Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Alba Regina de Abreu Lima / Banca: João Aristeu da Rosa / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Lilian Madi-Ravazzi / Resumo: A doença de Chagas é uma enfermidade de natureza endêmica, com pronunciada relevância na América do Sul. Um dos principais vetores do Trypanosoma cruzi, causador desta enfermidade, é o triatomíneo Triatoma infestans. Apesar de ter sua incidência reduzida, novos casos de reinfestação apontam a dificuldade do controle vetorial sobre esta espécie devido às suas características biológicas e genéticas, indicando, assim, a importância de se compreender a variabilidade genética neste inseto. No presente trabalho, foi elaborada uma revisão com o objetivo de reunir e organizar os dados disponíveis relacionados à variabilidade genética em T. infestans, permitindo eleger os principais e mais informativos genes, assim como evidenciar os índices de variabilidade intra-populacional e inter-populacional. Complementarmente, foi estudada a variação das regiões heterocromáticas, por meio da citogenética clássica e molecular. A aplicação da técnica de bandamento-C convencional e o uso de fluorocromos em nove linhagens e a técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH), com sondas específicas para regiões de DNA satélite em oito linhagens, permitiram observar a grande variação existente na quantidade e distribuição dessas regiões. Os resultados confirmaram a existência de dois grupos com notáveis diferenças genômicas, diferenciadas, principalmente, pela perda de material genético nas linhagens nãoandinas. A variabilidade intraespecífica observada pelas análises citogenéticas revelou uma extraordinária dinâmica genômica que ocorreu durante a dispersão desta espécie / Abstract: Chagas disease is an endemic illness of great relevance in South America. Within the triatomines, Triatoma infestans is one of the most important vectors of Trypanosoma cruzi, the causative protozoan of this disease. Its incidence is controlled, but new cases of reinfestation still occur, and they indicate the difficulties of vector control for this species due to its biological and genetic characteristics. Thus, it is important to understand the genetic variability of this species of insect. In this study, we present a review of the literature in order to gather and organize the data available on genetic variability of T. infestans. This review made it possible for us to elect the most appropriate genes and highlight the rates of intra-population and inter-population variability. The variation in the heterochromatic regions was also studied using classical and molecular cytogenetics. The application of the conventional C-banding technique combined with the use of fluorochromes in nine strains, as well as the application of the fluorescent in situ hybridization technique (FISH) with specific probes for regions of DNA satellite in eight strains, all together revealed the existence of noteworthy variation in the amount and distribution of these regions. The results confirmed the existence of two groups with remarkable genomic differences, which are distinguished mainly by the loss of genetic material in non-Andean lineages. The intraspecific variability observed through cytogenetic analysis revealed the extraordinary genomic dynamics that occurred during the dispersion of T. infestans / Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-03-21T11:26:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1278550 bytes, checksum: c271b17eabe8ba087f6b1cde6cb236e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-21T11:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1278550 bytes, checksum: c271b17eabe8ba087f6b1cde6cb236e2 (MD5) Previous issue date: 2015-09-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Triatomíneos são artrópodes hematófagos transmissores do Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli. É sabido que o comportamento alimentar e a transmissão de patógenos por estes vetores variam entre as diferentes espécies e são dependentes, direta ou indiretamente, de moléculas bioativas da saliva que auxiliam na interação vetor-parasito-hospedeiro. Neste sentido, caracterizamos e comparamos o repertório sialoproteômico de três importantes espécies dos principais gêneros de triatomíneos das Américas: Rhodnius prolixus, Triatoma lecticularia e Panstrongylus herreri, identificando 221 proteínas, sendo 69 de R. prolixus, 100 de T. lecticularia e 52 de P. herreri. Dentre os principais achados, encontramos a alta prevalência de nitroforinas em R. prolixus (68%) e de lipocalinas em T. lecticularia (79%) e P. herreri (49%). Neste contexto, as proteínas mais significativas por spot de R. prolixus, T. lecticularia e P. herreri mais abundantes, apresentando expressiva diferença entre as outras, foram Nitrophorin-4 (28,7%), Salivary lipocalin 5 (65,2%) e Putative triabin (20,5%), respectivamente. Outro achado significativo foi a única molécula presenta nas três espécies estudadas, a proteína não categorizada T1HT34, a qual atuaria como elo proteico entre elas, identificando-se como paráloga da Putative fry-like conserved. Os dados encontrados pela caracterização pelo Gene Ontology, vieram a corroborar achados anteriores, evidenciando-se todas as funções identificadas como beneficiadas pelo repasto sanguíneo dos triatomíneos. / Triatomine bugs are blood-sucking arthropods transmitters of Trypanosoma cruzi and Trypanosoma rangeli. It is known that eating behavior and the transmission of pathogens by these vectors vary between different species and are dependent, directly or indirectly, of bioactive molecules in saliva that help in vector-parasite-host interaction. In this sense, characterize and compare the sialoproteômico repertory of three important species of major triatomine genera of the Americas: Rhodnius prolixus, Triatoma lecticularia and Panstrongylus herreri, identifying 221 proteins, 69 of R. prolixus, 100 T. lecticularia and 52 P. herreri. Among the main findings, we found a high prevalence of nitroforinas in R. prolixus (68%) and lipocalin in T. lecticularia (79%) and P. herreri (49%). In this context, the most significant protein per spot R. prolixus, T. lecticularia and P. herreri most abundant, with significant difference among others, were Nitrophorin-4 (28.7%) Salivary lipocalin 5 (65.2%) and Putative triabin (20.5%), respectively. Another significant finding was the single molecule presents the three species studied, not categorized protein T1HT34, which would act as a protein link between them, identifying themselves as paráloga of Putative fry-like conserved. The data obtained by the characterization by the Gene Ontology, came to corroborate previous findings, showing up all the functions identified as beneficiaries of the blood meal of the insects.

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Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Se estudió la presencia de Trypanosoma cruzi en roedores silvestres y cosmopolitas (reservorios del ciclo silvestre), en sectores de las comunas de Calera de Tango y Til-Til, ubicados a 16 y 59 Km. respectivamente de la ciudad de Santiago. Se capturó un total de 138 roedores incluyendo ejemplares de Octodon degus, Rattus rattus, Phyllotis darwini, Abrothrix olivaceus y Abrocoma bennetti. Se les extrajo 0,5 ml de sangre mediante punción cardiaca, con el objetivo de determinar la frecuencia de T. cruzi por medio de la reacción de la polimerasa en cadena (PCR). Las muestras fueron sometidas a extracción del ADN contenidas en ellas, amplificación y detección de la región hipervariable de los minicírculos del ADNk de T. cruzi. Con el fin de visualizar el producto de la amplificación, se sometieron a electroforesis en gel de agarosa y se observó en transiluminador de luz ultravioleta. Se detectó la presencia de T. cruzi en 19 (14,84%) de las 128 muestras, diez de R. rattus, (7,25%), siete de O. degus, (5,07%), y dos de P. darwini, (1,45%). Los ejemplares de A. olivaceus y A. bennetti resultaron negativos. Estos resultados demostraron la circulación del parásito en la comunidad de micromamíferos, de lo que se puede concluir que los triatominos usan la sangre de roedores (silvestres y sinantrópicos), como alimento lo que asegura el mantenimiento del ciclo silvestre y peridoméstico del parásito, en las zonas rurales estudiadas en el presente trabajo

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La subfamilia Triatominae (Hemiptera: Reduvidae), comprende un grupo de insectos hematófagos transmisores de la Enfermedad de Chagas, endemia latinoamericana que afecta cerca de 10 millones de personas, causada por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi. Dadas las dificultades en el desarrollo de una vacuna contra la enfermedad, todos los esfuerzos están volcados al control de los triatominos, como insectos vectores. Los triatominos colonizan vivienda humana (hábitat doméstico), así como los ambientes próximos a ella (hábitat peridoméstico), con mayor o menor grado de adaptación dependiendo de la especie en consideración. Las especies asociadas al hombre suelen mostrar una amplia distribución geográfica, en parte como resultado de su transporte pasivo en los enseres domésticos durante las migraciones humanas. Se ha agrupado a las más de 130 especies que integran la subfamilia en distintos complejos y subcomplejos en base a similitudes morfológicas y de distribución geográfica, entre otras. El subcomplejo Triatoma sordida, incluído dentro del complejo T. infestans, está integrado por las especies T. sordida, T. garciabesi, T. guasayana y T. patagonica distribuidas diferencialmente en el cono sur de América del Sur (Argentina, Bolivia, Brasil y Paraguay). Se encuentran principalmente en los ambientes silvestres y peridomésticos y tienen una alta tasa de infección con T. cruzi. Suelen colonizar la vivienda humana tras la erradicación de T. infestans y T. brasiliensis, por lo que dentro de los programas de control se las considera especies secundarias y potencialmente riesgosas. La variabilidad en diversas características fenotípicas así como la posibilidad de obtener descendencia viable en los cruces experimentales ha llevado a dudar del estatus específico de dos de sus integrantes, T. garciabesi y T. patagonica. Asimismo, se ha sugerido que T. sordida podría estar integrada por dos especies crípticas. Las tres principales especies vectoras de la enfermedad son T. dimidiata, T. infestans y Rhodnius prolixus. Dentro del género Triatoma, la especie con mayor capacidad vectorial en América del Norte y Central es T. dimidiata. Con una alta tasa de infección con T. cruzi , esta especie tiene una alta adaptabilidad a diversas condiciones climáticas y coloniza fácilmente los ambientes peridoméstico y doméstico a partir de sus reservorios silvestres, pudiendo encontrársela incluso en grandes ciudades. De origen centroamericano, actualmente tiene una amplia distribución desde el centro de Mexico, por todos los países de América Central hasta Venezuela, Colombia, Perú y Ecuador en América del Sur. Debido a la gran variabilidad que presenta en sus características morfológicas y etológicas a lo largo de su distribución geográfica, inicialmente fue dividida en subespecies, aunque posteriormente fue reunificada en uno de los estudios más abarcativos hechos sobre taxonomía de triatominos. Sin embargo, numerosos estudios posteriores, empleando diversas técnicas fenotípicas y genéticas, muestran una variabilidad difícil de atribuir a la de una única especie. Los caracteres fenotípicos (citológicos, morfométricos, isoenzimáticos, etc.) y genéticos (obtenidos mediante los métodos de RAPD, rDNA ITS-1 y 2, 18S RNA, entre otros), analizados con diversas técnicas de análisis multivariado, se han empleado exhaustivamente en la taxonomía de varios grupos de animales, plantas, hongos y bacterias, ayudando a dilucidar y en parte a resolver relaciones que la taxonomía clásica no era capaz de definir. El patrón de hidrocarburos cuticulares de insectos se ha utilizado ampliamente como carácter taxonómico en el estudio de diversas especies; entre las de importancia sanitaria se destacan las de los géneros Glossina sp., Simulium sp. y Anopheles sp. En triatominos se conoce el patrón de hidrocarburos de varias especies y complejos, y se ha determinado su estructura en T. infestans, T. mazzottii y R. prolixus. Dentro del subcomplejo T. sordida, en este trabajo de tesis se pudo discriminar a T. garciabesi como especie distinta de T. sordida, en función de las caracteristicas cuali y cuantitativas de su perfil de hidrocarburos; sin embargo T. patagonica no se diferencia como especie, agrupándose como una población de T. guasayana. T. sordida y T. garciabesi mostraron una relación estrecha entre ambas, siendo T. guasayana la especie más diferenciada del subcomplejo. Las poblaciones de T. sordida quedaron divididas a su vez en dos grupos netamente diferenciados, que podrían ser considerados como subespecies, en coincidencia con otros estudios. El análisis de los hidrocarburos de T. dimidiata reveló que es necesaria una reconsideración de la taxonomía de la especie. Se obtuvieron tres grupos claramente diferenciados, que se corresponden con la clasificación en subespecies hecha originalmente: T. dimidiata maculipennis para la mayoría de los ejemplares mexicanos, T. d. dimidiata para los centroamericanos y T. d. capitata para los de la mayor parte de los sudamericanos. Adicionalmente, se obtuvo un grupo formado por los insectos de la región mexicana de Yucatán y norte de Guatemala que en coincidencia con otros análisis constituiría otra especie o subespecie. Los insectos colectados en los sistemas de cuevas de Lanquín (Guatemala) y en la región cercana de Augustine (Bélice) mostraron un nivel de diferenciación comparable al de otra especie. Los resultados obtenidos en esta tesis muestran que el patrón de hidrocarburos es un marcador taxonómico de gran utilidad y sensibilidad, tanto para discernir las relaciones interespecíficas como para evaluar la variabilidad intraespecífica en triatominos, además permite inferir el movimiento de insectos tanto dentro de una región geográfica como entre ambientes. La información aportada, en conjunto con la obtenida mediante otros marcadores genéticos y fenéticos contribuiría en el diseño de estrategias específicas de los programas de control de la enfermedad.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Triatoma infestans es el principal vector de la enfermedad de Chagas en Chile. Tradicionalmente se le ha asociado a ambientes domiciliarios, pero en los últimos años se ha detectado su presencia en ambientes silvestres, en sectores suburbanos de algunas comunas de las regiones Metropolitana y de Valparaíso. Frente a estos nuevos hallazgos, surgió la inquietud de caracterizar morfológicamente estas nuevas poblaciones, y compararlas con triatominos criados en condiciones de laboratorio, los que se asemejan a aquellos que habitan ambientes domiciliarios. Mediante morfometría geométrica se estudiaron las cabezas de ninfas de estadio V de T. infestans provenientes de laboratorio y de los focos silvestres de Calera de Tango, Región Metropolitana y Putaendo, Región de Valparaíso. Se analizaron 49 ejemplares criados en condiciones de laboratorio correspondientes a la generación número cuarenta y ocho de T. infestans, capturados en domicilios de la Región de Coquimbo durante el año 1960 y 50 ejemplares de los focos silvestres, 28 de los cuales de Calera de Tango y los 22 restantes de Putaendo, capturados entre Noviembre del año 2008 y Diciembre del año 2009. No se observaron diferencias significativas de tamaño ni conformación entre las cabezas de los individuos de laboratorio y los individuos de los focos silvestres, ni entre los individuos de Calera de Tango y los de Putaendo. De los resultados del estudio se concluye que las tres poblaciones analizadas no difieren significativamente en cuanto a su morfometría / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1070960

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2016-10-11T19:43:22Z No. of bitstreams: 1 2014 - Maria Luiza Ribeiro de Oliveira.pdf: 7923335 bytes, checksum: b4bf6ee6e3e8616e057c10373b9ec475 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T19:43:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014 - Maria Luiza Ribeiro de Oliveira.pdf: 7923335 bytes, checksum: b4bf6ee6e3e8616e057c10373b9ec475 (MD5) Previous issue date: 2014-09-26 / CAPES / The aim of this study was to morphologically characterize the external appendages (buccula, rostrum; stridulatory groove; scutellum of male legs and genitalia of females) Triatoma carcavalloi, Triatoma circummaculata and Triatoma rubrovaria compare the morphology and morphometry of exoc?rios bodies and opercula of eggs through optical and scanning electron microscopy, besides examining the bionomic characteristics of T. carcavalloi in laboratory conditions, providing subsidies to assess the vectorial capacity of this species. Morphostructural the differences of adults were illustrated in scutellar region where only one species, T. circummaculata, presented in the harth form median depression. In the analyzes of the cephalic region, stridulatory groove is in the form of "U" shaped and T. circummaculata "V" T. carcavalloi and T. rubrovaria the buccula and T. carcavalloi described how to T. rubrovaria "U" and T. circummaculata "V". Already the rostrum of T. carcavalloi, T. circummaculata and T. rubrovaria presented two side slits 1 + 1 at the apex. Were analyzed and highlighted significant differences in the length, width and diameter of the body and lid of the eggs of T. rubrovaria, T. carcavalloi and T. circummaculata. In the femurs of the legs of the three species, in both sexes a pair of subapical denticles were found. The spongy pits were found only in males, tibia of fore and middle legs. Regarding the biology of T. carcavalloi, the average incubation period of the eggs in T. carcavalloi was 22.7 days. The largest number of eggs / female / week was observed during the warmer months and the eggs that failed to hatch were fertile. The first day of blood meal was 3.13 days after hatching, on average. The intermoult period N1-N2 averaged de18,52 days; N2-N3 was 62.77 days; N3-N4 was 86.93 days; N4-N5 and N5 was 119.05 days, adult was 193.43 days. The overall average of feeds throughout the nymphal development was 13.4. The results achieved for starvation resistance indicated that the nymphs of 3rd, 4th and 5th stages have higher resistance than adults, and in this case the males were less resistant than females. The highest mortality rate was recorded in N3 (22.2%). The median survival was 25.6 weeks for adultos.O total life cycle was long, averaging 503.4 dias. A general evaluation of the results showed that in all studied morphological characters there were significant differences in all three species, putting each species in its specific status. However, the species that differs in the largest number of features, particularly the size of the structures is T. circummaculata. The data obtained in addition to expanding the knowledge of T. carcavalloi bion?mico contribute to the assessment of the possible role of this species in the transmission of T. cruzi. / O objetivo deste trabalho foi caracterizar morfologicamente os ap?ndices externos (b?cula, rostro; sulco estridulat?rio; escutelo de machos, patas e genit?lia de f?meas) deTriatoma carcavalloi, Triatoma circummaculata e Triatoma rubrovaria, comparar a morfologia e a morfometria dos exoc?rios dos corpos e op?rculos dos ovos atrav?s da microscopia ?tica e eletr?nica de varredura, al?m de examinar as caracter?sticas bion?micas de Triatoma carcavalloi em condi??es de laborat?rio, fornecendo subs?dios para avaliar a capacidade vetorial dessa esp?cie. Foram ilustradas as diferen?as morfoestruturais dos adultos na regi?o escutelar onde apenas uma esp?cie, T. circummaculata, apresentou a forma codiforme na depress?o mediana. Nas an?lises da regi?o cef?lica, o sulco estridulat?rio ? em forma de ?U? em T. circummaculata e em forma de "V" em T. carcavalloi e T. rubrovaria, as b?culas de T. carcavalloi e T. rubrovaria apresentaram a forma de ?U? e T. circummaculata de ?V?. J? o rostro de T. carcavalloi, T. circummaculata e T. rubrovaria apresentaram duas fendas laterais 1+1 no ?pice. Foram analisadas e evidenciadas diferen?as significativas no comprimento, largura e di?metro do corpo e do op?rculo dos ovos de T. rubrovaria, T. carcavalloi e T. circummaculata. Nos f?mures das patas das tr?s esp?cies, em ambos os sexos foram encontrados um par de dent?culos subapicais. As fossetas esponjosas foram encontradas somente nos machos, nas t?bias das patas anteriores e medianas. Em rela??o a biologia de Triatoma carcavalloi, o per?odo m?dio de incuba??o dos ovos em T. carcavalloi foi de 22,7 dias. O maior n?mero de ovos / f?mea /semana foi observado durante os meses mais quentes e os ovos que n?o eclodiram eram f?rteis. O primeiro dia de repasto sangu?neo foi de 3,13 dias ap?s a eclos?o, em m?dia. O per?odo de intermuda N1-N2 foi em m?dia de18,52 dias; N2-N3 foi 62,77 dias; N3-N4 foi 86,93 dias; N4-N5 foi 119,05 dias e N5-adulto foi 193,43 dias. A m?dia geral de alimenta??es durante todo o desenvolvimento ninfal foi de 13,4. Os resultados logrados para resist?ncia ao jejum indicaram que as ninfas de 3?, 4? e 5? est?dios apresentam maior resist?ncia do que os adultos, e neste caso os machos foram menos resistentes do que as f?meas. A taxa de mortalidade mais alta foi registrada em N3(22,2%). A sobreviv?ncia m?dia foi de 25,6 semanas para os adultos.O ciclo de vida total foi longo, com m?dia de 503,4 dias.Uma avalia??o geral dos resultados apontou que em todos os caracteres morfol?gicos estudados houveram diferen?as significantes nas tr?s esp?cies, colocando cada esp?cie em seu status espec?fico. Entretanto, a esp?cie que difere em maior n?mero de caracter?sticas, principalmente no tamanho das estruturas ? Triatoma circummaculata. Os dados obtidos al?m de ampliar o conhecimento bion?mico de Triatoma carcavalloi contribuem para a avalia??o de uma poss?vel participa??o desta esp?cie na transmiss?o do T. cruzi.

Trypanosoma cruzi is endemic in the U.S., infecting humans, dogs, and wildlife. This study identified a new geographic distribution for triatomine species within Texas based on 2,449 records obtained from published data and new field studies. Triatomine vectors of T. cruzi were reported from 97 counties covering all ecological zones. Triatoma gerstaeckeri was the most commonly collected species followed by T. sanguisuga. New field collections resulted in 233 specimens from 37 counties and a 52% T. cruzi infection rate. A second trypanosome, Blastocrithida triatomae was found in two specimens from different locations. A habitat suitability model for T. gerstaeckeri was developed using GIS and remote sensing applications. Forest and rangeland were the predominant land cover classes found within T. gerstaeckeri habitat, where as water and agriculture proved to have little influence on habitat suitability. Genetic variation of seven triatomine species from Texas was evaluated using cytochrome b DNA sequences from 61 new specimens. This is the first study of the taxonomic status of T. gerstaeckeri, T. indictiva, and T. neotomae using molecular markers. Intraspecific variation for T. sanguisuga and T. gerstaeckeri suggests significant gene flow across their ranges within Texas. Genetic variation of T. cruzi isolates from Texas was evaluated using SSU rRNA gene sequences. Included were 63 new sequences from five triatomine species, canine, baboon, and human isolates. Sequences partitioned into two groups in agreement with previous studies on U.S. isolates. Genetic variation of T. cruzi did not occur according to host, geographic location, or collection site. The extent of Chagas disease in domestic canines of Texas is described by geographic distribution, signalment, and clinical presentation and histopathology. Based on data from 553 cases, the geographic distribution in Texas is widespread (46 counties) and closely matches the distribution of the Triatomine vectors. Chagas disease was diagnosed in 33 breeds, primarily sporting/working dogs. This study represents the most comprehensive characterization of components of the Chagas disease transmission cycle in the U.S. to date. These findings should raise awareness among physicians, veterinarians, and public health practitioners regarding T. cruzi, its vectors, canine infection, and human risk for Chagas disease in Texas.