Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-10Bitstream added on 2014-06-13T20:26:20Z : No. of bitstreams: 1 silva_rc_me_botfmvz.pdf: 997441 bytes, checksum: 50d67e0480990ba5c46186e06fb9f216 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Toxoplasma gondii é um protozoário parasita de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, envolvendo alterações fetais e abortos na espécie humana e em animais, sendo ainda importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. A técnica de aglutinação direta modificada (MAT) destaca-se por independer da origem dos anticorpos e permitir diferenciar os estágios da infecção toxoplásmica. Assim, padronizou-se a técnica de sedimentação espontânea, verificando-se que com 60 minutos, a parte líquida da suspensão apresentava predominantemente taquizoítos e raras células pequenas. O antígeno inativado pelo metanol (AM) permitiu a exposição de antígenos de fase aguda somente, enquanto que a formalina (AF) expõe tanto os de fase aguda como crônica. Testou-se o antígeno para três grupos experimentais: G1, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, genótipo I, via oral; G2, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, via oral, e imunodeprimidas com corticóide; G3, grupo controle. A comparação das MATs permitiu a diferenciação dos anticorpos IgG de fase aguda, dos de fase crônica. Gradativamente foi obtida a maturação dos anticorpos, sendo observada pela avidez das mesmas no teste de ELISA. Os anticorpos do grupo experimental se comportaram semelhantemente para as provas sorológicas, até a 13ª semana. A reagudização no G2 foi detectada na bioprova da musculatura antes que no cérebro. Com isso, verificou-se que a MAT-AM e a MAT-AF permitem a diferenciação dos estágios agudo e crônico, e ainda a caracterização da reagudização da infecção em pacientes imunocomprometidos. / Toxoplasma gondii is a parasite protozoan with great importance to animal production and public health, involving foetal alterations and abortions in human and animal species, being an important opportunistic pathogen in immunocompromised patients. Modified agglutination test (MAT) has great importance to independ of the origin of antibody, and to allow differentiating the periods of the Toxoplasma infection. Thus, the protocol of spontaneous sedimentation we standardized, verifying that with 60 minutes, the liquid part of the suspension showed predominantly the presence of tachyzoites and rare small cells. The antigen inactivated with methanol (AM) allowed the exposition of antigens of acute phase only, while formalin (AF) as much the acute as chronic phase. Antigen was tested to three experimental groups: G1, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, genotype I, orally; G2, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, orally, and immunodepressed with corticoid; G3, control group. The comparation of MATs allows the differentiation of IgG from acute phase of the ones from chronic phase. A gradual maturation of immunoglobulins was gotten, being observed through the avidity of the same ones, and surveyed for ELISA. The antibodies of the experimental groups showed similar profile for all serological tests, until the 13th week. Reacutization of the infection in G2 was detected earlier in bioassay of musculature than brain. Thus, we verified that MAT-AM and MAT-AF allow the differentiation of the acute and chronic stages, and still the characterization of the reacutization of the infection in immunocompromised patients. / FAPESP: 2003/08063-0

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-01Bitstream added on 2014-06-13T20:26:15Z : No. of bitstreams: 1 lima_vy_dr_botfmvz.pdf: 252601 bytes, checksum: ccb77f186740e7b4309b3c17010d6394 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As zoonoses são doenças e infecções naturalmente transmissíveis entre os hospedeiros vertebrados e o homem. Dentre estas enfermidades está à toxoplasmose, zoonose de distribuição mundial que em diversos inquéritos soroepidemiológicos observa-se uma infecção de 70 a 90% das populações. E à leptospirose, atualmente estão disponíveis dados que sugerem que é a enfermidade mais comum dos animais domésticos. O presente estudo verificou hábitos alimentares e de costumes com as zoonoses por meio de levantamento soro-epidemiológico e da ocorrência de infecção na população acadêmica de medicina veterinária de duas universidades localizadas no oeste do estado do Paraná. Foi observado uma porcentagem de 25,5% (73/286) e de 3,8% (11/286) de positividade para a toxoplasmose e leptospirose, respectivamente. Os dados epidemiológicos referentes aos questionários aplicados aos alunos foram analisados, isoladamente para ambas as enfermidades. A associação entre os resultados sorológicos e as variáveis epidemiológicas foi verificada pelos testes de Qui-quadrado ou Exato de Fischer, adotando-se um nível de significância (a) de 5%. Observou-se diferença estatística entre as variáveis conviver com animais dentro de casa, deixar a ração exposta, beber leite cru, área onde a família mora urbana ou rural, ingerir carne crua para a toxoplasmose e somente a variável conviver com animais dentro de casa para a leptospirose. Concluiu-se que a ingestão de alimentos crus, continua sendo um dos principais fatores de risco de infecção pelo Toxoplasma gondii entre a população adulta e que a convivência destes acadêmicos com as várias espécies animais, foi o fator de risco principal na população estudada em relação à leptospirose. / The zoonoses are diseases and infections naturally transmissible between the vertebrate hosts and humans. Toxoplasmosis is a worldwide distribution zoonosis, that in many seroepidemiologic inquires had infections rates of 70% to 90% of the population. Actual data shows that leptospirosis is the most common disease of the domestic animals. This project correlated behavioral aspects of the veterinary academic population on the west region of Paraná state with the incidence and/or prevalence of toxoplasmosis and leptospirosis using a seroepidemiologic approach. There were total of 25.5% (73/286) and 3.8% (11/286) positive cases for toxoplasmosis and leptospirosis respectively. The epidemiologic data from the students’ behavior inquiry were analyzed separately. The association between the serologic results and the epidemiologic data were verified by Chi-square and Fisher exact test, using a significance level (a) of 5%. There were statistical significance between the inquiry variables “live with indoor animals”; “the pet’s food is exposed”; “drink raw milk”; “the family lives in urban or country areas”; “ingestion of raw meat” and toxoplasmosis. Living with indoors pets was the only variable with statistical significance for leptospirosis infections. In conclusion, ingestion of raw food continues to be one of the most important risk factors for Toxoplasma gondii infections in adult population; and living with various animal species is the main risk factor for leptospirosis.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-18. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:48Z : No. of bitstreams: 1 000837180.pdf: 2272798 bytes, checksum: 3d9bcb9da2787aa858c4ebae597f9f22 (MD5) / Este estudo teve como objetivo pesquisar a presença de T. gondii no sêmen, testículos e epidídimos de gatos experimentalmente infectados por este coccídio. Para tanto, doze felinos machos, sem raça definida, em idade reprodutiva e sorologicamente negativos para T. gondii foram selecionados e distribuídos em três grupos experimentais, GI: inoculados com 600 cistos teciduais de T. gondii (cepa P), GII: inoculados com 2x105 taquizoítos (cepa RH), e GIII: não inoculados (grupo controle). Anteriormente à inoculação (dias -7 e 0) e no 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º e 70º dias pós-inoculação (DPI), todos felinos, foram submetidos a exames clínicos, sorológicos (RIFI) e hematológicos (hemograma e parasitemia pelo T. gondii). As colheitas de sêmen (eletroejaculação), foram realizadas nas referidas datas, sendo posteriormente realizada a pesquisa do T. gondii por meio da nested PCR e bioprova em camundongos. No 70º DPI, os doze felinos foram orquiectomizados, sendo em seus testículos e epidídimos avaliada a presença do parasito (nested PCR, bioprova em camundongos, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Todos os felinos inoculados com T. gondii (GI e GII), soro-converteram à infecção toxoplásmica e apresentaram picos parasitêmicos em diferentes datas experimentais pós-inoculação. Os felinos inoculados com a cepa RH (GII) apresentaram títulos sorológicos mais elevados que os inoculados com a cepa P (GI). Nestes animais (GII) também foram diagnosticados mais picos parasitêmicos e alterações clínicas que nos felídeos pertencentes ao grupo I. Em nenhuma data experimental foi diagnosticada (bioprova e nested PCR) a presença de T. gondii nas amostras seminais colhidas dos felinos (GI, GII e GIII), nem tampouco nos testículos e epidídimos colhidos destes animais (nested PCR, bioprova, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Tais resultados possibilitam inferir... / This study aimed to investigate the presence of T. gondii in semen, testicles and epididymis of cats experimentally infected with this coccidia. Therefore, twelve mongrel male cats of reproductive age and serologically negative for T. gondii were selected and divided into three experimental groups, GI: inoculated with 600 tissue cysts of T. gondii (P strain), GII : inoculated 2x105 tachyzoites (strain HR), and GIII: not inoculated (control group). Prior to inoculation (days -7 and 0) and days 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º and 70º post-inoculation (PID), all cats underwent clinical, serological (IFA) and haematological (blood count and parasitemia by T. gondii) examinations. Semen samples were obtained (eletroejaculation) those dates, and later held the T. gondii search by nested PCR and bioassay in mice. On 70º PID, the twelve cats were castrated, and their testicles and epididymis were evaluated for the presence of the parasite (PCR, bioassay in mice, and histopathological and immunohistochemical analyzes). All cats inoculated with T. gondii (GI and GII), seroconverted to T. gondii infection and showed parasitemia peaks in different experimental days post inoculation. The cats inoculated with the RH strain (GII) had higher titers than those inoculated with the P strain (GI). In these animals (GII) were also diagnosed more parasitemia and clinical changes compared to those belonging to Group I. In no trial date was diagnosed (bioassay and nested PCR) the presence of T. gondii in semen samples taken from the cats (GI, GII and GIII), nor their testis and epididymis (PCR, bioassay, histopathological and immunohistochemical analyzes). These results make it possible to infer that sexual transmission in domestic cats is not an important route of infection in the spread of toxoplasmosis among cats

Introdução: A infecção aguda pelo Toxoplasma gondii em gestantes pode determinar infecção fetal através de passagem transplacentária. As crianças afetadas podem desenvolver coriorretinite e déficit neurológico, na ausência de tratamento adequado. Objetivos: Estimar a prevalência de toxoplasmose aguda em gestantes atendidas na maternidade do Hospital Nossa Senhora da Conceição, avaliando possíveis diferenças nas freqüências ao longo do período estudado; medir a incidência de toxoplasmose congênita (TC) e estimar a taxa de transmissão vertical em crianças nascidas neste hospital; avaliar a acurácia de testes diagnósticos em TC, aplicados no momento do nascimento, na população de crianças estudadas. Métodos: Inicialmente um estudo transversal foi desenvolvido para identificar as pacientes que apresentaram critérios de infecção aguda na gestação, atendidas na maternidade no momento do parto, entre outubro de 1998 e dezembro de 2005. Novas tecnologias foram introduzidas para detecção diagnóstica ao longo deste período. Entre outubro de 1998 e dezembro de 2001 (período 1), utilizou-se o método microparticle enzyme immunoassay – MEIA e entre janeiro de 2002 e dezembro de 2005 (período 2) foi utilizada a técnica de captura de IgM e o teste de avidez de IgG com o método enzyme linked fluorescent assay – ELFA (VIDAS). Os recém-nascidos identificados a partir deste estudo inicial foram incluídos em um estudo de coorte histórico, com tempo de acompanhamento aproximado de doze meses, para estabelecer o diagnóstico definitivo de toxoplasmose congênita, obtido em dois momentos: (1) logo após o nascimento; (2) aos 12 meses, aproximadamente. Para a definição de caso da infecção aguda na gestação e de toxoplasmose congênita foi utilizado o sistema de classificação elaborado por Lebech et al., com adaptações (quadro 1). Aqueles casos classificados como improváveis foram excluídos do cálculo da prevalência de toxoplasmose aguda em gestantes e de incidência de TC. Para avaliar a acurácia de testes diagnósticos em TC realizados no momento do nascimento utilizou-se, como padrão ouro para o diagnóstico definitivo, a concentração de anticorpos IgG em torno de 12 meses de vida. Um bebê infectado deve ter concentrações iguais ou mais elevadas de IgG nesta idade quando comparadas às encontradas no nascimento. Houve comparação independente e cega dos métodos diagnósticos avaliados em relação ao padrão ouro. A dosagem de anticorpos IgG e IgM em recém-nascidos foi processada com o método microparticle enzyme immunoassay (MEIA). Análise: Para comparar proporções foi utilizado o teste qui-quadrado com correção de Yates, teste exato de Fisher, quando necessário, e Teste t de Student para comparação entre médias de duas amostras independentes com distribuição simétrica. Na avaliação do desempenho de testes diagnósticos foram obtidos resultados de sensibilidade, especificidade, razões de verossimilhança (RV) positiva e negativa dos testes diagnósticos – hemograma, exame do líquor, ecografia transfontanelar, exame de fundo de olho (EFO) e a detecção de anticorpos IgM para toxoplasmose (MEIA) e do DNA do toxoplasma com reação em cadeia da polimerase – método Nested (RCP-Nested) séricos. Resultados: Em uma população de 41.112 gestantes, a prevalência de toxoplasmose aguda foi de 4,8 para cada 1.000 gestantes (IC95%: 4,2 a 5,6). Houve redução significativa na prevalência de toxoplasmose aguda nas gestantes deste hospital a partir do ano 2002 (P=0,008). O diagnóstico de toxoplasmose congênita foi definitivo em 37 crianças entre 40.727 nascidos vivos no período estudado, atingindo uma incidência de 0,9 para cada 1.000 nascimentos (IC95%: 0,6 a 1,3). Logo após o nascimento, entre os 200 recém-nascidos expostos ao T. gondii, resultado de 199 gestantes infectadas, 25 bebês apresentaram critérios diagnósticos de toxoplasmose congênita, atingindo taxa de transmissão vertical de 12,5% (IC 95%: 8,2% - 17,9%). Após o seguimento foram detectados mais 12 casos, aumentando esta taxa para 18,5% (IC 95%: 13,4% – 24,6%). Para avaliar a acurácia de testes diagnósticos aplicados no momento do nascimento, foram identificadas 31 crianças com TC, de acordo com o padrão ouro, entre 136 expostas ao protozoário intra-útero e que completaram seguimento até os 12 meses de vida. Os testes que apresentaram melhor desempenho isoladamente na predição do diagnóstico, foram detecção de anticorpos IgM específicos, EFO e RCPNested atingindo razões de verossimilhança positivas de 119,3 (IC95%: 7,40 – 1923,92), 49,9 (IC95%: 3,0 – 838,2) e 24,8 (IC95%: 3,22 – 190,35), respectivamente. A RV negativa para IgM foi 0,4 (IC95%: 0,3 – 0,6), mas para o EFO e RCP-Nested foi apenas 0,7 (IC95%: 0,6 – 0,9). Conclusão: A prevalência de toxoplasmose aguda em gestantes incluídas neste estudo foi inferior à encontrada na França e na Bélgica, mas foi mais elevada quando comparada às descritas na Suécia, Noruega, Dinamarca e Nova Iorque. A prevalência estimada neste estudo foi similar a de outros locais do Brasil, como Mato Grosso do Sul, mas inferior à obtida no Distrito Federal. Esta variabilidade nas estimativas pode estar relacionada com os diferentes métodos diagnósticos utilizados no rastreamento, ou ainda, com os diferentes fatores de risco envolvidos na transmissão da doença. Em nosso estudo, esta freqüência diminuiu a partir do ano de 2002, o que não pode ser atribuível à introdução do teste de avidez de IgG, uma vez que a média de idade gestacional na realização deste exame foi tardia. Entretanto, existe a possibilidade de que o teste de captura de IgM com o método ELFA tenha contribuído para diminuir os casos falso-positivos de IgM, o que poderá ser confirmado com futuros estudos. Estes resultados apontam que a introdução de novas tecnologias no laboratório deve ser acompanhada de esforços para melhorar as condições de acesso precoce das gestantes ao pré-natal de referência, com o objetivo de não perder a oportunidade para melhor discriminar as gestantes sem doença e evitar procedimentos invasivos, desnecessários e onerosos. A incidência de toxoplasmose congênita e a taxa de transmissão vertical foram elevadas. Estas freqüências podem estar subestimadas devido às perdas no seguimento. Para avaliar o efeito das perdas na validade do estudo, foram comparadas as características da população de gestantes e de recém-nascidos do grupo de bebês com seguimento completo em relação ao grupo que não retornou para o seguimento. Estas características foram semelhantes nos dois grupos, portanto, consideramos que o percentual de perdas, embora elevado, não prejudicou a validade do estudo. A identificação de 12 casos adicionais de TC com o seguimento dos bebês reforça a necessidade de monitoramento sorológico durante o primeiro ano de vida, mesmo sem evidência de infecção congênita ao nascimento. Na avaliação dos testes diagnósticos aplicados ao nascimento, a detecção de anticorpos IgM específicos no sangue do neonato, o EFO e o RCP-Nested sérico demonstraram melhor desempenho para identificar os bebês com TC. Entretanto, para afastar este diagnóstico, apenas o resultado não reagente de anticorpos IgM específicos apresentou maior utilidade, mas com efeito de pequena magnitude. / Introduction: The acute infection by Toxoplasma gondii in pregnant women may cause fetal infection by means of the transplacental transfer. Affected children may develop chorioretinitis and neurological deficit in the absence of a proper treatment. Objectives: To estimate the prevalence of acute toxoplasmosis in pregnant women cared for at the maternity ward of Hospital Nossa Senhora da Conceição, evaluating possible differences in frequencies along the period of study; to measure the incidence of congenital toxoplasmosis (CT), and estimate the rate of vertical transmission in children who were born in this hospital; to evaluate the accuracy of diagnostic tests in CT, applied at the moment of the birth, in the population of studied children. Methods: Initially a cross-sectional study was developed to identify the patients who presented criteria of acute infection in the pregnancy, cared for at the maternity ward at the moment of the labor, between October 1998 and December 2005. New technologies have been introduced for diagnostic detection along this period. Between October 1998 and December 2001 (period 1) the microparticle enzyme immunoassay – MEIA was used, while between January 2002 and December 2005 (period 2) the IgM capture technique and the IgG avidity test with the enzyme linked fluorescent assay – ELFA (VIDAS) method were used. Those newborns (NB) identified at this initial study were included in a historical cohort study, with an approximate follow-up time of twelve months, to establish the definitive diagnosis of congenital toxoplasmosis, obtained in two moments: (1) soon after birth; (2) at 12 months, approximately. For the definition of cases of acute infection in pregnancy and congenital toxoplasmosis, the classification system elaborated by Lebech et al. was used with adaptations (Picture 1). Those cases that were classified as unlikely were excluded from the prevalence calculation of acute toxoplasmosis in pregnant women and from the incidence of CT. In order to evaluate the accuracy of diagnostic tests in CT accomplished at the moment of birth, the concentration of IgG antibodies around 12 months of age was used as a gold standard for the ultimate diagnosis. An infected baby must have equal or higher concentrations of IgG at this age when compared to the ones found at birth. An independent and blind comparison of the diagnostic methods evaluated in relation to the gold standard was performed. The dosage of IgG and IgM antibodies in newborns was processed with the microparticle enzyme immunoassay (MEIA) method. Analysis: In order to compare proportions, a chi square test with Yates correction, an exact Fisher test when necessary, and a Student's t-test for comparison between means of two independent samples with symmetrical distribution were used. In the performance evaluation of diagnostic tests, results of sensitivity, specificity, positive and negative likelihood ratio (LR) of the diagnostic tests – hemogram, liquor test, transfontanellar ultrasonography brain scan, ophthalmoscopy, and detection of IgM antibodies for toxoplasmosis (MEIA) and the DNA of the toxoplasm with polymerase chain reaction – method Nested (PCR-Nested) serum were obtained. Results: In a population of 41,112 pregnant women, the prevalence of acute toxoplasmosis was 4.8 per 1,000 pregnant women (CI95%: 4.2 to 5.6). There was a significant decrease in the prevalence of acute toxoplasmosis in pregnant women of this hospital from 2002 on (P=0.008). The diagnosis of congenital toxoplasmosis was definitive in 37 children among 40,727 live births in the studied period, reaching an incidence of 0.9 per 1,000 births (CI95%: 0.6 to 1.3). Soon after the birth, among the 200 newborns exposed to the T. gondii, resulting from 199 pregnant women, 25 babies showed diagnostic criteria of congenital toxoplasmosis, reaching a vertical transmission rate of 12.5% (CI 95%: 8.2% - 17.9%). After the follow-up, another 12 cases were detected, increasing this rate to 18.5% (CI 95%: 13.4% – 24.6%). In order to evaluate the accuracy of diagnostic tests applied at the moment of birth, 31 children with CT were identified according to the gold standard, among 164 ones who were exposed to protozoan intra-uterus and who completed their follow-up until 12 months of age. The tests that showed better performance when isolate in the prediction of the diagnosis were the detection of specific IgM antibodies, ophthalmoscopy, and PCR-Nested reaching positive RV of 119.3 (CI95%: 7.40 – 1923.92), 49.9 (CI95%: 3.0 – 838.2), and 24.8 (CI95%: 3.22 – 190.35), respectively. The negative RV for IgM was 0.4 (CI95%: 0.3 – 0.6), but for ophthalmoscopy and PCR-Nested it was 0.7 (CI95%: 0.6 – 0.9) only. Conclusion: The prevalence of acute toxoplasmosis in pregnent women included in this study was lower than the one found in France and Belgium, but was higher when compared to the ones described in Sweden, Norway, Denmark, and New York. The estimated prevalence in this study was similar to the one from other locations in Brazil, such as Mato Grosso do Sul, but lower to the one obtained in Brasília. This variability in the estimates may be related to the different methods for diagnosis used in the screening or even to the different risk factors involved in the transmission of the disease. In our study, this frequency decreased from 2002 on, and this cannot be attributed to the introduction of the IgG avidity test, since the means of gestational age at the accomplishment of this test was late. However, there is a possibility that the IgM capture test with the ELFA method has contributed to decrease the frequency of false-positive cases of IgM, what can be confirmed with future studies. These results signal that the introduction of new technologies in the laboratory must be accompanied by efforts to improve conditions for an early access of pregnant women to the reference prenatal care, aiming to prevent the loss of opportunities of better discriminating pregnant women that are not sick and avoiding unnecessary and expensive invasive procedures. The incidence of congenital toxoplasmosis and the rate of vertical transmission were elevated. These frequencies may be underestimated due to the losses in the follow-up. In order to evaluate the effect of losses in the study validity, characteristics of the population of pregnant women and newborns belonging to the group of babies with full follow-up in relation to the group that did not return for the follow-up were compared. These characteristics were similar in the two groups, therefore we consider that the percentual of losses, even though high, did not endanger the validity of the study. The identification of twelve additional cases of congenital toxoplasmosis with the follow-up of the babies reinforces the need of a serological monitoring during the first year of life, even without any evidence of congenital infection at birth. In the evaluation of diagnostic tests applied at birth the detection of specific IgM antibodies in the blood of the newborn, the ophthalmoscopy, and the serum PCR-Nested showed a better performance to identify babies with CT. However, in order to discard this diagnosis, only the non-reagent IgM specific antibodies result showed higher utility, with a small magnitude effect though.

Orientador: Helio Langoni / Banca: Márcia Marinho / Banca: Antônio Carlos Paes / Resumo: A toxoplasmose é uma protozoonose causada pelo Toxoplasma gondii, de distribuição mundial e que acomete todos os animais homeotérmicos, incluindo o homem. Apresenta desde quadros assintomáticos a manifestações sistêmicas graves. Nos seres humanos a infecção atinge com maior gravidade principalmente indivíduos imunocomprometidos e gestantes, sendo que a primoinfecção, pode levar a óbitos, abortamentos, natimortos além de lesões severas do sistema nervoso central. Técnicas sorológicas precisas de fácil aplicação a campo e de menores custos, podem auxiliar na promoção de medidas de prevenção e controle, mas para isso é importante garantir a produção de antígenos em quantidade e de qualidade, a fim de atender as necessidades do método empregado, para garantir a sua padronização. A produção in vitro de taquizoítos de T.gondii usando células de sarcoma murino TG180 em histoculturas, mostra-se uma alternativa viável para a produção de antígeno de T. gondii, em quantidade e qualidade para uso no diagnóstico dessa infecção utilizando-se o Método de Aglutinação Direta, o que pode permitir sua difusão como um teste rápido a campo, possibilitando a sua utilização por profissionais autônomos ou unidades de saúde, podendo-se assim agilizar com uma maior rapidez as ações de prevenção dessa zoonose. / Abstract: Toxoplasmosis is one protozoonosis caused by Toxoplasma gondii, of world-wide distribution and that acomete to all the animals, including the man. It presents since without symptoms until serious clinical manifestations. In the human beings the infection reaches with bigger gravity immunocompromised patients individuals mainly and pregnant woman, being that the primary infecction, it can take the deaths, abortions, stillborn beyond severe injuries of the central nervous system. Serologicals techniques of easy application in the field and of lesser costs, can assist in the promotion of measures of prevention and control, but for this it is important to guarantee the production of antigens in amount and quality, in order to take care of the necessities of the employed method to guarantee its standardization. The production in vitro of taquizoitos of T.gondii using cells of sarcom murine TG180 in histoculture, reveals to a viable alternative for the antigen production of T. gondii, in amount and quality for use in the diagnosis of this infection by the Direct Agglutination Test, what it can allow its diffusion as a fast test in the field, allowing its use for independent professionals or units of health, and thus allowing to a bigger rapidity in the actions of prevention of this zoonose. / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: João Luis Garcia / Banca: Francisco Carlos Rodrigues de Oliveira / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Cesar Roberto Esper / Resumo: Ovinos machos isentos de Toxoplasma gondii, foram distribuídos em três grupos sendo, G1: um ovino inoculado, pela via oral, com 2,0 x 105 oocistos da cepa P, G2: um ovino infectado, pela via subcutânea, com 1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH e G3: um ovino não infectado mantido como controle. Após a inoculação dos machos com T. gondii, 12 ovelhas reprodutoras, não gestantes, sorologicamente negativas para doenças reprodutivas, sobretudo toxoplasmose, foram sincronizadas e em seguida expostas à monta natural pelos machos, anteriormente inoculados, sendo: cinco ovelhas submetidas à monta natural pelo macho do G1; cinco ovelhas expostas à monta natural pelo macho do G2 e duas ovelhas pelo macho pertencente ao grupo controle. Nos soros das ovelhas obtidos nos dias -30, -14, -7, -1, zero (antes da monta natural) e nos dias 1, 3, 5, 7, 11, 14 e semanalmente até o parto, foi pesquisada a presença de anticorpos contra T. gondii pela RIFI. Bioensaio em camundongos e PCR foram realizados em amostras de sêmen e tecidos dos machos, tecidos das fêmeas e de seus respectivos filhotes. Cinco das 12 fêmeas utilizadas apresentaram anticorpos específicos contra T. gondii após a monta natural, sendo duas pelo macho inoculado com oocistos (G1) e três pelo ovino infectado com taquizoítos (G2). Pelo bioensaio foi possível diagnosticar, no dia da monta natural, a presença do T. gondii em amostras seminais dos ovinos infectados (G1 e G2) e em amostras do "pool" de tecidos das cinco fêmeas e em cinco de seus respectivos filhotes. Foi possível, ainda, pela técnica da PCR isolar o DNA de T. gondii em amostras seminais dos machos reprodutores no dia do coito, e no "pool" de tecidos de uma e duas fêmeas expostas à monta natural por reprodutores infectados com oocistos e taquizoítos, respectivamente. É importante relatar que, por meio desta técnica foi possível diagnosticar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Male sheep in reproductive age and with no prior Toxoplasma gondii disease, were divided into three groups: G1, a sheep inoculated with 2.0 x 105 of P strain oocysts; G2, a sheep infected with 1.0 x 106 of RH strain tachyzoites and; G3 a control uninfected sheep. After inoculation of males with T. gondii, 12 breeding ewes, not pregnant, serologically negative for reproductive diseases, particularly toxoplasmosis, were synchronized and then exposed to natural mating by those males, previously inoculated, being: five ewes submitted to natural mating by male G1, five ewes exposed to natural mating by the male of G2 and two ewes submitted to natural mating by the male control from group. In sera obtained from all ewes on days -30, -14, -7, -1, zero (before natural mating) and on days 1, 3, 5, 7, 11, 14 and weekly until partum, was investigated the presence of antibodies against T. gondii by IFAT. Bioassay and PCR were performed on samples of semen and tissues of males/females tissues and their offspring. Five of the 12 females submitted to natural mating, had antibodies anti-T. gondii, being, two by male inoculated with oocysts (G1) and three for sheep infected with tachyzoites (G2). For the bioassay was possible to diagnose on the day of natural mating, the presence of T. gondii in semen samples from infected sheep (G1 and G2) and in samples of pool of tissues from five females and five of their puppies. It was also possible by PCR to isolate the DNA of T. gondii in semen samples of rams on sexual intercourse, and the pool of tissues of one and two females exposed to breeding by natural mating infected with tachyzoites and oocysts, respectively. It is important to report that through this technique it was possible to diagnose the presence of this parasite also in the pool of tissue from the offspring of a female submitted to the natural breeding sheep infected with oocysts. From the results... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Helio Langoni / Banca: Italmar Teodorico Navarro / Banca: Vírginia Bodelão Richini / Banca: Simone Bandini Lucheis / Banca: Rodrigo Costa da Silva / Resumo: A toxoplasmose se destaca pela elevada importância médica, veterinária e zootécnica, e seu controle tornou-se um desafio para a saúde pública em todo o mundo, sinalizando a prioridade em buscar na vacinação uma estratégia para conter a infecção. Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a proteção conferida pela pré-imunização, com vacina constituída de taquizoítos irradiados a 255 Gy, com raios γ, em ratas Wistar, contra desafios orais por diferentes estágios infectantes do Toxoplasma gondii. Nos experimentos foi investigada a proteção vacinal contra formação de cistos cerebrais, cistos na musculatura esquelética, transmissão congênita e eliminação do agente pelo leite. A vacina foi administrada por via oral, com uso de adjuvante, em três doses com intervalos de 15 dias, antes do acasalamento das ratas. Constatada a gestação, realizou-se o desafio oral das ratas com bradizoítos, oocistos e taquizoítos de T. gondii. Foram utilizadas ratas Wistar em idade reprodutiva, que foram distribuídas em dois experimentos, composto por oito grupos cada. No experimento I cada grupo foi formado por seis ratas e, no experimento II, por cinco ratas. Os animais em cada experimento foram distribuídos da seguinte forma: Grupo 1: imunizado e desafiado com bradizoítos (ME-49) de T. gondii; Grupo 2: desafiado com bradizoítos (ME-49) de T. gondii; Grupo 3: imunizado e desafiado com oocistos (ME-49) de T. gondii; Grupo 4: desafiado com oocistos (ME-49) de T. gondii; Grupo 5: imunizado e desafiado com taquizoítos (RH) de T. gondii; Grupo 6: desafiado com taquizoítos (RH) de T. gondii; Grupo 7: apenas imunizado, Grupo 8: não imunizado e não desafiado. Semanalmente, desde a imunização, foram realizadas análises sorológicas e hematológicas. Após a parição (experimento I), as ratas e neonatos foram eutanasiados para determinação da carga parasitária no cérebro e na musculatura esquelética ... / Abstract: Toxoplasmosis has high medical and veterinary importance, their control has become a challenge to public health worldwide, signaling the priority in seeking vaccination strategy to contain the infection.The objective of the present study was to evaluate the efficacy of Toxoplasma gondii (T. gondii) tachyzoites irradiated vaccine, administered in experimentally inoculated Wistar female rats by oral challenges against different infectious stage of Toxoplasma gondii for blocking the production of T. gondii cysts in brain and muscle tissues, congenital transmission and also the elimination of the parasite in milk. Vaccine was administered orally, plus aluminium hidroxy as adjuvant, with three doses of 15 days interval. One week after pregnancy confirmation, challenge was done by gavage with T. gondii cysts, oocysts and tachizoites. Wistar rats in reproductive stage were distributed in two studies, composed by eight groups of six animals each (experiment I) an five animals each (experiment II), as follows: Group 1: immunized and challenge with bradizoites of ME-49 T. gondii strain; Group 2: non- immunized and challenged bradizoites of ME-49 T. gondii strain; Group 3: immunized and challenged with oocysts of ME-49 T. gondii strain; Group 4: non- immunized and challenged with oocysts of ME-49 T. gondii strain; Group 5: immunized and challenged with tachizoites of RH T. gondii strain; Group 6: non- immunized and challenged with tachizoites of RH T. gondii strain; Group 7: only immunized, Group 8: non- immunized and non-challenged. Weekly, after vaccination serological and hematological were performed. After parturition (Experiment I), the rats and newborns were euthanized, tissues and organs were collected for parasite load evaluation by Real Time PCR, intestinal tissue was collected for subsequent histological examinations, immunological involved in immune response against T. gondii. During lactation ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T20:56:07Z : No. of bitstreams: 1 sakamoto_cam_me_araca.pdf: 208426 bytes, checksum: 3281fa8d04c8778ba11645850210ba58 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Doze gatas, sorologicamente negativas para Toxoplasma gondii, foram distribuídas em três grupos de quatro animais cada. Os animais dos grupos 1 e 2 foram infectados com cistos teciduais de T. gondii, por via oral, no terço médio de gestação, sendo: grupo 1 - isolado tipo I altamente virulento para camundongos; grupo 2 - isolado tipo III não virulento para camundongos; e grupo 3 – gatas controle não infectadas. Antes da infecção e durante todo o período experimental foram efetuadas avaliações clínicas. Amostras sangüíneas foram colhidas nos dias 0 (antes da inoculação), 15 e 30 dias pós-infecão para a realização de hemogramas e pesquisa de anticorpos contra T. gondii pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI 16). A infecção com o isolado de T. gondii virulento (tipo I) ocasionou diarréia, vômito, secreções ocular e vaginal e aborto de uma cria. Nas gatas inoculadas com o isolado tipo III não patogênico, foram observados diarréia, vômito, hiporexia, secreções nasal e ocular purulentas e um parto prematuro com natimortos. Todas as oito gatas infectadas com cistos teciduais de T. gondii apresentaram anticorpos contra T. gondii pela RIFI. Em dois filhotes da mesma ninhada, pertencentes ao grupo 1, foram detectados títulos de 16 e 64 aos 10 dias de vida. No grupo 2, títulos de 16, 32 e 32 foram detectados em três filhotes da mesma ninhada. Os resultados deste estudo demonstram que cistos teciduais de T. gondii de genótipos dos tipos I e III (pelo marcador SAG 2) provocaram transtornos reprodutivos semelhantes em gatas gestantes primoinfectadas. / Twelve pregnant queens, serologically negative to Toxoplasma gondii, were distributed into three groups of four animals each. Animals were infected orally with tissue cysts of T. gondii, in the meddle third of their pregnancies as follows: group 1– was infected with isolate type I highly virulent for mice; group 2 – was infected with isolate type III not virulent for mice; group 3 - no infected control queens. Clinical profiles of the animals were determined before infection and during the whole experimental period. Blood samples of the queens were taken in the following days: 0 (before the inoculation), 15 and 30 days pos infection for blood count and for the antibodies detection against T. gondii by the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT 16). Virulent T. gondii (type I) infection caused vomiting, diarrhea, purulent eye secretion, haemorrhagic vaginal secretion and abortion of one pregnancy. Queens infected with non pathogenic type III isolate developed diarrhea, emesis, hyporexia, purulent nose and ocular secretions and one premature stillbirth. In all eight infected queens with tissue cysts T. gondii antibody were detectable by IFAT. In two kittens of the same litter, from group 1, had been detected titers of 16 and 64 at 10 days of age. In group 2, titers of 16, 32 and 32 were detected in 3 kittens of the same litter. Infection with tissue cysts of types I and III (SAG 2 marker) of T. gondii isolates developed similar clinical and reproductive disturbance in primary infected pregnant queens.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-26Bitstream added on 2014-06-13T18:32:17Z : No. of bitstreams: 1 santos_tr_me_jabo_prot.pdf: 615595 bytes, checksum: 5ebde41577462db0b3f3c42f920081d7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Considerando a grande importância da toxoplasmose animal sobretudo em decorrência dos animais infectados servirem de fonte direta ou indireta de infecção ao homem, avaliou-se a freqüência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em bovinos leiteiros, complementando o estudo com amostras colhidas de caninos e humanos de convívio rural. Foram colhidas amostras de sangue de 200 fêmeas leiteiras bovinas, 61 cães e 116 humanos, pertencentes a 50 propriedades da região sudoeste do Estado do Mato Grosso. Os soros foram submetidos à reação de imunoflorescência indireta (IgG-RIFI), utilizando-se comomponto de corte as duluições de 1:64, 1:40 e 1:40 para bovinos, cães e humanos, respectivamente. Anticorpos para T. gondii foram encontrados em 71,00% dos bovinos (n=1420); 88,52% dos cães (n=54) e 97,41% dos humanos (n=113). As amostras de humanos também foram avaliadas para IgM, que mostrou 33,62% de soropositividade. Após essa triagem sorológica, as amostras positivas exceto de humanos, foram processadas até obtenção de título final. A associação dos riscos relacionados à toxoplasmose (IgG)como, consumo de leite cru, produção de derivados de origem animal, abate de animais e contato com felinos e/ou ouros animais, não influenciou na distribuição dos sororreagentes (P>=0,05). Contudo, em relação à presença de IgM detectou-se associação entre soropositividade e o abate de animais para o consumo próprio (P<=0,05). Os resultados demonstraram a elevada prevalência da infecção toxoplasmática na população estudada e o alto risco da carne como via de transmissão para o homem, quando manipulada ou ingerida crua ou mal cozida. / To determine the prevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies, 200 samples of blood serum from female dairy cattle belonging to 50 farms in the southwest of the state of Mato Grosso were analyzed by indirect immunofluorescent antibody test (IFAT>=40) for anti-T. Gondii. From these, 1420 (71,00%) of the cattle serum, 54 (88,52%) of the dog serum and 113 (97,41%) of the serum human were positive for the infection, at a diluition of 1:64 or more for cattle, 1:40 or more for dog and 1:40 for human. The samples human were also evaluated for IgM, wich showed 33,62% of seropositivity. No significant differences were observed to infection toxoplasmic (IgG) in terms consuption of raw milk, produce derivaties of animal origin, slaughtering of animals and contact with felines or other animals. However, for IgM was determined association between seropositivity and the slaughter of animals for personal consumption. Infection toxoplasmic has a high prevalence on the studied population. The results suggest that the handle or eat raw/rare cooked meat may be importants ways of transmiting toxoplasmosis to humans in this region.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:49:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:02:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP