los efectos de la hipertermia sobre el epidídimo fueron muy distintos de los descritos en el testículo. Los conductos epididimales se vaciaron progresivamente de los espermatozoides que contenían inicialmente en el lapso de unas seis semanas posttratamiento, lo que concordó con el hecho de que los lípidos epididimales se empobrecieron en 22:5n-6 y que la plasmenicolina con 22:4n-9 de la cauda disminuyó. Sin embargo, los niveles de fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina, y los correspondientes plasmalógenos, sobre todo en el caput se incrementaron sobre los niveles de los controles no tratados durante el mismo período. Llamativamente, los contenidos por gramo de tejido, tanto alquenil-DAG como alquil- DAG, se incrementaron agudamente en las tres regiones del epidídimo (caput, corpus, cauda) durante la primera semana post-hipertermia, y habían bajado nuevamente a la semana 2, con una divergencia interesante: en el caso de las especies con PUFA n-6, continuaron bajando, pero en el caso de las especies con 18:1n-9 y PUFA n-9 del caput, volvieron a incrementarse hacia la semana 6. Dado que el tejido testicular en este momento (día 42 post-hipertermia) estaba en vías de recuperación, este incremento podría reflejar una reacción celular específica de las células epididimales. Entre estas, merecen investigarse algunas células del sistema mononuclear fagocítico (células dendríticas, macrófagos), que están normalmente presentes en el compartimiento basal del epitelio epididimal, especialmente en el segmento inicial del caput. En el animal adulto en condiciones fisiológicas, la expresión (mRNA) de la alquilgliceronafosfato sintasa (AGPS), una enzima peroxisomal clave involucrada en la síntesis de lípidos con uniones éteres, fue significativamente menor en el testículo que en el epidídimo. En este último, la AGPS se expresó más activamente en el corpus que en caput y en éste más que en la cauda. Esto demostró la importancia de los dos primeros segmentos del epidídimo en la biosíntesis de lípidos con uniones éteres. Inmediatamente después del último de los 5 episodios de hipertermia aplicados, en el testículo se detuvo temporariamente la expresión de AGPS, mientras que en el epidídimo no. En contraste, a la semana 2 post-hipertermia el nivel de mRNA de la enzima en el testículo se había recuperado, mientras en el epidídimo se había reducido, tanto en el caput como en el corpus. Estos resultados sugieren que en el epidídimo la presencia de espermatozoides en el lumen es importante para que las enzimas involucradas en la biosíntesis de lípidos con una unión éter se expresen en las células del epitelio. En la primera parte del tercer capítulo se determinó la distribución entre la cabeza y la cola espermáticas de las subclases de los GPL de colina y de etanolamina. Un hallazgo original fue que la cabeza espermática, pese a su pequeño tamaño, concentró una proporción mayor de la plasmenilcolina total rica en 22:4n-9 que la cola. La cola a su vez contuvo más fosfatidiletanolamina rica en 20:4n-6 y 22:5n-6 y fosfatidilcolina rica en 22:5n-6, que la cabeza. Llamó la atención además que la cola contuviera plasmanilcolina y plasmaniletanolamina muy ricas en PUFA n-6. En la segunda parte de este capítulo se investigó la participación de las cuatro subclases principales de GPL del espermatozoide en la capacitación y la reacción acrosomal. Con respecto a controles no incubados, se produjeron hidrólisis de GPL de intensidad creciente en el siguiente orden: controles incubados sin agregados, gametas capacitadas, y gametas capacitadas que sufrieron la reacción acrosomal. Tal hidrólisis fue selectiva, pues afectó con intensidad creciente, en ese mismo orden, a las subclases fosfatidilcolina y fosfatidietanolamina. Por lo tanto estos eventos, importantes para la función de los espermatozoides, resultaron en un enriquecimiento relativo de las gametas en plasmalógenos. Los resultados de esta tesis abrieron nuevos interrogantes que serán objeto de futuros estudios sobre el rol biológico, propiedades, biosíntesis y catabolismo de los GPL y TG con una unión éter en células del tracto reproductor. / In mammalian tissues, glycerophospholipids (GPL) occur in three subclasses, depending on whether the hydrophobic chain that is linked to the sn-1 position of the glycerol backbone is an ester-bound fatty acid, an ether-bound fatty alcohol, or an alkenyl-ether-bound fatty aldehyde, the sn-2 position being occupied by a fatty acid (the phosphatidyl-, plasmanyl- or plasmenyl- GPL subclasses, respectively). In the class of triglycerides (TG), it is possible to find similar subclasses: the well-known triacylglycerols (TAG), with three fatty acids ester-bound to glycerol, and the etherlinked triglycerides (EL-TG), namely TG with a fatty acohol or a fatty aldehyde at the sn-1 position of glycerol, and fatty acids at the sn-2 and sn-3 positions (1-O-alky- or 1- O-alk-1’-enyl-, 2,3-diacyl-sn-glycerols, here abbreviated as alkyl-DAG and alkenyl- DAG, respectively). The knowledge about the characteristics of GPL and TG subclasses and their possible metabolic relationships in animal tissues and cells is at present scarce and fragmentary, especially regarding the EL-TG. The aim of this work was to gather information about the biochemistry of these subclasses, covering aspects of their levels and composition in different areas of the male reproductive system. Taking the rat as a model, in the testis and the epididymis the changes in these subclasses were studied during the postnatal development and, in the adult, the effects induced by heat stress. In spermatozoa, the distribution between head and tail of GPL subclasses, and the effects on the latter of the in vitro-induced capacitation and acrosome reaction were investigated. During postnatal development, the testicular content of all subclasses of choline and ethanolamine glycerophospholipids (CGP and EGP, respectively) increased, with a concomitant enrichment in 20 to 24 carbon atom polyunsaturated fatty acids (PUFA). As the postnatal age increased, in all of them the proportion of arachidonic acid (20:4n- 6) was reduced while that of docosapentaenoic acid (22:5n-6) increased. In adulthood the two plasmalogens, especially plasmenylethanolamine, were very rich in 22:5n-6. Similar increases in the percentage of 22:5n-6 was observed during pachytene spermatocytes differentiation into round spermatids, the 22:5n-6/20:4n-6 ratio being nearly 1:1 in phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine and a significantly higher ratio in the corresponding plasmalogens, especially plasmenylethanolamine. Both spermatogenic cells contained the 1-O-alkyl-GPL, plasmanylcholine and plasmanylethanolamine, the former being the potential precursor of the bioactive lipid PAF and the latter the metabolic precursor of plasmenylethanolamine. The EL-TG showed increases in their concentration per gram of tissue in two key stages of the first wave of spermatogenesis, postnatal days 21 and 45 (PN21 and PN45), when a considerable number of the first pachytene spermatocytes and the first round spermatids, respectively, are known to die by apoptosis. Transient and intermittent exposures of testicular tissue to hyperthermia (15 minutes to 43ºC, once a day during five consequently days) resulted in the selective loss of pachytene spermatocytes and early spermatids during the first 1-2 weeks after treatment, spermatogenesis restarting from the surviving spermatogonia afterwards. During this period, the numbers of germ cells and their characteristic lipids decreased, both increasing again with the recovery of spermatogenesis. The 20:4n-6-rich species of choline and ethanolamine GPL reappeared before those rich in 22:5n-6, just as it occurred during normal development, as spermatocytes reappeared before spermatids. During the first weeks post-treatment, when seminiferous tubules exhibited a profound loss of virtually all germ cell types with survival of Sertoli cells, the levels of TAG and TUE, and also of cholesterol esters, increased several fold, to decrease again afterwards. This transient accumulation was attributed to the phagocytic activity of Sertoli cells. In the epididymal tissue of adult rats, the three GPL subclasses were present. Regarding neutral lipids, in addition to large amounts of TAG, alkyl-DAG and alkenyl- DAG were found in significantly larger amounts than in testes. In both tissues, alkyl- DAG predominated over alkenyl DAG. Another notable difference with testes was that in epididymal lipids PUFA with 20 and 22 carbons of the n-6 series (20:4n-6, 22:5n-6) coexisted with PUFA of the n-9 series (22:3n-9, 22:4n-9). At postnatal day 30, in a scarcely differentiated epithelium and with no spermatozoa in its ducts, the epididymis contained higher levels of n-9 PUFA in plasmenylethanolamine than other subclasses. With the progress of development, these PUFA were increased in other subclasses, first in phosphatidylcholine (PN49 to 55) and then in plasmanyl- and plasmenylcholine (PN55 to adulthood). Regarding epididymal EL-TG, their levels increased significantly at PN49, coinciding with the fact that shortly before (PN45) a transient wave of germ cells from the testes had reached the epididymal tubules, being then replaced by the first spermatozoa. Because rat spermatozoa become progressively rich in plasmenylcholine with 22:4n-9 as they mature during their epididymal transit, we expected to find a greater concentration of this lipid in one of the epididymal segments, caput, corpus or cauda. However, in all the three regions the percentage of plasmenylethanolamine was higher than that of plasmenylcholine. The small corpus region was the one to exhibit the highest concentration (μg per gram of tissue) of plasmenylethanolamine and of its precursor, plasmanylethanolamine, in addition to alkyl-DAG and alkenyl-DAG, all of them rich in PUFA n-9. This suggested that the corpus plasmenyletanolamine could play a role as a precursor of the plasmenylcholine to be transferred to spermatozoa in transit. The possible mechanisms involved in these events are jet to be established. The effects of hyperthermia on the epididymis were very different from those described in the testis. The epididymal ducts progressively lost most of the spermatozoa that were originally present in their lumena in six weeks post-treatment, which agreed with the fact that epididymal lipids were depleted of 22:5n-6 and that 22:4n-6-rich plasmenycholine from cauda also decreased. However, the levels of phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, and the corresponding plasmalogens of the caput region showed a significant buildup during the same period. Interestingly, the content per gram of tissue of alkyl-DAG and alkenyl-DAG increased sharply in the three epididymal regions (caput, corpus, cauda) during the first week post-hyperthermia and had decreased again at week 2, with an interesting divergence: in the case of species with n-6 PUFA, they continued to decline, but in the case of species with 18:1n-9 and n-9 PUFA from the caput region, they increased again by week six post treatment. Since the testicular tissue at this time (day 42 posthyperthermia) was still recovering, this increase could reflect a specific cellular response of the epididymal cells. Among these, the role of some cells of the mononuclear phagocytic system (dendritic cells, macrophages), which are normally present in the basal compartment of the epididymal epithelium, is worth investigating. In the adult animal in physiological conditions, the expression (mRNA) of alkylglycerone phosphate synthase (AGPS), a key peroxisomal enzyme involved in the synthesis of ether-linked lipids, was significantly lower in the testis than the epididymis. In the latter, AGPS was more actively expressed in the corpus than the caput, and in the latter the expression was greater than in the cauda. These findings demonstrated the importance of the first two epididymal segments in the biosynthesis of lipids with an ether linkage. Immediately after the last of the 5 episodes of hyperthermia, the mRNA expression significantly decreased in the testis, whereas in the epididymis remained unchanged. By contrast, at week 2 post-hyperthermia the level of mRNA of the enzyme in the testes had recovered, while in the caput and corpus epididymal segments was reduced. These results suggest that in the epididymis the presence of spermatozoa in the lumen is important for the enzymes involved in ether lipid biosynthesis to be expressed in the epithelial cells. In the first part of the third chapter, distribution between the sperm head and the sperm tail of CGP and EGP was determined. A novel finding was that, despite its small size, the head concentrated more of the total 22:4n-9-rich plasmenylcholine than the tail. The tail, in turn, contained more n-6 PUFA-rich phosphatidylethanolamine and phosphatidylcholine than the head. Remarkably, the sperm tail also contained n-6- PUFA-rich plasmanylcholine and plasmanylethanolamine. In the second part of this chapter, the involvement of the four major subclasses of sperm GPL in sperm capacitation and the acrosomal reaction was investigated. Compared to non-incubated controls, GPL hydrolysis of increasing intensity occurred in the following order: controls incubated with no additions, capacitated sperm, and capacitated sperm that had undergone the acrosomal reaction. Such hydrolysis was selective, as it increasingly affected, in that same order, the phosphatidyldholine and phosphatidylethanolamine subclasses. Thus these events, important for the function of spermatozoa, resulted in a relative enrichment in plasmalogens of the gametes. The results in this thesis opened new questions that will be the subject of future research on the biological role, properties, biosynthesis and catabolism of the GPL and TG with an ether bound in the reproductive tract cells.

A degeneração testicular (DT) possui grande relevância dentre os distúrbios da reprodução e pode ser causada pelo aumento da temperatura testicular. Este provoca aumento do metabolismo celular, levando ao estresse oxidativo (EO) e apoptose. O tratamento usual consiste na retirada do agente causador e administração de antioxidantes; entretanto, pode não ser eficiente. Dessa forma, o presente estudo preconizou o tratamento da DT por meio de agentes com poder proliferativo: vitamina A e laserterapia de baixa intensidade (LTBI). Foram realizados três experimentos; o experimento 1 objetivou definir a dose de energia da LTBI necessária para a bioestimulação testicular. Foram utilizados seis carneiros distribuídos em três grupos: GC) insulação escrotal (IE) e sem tratamento (n=2); G28) IE e tratado com LTBI com 808 nm de comprimento de onda, 30 mW de potência e 28 J/cm² de densidade de energia por 15 dias a cada 48 horas (n=2); G56) IE e tratado com LTBI com 808 nm, 30 mW e 56 J/cm² por 15 dias a cada 48 horas (n=2). Foram feitas análises clínicas, reprodutivas e histopatológicas. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey. Apesar da LTBI diminuir as taxas de espermatozoides com membrana acrossomal íntegra, esta foi eficiente em aumentar a população celular dos túbulos seminíferos no G28. Portanto, a LBTI provocou efeito bioestimulatório em testículos degenerados de carneiros. O experimento 2 objetivou validar a técnica de avaliação do EO espermático por meio da sonda fluorescente CellROX Deep Red®. Foram realizados dois experimentos; o primeiro utilizou ejaculados de três carneiros tratados em T0 (ejaculado não submetido à indução de EO), T50 (50% não induzido e 50% induzido ao EO) e T100 (submetido ao EO). Os dados foram submetidos à regressão linear. No segundo experimento foram utilizados 16 carneiros submetidos à IE. Foram feitas avaliações do EO antes e após a IE. Os dados foram submetidos à ANOVA e teste LSD de Fisher. O coeficiente de determinação foi de 0,728 e houve aumento do EO após a IE. Assim, a sonda CellROX® foi capaz de detectar o EO espermático. No experimento 3 foi proposto tratamento para a DT baseado na suplementação vitamínica ou LTBI. Foram utilizados 33 carneiros distribuídos em seis grupos: CC) sem IE e sem tratamento (n=5); CA) sem IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); CL) sem IE e tratado com LTBI protocolo G28 (experimento 1) (n=5); IC) IE e sem tratamento (n = 5); IA) IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); IL) IE e tratado com LTBI protocolo G28 (n=6). Foram realizadas análises clínicas, reprodutivas, hormonais e histopatológicas. Os dados foram analisados usando o procedimento de modelos mistos e os efeitos dos tratamentos foram avaliados utilizando contrastes ortogonais. Não houve efeito benéfico dos tratamentos para as características ultrassonográficas, qualidade espermática, concentração de testosterona e aspectos histopatológicos. Assim, os tratamentos não foram eficientes para melhorar a qualidade espermática nem promover a proliferação celular. / The testicular degeneration (TD) has great significance among the reproductive disorders and one of the main causes is the increase in testicular temperature. High testicular temperature results in increase cellular metabolism, leading to oxidative stress and apoptosis. The treatment consists in removing the causative agent and administration of antioxidants; however, it could be not efficient. The objective of this study is to recommend the treatment of TD by administering agents with proliferative action: vitamin A and low level laser therapy (LLLT). For this, three experiments were conducted. In experiment 1 the objective was to define the dose of energy for LLLT testicular biostimulation; it was used six rams distributed in three groups: GC) scrotal insulation (SI) and untreated (n=2); G28) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 28 J/cm ² of power density for 15 days every 48 hours (n=2); G56) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 56 J/cm² for 15 days every 48 hours (n=2). Clinics, reproductive and histopathological analyzes were done. Data were subjected to analysis of variance and Tukey test. The rates of sperm with intact acrosome membrane were decreased by LLLT, but the LLLT was effective in increasing the cell population of the seminiferous tubules in the G28. Thus, LLLT was able of causing stimulatory effect in degenerate testis of rams. The objective of experiment 2 was to assess the technique of evaluation of sperm oxidative stress (OS). This study was divided in two experiments; in experiment 1 was used ejaculates of three rams treated in T0 (ejaculate that was not submitted to OS induction), T50 (50% without OS and 50% inducted to OS) and T100 (entire submitted to OS induction). Data obtained were evaluated by linear regression analysis. In experiment 2, sixteen rams were submitted to SI. Analyses of OS were done before and after the SI. Data obtained were evaluated by analysis of variance and Fisher\'s LSD test. The determination coefficient was of 0.728 and there were increase in sperm showing OS after SI period. Thus, CellROX® fluorescent probe was able to detect sperm OS. The objective of experiment 3 was establish a treatment for TD based on vitamin A supplementation or LLLT; 33 rams were distributed in six groups: CC) no SI and non-treated (n=5); CA) no SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); CL) no SI and treated with LLLT G28 protocol (experiment 1) (n=5); IC) SI and untreated (n=5); IA) SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); IL) SI and treated with LLLT G28 protocol (n=6). Clinics, reproductive, hormonal and histopathological analyzes were performed. Data were analyzed using the mixed models procedure and treatments effects were evaluated using orthogonal contrasts. There was no beneficial effect of treatments for ultrasonographic characteristics, sperm quality, testosterone concentration and histopathological aspects. Thus, the treatments were not effective for improving sperm quality or promoting cell proliferation.

Os esteróides anabólicos-androgênicos (EAA) se caracterizam como um grupo de compostos naturais e sintéticos formados a partir da testosterona e seus derivados e foram desenvolvidos com finalidade terapêutica. No entanto, a partir da década de 90 o seu uso tem sido considerado um problema de saúde pública; e o seu consumo aumentado entre atletas profissionais e amadores que usam a medicação até 100 vezes acima da dose recomendada. Os efeitos adversos mais comuns relacionados ao uso dos EAA são alterações hepáticas, endócrinas, músculo-esqueléticas, cardiovasculares, imunológicas, reprodutivas, psicológicas, efeitos virilizantes e feminilizantes; e efeitos tóxicos. Apesar de diversos efeitos deletérios, os EAA em dose e freqüência adequada podem ter efeitos benéficos no reparo de feridas, revertendo os efeitos de corticosteróides. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de doses suprafisiológicas (10mg/semana, por 60 dias) do EAA decanoato de nandrolona em 32 ratos (Rattus norvegicus), sendo divididos igualmente para o grupo experimental e controle (8 fêmeas e 8 machos para cada grupo) através da macroscopia, microscopia e morfometria. Os resultadosmostraram que os animais do grupo controle ganharam mais peso ao final do tratamento do que os animais tratados. Os ovários e testículos apresentaram atrofiaenquanto a hipertrofia foi observada nos úteros e próstatas, com diferença de peso significativa estatisticamente em todos os órgãos entre o grupo experimental e controle. Nos testículos, a contagem do número de células de Sertoli não apresentou diferença estatística, assim como no percentual de fibras colágenas entre o grupo experimental e controle. A média da altura das células epiteliais nas próstatas dos animais tratados apresentou-se maior que as do controle. Os ovários das ratas medicadas apresentaram diminuição de corpos lúteos e folículos atrésicos. Os resultados encontrados indicam que as altas doses do EAA decanoato de nandrolona causam alterações macroscópicas e morfológicas nos sistemas reprodutores de machos e fêmeas, podendo ser irreversíveis. O efeito benéfico do uso de EAA na síntese de colágeno não foi observado nos fragmentos de gengiva analisados. / The anabolic-androgenic steroids (AAS) are characterized as a group of natural and synthetic compounds formed from testosterone and derivatives, and have been developed for therapeutic purposes. However, after the 1990s, their utilization has been considered a public health problem and the intake increased among professional and amateur athletes, who ingest up to 100 times the recommended dose of the drug. The most common adverse effects related to utilization of AAS are hepatic, endocrine, muscle-skeletal, cardiovascular, immunological, reproductive and psychological alterations; masculinizing and feminizing effects; and toxic effects. Despite the several harmful effects, utilization of AAS at adequate dose and frequency may have beneficial effects on wound repair, reverting the effects of corticosteroids. This study evaluated the effects of supraphysiological doses (10mg/week, for 60 days) of the AAS nandrolone decanoate in 32 rats (Rattus norvegicus), equally divided into experimental and control groups (8 females and 8 males for each group), by macroscopic, microscopic and morphometric analyses. The results revealed that animals in the control group gained more weight at treatment completion than treated animals. The ovaries and testicles presented atrophy, and hypertrophy of uterus and prostates was observed, with statistically significant difference in weight in all organs between the experimental and control groups. In the testicles, counting of the number of Sertoli cells and the percentage of collagen fibers did not present statistically significant difference between the experimental and control groups. The mean height of epithelial cells in the prostates of treated animals was greater in treated animals than in the control group. The ovaries of treated rats exhibited reduction in corpora lutea and atresic follicles. The results indicated that high doses of AAS nandrolone decanoate caused macroscopic and morphological alterations in the reproductive systems of males and females, which may be irreversible. The beneficial effect of utilization of AAS on the collagen synthesis was not observed on gingival fragments analyzed

Aisla células germinales testiculares de Vicugna pacos, las caracteriza morfológicamente y detecta a nivel transcripcional la expresión de biomarcadores específicos para células madre espermatogoniales en tejido gonadal durante el desarrollo testicular posnatal. Los testículos fueron colectados en estancias alpaqueras de Ayacucho y Huancavelica (Aprox. 4,200 m.s.n.m.) y en el Matadero Municipal de Huancavelica (Aprox. 3,600 m.s.n.m.). La biometría testicular, el aislamiento de espermatogonias y la determinación de viabilidad y rendimiento, así como la citometría de flujo, se hicieron a partir de muestras frescas. Para la extracción de RNA por el método del fenol/cloroformo, los testículos fueron previamente obtenidos por castración del animal vivo, transportados en nitrógeno líquido a -196°C y almacenados en ultracongelación a -80°C.Se diseñaron primers con el Programa Oligo6, a partir de exones rescatados y RNA ensamblados para alpaca, tomando como base los exones codificantes de cada uno de los biomarcadores encontrados en el genoma de Bos taurus, los mismos que fueron sintetizados por Macrogen (Corea del Sur) y utilizados para amplificar el cDNA de alpaca. La viabilidad y el rendimiento fueron superiores enalpacas de 10-12 meses de edad, con valores de 92.15% y 55 x 106 espermatogonias/ml, respectivamente. Las espermatogonias de alpaca tuvieron un diámetro promedio de 16 , las células germinales de alpaca mostraron reactividad frente al conjugado del fluorocromo isotiocianato de fluoresceína con la aglutinina de Dolichos biflorus. A partir de siete biomarcadores positivos para SSC seleccionados (Zbtb16, GFR -1, Stra8, Nanos2, Ngn3, Lin28 y Ecad), tres negativos (Ckit, Sohlh1 y Sohlh2) y tres genes de referencia (Rplp0, Gadph y Actb), se lograron detectar Nanos2, Lin28, Ckit, RPLP0 y Actb en tejido testicular de alpaca. Se concluye que la edad más apropiada para aislar espermatogonias, caracterizarlas morfológicamente y detectar biomarcadores específicos de SSC en alpaca, es de 10-12 meses. / Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga / Tesis

A degeneração testicular (DT) possui grande relevância dentre os distúrbios da reprodução e pode ser causada pelo aumento da temperatura testicular. Este provoca aumento do metabolismo celular, levando ao estresse oxidativo (EO) e apoptose. O tratamento usual consiste na retirada do agente causador e administração de antioxidantes; entretanto, pode não ser eficiente. Dessa forma, o presente estudo preconizou o tratamento da DT por meio de agentes com poder proliferativo: vitamina A e laserterapia de baixa intensidade (LTBI). Foram realizados três experimentos; o experimento 1 objetivou definir a dose de energia da LTBI necessária para a bioestimulação testicular. Foram utilizados seis carneiros distribuídos em três grupos: GC) insulação escrotal (IE) e sem tratamento (n=2); G28) IE e tratado com LTBI com 808 nm de comprimento de onda, 30 mW de potência e 28 J/cm² de densidade de energia por 15 dias a cada 48 horas (n=2); G56) IE e tratado com LTBI com 808 nm, 30 mW e 56 J/cm² por 15 dias a cada 48 horas (n=2). Foram feitas análises clínicas, reprodutivas e histopatológicas. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey. Apesar da LTBI diminuir as taxas de espermatozoides com membrana acrossomal íntegra, esta foi eficiente em aumentar a população celular dos túbulos seminíferos no G28. Portanto, a LBTI provocou efeito bioestimulatório em testículos degenerados de carneiros. O experimento 2 objetivou validar a técnica de avaliação do EO espermático por meio da sonda fluorescente CellROX Deep Red®. Foram realizados dois experimentos; o primeiro utilizou ejaculados de três carneiros tratados em T0 (ejaculado não submetido à indução de EO), T50 (50% não induzido e 50% induzido ao EO) e T100 (submetido ao EO). Os dados foram submetidos à regressão linear. No segundo experimento foram utilizados 16 carneiros submetidos à IE. Foram feitas avaliações do EO antes e após a IE. Os dados foram submetidos à ANOVA e teste LSD de Fisher. O coeficiente de determinação foi de 0,728 e houve aumento do EO após a IE. Assim, a sonda CellROX® foi capaz de detectar o EO espermático. No experimento 3 foi proposto tratamento para a DT baseado na suplementação vitamínica ou LTBI. Foram utilizados 33 carneiros distribuídos em seis grupos: CC) sem IE e sem tratamento (n=5); CA) sem IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); CL) sem IE e tratado com LTBI protocolo G28 (experimento 1) (n=5); IC) IE e sem tratamento (n = 5); IA) IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); IL) IE e tratado com LTBI protocolo G28 (n=6). Foram realizadas análises clínicas, reprodutivas, hormonais e histopatológicas. Os dados foram analisados usando o procedimento de modelos mistos e os efeitos dos tratamentos foram avaliados utilizando contrastes ortogonais. Não houve efeito benéfico dos tratamentos para as características ultrassonográficas, qualidade espermática, concentração de testosterona e aspectos histopatológicos. Assim, os tratamentos não foram eficientes para melhorar a qualidade espermática nem promover a proliferação celular. / The testicular degeneration (TD) has great significance among the reproductive disorders and one of the main causes is the increase in testicular temperature. High testicular temperature results in increase cellular metabolism, leading to oxidative stress and apoptosis. The treatment consists in removing the causative agent and administration of antioxidants; however, it could be not efficient. The objective of this study is to recommend the treatment of TD by administering agents with proliferative action: vitamin A and low level laser therapy (LLLT). For this, three experiments were conducted. In experiment 1 the objective was to define the dose of energy for LLLT testicular biostimulation; it was used six rams distributed in three groups: GC) scrotal insulation (SI) and untreated (n=2); G28) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 28 J/cm ² of power density for 15 days every 48 hours (n=2); G56) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 56 J/cm² for 15 days every 48 hours (n=2). Clinics, reproductive and histopathological analyzes were done. Data were subjected to analysis of variance and Tukey test. The rates of sperm with intact acrosome membrane were decreased by LLLT, but the LLLT was effective in increasing the cell population of the seminiferous tubules in the G28. Thus, LLLT was able of causing stimulatory effect in degenerate testis of rams. The objective of experiment 2 was to assess the technique of evaluation of sperm oxidative stress (OS). This study was divided in two experiments; in experiment 1 was used ejaculates of three rams treated in T0 (ejaculate that was not submitted to OS induction), T50 (50% without OS and 50% inducted to OS) and T100 (entire submitted to OS induction). Data obtained were evaluated by linear regression analysis. In experiment 2, sixteen rams were submitted to SI. Analyses of OS were done before and after the SI. Data obtained were evaluated by analysis of variance and Fisher\'s LSD test. The determination coefficient was of 0.728 and there were increase in sperm showing OS after SI period. Thus, CellROX® fluorescent probe was able to detect sperm OS. The objective of experiment 3 was establish a treatment for TD based on vitamin A supplementation or LLLT; 33 rams were distributed in six groups: CC) no SI and non-treated (n=5); CA) no SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); CL) no SI and treated with LLLT G28 protocol (experiment 1) (n=5); IC) SI and untreated (n=5); IA) SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); IL) SI and treated with LLLT G28 protocol (n=6). Clinics, reproductive, hormonal and histopathological analyzes were performed. Data were analyzed using the mixed models procedure and treatments effects were evaluated using orthogonal contrasts. There was no beneficial effect of treatments for ultrasonographic characteristics, sperm quality, testosterone concentration and histopathological aspects. Thus, the treatments were not effective for improving sperm quality or promoting cell proliferation.

Os esteróides anabólicos-androgênicos (EAA) se caracterizam como um grupo de compostos naturais e sintéticos formados a partir da testosterona e seus derivados e foram desenvolvidos com finalidade terapêutica. No entanto, a partir da década de 90 o seu uso tem sido considerado um problema de saúde pública; e o seu consumo aumentado entre atletas profissionais e amadores que usam a medicação até 100 vezes acima da dose recomendada. Os efeitos adversos mais comuns relacionados ao uso dos EAA são alterações hepáticas, endócrinas, músculo-esqueléticas, cardiovasculares, imunológicas, reprodutivas, psicológicas, efeitos virilizantes e feminilizantes; e efeitos tóxicos. Apesar de diversos efeitos deletérios, os EAA em dose e freqüência adequada podem ter efeitos benéficos no reparo de feridas, revertendo os efeitos de corticosteróides. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de doses suprafisiológicas (10mg/semana, por 60 dias) do EAA decanoato de nandrolona em 32 ratos (Rattus norvegicus), sendo divididos igualmente para o grupo experimental e controle (8 fêmeas e 8 machos para cada grupo) através da macroscopia, microscopia e morfometria. Os resultadosmostraram que os animais do grupo controle ganharam mais peso ao final do tratamento do que os animais tratados. Os ovários e testículos apresentaram atrofiaenquanto a hipertrofia foi observada nos úteros e próstatas, com diferença de peso significativa estatisticamente em todos os órgãos entre o grupo experimental e controle. Nos testículos, a contagem do número de células de Sertoli não apresentou diferença estatística, assim como no percentual de fibras colágenas entre o grupo experimental e controle. A média da altura das células epiteliais nas próstatas dos animais tratados apresentou-se maior que as do controle. Os ovários das ratas medicadas apresentaram diminuição de corpos lúteos e folículos atrésicos. Os resultados encontrados indicam que as altas doses do EAA decanoato de nandrolona causam alterações macroscópicas e morfológicas nos sistemas reprodutores de machos e fêmeas, podendo ser irreversíveis. O efeito benéfico do uso de EAA na síntese de colágeno não foi observado nos fragmentos de gengiva analisados. / The anabolic-androgenic steroids (AAS) are characterized as a group of natural and synthetic compounds formed from testosterone and derivatives, and have been developed for therapeutic purposes. However, after the 1990s, their utilization has been considered a public health problem and the intake increased among professional and amateur athletes, who ingest up to 100 times the recommended dose of the drug. The most common adverse effects related to utilization of AAS are hepatic, endocrine, muscle-skeletal, cardiovascular, immunological, reproductive and psychological alterations; masculinizing and feminizing effects; and toxic effects. Despite the several harmful effects, utilization of AAS at adequate dose and frequency may have beneficial effects on wound repair, reverting the effects of corticosteroids. This study evaluated the effects of supraphysiological doses (10mg/week, for 60 days) of the AAS nandrolone decanoate in 32 rats (Rattus norvegicus), equally divided into experimental and control groups (8 females and 8 males for each group), by macroscopic, microscopic and morphometric analyses. The results revealed that animals in the control group gained more weight at treatment completion than treated animals. The ovaries and testicles presented atrophy, and hypertrophy of uterus and prostates was observed, with statistically significant difference in weight in all organs between the experimental and control groups. In the testicles, counting of the number of Sertoli cells and the percentage of collagen fibers did not present statistically significant difference between the experimental and control groups. The mean height of epithelial cells in the prostates of treated animals was greater in treated animals than in the control group. The ovaries of treated rats exhibited reduction in corpora lutea and atresic follicles. The results indicated that high doses of AAS nandrolone decanoate caused macroscopic and morphological alterations in the reproductive systems of males and females, which may be irreversible. The beneficial effect of utilization of AAS on the collagen synthesis was not observed on gingival fragments analyzed

Com este estudo, objetivou-se estudar o efeito da dieta de ovelhas com e sem caroço de algodão (gossipol) no desenvolvimento dos seus cordeiros do nascimento ao desmame por meio das seguintes avaliações: peso corporal dos cordeiros, teores dos hormônios (testosterona, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4)) por radioimonoensaio, morfometria histológica dos testículos, concentrações dos elementos químicos por ativação neutrônica e microfluorescencia de raios X e o mapa de distribuição multielementar nos testículos. Foram utilizados 18 cordeiros, com peso corporal médio ao nascimento de 3,94 ± 0,81 kg, descendentes de ovelhas Santa Inês, alimentadas com e sem caroço de algodão, durante as fases de acasalamento, gestação e lactação dos cordeiros, formando assim dois tratamentos: grupo controle (CO), sem a inclusão do caroço de algodão e com a inclusão de caroço de algodão (CA). Do nascimento aos 60 dias de idade, em intervalo de 15 dias, os animais foram pesados, realizadas a medição testicular e amostras de sangue foram coletadas para quantificação dos teores dos hormônios. Aos 60 dias de idade, os cordeiros foram sedados e em seguida orquiectomizados para a coleta de seus testículos para análises de histologia, ativação neutrônica e microfluorescência de raios X. No leite, além da matéria seca (MS), os teores de cálcio (Ca) e potássio (K) foram superiores nas ovelhas CO em relação às do CA. Os cordeiros do tratamento CO apresentaram maior peso corporal a partir dos 45 dias em diante em relação aos animais CA (P < 0,05), bem como maior ganho em peso diário (P < 0,05). Nos teores de testosterona não houve diferenças entre tratamentos (P > 0,05), somente aumento destas variaveis ao final do experimento (P < 0,05). Nos teores T3 e T4 também não houve diferenças entre os tratamentos, porem ocorreu redução nos teores ao final (P < 0,05). Os cordeiros do grupo CO apresentaram características testiculares (peso, volume, comprimento e largura) e histológicas (diâmetros do túbulo e lúmen), superiores aos CA (P < 0,05). Para a espessura do epitélio não houve diferenças entre tratamentos (P > 0,05). Na análise multielementar por ativação neutrônica os teores de rubídio (Rb), selênio (Se) e césio (Cs) foram superiores nos cordeiros CO e o teor de zinco (Zn) foi superior nos cordeiros CA (P < 0,05). Na análise multielementar e mapa de distribuição dos elementos por microfluorescência de raios X não houve diferenças entre os dois tratamentos. Por isso, pode-se concluir que a dieta materna controle apresentou impacto positivo no desempenho e no sistema reprodutivo dos cordeiros (descendentes), devido às melhores características nutricionais do leite (MS, Ca e K) destas ovelhas em relação ao grupo com caroço de algodão / The aim of this study was to investigate the effect of sheep diets, with and without cottonseed (gossypol), in the development of their lambs from birth to weaning through evaluation of the: body weight of lambs, levels of hormones (testosterone, triidohyronine (T3) and thyroxine (T4)) by radioimmunoassay, histological morphology of testicles, concentration of chemical elements by neutron activation and X-ray microfluorescence, and multielementary map distribuition in the testicles. Eighteen lambs were used with an average body weight at birth of 3.94 ± 0.81 kg, offspring of Santa Inês sheep, fed with and without cottonseed, during mating, gestation and lactation of lambs, thus forming two treatments: control group (CO), without the inclusion of cottonseed and with the inclusion of cottonseed (CA). From birth to 60 days of age, at 15 days intervals, the animals were weighed, testicular measure were took and blood samples were collected to quantify the levels of hormones. At the age of 60 days, the lambs were sedated and orchiectomized to collect their testicles for histological, neutral activation and x-ray microfluorescence analysis. In milk, besides the dry matter (DM), the levels of calcium (Ca) and potassium (K) were higher in sheep fed CO compared to CA. Lambs from CO treatment presente higher body weight from 45 days onwards as well as higher average daily gain when compared to CA treatment (P < 0.05). The treatments showed no effect on levels of testosterone (P > 0.05) but these variables increased at the end of the experiment (P < 0.05). Levels of T3 and T4 were not affect by treatment (P > 0.05) but at the end of the experiment a reduction occurred (P < 0.05). Lambs from CO treatment presented higher testicular weight, volume, length, width and tubule and lumen diameters compared to lambs from CA treatment (P < 0.05). The treatments showed no effects in testicular epithelium thickness (P > 0.05). Multielementary neutron activation analysis showed greater levels of rubidium, selenium and caesium in the testicles of lambs from CO when compared to CA treatment, while CA showed higher zinc levels (P < 0.05). No differences between treatments were found when analyzing elements levels and distribution using the X-ray microfluorescence analysis (P> 0.05). Therefore we conclude that the maternal control diet (CO) positively affected the performance and the reproductive trait of their lambs due to better nutritional characteristics of milk (DM, Ca and K) from these sheep when compared to CA treatment

Com este estudo, objetivou-se estudar o efeito da dieta de ovelhas com e sem caroço de algodão (gossipol) no desenvolvimento dos seus cordeiros do nascimento ao desmame por meio das seguintes avaliações: peso corporal dos cordeiros, teores dos hormônios (testosterona, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4)) por radioimonoensaio, morfometria histológica dos testículos, concentrações dos elementos químicos por ativação neutrônica e microfluorescencia de raios X e o mapa de distribuição multielementar nos testículos. Foram utilizados 18 cordeiros, com peso corporal médio ao nascimento de 3,94 ± 0,81 kg, descendentes de ovelhas Santa Inês, alimentadas com e sem caroço de algodão, durante as fases de acasalamento, gestação e lactação dos cordeiros, formando assim dois tratamentos: grupo controle (CO), sem a inclusão do caroço de algodão e com a inclusão de caroço de algodão (CA). Do nascimento aos 60 dias de idade, em intervalo de 15 dias, os animais foram pesados, realizadas a medição testicular e amostras de sangue foram coletadas para quantificação dos teores dos hormônios. Aos 60 dias de idade, os cordeiros foram sedados e em seguida orquiectomizados para a coleta de seus testículos para análises de histologia, ativação neutrônica e microfluorescência de raios X. No leite, além da matéria seca (MS), os teores de cálcio (Ca) e potássio (K) foram superiores nas ovelhas CO em relação às do CA. Os cordeiros do tratamento CO apresentaram maior peso corporal a partir dos 45 dias em diante em relação aos animais CA (P < 0,05), bem como maior ganho em peso diário (P < 0,05). Nos teores de testosterona não houve diferenças entre tratamentos (P > 0,05), somente aumento destas variaveis ao final do experimento (P < 0,05). Nos teores T3 e T4 também não houve diferenças entre os tratamentos, porem ocorreu redução nos teores ao final (P < 0,05). Os cordeiros do grupo CO apresentaram características testiculares (peso, volume, comprimento e largura) e histológicas (diâmetros do túbulo e lúmen), superiores aos CA (P < 0,05). Para a espessura do epitélio não houve diferenças entre tratamentos (P > 0,05). Na análise multielementar por ativação neutrônica os teores de rubídio (Rb), selênio (Se) e césio (Cs) foram superiores nos cordeiros CO e o teor de zinco (Zn) foi superior nos cordeiros CA (P < 0,05). Na análise multielementar e mapa de distribuição dos elementos por microfluorescência de raios X não houve diferenças entre os dois tratamentos. Por isso, pode-se concluir que a dieta materna controle apresentou impacto positivo no desempenho e no sistema reprodutivo dos cordeiros (descendentes), devido às melhores características nutricionais do leite (MS, Ca e K) destas ovelhas em relação ao grupo com caroço de algodão / The aim of this study was to investigate the effect of sheep diets, with and without cottonseed (gossypol), in the development of their lambs from birth to weaning through evaluation of the: body weight of lambs, levels of hormones (testosterone, triidohyronine (T3) and thyroxine (T4)) by radioimmunoassay, histological morphology of testicles, concentration of chemical elements by neutron activation and X-ray microfluorescence, and multielementary map distribuition in the testicles. Eighteen lambs were used with an average body weight at birth of 3.94 ± 0.81 kg, offspring of Santa Inês sheep, fed with and without cottonseed, during mating, gestation and lactation of lambs, thus forming two treatments: control group (CO), without the inclusion of cottonseed and with the inclusion of cottonseed (CA). From birth to 60 days of age, at 15 days intervals, the animals were weighed, testicular measure were took and blood samples were collected to quantify the levels of hormones. At the age of 60 days, the lambs were sedated and orchiectomized to collect their testicles for histological, neutral activation and x-ray microfluorescence analysis. In milk, besides the dry matter (DM), the levels of calcium (Ca) and potassium (K) were higher in sheep fed CO compared to CA. Lambs from CO treatment presente higher body weight from 45 days onwards as well as higher average daily gain when compared to CA treatment (P < 0.05). The treatments showed no effect on levels of testosterone (P > 0.05) but these variables increased at the end of the experiment (P < 0.05). Levels of T3 and T4 were not affect by treatment (P > 0.05) but at the end of the experiment a reduction occurred (P < 0.05). Lambs from CO treatment presented higher testicular weight, volume, length, width and tubule and lumen diameters compared to lambs from CA treatment (P < 0.05). The treatments showed no effects in testicular epithelium thickness (P > 0.05). Multielementary neutron activation analysis showed greater levels of rubidium, selenium and caesium in the testicles of lambs from CO when compared to CA treatment, while CA showed higher zinc levels (P < 0.05). No differences between treatments were found when analyzing elements levels and distribution using the X-ray microfluorescence analysis (P> 0.05). Therefore we conclude that the maternal control diet (CO) positively affected the performance and the reproductive trait of their lambs due to better nutritional characteristics of milk (DM, Ca and K) from these sheep when compared to CA treatment

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-29T17:19:00Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1088221 bytes, checksum: cabd7a961d215c6f03f377bf7135674e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T17:19:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1088221 bytes, checksum: cabd7a961d215c6f03f377bf7135674e (MD5) Previous issue date: 2016-07-19 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os roedores constituem a maior ordem de mamíferos do mundo, representando no Brasil, 36% da mastofauna. São animais encontrados em todos os habitat, apresentando grande importância na manutenção e dinâmica das florestas que habitam. Nosso conhecimento sobre a biologia e fisiologia da reprodução desses mamíferos silvestres é ainda muito limitado. A descrição de parâmetros espermatogênicos é de grande importância para a elaboração de políticas de conservação que previnam a extinção ou melhore o manejo das mesmas. Assim, objetivou-se descrever histomorfometricamente o compartimento tubular e intertubular dos testículos de Kannabateomys amblyonyx, enfatizando também a dinâmica da espermatogênese. Este é o primeiro estudo que avaliou a morfometria testicular deste representante da família Echimyidae, sendo esta a única espécie representante do gênero encontrada no Brasil. Foram utilizado sete animais capturados em regiões de Mata Atlântica, na Zona da Mata, em Minas Gerais, através de esforço ativo de captura por arma de pressão, sendo as capturas autorizadas previamente pelo IBAMA (Licença 37986-2). Um dos testículos foi incluído rotineiramente em historesina, seccionado e corado sendo obtidas imagens em microscopia de luz para realização de análises morfométricas. O outro testículo teve sua túnica albugínea retirada e pesada para obtenção do peso do parênquima testicular. O peso corporal foi de 418,43g, dos quais 0,41% estão alocados em gônada (IGS) e destes 0,38% em túbulo seminífero (ITS). Em torno de 93% do parênquima testicular são ocupados por túbulo seminífero, sendo 84% de epitélio, 2,5% de túnica própria, e 6,5% de lúmen. Os túbulos seminíferos apresentaram diâmetro de 214,23μm, e 72,68μm de altura de epitélio. Esses roedores possuem 21,62m de túbulo seminífero por testículo, e 12,92m por grama de testículo. Foram identificados 8 estádios do ciclo do epitélio seminífero, com associações celulares bem definidas, sendo o estádio Ι o mais frequente ao contrário do estádio IV. Foram contabilizadas, 0,47 espermatogônias A, 11,78 espermatócitos em preleptóteno, 3,81 em zigóteno, e 14,31 em paquíteno, além de 32,19 espermátides arredondadas, e 6,23 células de Sertoli. Os índices mitóticos e meióticos mostraram perdas de 60% e 43%, respectivamente, e o rendimento geral da espermatogênese foi de 69,73 células germinativas. A capacidade total suporte das células de Sertoli foi de 10,03 células sendo de 5,17 para espermátides arredondadas. O número de célula de Sertoli, por testículo e por grama de testículo, foi de 44,98x10 6 e 53,32x10 6 , respectivamente. A reserva espermática testicular foi de 274,40. O intertúbulo, que constitui em torno de 7% do parênquima, é ocupado em sua maior parte por células de Leydig, possibilitando um índice Leydigossomático de 0,02%. O intertúbulo foi ocupado por 79,88% células de Leydig, 3,28% de espaço linfático, 6,26% de vasos sanguíneos, 1,56% de macrófagos, 0,53% de mastócitos e 8,48% de tecido conjuntivo. Esses percentuais equivalem a 5,10; 0,22; 0,43; 0,10; 0,005 e 0,54% do parênquima testicular, respectivamente. Existem em média 33,46x10 6 células de Leydig por testículo e 40,32x10 6 por grama de testículo. Essas células possuem um volume de 1.280,99μm3, sendo 213,19μm3 nucleares e 1.067,80μm3 citoplasmáticos. A organização dos componentes do compartimento intertubular, corresponde ao padrão tipo III descrito por Fawcett. / Rodents are the largest order of world's mammals, representing in Brazil, 36% of mammalian fauna. They are found in all habitats, with great importance in the maintenance and dynamics of the forests they inhabit. Our knowledge of the biology and physiology of reproduction of these wild mammals is still very limited. The description of spermatogenic parameters is of great importance for the development of conservation policies to prevent the extinction or improve the management of the species. This study aimed to describe histomorphometrically the tubular and intertubular compartments of the testes of Kannabateomys amblyonyx, also emphasizing the dynamics of spermatogenesis. This is the first study to evaluate the testicular morphometry this representative Echimyidae family, being the only species found in Brazil. Seven animals were caught in Atlantic Forest in the state of Minas Gerais, through active effort capture. One testis was included in historesin routinely, sectioned and stained to yield light microscopy images to carry out morphometric analysis. The other testis had its albuginea removed and weighed to obtain the weight of the testicular parenchyma. Body weight was 418.43g, of which 0.41% is allocated in gonad (IGS) and 0.38% in seminiferous tubule (ITS). Approximately 93% of testicular parenchyma is occupied by seminiferous tubule, being 84% of epithelium, 2.5% tunica propria, and 6.5% lumen. The seminiferous tubules have a diameter of 214.23μm and 72.68μm of epithelium height. These rodents have 21.62m of seminiferous tubule per testis, and 12.92m per gram of testis. Eight stages of the epithelium seminiferous cycle were identified with well-defined cell associations, being the most frequent stage Ι unlike the less frequent stage IV. They were recorded, 0.47 spermatogonia A, 11.78 spermatocytes in preleptotene, 3.81 in zygotene, 14.31 in pachytene, 32.19 round spermatids, and 6.23 Sertoli cells. The meiotic and mitotic indexes showed losses of 60% and 43%, respectively, and the spermatogenesis yield was 69.73 cells. The total support capacity of Sertoli cells was 10.03 cells being 5.17 to round spermatids. The number of Sertoli cell per testis and per gram of testis was 44.98x106 and 53.32x10 6 , respectively. Testicular sperm reserve was 274.40. The intertubule, which is around 7% of the parenchyma, is occupied mostly by Leydig cells, enabling Leydigsomatic index of 0.02%. Thus, we observe in intertubule 79.88% of Leydig cells, 3.28% of lymphatic space, 6.26% of blood vessels, 1.56% of macrophages, 0.53% of mast cells and 8.48% connective tissue. These percentages are equivalent to 5.10, 0.22, 0.43, 0.10, 0.005 and 0.54% of the testicular parenchyma, respectively. There are on average of 33.46x10 6 Leydig cells per testis and 40.32x10 6 per gram of testis. These cells have a volume 1.280.99μm3 being 213.19μm3 and 1.067.80μm3 to the nucleus and cytoplasm, respectively. The organization of the components the intertubular compartment corresponds to type III described by Fawcett.