Introdução - A urbanização desencadeia inúmeros transtornos, como a disseminação de artrópodes e, conseqüentemente, de doenças veiculadas pelos mesmos. As formigas são muito adaptáveis e se beneficiam com a convivência humana. Nos hospitais, elas podem ser vetores mecânicos de inúmeras bactérias, e a diversidade de espécies encontradas nestes ambientes, causam preocupação pelo risco potencial à saúde pública. O aumento das infecções hospitalares envolvendo micobactérias ambientais, com surtos no Brasil entre 1998 a 2009 em 23 estados alarmou os órgãos e profissionais de saúde pública. Objetivos - Avaliar o potencial de formigas como vetores de micobactérias em um hospital especializado no atendimento de doentes com tuberculose. Métodos - Foram realizadas seis coletas de formigas em diferentes áreas do hospital no período de 2009 a 2010, que foram semeadas em meios de cultura de Löwenstein-Jensen e de Stonebrink para isolamento de micobactérias. As culturas sugestivas foram submetidas à coloração de Ziehl-Neelsen para bacilos álcool-ácido resistentes e identificação por métodos moleculares (PRA para o gene hsp65 com o par de primers TB11 e TB12 gênero-específico e sequenciamento genético do DNA). Resultados - Do total de 247 amostras de formigas coletadas e semeadas, 70 por cento das formigas pertenciam à espécie Tapinoma melanocephalum, 25 por cento a espécie Dorymyrmex sp., 3 por cento a espécie Camponotus sp. e 2 por cento a espécie Pheidole sp., dados similares foram observados anteriormente em pesquisas realizadas em hospitais. Quinze amostras apresentaram bacilos álcool-ácido resistentes de crescimento rápido. Nos métodos moleculares, doze pertenciam ao Gênero Mycobacterium. No PRA-hsp 65, e no sequenciamento genético do DNA, quatro amostras foram identificadas quanto à espécie (duas Mycobacterium chelonae, uma Mycobacterium parafortuitum e uma Mycobacterium murale), quatro micobactérias com resultados idênticos no PRA e não identificadas no sequenciamento foram sugestivas de uma nova espécie, e duas amostras não foram identificadas. Mycobacterium chelonae isolada nesta pesquisa foi previamente descrita como agente causador de abscessos em humanos. Conclusão - Estes dados confirmam a presença de micobactérias veiculadas por formigas no ambiente hospitalar, representando um potencial vetor mecânico destas para pacientes e profissionais de saúde, principalmente em infecções nosocomiais / Introduction- Urbanization triggers numerous disorders, such as the dissemination of arthropods and, consequently, dissemination of diseases transmitted by them. Some ant species are very adaptable to the human environment. At hospitals, once they are mechanical vectors of bacteria, and the diversity of species found in these environments, they can represent a potential risk to public health. The increase of nosocomial infections involving environmental mycobacteria, with outbreaks in Brazil from 1998 to 2009 in 23 states called the interest of health professionals and health agencies. Purpose - Evaluate the potential of ants as vectors of mycobacteria in a hospital specialized in the care of patients with tuberculosis. Methods Samples of ants were collected from different areas of the hospital from 2009 to 2010, and workers were inoculated in Löwenstein-Jensen and Stonebrink media for mycobacteria isolation. The suggestive cultures were subjected to Ziehl-Neelsen stain for acid-fast bacilli and identification were performed by molecular methods (PRA for the hsp65 gene with the pair of primers TB11 - TB12 and genetic sequencing). Results - The total of 247 samples of ants collected and sown, 70 per cent belonged to species of ants Tapinoma melanochepalum, 25 per cent Dorymyrmex sp.,3 per cent Camponotus sp. and 2 per cent Pheidole sp., data similar with previous studies conducted in hospitals. Fifteen fast-growing mycobacteria were isolated. In molecular methods, twelve belonged to the genus Mycobacterium. In PRA-hsp65, and the genome sequencing of DNA, four samples were identified at species level (two Mycobacterium chelonae, one Mycobacterium parafortuitum and one Mycobacterium murale), four mycobacteria with similar results in the PRA and not identified in the sequencing, suggestive of a new species and two unidentified samples. M. chelonae was previously reported as causative agent of abscess in humans. Conclusions - These results confirm the presence of mycobacteria carried by ants in the hospital, representing a potential mechanical vector for these patients and healthcare professionals, particularly in nosocomial infections

A leprose dos citros, principal doença viral que afeta a citricultura no Brasil, é causada pelo Citrus leprosis virus C (CiLV-C, gênero Cilevirus). CiLV-C possui um genoma bipartido de RNA de fita simples, polaridade positiva, que codifica para seis proteínas. O vírus é transmitido de planta a planta por ácaros Brevipalpus phoenicis e pode infectar mais de 40 espécies vegetais, produzindo lesões localizadas cloróticas ou necróticas ao redor do sítio de inoculação pelo ácaro. Invariavelmente, o patógeno não realiza movimento sistêmico em nenhuma de suas hospedeiras conhecidas. Para se revelar os mecanismos moleculares que determinam a atípica interação vírus/ácaro/planta, as atividades das principais vias de defesa foram avaliadas durante a infestação de A. thaliana com ácaros avirulíferos e virulíferos para o CiLV-C. A expressão de 19 genes marcadores associados às respostas de defesa do hospedeiro foi verificada mediante PCR quantitativo (RT-qPCR) em um experimento de time course (6, 12 e 24 horas após a infestação, e no momento do aparecimento dos sintomas de leprose). As análises demostraram que os genes envolvidos na via do ácido salicílico (SA) foram induzidos durante a interação com o ácaro e com o vírus. O perfil de expressão dos genes desta via durante a infestação com ácaros virulíferos foi similar ao observado com ácaros avirulíferos, porém a resposta da planta a ambos os estímulos foi mais intensa. Ademais, ambas as vias do ácido jasmônico e etileno foram ativadas durante a interação com o ácaro e reprimidas ao longo da infecção com o vírus, sugerindo uma interferência antagonística mediada pela via do SA. O mecanismo de silenciamento de RNA foi regulado de maneira diferencial em resposta à interação com ácaros avirulíferos e virulíferos. Diante da infecção viral, em tempos iniciais da infecção, as plantas responderam com a ativação de uma primeira linha de defesa mediada por AGO1, e depois alternaram para uma segunda linha de defesa mediada por AGO2. Os resultados indicam a ativação de um processo multifatorial em resposta ao CiLV-C e ao ácaro B. phoenicis em A. thaliana. / Citrus leprosis, the main viral disease affecting citrus orchards in Brazil, is caused by Citrus leprosis virus C (CiLV-C, genus Cilevirus). CiLV-C has a bipartite genome of singled stranded positive RNA, which encodes six proteins. CiLV-C is plant-to-plant transmitted by Brevipalpus phoenicis mites and can infect more than 40 plant species, invariably producing localized chlorotic or necrotic lesions around the site of feeding of the viruliferous mites. Viral long distance movement in its hosts is not accomplished. To unveil the mechanisms determining the unique characteristic of the virus/mite/plant interaction, activities of main plant defense pathways were evaluated during aviruliferous and CiLV-C viruliferous mite infestation in Arabidopsis thaliana. The expression of 19 marker genes involved in defense responses along a time course experiment (6, 12 and 24 hours after infestation, and after appearance of leprosis symptoms) was assessed by RT-qPCR. Analyses showed that genes involved in the salicylic acid (SA) pathway were up-regulated during plant interaction with mite and virus. The SA pathway expression profile observed at the infestation by viruliferous mites resembled those observed for the aviruliferous mites, but plant response to both stimuli was stronger. Both the jasmonic acid and ethylene pathways were activated during mite/plant interaction and were repressed at the course of infection with CiLV-C, suggesting an antagonistic effect mediated by the activated SA pathway. Gene silencing mechanism was differentially regulated in response to both aviruliferous and viruliferous mites. Upon viral infection, plants responded with the activation of an AGO1-mediated first defense line, in early times of infection; and then switched to an AGO2-mediated defense. Results indicate the activation of a multifactorial process in response to CiLV-C and B. phoenicis mites in A. thaliana.

Submitted by Emerson Leão Júnior null (emerson.leaojr@gmail.com) on 2017-12-05T18:07:16Z No. of bitstreams: 1 leao_ej_me_prud.pdf: 4186679 bytes, checksum: ee186b23411343c3e2d782d622226699 (MD5) / Approved for entry into archive by ALESSANDRA KUBA OSHIRO null (alessandra@fct.unesp.br) on 2017-12-06T10:52:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 leaojunior_e_me_prud.pdf: 4186679 bytes, checksum: ee186b23411343c3e2d782d622226699 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-06T10:52:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leaojunior_e_me_prud.pdf: 4186679 bytes, checksum: ee186b23411343c3e2d782d622226699 (MD5) Previous issue date: 2017-04-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Considerando o cenário durante a crise hídrica de 2014 e a situação crítica dos reservatórios do sistema Cantareira no estado de São Paulo, este estudo realizado no reservatório Jaguari-Jacareí, consistiu na extração de informações a partir de imagens multiespectrais e análise da qualidade da informação relacionada com a acurácia no cálculo do volume de água do reservatório. Inicialmente, a superfície do espelho d’água foi obtida pela classificação da cobertura da terra a partir de imagens multiespectrais RapidEye tomadas antes e durante a crise hídrica (2013 e 2014, respectivamente), utilizando duas abordagens distintas: classificação orientada a objeto (Object-based Image Analysis - OBIA) e classificação baseada em pixel (Support Vector Machine – SVM). A acurácia do usuário por classe permitiu expressar o erro para detectar a superfície do espelho d’água para cada abordagem de classificação de 2013 e 2014. O segundo componente da estimação do volume foi a representação do relevo submerso, que considerou duas fontes de dados na construção do modelo numérico do terreno (MNT): dados topográficos provenientes de levantamento batimétrico disponibilizado pela Sabesp e o modelo de superfície AW3D30 (ALOS World 3D 30m mesh), para complementar a informação não disponível além da cota 830,13 metros. A comparação entre as duas abordagens de classificação dos tipos de cobertura da terra do entorno do reservatório Jaguari-Jacareí mostrou que SVM resultou em indicadores de acurácia ligeiramente superiores à OBIA, para os anos de 2013 e 2014. Em relação à estimação de volume do reservatório, incorporando a informação do nível de água divulgado pela Sabesp, a abordagem SVM apresentou menor discrepância relativa do que OBIA. Apesar disso, a qualidade da informação produzida na estimação de volume, resultante da propagação da variância associada aos dados envolvidos no processo, ambas as abordagens produziram valores similares de incerteza, mas com uma sutil superioridade de OBIA, para alguns dos cenários avaliados. No geral, os métodos de classificação utilizados nesta dissertação produziram informação acurada e adequada para o monitoramento de recursos hídricos e indicou que a abordagem SVM teve um desempenho sutilmente superior na classificação dos tipos de cobertura da terra, na estimação do volume e em alguns dos cenários considerados na propagação da incerteza. / This study aims to extract information from multispectral images and to analyse the information quality in the water volume estimation of Jaguari-Jacareí reservoir. The presented study of changes in the volume of the Jaguari-Jacareí reservoir was motivated by the critical situation of the reservoirs from Cantareira System in São Paulo State caused by water crisis in 2014. Reservoir area was extracted from RapidEye multispectral images acquired before and during the water crisis (2013 and 2014, respectively) through land cover classification. Firstly, the image classification was carried out in two distinct approaches: object-based (Object-based Image Analysis - OBIA) and pixel-based (Support Vector Machine - SVM) method. The classifications quality was evaluated through thematic accuracy, in which for every technique the user accuracy allowed to express the error for the class representing the water in 2013 and 2014. Secondly, we estimated the volume of the reservoir’s water body, using the numerical terrain model generated from two additional data sources: topographic data from a bathymetric survey, available from Sabesp, and the elevation model AW3D30 (to complement the information in the area where data from Sabesp was not available). When compare the two classification techniques, it was found that in the image classification, SVM performance slightly overcame the OBIA classification technique for 2013 and 2014. In the volume calculation considering the water level estimated from the generated DTM, the result obtained by SVM approach was better in 2013, whereas OBIA approach was more accurate in 2014. Considering the quality of the information produced in the volume estimation, both approaches presented similar values of uncertainty, with the OBIA method slightly less uncertain than SVM. In conclusion, the classification methods used in this dissertation produced accurate information to monitor water resource, but SVM had a subtly superior performance in the classification of land cover types, volume estimation and some of the scenarios considered in the propagation of uncertainty.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-08-27T00:29:23Z No. of bitstreams: 1 MoizesDaSilvaMelo_DISSERT.pdf: 1403747 bytes, checksum: d910e8743f2cf3fa46d99902729b8c73 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-09-02T20:06:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MoizesDaSilvaMelo_DISSERT.pdf: 1403747 bytes, checksum: d910e8743f2cf3fa46d99902729b8c73 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T20:06:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MoizesDaSilvaMelo_DISSERT.pdf: 1403747 bytes, checksum: d910e8743f2cf3fa46d99902729b8c73 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A alta variabilidade de um processo est? diretamente relacionada com a m? qualidade do mesmo, portanto, reduzi-la ? a maneira de melhorar o processo. Os m?todos estat?sticos est?o inclu?dos ao planejamento de melhoria de processos, dentre os quais os gr?ficos de controle s?o o mais eficientes e utilizados. Esta disserta??o prop?e dois novos gr?ficos de controle para monitorar um vetor de m?dias de um processo bivariado. O primeiro, chamado de new npxy, emprega um gr?fico por atributos. O procedimento consiste em inspecionar e classificar, atrav?s dos limites discriminantes, cada unidade da amostra como aprovada ou reprovada. Os limites discriminantes s?o ajustados de tal forma que tem-se uma fra??o especificada de unidades reprovadas quando o processo est? sob controle. Em seguida o n?mero de unidades reprovadas ? plotado no gr?fico, e caso seja maior que o limite de controle, o processo ? parado para ajuste. O segundo gr?fico utiliza os gr?ficos new npxy e T2. Este procedimento consiste em dividir uma amostra de tamanho $n$ em duas partes (n1 e n2), determinadas por um processo de otimiza??o. As unidades da primeira sub-amostra s?o avaliadas por atributos e plotadas em um gr?fico de controle new npxy. Caso seja detectada a presen?a de alguma causa especial, inspeciona-se a sub-amostra de tamanho n2 por vari?veis por meio do gr?fico T2. O procedimento ? interrompido para o ajuste se a presen?a de alguma causa especial for detectada em ambos gr?ficos de controle. A possibilidade de n?o inspecionar todos os itens da amostra pode promover uma redu??o tanto no custo quanto no tempo de inspe??o. A an?lise de desempenho foi realizada comparando o n?mero m?dio de amostras at? o alarme verdadeiro (NMA1). Verificou-se que os gr?ficos propostos apresentam desempenho satisfat?rio e s?o concorrentes com o gr?fico T2. Os resultados foram obtidos com o aux?lio do software estat?stico R.

This thesis presents a new model to protein function prediction using support vector machines, a machine learning approach trained using structural parameters calculated from protein tertiary structure. The model is different from the others paradigms because it is not necessary to search for similarities against the others known proteins in public databases by alignments. In this way, the model is able to associate functional relationships among proteins with no similarities and it could be used when all other methods fail or when the user don t want to use the concept of similarity in function predictions. The proof that the model is valid was accomplished analyzing its performance with unknown proteins, i.e proteins not used in the training set. The validation approach used a set of binding proteins. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / Este trabalho apresenta um novo modelo capaz de prever a função de proteínas utilizando máquinas de vetor de suporte, um método de aprendizagem de máquina treinado usando parâmetros estruturais calculados a partir da conformação espacial da própria proteína. O modelo difere do paradigma comum de predição por não ser necessário calcular similaridades por meio de alinhamentos entre a proteína que se deseja prever a função e as proteínas de função conhecida presentes nos bancos de dados públicos. Dessa forma, o modelo é capaz de associar função às proteínas que não possuem qualquer semelhança com proteínas conhecidas, podendo ser usado quando todos os outros métodos falham ou quando não se deseja utilizar o conceito de similaridade na predição da função. A justificativa de que o modelo é válido foi realizada analisando sua performance ao prever funções de proteínas desconhecidas, proteínas não usadas no treinamento, utilizando como estudo de caso um conjunto de proteínas de ligação.

Submitted by Flávio Tomimori Muto (tomi_muto@yahoo.com) on 2015-08-26T21:10:36Z No. of bitstreams: 1 Flavio Muto Dissertação MPFE _ago15.pdf: 591570 bytes, checksum: 378e72c94583096ec3b89234270a9ee8 (MD5) / Approved for entry into archive by Renata de Souza Nascimento (renata.souza@fgv.br) on 2015-08-26T22:27:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Flavio Muto Dissertação MPFE _ago15.pdf: 591570 bytes, checksum: 378e72c94583096ec3b89234270a9ee8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-27T13:13:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavio Muto Dissertação MPFE _ago15.pdf: 591570 bytes, checksum: 378e72c94583096ec3b89234270a9ee8 (MD5) Previous issue date: 2015-08-04 / The unemployment rate in Brazil has suffered significant reduction from the beginning of the twenty-first century to end of 2014. However, this significant reduction was not accompanied by the expected economic growth. Thus, it appears that although the unemployment rate has been reduced, people were not necessarily working or producing. This study will try to understand the factors that influenced this low unemployment trend by influencing the labor force and the number of employees hired in the formal market, which will approach the supply and the demand for labor. In other words, it intends to check the variables that have influence in a possible reduction of labor supply, as well as an increased demand for labor, that resulted in a reduction in the unemployment rate. We will consider income, transfer, education and economic growth variables in the analysis. Based on a vector error correction model (VEC) it is intended to identify variables that actually affect the outlook of unemployment. / A taxa de desemprego no Brasil sofreu redução significativa do começo do século XXI até o fim do ano de 2014. No entanto, esta redução significativa não foi acompanhada do esperado crescimento econômico disposto na teoria. Desta forma, constata-se que embora a taxa de desemprego tenha se reduzido, não necessariamente as pessoas estavam trabalhando e produzindo. Procurará se entender os fatores que influenciaram esta trajetória de redução da taxa de desemprego por meio de influência na PEA e no número de admissões de empregados, que aproximaremos à oferta e à demanda por mão de obra. Ou seja, pretende-se verificar as variáveis que influenciaram uma possível redução da oferta de trabalho, assim como uma maior demanda por trabalho, resultantes em uma redução da taxa de desemprego. Serão consideradas variáveis de renda, de transferência de renda, de educação e de crescimento econômico na análise das influências da baixa taxa de desemprego. Com base em um modelo vetor de correção de erros (VEC) pretende-se identificar quais variáveis efetivamente afetaram o panorama do desemprego.

Submitted by Ricardo Barão (ricardorbarao@gmail.com) on 2015-10-22T17:20:08Z No. of bitstreams: 1 Ricardo Barão - Thesis - Br.pdf: 1029409 bytes, checksum: c798d4c5b758b979c5d388783dbf989a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Luiza Holme (ana.holme@fgv.br) on 2015-10-22T17:32:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Ricardo Barão - Thesis - Br.pdf: 1029409 bytes, checksum: c798d4c5b758b979c5d388783dbf989a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-23T11:42:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo Barão - Thesis - Br.pdf: 1029409 bytes, checksum: c798d4c5b758b979c5d388783dbf989a (MD5) Previous issue date: 2015 / Este trabalho tem como objectivo compreender de que forma os investidores veem as energias renováveis: se as veem como parte do sector tecnológico, à espera de novos desenvolvimentos, ou como uma alternativa aos métodos existentes de produção de energia. Para responder a esta questão, foi desenvolvido um modelo de vectores autoregressivos com quatro variáveis de forma a se poder aplicar um Granger causality test e Impulse Response function. Os resultados sugerem que para o período de 2002-2007 à escala global ambas as hipóteses se confirmam, porém de 2009-2014 os resultados sugerem que os investidores não reconhecem as energias renováveis como um ramo do sector tecnológico, neste período. Para além disso, durante o período de 2009-2014, e quando comparados investidores Americanos com Europeus, os resultados sugerem que apenas o último identifica as energias renováveis como uma fonte viável para a produção energética. / This work aimed to understand the investor perception on clean energy: if it is seen as part of the technology sector, awaiting new developments, or as an alternative to the existing energy production methods. To answer this question, a four variable vector autoregression model was developed so that a Granger causality test and Impulse response function could be applied. The results suggest that while both hypotheses were confirmed worldwide for the period 2002-2007, from 2009 to 2014 results suggest that investors do not recognize the field of clean energy as part of the technology sector. Moreover, during the period that ranges from 2009 to 2014, and when comparing the American investor with the European investor, only the latter identifies renewable energy as a viable source of energy production.

The Brazilian social protection has accentuated its importance among the lower classes of society. These individuals see the INSS with only source of income during old age or in case of an accident during your life. An analysis of macroeconomic indicators and rates of occupational factors that are linked to social security and tax collection, issue and balance are important in building a policy that helps in decision making. This study estimates the relationship between macroeconomic variables and financial indicators with the Occupational Social Security, said revenues, and balance pension issue. The data used represent monthly rates available on government websites, for the period March 2002 to December 2009. For this purpose, we use unit root tests and Johansen cointegration, Granger causality analysis, estimation and analysis of the model vector error correction (VEC), estimation of impulse response function and the decomposition of the variance of errors prediction. The results indicate that changes in long-term indicators and the collection of social security issue is related to the same variables and coefficients of adjustment to imbalances in the short term are low, that is, slowly tend to balance in the long run. Regarding the pension balance different variables that were found to show long-term relationship with this variable, but also the long-term equilibrium occurs slowly at times. After the construction of error correction models found for the variables under study, one can say that the results showed important inter-relationships between variables and that are consistent with the literature. These results show the behavior of financial indicators of the Brazilian social security system in relation to other variables / A proteção social no Brasil tem sua importância acentuada entre as classes menos favorecidas da sociedade. Os indivíduos pertencentes a elas vêem no Instituto Nacional do Seguro Social a única fonte de renda durante a velhice ou em caso de algum acidente durante sua vida. Uma análise dos indicadores macroeconômicos e das taxas ocupacionais que estejam interligados aos fatores previdenciários como arrecadação, emissão e saldo são relevantes na construção de uma política que ajude na tomada de decisões dos gestores. Esta pesquisa tem por objetivo estimar relações empíricas existentes entre as variáveis macroeconômicas e ocupacionais com os indicadores financeiros da Previdência Social, ditos arrecadação, emissão e saldo previdenciário. Os dados empregados correspondem a índices mensais disponíveis nos sites oficiais para o período de março de 2002 a dezembro de 2009. Para tal, utilizaram-se as métricas e análises de testes hipóteses de raiz unitária e de cointegração de Johansen, além do teste de análise da causalidade de Granger, a estimação e análise do modelo vetorial de correção de erro (VEC), a estimação da função impulso-resposta, além da decomposição da variância dos erros de previsão. Os resultados indicam que as variações de longo prazo para os indicadores da arrecadação e da emissão previdenciária são relacionadas às mesmas variáveis, e os coeficientes de ajuste a desequilíbrios de curto prazo são baixos, isto é, tendem lentamente ao equilíbrio no longo prazo. Em relação ao saldo previdenciário, foram encontradas variáveis diferentes que se mostram relacionadas, em longo prazo, com essa variável, mas o equilíbrio, também de longo prazo, se dá de forma lenta nos períodos. Após a construção dos modelos de correção de erros encontrados para as variáveis em estudo, pode-se dizer que os resultados mostraram importantes interrelações entre as variáveis estudadas, concordando com a literatura em questão.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-05Bitstream added on 2014-06-13T20:26:13Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_fs_dr_jabo.pdf: 3109118 bytes, checksum: 5a4b81536e1b9bd9d62a0e42796b675b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O fator de transcrição Oct-4 é bem conservado entre as espécies e é conhecido por ser expresso em embriões e células-tronco embrionárias (CTE), sendo um importante marcador da pluripotência. Recentemente, foi relatado que a combinação de Oct-4 com três outros fatores de transcrição Klf-4, c-Myc e Sox2 foram capazes de reprogramar células somáticas a um estado indiferenciado pluripotente, chamadas células-tronco pluripotentes induzidas (“células iPS”), as quais apresentam várias das mesmas propriedades das CTE incluindo a pluripotência, auto-renovação e proliferação. O objetivo desse estudo foi avaliar a funcionalidade do promotor Oct-4 de eqüino em CTE de murinos. Três vetores plasmidiais expressando GFP (“green fluorescent protein”) sob o controle do promotor Oct-4 de equinos, camundongo e quatro vetores lentivirais, também contendo o gene reporter GFP e os promotores Oct-4 de equinos, camundongo e humanos, pLZ2-ecOCT-EGFP (meq) (sequência equivalente de camundongos), pLZ2-ecOCT-EGFP (heq) (sequência equivalente de humanos), pLZ2-mOCT-EGFP e pLZ2-hOCT-EGFP, respectivamente, foram construídos. Todos os vetores também contêm um sítio de resistência à blasticidina que permite a seleção das células estáveis e das células transduzidas. Essas construções plasmidiais foram verificadas se funcionavam eficientemente, bem como o efeito do promotor Oct-4 em transfectar transientes e estáveis CTE. As construções com promotor Oct-4 de camundongo, humano e eqüino (sequência análoga à de camundongo) produziram somente 6% de células GFP positivas com intensidade de fluorescência (IF) >1000 pela análise em citômetro de fluxo, enquanto que o plasmídeo contendo o promotor Oct-4 de eqüino (sequência equivalente à de humanos) produziu menos células GFP positivas (>3%) com IF >1000, quando... / The pluripotency transcription factor Oct-4 is well conserved among species and is known to be expressed in embryos and embryonic stem (ES) cells; it is being an important pluripotency marker. It was recently demonstrated that the combination of Oct-4 with three other factors Klf-4, c-myc and Sox2 were able to reprogram somatic cells to a pluripotent and undifferentiated state. These cells known as induced pluripotent stem (iPS) cells share several properties with ES cells including self-renewal, proliferation and pluripotency. The aim of this study was to assess the functionality of the horse Oct-4 promoter in mouse ES cells. Three plasmids vectors expressing GFP (green fluorescent protein) under the control of the horse, mouse and four lentivirus vectors also containing reporter gene GFP and horse, mouse and human promoters, pLZ2-ecOCT-EGFP (mouse sequence equivalent), pLZ2-ecOCT-EGFP (human sequence equivalent), pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP, respectively, were built. All these vectors also contain a blasticidin resistance cassette to allow selection of transfected stable cells and transduced cells. Afterwards, to assess the functionality of the Oct-4 promoter all plasmids were tranfected the into transient and stable mouse ES cells. Constructs with mouse, human and horse (mouse analog sequence) Oct-4 promoter produced only 6% GFP positive cells with fluorescence intensity (FI)>1000 by 20 FACs assay, while plasmid horse (human analog sequence) Oct-4 promoter produced less GFP positive cells (>3%) with FI>1000, when compared with the positive control and among groups. However, GFP expression was not present in stable cells, whereas there were Blasticidin-resistant colonies-forming from 6 days post-transfection. To optimize the system in mouse ES cells, pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP lentivectors, were tested as controls. It was used HIV-1-derived... (Complete abstract click electronic access below)

Da interação da actina com a miosina resulta a contração muscular. Esta interação é controlada pela concentração de íons cálcio, que atuam sobre um sistema regulatório associado ao filamento de actina. O sistema regulatório é composto de uma molécula de tropomiosina e um complexo protéico composto de três polipeptídeos chamado troponina. Uma das subunidades, troponina C, e o receptor de ions cálcio; outra, troponina T, liga-se à tropomiosina; e a terceira, troponina I, é a responsável pela inibição da atividade ATPásica da actomiosina. Esta dissertação descreve o desenvolvimento do processo de expressão da troponina I em bactéria, sua purificação e caracterização. Partindo de um cDNA de troponina I músculo esquelético de galinha, procedemos à construção de um vetor de expressão da proteína em E.coli com o sistema pET. Inicialmente construímos um vetor de expressão capaz de produzir a troponina I fundida a 18 aminoácidos. A proteína foi purificada e caracterizada, comportando-se de forma semelhante à troponina I selvagem. Numa segunda etapa, foram feitas mutações sítio-dirigidas para a construção de um novo sítio de restrição que possibilitou construir um vetor de expressão da troponina I a partir de sua metionina inicial. Entretanto não foi obtida expressão com esta construção. Para solucionar o problema, foram feitas novas mutações que alteraram os codons AGG presentes nos 25 primeiros codons do gene da proteína por codons CGT, sem alterar o aminoácido codificado. Nesta construção final foi obtida a expressão da proteína sem fusão, que purificada e caracterizada, comporta-se de modo idêntico à troponina I selvagem. / Muscle contraction results from the interaction of myosin with actin and this interaction is controlled by the calcium ion concentration which acts on the regulatory system associated with the actin filaments. This regulatory system comprises one tropomyosin molecule and a complex composed of three polypeptide subunits. One of this subunits, troponin C binds calcium ions; another, troponin T, binds to tropomyosin while the third, troponin I, inhibits the ATPase activity of actomyosin. This dissertation describes the development of the methodology to express troponin I in bacteria and its subsequent purification and characterization. Starting with a troponin I cDNA from chicken skeletal muscle, a pET expression vector was constructed. The initial vector resulted the expression of a troponin I fusion protein having an additional 18 amino acids. This protein was purified and characterized and found to behave like wild type troponin I. Subsequently, employing site-directed mutagenesis, a new vector was made which allowed the expression of the protein starting at its initial methionine codon and lacking the extra amino acids. However, no expression was achieved using this vector and, to circumvent this, further mutations were introduced in the first 25 codons which substituted AGG for CGT without altering the amino acid sequence. This final construct permitted the expression of a non fusion troponin I which, after purification and characterization, was found to behave identically to the wild type protein.