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TbeIF2K2, uma nova quinase de eIF2alfa associada a membrana da bolsa flagelar do trypanosoma brucei / A movel membrane-bound eIF2alfa kinase in the flagellar pocket of Trypanosoma bruceiMoraes, Maria Carolina Strano [UNIFESP] January 2007 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O controle traducional mediado pela fosforilacao da subunidade alfa do fator de inicio de traducao 2 (eIF2a) e um ponto central para programas de expressao genica induzidos por estresse. Tripanossomatideos, importantes patogenos humanos, apresentam processos de diferenciacao desencadeados pelo contato com os distintos ambientes encontrados em seus insetos vetores e hospedeiros mamiferos, provavelmente representando situacoes de estresse. Trypanosoma brucei, o agente causador da tripanossomiase africana, codifica tres potenciais quinases de eIF2α (TbeIF2Kl-K3). Neste trabalho, nos mostramos que TbeIF2K2 e uma glicoproteina associada a membrana, expressa tanto na forma prociclica quanta na sanguinea. 0 dominio catalitico de TbeIF2K2 fosforila eIF2α de levedura e de mamiferos na Ser51. A quinase tambem fosforila a incomum forma de eIF2α encontrada em tripanossomatideos, especificamente no residuo Thr169, que corresponde a Ser51 em outros eucariotos. 0 eIF2α de T brucei, no entanto, nao e um substrato para GCN2 ou PKR in vitro. 0 dominio regulatorio putativo de TbeIF2K2 nao apresenta nenhuma similaridade de sequencia com as quinases de eIF2α conhecidas. Tanto na forma sanguinea quanto na prociclica, TbeIF2K2 esta localizada principalmente na bolsa flagelar, organela que e o local exclusivo de exo e endocitose nesses parasitas. Ela tambem pode ser detectada em compartimentos endociticos, mas nao em lisossomos, sugerindo que a quinase e reciclada entre os endossomos e a bolsa flagelar. A localizacao de TbeIF2K2 sugere que ela possa funcionar como um sensor do transporte de nutrientes ou proteinas em T brucei, um organismo que depende de mecanismos regulatorios pos-transcricionais para controlar a expressao genica em diferentes situacoes. Essa e a primeira quinase de eIF2α associada a membrana descrita em eucariotos unicelulares / Translational control mediated by phosphorylation of the alpha subunit of the eukaryotic
initiation factor 2 (eIF2α) is central to stress-induced programs of gene expression.
Trypanosomatids, important human pathogens, display differentiation processes elicited by
contact with the distinct physiological milieu found in their insect vectors and mammalian
hosts, likely representing stress situations. Trypanosoma brucei, the agent of African
trypanosomiasis, encodes three potential eIF2α kinases (TbeIF2K1-K3). We show here that
TbeIF2K2 is a transmembrane glycoprotein expressed both in procyclic and bloodstream
forms. The catalytic domain of TbeIF2K2 phosphorylates yeast and mammalian eIF2α at
Ser51. It also phosphorylates the highly unusual form of eIF2α found in trypanosomatids
specifically at residue Thr169, that corresponds to Ser51 in other eukaryotes. T. brucei
eIF2α, however, is not a substrate for GCN2 or PKR in vitro. The putative regulatory
domain of TbeIF2K2 does not share any sequence similarity with known eIF2α kinases. In
both procyclic and bloodstream forms TbeIF2K2 is mainly localized in the membrane of
the flagellar pocket, an organelle that is the exclusive site of exo- and endocytosis in these
parasites. It can also be detected in endocytic compartments but not in lysosomes,
suggesting it is recycled between endosomes and the flagellar pocket. TbeIF2K2 location
suggests a relevance in sensing protein or nutrient transport in T. brucei, an organism that
relies heavily on posttranscriptional regulatory mechanisms to control gene expression in
different environmental conditions. This is the first membrane-associated eIF2α kinase
described in unicellular eukaryotes. / FAPESP: 02/13783-9 / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Desenvolvimento e avaliação da liberação in vitro de drug delivery system pH-dependente à base de benznidazol e ZIF-8 visando a obtenção de uma terapia alternativa para a doença de ChagasFERRAZ, Leslie Raphael de Moura 25 January 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-01-25 / CAPES / O parasita Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, que figura como um dos graves problemas de saúde pública de países em desenvolvimento. Único fármaco disponível para a terapêutica da doença de Chagas, o benznidazol (BNZ) é um derivado 2- nitroimidazol com largo espectro de atividade farmacológica antiparasitária. Entretanto, o BNZ apresenta entraves biofarmacotécnicos: grandes doses administradas, tratamentos prolongados, a alta incidência de reações adversas; tudo devido a sua baixa solubilidade aquosa, uma vez que pertence à classificação biofarmacêutica de classe II. O papel da tecnologia farmacêutica é, então, prover alternativas capazes de incrementar a solubilidade do BNZ e modular sua liberação a fim de obter um tratamento alternativo de maior qualidade e com maior aceitação pelo paciente. Neste contexto, o presente trabalho objetivou desenvolver Drug Delivery Systems (DDS) à base de BNZ e do excipiente inovador Zeolitic Imidazolate Framework (ZIF-8), a fim de utilizá-lo nos estudos de pré-formulação de forma farmacêutica de liberação prolongada para o tratamento alternativo da doença de Chagas. Os sistemas foram obtidos em diferentes proporções molares após otimização de um método ex situ de incorporação do fármaco. A maior eficiência de incorporação foi o critério escolhido para a seleção do melhor DDS. Em seguida, foram realizadas diferentes caracterizações físico-químicas visando avaliar a formação do sistema e a cinética de liberação in vitro do fármaco através de ensaios de dissolução e diálise sob condições sink e non-sink. Para fins comparativos, foram utilizadas misturas físicas na proporção molar de 1:1. Os dados de liberação foram analisados através da área sob a curva (AUC) e ajuste dos resultados quanto aos métodos modelo-dependente e -independente. O sistema BNZ:ZIF-8 1:1 (mol:mol) obtido em acetona foi o selecionado por apresentar maior eficiência de incorporação (em média 38%) após 4 dias de agitação intermitente. As diferentes técnicas de caracterização utilizadas corroboraram a formação do sistema. Os estudos de liberação in vitro do BNZ através de dissolução e de diálise mostraram que houve modulação da liberação do fármaco de acordo com o pH utilizado em condições sink e non-sink. A modulação da liberação foi corroborada tanto pelo ajuste dos resultados a diferentes modelos cinéticos e alteração do mecanismo de liberação do fármaco, quanto pela diferença entre os perfis de liberação comprovada pelo fator de semelhança. Assim, em pH 4,5 o sistema apresentou uma liberação mais rápida, com efeito burst, enquanto que em pH 7,6 houve uma liberação prolongada, mais lenta e sem efeito burst. Em vista dos argumentos apresentados, fica evidente que foi obtido um DDS pH-dependente promissor a ser utilizado como inovador carreador do BNZ em formas farmacêuticas destinadas ao tratamento alternativo da doença de Chagas. / Trypanosoma cruzi is the etiologic agent of Chagas’ disease and consist in one of the major public health problems in developing countries. Only drug available for the treatment of Chagas’ disease, benznidazole (BNZ) is a 2-nitroimidazole derivative with broad-spectrum antiparasitic activity. However, BNZ has biopharmaceutical barriers: large doses, prolonged treatments, the high incidence of adverse reactions; all due to its low aqueous solubility, since it belongs to the biopharmaceutical classification II. Therefore, pharmaceutical technology provides alternatives capable of increasing the solubility of the BNZ and modulate its release in order to obtain an alternative treatment with higher quality and greater patient acceptance. In this context, this study aimed to develop a Drug Delivery Systems (DDS) based on BNZ and the innovative excipient Zeolitic Imidazolate Framework (ZIF-8) aiming to use it in the pre- formulation studies of extended release dosage forms to alternative treatment of Chagas’ disease. The systems were obtained at different molar ratios after optimization of an ex situ method of drug incorporation. The largest uptake efficiency was the criterion used for selecting the best DDS. Then, different characterizations were performed to evaluate the system obtainment, including the kinetics of drug in vitro release through dissolution tests and dialysis under sink and non-sink conditions. For comparison, physical mixtures (PM) were used in the molar ratio 1:1. The release data were analyzed by the area under the curve (AUC) and setting the kinetic results through methods model dependent and independent. The BNZ:ZIF-8 1:1 (mol:mol) system was selected because of its higher incorporation efficiency (38%) after 4 days of intermittent agitation. The different characterization techniques corroborated the obtainment of the system. In vitro release studies of BNZ through dissolution and dialysis showed that there was modulation of the drug release according to the pH used in sink and non-sink conditions. Modulation of the release was corroborated by the adjustment of the results to different kinetic models and alteration of the mechanism of drug release, as well as by the difference between the release profiles evidenced by the similarity factor. Thus, at pH 4.5 the system showed a faster release with burst effect, while at pH 7.6 there was a prolonged, slower release with a reduce in the burst effect. Finally, it is evident that a promising DDS pH-sensitive was obtained to be used as the novel carrier of BNZ in dosage forms intended for the alternative treatment of Chagas' disease.
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Risco de transmissão vetorial do Trypanosoma cruzi ao homem, no município de Támara, estado de Casanare, Colômbia, e proposta de um novo modelo de determinação e estratificação de riscoLopéz, Diego Camilo Montenegro January 2013 (has links)
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Previous issue date: 2014-05-07 / Em estudos desenvolvidos na Colômbia sobre a epidemiologia da DCh, o estado de Casanare apresenta a maior soroprevalência, associada, na sua maioria, à transmissão vetorial. Portanto, as organizações nacionais e internacionais de saúde têm priorizado, entre outros, o município de Támara - Casanare, a fim de "interromper a transmissão do Trypanosoma cruzi intradomiciliar pelo vetor Rhodnius prolixus e reduzir a infestação e o risco de transmissão de outras espécies com algum grau de domiciliação". Para definir ações de interrupção da transmissão vetorial faz-se necessário definir indicadores entomológicos como linha base que permitam direcionar as atividades de vigilância e controle do vetor. O presente trabalho fez caracterização do intra e peridomicílio e levantamento entomológico em 1.434 domicílios dentro de 48 de 52 comunidades existentes na área rural de Támara. Segundo o censo, a população rural é de 4.799 pessoas, 53,4% do gênero masculino e 46,6% do gênero feminino, sendo a população principalmente jovem com 44,8% de indivíduos entre 0 e 8 anos. Das famílias totais, 41% já ouviram falar do termo Chagas associando-o a uma enfermidade humana, enquanto os demais desconheciam o agravo. A composição estrutural predominante na avaliação conjunta das moradias foi: teto de zinco (80,3%) e de palmeira (22,6%), paredes de adobe (49,76%), tijolo (20,59%) ou de madeira (21,3%), reboco completo em 35% das paredes de adobe e ausência de reboco em 34% delas. Quanto ao tipo de piso, 66,1% tinham piso de terra e 33,0% de cimento. O levantamento entomológico encontrou 321 insetos hematófagos
As espécies identificadas, em sua ordem de abundância, foram Rhodnius prolixus, Panstrongylus geniculatus e Rhodnius pictipes. A primeira espécie apresentou densidade de 77,88% de toda a fauna entomológica analisada e foi a única com presença de infecção com T. cruzi. R. prolixus foi encontrada colonizando o ambiente artificial, assim como P. geniculatus. A colonização e abundância de ninfas do principal vetor transmissor do T. cruzi na Colômbia (R. prolixus) esteve associado a moradias com teto de palha, paredes não rebocadas, chão de terra batida e presença de porcos; porém, a presença de adultos teve relação com a presença de hospedeiros, número de pessoas e presença da palmeira Attalea butyracea. Ao determinarmos o risco de transmissão, segundo os modelos empregados e o proposto no presente estudo, o RIVDCha, não encontramos diferença estatisticamente significante (F(3,188)= 1.341, p= 0.155), mas de acordo com a lógica e o conjunto de variáveis determinantes do risco de cada deles, são naturalmente diferentes
O modelo proposto foi o único a categorizar exclusivamente em baixo risco às comunidades onde não há infestação com triatomíneos, demonstrando sua alta sensibilidade e capacidade informativa mesmo na ausência de casos de DCh. Baseados no modelo proposto, ficou demonstrado que há uma relação entre os casos de DCh e a distribuição e domiciliação de R. prolixus na área rural de Támara. Mas faz-se necessário continuar validando o modelo proposto em áreas endêmicas que permitam esclarecer o real funcionamento e definir sua aplicabilidade generalizada / Studies conducted in Colombia on the epidemiology of Chagas disease (DC), showed that the state of Casanare had the highest prevalence, associated in most cases to the transmission by the insect vector. Therefore, national and international health organizations have prioritized, among others, the municipality of Tamara -Casanare, in order to "interrupt household transmission of Trypanosoma cruzi caused by the vector Rhodnius prolixus and thus reduce the risk of infestation and transmission by other species with some degree of domiciliation. To interrupt vector transmission is necessary to define entomological indicators to guide the activities of surveillance and vector control. This study made a characterization of household areas its indoor and outdoor environments as well as an entomological survey of 1434 households in 48 communities of 52 existing in Tamara’s rural area. According to the latest census, the rural population is 4799 people, 53.4% male and 46.6% female, with a mainly young population with 44.8% of individuals between 0 and 8 years. Of the total households, 41% had heard of the term Chagas associating it to a human disease, while the remaining didn’t have any knowledge about the disease. The predominant structural composition of dwellings was: houses with tin roof (80.3%) and palm leaves (22.6%); adobe walls (49.76%), brick (20,6%) and wood (21.3%). The walls possessed complete plastering in 35% of cases and absence of plaster in 34%. Regarding the type of floor, 66.1% had a dirt floor and 33.0% cemented floor. The entomological survey found 321 bugs of an interest to public health. The species found in order of abundance were Rhodnius prolixus,Panstrongylus geniculatus and Rhodnius pictipes. The first presented density of 77.88% of all insects analyzed and was the only species found naturally infected with T cruzi. The colonization and abundance of indoors nymphs of the main transmission vector of T. cruzi in Colombia (R.prolixus) was associated with the dwellings that had a thatched roof, walls without plaster, dirt floors and presence of pigs at the household, however, the presence of adult insects was related to the presence of hosts, number of people and the presence of palm Attalea butyracea. In determining the risk of transmission, according to the models used and proposed in this study, RIVDCha, we found no statistically significant difference (F (3,188) = 1.341, p = 0.155), but according to the logic and to the set of variables determining the likelihood of each of them, they are naturally different. The proposed model was the only one to categorize exclusively as of low-risk the communities not infested with triatomines, demonstrating its high sensitivity and informativeness despite the absence DCh cases. Based on the proposed model, it was proved that there is a relationship between cases of DC and the distribution and domicilliation of R. prolixus in rural areas of Tamara. But it is necessary to further validation of the proposed model in endemic areas, clarifying its actual funcionality and establish its applicability elsewhere.
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Fosfoglicerato mutase de Trypanosoma brucei: estrutura e mecanismo de reação / Phosphoglycerate Mutase from Trypanosoma brucei: structure and reaction mecanismMercaldi, Gustavo Fernando 03 September 2010 (has links)
As doenças tropicais têm um grande impacto sobre a saúde em países de baixa renda, estando relacionadas com condições de pobreza e desigualdade. A tripanossomíase africana é uma infecção parasitaria negligenciada incluída na agenda da Organização Mundial de Saúde. Esta enfermidade é causada pelo Trypanosoma brucei gambiense e Trypanosoma brucei rhodesiense, sendo transmitida pela mosca tsé-tsé (Glossina sp.) e geralmente fatal se não tratada. Os fármacos usados no seu tratamento são ineficazes, difíceis de administrar e causam severas reações adversas. Portanto, existe a necessidade do desenvolvimento de alternativas quimioterápicas eficazes e seguras. Assim, a enzima fosfoglicerato mutase (PGAM) surge como um importante alvo molecular. Esta enzima esta envolvida no metabolismo de glicose, sendo necessária para a viabilidade do parasito. Somado a isso, ela difere da enzima dos hospedeiros permitindo a identificação de inibidores específicos. Não obstante, esforços têm sido realizados para identificar inibidores da PGAM, bem como para elucidar sua estrutura e mecanismo de reação. Nosso propósito é obter o modelo de alta resolução desta macromolécula sem ligantes e conseqüentemente analisar a mudança de conformação que esta sofre ao se ligar ao seu substrato natural. A PGAM de Trypanosoma brucei obtida na expressão e purificação mostrou-se cataliticamente ativa nos ensaios cinéticos. Por experimentos de cromatografia de exclusão molecular observamos que a amostra purificada se comportava na forma de monômero. Dados de difração de raios-X foram coletados para cristais da macromolécula obtidos na ausência de ligantes. A estrutura cristalográfica foi resolvida a 2.3 Å, apresentando um dímero na unidade assimétrica. Ambas as moléculas do dímero estavam na forma livre e apresentava grande diferença conformacional se comparadas com as PGAMs de estruturas conhecidas que estão ligadas ao substrato ou produto natural. Por espalhamento de raios-X a baixos ângulos confirmamos que a enzima é monomérica em condições que mimetizam a fisiológica. A mudança conformacional induzida pelo ligante não afeta a topologia dos dois domínios da PGAM. Entretanto, há mudanças nos ângulos torcionais da cadeia principal dos laços que conectam os domínios da proteína. Além disso, o metal cobalto parece estar envolvido na estabilização da estrutura terciária da PGAM na conformação livre. Finalmente, este novo modelo estrutural pode contribuir para o esforço internacional de desenvolver fármacos tripanocidas / Tropical diseases represent a major burden on population health in low-incoming countries, being related to poverty and social disadvantage. African trypanosomiasis is a neglected parasitic infection on the agenda of World Health Organization. This disorder is caused by Trypanosoma brucei gambiensis and Trypanosoma brucei rhodesiensis, transmitted by the tsetse fly (Glossina sp.), and usually fatal if untreaded. The drugs used in the treatment are ineffective, difficult to administer, and cause severe adverse reactions. Therefore, there is a need to develop effective and safe chemotherapies. Thus, the enzyme phosphoglycerate mutase (PGAM) emerges as an important molecular target. This enzyme is involved in glucose metabolism, and is necessary for viability of the parasite. Moreover, it differs from the host enzyme allowing the identification of specific inhibitors. Nevertheless, efforts have been made in identifying PGAM inhibitors and to elucidate their structure and mechanism of reaction. Our purpose is to obtain the high resolution model of the macromolecule free from ligands and consequently to analyze the change in conformation that undergoes upon binding to its natural substrate. Trypanosoma brucei PGAM obtained in the expression and purification was shown to be catalytically active in the kinetics assays. In the size exclusion chromatography we observed that the purified sample behaves as a monomer. X-ray diffraction data were collected for crystals of the macromolecules obtained in the absence of ligands. The crystal structure was solved to 2.3 Å, showing a dimmer in the asymmetric unit. Both molecules of the dimmer were in free form, and had a large conformational difference compared with those of know PGAM structures that are connected to the natural substrate or product. Small angle X-ray scattering confirm that the enzyme is monomeric under conditions that mimic the physiological. Ligand-induced conformational change does not affect the topology of the two domains of the PGAM. However, there are changes in torsional angles of the main chain of the loops that connect the protein domains. Additionally, the metal cobalt seems to be involved in stabilizing the tertiary structure of PGAM in the free conformation. Finally, this new structural model may contribute to the international effort to develop trypanocidal drugs.
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Estrutura cristalográfica da enzima superóxido dismutase de Trypanosoma brucei e análise da especificidade do metal incorporado por acoplamento estatístico / Crystal structure of the superoxide dismutase enzyme from Trypanosoma brucei and incorporated metal specificity analysis by statistical coupling.Bachega, José Fernando Ruggiero 25 July 2008 (has links)
A doença do sono é causada pelo parasita Tripanosoma brucei. Considerada uma doença negligenciada, mata milhares de pessoas todos os anos na África subsaariana. O T.brucei não apresenta resposta imune pronunciada, o que dificulta o desenvolvimento de vacinas, e os medicamentos disponíveis são escassos. Os tripanossomatídeos são comprovadamente sensíveis ao stress oxidativo causado pelo radical superóxido. Assim, as enzimas superóxido dismutases (SODs) são a primeira linha de defesa contra esse radical. As SODs são metalo enzimas (EC 1.5.1.1) capazes de catalisar a dismutação do superóxido em oxigênio molecular e peróxido de hidrogênio. São classificadas de acordo com o metal incorporado na estrutura: cobre e zinco (CuZnSOD), ferro ou manganês (Fe/MnSOD) e níquel (NiSODs). Neste trabalho de mestrado, a enzima TbFeSODB2 de T.brucei foi, expressa, purificada, cristalizada e teve sua estrutura resolvida. A estrutura cristalográfica da enzima do parasita foi comparada com a enzima humana análoga contendo manganês (HuMnSOD), onde foram evidenciadas as principais diferenças entre as duas estruturas que podem ser exploradas para o desenho do novos inibidores seletivos. Foi realizada uma análise de acoplamento estatístico, onde com base em um alinhamento múltiplo dessas enzimas determinou-se resíduos que são capazes de interferir na seletividade do metal incorporado e estado oligomérico das SODs. / Sleeping sickness, caused by the parasite Tripanosoma brucei, is considered a neglected disease, killing thousands of people every year in subsaharian Africa. T. brucei does not generate a pronounced immune response, difficulting the development of vaccines. Furthermore, available medicines are scarce. Tripanosomatides are known to be sensitive to oxidative stress caused by the superoxide radical. Therefore, the superoxide dismutase enzymes (SODs) are a primary line of defence for the parasites against this radical. SODs are metalloenzymes (EC 1.5.1.1) capable of catalyzing superoxide dismutation into molecular oxygen and hydrogen peroxide. SODs are classified according to the incorporated metal: copper/zinc (CuZnSOD), iron/manganese (Fe or MnSOD) and nickel (NiSODs). In the work presented here, TbFeSODB2 from T. brucei was expressed, purified, crystallized and its 3D structure solved. The crystal structure of the parasite enzyme was compared to the homologous human enzyme containing manganese (HuMnSOD), revealing evidence for differences between both structures which could be exploited in the design of new selective inhibitors. In addition, a statistical coupling analysis was performed on the entire Fe/MnSOD superfamily, based on a multiple sequence alignment. It was shown that this technique was able to identify novel residue determinants of metal selectivity and oligomeric state.
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Infecção pelo Trypanosoma cruzi em Canis familiares e Triatomíneos (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) na zona rural do Estado do Rio Grande do NorteAraújo Neto, Vicente Toscano de 16 March 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-03-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / A infecção pelo Tripanosoma cruzi em Canis familiaris e triatomíneos foi avaliada nos
ambientes domiciliar e peridomiciliar de localidades rurais de alguns municípios do
Estado do Rio Grande do Norte. Amostras de sangue de 43 cães foram coletadas nos
municípios de Acari, Caicó, Caraúbas e Marcelino Vieira e avaliadas quanto a infecção
pelo T. cruzi por meio de testes sorológicos e pela Reação em Cadeia da Polimerase
(PCR). Inicialmente, testes sorológicos como o DPP® (Dual Path Platform, BioManguinhos/FIOCRUZ)
e ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) foram
realizados para verificar a presença de anticorpos anti-Leishmania. Para a detecção de
anticorpos anti-T. cruzi foram realizadoso ELISA in house para IgM e IgG e a reação de
Imunofluorescência Indireta (RIFI). As capturas de triatomíneos foram realizadas nas
mesmas localidades em que foram coletadas as amostras de sangue de cão. A infecção foi
avaliada por exame direto e/ou PCR. Na sorologia para T. cruzi, 16,3% dos cães
apresentaram reatividade sugestiva de fase aguda e 11,6% de fase crônica. A sorologia
para Leishmania foi reativa em 9,3% dos animais dos quatro municípios investigados,
sendo mais elevado no município de Acari com 12,5% . A reatividade entre os testes para
Leishmania e T. cruzi foi de 23,2% das amostras, relacionada provavelmente com
sobreposição /de áreas endêmicas. Na detecção do kDNA pela PCR, 41,9% das amostras
apresentam a banda 330pb, as quais 20,9% eram do município de Caraúbas, 9,3% de
Marcelino Vieira, 9,3% de Acari e 2,3% de Caicó. Nesses municípios, ninfas e adultos de
Triatoma brasiliensis, Triatoma pseudomaculata e Rhodnius nasutus foram capturados
em ambientes peridomiciliar e/ou intradomiciliar. As análises do conteúdo intestinal
avaliados pela PCR apontaram 59,5% de positividade. Os resultados apontam elevada
taxa de infecção de cães e triatomíneos pelo T. cruzi em diferentes municípios do Rio
Grande do Norte, o que pode favorecer a infecção em humanos e a manutenção da
infecção ativa pelo T. cruzi no Estado. / The infection by Trypanosoma cruzi in Canis familiaris and Triatomines was evaluated
in the home and peridomiciliary environment of rural communities in the State of Rio
Grande do Norte. Blood samples from 43 dogs from rural areas in the municipalities of
Acari, Caicó, Caraúbas and Marcelino Vieira were evaluated for T. cruzi infection by
serological techniques and by Polymerase Chain Reaction (PCR) to identify T. cruzi
kDNA. Serology was initially performed to identify anti-T.cruzi antibodies by ELISA
(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) for IgM and IgG in house and the Indirect
Immunofluorescence (IFR) reaction. The presence of anti-Leishmania antibodies with
DPP® (Dual Path Platform, Bio-Manguinhos / FIOCRUZ) and ELISA were also used.
The catches of triatomines were carried out in the same locations and in the same period
in which the dog samples were collected and the infection evaluated by direct examination
and/or PCR. The criterion for positivity in T. cruzi serology was the agreement between
two different techniques, which resulted in 16.3% (7/43) of the samples suggestive of
acute phase and 11.6% (5/43) of chronic phase. The reactive serology for Leishmania was
9.3% of the animals in the four municipalities studied, being more reactive in the
municipalities of Acari. These results of reactivity for Leishmania and T. cruzi may be
related to the overlap of endemic areas. In the identification of kDNA by PCR in blood
samples from dogs, 41.9% (18/43) of the samples present the band 330pb, of these 6.8%
(4/43) are in the municipality of Acari, 2.3% (1/43) in Caicó, 20.9% (9/43) in Caraúbas
and 9.3% (4/43) in Marcelino Vieira. The catches of triatomines identified adults and
nymphs of T. brasiliensis, T. pseudomaculata, R. nasutus and adults of P. lutzi in
peridomiciliary and/or intradomiciliary environments of all the studied localities. The
analysis of the intestinal contents evaluated by PCR found positivity of 78.5% (95/121)
of the triatomines that cohabitated these environments with the dogs. The natural T. cruzi
infection was identified in dogs and triatomines in all municipalities studied, probably
helping to maintain active T. cruzi infection in the domiciliary area and increasing the
risk of infection in the human population.
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Doença de chagas canina: análise de fatores de risco e educação em saúde / Chagas disease in dogs: analysis of risk factors and health educationSilva, Luanna Fernandes 21 March 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-03-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Chagas disease affects humans and many animals susceptible, among which dogs are considered the main reservoir in the domestic cycle, and the diagnosis in this important species for assessing the risk of transmission to the population in a region. The successful control and prevention requires knowledge among the population about the disease and ways to avoid it. In this context, we observe the Community Health Agents (CHA), working in the dissemination of information on these and other endemic diseases. Thus, the present study aimed to evaluate the knowledge about Chagas disease by owners of dogs positive for the disease and, in addition, verify that the CHA active in the neighborhoods where these owners reside, know Chagas disease to perform a job education in satisfactory health, and to assess whether these agents include the prevention of disease in their daily work and municipal management empowers and provides working conditions for these professionals. Several interviews with 34 owners of dogs seropositive for Chagas disease and 48 were performed with CHA. In both cases was used a semi-structured questionnaire with open and closed questions about Chagas disease, and for CHA, were added questions about the prevention and control activities performed by them and about the conditions of work offered for these professionals. In addition, at the time of the visit to interview the owners, blood was collected from seropositive dogs to confirm the diagnosis by Polymerase Chain Reaction (PCR). Of the 34 dogs, nine (26.47%) had a diagnosis confirmed by PCR, confirming the presence of the parasite in the peripheral circulation of the animal and maintaining the consequent risk of the disease cycle. There was also a lack of knowledge of the owners about the symptoms of human Chagas disease, vector characteristics, general preventive measures of the disease susceptibility of dogs, symptoms, cure and vaccine canine Chagas disease, and the habit of accumulating matter organic outside the home, which acts as a risk factor for the occurrence of the disease in animals and men who share the same environment. However, there was no association between this environmental risk factor or between people's knowledge about the disease and positivity of dogs. About the CHA, it was found that although these show know the susceptibility of humans to the disease, its symptoms, the vector and measures to prevent it, they do not know the etiologic agent, the mechanisms of transmission and prevention of the same.It was also found that there is little inclusion of health education activities related to the Chagas disease in their daily work and conditions offered by the municipality are unsatisfactory. Thus, the research highlights the importance of establishing monitoring programs for Chagas infection in domestic animals and from this, health services can identify areas at risk of transmission, and encourage education work in more emphatic by the CHA health in these areas. As a consequence, the population at risk know more about the disease and ways to prevent it, and thus there will be more successful in the prevention and control the disease / A doença de Chagas acomete o homem e diversos animais suscetíveis, dentre os quais os cães são considerados os principais reservatórios no ciclo doméstico, sendo o diagnóstico nessa espécie importante para avaliação do risco de transmissão para população em uma região. O êxito no controle e prevenção da doença requer o conhecimento por parte da população sobre a enfermidade e as formas de evitá-la. Nesse contexto, observam-se os Agentes Comunitários de Saúde (ACS), atuando na divulgação de informações sobre essa e outras endemias. Assim, o presente estudo objetivou avaliar o conhecimento sobre a doença de Chagas por proprietários de cães sororreagentes a antígenos de T. cruzi e, paralelamente, verificar se os ACS atuantes nos bairros em que esses proprietários residem, conhecem a doença de Chagas para realizar um trabalho de educação em saúde satisfatório, bem como avaliar se esses agentes incluem a prevenção da doença em seu trabalho diário e se a gestão municipal capacita e fornece condições de trabalho para esses profissionais. Para tanto, foram realizadas entrevistas com 34 proprietários de cães sororreagentes 48 ACS com área de atuação nos bairros de residência desses proprietários. Utilizou-se nos dois casos, questionário semiestruturado contendo perguntas sobre a doença, sendo que para os ACS, acrescentaram-se questões sobre as atividades de prevenção e controle realizadas por eles e sobre suas condições de trabalho. Em adição, no momento da visita para entrevista dos proprietários, foi coletado sangue dos cães sororreagentes para confirmação do diagnóstico por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Dos 34 cães, nove (26,47%) tiveram resultados positivos na PCR, confirmando a presença do parasita na circulação periférica do animal, e consequente risco de manutenção do ciclo da doença. Verificou-se ainda falta de conhecimento dos proprietários acerca dos sintomas da doença de Chagas humana, características do vetor, medidas gerais de prevenção da doença, suscetibilidade dos cães, sintomas, inexistência de cura e vacina para a doença canina, além do hábito de acumular matéria orgânica no peridomicílio, que atua como fator de risco para a ocorrência da doença nos animais e homens que compartilham do mesmo ambiente. No entanto, não houve associação entre este fator de risco ambiental ou entre o conhecimento da população sobre a doença e a positividade dos cães. Sobre os ACS, constatou-se que, embora estes demonstrem conhecer a suscetibilidade do homem à doença, seus sintomas, o vetor e medidas para evitá-lo, eles desconhecem o agente etiológico, os mecanismos de prevenção e de transmissão da mesma. Verificou-se ainda que a inclusão de atividades de educação em saúde relacionadas à doença no seu trabalho diário é insuficiente e as condições oferecidas pelo município são insatisfatórias. Dessa forma, a pesquisa destaca a importância da criação de programas de monitoramento da infecção chagásica nos animais domésticos e a partir disso, a possibilidade de identificação pelos serviços de saúde das áreas com risco de transmissão, além de incentivar um trabalho de educação em saúde mais enfático pelos ACS nestas áreas. Como consequência, haverá maior êxito na prevenção e controle dessa importante antropozoonose
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Efeito da infecção por Trypanosoma vivax sobre a ingestão de alimento, conversão alimentar, ganho de peso e características da carcaça de ovinos infectados experimentalmente / Effect of Trypanosoma vivax infection on feed intake, feed conversion, weight gain and carcass characteristics of sheep experimentally infectedBrito, Parmênedes Dias de 30 August 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-08-30 / Trypanosomiasis caused by Trypanosoma vivax, is a debilitating and often fatal
disease in domestic animals, which causes economic losses to cause growth retardation, abortion,
decreased productivity, high costs of treatment and even death of the severely affected animals.
This study aims avaluate the changes caused by T. vivax on performance and carcass characteristics
of sheep, with no racial pattern defined experimentally infected in Mossoró, Rio Grande do Norte,
Brazil. We used 10 ovines, male, without defined racial standard (WDRS), adults of average weight
20 kg, during the finishing stage, arranged in two treatments: control group and the group infected
with strain of T. vivax originating from the outbreak of Paraíba with inoculum of 1,3 x 105 viable
tripomastigostas. The animals were kept in two in sheds covered for 70 days in the same
management conditions and feeding. Clinical symptoms, temperature and parasitemia were
monitored daily. Weekly blood tests were performed, serum biochemistry, evaluation of feed intake
and weight measurements, and calculation of feed efficiency ratio and feed every 15 days. At the
end of the experiment, was the sacrifice of animals for evaluation of performance and carcass traits.
There was a negative effect of T. vivax in feed conversion and feed efficiency ratio (P <0.05). The
average weekly weight gain of the infected group was always lower when compared to the control
group. Inherent in the feed intake was observed that there was no difference (P> 0.05) in total feed
consumed weekly. Only the beef ribs and ham cuts showed a significant difference (P <0.05). But it
is noteworthy that the infected group showed weight of the palette, neck, back and saw, 9%, 16%,
24% and 25% lower compared to the control group. There was a negative effect on fat deposition
surface (P <0.05) and longissimus muscle area (P <0.05). Trypanosomiasis caused by T. vivax can
cause direct losses in animal performance of 19,72% and resulting in economic losses for rural
producers of up to 45,86% when deaths occur in the herd / Tripanossomíase provocada pelo Trypanosoma vivax, é uma enfermidade debilitante e
comumente fatal nos animais domésticos, que acarreta perdas econômicas por provocar crescimento
retardado, aborto, queda na produtividade, altos custos de tratamento e até morte dos animais
severamente afetados. O presente trabalho tem por objetivo avaliar as alterações causadas pelo T.
vivax sobre o desempenho e características da carcaça de ovinos, sem padrão racial definido
(SPRD), infectados experimentalmente, em Mossoró, Rio Grande do Norte, Brasil. Foram
utilizados 10 ovinos machos, SPRD, adultos de peso médio 20kg, na fase de acabamento, dispostos
em dois tratamentos, grupo controle e grupo infectado com cepa de T. vivax oriundo do surto da
Paraíba, com inóculo de 1,3 x 105 tripomastigostas viáveis. Os animais foram mantidos em duas
baias teladas, por 70 dias, em iguais condições de manejo e alimentação. Diariamente realizou-se
acompanhamento de temperatura, parasitemia e sinais clínicos. Semanalmente, foram realizados
exames hematológicos, bioquímico sérico, avaliação do consumo de ração e pesagens, além cálculo
de conversão alimentar e índice de eficiência alimentar a cada 15 dias. Ao final do período
experimental, foi realizado o sacrifício dos animais para avaliação do desempenho e das
características da carcaça. Houve efeito negativo do T. vivax na conversão alimentar e no índice de
eficiência alimentar (P<0,05). O ganho médio de peso semanal do grupo infectado sempre foi
inferior quando comparado ao grupo controle. Inerente ao consumo de ração foi observado que não
houve diferença (P>0,05) no total de ração consumida semanalmente. Somente os cortes cárneos
costilhar e pernil mostraram diferença significativa (P<0,05). Contudo vale ressaltar que o grupo
infectado apresentou peso da paleta, pescoço, lombo e serrote, 9%, 16%, 24% e 25% inferiores em
relação ao grupo controle. Houve um efeito negativo na deposição de gordura superficial (P<0,05) e
área de olho de lombo (P<0,05). A tripanossomíase causada pelo T. vivax pode causar perdas no
diretamente no desempenho animal de 19,72% e resultando em perdas econômicas para o produtor
de até 45.86% quando ocorre óbitos no rebanho.
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Tripanossomíase por Trypanosoma vivax em pequenos ruminantes: descrição de surtos e infecção experimental da doença / Trypanosome s by Trypanosome vivax in little ruminants: description of outbreaks and e experimental infection of the diseasePaiva, Erika de Souza 27 August 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-08-27 / This research has considered Trypanosome s outbreaks by T. vivax that occurred in four groups of little ruminants in three towns of Alto Sertão da Paraíba in 2008 and recreated the disease experimentally in caprines and ovines, in order to relate the cardiac and central nervous system injuries with the parasite. For the statistics analyses the Test of Tukey (SAS) and the Qui-square (Epi Info 6.0) were done. The natural infection evaluation was done in the first outbreak (outbreak 1) and second (outbreak 2) semester of 2008, when the clinic signs were registered, parasitemia, rectal temperature, PCV and body score. 20% of adult caprine and ovine from each flock were chosen. It was noticed that in the first outbreak, the parasitemia was significantly bigger than in the second outbreak for both species, suggesting an acute and chronic stage of the disease. There was also a significant relation between the parasitemia, the temperature, the PCV and the body score in caprines and ovines. The anemia is a more evident clinical signal of the disease, followed by weight loss. At the PCR checkup, it was noticed that all the animals checked had the parasite in the blood. To evaluate the relation between the cardiac injuries with the T. vivax, 14 male ovines were used, SRD, disposed in 3 groups, being G1 the animals evaluated up to the 20th dpi (day pos infection), the G2, animals evaluated up to the 90th dpi and the G3 which is the control group, corresponding to the days of the groups treated. The isolated from T. vivax was from the outbreak occurred from Paraiba, being inoculated 1 ml containing 107 tripomastigotes. Clinical exams were done, hematological and anatomic-pathological. The animals presented hyperthermia, hydrothorax, ascites and hidropericardium. To the necropsy, the heart from an ovine from G2 presented evidences of cardiac failure. In the histological exam, hyaline necrosis was noticed, miocarditis with infiltrated inflammatory, besides fibrosis, suggestive of cardiac failure. In the evaluation of the injuries at the SNC related to T. vivax 12 male caprines were used, SRD, also disposed in three groups: G1 (animals evaluated in the acute stage of the disease), G2 (animals evaluated at the chronic stage of the disease) and G3 (control group). The isolated from T. vivax was due to an outbreak from ovines in Paraíba, being inoculated 1 ml containing 1.25 x 105 tripomastigotes. Within this study, besides the clinical exams, hematological and anatomic-pathological exams, the biochemical exam of the LCR were also done. The animals presented tetany, bruxism, opisthotonos and severe hyperthermia. In the exam of the LCR, there was a significant increase of the proteins in general and cellularity, as well as glicorrhachia and tubidez LCR. In the histological exam, meningoencephalitis was noticed, characterized by the presence of infiltrated inflammatory, besides morules cells (cells of Mott). / Este trabalho avaliou surtos de tripanossomíase por T. vivax que ocorreu em quatro rebanhos de pequenos ruminantes em três municípios do alto sertão da Paraíba em 2008 e reproduziu a doença experimentalmente em caprinos e ovinos, a fim de relacionar as lesões cardíacas e do sistema nervoso central com o parasita. Para análise estatística foi realizado o teste de Tukey (SAS) e o Qui-quadrado (Epi Info 6.0). A avaliação da infecção natural foi realizada no primeiro (surto 1) e segundo (surto 2) semestre de 2008, quando foram registrados os sinais clínicos, parasitemia, temperatura retal, hematócrito e escore corporal. Foram escolhidos 20% de caprinos e ovinos adultos de cada rebanho. Foi observado que no surto 1, a parasitemia foi significativamente maior que no surto 2 para ambas as espécies, sugerindo uma fase aguda e crônica da doença. Houve também uma relação significativa entre a parasitemia, a temperatura, o hematócrito e o escore corporal em caprinos e ovinos. A anemia é o sinal clínico mais evidente na enfermidade, seguida da perda de peso. Ao exame da PCR, foram verificados que todos os animais avaliados possuíam o parasita no sangue. Para avaliar a relação das lesões cardíacas com o T. vivax foram utilizados 14 ovinos machos, SRD, dispostos em 3 grupos, sendo G1 os animais avaliados até o 20o dpi (dias pós-infecção), o G2, animais avaliados até o 90o dpi e o G3 que é o grupo controle, correspondente aos dias dos grupos tratados. O isolado do T. vivax foi proveniente do surto ocorrido na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 107 tripomastigotas. Foram realizados exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos. Os animais apresentaram hipertermia, hidrotórax, ascite e hidropericárdio. À necropsia, o coração de um ovino do G2 apresentou evidências de insuficiência cardíaca. No exame histológico, observou-se necrose hialina, miocardite com infiltrado inflamatório, além de fibrose, sugestivo de insuficiência cardíaca. Na avaliação das lesões no SNC relacionadas ao T. vivax foram utilizados 12 caprinos machos, SRD, também dispostos em três grupos: G1 (animais avaliados na fase aguda da doença), G2 (animais avaliados na fase crônica da doença) e G3 (grupo controle). O isolado do T. vivax foi decorrente de um surto em bovinos na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 1,25 x 105 tripomastigotas. Neste estudo, além dos exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos foram realizados também o exame bioquímico do LCR. Os animais apresentaram tetania, bruxismo, opistótono e hipermetria acentuada. No exame do LCR, houve um aumento significativo das proteínas totais e celularidade, bem como glicorraquia e tubidez do líquor. No exame histológico foi verificada meningoencefalite, caracterizada pela presença de infiltrado inflamatório, além de células morulares (células de Mott).
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Modulação da resposta das ectonucleotidases em ratos infectados com Trypanosoma evansi através do uso de curcumina como pré-tratamento / Response of ectonucleotidases modulation of rats infected with Trypanosoma evansi through the use of pre-treatment with curcuminPereira, Andreia Bugnotto 08 September 2014 (has links)
Trypanosoma evansi is a protozoan parasite which infects a wide variety of mammalian hosts leading to the development of trypanosomiasis. Several papers have investigated the enzymatic changes in lymphocytes, important cells involved in immune responses, which are important for understanding the pathological mechanism of trypanosomiasis in animals. Among them we highlight the ectoATPases, enzymes that hydrolyze extracellular nucleotides and nucleosides of adenine. The curcumin (cur) has been associated with several beneficial effects associated with its use in animals experimentally infected with T. evansi, since this compound exhibits its properties among inflammatory and anti-parasitic effects. This study aimed to evaluate the activity of enzymes of the purinergic system in lymphocytes of rats supplemented or not with curcumin 30 days before infection with Trypanosoma evansi. Thirty-two adult male Wistar rats were divided into four groups. The uninfected control group (C) received saline intraperitoneally (IP), the infected control group (CI) received by the same route 0.2 ml of blood with 1x106 parasites and treatment with corn oil. The group pre-infection 20 (PreI20) received 20mg/kg curcumin and pre-infection group 60 (PreI60) received 60mg/kg of curcumin for 30 days prior to inoculation with T. evansi. After inoculation, the 03 treated groups continued to receive daily curcumin within 15 days before euthanasia. The NTPDase activity for both the hydrolysis of ATP to ADP increased significantly in the infected control group compared to the control group (P <0.05). The ADA activity
decreased significantly in the infected control group compared to the control (P <.05). The use of curcumin at doses of 20 and 60 mg / kg for 30 days prior to infection with T.evansi reduced significantly NTPDase activity and increased significantly ADA activity in the treated groups (P <0.05). The results of this study support the evidence that the use of curcumin prior infection with T. evansi induces immunomodulatory effects, since they maintain the NTPDase activity reduced in lymphocytes, and maintains high ADA activity, favoring the response against the parasite. Thus, it is suggested that curcumin can be used as a food supplement for animals in areas where trypanosomosis is endemic. / O Trypanosoma evansi é um protozoário o qual infecta uma grande diversidade de hospedeiros mamíferos levando ao desenvolvimento da tripanossomíase. Diversos trabalhos têm investigado as alterações enzimáticas em linfócitos, importantes células envolvidas com respostas imunológicas, as quais são importantes para a compreensão do mecanismo patológico da tripanossomíase em animais. Dentre elas se destacam as NTPDases, enzimas que hidrolisam nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares de adenina. A curcumina (Cur) tem sido relacionada com diversos efeitos benéficos associados ao seu uso em animais experimentalmente infectados com o T. evansi, uma vez que este composto apresenta dentre suas propriedades efeitos antiinflamatórios e antiparasitários. Este estudo teve por objetivo avaliar a atividade das enzimas do sistema purinérgico nos linfócitos de ratos, suplementados ou não com curcumina 30 dias antes da infecção por Trypanosoma evansi. Trinta e dois ratos Wistar adultos foram distribuídos em grupos controle não infectado (C), recebeu solução fisiológica via intraperitoneal (IP), o grupo controle infectado (CI) recebeu pela mesma via 0,2ml de sangue com 1x106 parasitas e tratamento com óleo de milho. O grupo pré-infecção 20 (PreI20) recebeu 20mg/kg de curcumina e o grupo pré-infecção 60 (PreI60) recebeu 60mg/kg de curcumina por 30 dias prévios à inoculação com T. evansi.. Após a inoculação, os 3 grupos tratados continuaram a receber a curcumina diariamente no período de 15 dias até a eutanásia. A atividade da NTPDase tanto para a hidrólise do ATP quanto do ADP aumentou significativamente no grupo CI quando comparado ao grupo controle (P<0,05). A atividade da ADA diminuiu significativamente no grupo CI em relação ao controle (P<0,05). A utilização da Curcumina nas doses de 20 e 60mg/Kg por 30 dias prévios a infecção com o T. evansi reduziu significativamente a atividade da NTPDase e aumentou significativamente a atividade da ADA nos grupos tratados (P<0,05). Os resultados deste trabalho reforçam a evidencia que o uso da curcumina previamente a infecção por T. evansi induz efeitos imunomodulatórios, pois mantêm a atividade da NTPDase nos linfócitos reduzida, e mantém alta a atividade da ADA, favorecendo a resposta contra o parasita. Desta forma, sugere-se que a curcumina possa ser utilizada como suplemento alimentar para animais em áreas onde a tripanosomose é endêmica.
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