O avanço da ciência regenerativa está se comprometendo com a busca de novas opções terapêuticas no combate as diversas doenças e disfunções orgânicas. Nessas avançadas linhas de pesquisas, as células-tronco são um símbolo dessa evolução. A variedade da aplicação deste novo e experimental método de tratamento está sendo utilizado, pela bioengenharia, para reparar tecidos e órgãos lesados. Defeitos ósseos extensos ocorrem após diversos tipos de injúrias ao esqueleto facial, como traumas faciais, ressecções por lesões agressivas e malformações congênitas. Essas sequelas são tratadas, preferencialmente, através da reconstrução utilizando enxertos ósseos de origem autógena. Entretanto, às desvantagens proporcionadas pela obtenção do tecido ósseo autógeno, lançaram um dos maiores desafios, da bioengenharia que é a busca pelo aprimoramento dos substitutos ósseos. Nesse caminho do aprimoramento dos biomateriais a adição de células-tronco mesenquimais representam a possibilidade da criação de um sinergismo, entre as células e o arcabouço, para otimizar a osteogênese. Nessa linha, esse estudo propõe-se a avaliar o reparo ósseo em estudo experimental, em modelo animal, através do tratamento de defeito ósseos criados em fêmures de ratos. A amostra dessa pesquisa foi composta de 96 ratos albinos da espécie Rattus novergicus albinus, linhagem SHR (Spontaneously Hypertensive Rats), isogênicos. Os animais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos de acordo com o tipo de tratamento (Grupo I: α – TCP + ADSCs; Grupo II: α – TCP + ADSCs/ENDO; Grupo III: α – TCP; Grupo IV). A cultura de células tronco tiveram como tecido de origem o tecido adiposo da região abdominal e as células endoteliais formam coletadas da medula óssea. A peças foram avaliadas em 03 períodos de tempo diferentes (07, 14 e 21 dias). A histomorfometria avaliou a área de neoformação óssea dos defeitos bem como a imunohistoquímica com marcação para a proteína VEGF avaliou a eficácia da adição das células endoteliais. Os resultados demonstraram, através dos testes estatísticos que houve uma diferença estatisticamente significante, no reparo ósseo, favorecendo os tratamentos dos defeitos que utilizaram a terapia celular e a vascularização foi também otimizada no grupo que foi tratado com a adição das células endoteliais. Dessa forma conclui-se que nesse modelo de estudo a utilização das ADSCS foram capazes de otimizar o reparo ósseo. / The regenerative medicine has been searching for a new therapeutic options to manage diseases and also organic dysfunctions. The advanced research fields, has enrolled the stem cells to achieve the upgrade in the new treatment objectives. The bioengineering is application of this new and experimental, treatment method to repair damaged tissues and organs using the stem cells, includes the possibility to acelerating and improving the bone repair process. The autogenous bone graft has been considered the gold standart graft material to reconstruction the bone defects, fundamentally because of the osteogenic potential. However, the harvest disadvantages autogenous bone tissue leads to the search for bone substitutes improvement. In this field a promising alternative has been proposed by tissue engineering. The totipotent cells, also called mesenchymal stem cells, which has the cellular plasticity ability, is associated with biomaterials, creating a synergy, between these cells and the scaffold, to optimize the osteogenesis. The tissue engineering application to tissue repair has been extensively researched with the aim of proposing more reliable and more efficient clinical methods. Although the effects of the use of adult stem cells are well known in bone marrow transplants, in some areas, such as bone repair, there is still lack of scientific data. This research was conducted, in animal model, to assessment bone repair in created femural bone defects treated with mesenchymal stem cells. 96 animals (Rattus novergicus albinus - Spontaneously Hypertensive Rats) were randomly divided into four groups (Group I: α - TCP + ADSCs, Group II: α - TCP + ADSCs/Endo, and Group III: α - TCP; (07, 14 and 21 days). The histological sections were stained in H&E and the histomorphometry was used to evaluated the new bone formation area in the defects and also the immunohistochemical expression of VEGF was analysed. Our results suggest that the combination of ADSCs and the scaffold was able to enhance the bone repair in this study model.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 426668.pdf: 3860401 bytes, checksum: cecf8536ffcc30bf313ecd3f32dd76e9 (MD5) Previous issue date: 2010-09-30 / A Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) ? a manifesta??o convulsiva mais comum em adultos e que comumente se apresenta como uma s?ndrome refrat?ria aos tratamentos farmacol?gicos. Altera??es anat?micas e fisiol?gicas est?o geralmente presentes em pacientes com ELT, como a atrofia hipocampal vista em estudos de RM. As c?lulas tronco mostraram ter a habilidade de regenerar estruturas hipocampais em modelos experimentais. O objetivo do presente estudo ? avaliar a seguran?a e factibilidade de uma nova estrat?gia terap?utica - o transplante aut?logo de c?lulas tronco mononucleares da medula ?ssea (CTMMO) no tratamento de pacientes com ELT com esclerose hipocampal unilateral refrat?ria. Foram avaliados 9 pacientes adultos com diagn?stico de ELT confirmado por hist?ria cl?nica, RM com volumetria hipocampal, v?deo EEG prolongado para registro de crises e exames laboratoriais. Ap?s consentimento informado e preenchendo todos os crit?rios de congru?ncia para lateralidade, os pacientes foram submetidos ao transplante de CTMMO. O transplante de c?lulas tronco foi realizado atrav?s de arteriografia seletiva da art?ria cerebral posterior infundindo-se de 1,51 x 108 a 5,51 x 108 c?lulas mononucleares. Nenhum efeito adverso significativo foi registrado durante o procedimento nem durante o tempo de seguimento. Tr?s pacientes (44.5%) permaneceram na Classe IA de Engel, 04 na classe IB e 02 pacientes na classe IIA. Dados os resultados obtidos, conclu?mos que o transplante de CTMMO parece fact?vel e seguro em pacientes com ELT refrat?ria. O controle de crises alcan?ado nessa popula??o nos d? um potencial terap?utico promissor no tratamento dessa popula??o

Orientador: Marcelo Fábio Nogueira / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Marcos Roberto Chiaratti / Banca: Flávio Vieira Meirelles / Banca: Lawrence Charles Smith / Resumo: Na literatura, não há descrição de que células trofectodérmicas sejam adequadas para a agregação (sem utilizar a fusão ou a microinjeção) e forma cão de embrião quimérico. O presente trabalho buscou validar um modelo para gerar blastocistos quiméricos, pela agrega ção de tecido trofectodérmico, primeiramente validando-o em camundongos e posteriormente testando a sua eficácia na espécie bovina. Nesta, duas técnicas para a reconstrução de blastocistos foram investigadas, mediante a agregação de um fragmento de trofectoderme (TE) com a massa celular interna (MCI) ou com células tronco induzidas a pluripotência (iPS). Os embriões foram bissectados com lâmina, assistida por micromanipulador, exceto no Experimento 1 e 2 (embriões bovinos) em que a bissecação utilizou microlâmina, por em controlada manualmente. De acordo com o delineamento de cada experimento, os embriões, os fragmentos embrionários e/ou as células iPS, foram depositados em micropoços preenchidos com meio KSOMaa (camundongo) ou SOF (gado bovino). Após 24 horas, a taxa de agregação (TA) das estruturas nos micropoços foi avaliada morfologicamente, mediante a detecção de uma única e coesa massa celular ou pela re-expansão e reorganização do blastocisto. Na validação em camundongos, foram utilizados dois hemiblastocistos ou MCI e TE derivados de embriões produzidos in vivo das linhagens Swiss Webster e C57BL/6/EGFP. Três experimentos foram conduzidos para caracterizar: 1) a eficácia da agregação de embriões em estágios pós-compactação; 2) o efeito do aumento de fragmentos embrionários e a utilização de um agente aglutinante biológico (fitohemaglutinina) na agregação; e 3) a exequibilidade da reconstrução do blastocisto pela aproximação entre MCI e fragmento de TE. Na segunda parte do trabalho, foram utilizados embriões bovinos produzidos in vitro em 5 experimentos: 1) utilização de fitohemaglutinina ... / Abstract: There is no report in the literature that trophectoderm cells can be used for aggregation (except in combination with fusion or microinjection techniques) and develop aggregates into a chimeric embryo. We aimed to validate a model to generate chimeric blatocysts using the trophectodermic tissue for aggregation in mice and replicate the validated technique in bovine embryos. We tested two methods of reconstruction in order to aggregate a trophectoderm fragment with either the inner cell mass (ICM) or the induced pluripotent stem (iPS) cells. Embryos were bisected by a blade assisted by micromanipulator, except in experiment 1 and 2 (bovine embryos) in which embryos were bisected by a manually controlled microblade. According to each experimental design, embryos, embryonic fragments and/or iPS cells were deposited in microwells lled with KSOMaa (mice) or SOF (bovine cattle). After 24 h the aggregation rate (AR) was assessed morphologically by the detection of a single, cohesive cell mass or by a re-expanded and reorganized blastocyst. In mice we used two demi-blastocysts or ICM and TE derived from in vivo produced Swiss Webster and C57BL/6/EGFP embryos. Three approaches aimed to characterize: 1) the e ectiveness of aggregation in post-compaction embryos; 2) the e ect on aggregation of increasing embryonic fragments and the use of the cell agglutination agent, phytohemagglutinin-L; and 3) the feasibility of reconstructing blastocysts by culturing ICM and TE fragments in close contact. In the bovine experiment we used in vitro produced embryos in 5 approaches to assess: 1) the effect of phytohemagglutinin-L in the aggregation of post-compaction demi-embryos; 2) blastocyst reconstruction using manually sectioned structures (ICM and TE); 3) microinjection of TE fragments into morula; 4) blastocyst reconstruction using structures (ICM and TE) sectioned with micromanipulator; and 5) production of chimeric ... / Doutor

Orientador: Marinônio Lopes Cornélio / Coorientadora: Agnes Cristina Fett Conte / Banca: Elias Naim Kassis / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Patrícia Simone Leite Vilamaior / Banca: Andreia Borges Scriboni / Resumo: Introdução: A terapia de tecidos e órgãos artificiais tem resultado no aumento da expectativa de vida de milhares de pessoas, sendo que uma a cada cinco com mais de 65 anos já foi beneficiada com tecidos e órgãos gerados in vitro. Assim, torna-se imperativo o desenvolvimento de novas estratégias de desenvolvimento e optimização de biomatrizes e de células tronco, para atender a demanda, que sejam capazes de promover regeneração de tecidos e órgãos, amortização dos custos e uso seguro em nível celular. Neste contexto, as células tronco mesenquimais adiposas (CTMA) tem despertado grande interesse científico. Objetivo: Foi analisado a biocompatibilidade em nível celular e cromossômica/cromatídica da biomatriz de quitosana-colágeno-genipina com CTMA humanas. Métodos: Foram testadas diferentes concentrações de genipina para estabelecimento da matriz, por análise de intumecimento, degradação e grau de reticulação, por espectrofotometria. As CTMA foram obtidas por processamento enzimático do lipoaspirado humano e cultivadas em Petakas (controle) e na biomatriz selecionada após caracterização físico-química, com e sem criopreservação. As CTMA foram caracterizadas quanto a adesão e proliferação por microscopia óptica convencional, contraste de fase e eletrônica de varredura, imunofenotipagem, viabilidade celular com teste de azul de Trypan, estabilidade cromossômica, por técnicas citogenéticas convencionais, potencial neoplásico por teste de Papanicolau e quanto a capacidade de... / Abstract: Introduction: Therapy of artificial tissues and organs has resulted in an increase in the life expectancy of thousands of people, and one in five over 65 years has already benefited from tissues and organs generated in vitro. Thus, it is imperative to develop new strategies for the development and optimization of biomatrices and stem cells to meet demand, which is capable of promoting tissue and organ regeneration, cost amortization and safe use at the cellular level. In this context, adipose mesenchymal stem cells (AMSC) have aroused great scientific interest. Objective: The biocompatibility at the cellular and chromosomal/chromatidic level of chitosan-collagen-genipin biomatrix with human AMSC was analyzed. Methods: Different concentrations of genipin for matrix establishment were tested by the analysis of the number of cells, the degradation, and degree of crosslinking by spectrophotometry. AMSC were obtained by enzymatic processing of human lipoaspirate and cultured in Petakas (control) and in the selected biomatrix after physicochemical characterization, with and without cryopreservation. The AMSC were characterized for adhesion and proliferation by conventional optical microscopy, phase contrast and scanning electron microscopy, immunophenotyping, cell viability with Trypan blue test, chromosomal stability, by conventional cytogenetic techniques, neoplastic potential by Papanicolaou test and for the capacity of cell differentiation in three types of tissues, with a ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Andrigo Barboza de Nardi / Banca: Jorge Luiz Costa Castro / Banca: Wilson Gómez Manrique / Resumo: Tradicionalmente um enxerto é realizado em um leito receptor coberto por tecido de granulação saudável, e na atualidade, as células tronco mesenquimais representam uma excelente alternativa para estimular a cicatrização de feridas agudas e crônicas. Sendo assim, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos de células tronco mesenquimais xenógenas na cicatrização de auto-enxertos cutâneos em leito receptor sem tecido de granulação de coelhos. Foram utilizados 60 coelhos, divididos em três grupos de 20 pacientes. O primeiro grupo (GIL) e o segundo (GIV) receberam tratamento de 2 x106 células tronco, por vias intralesional e intravenosa respetivamente, enquanto o grupo controle (GC) recebeu apenas o auto-enxerto cutâneo. Na avaliação macroscópica, enxertos dos grupos GIL e GIV apresentaram melhor coloração comparado com o grupo controle, no entanto, na avaliação microscópica as variáveis inflamação, reepitelização, necrose e neovascularização não mostraram diferencia significativa entre os três grupos (p>0,05). Conclusão: a reepitelização dos auto-enxertos cutâneos em malha em leito receptor desprovido de tecido de granulação em coelhos (Oryctolagus cuniculus ) provavelmente não precisam de técnica adjuvante para estimular a cicatrização. A versatilidade da malha permite uma aderência estável ao leito receptor, e através das fendas criadas permite a eliminação da secreção inflamatória, evitando assim a presença de seroma e garantindo a nutrição e revascularização do enxer... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Traditionally, a graft is performed in a healthy granulation tissue bed, although nowadays, the mesenchymal stem cells represent an excellent alternative to stimulate wound healing in a recipient bed without a healthy granulation tissue bed. Thus, this study aimed to evaluate the effects of mesenchymal stem cells xenogeneic at the healing of skin autografts in a recipient bed without granulation tissue in rabbits. A total of 60 rabbits were divided into three groups of 20 patients. The first (GIL) and the second group (GIV) were treated with 2x106 intralesional and intravenous stem cells respectively; meanwhile the control group (CG) received only skin autograft. At the macroscopic examination, the grafts GIL and GIV groups showed better color than the control group, however, microscopic evaluation of the variables: inflammation, re-epithelization, necrosis and angiogenese showed no significant difference among the three groups (p>0,05). Conclusion: reepithelialization of meshed skin autografts from recipient bed without granulation tissue in rabbits (Oryctolagus cuniculus) probably does not need an adjuvant technique to stimulate wound healing. The versatility of the mesh allows a stable adherence to the recipient bed, and through the created slits allows the evacuation of inflammatory secretion, avoiding the presence of seroma and providing nutrition and graft revascularization / Mestre

Orientador: Milton Artur Ruiz / Banca: Flavia Cristina Rodrigues Lisoni / Banca: Rubens Camargo Siqueira / Resumo: O transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH) constitui uma importante opção terapêutica para pacientes com doenças onco-hematológicas, autoimunes e alguns tumores sólidos; caracteriza-se pela infusão intravenosa de células progenitoras hematopoéticas com o objetivo de restabelecer a função medular e imunológica. No entanto, esse procedimento requer imunossupressão o que favorece o desenvolvimento de complicações, principalmente infecciosas, as quais frequentemente se manifestam ou se originam na cavidade bucal podendo ser causadora de infecções sistêmicas. O estado de saúde bucal do paciente submetido ao TCTH tem sido considerado como um fator que interfere diretamente no grau de morbimortalidade. A mucosite representa o principal fator de risco para as infecções sistêmicas e está entre as complicações de maior relevância. Uma vez que existe uma relação direta entre inflamação crônica e muitas doenças emergentes, tem se destacado o estudo da melatonina (MEL), um hormônio fabricado pela glândula pineal, que pode ser capaz de proteger não somente a cavidade bucal, mas todo o organismo dos radicais livres produzidos por processos inflamatórios e infecciosos. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e os fatores de risco desencadeadores das infecções odontogênicas, lesões da mucosa oral, estabelecendo um índice de complicações orais (ICO-TCTH) e sua relação com a concentração de melatonina extraída da saliva dos pacientes, doenças de base e tipo de transplante;... / Abstract: Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is an important therapeutic option for patients with onco-hematological, autoimmune and some solid tumors; It is characterized by the intravenous infusion of hematopoietic progenitor cells with the objective of restoring the medullary and immunological function. However, this procedure requires an effect of complications, mainly infectious, how often they manifest or originate in the oral cavity and can be the cause of systemic infections. The state of oral health of patients submitted to HSCT has been considered as a factor that directly interferes with the degree of morbidity and mortality. Mucositis represents the main risk factor for systemic infections and is among the most relevant complications. Since there is a direct relationship between chronic inflammation and many emerging diseases, a melatonin (MEL) is a hormone made by the pineal gland, which may be able to protect not only an oral cavity, but the entire body of free radicals produced by processes Inflammatory and infectious.The objective of this study is to evaluate the prevalence and risk factors of odontogenic infections, lesions of the oral mucosa, to meet the oral complications index (ICO-HSCT) and to relate it to the concentration of melatonin extracted from the patient's saliva, Underlying diseases and type of transplant presenting an oral cavity treatment plan that may interfere with no transplant success; One might advocate this hormone as a prognostic ... / Mestre

Orientador: José Luiz Laus / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Luís Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Banca: João Antônio Tadeu Pigatto / Banca: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Resumo: O omento, tecido gorduroso rico em células tronco mesenquimais, expressa fatores de crescimento, que atuam na regeneração tecidual, tornando-o atrativo para utilização em medicina regenerativa. Não há relatos, todavia, quanto à investigação sobre células do omento na cirurgia regenerativa em oftalmologia. Avaliaram-se os efeitos clínicos e à microscópia do omento com membrana amniótica na reparação da córnea de coelhos submetidos a ceratectomia. Duas modalidades foram avaliadas. Na primeira, o omento foi coberto com membrana amniótica imediatamente à sua implantação na córnea (grupo OM); na segunda, a membrana amniótica foi colonizada por células progenitoras extraídas do omento e transplantadas para a córnea (grupo OMC). Os efeitos clínicos foram avaliados a partir de dados coletados por até 60 dias de pós-operatório. A incidência e a prevalência de quemose foram maiores no grupo OM (p<0,05). O grupo OMC mostrou mais incidência de blefarospasmo (p<0,001). À microscopia de luz, encontrou-se reparação corneal gradativa em ambos os grupos, com reepitelização ao 100 de pós-operatótio. Aos 60 dias da avaliação, todas as córneas estavam reparadas, entretanto, no grupo OMC constatou-se vascularização. Proliferação celular acentuada foi observada com o ki-67, nos estágios finais do processo de reparação de córneas que receberam MA contendo células do omento (grupo OMC). Somente no grupo OMC, a reparação corneal sem tranparência foi alcançada / Abstract: The omentum, a fatty tissue rich in mesenchymal stem cells, expresses growth factors that act in tissue regeneration, making it attractive for use in regenerative medicine. To our knowledge, reports that investigate the use of omentum cells in ophthalmology have yet to be published. The purpose of this study was to assess the clinical and microscopic effects of omentum associated with amniotic membrane on the repair of rabbit cornea submitted to keratectomy. Two methods were evaluated; in the first, the omentum was covered with amniotic membrane immediately following its implantation on the cornea (OM group), while in the second, the amniotic membrane was colonized by omental progenitor cells and transplanted to the cornea (OMC group). Clinical parameters were evaluated from data collected up to 60 days postoperatively. The incidence and prevalence of chemosis were higher in the OM group (p<0.05). The OMC group showed greater incidence of blepharospasm (p<0.001). Under light microscopy, the absence of epithelium in the lesioned area and stromal disorganization were observed in the early postoperative period. After 60 days of evaluation, all the corneas were repaired. Intense cell proliferation was detected with Ki-67, in the final stages of the repair process, where amniotic membrane containing omental progenitor cells was transplanted to the corneas. The use of omentum and its cells, in association with amniotic membrane, favored the repair of the cornea and did not induce complications / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-23Bitstream added on 2014-06-13T19:07:28Z : No. of bitstreams: 1 barrach_rh_me_botfm.pdf: 1289263 bytes, checksum: 490cd4fe7ff6848d99b4260ebbae5f93 (MD5) / A cavidade oral é um local potencial de complicações em pacientes imunossuprimidos podendo ser um importante local de agentes causadores de infecções sistêmicas, o que pode contribuir para a perda do transplante de célulastronco hematopoéticas, ou mesmo para o óbito do paciente. OBJETIVOS: Apresentar um modelo de avaliação para identificação de potenciais riscos das doenças orais em pacientes imunossuprimidos antes e após transplante de célulastronco hematopoéticas. O presente estudo é clínico, prospectivo, com modelo de coorte temporal longitudinal, realizado no período de julho de 2007 a dezembro de 2008 no Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP. Foram incluídos 65 pacientes divididos em 2 grupos de acordo com o tipo de transplante (alogênico e autológo), maiores de 18 anos, de ambos os sexos, portadores de doenças hematológicas malignas ou não, e que se submeteram ao transplante de células-tronco hematopoéticas no período acima citado. Foram feitas 3 avaliações odontológicas: no período pré-transplante (momento 1), uma semana após a infusão das célulastronco (momento 2) e cem dias pós-transplante (momento 3). Os dados de cada momento foram correlacionados de acordo com a pontuação obtida e os indivíduos foram classificados como grau de risco leve, moderado, grave e gravíssimo no momento 1 e graus de toxicidade leve, moderado, grave e gravíssimo nos momentos 2 e 3 para as complicações clínicas da cavidade oral. As alterações patológicas da boca mais frequentes foram as gengivites, pericoronarite de 3º molar e próteses nos três momentos. Porém, nos momentos 2 e 3 a principal causa do aumento da toxicidade associada a imunossupressão foi a mucosite. Mesmo em indivíduos classificados com grau leve, quando tinham mucosite em graus variados o período de internação hospitalar era maior o mesmo ocorrendo para as recidivas e óbitos... / Oral cavity is a potential site for complications in immunosuppressed patients and it can be an important center of causative agents of systemic infections, which can contribute to the loss of hematopoietic stem cell transplantation, or even to patient’s death. To present an assessment model for identifying the potential risks of oral diseases in immunosuppressed patients, before and after the hematopoietic stem cell transplantation. This is a clinical, prospective study with model of longitudinal temporal cohort performed from July/2007 to December/2008, at the Amaral Carvalho Hospital, Jau, São Paulo. The sample comprised 65 patients who were divided into 2 groups according to transplant type (allogenous and autologous), older than 18 years old, both sexes, with or without malignant hematopoietic diseases, and who undergone hematopoietic stem cell transplantation during the aforementioned period. Three dental assessments were executed: at pretransplantation (Time 1), at one week after stem cell infusion (Time 2), and at 100-day post-transplantation (Time 3). Data of each time were correlated according to the score obtained, and the individuals were classified in: mild, moderate, severe, and very severe risk groups at Time 1; and, in mild, moderate, severe and very severe toxicity levels at Time 2 and 3, regarding to clinical complications of oral cavity. The most frequent pathological conditions were: gingivitis, pericoronaritis due to third molar, and presence of prosthesis, at three times. However, at Time 2 and 3, the main cause of the increase of toxicity associated to immunosuppression was mucositis. Even when mild-risk individuals exhibited mucositis at several levels, the hospital stay length was higher, as well as the relapses and deaths. In the identification of oral diseases in patients who will undergo hematopoietic stem cell transplantation, mucositis accounted... (Complete abstract click electronic access below)

A medicina regenerativa é um campo fascinante e tem chamado a atenção, nos últimos anos, pelo crescente esforço multidisciplinar em busca de metodologias adequadas para a reposição de tecidos danificados no corpo humano. Entre as técnicas utilizadas para desenvolver matrizes para o uso em engenharia tecidual está o electrospinning. Essa técnica que permite a produção de nanofibras através do uso de forças electrostáticas e tem sido empregado para a produção de matrizes fibrosas. As células-tronco mesenquimais (CTM) são células-tronco adultas com alta plasticidade e por isto alvo de muitos estudos terapêuticos. O presente trabalho foi dividido em dois capítulos sendo que cada um tratou de um objetivo, como segue: (1) cultivar e diferenciar células-tronco mesenquimais em matrizes de nanofibras de poli(ácido lático-co-glicólico) (PLGA) produzidas através da técnica de electrospinning e investigar o envolvimento de receptores integrina- 1 no processo de adesão em matrizes de PLGA; (2) avaliar a viabilidade celular de células-tronco mesenquimais ou células mononucleares (CMNs) misturadas a uma solução de poli(álcool vinílico) (PVA) e submetidas a produção de fibras por electrospinning. No capítulo I, as CTM foram isoladas de camundongos da linhagem C57BL/6, cultivadas e submetidas a diferenciação condrogênica em matrizes de nanofibras de PLGA produzidas por electrospinning. Análises realizadas 24 horas após a semeadura demonstraram que as CTM eram responsívas e apresentavam morfologia semelhante a de fibroblastos com a presença de fibras de estresse de actina. O bloqueio dos receptores integrina- 1 reduziu (em cerca de 20%) a adesão celular e as observações demonstraram a perda das fibras de estresse de actina. Estes resultados demonstraram a habilidade das nanofibras de PLGA em ativar respostas celulares mediadas por adesão via integrina. No capítulo II foi avaliada a viabilidade de CTM e CMNs após terem sido processadas pelo electrospinning. As CTM foram extraídas da parede de cordão umbilical e as CMNs do sangue de cordão umbilical. Ambas as células foram misturadas a uma solução de PVA 10% e esta suspensão foi utilizada para produzir fibras pelo processo de electrospinning durante 30 minutos utilizando-se uma voltagem de 21 kV. Após o procedimento a viabilidade celular foi mensurada através de contagem celular com exclusão de células mortas por coloração com Trypan Blue. As CTM tiveram a viabilidade reduzida para 19.6%, e as CMNs para 8.38%. Os dados coletados sugerem a necessidade de mais estudos na busca de estratégias de proteção celular durante o electrospinning, uma vez que a elevada perda da viabilidade celular pode estar relacionada à alta viscosidade da solução polimérica, levando a redução do acesso ao meio nutritivo, associada aos efeitos do estresse mecânico e elétrico inerentes do procedimento. Os resultados gerais destes capítulos (1) demonstraram a habilidade das matrizes de nanofibras de PLGA em ativar respostas celulares via receptores integrinas- 1; (2) sugerem que a incorporação de células em matrizes fibrosas durante a produção de fibras através da técnica de electrospinning é um procedimento viável e pode ser utilizado como estratégia para a melhor distribuição celular na matriz formada. Juntamente, estes dados contribuem para o entendimento do comportamento das CTM em matrizes biodegradáveis e biocompatíveis produzidas por electrospinning, as quais podem ser utilizadas como material carreador em tratamentos clínicos envolvendo transplante celular. / Regenerative medicine is an amazing field that has called attention, in the last years, due to the multidisciplinary efforts to find suitable methodologies to regenerate damage tissues. Electrospinning is an important technique used to produce nanofibers and is employed to develop fibrous scaffolds. Mesenchymal stem cells (MSC) are adult stem cells with high plasticity and, for this reason, are widely studied in therapeutic approaches. The present study is composed by two chapters, with different aims, as follow: (1) culture MSC on poly(D, Llactide- co-glycolide) (PLGA) nanofiber scaffolds and induce them to condrogenic differentiation and, analyze the influence of the integrin- 1 receptor in the adhesion of MSC on PLGA scaffolds; (2) analyze the viability of MSC and mononuclear cells (MNCs) mixed to a PVA solution after electrospinning. In the Chapter I, MSCs were isolated from C57BL/6 mice, cultured on PLGA scaffold produced by electrospinning technique and differentiated into chondrogenic lineage. After seeding, MSCs were responsive and become flattened with fibroblast-like morphology demonstrated by the presence of actin stress fibers. Integrin- 1 receptor blockage reduced (about 20%) cell adhesion with loss of actin stress fibers, demonstrating the ability of PLGA nanofiber to trigger integrin receptor-mediated cell adhesion. In the Chapter II, the viability of MSC and MNC after electrospinning were analyzed. MSC were extracted from the wall of the umbilical cord, and MNC from the umbilical cord blood. Cells were resuspended in a solution of poly(vinil alcohol) (PVA) 10% and subjected to electrospinning during 30 minutes under a voltage of 21kV. Cell viability was assessed before and after the procedure by exclusion of dead cells by Trypan Blue staining. After electrospinning the MSC viability reduced to 19.6%, and the MNCs viability to 8.38%. These data suggest the need for more investigations looking for strategies to protect cell from the damages caused by electrospinning, as the loss of viability can be related to the high viscosity of the polymeric solution which reduced the access to nutrients associated to the electric and mechanical stress during electrospinning. The results of both chapters (1) demonstrated the ability of PLGA nanofiber to trigger integrin receptor-mediated cell adhesion; (2) suggested that the cellular incorporation into fibrous scaffolds produced by electrospinning is a viable process and can be used to improve the cellular distribution into scaffolds. The present data contribute to the understanding of MSCs´ behavior on these biodegradable and biocompatible scaffolds that can be used as carriers in treatments involving cell transplantation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-09Bitstream added on 2014-06-13T19:01:25Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_pgg_dr_botfmvz.pdf: 525074 bytes, checksum: 52d948b8418c2241104df84f8dd60b54 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Lesões tendíneas, especialmente do tendão flexor digital superficial dos membros torácicos, são importantes enfermidades que acometem a espécie equina, e apresentam alto índice de recidivas e afastamento da atividade atlética. Os avanços médicos e pesquisas relacionadas têm mostrado crescente interesse na utilização da terapia celular em tratamentos dessas lesões que apresentam uma cicatrização lenta ou ineficaz. Existem dúvidas quanto à persistência e comportamento das células tronco mesenquimais (CTM) implantadas no local da lesão e de sua migração a outros locais inflamados. Sendo assim, este estudo teve como objetivo identificar CTM marcadas com nanocristais antes e após o implante em lesões experimentais do tendão flexor digital superficial (TFDS) de eqüinos, observando a possibilidade de migração das CTM para outro foco de lesão realizado no membro contralateral do animal. Para isso, foram utilizados cinco equinos, submetidos à indução de lesões no TFDS em ambos os membros torácicos e, após sete dias, foram implantadas as CTM autólogas marcadas com nanocristais Qtracker 655 em um dos membros do animal. Sete dias após o implante, foram realizadas biópsias dos tendões, congelados em nitrogênio, sendo posteriormente realizados cortes histológicos para visualização em microscópio de fluorescência. Paralelamente, células marcadas com nanocristal foram mantidas em cultivo por 24 horas e, após este período, avaliou-se a sua viabilidade. Nas lesões que receberam células marcadas, foram visualizados sinais fluorescentes nas amostras, enquanto estes eram ausentes nas lesões dos membros contralaterais. As CTM marcadas e injetadas no tecido tendíneo mantiveram sua fluorescência sete dias após o implante in vivo, não sendo observado migração para o membro contralateral. As células mantiveram sua viabilidade após 24 horas de incubação com o marcador Qtracker / Tendon lesions, especially of the superficial digital flexor tendon (SDFT) on forelimb, are important injuries in equine, because have high reinjury incidence and can cause retirement of athletic activities. Medical researches have shown growing interest on using stem cell therapy in the treatment of lesion with slow or ineffective repair. There are doubts regarding the persistency of the mesenchymal stem cells (MSC) implanted on the lesion site and of its migration to other injury sites. This study aims to identify marked MSC with nanoparticles quantum dots (QD) before and after the implant in equine induced tendinitis and to verify if there is a migration to another injury site on the contralateral. Five equines have a SDFT tendinitis induced on both forelimb and, after seven days, have seeded autologous MSC, marked with quantum dots Qtracker 655 in one of the limbs. Seven days after the implant, biopsies of the tendons were conducted, in which histological cuts were made for visualization in fluorescence microscope. The viability of the cells marked with nanoparticles and kept in cultivation was evaluated after 24 hours of incubation. Fluorescent signs were visualized on samples of the lesions that received marked cells, while they were absent on the lesions of the contralaterals. The marked MSCs kept their fluorescent emission, making it possible to identify them after seven days of in vivo implant, not occurring migration to the opposite limb. The cells maintained their viability in cultivation after 24 hours of incubation with the Qtracker marker