Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-02T21:32:55Z No. of bitstreams: 1 JessicaTeixeiraJales_DISSERT.pdf: 1910451 bytes, checksum: e7f1801b5eb5bf661f06cfbba7ef2fe1 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-09T11:25:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JessicaTeixeiraJales_DISSERT.pdf: 1910451 bytes, checksum: e7f1801b5eb5bf661f06cfbba7ef2fe1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T11:25:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JessicaTeixeiraJales_DISSERT.pdf: 1910451 bytes, checksum: e7f1801b5eb5bf661f06cfbba7ef2fe1 (MD5) Previous issue date: 2018-02-16 / A infecção pelo Trypanosoma cruzi é um problema de saúde pública, e é importante que seu diagnóstico seja realizado com rapidez e eficiência. Entretanto, as técnicas aplicadas para esse fim apresentam baixa sensibilidade e especificidade no que concerne a vigilância entomológica e epidemiológica do parasito. Pensando nesta problemática, a bioespectroscopia com análise multivariada foi utilizada neste trabalho para avaliar a eficiência na identificação da infecção experimental de Triatoma brasiliensis por diferentes Unidades de tipagem discreta (DTU) do T. cruzi. Na padronização do modelo de classificação foram utilizadas ninfas de 4° e 5º estádio de T. brasiliensis, infectadas experimentalmente com diferentes DTUs do parasito (TcI, TcII, TcIII ou infecção mista), na concentração de 40.000 parasitos/mL de sangue. Seguidos 15 e 30 dias após infecção (DAI), espectros de infravermelho foram coletados do abdômen de cada inseto; 30 DAI, dejetos intestinais foram coletados e posteriormente utilizados para análise do kDNA. A padronização do modelo de calibração mostrou que a aplicação do infravermelho médio utilizando o Infravermelho médio com transformada de Fourrier com reflexão total atenuada (ATR-FTIR) discriminou os triatomíneos não infectados e infectados com o T. cruzi. Além disso, a técnica foi capaz de distinguir as DTUs utilizadas, e separar os 5 grupos estudados apenas com a análise exploratória de dados por meio da aplicação da Análise dos componentes principais (PCA), a qual identificou diferencialmente grupamentos proteicos, ácidos nucleicos e em menor proporção, lipídeos. A análise do kDNA confirmou 92,5% das infecções, enquanto o ATR-FTIR identificou corretamente todas as amostras. Desta forma, a bioespectroscopia foi eficiente, simples e acurada na identificação da infecção de T. brasiliensis por T. cruzi, podendo ser utilizado como ferramenta de diagnóstico futura, auxiliando na vigilância entomológica da infecção por este parasita. / The Trypanosoma cruzi infection is a public health problem and it is substancial that its diagnosis be performed quickly and efficiently. However, the techniques applied on the diagnosis of T. cruzi infection present low sensitivity and specificity regarding the entomological and epidemiological surveillance of the parasite. Considering this problem, the biospectroscopy with the use of ATR-FTIR was used in this study to evaluate its efficiency in the identification of the experimental infection of Triatoma brasiliensis by different DTUs of T. cruzi. The standardization of the calibration model included the use of fourth and fifth instars of T. brasiliensis, which were infected with different DTUs of the parasite (TcI, TcII, TcIII or mixed infection) at a concentration of 40,000 parasites / ml of blood. Followed 15 and 30 days after infection (DAI), infrared spectra were collected from the abdomen of each insect; 30 DAI, intestinal wastes were collected and later used for kDNA analysis. The standardization of the calibration model showed that the application of the mild-infrared using the ATR-FTIR distinguished the triatomines that were not infected and experimentally infected with T. cruzi. In addition, the technique was able to identify the DTUs used, separating the 5 distinct groups only with the exploratory data analysis through the application of Principal Component Analysis (PCA), which differentially identified protein clusters, nucleic acids and to a lesser extent, lipids. The kDNA analysis confirmed 92.5% of the infected insects, while the ATR-FTIR correctly identified all samples. Thus, biospectroscopy applied with the use of ATR-FTIR was efficient in the identification of the T. brasiliensis infection by T. cruzi, and could be used as a diagnostic tool for the future, assisting in the entomological surveillance of the infection by this parasite.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:55Z : No. of bitstreams: 1 000864103.pdf: 4214125 bytes, checksum: 96b80eb0d58d2e5a5f75758824bad053 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas, também conhecida como Tripanossomíase Americana, causada pelo parasita hemoflagelado Trypanosoma cruzi, é tipicamente endêmica em países das Américas Central e Latina, mas devido ao processo de migração, a doença já atinge outros países como Estados Unidos e alguns países europeus. Estima-se que haja aproximadamente 7 - 8 milhões de pessoas infectadas no mundo e mais de 25 milhões correm risco de infecção. Os fármacos aprovados para o tratamento da doença são o benznidazol e o nifurtimox, ambos ativos somente na fase aguda da doença. No Brasil, apenas o benznidazol está disponível na terapêutica. Neste sentido, o presente projeto propõe a obtenção de duas séries de compostos. A série 1 é constituída de sete derivados inéditos híbridos de furoxanos e primaquina. Já a série 2 constitui-se de seis derivados inéditos bioisósteros de nitrofural, substituindo o núcleo nitrofurânico pelo núcleo furoxânico. Os derivados furoxânicos apresentam a capacidade de doação de NO, propriedade anti-inflamatória e tem demonstrado atividade antiparasitária interessante. A primaquina é um fármaco antimalárico, que foi previamente avaliado e demonstrou potencial atividade tripanossomicida. Foram obtidos seis derivados furoxânicos intermediários e caracterizados por espectrometria de infravermelho (IV) e por Ressonância Magnética Nuclear (RMN) e seis compostos finais, sendo caracterizados por espectrometria de infravermelho (IV) e por Ressonância Magnética Nuclear (RMN). Os compostos finais obtidos foram avaliados quanto a atividade tripanossomicida em formas epimastigotas e amastigotas, a capacidade de doação de óxido nítrico e quanto a mutagenicidade in vivo. Os compostos apresentaram boa atividade tripanossomicida contra as formas epimastigotas e também se mostraram não mutagênicos no ensaio realizado. / Chagas disease, also known as American trypanosomiasis, caused by the hemoflagellate parasite Trypanosoma cruzi, is typically endemic in countries of Central and Latin America. However, due to the migration process, this disease has already reached other countries like the United States and some European countries. It is estimated that there are approximately 7 - 8 million people infected worldwide and more than 25 million are at risk of infection. The drugs approved for the treatment are benznidazole and nifurtimox, both active only in the acute phase of the disease. In Brazil, only benznidazole is available. Due to the above, this project proposes to obtain two series of compounds. The Series 1 consists of seven new compounds derived from furoxanos and primaquine. The second series consists of six new bioisosters of nitrofurazone, replacing the nitrofuran group with furoxan. Furoxans derivatives have the ability to donate NO, anti-inflammatory properties and have shown interesting anti-parasitic activity. Primaquine is an antimalarial drug, which was previously demonstrated to have potential trypanocidal activity. Six furoxans intermediates and six finals derivatives were synthesized and characterized by infrared spectrometry (IR) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR). Was evaluated the trypanocidal activity against epimastigote form of T. cruzi, the capability of NO donation and the mutagenicity in an in vivo assay. They presented good activity against epimastigote forms of parasite and show no mutagenicity in the in vivo assay.

Orientador: Chung Man Chin / Coorientador: Priscila Longhin Bosquesi / Banca: Rafael Victorio Carvalho Guido / Banca João aristeu da Rosa / Resumo: A doença de Chagas, também conhecida como Tripanossomíase Americana, causada pelo parasita hemoflagelado Trypanosoma cruzi, é tipicamente endêmica em países das Américas Central e Latina, mas devido ao processo de migração, a doença já atinge outros países como Estados Unidos e alguns países europeus. Estima-se que haja aproximadamente 7 - 8 milhões de pessoas infectadas no mundo e mais de 25 milhões correm risco de infecção. Os fármacos aprovados para o tratamento da doença são o benznidazol e o nifurtimox, ambos ativos somente na fase aguda da doença. No Brasil, apenas o benznidazol está disponível na terapêutica. Neste sentido, o presente projeto propõe a obtenção de duas séries de compostos. A série 1 é constituída de sete derivados inéditos híbridos de furoxanos e primaquina. Já a série 2 constitui-se de seis derivados inéditos bioisósteros de nitrofural, substituindo o núcleo nitrofurânico pelo núcleo furoxânico. Os derivados furoxânicos apresentam a capacidade de doação de NO, propriedade anti-inflamatória e tem demonstrado atividade antiparasitária interessante. A primaquina é um fármaco antimalárico, que foi previamente avaliado e demonstrou potencial atividade tripanossomicida. Foram obtidos seis derivados furoxânicos intermediários e caracterizados por espectrometria de infravermelho (IV) e por Ressonância Magnética Nuclear (RMN) e seis compostos finais, sendo caracterizados por espectrometria de infravermelho (IV) e por Ressonância Magnética Nuclear (RMN). Os compostos finais obtidos foram avaliados quanto a atividade tripanossomicida em formas epimastigotas e amastigotas, a capacidade de doação de óxido nítrico e quanto a mutagenicidade in vivo. Os compostos apresentaram boa atividade tripanossomicida contra as formas epimastigotas e também se mostraram não mutagênicos no ensaio realizado. / Abstract: Chagas disease, also known as American trypanosomiasis, caused by the hemoflagellate parasite Trypanosoma cruzi, is typically endemic in countries of Central and Latin America. However, due to the migration process, this disease has already reached other countries like the United States and some European countries. It is estimated that there are approximately 7 - 8 million people infected worldwide and more than 25 million are at risk of infection. The drugs approved for the treatment are benznidazole and nifurtimox, both active only in the acute phase of the disease. In Brazil, only benznidazole is available. Due to the above, this project proposes to obtain two series of compounds. The Series 1 consists of seven new compounds derived from furoxanos and primaquine. The second series consists of six new bioisosters of nitrofurazone, replacing the nitrofuran group with furoxan. Furoxans derivatives have the ability to donate NO, anti-inflammatory properties and have shown interesting anti-parasitic activity. Primaquine is an antimalarial drug, which was previously demonstrated to have potential trypanocidal activity. Six furoxans intermediates and six finals derivatives were synthesized and characterized by infrared spectrometry (IR) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR). Was evaluated the trypanocidal activity against epimastigote form of T. cruzi, the capability of NO donation and the mutagenicity in an in vivo assay. They presented good activity against epimastigote forms of parasite and show no mutagenicity in the in vivo assay. / Mestre

Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Hermione Elly Melara de Campos Bicudo / Banca: Carlos Roberto Ceron / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Aline Rimoldi Ribeiro / Resumo: Os triatomíneos pertencem à ordem Heteroptera, família Reduviidae e subfamília Triatominae. Atualmente, são admitidas 150 espécies, agrupadas em seis tribos e 18 gêneros. O subcomplexo Brasiliensis foi proposto, inicialmente por Lucena, em, 1970, contendo nove espécies, a saber: Triatoma brasiliensis; T. juazeirensis; T. melânica; T melanocephala; T. petrochiae; T. lenti; T. sherlocki; T. tibiamaculata e T. vitticeps. A partir de dados citotaxonômicos, foi proposta a exclusão das espécies T. melanocephala, T. vitticeps e T. tibiamaculata por apresentarem fragmentação do cromossomo sexual X e, com isso, serem proximamente relacionados aos triatomíneos da América do Norte. Com base em dados moleculares, foi sugerido, portanto, que esse subcomplexo compreende as seguintes espécies: T. brasiliensis, T. juazeirensis, T. melanica, T. sherlocki e a subespécie T. b. macromelasoma. No entanto, os estudos não incluíram T. lenti e T. petrochiae. Com base em análises citogenéticas, foi proposto que T. lenti seja um membro do subcomplexo Brasiliensis. Visando esclarecer as dúvidas relacionadas à posição das espécies T. lenti e T. petrochiae dentro desse subcomplexo, o presente trabalho teve como objetivo analisar, por meio do Domínio D2 (região 28S DNAr) e do gene mitocondrial ND1 a relação filogenética dos táxons que compõem o subcomplexo Brasiliensis. A partir das análises geradas com o domínio nuclear D2, concluímos que não foi possível confirmar a relação filogenética entre os membros do subcomplexo Brasiliensis, visto que, as sequencias obtidas apresentaram apenas dois sítios polimórficos em 567 pb, demonstrando que esse domínio não é um marcador molecular adequado para essas espécies, devido ao seu alto grau de conservação. Todavia, os resultados obtidos para o gene mitocondrial ND1 corroboraram os dados citotaxonômicos que consideram a espécie T. lenti como membro do subcomplexo Brasiliensis,... / Abstract: Triatomines belong to the order Heteroptera, family Reduviidae and subfamily Triatominae. Currently, they admitted 150 species, grouped into two tribes and 18 genera. Brasiliensis subcomplex was proposed initially by Lucena, in 1970, containing nine species: Triatoma brasiliensis; T. juazeirensis; T. melânica; T melanocephala; T. petrochiae; T. lenti; T. sherlocki; T. tibiamaculata and T. vitticeps. From data citotaxonomicals, it was proposed the exclusion of species T. melanocephala, T. vitticeps and T. tibiamaculata by present fragmentation of sex chromosome X and, therefore, are closely related to triatomines North America. Based on molecular data, it was suggested therefore that comprises the subcomplex species: T. brasiliensis, T. juazeirensis, T. melanica, T. sherlocki and subspecie T. b. macromelasoma. However, the studies didn't include T. lenti and T. petrochiae. Based on cytogenetic analysis, it was proposed that T. lenti be a member of Brasiliensis subcomplex. Aiming to answer questions related to the position of the species T. lenti and T. petrochiae within this subcomplex, this study aimed to analyze, through the Domain D2 (region 28S RNAr) and mitochondrial gene ND1 the phylogenetic relationship of the taxa that comprise the subcomplex Brasiliensis. From the analysis generated with domain D2, we concluded that it was not possible to confirm the phylogenetic relationship among the members of Brasiliensis subcomplex, since the obtained sequences showed only two polymorphic sites in 567 bp, indicating that this domain is not a marker molecular suitable for these species, due to its high degree of conservation. However, the results obtained from the mitochondrial gene ND1 corroborate cytotaxonomic data that consider the species T. lenti as Brasiliensis subcomplex member, evidenced by the high support in the branches generated by phylogeny (89% bootstrap). In the topology it was also observed that T. petrochiae be the brother ... / Doutor

Submitted by Gilvan Almeida (gilvan.almeida@icict.fiocruz.br) on 2017-02-21T17:18:27Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2017-06-06T18:46:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 josiane_muller_ioc_mest_2016.pdf: 4833200 bytes, checksum: b94e6e5bcaa8ae13a194dbe0ba76f6ea (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T18:46:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 josiane_muller_ioc_mest_2016.pdf: 4833200 bytes, checksum: b94e6e5bcaa8ae13a194dbe0ba76f6ea (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Triatoma maculata, vetor da doença de Chagas, encontra-se associado a unidades domiciliares do Estado de Roraima - Brasil, diferente de outras espécies de triatomíneos da região amazônica estabelecidas em habitat silvestre. Esta região apresenta um cenário ambiental em mosaico, com diferentes ecorregiões, como áreas planas, serras, florestas e savanas. Para responder a distintas perguntas biológicas, metodologias como abordagens morfológicas, morfométricas, moleculares e biogeográficas, entre outras, podem ser utilizadas. Entre as morfológicas, o fenótipo antenal vem contribuindo e elucidando de forma expressiva como indicador de habitat em espécies de Triatominae. Neste sentido, buscou-se caracterizar populações de T. maculata de diferentes habitats (colônia de laboratório, peridomiciliar, intradomiciliar e silvestre \2013 encontrados na literatura), com base no estudo do padrão morfológico e morfométrico dos ovos associado ao fenótipo antenal, para avaliar o processo de adaptação deste vetor ao ambiente domiciliar. Foram analisados ovos e antenas de populações de T. maculata, oriundas das localidades, Amajari, Boa Vista, Bonfim e Uiramatã. Os estudos morfológicos e morfométricos dos ovos foram realizados pela Microscopia Óptica (MO), com base em 30 ovos de Amajari e Bonfim, respectivamente, e pela Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), utilizando-se 10 ovos de Amajari, Bonfim e Boa Vista, respectivamente, e destes 30 células do opérculo e corpo do ovo, de cada população. Os ovos foram medidos pela MO, enquanto a morfologia e as estruturas exocoriais do opérculo e do corpo do ovo, bem como a análise da conformação, número e localização das pontuações (região cefálica, mediana e caudal) foram feitos pela MEV Quatro tipos de sensilla antenais quimiorreceptoras (TPF, TPG e BA) e uma mecanorreceptora (BR) situadas no pedicelo e os dois segmentos flagelares, foram analisadas pela MO em 43 espécimes adultos provenientes das populações de Roraima, acima mencionadas. A prova de ANOVA foi utilizada para contrastar a existência de diferenças significativas entre as variáveis analisadas, tanto a caracterização morfológica dos ovos quanto o fenótipo antenal. O exocório do ovo apresentou média do comprimento e largura de 1,70mm e 1,08mm, respectivamente, e as análises das células exocoriais do opérculo entre as populações mostraram diferença significativa entre Amajari e Bonfim. Pela MEV os polígonos do corpo do ovo variaram de forma quadrilátera a octogonal, predominando a hexagonal. As análises morfológicas não possibilitaram a caracterização das três populações, enquanto as morfométricas evidenciaram diferenças significativas entre as populações de Bonfim x Boa Vista e Amajari x Bonfim. O fenótipo antenal mostrou dimorfismo sexual para as sensilla TPF e TPG, mesmo entre os espécimes mantidos em colônia de laboratório. Quando comparados aos espécimes silvestres (dados da literatura) os do peri e intradomicílio mostraram uma redução na maioria das sensilla com exceção de TPF que apresentou-se em maior quantidade. A caracterização fenotípica, mapa fatorial e o dendograma UPGMA mostraram uma clara diferenciação na população criada no laboratório, indicando um processo de adaptação dos triatomíneos possivelmente devido à frequência e tipo de alimentação, condições ambientais, de agregação, etc. Os resultados do fenótipo antenal e da morfologia dos ovos de T. maculata das restantes populações analisadas não mostraram uma caracterização definida / Triatoma maculata, vector of Chagas disease, is associated with domiciliary units in the State of Roraima - Brazil, unlike other species of insects in the Amazon region established in wild habitat. This region has an environmental scenario mosaic, composed of different ecoregions as flat areas, hills, forests and savannas. To answer distinct biological questions, methodologies focused on morphological approaches, such as morphometric, molecular and bio-geographic, among others, may be used. Among morphological assays, the antennal phenotype has contributed expressively as a habitat indicator for Triatominae species. In this context, we sought to characterize populations of T. maculata from different habitats (laboratory colony, peridomiciliary, intradomiciliary and wild - from literature), based on the morphology and morphometric study of the eggs, associated with the antennal phenotype to assess the adaptation process of this vector to the domicile environment. Eggs and antennas of populations of T. maculata, coming from the localities of Amajari, Boa Vista, Bonfim and Uiramutã were analyzed. The morphological and morphometric studies of the eggs were conducted by Optical Microscopy (OM), 30 eggs from Amajari and Bonfim, were analyzed respectively; and by Scanning Electron Microscopy (SEM), using 10 eggs from Amajari, Bonfim and Boa Vista, respectively, and from these 30 operculum cells and body of the egg, of each population. The eggs were measured by OM, while the morphologies and exocorial structures of operculum and the body of the egg, as well as, the analysis of the conformation, number and location of the marks (the region cephalic, median and flow rate) were done by SEM Four types of sensilla antennal chemoreceptors (TPF, TPG and BA) and a mecanorreceptor (BR) located in the pedicel and the two flagellar segments were analyzed by OM, in 43 adults specimens from the population of Roraima, mentioned above. The ANOVA test was used to contrast the existence of significant differences between the variables, both the morphological characterization of the eggs as the antennal phenotype. The egg exochorion had a mean length and width of 1.70mm and 1.08mm, respectively, and analyzes of exocorias cells operculum between populations showed significant differences between Amajari and Bonfim. Under SEM the egg body polygons ranged from quadrilateral the octagonal shape, predominantly hexagonal. The morphological analysis did not allow the characterization of three populations, while morphometric analyzes showed significant differences between the populations of Bonfim x Boa Vista and Amajari x Bonfim. The antennal phenotype showed sexual dimorphism for TPF and TPG sensilla, even among specimens kept in laboratory colony. When compared to wild specimens (data from literature) the peri and intradomicile environments showed a reduction in most sensilla except TPF that showed up in greater quantities. Phenotypic characterization, factorial map and UPGMA dendrogram showed a clear differentiation in the population from in laboratory, indicating a process of adaptation of triatomine possibly because of the frequency and type of feeding, environmental conditions, aggregation, etc. The results of the antennal phenotype and morphology of T. maculata eggs of other populations analyzed showed no definite characterization

Orientador: João Aristeu da Rosa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T20:03:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_VagnerJose_M.pdf: 9704244 bytes, checksum: c343d08640ae10d944866e45beb0b3ae (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Triatomíneos silvestres coletados por Cerqueira em 1975 em Santo Inácio/BA foram estudados por Papa et al. (2002) que concluíram tratar-se de uma nova espécie, denominada T. sherlocki ao compará-la com outros Triatominae. No intuito de ampliar o conhecimento dessa nova espécie e inferir relação filogenética para as espécies da subfamília Triatominae foram seqüenciados genes nucleares, ITS-2 e 28S, e mitocondriais, citocromo b e 16S, de T. sherlocki e T. brasiliensis. As seqüências foram alinhadas no programa Clustal W do BioEdit e as relações filogenéticas construídas utilizando metodologias de distâncias com os parâmetros p-distance e Kimura-2 do algoritimo Neighbor-Joining, do programa MEGA 3.1, e Máxima Parsimônia, do programa PAUP 4.1. A filogenia baseada nos dois genes mitocondriais revelou que a espécie T. sherlocki é estritamente relacionada com a espécie T. melanica, e que T. brasiliensis aparece como espécieirmã dessas duas, exceção para a análise de Parcimônia do gene 16S que apresenta T. melanica como espécie-irmã da relação mais estreita entre T. sherlocki e T. brasiliensis. P. megistus e T. infestans aparecem relacionadas com espécies norte-americanas nas filogenias inferidas do gene 16S e das seqüências dos aminoácido do citocromo b, respectivamente. A filogenia baseada no gene nuclear 28S revelou uma politomia envolvendo as espécies T. sherlocki, T. brasiliensis e T. melanica. Essa filogenia foi subestimada pelo baixo número de espécies presentes na árvore. Essa mesma relação ocorreu na filogenia do gene do ITS-2 na análise baseada em Parcimônia. A análise de distância desse gene revelou a proximidade entre T. sherlocki e T. brasiliensis, com T. melanica como espécie-irmã. Essa filogenia apresentou as espécies T. maculata, T. brasiliensis e T. infestans estritamente relacionadas com espécies de triatomíneos norte-americanas. Algumas espécies como T. infestans e P. megistus apresentaram mais de uma topologia dependendo do gene analisado, sendo necessários mais estudos para definir uma posição filogenética dessas espécies. A proximidade de T. sherlocki com os haplótipos de T. brasiliensis, principalmente com a espécie T. melanica, pode inferir uma possível filogeografia a partir de ancestrais de T. brasiliensis, tratando-se portanto de espécies derivadas / Abstract: Wild triatomines collected by Cerqueira in 1975 in Santo Inácio,BA, Brazil were studied by Papa et al. (2002), who observed morphological differences from other species of the Triatominae, concluding that they represented a new species, named Triatoma sherlocki. Mitochondrial (cytocrome b and 16S) and nuclear (ITS-2 and 28S) gene sequencing of T. sherlocki and T. brasiliensis was carried out with the aim of learning more about the new species and its phylogenetic relationship to the species of the Triatominae subfamily. The sequences ware aligned with the Clustal W application of the BioEdit freeware program and the phylogenetic relationship inferred by estimating distances with the Kimura 2-parameter and p-distance methods of the Neighbor-Joining algorithm in the MEGA 3.1 program and Maximum Parsimony (MP) method of the PAUP 4.1 program. The phylogeny based on the two mitochondrial genes disclosed that T. sherlocki and T. melanica were closely related and that T. brasiliensis was a sister species of the two, with the exception that in for the Parsimony analysis of the 16S gene, T. melanica appeared as a sister species of the clade formed by T. sherlocki and T. brasiliensis. The species Panstrongylus megistus and T. infestans are related to North American species in phylogenetic analyses of the large subunit ribosomal RNA mitochondrial gene (16S) and the amino acid sequences of cytocrome b, respectively. The phylogeny based on the large subunit ribosomal D2 (28S) nuclear gene revealed to a polytomy involving T. sherlocki, T. brasiliensis and T. melanica. This phylogeny was underestimated due to the small number of species present in the tree. This same relationship occurred in the phylogeny of internally transcribed spacer 2 (ITS-2) nuclear gene, in analysis based on Maximum Parsimony. The analysis of distance in this gene revealed proximity between T. sherlocki and T. brasiliensis, with T. melanica as sister species. This phylogeny showed T. maculata, T. brasiliensis and T. infestans to be closely related to North American triatomines. Certain species, such as T. infestans and P. megistus, exhibited more than one topology with different genes, and fusther study is needed to define the phylogenetic positions of these species. The proximity of T. sherlocki to the T. brasiliensis haplotypes, especially with the species T. melanica, may reveal a possible phylogeography originaling from T. brasiliensis ancestors, thus implying derived species / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador: Maria Tercília Vilela Azeredo Oliveira / Coorientador: Patrícia Simone Leite Vilamaior / Banca: Alba Regina de Abreu Lima / Banca: Silvana Gisele Pegorin de Campos / Resumo: Os triatomíneos são insetos hematófagos de grande importância para a saúde pública, uma vez que são considerados como a principal forma de transmissão do protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Além da importância epidemiológica, esses insetos se destacam em estudos celulares, pois apresentam algumas peculiaridades, como cromossomos holocêntricos, meiose invertida para os cromossomos sexuais e persistência nucleolar durante a meiose. O fenômeno de persistência nucleolar é definido pela presença do nucléolo ou corpúsculos nucleolares durante todas as fases da meiose. Esse fenômeno foi descrito, até o momento, para 24 espécies de triatomíneos, dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus. No entanto, somente a presença dessa estrutura nuclear em todas as fases da meiose não garante a sua atividade transcricional. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo descrever a nucleologênese em novas espécies de, pelo menos, sete novos gêneros (Cavernicola, Psammolestes, Dipetalogaster, Eratyrus, Meccus, Mepraia, Nesotriatoma), com o intuito de analisar se a persistência nucleolar é uma sinapomorfia da subfamília Triatominae. Além disso, esse trabalho também teve como finalidade avaliar a atividade nucleolar durante a meiose das espécies Triatoma infestans, Rhodnius montenegrensis e Panstrongylus megistus, por meio da técnica citoquímica Acridine Orange, com o objetivo de caracterizar, com base na presença de RNA, se existe atividade transcricional... / Abstract: Triatomines are hematophagous insects of great importance for public health, since they are considered as the main form of transmission of the protozoan Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease. Besides the epidemiological importance, these insects stand out in cellular studies, as they present some peculiarities, such as holocentric chromosomes, inverted meiosis for sex chromosomes and nucleolar persistence during meiosis. The phenomenon of nucleolar persistence is defined by the presence of the nucleolus or nucleolar corpuscles during all phases of meiosis. So far, this phenomenon has been described for 24 triatomine species of the genus Triatoma, Rhodnius and Panstrongylus. However, only the presence of this nuclear structure in all phases of meiosis does not guarantee its transcriptional activity. So, the objective of the present study was to describe the nucleologenesis in new species of at least seven new genera (Cavernicola, Psammolestes, Dipetalogaster, Eratyrus, Meccus, Mepraia, Nesotriatoma), in order to analyze if nucleolar persistence is a synapomorphy of the subfamily Triatominae. Besides that, this work had the purpose to evaluate the nucleolar activity during the meiosis of the species Triatoma infestans, Rhodnius montenegrensis and Panstrongylus megistus, by means of the cytochemical technique Acridine Orange, with the objective of characterizing, based on the presence of RNA, if there is transcriptional activity in the persistent nucleolar material. All 59 species analyzed, distributed in seven genera, presented nucleolar persistence during meiosis, thus corroborating that this phenomenon is a synapomorphy of the subfamily Triatominae. By means of the fluorochrome Acridine Orange, the persistent nucleolus has been found to be transcriptionally active. Thus, it was evident, for the first time, that the nucleolus is present in the spermatogenesis of ... / Mestre

Resumo: Os triatomíneos são insetos hematófagos de grande importância para a parasitologia humana, pois são transmissores do Trypanosoma cruzi, protozoário causador da doença de Chagas. Além de sua importância médico-sanitária, os triatomíneos destacam-se pela sua citogenética, pois possuem cromossomos holocêntricos e um modelo de meiose incomum, com meiose invertida para os cromossomos sexuais. Recentes pesquisas com marcadores moleculares em triatomíneos tentam compreender a ancestralidade do grupo. Uma das formas de se compreender a evolução entre espécies é a partir da análise de seqüências do DNA ribossômico (DNAr). Por pertencer a famílias multigênicas, cópias individuais do DNAr não acumulam mutações independentemente, resultando em pequena variação intra-específica e relevante diferenciação interespecífica. No presente trabalho foi realizado um estudo comparativo entre as espécies Triatoma maculata e Triatoma pseudomaculata, com base no uso das técnicas citogenéticas convencionais de orceína lacto-acética, impregnação por íons prata, bandamento-C, reação de Feulgen; da técnica de citogenética molecular de bandamento- C CMA/DAPI; e também por meio da análise da região ITS-1 do DNAr, com base no sequenciamento, com o objetivo de avaliar o grau de homologia entre as espécies estudadas. Os cariogramas das duas espécies indicaram dez pares de autossomos (um deles de tamanho maior) e um par de cromossomos sexuais (2n = 22). No ciclo meiótico foi possível observar a fragmentação da região nucleolar no final do estágio difuso. Corpúsculos nucleolares foram observados em alguns dos núcleos em metáfases meióticas de T. pseudomaculata, evidenciando a persistência nucleolar. A técnica de bandamento-C revelou que o cromossomo Y é heterocromático em ambas as espécies. O sequencimento da região ITS-1, indicou que as espécies apresenta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The triatomines are hematophagous insects of great concern in public health because they are vectors of Trypanosoma cruzi, a protozoan that causes Chagas disease. Triatomines are also of great genetic interest, because that they present holocentric chromosomes and an unusual form of meiosis with post-reductional segregation of sex chromosomes. Recent studies based on molecular markers try to understand the evolutionary history of triatomines. To understand the evolution of a given species, ribosomal DNA (rDNA) analyses are frequently used, which can help to infer evolutionary relationships among species. Individual copies of rDNA do not accumulate mutations independently because they belong to multigene families, resulting in slight intraspecific and important interspecific variation. In this study, a comparative analysis was performed between the species Triatoma maculata and Triatoma pseudomaculata, based on the cytogenetic techniques of lacto-acetic orcein, silver ion impregnation, Cbanding, Feulgen reaction; and CMA/DAPI C-banding. We also compared the species by sequencing the ITS-1 rDNA internal transcribed region in order to evaluate the degree of homology among the studied species. The cariograms of the two species revealed ten autosomes and one pair of sexual chromosomes (2n= 22). In the meiotic cycle, nucleolar fragmentation during the final stages of meiotic prophase I was found. Nucleolar corpuscles were found in some meiotic metaphases of T. pseudomaculata, which is evidence of nucleolar persistence. The C-banding technique revealed that the Y chromosome is heterochromatic in both species. The ITS-1 rDNA sequences showed that the species presented a discharge proximity to each other, and had a high degree of homology (98.5%). The knowledge obtained in this study contributes to the understanding of the interrelation and distribution of those species, and offers... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Coorientador: Lilian Castiglioni / Banca: João Aristeu da Rosa / Banca: Carlos Roberto Ceron / Mestre

<p>This thesis analyses several factors affecting the control of triatomines in Guatemala. There are three synantropic triatomines in Guatemala, i.e., <i>Rhodnius prolixus</i>, <i>Triatoma dimidiata</i> and <i>T. nitida</i>. Their distibution is mainly at an altitude between 800 and 1500 m a.s.l. <i>R. prolixus</i> and <i>T. nitida</i> have localized but scaterred distibution while <i>T. dimidiata</i> is present in 21 of the 22 departments in the country. Several investigations have shown that <i>R. prolixus</i> could be relatively easily eradicated while <i>T. dimidiata</i> may be more difficult to control, since it is present in domestic, peridomestic and sylvatic environments showing high diversity and a variety of epidemiological characteristics. Based on the incidence of <i>Trypanosma cruzi</i> infection in humans in the distributional areas of the triatomines, <i>R. prolixus</i> appear to be a more competent vector than <i>T. dimidiata</i>. This is despite the fact that these vectors have similar infection rates. Inside houses, <i>R. prolixus</i> and <i>T. dimidiata</i> and in artificial environments, <i>T. ryckmani</i> and <i>T. dimidiata</i>, preferred the northern side of the walls. Therefore, selective application of insecticides should focus on walls and furniture located in the northern part of the house. House improvements reduced the infestation of triatomines, and could be used as a complement to insecticidal spraying. Although <i>T. dimidiata</i> is not an efficient vector its wide distribution, versatility in occupying different habitats and capacity to disperse render this species difficult to control in Central America. Thus, only few months after insecticidal spraying <i>T. dimidiata</i> had reinfested the domestic environments. Morphometic methodology and genetic markers have been developed to differentiate within-species populations of <i>T. dimidiata</i> and <i>T. nitida</i>. Studies on the migration patterns of sylvatic <i>T. dimidiata</i> and <i>T. ryckmani</i> have been performed in order to clarify the colonization patterns. The adults migrate, in particular, in the dry part of the year. This finding may be of help in attempts to control <i>T. dimidiata</i>.</p>

This thesis analyses several factors affecting the control of triatomines in Guatemala. There are three synantropic triatomines in Guatemala, i.e., Rhodnius prolixus, Triatoma dimidiata and T. nitida. Their distibution is mainly at an altitude between 800 and 1500 m a.s.l. R. prolixus and T. nitida have localized but scaterred distibution while T. dimidiata is present in 21 of the 22 departments in the country. Several investigations have shown that R. prolixus could be relatively easily eradicated while T. dimidiata may be more difficult to control, since it is present in domestic, peridomestic and sylvatic environments showing high diversity and a variety of epidemiological characteristics. Based on the incidence of Trypanosma cruzi infection in humans in the distributional areas of the triatomines, R. prolixus appear to be a more competent vector than T. dimidiata. This is despite the fact that these vectors have similar infection rates. Inside houses, R. prolixus and T. dimidiata and in artificial environments, T. ryckmani and T. dimidiata, preferred the northern side of the walls. Therefore, selective application of insecticides should focus on walls and furniture located in the northern part of the house. House improvements reduced the infestation of triatomines, and could be used as a complement to insecticidal spraying. Although T. dimidiata is not an efficient vector its wide distribution, versatility in occupying different habitats and capacity to disperse render this species difficult to control in Central America. Thus, only few months after insecticidal spraying T. dimidiata had reinfested the domestic environments. Morphometic methodology and genetic markers have been developed to differentiate within-species populations of T. dimidiata and T. nitida. Studies on the migration patterns of sylvatic T. dimidiata and T. ryckmani have been performed in order to clarify the colonization patterns. The adults migrate, in particular, in the dry part of the year. This finding may be of help in attempts to control T. dimidiata.