Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-27Bitstream added on 2014-11-10T11:57:54Z : No. of bitstreams: 1 000789729_20180608.pdf: 380717 bytes, checksum: 81a76f2394aacd694f3ae1e83a381c2f (MD5) Bitstreams deleted on 2018-06-11T13:00:35Z: 000789729_20180608.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-06-11T13:01:28Z : No. of bitstreams: 1 000789729.pdf: 380675 bytes, checksum: 6fd0d0d5bc0128ca33bf68fd3ce8bb05 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A doença de Chagas é uma enfermidade de natureza endêmica, com pronunciada relevância na América do Sul. Um dos principais vetores do Trypanosoma cruzi, causador desta enfermidade, é o triatomíneo Triatoma infestans. Apesar de ter sua incidência reduzida, novos casos de reinfestação apontam a dificuldade do controle vetorial sobre esta espécie devido às suas características biológicas e genéticas, indicando, assim, a importância de se compreender a variabilidade genética neste inseto. No presente trabalho, foi elaborada uma revisão com o objetivo de reunir e organizar os dados disponíveis relacionados à variabilidade genética em T. infestans, permitindo eleger os principais e mais informativos genes, assim como evidenciar os índices de variabilidade intra-populacional e inter-populacional. Complementarmente, foi estudada a variação das regiões heterocromáticas, por meio da citogenética clássica e molecular. A aplicação da técnica de bandamento-C convencional e o uso de fluorocromos em nove linhagens e a técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH), com sondas específicas para regiões de DNA satélite em oito linhagens, permitiram observar a grande variação existente na quantidade e distribuição dessas regiões. Os resultados confirmaram a existência de dois grupos com notáveis diferenças genômicas, diferenciadas, principalmente, pela perda de material genético nas linhagens nãoandinas. A variabilidade intraespecífica observada pelas análises citogenéticas revelou uma extraordinária dinâmica genômica que ocorreu durante a dispersão desta espécie / Chagas disease is an endemic illness of great relevance in South America. Within the triatomines, Triatoma infestans is one of the most important vectors of Trypanosoma cruzi, the causative protozoan of this disease. Its incidence is controlled, but new cases of reinfestation still occur, and they indicate the difficulties of vector control for this species due to its biological and genetic characteristics. Thus, it is important to understand the genetic variability of this species of insect. In this study, we present a review of the literature in order to gather and organize the data available on genetic variability of T. infestans. This review made it possible for us to elect the most appropriate genes and highlight the rates of intra-population and inter-population variability. The variation in the heterochromatic regions was also studied using classical and molecular cytogenetics. The application of the conventional C-banding technique combined with the use of fluorochromes in nine strains, as well as the application of the fluorescent in situ hybridization technique (FISH) with specific probes for regions of DNA satellite in eight strains, all together revealed the existence of noteworthy variation in the amount and distribution of these regions. The results confirmed the existence of two groups with remarkable genomic differences, which are distinguished mainly by the loss of genetic material in non-Andean lineages. The intraspecific variability observed through cytogenetic analysis revealed the extraordinary genomic dynamics that occurred during the dispersion of T. infestans

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:24:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luiz_sangenis_ioc_dout_2013.pdf: 6266422 bytes, checksum: 27e01a2cd899212302255997269467d6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O estado do Rio de Janeiro nunca foi considerado endêmico para doença de Chagas. Porém, 3,7% dos pacientes acompanhados no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas da Fundação Oswaldo Cruz são naturais do estado do Rio de Janeiro. O objetivo deste trabalho é esclarecer as formas de exposição a Trypanosoma cruzi nos pacientes portadores de doença de Chagas naturais do estado do Rio de Janeiro, bem como identificar as formas de apresentação clínica e suas respectivas progressões. O estudo foi dividido em quatro etapas, sendo as duas primeiras caracterizadas como um delineamento série de casos e as duas últimas como estudos seccionais de campo. Foram estudados 69 pacientes com doença de Chagas naturais do Rio de janeiro no período de 1986 a 2011 (média de 12,5 anos de observação), sendo 67% oriundos de áreas urbanas do estado e 33% de áreas rurais. A transmissão congênita foi a mais frequente, 40% dos casos, seguida daqueles que adquiriram a infecção autóctone de forma natural (22%) e transfusional (15%). Houve predomínio do sexo masculino (67%) e de brancos (56,5%). A média de idade ao diagnóstico foi de 38 anos. A maior parte dos pacientes oriundos das áreas rurais residiu em casas de pau a pique, tinham o hábito de consumir animais silvestres e caldo de cana in natura. O conhecimento de barbeiros foi referido por 19% dos casos. A forma indeterminada foi a mais prevalente (56,5%), seguida da forma cardíaca (42%) e digestiva (10,5%). O bloqueio do ramo direito, o hemibloqueio anterior esquerdo e as extrassístoles ventriculares foram alterações eletrocardiográficas comuns A hipertensão arterial estava presente em 23,2% e a diabetes mellitus em 7,2%. O tratamento etiológico foi realizado por 35% dos pacientes, sendo que nenhum paciente apresentou negativação sorológica. A progressão para formas clínicas mais graves foi observada em 12% dos pacientes, sendo inferior a 1% ao ano entre os indeterminados. A insuficiência cardíaca congestiva foi a causa de óbito mais comum. Entre os 15 casos autóctones, a maior parte era oriunda de municípios do Norte Fluminense (87%). Além das sorologias positivas, 1 (8,3%) apresentou positividade ao xenodiagnóstico e 4 (36,3%) à PCR, sendo identificada infecção mista pelo genótipo (TcI/TcVI). A forma cardíaca estava presente em 54% dos casos. No estudo seccional de campo foram visitadas 245 propriedades rurais de São Sebastião do Alto e São Fidélis, sendo 84% de paredes de tijolos e 16% de pau a pique. O consumo de animais silvestres foi referido por 78% dos moradores e de caldo de cana por 88%. O conhecimento do barbeiro era comum a 34% dos habitantes, correspondendo a 31% das casas visitadas. Das 404 amostras de sangue coletadas, três revelaram positividade para a doença de Chagas (0,74% de prevalência). Foram capturados 49 triatomíneos da espécie Triatoma vitticeps no intradomicílio e 73% apresentaram positividade para T. cruzi do genótipo I pela PCR multiplex do gene do mini-exon. Trinta e quatro mamíferos silvestres foram capturados e a infecção pelo T. cruzi estava presente em 8,8%, sendo identificado o genótipo I em um roedor da espécie Akodon cursor. Constatou-se dois padrões epidemiológicos da doença de Chagas humana no Rio de Janeiro, um urbano com predomínio de infecções pela via congênita e outro rural com mecanismo de transmissão vetorial A presença de reservatórios silvestres sinantrópicos, triatomíneos autóctones invadindo os domicílios e o hábito da caça são condições que propiciam o surgimento de casos humanos da doença no Rio de Janeiro / Rio de Janeiro State was never considered to be a Chagas disease endemic area . H owever, 3.7% of patients followed at the Evandro Chagas Clinical Research Institute of the Oswaldo Cruz Foundation were born at Rio de Janeiro State. The aim of this study was to clarify the Chagas disease mode of transmission faced by the patients born at Rio de Janeiro State and their clinical presentation and disease progressions . The study was perform ed in four steps: characterization of a case se ries and environmental studies . We retrospec tively identified 69 patients with Chagas d isease born at Rio de Janeiro followed at our institution between 1986 and 2011 . From those, 67% lived in urban areas and 33% i n rural areas. Most patients from rural areas lived in mud and wattle houses and used to consume wild animals’ meat and drink fresh sugar cane juice. Most of the patients were males (67%) and whites (56.5%). The average age at diagnosis was 38 years . Hyper tension was present in 23.2% and diabetes mellitus in 7.2% of the patients . Nineteen percent of the patients reported to know “ kissing bugs ” . The most frequent transmission mechanism was congenital (40%), followed by autochthonous cases (22%) and transfusi on (15%). The most prevalent clinical presentation was the indetermi nate form (56.5%), followed by cardiac form (42%) and gastrointestinal (10.5%). The most common electrocardiographic changes present in patients with cardiac form were right bundle branch block, left anterior hemiblock and vent ricular extrasystoles . Thirty - five percent of the patients received antitrypanosomal therapy , but none of them presented a negative serology afterwards . The mean follow - up time was 12.5 years. Disease progression occurred in 12% of the patients, but the progression rate per year was less than 1% among patients with the indeterminate form. H eart failure was the most common cause of death. Among the 15 autochtho nous cases, most were born at the N o rth Region of the Rio de Janeiro State (87%) and 54% them presented cardiac form . Besides the positive serological tests for Chagas disease, one (8 . 3%) of them presented a positive xenodiagnosis and 4 (36.3%) positive PCR. PCR identified mi xed infection by genotype TcI and TcVI. In the environment al study , 245 dwellings (84 % of brick wall ed houses and 16% mud and wattle houses) were visited in São Sebastião do Alto and São Fidé lis. Most of the residents reported to consu me wild animals ’ meat ( 78% ) and sug ar cane juice ( 88% ) . Thirty - four percent of the inhabitants, which represented 31% of the visited homes, reported to know “k issing bugs ” . The prevalence of positive serology for Chagas disease was 0.74% among 404 samples . Among 49 species of Triatoma vitti ceps captured indoors, 73% were positive for T. cruzi I genotype. Among 34 wild mammals captured , T. cruzi infection wa s present in 8.8% and the genotype I was identified in a rodent species Akodon cursor . Therefore , two epidemiological patterns of human Chagas disease were found in Rio de Janeiro: an urban pattern with predominance of the congenital mode transmission and a rural one with a vector ial mode transmission. W ild reservoirs, autochthonous triatomines inside households and hunting habit s are c onditions that favor the occurren ce of human Chagas disease in Rio de Janeiro

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:47:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 nathalia_correia_ioc_mest_2015.pdf: 2323287 bytes, checksum: cd639a3b9f983d6d6bdd5bea1e8bcf4d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Triatoma b. brasiliensis, considerado um dos principais vetores da doença de Chagas nas áreas do semiárido nordestino brasileiro, faz parte de um complexo de espécies proposto por estudos multidisciplinares. Atualmente, neste complexo estão incluídos Triatoma b. macromelasoma e Triatoma juazeirensis, apresentando um padrão de distribuição parapátrico nos estados de Pernambuco e Bahia, respectivamente. Todas as espécies do complexo T. Brasiliensis foram encontradas infectadas naturalmente por Trypanosoma cruzi e podem invadir e/ou colonizar as habitações demonstrando diferentes graus de adaptação aos ecótopos artificiais. Em laboratório, estas espécies podem se reproduzir e gerar obtidos híbridos férteis. Assim, a hipótese de existirem híbridos naturais foi testada porestudos morfométricos comparativos das asas e também do padrão cromático do pronoto. Os resultados sugeriram a existência de uma área de hibridação natural no estado de Pernambuco onde posteriormente uma alta variabilidade fenotípica foi registrada,corroborando a hipótese levantada. Pernambuco apresenta altos índices de infestação domiciliar por triatomíneos os quais podem ser encontrados em ecótopos naturais, portanto, os riscos de transmissão do agente etiológico e as possibilidades de reinfestação das casas demandam um constante monitoramento e controle dos vetores nas áreas habitadas. Este trabalho teve por objetivo comparar parâmetros relacionados à competência vetorial de ninfas de 5º estádio de T. b. Brasiliensis e T. juazeirensis e de seus híbridos experimentais(Hjb -\2640T. Juazeirensis x \2642T. b. Brasiliensis e Hbj -\2640T. b. Brasiliensis x \2642T. juazeirensis), obtidos por cruzamentos recíprocos entre as espécies. A suscetibilidade dos híbridos e parentais à infecção por T. cruzi foi analisada pela alimentação artificial com a cepa TcI 0354, e posteriormente dissecados nos períodos de 10, 20 e 30 dias Os comportamentos alimentar e de defecação foram analisados comparativamente pelo:1-registro do tempo de início do repasto sanguíneo em camundongos,2-tempo de duração da alimentação, 3-tempo do término da alimentação e tempo e comportamento de defecação. Os insetos foram pesados antes e após a alimentação nos dois experimentos. Híbridos e parentais apresentaram-se infectados por T. cruzi durante os 30 dias após a alimentação infectante, predominantemente com epimastigotas. A quantidade de epimastigotas no estômago e no intestino de T. Juazeirensis foi significativamente menor do que híbridos e T. b. brasiliensis. A população de tripomastigota metacíclica foi significativamente maior em híbridos no intestino e ampola retal. Os híbridos demonstraram-se mais suscetíveis à infecção por apresentarem estatisticamente um padrão da infecção ao longo do tempo mais homogêneo do que seus parentais. Não foi encontrada relação entre volume de sangue ingerido e taxa de infecção. Híbridos e parentais apresentaram voracidade, pois procuraram avidamente a fonte alimentar nas primeiras semanas. Após a segunda semana, os híbridos levaram mais tempo para iniciarem o repasto sanguíneo e ainda na primeira semana levaram mais tempo para defecar após a alimentação quando comparados aos parentais. T. b. brasiliensis, apresentou as menores médias de tempo para se aproximar da fonte alimentar e iniciar a alimentação, porém não foi estatisticamente diferente de T. juazeirensis. Todos os grupos defecaram próximo do camundongo,T. b. brasiliensis defecou mais vezes em menos de um minuto Este trabalho ressalta a importância epidemiológica desta área em que são encontrados os fenótipos de T. b. brasiliensis, pois híbridos e parentais apresentaram características de bons vetores, sendo os híbridos mais suscetíveis à infecção pela cepa 0354 do que as espécies parentais, enquanto que os parentais apresentaram melhor comportamento alimentar e de defecação / Triatoma b. brasiliensisis consider one of the main vectors of Chagas disease in the Northeast Region of Brazil and belongs to a species complex proposed by multidisciplinar studies. In this species complex, is also included Triatoma b. macromelasoma and Triatoma juazeirensis, geographically distributed in a parapatric form in Pernambuco and Bahia States, respectively. All species of Triatoma brasiliensis complex can be found infected by Trypanosoma cruzi in nature and invading and/or colonizing human habitations with different degrees of adaptation to each artificial ecotope. Since experimental crossings between all of those species can result in fertile hybrids, there was a question whether those hybrids could naturally exist that was tested by morphometric comparisons of the wings and chromatic pattern of pronotum. It was latter suggested the existence of a natural hybridization zone in Pernambuco State in which there is a high phenotypic variability, in corroboration with the hypothesis raised. There are high rates of house infestation by triatomine in Pernambuco State, and it is also find insects in natural ecotopes, therefore there is a high risk of transmission of the etiological agent caused by the possibility of domiciliary reinfestations by insect vector, which demands constant monitoring and control of vectors. This study aimed to compare some of the parameters related to the vector competence of T. b. brasiliensis, T. juazeirensis and their experimental hybrids(Hjb -\2640T. juazeirensis x \2642T. b. brasiliensis and Hbj -\2640T. b. brasiliensis x \2642T. juazeirensis) in the5thnymphal stage, obtained through reciprocal crosses. It was analyzed their susceptibility to infection with T. cruzi through artificial feeding with TcI 0354strain, and then dissected in the10th, 20th and 30th days after infection The feeding and defecation behaviors were comparatively analyzed by the parameters: 1-the elapsed time for the insect to start feeding in mice, 2-the elapsed time between the end of feeding, 3-the defecation time and behavior were registered. We weighed the insects before and after both feeding experiments. Hybrids and parental species maintained infected with the 0354 strain of T. cruzi in the 30 days after the infective of experiment and the epimastigote was the most found form of the parasite. It was significantly lower the number of epimastigotes in the stomach and intestine of T. juazeirensis in comparison to hybrids and T. b. brasiliensis. It was detected a significantly higher percentage of metacyclic trypomastigotes in the intestine and rectum of hybrids. These hybrids demonstrated higher susceptibility to this strain because they present statistically a homogenous pattern of infection. It wasn\2019t found any relationship between ingested blood volume and rates of infection. Hybrids and parental species showed feeding voraciously as they eagerly sought food source in the first weeks of feeding. After two weeks, hybrid stook longer time to begin the blood meal. In addition, in the first week of observation the hybrids took more time for defecation after feeding when compared with parental species. T. b. brasiliensis showed the lowest average time to approach the food source and start feeding, but it was not statistically different from T. juazeirensis All groups of insects defecated near or directly in the mouse but T. b. brasiliensis did it more times in less than 1 minute. This work stress the epidemiological importance in this geographical area of the phenotypes of T. b. brasiliensis, since either hybrids and their parental species presented vector capacity, although hybrids seem to be more susceptible to infection with 0354 T. cruzi strain than parental species, the latter presented better feeding and defecation behavior

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:42:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carla_ribeiro_ioc_mest_2014.pdf: 1991393 bytes, checksum: 9d95a62cabcb098791835cb30218c6b4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Triatoma sordida é um triatomíneo nativo de regiões de clima tipicamente seco e de altas temperaturas. Apresenta ampla distribuição, ocorrendo no Brasil, Argentina, Paraguai e Bolívia. É um importante vetor secundário da doença de Chagas sendo frequentemente capturado em ecótopos artificiais próximos a habitações humanas, como galinheiros, currais e estábulos. Por ser uma espécie autóctone e apresentar populações silvestres e peridomésticas que podem ocasionalmente recolonizar áreas previamente tratadas, principalmente após a eliminação dos vetores de maior importância epidemiológica, estratégias tradicionais de controle vetorial, como o uso de inseticidas residuais, podem ser ineficazes para eliminação de T. sordida. Por estas razões, torna-se necessário o desenvolvimento de novas medidas de vigilância e controle destinadas especificamente a este vetor. Estudos moleculares têm demonstrado alta diversidade genética entre populações de T. sordida, sugerindo que esta espécie representa na verdade um complexo de espécies crípticas que podem apresentar diferenças quanto à relevância epidemiológica. Deste modo, para a elaboração e aplicação de melhores estratégias de controle contra esse vetor é fundamental que uma correta identificação taxonômica de T. sordida seja realizada, além da delimitação precisa de sua distribuição geográfica. Um estudo filogeográfico de espécimes de T. sordida coletados em nove localidades no Brasil e uma na Argentina foi realizado utilizando um fragmento de 510 pb do gene mitocondrial citocromo b (cyt b) As análises filogenéticas revelaram que as populações de T. sordida amostradas nesse estudo formam um grupo monofilético, filogeneticamente distinto de populações de T. sordida da Bolívia (T. sordida grupos 1 e 2). Interessantemente, análise das amostras de Rochedo em Mato Grosso do Sul sugerem a ocorrência de um processo recente de especiação. Resultados das análises populacionais revelaram baixos níveis de fluxo gênico entre as populações estudadas (valores de Fst entre 0,22 e 1,00). As sequências de cyt b das populações de T. sordida apresentaram baixa diversidade nucleotídica (valores de \03C0 entre 0,0000 e 0,0077) e 23 haplótipos foram detectados (três deles compartilhados entre diferentes localidades). A população identificada como Poxoréu/Formosa/Lontra apresentou valores negativos e significativos nos testes de neutralidade (ressaltando que o teste de Fu apresentou valor-p limítrofe) o que juntamente com os resultados obtidos a partir das análises de mismatch distribution e da rede de haplótipos, indicam expansão súbita e recente dessa população. Isto sugere que, possivelmente, a ecorregião do cerrado brasileiro seja o centro de origem e dispersão de T. sordida / Triatoma sordida is a triatomine species native to regions of typically dry weather and high temperatures. It presents a wide distribution, occurring in Brazil, Argentina, Paraguay and Bolivia. It is an important secondary vector for Chagas disease being often captured in artificial ecotopes close to human dwellings, such as chicken coops, corrals and stables. Because it is an autochthonous species with sylvatic and peridomestic populations that can occasionally recolonize previously treated areas (mainly after the elimina tion of vectors of greater epidemiological importance) traditional vector control strategies, such as the use of residual insecticides, may be ineffective against T. sordida . For these reasons, the development of new measures of surveillance and control in tended specifically for this vector are required. Molecular studies have shown high genetic diversity among T. sordida populations, suggesting that this species represents, actually, a cryptic species complex that may conceal units with differences in epid emiological relevance. Thereby, to elaborate better control strategies against this vector it is important to determine the taxonomic status of T. sordida populations and the limits of their geographic distribution. A phylogeographic study of T. sordida sp ecimens collected from nine locations in Brazil and one in Argentina was carried out using a fragment of 510pb of the mitochondrial gene cytochrome b (cyt b ). The phylogenetic analyses revealed that the T. sordida populations sampled consist in a monophyle tic group distinct of T. sordida populations of Bolivia ( T. sordida groups 1 and 2). Interestingly, the analysis of Mato Grosso do Sul samples suggests the occurrence of a recent speciation process. Results of population analyses revealed low levels of gen ic flow among the studied populations ( F st values between 0.22 and 1.00). Nucleotide diversity was low (π values between 0 and 0.0077) and twenty three haplotypes were detected (three of them shared among different locations). The population identified as Poxoréu/Formosa/Lontra showed negative and significant values in tests of neutrality (the Fu test gave borderline p - values), which along with the obtained results from mismatch distribution analysis and from the haplotype network, indicate a sudden and rec ent expansion of this population. This indicates that, possibly, the Brazilian cerrado ecoregion is the center of origin and dispersion of T. sordida .

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:29Z : No. of bitstreams: 1 000842326.pdf: 1568778 bytes, checksum: 44ee70fd5854d8be4d8c71d1f4d50503 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A subfamila Triatominae compreende 146 espécies, agrupadas em 18 gêneros e cinco tribos. O gênero Triatoma é o mais representativo da subfamília com 80 espécies descritas, as quais estão agrupadas em oito complexos e oito subcomplexos, sendo essa classificação baseada principalmente em características morfológicas. Triatoma rubravaria é considerado um importante vetor na transmissão da doença de Chagas no Estado do Rio Grande do Sul, uma vez que houve um aumento de sua captura e encontros de colônias intradomiciliares após o programa de combate ao T. infestans. Possui hábitos rupestres e é encontrado em buracos e fendas de locais pedregosos, juntamente com T. carcavalloi, T. circummaculata e T.klugi, os quais mostram semelhanças morfológicas. Marcadores moleculares pertencentes ao DNA nuclear, como os espaçadores internos transcritos (ITS) apresentam uma evolução mais rápida, permitindo estabelecer relações recentes ao passo que a grande subunidade ribossomal 28S (D2), por ser bem conservado, permite estabelecer relação entre organismos distantemente relacionados. Marcadores mitocondriais (Citocromo B - CytB e Citocromo Oxidase I - COI) apresentam taxa de mudança dez vezes mais rápida que aquelas apresentadas pelo DNA nuclear, sendo, portanto, úteis para estabelecer relações filogenéticas entre organismos que divergiram recentemente. A análise Bayesiana por meio de sequencias pertecentes ao mtDNA (CytB e COI) reafirmam o posicionamento de espécies no subcomplexo rubrovaria e indica T. carcavalloi como espécie irmã do grupo formado por T. klugi + T. rubrovaria + T. circummaculata. A análise bayesiana de seis populações de T. rubrovaria mostrou a população coletada em Canguçu isolada das demais, sugerindo que se trata de espécie críptica. / The subfamily Triatominae comprises 146 species grouped in 18 genera and five tribes. The genus Triatoma is the most representative subfamily with 80 described species, which are grouped into eight complex and eight subcomplexes and this classification being based primarily on morphological characteristics. Triatoma rubravaria is considered an important vector in the transmission of Chagas disease in the state of Rio Grande do Sul since it was detected an increase of their capture and meetings colonies household after the program to combat of T. infestans. T. rubrovaria is found in groves and crevices of rocky areas within T. carcavalloi, T. circummaculata and T.klugi, which show morphological similarities. Molecular markers belonging to the nuclear DNA, as the internal transcribed spacers (ITS) have more rapid evolution, establishing recent relationships while the large ribosomal subunit 28S (D2), being well maintained, allows establishing the relationship between distantly related organisms. Mitochondrial markers (Cytochrome B - CytB and Cytochrome Oxidase I - COI) present a rate of change ten times faster than those presented by nuclear DNA, and are therefore useful for establishing phylogenetic relationships between organisms that diverged recently. A Bayesian analysis using mtDNA sequences belonging to (CytB and COI) reaffirmed the positioning of the species and indicates subcomplex rubrovaria and indicates T. carcavalloi as sister species from the group of T. klugi + T. rubrovaria + T. circummaculata. A Bayesian analysis of six populations of T. rubrovaria showed the population collected in Canguçu isolated from the others, suggesting that they are cryptic species. / FAPESP: 09/52236-2

Orientador : João Aristeu da Rosa / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: José Clóvis do Prado Júnior / Banca: Marcos Takashi Obara / Banca: Carlos Eduardo de Almeida / Resumo: A subfamila Triatominae compreende 146 espécies, agrupadas em 18 gêneros e cinco tribos. O gênero Triatoma é o mais representativo da subfamília com 80 espécies descritas, as quais estão agrupadas em oito complexos e oito subcomplexos, sendo essa classificação baseada principalmente em características morfológicas. Triatoma rubravaria é considerado um importante vetor na transmissão da doença de Chagas no Estado do Rio Grande do Sul, uma vez que houve um aumento de sua captura e encontros de colônias intradomiciliares após o programa de combate ao T. infestans. Possui hábitos rupestres e é encontrado em buracos e fendas de locais pedregosos, juntamente com T. carcavalloi, T. circummaculata e T.klugi, os quais mostram semelhanças morfológicas. Marcadores moleculares pertencentes ao DNA nuclear, como os espaçadores internos transcritos (ITS) apresentam uma evolução mais rápida, permitindo estabelecer relações recentes ao passo que a grande subunidade ribossomal 28S (D2), por ser bem conservado, permite estabelecer relação entre organismos distantemente relacionados. Marcadores mitocondriais (Citocromo B - CytB e Citocromo Oxidase I - COI) apresentam taxa de mudança dez vezes mais rápida que aquelas apresentadas pelo DNA nuclear, sendo, portanto, úteis para estabelecer relações filogenéticas entre organismos que divergiram recentemente. A análise Bayesiana por meio de sequencias pertecentes ao mtDNA (CytB e COI) reafirmam o posicionamento de espécies no subcomplexo rubrovaria e indica T. carcavalloi como espécie irmã do grupo formado por T. klugi + T. rubrovaria + T. circummaculata. A análise bayesiana de seis populações de T. rubrovaria mostrou a população coletada em Canguçu isolada das demais, sugerindo que se trata de espécie críptica. / Abstract: The subfamily Triatominae comprises 146 species grouped in 18 genera and five tribes. The genus Triatoma is the most representative subfamily with 80 described species, which are grouped into eight complex and eight subcomplexes and this classification being based primarily on morphological characteristics. Triatoma rubravaria is considered an important vector in the transmission of Chagas disease in the state of Rio Grande do Sul since it was detected an increase of their capture and meetings colonies household after the program to combat of T. infestans. T. rubrovaria is found in groves and crevices of rocky areas within T. carcavalloi, T. circummaculata and T.klugi, which show morphological similarities. Molecular markers belonging to the nuclear DNA, as the internal transcribed spacers (ITS) have more rapid evolution, establishing recent relationships while the large ribosomal subunit 28S (D2), being well maintained, allows establishing the relationship between distantly related organisms. Mitochondrial markers (Cytochrome B - CytB and Cytochrome Oxidase I - COI) present a rate of change ten times faster than those presented by nuclear DNA, and are therefore useful for establishing phylogenetic relationships between organisms that diverged recently. A Bayesian analysis using mtDNA sequences belonging to (CytB and COI) reaffirmed the positioning of the species and indicates subcomplex rubrovaria and indicates T. carcavalloi as sister species from the group of T. klugi + T. rubrovaria + T. circummaculata. A Bayesian analysis of six populations of T. rubrovaria showed the population collected in Canguçu isolated from the others, suggesting that they are cryptic species. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntonioWilson-2006.pdf: 6802842 bytes, checksum: 8134652d892262dcb956b18b01349113 (MD5) Previous issue date: 2006-03-31 / The Chagas disease occurs from the United States to Patagonia, affecting about 16 million peopleThis disease was always associated with poverty conditions which are represented by the primitive houses made out of wood and mud The incidence of this infection in Brazil was estimated at a hundred thousand annual new cases in the end of the seventies and has a prevalence of 4,2% in the rural population The highest rates were found in Minas Gerais and Rio Grande do Sul with the seroprevalence of 8,8% following by Goiás (7,4%) and Bahia (5,4%) In Goiás within 2000 and 2003 249.868 home units were investigated and 51.570 triatomíneos were captured with 335 specimens infected by T. cruzi The peridomiciliar infestation was significantly bigger than the intradomiciliar by the species Triatoma sordida following by Panstrongylus megistus The inverse was observed with the species Rhodnius neglectus Panstrongylus geniculatus and Triatoma pseudomaculata (p <0,018) There was not significant difference in the infestations intra and peridomiciliar by the species Panstrongylus diasi Triatoma costalimai and Triatoma williami Only one specimen of Triatoma infestans was captured in the year 2000 / A infecção chagásica ocorre desde os Estados Unidos até a Patagônia acometendo cerca de 16 milhões de pessoas Essa doença sempre esteve associada às condições de pobreza representadas pelas casas primitivas construídas de artefatos de madeira e barro A incidência dessa infecção no Brasil foi estimada em 100 mil casos novos anuais no final dos anos 70 e prevalência de 4,2% na população rural Os coeficientes mais elevados dessa doença foram encontrados em Minas Gerais e Rio Grande do Sul com a soroprevalência de 8,8% seguidos por Goiás (7,4%) e Bahia (5,4%) Em Goiás no período de 2000 a 2003 foram investigadas 249.868 unidades domiciliares e capturados 51.570 triatomíneos com 335 espécimes infectados com T. cruzi A infestação peridomiciliar foi significativamente maior do que a intradomiciliar na espécie Triatoma sordida, seguida de Panstrongylus megistus O inverso ocorreu nas espécies Rhodnius neglectus Panstrongylus geniculatus e Triatoma pseudomaculata (p< 0,018) Não houve diferença significativa nas infestações intra e peridomiciliar nas espécies Panstrongylus diasi Triatoma costalimai e Triatoma williami. Apenas um exemplar da espécie Triatoma infestans foi capturado no ano de 2000

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas, una zoonosis que afecta al continente Americano, es causada por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi y su principal vía de transmisión es vectorial, a través de insectos hematófagos de la subfamilia Triatominae. Epidemiológicamente, en Chile el vector más importante es Triatoma infestans. La saliva de artrópodos hematófagos tiene propiedades vasodilatadoras e inmunomoduladoras que favorecen la ingestión de sangre, sin daño aparente para el hospedero. Extractos de glándula salival de algunos de estos organismos inhiben la ruta clásica y alterna de activación del sistema del complemento humano. Se ha aislado en la saliva de otros artrópodos hematófagos a calreticulina (CRT), una proteína altamente pleiotrópica que está presente en todos los linajes celulares, excepto eritrocitos. En este estudio se demostró la presencia de CRT en extracto de glándula salival de T. infestans (TiCRT), usando criterios antigénicos y funcionales. Se analizó el extracto completo de glándula salival de T. infestans mediante electroforesis en gel de poliacrilamida al 10% p/v, en presencia de dodecil sulfato de sodio y β2-mercaptoetanol (SDS- PAGE). Una réplica fue sometida a electrotransferencia, donde anticuerpos heterólogos reconocieron TiCRT putativa. Funcionalmente, y de acuerdo a lo esperado, se verificó que la TiCRT putativa presente en el extracto de glándula salival se unió específicamente al componente C1q, módulo de reconocimiento de señales de peligro de la ruta clásica del sistema del complemento humano. Más aún, el extracto de glándula salival, conteniendo TiCRT, inhibió esa ruta de activación, según lo verificado en ensayos inmunométricos. Muy probablemente, la unión de TiCRT a C1q medió una disminución en el depósito a la fase sólida de C4b. Esta es la unidad central de las convertasas de C3 y de C5 del complemento. Tomados en conjunto, estos resultados permiten proponer que el extracto de glándula salival de T. infestans contiene una molécula con peso aparente y propiedades antigénicas y funcionales compatibles con aquellas conocidas para CRT

Orientador: João Aristeu da Rosa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T17:55:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_AlineRimoldi_M.pdf: 8854165 bytes, checksum: dfc09fd67f41d32a061c2b77ca9455b8 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo : A doenca de Chagas, assim como seu agente etiologico Trypanosoma cruzi, foram descritos por Carlos Ribeiro Justiniano das Chagas. T. cruzi e transmitido por hemipteros sendo os generos Panstrongylus, Rhodnius e Triatoma os mais importantes. Com resultados bastante satisfatorios em relacao ao controle do principal vetor, T. infestans, outros triatomineos de importancia secundaria, coletados no peridomicilio, passaram a assumir maior relevancia, dentre essas especies, T. sordida. As populacoes de T. cruzi apresentam grande variabilidade intraespecifica evidenciada por diferencas na morfologia, na virulencia e patogenicidade, na habilidade de evasao a resposta imune do hospedeiro e na constituicao antigenica. Essa diversidade pode estar associada a sua adaptacao e sobrevivencia em diferentes hospedeiros. As diferentes formas de manifestacao clinica da doenca no homem podem ser associadas com cepas especificas ou com marcadores geneticos do hospedeiro, embora ambos possam influenciar o curso da infeccao. Este trabalho objetivou a caracterizacao biologica, morfologica e molecular de tres cepas de T. cruzi (SI5, SI8 e SIGR3) isoladas de T. sordida coletadas em Santo Inacio, Bahia. Desse modo, o estudo biologico indicou que as cepas isoladas de Santo Inacio, pertencem ao Biodema III e Zimodema I. Os resultados das mensuracoes das cepas SI5, SI8 e SIGR3 mostraram polimorfismo das formas tripomastigotas sanguineas, embora com predominancia de formas intermediarias para largura do corpo e curtas para comprimento total do corpo no decurso da infeccao experimental. Foram avaliados para as formas epimastigotas, parametros como comprimento total do corpo, largura e indice nuclear e observamos para as cepas SI5, SI8 e SIGR3 respectivamente, formas intermediaria/intermediaria/baixo, curto/intermediario/baixo e curta/larga/baixo para os parametros descritos acima. O significado geral desse polimorfismo ainda nao foi suficientemente investigado, desconhecendo-se se ele expressa um diferente comportamento biologico das cepas ou se reflete apenas a existencia de um "complexo" morfologico. A caracterizacao molecular das cepas SI5, SI8 e SIGR3, as enquadram no grupo II, o que indica, que nesse local circula uma mesma linhagem de T. cruzi, apesar das mesmas terem sido isoladas de hospedeiros e epocas distintas. / Abstract: Chagas disease and its causative agent Trypanosoma cruzi were described by Carlos Ribeiro Justiniano das Chagas. T. cruzi is transmitted by blood-sucking hemipterous and Panstrongylus, Rhodnius and Triatoma are the most important genera. Satisfactory results were achieved to the control of the main vector, T. infestans. However, other bugs of secondary importance, like Triatoma sordida collected around the houses began to assume greater epidemiological importance. The populations of T. cruzi show great variability among individuals demonstrated by differences in morphology, virulence and pathogenicity, ability to evade the host immune response and antigenic constitution. Such diversity may be associated with their adaptation and survival in different hosts. The course of the infection in human may be associated with specific strains or host genetic markers, although both can influence. This aim of this study was the biological, morphological and molecular characterization of three strains of T. cruzi (SI5, and SI8 SIGR3) isolated from T. sordida collected in Santo Inacio, Bahia. The biological study indicated that the isolates from Santo Inacio, belong to Biodeme III Zimodeme I. The results of measurements of the strains SI5, SI8 SIGR3 showed polymorphism of blood trypomastigotes, with a predominance of intermediate forms to body width and short length for total body in the course of experimental infection. Parameters such as: total body length, width and nuclear index were evaluated for epimastigotes, and observed for strains SI5, SI8 and SIGR3 respectively, forms na intermediate / middle / low, short / intermediate / low, short / wide / low for the parameters described above. The general meaning of this polymorphism has not been sufficiently investigated. It is not known if such poliymorphism expresses a different biologic behavior of the strains or merely is a result of a "complex" morphology. According to the molecular characterization the strains SI5, SI8 SIGR3 are in group II, which indicates that in this site it occurs the same lineage of T. cruzi, despite their different sources (isolated from different hosts and different times). / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T03:24:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alvarenga_EleniceMonte_M.pdf: 2829254 bytes, checksum: 964b17aaf1c7f50d4471a7be569aaa6d (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A cromatina pode existir em núcleos interfásicos em dois estados distintos: como eucromatina e como heterocromatina, podendo ser esta constitutiva ou facultativa. Em células somáticas do final da fase ninfal dos hemípteros reduviídeos Triatoma infestans e Panstrongylus megistus há núcleos grandes, poliploides, nos quais a heterocromatina apresenta-se como corpos conspícuos (cromocentros), daí tais células apresentarem-se como um bom modelo para investigação de características morfológicas e funcionais da cromatina. Em estudos sobre a constituição cromatínica, a composição em bases do DNA é algo muito explorado, dado o conteúdo informativo dos achados. Já quando se objetiva a investigação da funcionalidade da cromatina, mais recentemente, tem-se feito uso da abordagem epigenética. Neste trabalho buscou-se investigar a composição em bases do DNA destas células, associando-a aos domínios cromatínicos aí existentes e também à presença das NORs. Por meio de colorações fluorescentes com Cromomicina A3 (CMA3)/Distamicina e 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)/Actinomicina D concluiuse que o DNA dos cromocentros de T. infestans e P. megistus são ricos em sequências AT e pobres em GC. Isto foi ainda confirmado por imunodetecção de 5-metilcitosina, que ocorreu somente na eucromatina, e tratamento de ninfas de T. infestans com 5-aza-2'-deoxicitidina (agente demetilante), seguido da análise dos fenótipos nucleares e análise de imagem, em que se observou expansão somente da área eucromática. Com o método de AgNOR evidenciou-se que a região rica em bases GC ao redor do cromocentro coincide com um acúmulo de proteínas argirofílicas, o que sugere associação com NORs. A presença de modificações epigenéticas nas caudas das histonas na cromatina destes insetos foi investigada por meio do uso de anticorpos contra marcadores epigenéticos específicos, permitindo identificar a participação diferencial dos mesmos na composição e na estrutura dos territórios heterocromáticos. Assim, observou-se hipoacetilação e hipermetilação de histonas na região do corpo heterocromático, o que indicaria uma possível ação da modificação de histonas na manutenção da estrutura heterocromática nas células somáticas de ambas as espécies de reduviídeos. Por meio da avaliação da ação de drogas inibidoras de deacetilases de histonas sobre a cromatina dos insetos percebeu-se que, quando ninfas de T. infestans e P. megistus foram tratadas com as drogas, houve aumento na frequência de necroses e, no caso específico do tratamento com tricostatina A (TSA) e butirato de sódio (NaBt), ocorreu descompactação da heterocromatina. Sugere-se que o tratamento com TSA e NaBt afete o processo de deacetilação de histonas, o qual seria, então, um fator importante na estruturação dos cromocentros. A observação da ocorrência de mudas e da sobrevivência de ninfas de T. infestans, realizada a fim de se avaliar a ação do ácido valproico (VPA) sobre o desenvolvimento dos insetos, mostrou que a droga, assim como a injeção de solução salina, reduziu seu período de sobrevivência, além de afetar a ocorrência de mudas / Abstract: Chromatin in interphase cell nuclei can be present in two distinct states: euchromatin and heterochromatin, which may be constitutive or facultative. In somatic cells at the end of the nymphal stage of Triatoma infestans and Panstrongylus megistus there are large nuclei, in which heterochromatin is presented as conspicuous bodies (chromocenters). These cells are an appropriate model for investigation of morphological and functional characteristics of the chromatin. In studies about chromatin constitution, the base DNA composition is explored due to the informational content of the findings. If the objective is to investigate the chromatin functionality, recently has been used the epigenetic approach. In the current study, the aim was to investigate the DNA base composition in these cells, associating with the chromatin domains therein and also the presence of NORs. Through fluorescent stains with Chromomycin A3 (CMA3)/Distamycin and 4',6-diamidino-2-fenilindole (DAPI)/Actinomycin D was found that the chromocenters DNA of T. infestans and P. megistus were AT-rich and GC-poor. This was also confirmed by immunodetection of 5-methylcytidine, which occurred only in the euchromatin, and by T. infestans nymphs treatment with 5-aza-2'- deoxycytidine (demethylating agent), followed by nuclear phenotypes analysis and image analysis, in which expansion was observed only in the euchromatic area. AgNOR test evidenced that the GC-rich region around the chromocenter coincides with an accumulation of argyrophilic proteins, suggesting association with NORs. Epigenetic modifications on histone tails in chromatin of these insects were investigated by using antibodies against specific epigenetic markers, in order to identify their differential participation in the composition and structure of these heterochromatic regions. It was observed hypoacetylation and hypermethylation in heterochromatic body area, suggesting a possible action of histones modification in the maintenance of the heterochromatic structure in somatic cells of both species of reduviids. Through evaluation of histones deacetylases inhibitors action on the chromatin, it was observed that when T. infestans and P. megistus nymphs were treated with these drugs there was an increase in the frequencies of necrosis, and in the specific case of Trichostatin A (TSA) and sodium butyrate (NaBt), occurred heterochromatin decondensation. It is suggested that treatments with TSA and NaBt could affect the histones deacetilation process, which would be an important factor in chromocenters structuring. Observations of the molting occurrence and survival of T. infestans nymphs, carried out in order to evaluate the action of valproic acid (VPA) on the development of insects, showed that this drug, as well as injection of saline, reduced the survival period, besides affecting the molting occurrence / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural