Os efeitos benéficos que as bactérias probióticas proporcionam à saúde humana dependem de sua quantidade e atividade biológica no intestino humano. Esse trabalho objetivou estabelecer as melhores condições laboratoriais para o cultivo e enumeração diferencial de cinco culturas de bactérias, sendo três probióticas (Bifidobacterium animalis Bb12, Lactobacillus acidophilus La05, Lactobacillus casei Lc01) e duas láticas não probióticas (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus e Streptococcus thermophilus). O trabalho objetivou também avaliar a capacidade de duas linhagens de bactérias probióticas de Lactobacillus casei (Shirota e Lc01) sobreviverem ao transito pelo trato gastrintestinal humano (TGI), empregando modelos simulados in vitro. Foram testados vinte e um meios de cultura diferentes, semeados em superfície e em profundidade, e incubados a 37°C e a 42°C, em condições de aerobiose e anaerobiose. Para a avaliação da resistência ao TGI, empregou-se modelos simulados constituídos de solução de NaCI estéril (0,5% p/v) contendo pepsina (3g/L), com pH 1,5, 2,0, 2,5 e 3,0 (suco gástrico) e solução de NaCI estéril (0,5% p/v) contendo pancreatina (1g/L) e bile (10g/L), com pH 8,0 (suco entérico). As culturas foram expostas ao suco gástrico por até 120min, e em seguida ao suco entérico por até 240min. Os resultados indicaram que a suplementação do ágar MRS com diferentes compostos e o uso de combinações apropriadas de forma de semeadura e condições de incubação permitem tornar o ágar MRS um meio seletivo e diferencial para as diferentes espécies testadas. Em função dos resultados da avaliação dos meios de cultura, selecionou-se o ágar MRS pH 5,4 com semeadura em profundidade e incubação a 37°C em aerobiose para avaliar a resistência de L. casei (Shirota e Lc01) ao TGI. Os resultados revelaram que, após a exposição por 30min ao suco gástrico com pH 1,5 e 2,0, as duas linhagens de L. casei não eram mais cultiváveis. Em pH 2,5, houve redução de 4 ciclos log após 2h e, em pH 3,0, não houve modificação no número de células viáveis. A transferência para o suco entérico resultou na reversão parcial da injúria causada pelo suco gástrico extremamente ácido. Além disso, foi demonstrado que o leite pode proteger as bactérias do estresse decorrente da passagem pelo TGI. / The beneficial effects of probiotic bacteria to the human health depend on their quantity and biological activity in the human gut. This study aimed to establish the best laboratorial conditions for the differential cultivation and enumeration of five bacterial cultures, including three probiotic (Bifidobacterium animalis Bb12, Lactobacillus acidophilus La05 and Lactobacillus casei Lc01) and two nonprobiotic (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Streptococcus thermophilus) strains. In addition, this study also aimed to evaluate the capability of two probiotic strains (Lactobacillus casei Shirota and Lc01) to survive the transit through the human gastrointestinal tract, using in vitro simulated models. Twenty one different culture media were tested. They were inoculated using pour-plating and spread-plating techniques. Plates were incubated at 37°C and 42°C, under aerobiosis and anaerobiosis. Resistance to the gastrointestinal tract was tested using simulated models, constituted by 0.5% saline containing pepsin (3g/L) at pH 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0 (gastric juice) and by 0.5% saline containing pancreatin (1g/L) and bile (10g/L) at pH 8.0 (enteric juice). The cultures were exposed to gastric juice (up to 120min) and then to enteric juice (up to 240min). Results indicated that supplementation of MRS agar with certain compounds and use of appropriate combinations of plating procedures and incubation conditions can turn MRS agar a selective and differential medium for the tested species. The combination MRS agar at pH 5,4, pour-plating and incubation at 37°C under aerobiosis was selected for evaluation of resistance of the L. casei (Shirota e Lc01) to the gastrointestinal tract. Results indicated that both cultures became non-culturable after 30min exposure to the gastric juice at pH 1.5 and 2.0. After 2h at pH 2.5, a 4 log reduction was observed. At pH 3.0, no change in the number of viable cells was detected. The subsequent transfer to the enteric juice caused a partial reversion in injury induced by the acid pH. In addition, it was observed that milk can protect the probiotic bacteria from the stress caused by the transit through the gastrointestinal tract.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-04Bitstream added on 2014-06-13T18:57:30Z : No. of bitstreams: 1 alarcon_mff_me_jabo.pdf: 1406127 bytes, checksum: 842dbbaa540dbb4b860fec0374842606 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foram avaliados parâmetros fisiológicos e imunológicos de matrizes de corte vacinadas ou não contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG), submetidas a diferentes períodos de jejum após a eclosão, seguido de alimentação até a terceira semana de vida. No Capítulo 2, encontram-se os resultados do desempenho zootécnico e o desenvolvimento de órgãos gastrintestinais. No Capítulo 3, estão descritos os resultados de parâmetros hematológicos e bioquímicos. O Capítulo 4 apresenta as cinéticas de decaimento dos anticorpos maternos e os perfis cinéticos da reposta imune humoral nos compartimentos local e sistêmico. A vacina contra a BIG influenciou parâmetros de desempenho, de morfometria intestinal, o hematócrito, parâmetros bioquímicos, percentuais de heterófilos e linfócitos e induziu a resposta imune humoral na secreção lacrimal. O jejum pós-eclosão prolongado seguido de alimentação influenciou negativamente o desempenho, o desenvolvimento das vísceras gastrintestinais, as variáveis bioquímicas, imunológicas e a maioria das variáveis hematológicas. Os dados indicam que períodos de jejum pós-eclosão superiores a 48 h devem ser evitados, pois ao afetar negativamente parâmetros hematológicos, intestinais e imunológicos, podem comprometer o crescimento das matrizes e inferir negativamente sobre sua resposta imune. No entanto, o jejum moderado pode favorecer a resposta imune vacinal / Immunological and physiological parameters were evaluated in broiler breeder vaccinated or not against infectious bronchitis virus (IBV), submitted to different periods of fasting post-hatching, followed by feed until the third week of life. In Chapter 2, are the results of zootechnical performance and development of gastrointestinal organs. The Chapter 3 describes the results of hematological and biochemical parameters of blood. Chapter 4 presents the kinetics of decay of maternal antibodies and the kinetic profiles of humoral immune response in local and systemic compartments. The IBV vaccine influenced parameters of performance, intestinal morphology, hematocrit, biochemical parameters, percentage of heterophils and lymphocytes, and induced humoral immune response in tear secretion. Prolonged fasting post-hatching, followed by feeding, negatively affected the performance, the development of gastrointestinal organs, biochemical variables, immunological and the most of hematological variables. The data indicate that periods of fasting post-hatching over 48 h should be avoided as they adversely affect the hematological, gastrointestinal and immunologic, may compromise the growth of broiler breeder and infer a negative effect on their immune response. However, moderate fasting can promote the immune response vaccine

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Seawater teleost fish are hyposmotic to their environment and as a consequence must deal with a constant diffusive loss of water and a net gain of salts. In contrast to living in seawater, teleosts fish in a freshwater environment are faced with the opposite dilemma, a constant osmotic influx of water and depletion of salts. Between these environments there are estuarine regions, which are habitats of several species. The purpose of this study was to investigate Na+, Cl-, K+, Ca2+, and Mg2+ levels in the fluid phase and total amount of the contents of the segments of the gastrointestinal tract and plasma of freshwater and estuarine teleosts collected in different salinities (0 to 34 ) in the São Gonçalo channel in Pelotas, southern Brazil. Moreover, a possible relationship between the ion levels and salinity was investigated. After capture of the fishes, blood was collected and specimens were sacrificed for removal gastrointestinal tract segments: stomach, pyloric ceca/anterior intestine, mid- and posterior intestine. The results showed that there was no relationship between ion levels in the plasma, in the fluid phase and in the total amount of the segments of the gastrointestinal tract with salinity when considering all species together, but species (Micropogonias furnieri and Netuma barba) collected in three or more salinities demonstrated significant relationship of these parameters with salinity. The ion levels in the fluid phase and total amount of the most species showed significantly higher values in the anterior intestine than stomach. Moreover, ion levels showed a variation throughout the gastrointestinal tract suggesting possible ion absorption. These results suggest that the change of salinity affected ion levels in the plasma and in the content of the gastrointestinal tract of Micropogonias furnieri and Netuma barba, indicating that this system might be related with osmoregulation of these species. / Peixes teleósteos adaptados à água do mar são hiposmóticos em relação ao meio em que vivem e como conseqüência disso convivem com uma constante perda de água por osmose e ganho de sais por difusão. Ao contrário dos teleósteos que vivem na água salgada, peixes teleósteos adaptados à água doce convivem com o dilema oposto, uma constante entrada de água por osmose e perda de íons por difusão. Além disso, entre esses ambientes existem as regiões estuarinas, as quais são habitats de várias espécies. A proposta desse estudo foi investigar os níveis de Na+, Cl-, K+, Ca2+ e Mg2+ na fase fluida e quantidade total do conteúdo dos segmentos do trato gastrintestinal e do plasma de teleósteos estuarinos e de água doce coletados em diferentes salinidades (0-34 ) no Canal São Gonçalo em Pelotas, sul do Brasil. Além disso, uma possível relação entre os níveis iônicos e a salinidade foi investigada. Após a captura dos peixes, coletou-se sangue e os espécimes foram submetidos a eutanásia para remoção dos segmentos do trato gastrintestinal: estômago, cecos pilóricos/intestino anterior, intestino médio e posterior. Os resultados mostraram que não houve relação entre os íons no plasma, na fase fluida e na quantidade total dos segmentos do trato gastrintestinal com a salinidade quando se considerou todas as espécies juntas, porém duas espécies (Micropogonias furnieri e Netuma barba) coletadas em três ou mais salinidades demonstraram relação significativa entre esses parâmetros e a salinidade. Os níveis iônicos na fase fluida e quantidade total da maioria das espécies mostraram valores significativamente maiores no intestino anterior em relação ao estômago. Além disso, os níveis iônicos mostraram variação ao longo do trato gastrintestinal sugerindo uma possível absorção de íons. Estes resultados sugerem que a mudança de salinidade afetou os níveis iônicos do plasma e dos conteúdos do trato gastrintestinal de Micropogonias furnieri e Netuma barba, indicando que este sistema pode estar relacionado com a osmorregulação destas espécies.

Coccidiosis is a disease caused by protozoa of the genus Eimeria ssp. These protozoa are intracellular parasites of enterocytes that rupture the host cell, causing damage to the intestinal mucosa. The lesions caused by Eimeria reduce nutrient uptake by broilers, affecting their productivity gain, and also represent a portal of entry for other enteropathogens. The aim of this study was to assess the correlation between lesions caused by Eimeria and the prevalence of coccidiosis and other gastrointestinal disorders among broilers reared in Brazil from 2012 to 2014. Intestinal health was evaluated at 82 poultry houses in Brazil, totaling 5,528 birds aged 12 to 40 days. The rearing period was divided into two phases: phase 1 (12 to 21 days) and phase 2 (22 to 40 days). The broilers, at least three per shed, were collected from three different sites. The following gastrointestinal aspects were analyzed in the present study: presence of cell desquamation, excess fluid, excess mucus, ingestion of contaminated litter, thickened intestinal walls, thin intestinal walls, movement of food bolus, abnormal intestinal tonus, Turkish towel appearance, verminosis, and necrotic enteritis. The classification of the scores for gross lesions caused by Eimeria acervulina, Eimeria maxima, and Eimeria tenella followed the method proposed by Johnson & Reid, [8] and the oocyst count of E. maxima (E. maxima micro) in the mucosa was performed under a light microscope at 100X magnification. The statistical analysis of the Pearson correlation coefficient was carried out by the SAS 9.3 software program [16], using a 95% confidence interval. The results of this study revealed that E. acervulina was the most prevalent (mean of 13.5%) species in both rearing stages. Also, there was a positive correlation with thin intestinal walls and abnormal intestinal tonus in phases 1 and 2, as well as a positive correlation with ingestion of contaminated litter in phase 2. The second highest prevalence was that of E. maxima (mean of 6.75%), with a positive correlation with excess mucus, thickened and thin intestinal walls in phase 1, and a positive correlation with cell desquamation, excess fluid, and Turkish towel appearance in phase 2. E. tenella yielded the lowest prevalence rates (mean of 4.35) among the analyzed Eimeria species, showing a positive correlation with excess fluid in phases 1 and 2 and with thickened intestinal walls and lesions caused by E. maxima in phase 2. The microscopic analysis demonstrated that E. maxima was found in 18% of mucosal scrapings in phase 1, which accounts for a subclinical coccidiosis rate of 282.98% compared with clinical coccidiosis. A positive correlation was observed for E. maxima micro between thickened intestinal walls and lesions caused by E. maxima. E. maxima was detected in mucosal scrapings of 29.6% of the broilers in phase 2, accounting for a subclinical coccidiosis rate of 236.37% compared with clinical coccidiosis. E. maxima micro revealed a positive correlation with excess fluid, necrotic enteritis, E. acervulina, E. maxima, and E. tenella in phase 2. The comparison between the rearing periods showed that subclinical coccidiosis affected 64.45% more broilers in phase 2 than in phase 1. In the gross analysis, E. acervulina was the most prevalent species in both rearing periods. A lesion score equal to 1 was the most frequent among all Eimeria species. Subclinical coccidiosis affected a significant number of broilers in the analyzed Brazilian flocks, and was correlated with several factors that reduce intestinal health. It may be concluded that monitoring is of utmost importance to find out the status of intestinal health of poultry. The microscopic detection of E. maxima (mean of 23.8%) is correlated with factors that negatively affect intestinal health. / A coccidiose é uma enfermidade causada por protozoários do gênero Eimeria ssp. Esses são parasitas intracelulares de enterócitos que rompem a célula hospedeira causando lesões na mucosa intestinal. As lesões causadas pelas Eimerias resultam em redução na capacidade de absorção de nutrientes, afetando o ganho produtivo dos frangos de corte, e representam uma porta de entrada para outros enteropatógenos. Sendo assim, o objetivo desse estudo foi analisar a correlação entre as lesões causadas pelas Eimerias, e a prevalência de coccidiose e de demais alterações encontradas no trato gastrointestinal de frangos de corte produzidos, no Brasil, no período de 2012 a 2014. As avaliações da saúde intestinal foram realizadas em 82 integrações de frangos de corte, no Brasil, totalizando 5.528 aves analisadas com idades entre 12 e 40 dias. O período de produção analisado foi dividido em duas fases: 1ª fase (12 aos 21 dias) e 2ª fase (22 aos 40 dias). Os frangos necropsiados foram coletados em três diferentes pontos e no mínimo três aves por galpão. No presente estudo foram analisadas as seguintes alterações do trato gastrintestinal: presença de descamação celular, excesso de fluido, excesso de muco, ingestão de cama, intestino espesso, intestino fino, passagem de alimento, tônus alterado, toalha turca, verminose e enterite necrótica. A definição dos escores macroscópicos de lesão causados pelas Eimeria acervulina, Eimeria maxima, Eimeria tenella seguiram a metodologia de Johnson & Reid [8], e a contagem de oocistos na mucosa para E. maxima (E. maxima micro) foi realizada com auxílio de microscópio óptico com aumento de 100 X. A análise estatística do coeficiente de correlação de Pearson foi feita com o programa SAS 9.3., com intervalo de confiança de 95%. Os resultados desse estudo demonstraram que a espécie E. acervulina foi a que apresentou maior prevalência (média de 13,5%) em ambas as fases de produção avaliadas. Ainda, referente à E. acervulina, observou-se correlação positiva com intestino fino e tônus intestinal alterado na 1ª e 2ª fase, bem como correlação positiva com ingestão de cama apenas na 2ª fase. A segunda maior prevalência foi da espécie E. maxima (média de 6,75%), obteu-se correlação positiva com excesso de muco, intestino espesso e fino na 1a fase e correlação positiva com descamação celular, excesso de fluído e toalha turca na 2a fase avaliada. A E. tenella representou a menor prevalência (média de 4,35) entre as espécies de Eimerias analisadas, apresentando uma correlação positiva na 1ª e 2ª fase com o excesso de fluído e na 2ª fase com o intestino espesso e com lesões de E. maxima. Na avaliação microscópica, a E. maxima esteve presente em 18% dos raspados de mucosa realizados na 1ª fase, o que representa uma coccidiose subclínica de 282,98% com relação a coccidiose clínica. Para a E. maxima micro foi detectada correlação positiva entre os achados com o intestino espesso e com as lesões de E. maxima. Na 2ª fase, E. maxima foi encontrada nos raspados de mucosa de 29,6% das aves, representando uma coccidiose subclínica de 236,37% com relação à coccidiose clínica. A E. maxima micro apresentou na 2ª fase uma correlação positiva com o excesso de fluido, enterite necrótica, E. acervulina, E. maxima e E. tenella. Na análise comparativa entre os períodos, a coccidiose subclínica acometeu 64,45% mais frangos de corte na 2ª fase em relação a 1ª fase. Na avaliação macroscópia de lesões relacionadas à coccidiose, a E. acervulina foi a espécie de maior prevalência em ambas fases de produção. O escore de lesão mais frequente para todas as espécies de Eimerias foi o de grau 1. A coccidiose subclínica acometeu um número expressivo de frangos de corte do plantel brasileiro e foi correlacionada com diversos fatores de diminuição de saúde intestinal. Concluiu-se que o monitoramento é de suma importância para conhecer o status de saúde intestinal dos lotes avícolas. Pois, a E. maxima microscópica está presente (média de 23,8%) com correlação aos fatores que reduzem a saúde intestinal.