O objetivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade de cistos de Toxoplasma gondii em carnes suínas processadas por maturação úmida por 14, 21 e 28 dias a 0º (±1), assim como avaliar a distribuição dos cistos em órgãos e cortes comerciais de suínos experimentalmente infectados. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos e em ambos, os suínos foram infectados com 3.000 oocistos do isolado TgCkBr57 (BrII). O lombo foi o corte muscular escolhido para sofrer o processo de maturação por ser o corte convencionalmente utilizado para o processo. O lombo direito de cada suíno foi submetido ao processo de maturação e o esquerdo foi mantido como controle, sem processamento. No Experimento 1 três suínos foram infectados. Dos lombos processados por maturação (n=3) e controle (n=3) realizou-se bioensaio em gatos e em camundongos e o período de maturação foi de 14 dias. Nesse ensaio também avaliou-se a distribuição de cistos teciduais pelo bioensaio em camundongos do cérebro, retina, língua, diafragma e coração e de cortes musculares: lombo (m. longissimus), copa (m. longissimus, spinalis dorsi, rhomboideus), filé mignon (m. psoas major), coxão-duro (m. biceps femoris), coxão mole (m. semimembranosus) e alcatra (m. gluteos medius). No Experimento 2 seis suínos foram infectados e foi realizado o bioensaio em camundongos dos lombos que ficaram sob maturação por 14 (n=2), 21 (n=2) e 28 (n=2) dias. Em ambos os experimentos, cistos de T. gondii presentes nos lombos permaneceram viáveis após 14 dias de maturação úmida, com confirmação pelo bioensaio em gatos e em camundongos. Nos períodos de 21 e 28 dias, pelo bioensaio observou-se que os camundongos não se infectaram, indicando que o processo inviabilizou os cistos. Quanto à distribuição dos cistos, estes foram isolados da copa, coração, diafragma e língua dos três suínos; do filé mignon, coxão duro e cérebro de dois suínos e da alcatra e lombo de um suíno. Nenhum camundongo infectou-se no bioensaio com o coxão mole e com a retina. Os resultados demonstram que a maturação em embalagem a vácuo por 14 dias em temperatura controlada (0ºC) não foi eficaz para inativação dos cistos de T. gondii, porém, o processo se mostrou eficiente quando a maturação foi feita por período igual ou superior a 21 dias. Cistos de T. gondii foram encontrados em praticamente todos os órgãos e cortes avaliados, demonstrando a ampla distribuição do parasita em suínos e a importância dessa espécie como fonte de infecção para o homem. / The objective of the present study was to evaluate the viability of Toxoplasma gondii cysts in pork processed by dry-aged for 14, 21 and 28 days at 0º (± 1), as well as to evaluate the distribution of T. gondii cysts in organs and commercial cuts of experimentally infected pigs. For that, two experiments were conducted ans in both the pigs were infected with 3.000 oocysts of the isolate TgCkBr57 (BrII). The loin was the muscle chosen to undergo the dry-aged because it is the cut conventionally used for the process. The right loin of each pig was submitted to the dry-aged and the left was kept as control, without processing. In Experiment 1, three pigs were infected. From the loins processed by dry-aged (n=3) e controle (n=3), the bioassay was performed on cats and mice and the aged period of the loins was 14 days. This study, also avaluated the distribution of T. gondii tissue cysts by bioassay in mice of brain, retina, tongue, diaphragm and hear and of the muscles: loin (m. longissimus), coppa (m. longissimus, spinalis dorsi, rhomboideus), tender loin (m. psoas major), outside flat (m. biceps femoris), topside (m. semimembranosus) and top sirloin (m. gluteos medius) was evaluated. In Experiment 2, six pigs were infected and the bioassay was performed in mice of the loins aged for 14 (n=2), 21 (n=2) and 28 (n=2) days. In both experiments, T. gondii cysts of the loins remained viable after 14 days of dry-aged, confirmed by bioassay in cats and mice. At 21 and 28 days, the bioassay showed that the mice did not become infected, indicating that the process made the cysts unfeasible. As to the distribution of the cysts, T. gondii was isolated from the coppa, heart, diaphragm and tongue of the three pigs, to the tender loin, outside flat and brain of two pigs and to the top sirloin and loin of one pig. No mice were infected in the bioassay with the topside and with the retina. The results demonstrate that the dry-aged for 14 days at controlled temperature (0ºC) was not effective for inactivation of T. gondii cysts, however, the process was efficient when the dry-aged was done for a period egual or righter than 21 days. Toxoplasma gondii cysts were found in practically all organs and cuts evaluated, demonstrating the wide distribution of the parasite in pigs and the importance of this species as a source of infection for man.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-06-20T21:04:05Z No. of bitstreams: 1 fabiananakashima_tese.pdf: 1263029 bytes, checksum: ea1d05d8998fac5ccacd5e04039e5c2a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T21:04:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabiananakashima_tese.pdf: 1263029 bytes, checksum: ea1d05d8998fac5ccacd5e04039e5c2a (MD5) Previous issue date: 2015-12-14 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: Toxoplasma gondii, which causes toxoplasmosis, is an intracellular protozoan that has several transmission routes, among them the transfusion. Objective: To investigate by serological and molecular methods the T. gondii infection in blood donors to assess the risk of transmission via transfusion. Methods: We selected 750 individuals able to donate blood. These individuals were submitted to an interview about their lifestyle habits and a collection of peripheral blood. The immunosorbent assay (ELISA) was used to investigate the presence of anti-T. gondii IgM and IgG classes, and the Nested PCR and qQPCR, the parasitaemia. Positive samples in the molecular methods were submitted for genotyping by the Multilocus Nested PCR RFLP method. Donors with positive molecular result and no positive serology were recalled to investigate seroconversion by ELISA and Indirect Immunofluorescence (IIF). In addition, recipients of blood components with molecular suspected parasitemia were screened. Of these, aliquots were separated from peripheral blood prior to transfusion and after transfusion (± 20 days), which were also analyzed by serological methods (ELISA and IIF) and molecular (PCR, qPCR Mulitplex nested PCR and RFLP). Results: Three hundred and fifty-seven (47.6%) donors had positive result and 393 (52.4%) showed no positive result for the presence of anti-T. gondii IgG class. Twenty-seven (3,6%) showed positive result for IgM and 723 (96.4%) non-reactive. The variables associated with infection by T. gondii were: advanced age (P < 0.0001), consumption of raw milk (P = 0.001), consumption of raw and underare beef and pork meat (P = 0.003), to reside in the countryside (P = 0.004), frequent presence of mechanical vectors in the residence (cockroach, mouse and fly P = 0.02; mice, P = 0.03), lower education (1st grade incomplete, P <0.0001 and 1st grade complete, P = 0.002) and low family income (P = 0.002). No sample was positive by qPCR, but 40 (11%) were positive by Nested PCR and positive serology. However, these samples did not show amplification when undergoing to genotyping. The four cases screened did not show positive results to molecular analysis and no recalled donor presented seroconversion. Conclusion: We concluded that the studied population of blood donors is exposed to various risk factors associated with infection by T. gondii, and it is likely that the high frequency of anti-T. gondii IgG class found in this study is related to this exposure. The results show that there is no molecular evidence of parasitaemia in the studied donors, thus the risk of transmission of this infection via blood transfusion is low or zero in this region. In addition, the failure of genotyping and the non-occurrence of seroconversion of reanalyzed donors suggest that the positivity found in some samples analyzed by Nested PCR, were related to false-positive results. / Introdução: Toxoplasma gondii, causador da toxoplasmose, é um protozoário intracelular que apresenta várias vias de transmissão, dentre elas a transfusional. Objetivo: Investigar por métodos sorológicos e moleculares, a infecção por T. gondii em doadores de sangue para avaliar o risco de transmissão via transfusional. Casuística e métodos: Foram selecionados 750 indivíduos aptos à doação de sangue. Estes indivíduos foram submetidos a uma entrevista sobre seus hábitos de vida e a uma coleta de sangue periférico. Com o ensaio imunoenzimático (ELISA) foi investigada a presença de anticorpos anti-T. gondii das classes IgM e IgG, e por Nested PCR e qPCR a parasitemia. As amostras positivas nos métodos moleculares foram submetidas à genotipagem pelo método Multilocus Nested PCR RFLP. Os doadores com resultados moleculares positivos e sorologias não reagentes foram reconvocados para investigar a soroconversão por ELISA e imunofluorescência indireta (IFI). Além destes, os receptores dos hemocomponentes com suspeita molecular de parasitemia foram rastreados. Destes, foram separadas alíquotas de sangue periférico, antes da transfusão e após a transfusão (±20 dias), as quais também foram analisadas pelos métodos sorológicos (ELISA e IFI) e moleculares (Nested PCR, qPCR e Mulitplex Nested PCR RFLP). Resultados: Trezentos e cinquenta e sete (47,6%) doadores apresentaram resultado reagente e 393 (52,4%) apresentaram resultado não reagente para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii da classe IgG. Vinte e sete (3,6%) apresentaram resultado reagente para IgM e 723 (96,4%) não reagente. As variáveis associadas a infecção por T. gondii foram: média de idade avançada (P < 0,0001), consumo de leite cru (P = 0,001), consumo de carne crua e mal passada de bovino e suíno (P = 0,003), residir na zona rural (P = 0,004), presença frequente de vetores mecânicos na residência (barata, rato e mosca P = 0,02; ratos, P = 0,03), menor grau de escolaridade (1º grau incompleto, P < 0,0001 e 1º grau completo, P = 0,002) e a baixa renda familiar (P = 0,002). Nenhuma amostra foi positiva pela qPCR, mas 40 (11%) apresentaram resultado positivo pela Nested PCR e sorologia reagente. Entretanto, estas amostras ao serem submetidas a genotipagem, não apresentaram amplificações. Os quatro casos rastreados também não apresentaram resultados positivos nas análises moleculares e nenhum doador reconvocado apresentou soroconversão. Conclusão: Concluímos que a população de doadores de sangue estudada está exposta a vários fatores de riscos associados a infecção por T. gondii e, é provável que a elevada frequência de anticorpos anti-T. gondii da classe IgG encontrada neste trabalho esteja relacionada a esta exposição. Os resultados demonstram que não há evidências moleculares de parasitemia nos doadores estudados, portanto o risco de transmissão desta infecção via transfusional é baixo ou nulo para esta região. Além disto, o insucesso da genotipagem e a não ocorrência de soroconversão dos doadores reanalisados sugerem que a positividade, encontrada em algumas amostras analisadas por Nested PCR, tratavam-se de resultados falso-positivos.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2017-09-29T14:01:26Z No. of bitstreams: 1 anavitoriadascamargo_dissert.pdf: 2267502 bytes, checksum: 7b4d6187bc2712721b24d6875f2fc823 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-29T14:01:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anavitoriadascamargo_dissert.pdf: 2267502 bytes, checksum: 7b4d6187bc2712721b24d6875f2fc823 (MD5) Previous issue date: 2016-06-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: Toxoplasmosis, a disease resulting from Toxoplasma gondii infection, is clinically manifested through ocular, cerebral and congenital ways. This pararsito Apicomplexa is capable of infecting cells of all nucleated tissues and may remain in a latent state or cause irreversible cell damage. The HLA class II genes control the adaptive immune response humoral and influence susceptibility and the resistance to infectious and parasitic diseases. The ocular toxoplasmosis, besides being dependent on infection with T. gondii as well as the variability of the infecting strain, is influenced by host genetic factors. Aim: To test the hypothesis that the HLA class II genes (HLA-DRB1 and HLA-DQB1) are associated with ocular toxoplasmosis. Materials and Methods: Samples of 249 patients undergoing ophthalmologic evaluation and positive serology to T. gondii were analyzed. According to the clinical conditions, two distinct groups were composed: one formed by patients with ocular toxoplasmosis (n=123); and another group with patients without the disease ocular form (n=126). The patients with ocular toxoplasmosis were subdivided into two groups, according to the type of ocular manifestation: primary (n=93 samples) or recurrent (n=30). Genotyping of Class II HLA alleles were performed by the polymerase chain reaction technique with specific oligonucleotide sequence (PCR-SSO; One Lambda®). Results: The average ages of the group of patients with ocular toxoplasmosis was less (40.9±19.9) than the average age of patients without ocular toxoplasmosis (57.6±17.2) (p<0.0001).The alleles HLA-DRB1*03 (OR=1,94; IC 95% 1.09-3.45; p=0.031; pc=0.404) and HLA-DQB1*02 (OR=1.52; IC 95% 1.03-2.24; p=0.039; pc=0.197) showed a more allelic frequency in patients without ocular toxoplasmosis when compared to the group with ocular toxoplasmosis. The HLA-DRB1*14 alelle was more frequent in the subgroup of the recurrent manifestation, when compared to the group without ocular toxoplasmosis (OR=0.32; IC 95% 0.12-0.83; p=0.032; pc=0.417) and to the primary manifestation subgroup (OR=0.25; IC95% 0.08-0.73; p=0.017; pc=0.223). The HLA-DRB1*03_DQB1*02 haplotype was not associated with the lower risk of ocular toxoplasmosis (OR=1.86; IC 95%: 1.03-3.36; p=0.052). Conclusions: The obtained results suggest that the Class II HLA genes (DRB1 and DQB1) are not associated with the ocular toxoplasmosis development; and that none HLA DRB1_DQB1 haplotype influences the ocular toxoplasmosis development in the study population. / Introdução: A toxoplasmose, uma doença resultante da infecção por Toxoplasma gondii, manifesta-se clinicamente nas formas ocular, cerebral e congênita. Este parasito Apicomplexa infecta células nucleadas de todos os tecidos e pode permanecer em estado latente ou provocar danos celulares irreversíveis. Os genes HLA de classe II controlam a resposta imune adaptativa humoral e influenciam a suscetibilidade e a resistência às doenças infecciosas e parasitárias. A toxoplasmose ocular, além de ser dependente da infecção por T. gondii e da variabilidade das cepas infectantes, é fortemente influenciada por fatores genéticos do hospedeiro. Objetivo: Testar a hipótese de que os genes HLA de classe II (HLA-DRB1 e HLA-DQB1) estão associados à toxoplasmose ocular. Materiais e Métodos: Foram analisadas amostras de DNA de 249 indivíduos submetidos à avaliação oftalmológica e com sorologia reagente para T. gondii. De acordo como quadro clínico, dois grupos distintos foram compostos: um formado por pacientes com toxoplasmose ocular (n=123) e outro grupo, por pacientes sem a forma ocular da doença (n=126). Os pacientes com toxoplasmose ocular foram subdivididos em dois grupos de acordo com o tipo de manifestação ocular: primária (n=93) ou recorrente (n=30). A genotipagem dos alelos HLA de classe II foi realizada pela técnica reação da cadeia de polimerase com sequência de oligonucleotídeos específicos (PCR-SSO; One Lambda®). Resultados: A média de idade dos pacientes com toxoplasmose ocular foi menor (40.9±19.9) que a daqueles sem toxoplasmose ocular (57.6±17.2) (p<0.0001). Os alelos HLA-DRB1*03 (OR=1,94; IC 95% 1.09-3.45; p=0.031; pc=0.404) e HLA-DQB1*02 (OR=1.52; IC 95% 1.03-2.24; p=0.039; pc=0.197) apresentaram maior frequência alélica no grupo sem toxoplasmose ocular em comparação ao grupo com toxoplasmose ocular. O alelo HLA-DRB1*14 foi mais frequente no subgrupo com a manifestação recorrente em comparação ao grupo sem toxoplasmose ocular (OR=0.32; IC 95% 0.12-0.83; p=0.032; pc=0.417) e com o subgrupo manifestação primária (OR=0.25; IC95% 0.08-0.73; p=0.017; pc=0.223). O haplótipo HLA-DRB1*03_DQB1*02 não se mostrou associado ao menor risco de toxoplasmose ocular (OR=1.86; IC 95%: 1.03-3.36; p=0.052). Conclusões: Os resultados obtidos sugerem que os genes HLA de classe II (DRB1 e DQB1) não estão associados com o desenvolvimento da toxoplasmose ocular e que nenhum haplótipo HLA DRB1_DQB1 influencia o desenvolvimento desta doença na população analisada.

Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-11-09T18:03:41Z No. of bitstreams: 1 ChristianeAyo_tese.pdf: 8833199 bytes, checksum: e3a470634a8f41b17966d4b370464f0c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-09T18:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ChristianeAyo_tese.pdf: 8833199 bytes, checksum: e3a470634a8f41b17966d4b370464f0c (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Ocular toxoplasmosis, characterized by an intraocular inflammation, is the most common clinical manifestation of toxoplasmosis, the infectious disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii. The lesions can affect the macula and other layers of the retina and the choroid, resulting in retinochoroiditis with different degrees of ocular involvement. Chagas disease is resulting from infection by the protozoan Trypanosoma cruzi. After 20 years of infection, about 30% develop chronic Chagas heart disease, which is clinically manifested by malignant ventricular arrhythmia, thromboembolism, sudden cardiac death, and chronic heart failure. Ten per cent of Chagas patients present the digestive form of the disease, characterized mainly by dilatations of the esophagus and/or colon, due to the denervation process. The progression of the infection, as well as the development of the different clinical forms and different degrees of severity may be related to genetic characteristics of the pathogen and the host. Among the factors related to the host, the immunological response is of special interest with genetic markers playing an important modulating role in this context as they may contribute to the pathogenesis or resistance in the clinical course of these infections. Objective: The present study aimed to verify the hypothesis that KIR genes, their HLA ligands and MICA gene polymorphisms are associated with ocular toxoplasmosis (OT) and the different clinical forms of Chagas disease. Patients and Methods: This study included 297 patients with toxoplasmosis, 148 clinically diagnosed with OT and 149 without OT. Moreover, 267 patients with Chagas disease were enrolled: 78 clinically diagnosed with the digestive form of the disease, 107 with the cardiac form and 82 with the mixed form. The ELISA technique was used to confirm infection by T. gondii and T. cruzi. Polymorphisms of the KIR and MICA genes were identified by PCR-SSOP and nested PCR. Continuous variables were compared using the unpaired t test and the Chi-square test with Yates correction or the Fisher's exact test were used compare the other results. Results: In relation to the toxoplasmosis, MICA genotypes and alleles did not differ between patients with and without OT, or between patients with the primary or recurrent manifestations of the disease. KIR3DS1 gene was positively associated with the development of OT. KIR activating genes along with their HLA ligands (KIR3DS1+/Bw4-80Ile+, KIR2DS1+/C2+ and KIR3DS1+/Bw4-80Ile+) were associated with susceptibility to OT and both its primary and recurrent clinical manifestations. The inhibitory pairs - KIR2DL3/2DL3-C1/C1 and KIR2DL3/2DL3-C1 - were associated with resistance to OT and its clinical manifestations, whereas the combination KIR3DS1-/KIR3DL1+/Bw4-80Ile+ was a protection factor for the development of OT and, in particular, against recurrent manifestations. As for Chagas disease, The MICA-129met allele was associated with the development of left ventricular systolic dysfunction (LVSD) in patients with chronic chagasic cardiomyopathy, while the MICA-129val allele was associated with a protection of developing LVSD. In particular, the MICA-129 met/met homozygous haplotype was associated with the development of severe LVSD and the MICA-129 val/val homozygous genotype protected against this condition. It was also possible to demonstrate that the haplotype MICA*008~HLA-C*06 and the combination between KIR genes and their HLA ligands - KIR2DS2-/KIR2DL2-/KIR2DL3+/C1+ - were associated with susceptibility for the digestive clinical form of Chagas disease. Conclusions: Our results demonstrate that KIR genes may influence both OT and the clinical digestive form of Chagas disease, whereas the MICA gene may influence the clinical forms of Chagas disease, but not the development of OT. / A toxoplasmose ocular, caracterizada por uma inflamação intraocular, é a manifestação clínica mais comum da toxoplasmose, doença infecciosa causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. As lesões podem afetar a mácula, as diversas camadas da retina e a coróide resultando em retinocoroidite com diferentes graus de comprometimento ocular. A doença de Chagas é resultante da infecção pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Após 20 anos de infecção, cerca de 30% dos pacientes desenvolvem a cardiopatia chagásica crônica, que se manifesta clinicamente por arritimia ventricular malígna, tromboembolismo, morte súbita cardíaca e insuficiência cardíaca crônica. Dez por cento dos pacientes apresentam a forma digestiva, caracterizada principalmente por dilatações do esôfago e/ou cólon devido ao processo de denervação. A progressão de uma infecção, assim como o desenvolvimento de diferentes formas clínicas e diferentes graus de gravidade, podem estar relacionadas com as características genéticas do patógeno e do hospedeiro. Dentre os fatores relacionados ao hospedeiro, a resposta imunológica desperta um interesse especial e os marcadores genéticos exercem importante papel modulador neste contexto, pois podem contribuir para patogênese ou resistência do curso clínico dessas infecções. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo verificar a hipótese de que os genes KIR, seus ligantes HLA e o polimorfismo do gene MICA estão associados à toxoplasmose ocular (TO) e às diferentes formas clínicas da doença de Chagas. Casuística e métodos: Foram incluídos no estudo 297 pacientes com toxoplasmose, 148 clinicamente classificados com TO e 149 sem TO. Também participaram deste estudo 267 pacientes com doença de Chagas, 78 clinicamente classificados com a forma digestiva da doença, 107 com a forma cardíaca, 82 com a forma mista. O teste de ELISA foi realizado para confirmar as infecções por T. gondii e T. cruzi. Os polimorfismos destes genes foram identificados por PCR-SSOP e PCR nested. As variáveis contínuas foram comparadas utilizando o teste t não pareado. Para comparação dos demais resultados foram realizados o Teste Qui-quadrado com correção de Yates ou o Teste Exato de Fisher. Resultados: Em relação à toxoplasmose, alelos e genótipos MICA não diferiram entre os pacientes com e sem TO, nem entre os pacientes com a manifestação primária ou recorrente da doença. O gene KIR3DS1 foi associado positivamente com o desenvolvimento da TO. Genes KIR ativadores juntamente com os seus ligantes HLA (KIR3DS1+/Bw4-80Ile+ e KIR2DS1+/C2+ + KIR3DS1+/Bw4-80Ile+) foram associados com suscetibilidade à TO e às suas manifestações clínicas primária e recorrente. Os pares inibidores - KIR2DL3/2DL3-C1/C1 e KIR2DL3/2DL3-C1 – foram associados com a resistência à TO e suas manifestações clínicas, enquanto que a combinação KIR3DS1-/KIR3DL1+/Bw4-80Ile+ foi associada como fator de proteção para o desenvolvimento da TO e, em particular, para a manifestação recorrente. Quanto à doença de Chagas, o alelo MICA-129met foi associado como fator de risco para o desenvolvimento da disfunção sistólica ventricular esquerda (DSVE) em pacientes com cardiopatia chagásica crônica, enquanto que o alelo MICA-129val foi associado com a proteção ao desenvolvimento da DSVE. Em especial o haplótipo homozigoto MICA-129 met/met foi associado com o desenvolvimento da DSVE grave e o genótipo homozigoto MICA-129 val/val foi associado com a proteção desta condição. Também foi possível demonstrar que o haplótipo MICA*008~HLA-C*06 e a combinação entre KIR e seus ligantes HLA - KIR2DS2-/KIR2DL2-/KIR2DL3+/C1+ - foram associados como fatores de suscetibilidade à forma clínica digestiva da doença de Chagas. Conclusões: Nossos resultados demonstram que os genes KIR podem exercer influência tanto na toxoplasmose ocular quanto na forma clínica digestiva da doença de Chagas, enquanto que MICA pode exercer influência nas formas clínicas da doença de Chagas, mas não no desenvolvimento da toxoplasmose ocular.

Resumo: A toxoplasmose na maioria dos casos é assintomática, porém pode causar seqüelas graves no feto, quando transmitida durante a fase aguda da infecção pela gestante. Diante disso, é de fundamental importância o acompanhamento sorológico de gestantes, a fim de definir o momento em que houve a aquisição da infecção por T. gondii, possibilitando assim, o tratamento precoce e diminuindo, portanto, o risco de transmissão congênita. No período de Janeiro a Novembro de 2005, avaliou-se a metodologia sorológica do teste de avidez de IgG anti-Toxoplasma gondii na rotina laboratorial entre as gestantes com teste sorológico negativo para anticorpos IgM anti-Toxoplasma (n = 200) e gestantes com teste sorológico positivo (n = 33) durante o pré-natal, em Araraquara-SP, no Laboratório de Imunologia Clínica e Biologia Molecular NAC-FCF/UNESP. Os resultados foram avaliados, segundo o perfil sorológico das gestantes participantes da pesquisa e a variação do índice de avidez de IgG entre as soropositivas para IgM e sua relação com o tratamento antiparasitário. Baseando-se nos resultados ressaltou-se a importância da adoção de medidas profiláticas para a redução da transmissão congênita. Todos os resultados para anticorpos IgG e IgM devem ser notificados na ficha da paciente, outros testes complementares devem ser realizados e a interpretação utilizada para o teste de avidez de IgG, precisa ser padronizada. Concluiu-se que alguns profissionais de saúde realizaram desnecessariamente o tratamento antiparasitário nas gestantes. Embora as gestantes realizem em sua maioria, o pré-natal no primeiro trimestre de gestação, a prevalência para toxoplasmose entre as gestantes de Araraquara-SP foi elevada, necessitando, portanto, de melhor acompanhamento da gestante e do recém-nascido e conscientização da importância da assistência à saúde pelos serviços de saúde. / Abstract: Toxoplasmosis usually is asymptomatic but can cause serious sequels in the fetus, when transmitted during the acute stage by the pregnant woman. Therefore, the serological screening of pregnant women has fundamental importance, in order to define the moment of contamination by T. gondii, and thus facilitating the precocious treatment and decreasing the risk of congenital transmission. During the period of January to November of 2005, we evaluated the serological methodology of IgG avidity test for toxoplasmosis in the routine laboratory, among pregnant women, with negative serological test for anti-Toxoplasma IgM antibodies (n = 200) and pregnant with serological test positive (n = 33), during the prenatal, in Araraquara-SP, in Immunology Clinic's Laboratory and Molecular Biology NAC-FCF/UNESP. The results in this study were evaluated, according to the serological profile of the pregnant women and the variation of anti-Toxoplasma IgG avidity index among the pregnant women with positive IgM antibodies and its relationship with the antiparasitic treatment. According to our results, we reinforce the importance of use prophylactics measures to reduce congenital transmission. All results for IgG and IgM antibodies must be notified, other complementary tests should be accomplished and the interpretation used for the IgG avidity test should be standardized. We concluded that some professionals realized unnecessary antiparasitic treatment. Although most of pregnant women at Araraquara-SP accomplish the prenatal in the first trimester of gestation, the prevalence for toxoplasmosis are elevated, needing therefore, a better accompaniment of the pregnant women and of the newly born and conscientiousness about the importance of health assistance during pregnancy by health services. / Orientador: Maria Jacira Silva Simões / Coorientador: Paulo Inácio da Costa / Banca: Semíramis Guimarães Ferraz Vianna / Banca: Herminia Yohko Kanamura / Mestre

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-04-04T11:49:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Nícolas Gustavo Matias de Oliveira - 2018.pdf: 1671663 bytes, checksum: 77209b17924ba8b6327e4442c9878a74 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-04-04T13:24:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Nícolas Gustavo Matias de Oliveira - 2018.pdf: 1671663 bytes, checksum: 77209b17924ba8b6327e4442c9878a74 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-04T13:24:34Z (GMT). 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The agent that causes toxoplasmosis, Toxoplasma gondii, seems to be related to the development and progression of the disease, evidenced by studies that argue that T. gondii infection may be a triggering factor for psychosis in some individuals, since the parasite has a certain tropism by the central nervous system. Furthermore, studies have reported parasite infection as a factor related to genotoxicity, including toxoplasma infection in an animal model. Based on the foregoing, the present study aimed to evaluate the seropositivity to T. gondii (IgM or IgG) and the avidity of IgG in a group of individuals diagnosed with EQZ in the city of Goiânia and to evaluate the occurrence of genotoxicity in these, of genotoxicity with exposure to xenobiotics such as tobacco, alcohol, especially drugs, and / or T. gondii infection. Seropositivity was observed above 70% among individuals diagnosed with EQZ in relation to the controls, with avidity above 50%, indicating that individuals had contact with T. gondii at some time prior to the survey. Despite the genotoxic damage found, there was no significant difference in genotoxic damage among the infected individuals evaluated. The present study did not demonstrate that T. gondii may be a contributing factor to the occurrence of DNA damage, and the use of antipsychotic drugs, tobacco and alcohol, despite being a risk factor for genotoxicity, did not demonstrate an influence significant difference in the present study. However, it is necessary to carry out other analyzes and investigate parameters such as the time of drug use and exposure to other xenobiotics. In order to know better the life habits of individuals, it may help to provide more information about this relationship between T. gondii and EQZ. / A esquizofrenia (EQZ) é uma doença mental crônica que afeta cerca de 1% da população mundial e se caracteriza por domínios comportamentais, como sintomas positivos, caracterizados por alucinações e delírios e sintomas negativos, que envolvem apatia, anedonia e embotamento social. A causa da EQZ ainda permanece desconhecida, mas sabe-se que se trata de uma doença que cuja etiologia envolve fatores ambientais e genéticos. Vários estudos buscam identificar fatores que esclareçam a etiologia da doença. O agente causador da toxoplasmose, Toxoplasma gondii, parece ter relação com o desenvolvimento e progressão da doença, evidenciado por estudos que defendem que a infecção por T. gondii pode ser um fator desencadeante de psicoses em alguns indivíduos, já que o parasito apresenta um certo tropismo pelo sistema nervoso central. Ainda, estudos tem reportado a infecção por parasitos como fator relacionado a genotoxicidade, incluindo a infecção pelo toxoplasma em um modelo animal. Com base no exposto, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a soropositividade para T. gondii (IgM ou IgG) e a avidez da IgG em um grupo de indivíduos diagnosticados com EQZ do município de Goiânia e avaliar a ocorrência de genotoxicidade nestes, procurando relação da genotoxicidade com a exposição a xenobióticos como tabaco, álcool, especialmente medicamentos, e/ou com a infecção pelo T. gondii. Observou- se soropositividade acima de 70% entre os indivíduos diagnosticados com EQZ em relação aos controles, com avidez acima de 50%, indicando que os indivíduos tiveram contato com o T. gondii em algum momento anterior a pesquisa. Apesar do dano genotóxico encontrado, não houve diferença significativa no dano genotóxico entre os indivíduos infectados avaliados. O presente estudo não demonstrou que T. gondii pode ser um fator contribuinte para a ocorrência de danos ao DNA, e o uso de fármacos antipsicóticos, o fumo e o álcool, apesar de serem um fator de risco para a genotoxicidade, não demonstraram uma influência significativa no presente estudo. Entretanto, há a necessidade de realizar outras análises e investigar parâmetros como o tempo de uso dos fármacos, e de exposição a outros xenobióticos, enfim, o melhor conhecimento dos hábitos de vida dos indivíduos pode ajudar a trazer mais informações acerca dessa relação entre T. gondii e a EQZ.

Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-04-13T11:51:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thays Millena Alves Pedroso - 2018.pdf: 1986082 bytes, checksum: b3aac60659fe2df15ac816445271ea24 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-04-13T12:39:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thays Millena Alves Pedroso - 2018.pdf: 1986082 bytes, checksum: b3aac60659fe2df15ac816445271ea24 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-13T12:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thays Millena Alves Pedroso - 2018.pdf: 1986082 bytes, checksum: b3aac60659fe2df15ac816445271ea24 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Schizophrenia is a complex mental disorder in which the individual has difficulty distinguishing between what is real and what is imaginary. It is a multifactorial disease in which factors such as environment, genetic predisposition, toxoplasmosis and biochemical changes in the brain are closely related to the severity of the disease, both positive and negative symptoms. The present study aimed to evaluate the prevalence of toxoplasmosis and genotoxicity of Toxoplasma gondii in individuals diagnosed with schizophrenia. The ELISA immunoenzymatic assay was used to evaluate the seropositivity to T. gondii and the comet assay to detect genotoxic damage. In the group, 69 individuals and 45 individuals who did not have schizophrenia or any mental disorder were analyzed. A statistically significant difference (p <0.05) was observed when the mean age and tobacco use frequency were analyzed, the individuals diagnosed with schizophrenia showed higher seropositivity (p <0.01) when compared to the control group. Analyzing the mean ± SD (standard deviation), they showed greater genotoxic damage in the case group in relation to the control group. In addition, it was observed that the association between the genotoxic damage of the case group with sex, IgG, disease, smoking and alcoholic beverages presented values of p> 0.05. Thus, it can be concluded that there was no significant difference when comparing the genders to the prevalence of toxoplasmosis in the individuals diagnosed with schizophrenia. In the case group it was possible to verify greater genotoxic damage in the DNA than in the control group. / A esquizofrenia é um transtorno mental complexo em que o indivíduo tem dificuldades para distinguir o que é real e o que é imaginário. É uma doença multifatorial, em que fatores como ambiente, pré-disposição genética, toxoplasmose e alterações bioquímicas no cérebro estão intimamente relacionados com a severidade da doença, sintomas positivos e negativos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a prevalência da toxoplasmose e genotoxicidade do Toxoplasma gondii em indivíduos diagnosticados com esquizofrenia. Foi usado o teste imunoenzimático ELISA para avaliar a soropositividade para T. gondii e o ensaio cometa para detectar o dano genotóxico. Foram analisados no grupo caso 69 indivíduos e 45 indivíduos que não possuem esquizofrenia ou qualquer transtorno mental. Observou-se diferença estatisticamente significativa (p<0,05) ao se analisar as médias de idade e na frequência do uso de tabaco, os indivíduos diagnosticados com esquizofrenia apresentaram a soropositividade maior (p<0,01), ao serem comparadas ao grupo controle. Analisando a média ± DP (desvio padrão), mostraram maior dano genotóxico no grupo caso em relação ao grupo controle. Além disso, observou se que a análise quanto a associação entre o dano genotóxico do grupo caso com o sexo, IgG, doença, tabagismo e bebida alcoólica apresentou valores de p>0,05. Sendo assim pode-se concluir que não houve diferença significativa ao se comparar os gêneros quanto à prevalência de toxoplasmose nos indivíduos diagnosticados com esquizofrenia. No grupo caso foi possível verificar um maior dano genotóxico no DNA do que no grupo controle.

A toxoplasmose é uma protozoose altamente prevalente que atinge pelo menos um bilhão de indivíduos no mundo. A infecção causada pelo Toxoplasma gondii é benigna e assintomática, mas pode causar perdas visuais ou morte em fetos e pacientes imunossuprimidos. Isto pode ser controlado com diagnóstico e instituição de tratamento, mas depende da determinação de infecção ativa ou recente. O diagnóstico parasitológico é complexo, demorado e só executado em poucos centros, sendo a sorologia específica essencial no diagnóstico da doença. A avidez de anticorpos IgG tem sido utilizada para determinação da infecção recente, porém os testes convencionais de avidez só permitem uma estimativa indireta destes anticorpos a partir dos anticorpos totais e os de alta avidez. A quantificação destes anticorpos de baixa avidez seria interessante devido aos altos títulos na fase aguda da infecção ou como marcadores da atividade da doença. Padronizamos um ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando o pH como agente caotrópico, para permitir a determinação e quantificação dos anticorpos de baixa avidez. Na padronização utilizamos amostras de soro de coelhos experimentalmente infectados ou amostras do banco de material biológico do Laboratório de Protozoologia do IMTSP. Nossos resultados mostraram que pH 3,5 apresentou poder caotrópico semelhante a uréia 6M (r2= 0,9909), e que nos soros experimentais, os anticorpos de alta avidez foram resistentes aos dois caotrópicos associados. Os anticorpos recuperados na eluição com pH 3.5 ou Uréia eram semelhantes quanto a especificidade antigênica por imunomarcação ou Western Blot. A neutralização do anticorpo eluído por pH permitiu seu reensaio por ELISA após 1 hora de renaturação, com a quantificação direta dos anticorpos de baixa avidez.. A reprodutibilidade intra e inter teste foi superior a 95%, embora com resultados piores para o pH 3,5. Uma vez padronizada a reação, foram analisadas 150 amostras de soros humanos com sorologia e avidez conhecidas, composta por grande maioria de soros de alta avidez. As medidas de avidez por porcentagem mostraram um resultado errático, atribuído ao uso de grande maioria de anticorpos de alta avidez, embora a medida dos anticorpos recuperados mantivesse correlação com estimativa a partir da medida indireta (r2= 0.48). Esta abordagem permite a determinação direta dos anticorpos de baixa avidez, que são os anticorpos inicialmente produzidos em um desafio antigênico. Nosso ensaio é semelhante ao imunológico, já que a apresentação de antígenos por exossomos ácidos de células dendríticas foliculares no centro germinativo parece ser o sistema de seleção de clones produtores de anticorpos de alta avidez. As perspectivas futuras de uso da medida dos anticorpos de baixa avidez na toxoplasmose são imensas, desde a relação com a gravidade da doença, pela sua quantidade, ou da presença de infecção recente, principalmente em infecção congênita ou e em imunossuprimidos, ou a reatividade da doença crônica, como na toxoplasmose ocular. / Toxoplasmosis is a highly prevalent protozoosis, affecting at least one billion people worldwide. The infection caused by Toxoplasma gondii is asymptomatic and benign but it can cause visual losses in addition to death in fetuses and immunocompromised patients. The agent can be controlled by early diagnosis and treatment, but this therapy depends on the determination of active or recent infection. The parasitological diagnosis is complex, time consuming and only performed in few centers, so specific serology is essential for diagnosis. The IgG avidity tests has been used to determine recent infection, but avidity conventional tests only provide an indirect estimate of low avidity antibodies from the total and high avidity antibodies. The quantification of low avidity antibodies would be interesting due to high titers in the acute phase of infection or as markers of disease activity. Using reversible chaotrope such as pH, we standardized an enzyme immunoassay (ELISA) to allow the determination and quantification of low avidity antibodies. For standardization we used serum samples from experimentally infected rabbits or samples of biological material bank of the Laboratory of Protozoology, IMTSP. Our results showed that pH 3.5 is a chaotrope similar to 6M urea (r2 = 0.9909) in avidity ELISA, and high avidity antibodies had similar resistance to two associated chaotrope in experimental sera. The antibodies recovered on elution with pH 3.5 or urea had similar antigen specificity by immunostaining or Western blot. The neutralizing antibody eluted by pH allowed retest by ELISA after 1 hour of refolding, with direct quantification of antibodies of low avidity. The reproducibility inter and intra test were above 95%, but with worse results for pH 3.5. After standardization, we analyzed 150 samples of human sera with known serology and avidity, composed by a large majority of high avidity samples. Avidity as percent of high avidity antibodies showed erratic results in chaotrope comparison, attributed to the majority of high avidity samples, although the direct measure of low avidity IgG kept correlation with the indirect estimate (r2 = 0.48). This approach allows the direct determination of low avidity antibodies that are early produced in an antigen challenge. Our test is similar to the biology of antibody selection, since antigen presentation by acid exosomes of follicular dendritic cells in germinal center seems to be the system of selection of clones that produce high avidity antibodies. The prospective use of the quantification of low avidity antibodies in toxoplasmosis are attractive, either by the quantitative relationship with the severity of the disease; or the increased presence in recent infections, especially in congenital infection and in immunosuppressed patients, or their relative increase in reactivated chronic disease, such as ocular toxoplasmosis.

Made available in DSpace on 2016-08-19T18:15:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao JAYRA ADRIANNA DA SILVA SOUSA.pdf: 671009 bytes, checksum: f0e6bf5f327201cfaa12b11622daaee9 (MD5) Previous issue date: 2014-11-28 / Toxoplasmosis is an infection that affects nearly one third of the world population. In the adult, not always symptomatic, however important events in children, by transplacental transmission. The Pre-Christmas is an important moment with actions directed to the care of the woman in pregnancy to prevent diseases that compromise the life of the mother and child. This is a descriptive qualitative study aiming to understand the perception of nurses and pregnant women about toxoplasmosis of Prenatal Primary Care. Was performed in 05 units of primary health care in the municipality of São Luis - MA. The sample consisted of 15 nurses working in nursing consultation and 15 pregnant women attended prenatal. To collect data we used a semi-structured questionnaire and an interview guide covering issues related to knowledge and behaviors about toxoplasmosis. The analysis was performed using the technique of content analysis. The results showed the following categories: Knowledge of toxoplasmosis; Guidance during prenatal visits; Nurses' knowledge of the avidity test; Conduct and guidelines reagents cases. Pregnant women showed ignorance about Toxoplasmosis and its effects. However, nurses demonstrated a basic, but of little usefulness as regards the guidelines for mom. It is emphasized that the nurse plays an important role in educational actions for pregnant women, contributing to the quality of prenatal care. / A Toxoplasmose é uma infecção que acomete quase um terço da população mundial. No adulto, nem sempre sintomático, porém de manifestações importantes em crianças, pela transmissão transplacentária. O Pré-Natal representa um momento importante com ações voltadas aos cuidados da mulher no período gestacional a fim de evitar agravos que comprometam a vida da mãe e filho. Tratase de um estudo descritivo de abordagem qualitativa com o objetivo de Conhecer a percepção dos enfermeiros e gestantes sobre Toxoplasmose no Pré-Natal da Atenção Básica. Foi realizado em 05 Unidades de Atenção Básica de Saúde, no município de São Luis MA. A amostra foi de 15 enfermeiros que atuam na consulta de enfermagem e 15 gestantes assistidas no pré-natal. Para a coleta de dados utilizou-se um questionário semi-estruturado e um roteiro de entrevista contemplando questões relacionadas ao conhecimento e condutas sobre toxoplasmose. A análise foi realizada utilizando-se a técnica de Análise de Conteúdo. Os resultados mostraram as categorias: Conhecimento sobre Toxoplasmose; Orientações durante a consulta pré-natal; Conhecimento dos enfermeiros sobre o teste de avidez;Conduta e orientações em casos reagentes. As gestantes demonstraram desconhecimento sobre a Toxoplasmose e seus efeitos. No entanto, os enfermeiros demonstraram ter conhecimentos básicos, porém de pouca aplicabilidade no que diz respeito a orientações às gestantes. Destaca-se que o enfermeiro desempenha papel importante nas ações educativas às gestantes, contribuindo para a qualidade da assistência pré-natal.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-05-16T19:17:11Z No. of bitstreams: 1 JayraSousa.pdf: 671009 bytes, checksum: f0e6bf5f327201cfaa12b11622daaee9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T19:17:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JayraSousa.pdf: 671009 bytes, checksum: f0e6bf5f327201cfaa12b11622daaee9 (MD5) Previous issue date: 2014-11-28 / Toxoplasmosis is an infection that affects nearly one third of the world population. In the adult, not always symptomatic, however important events in children, by transplacental transmission. The Pre-Christmas is an important moment with actions directed to the care of the woman in pregnancy to prevent diseases that compromise the life of the mother and child. This is a descriptive qualitative study aiming to understand the perception of nurses and pregnant women about toxoplasmosis of Prenatal Primary Care. Was performed in 05 units of primary health care in the municipality of São Luis - MA. The sample consisted of 15 nurses working in nursing consultation and 15 pregnant women attended prenatal. To collect data we used a semi-structured questionnaire and an interview guide covering issues related to knowledge and behaviors about toxoplasmosis. The analysis was performed using the technique of content analysis. The results showed the following categories: Knowledge of toxoplasmosis; Guidance during prenatal visits; Nurses' knowledge of the avidity test; Conduct and guidelines reagents cases. Pregnant women showed ignorance about Toxoplasmosis and its effects. However, nurses demonstrated a basic, but of little usefulness as regards the guidelines for mom. It is emphasized that the nurse plays an important role in educational actions for pregnant women, contributing to the quality of prenatal care. / A Toxoplasmose é uma infecção que acomete quase um terço da população mundial. No adulto, nem sempre sintomático, porém de manifestações importantes em crianças, pela transmissão transplacentária. O Pré-Natal representa um momento importante com ações voltadas aos cuidados da mulher no período gestacional a fim de evitar agravos que comprometam a vida da mãe e filho. Tratase de um estudo descritivo de abordagem qualitativa com o objetivo de Conhecer a percepção dos enfermeiros e gestantes sobre Toxoplasmose no Pré-Natal da Atenção Básica. Foi realizado em 05 Unidades de Atenção Básica de Saúde, no município de São Luis – MA. A amostra foi de 15 enfermeiros que atuam na consulta de enfermagem e 15 gestantes assistidas no pré-natal. Para a coleta de dados utilizou-se um questionário semi-estruturado e um roteiro de entrevista contemplando questões relacionadas ao conhecimento e condutas sobre toxoplasmose. A análise foi realizada utilizando-se a técnica de Análise de Conteúdo. Os resultados mostraram as categorias: Conhecimento sobre Toxoplasmose; Orientações durante a consulta pré-natal; Conhecimento dos enfermeiros sobre o teste de avidez;Conduta e orientações em casos reagentes. As gestantes demonstraram desconhecimento sobre a Toxoplasmose e seus efeitos. No entanto, os enfermeiros demonstraram ter conhecimentos básicos, porém de pouca aplicabilidade no que diz respeito a orientações às gestantes. Destaca-se que o enfermeiro desempenha papel importante nas ações educativas às gestantes, contribuindo para a qualidade da assistência pré-natal.