Sibiromycin is produced by actinomycetes of Streptosporangium sibiricum and structurally belongs to family of pyrrolo-1,4-benzodiazepines. Sibiromycin is characterized by antibacterial and especially antitumor activity but due to its proved cardiotoxicity it cannot be used. The following research of possible therapeutic sibiromycin utilization is concerned on new nontoxic derivatives produced by genetic manipulated strains of S. sibiricum. For this purpose a new routine chromatographic UPLC-UV method with analyte preconcentration was developed and partially validated. A fermentation broth was extracted by solid phase extraction (SPE) on OASIS MCX columns with the sorbent based on a cation-exchange. Eluted extract was evaporated, reconstituted in methanol and loaded onto UPLC BEH C18 column and analyzed under gradient mode with mobile phases of methanol (A) and trifluoroacetic acid (B). Detection limit of the method was determined as 40 ng/ml, the recovery was 74.75 % and its reproducibility expressed as RSD was 5.18 %. The method was applied to comparison of sibiromycin production by S. sibiricum on 13 different fermentation media. It was found, that a composition of fermentation media influences not only the sibiromycin production but also a synthesis of sibiromycin nature derivatives, which were...

As elevadas taxas de colesterol plasmático representam um grande risco à saúde, uma vez que podem causar doenças cardiovasculares. Para o tratamento e prevenção da dislipidemia são utilizados medicamentos reguladores do colesterol, como as estatinas. Embora eficazes e extensamente utilizados, esses fármacos apresentam efeitos adversos se administrados na dosagem errada. Assim, faz-se necessário o desenvolvimento de um método de monitorização terapêutica a fim de se ajustar a concentração desses compostos no sangue. Este trabalho visa o desenvolvimento de um método para análise de pravastatina (PRA), atorvastatina (AT), fluvastatina (FLV) e sinvastatina (SV) em plasma humano usando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS). Na etapa de preparo de amostras, de forma inédita, utilizou-se a técnica microextração por sorvente empacotado (MEPS) para a análise de plasma humano contendo quatro estatinas. Para a otimização das condições de extração avaliaram-se, por experimentos univariados, parâmetros como fase extratora, composição do solvente de eluição e de lavagem. Outros fatores como volume de amostra, ciclos de amostragem, ciclos de eluição e etapas de eluição foram avaliados empregando-se planejamento experimental multivariado. A extração foi realizada utilizando-se uma fase estacionária C18 Chromabond como sorvente. O método MEPS-LC-MS/MS desenvolvido foi validado baseando-se nas recomendações da agência nacional de vigilância sanitária (ANVISA) e apresentou linearidade, seletividade, precisão, exatidão e recuperação adequadas para as estatinas, excetuando-se para a sinvastatina. A faixa de linearidade obtida foi de 10-200 ng mL-1 (FLV e AT) e 20-200 ng mL-1 (PRA). Os limites de quantificação obtidos foram da ordem de 10 ng mL-1 (AT e FLV) e 20 ng mL-1 (PRA). Desta forma o método desenvolvido poderá ser utilizado para a determinação dos níveis de pravastatina, fluvastatina e atorvastatina em amostras de plasma humano. / Elevated plasma cholesterol level is a risk factor for coronary diseases, which are the most deadly sickness according to the World Health Organization (WHO). In order to fight the hypercholesterolemia in patients, statins are a well-established class of drugs to be prescribed. Even though they are efficient, some side effects can be associated with statin therapy, especially when interactions with other drugs occur. In these cases, monitoring the concentration can optimize the drug dosage to therapeutic effectiveness whilst minimizing the adverse effects. The aim of this work was to develop a method for analysis of pravastatin (PRA), atorvastatin (AT), fluvastatin (FLV) and simvastatin (SV) in human plasma. The experimental means chosen to attain the goal was liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and for the sample preparation, microextraction by packed sorbent (MEPS). To optimize the extraction conditions, parameters such as sorbent, elution and washing solution were evaluated. Other parameters such as sampling, elution cycles, sample volume and elution steps were evaluated using multivariate experimental design. The extraction was performed using C18 Chromabond as sorbent. The method was validated based on ANVISA recommendations and featured appropriated linearity, selectivity, accuracy, precision, and recovery, except for simvastatin. The calibration curve in plasma was obtained in the concentration range 10-200 ng mL-1 (FLV and AT) and 20-200 ng mL-1 (PRA) and the limit of quantification (LOQ) was 10 ng mL-1 (FLV and AT) and 20 ng mL-1 (PRA). The method developed proved to be suitable for the analysis of pravastatin, fluvastatin and atorvastatin in human plasma sample, but not simvastatin, and it can contribute to a more efficient usage of the statins in the treatment of hypercholesterolemia.

O quadro evolutivo da agricultura brasileira resulta em benefícios à população exigindo crescentes avanços tecnológicos no setor. Constantemente, novos agrotóxicos são introduzidos estimulando estudos científicos com a finalidade de determinar e avaliar os impactos na população e no meio ambiente. No presente trabalho, a matriz avaliada foi o lodo gerado no processo de tratamento de água para consumo humano, coletado na região do Vale do Ribeira, SP. A técnica empregada foi a cromatografia líquida de fase reversa acoplada à espectrometria de massas triploquadrupolar em tandem com ionização por electrospray. Os compostos foram extraídos previamente da matriz. O desenvolvimento da metodologia exigiu tratamento dos dados para que esses pudessem ser utilizados e transformados em informações confiáveis. Os processos envolvidos foram avaliados usando o conceito da validação de ensaios químicos. Os indicadores avaliados foram seletividade, linearidade, intervalo de trabalho, sensibilidade, exatidão, precisão, limite de detecção, limite de quantificação e robustez. Esses indicadores produziram valores quantitativos e qualitativos que foram estatisticamente evidenciados de forma objetiva. A metodologia desenvolvida e validade é simples. Como resultado, mesmo explorando a sensibilidade da técnica, os compostos estudados não foram encontrados no lodo da ETA de Registro. Isso leva a crer que esses compostos podem estar presentes em concentrações muito baixas, podem sofrer degradação durante o tratamento da água ou não são retidos completamente pela ETA. 7 / The evolving scenario of Brazilian agriculture brings benefits to the population and demands technological advances to this field. Constantly, new pesticides are introduced encouraging scientific studies with the aim of determine and evaluate impacts on the population and on environment. In this work, the evaluated sample was the sludge resulted from water treatment plant located in the Vale do Ribeira, São Paulo, Brazil. The technique used was the reversed phase liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry. Compounds were previously liquid extracted from the matrix. The development of the methodology demanded data processing in order to be transformed into reliable information. The processes involved concepts of validation of chemical analysis. The evaluated parameters were selectivity, linearity, range, sensitivity, accuracy, precision, limit of detection, limit of quantification and robustness. The obtained qualitative and quantitative results were statistically treated and presented. The developed and validated methodology is simple. As results, even exploring the sensitivity of the analytical technique, the work compounds were not detected in the sludge of the WTP. One can explain that these compounds can be present in a very low concentration, can be degraded under the conditions of the water treatment process or are not completely retained by the WTP.

A avicultura de corte brasileira tem apresentado elevados índices de crescimento. No intuito de garantir uma maior eficiência da produção de aves, medicamentos veterinários são administrados para tratamento e prevenção de doenças. A coccidiose é uma dessas doenças, a qual é causada por várias espécies do protozoário do gênero Eimeria. Os poliéteres ionóforos são antibióticos largamente administrados no controle desses microrganismos. No entanto, a administração contínua de doses subterapêuticas dessa classe de fármacos pode acarretar no acúmulo de resíduos nos tecidos dos frangos de corte. No intuito de garantir a segurança dos consumidores, são definidos Limites Máximos de Resíduos (LMRs) por órgãos internacionais como: Food and Drug Administration (FDA), Commission Regulation, Codex Alimentarius; e nacionais como Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Dessa forma, este estudo teve por objetivo o desenvolvimento, validação e aplicação de um método para determinação em peito de frango de resíduos de Lasalocida (LAS), Monensina (MON), Salinomicina (SAL) e Narasina (NAR) por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial com ionização por eletrospray (LC-ESI-MS/MS). Nigericina (NIG) foi utilizada como padrão interno do método analítico. As amostras foram liofilizadas, trituradas e tamisadas, sendo utilizadas no método amostras com tamanho de partículas entre 125 ?m e 250 ?m. Os resíduos foram extraídos com metanol e uma alíquota do extrato foi evaporada e reconstituída para análise em LC-ESI-MS/MS no modo positivo de monitoramento de reação selecionada (SRM). A etapa de clean up foi realizada por meio de filtração do extrato em membrana de PTFE 0,22 ?m. O método apresentou-se linear no intervalo de concentração de 0,0 a 40,0 ?g kg-1 para LAS, de 0,0 a 20,0 ?g kg-1 para MON, de 0,0 a 200,0 ?g kg-1 para SAL e de 0,0 a 30,0 ?g kg-1 para NAR. Para todos os antibióticos o coeficiente de correlação linear (r) esteve de acordo com as diretrizes para métodos bioanalíticos (r >= 0,98). A repetitividade foi avaliada em três concentrações de fortificação para cada antibiótico ionóforo, sendo realizada em três dias consecutivos. Foi obtida boa reprodutibilidade intralaboratorial, com coeficiente de variação (CV) de 4,5% para NAR (22,5 ?g kg-1) e 15,2% para LAS (10,0 ?g kg-1). A recuperação ficou acima de 90,0% para todos os antibióticos, sendo de 91,5% para LAS (10,0 ?g kg-1) e 99,1% para MON (15 ?g kg-1). Valores satisfatórios para o limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) foram obtidos, sendo CC? de 11,8 ?g kg-1 e 115,2 ?g kg-1 para MON e SAL, respectivamente, e CC? de 13,6 ?g kg-1 e 130,3 ?g kg-1 para os mesmos antibióticos. Os limites de detecção (LD) e os limites de quantificação (LQ) foram determinados a partir de dados da curva de calibração. Todos os antibióticos apresentaram LQ inferior ao seu respectivo LMR. O método foi aplicado em 18 amostras disponíveis comercialmente em Ribeirão Preto, SP. De todas as amostras analisadas apenas uma apresentou resíduo de NAR com concentração acima do seu respectivo LD. / The Brazilian poultry industry has shown high rates of growth. In order to ensure greater efficiency of poultry production, veterinary drugs are administered for the treatment and prevention of diseases. Coccidiosis is one of those diseases, which is caused by various species of protozoa of the genus Eimeria. Polyether ionophore antibiotics are widely administered to control these microorganisms. Continuous administration of subtherapeutic doses of this class of drugs may result in the accumulation of residues at low concentration levels in the tissues of broiler. In order to ensure consumer safety, are set Maximum Residue Limits (MRLs) by international organizations such as Food and Drug Administration (FDA), Commission Regulation (EU), Codex Alimentarius; and national such as Ministério da Agricultura e Pecuária (MAPA). Thus, this study aimed to develop, validate and apply a simple method for determination of residues of Lasalocid (LAS), Monensin (MON), Salinomycin (SAL) and Narasin (NAR) in chicken meat by liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). Nigericin (NIG) was used as qualitative internal standard. Samples were lyophilized, powdered and sieved. Particles size between 125 ?m and 250 ?m were used. Residues were extracted with methanol and aliquots of the extracts were evaporated and reconstituted for injection in the LC-ESI-MS/MS operated in positive selected reaction monitoring (SRM). From the molecular ion were obtained two fragment ions and that of higher relative abundance was used in quantification process. Clean-up step was performed by filtration on 0.22 ?m PTFE membrane. In the validation process, this method showed linearity over the concentration range from 0.0 to 40.0 ?g kg-1 for LAS; 0.0 to 20.0 ?g kg-1 for MON; 0.0 to 200.0 ?g kg-1 for SAL and 0.0 to 30.0 ?g kg-1 for NAR. For all antibiotics the coefficient of linear correlation (r) was in accordance with the guidelines for bioanalytical methods (r >= 0.99). The intra-day precision was evaluated at three spiked concentrations for each ionophore antibiotic and was determined in three consecutive days. Good inter-day precision was obtained, with relative standard deviations from 4.5% for NAR (22.5 ?g kg-1) and 15.2% for LAS (10.0 ?g kg-1). For all antibiotics recovery above 90.0% was obtained, which were 91.5% for LAS (10.0 ?g kg-1) and 99.1% for MON (15.0 ?g kg-1). Satisfactory results of decision limit (CC?) and detection capability (CC?) were determined, which were CC? 11.8 ?g kg-1 and 115.2 ?g kg-1 for MON and SAL, respectively; CC? 13.6 ?g kg-1 and 130.3 ?g kg-1 for the same drugs. The limit of detection (LD) and limit of quantification (LQ) were determined from data of the calibration curve. All the LQs were remarkably below the MLRs for each antibiotic. The method was applied to 18 samples acquired in Ribeirão Preto, SP. Of all analyzed samples only one exhibited traces of NAR with concentration above its respective LD. Thus, the proposed method can be applied in routine analysis on samples of commercial chicken meat.

Os pesticidas têm sido largamente empregados na agricultura para controle de pragas, doenças e ervas daninhas. O uso intensivo de pesticidas nas culturas de tomates, desrespeitando as boas práticas agrícolas, tem causado preocupações quanto à provável contaminação do produto final e muitos métodos multirresíduos têm sido empregados para avaliar e determinar os níveis de resíduos em amostras de alimentos. Para tanto, o objetivo deste estudo foi a validação do método usando QuEChERS no preparo de amostra e LC-MS/MS para a quantificação de resíduos de 61 pesticidas de diferentes classes químicas em tomate. A detecção foi realizada utilizando espectrômetro de massas no modo MRM dinâmico, o tempo de análise foi de 13 min com coluna analítica recheada com partículas de 1,8 \'mü\'m de partícula. Dos 61 pesticidas estudados, 46 estão de acordo com os parâmetros de validação da Comissão Européia e Anvisa, 15% dos pesticidas validados apresentaram efeito matriz médio e as recuperações ficaram entre 87 e 116% e coeficiente de variação de 5 a 17%. Mais de 85% dos compostos investigados apresentaram limites de detecção igual ou menor que 5 \'mü\'g kg-1 e de quantificação igual ou menor que 10 \'mü\'g kg-1. Foram analisadas 58 amostras de tomate coletadas em supermercados da cidade de Piracicaba, SP, Brasil. Doze compostos foram detectados em trinta e cinco amostras (60% do total analisado), todos abaixo do limite máximo de resíduos permitido no Brasil para acefato, acetamiprido, azoxistrobina, benalaxil, bromuconazol, diflubenzurom, imidacloprido, iprodiona, procloraz e tiametoxam, e 15 amostras positivas para metamidofós e 1 para oxamil, que não possuem uso autorizado para a cultura de tomate. Foi realizado um estudo de lavagem de tomates contaminados com produtos formulados (8 pesticidas) com água, solução com 10% de vinagre e com 10% de bicarbonato de sódio e analisada a casca e polpa, para avaliar a capacidade de remoção de cada procedimento. Todos os tratamentos de lavagens (n=3) diferiram estatisticamente para todos os pesticidas avaliados (n=8), com exceção do fipronil, para o qual as lavagens com solução de 10% de bicarbonato de sódio e água não apresentaram diferença no nível de significância de 5%. A lavagem com água ou outras soluções antes do consumo é indicada para a redução de resíduos de pesticidas em tomate e a retirada da casca também contribui para essa redução / Pesticides have been widely used in agriculture to control pests, diseases and weeds. The intensive use of pesticides in tomato crops disrespecting good agricultural practices have been causing concerns about the possible contamination of the final product and many multiresidue methods have been used in order to evaluate and determine the levels of residues in food samples. Therefore, the aim of this study was validate the method using QuEChERS sample preparation and LC-MS/MS for quantification of 61 pesticides residues from different chemical classes in tomato. Detection was performed using mass spectrometry in dynamic MRM mode, run time had 13 min and analytical column packed with 1,8 \'mü\'m particles. Of the 61 pesticides studied, 46 are in accordance with the validation parameters of the European Commission and ANVISA, 15% of the validated pesticides presented matrix effect, recoveries were between 87 and 116% and coefficient of variation 5 to 17%. More than 85% of the compounds investigated showed limits of detection less or equal than 5 \'mü\'g kg-1 and the limits of quantification less or equal than 10 \'mü\'g kg-1. 58 real samples of tomato were analyzed and collected in supermarkets in Piracicaba, SP, Brazil. Twelve compounds were detected in thirty-five samples (60% of the total analyzed), all below the maximum residue limit allowed in Brazil for acephate, acetamiprid, azoxystrobin, benalaxyl, bromuconazole, diflubenzuron, imidacloprid, iprodione, prochloraz and thiamethoxam, and 15 positive samples of methamidophos and 1 for oxamyl, which are not authorized to use at the culture of tomatoes. A wash study was conducted with spiked tomatoes using formulated products (8 pesticides) with water, 10% acetic acid, 10% sodium bicarbonate solution and analyzed concentration in the peel and pulp, in order to evaluate the capacity to remove pesticides in each procedure. All wash treatments (n= 3) differed significantly for all pesticides evaluated (n= 8), with the exception of fipronil, which the washing with 10% of sodium bicarbonate solution and water no showed difference in the level of significance 5%. The washing with water or other solutions before consumption is indicated for the reduction of pesticide residues in tomatoes and the peeling also contributes to this reduction

A ciclobenzaprina é um relaxante muscular de ação central estruturalmente similar aos antidepressivos tricíclicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a bioequivalência de comprimidos contendo 10 mg de cloridrato de ciclobenzaprina em voluntários sadios. O estudo de bioequivalência entre o produto teste (Miosan®) e referência (Flexeril®) foi do tipo randomizado, aberto e cruzado. Os produtos foram administrados por via oral aos voluntários em dose única de 10 mg de cloridrato de ciclobenzaprina. Amostras de sangue foram coletadas até 240 horas após a administração do fármaco e quantificadas por método previamente validado através de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de massas. As curvas médias de decaimento plasmático dos produtos teste (Miosan®) e referência (Flexeril®) foram semelhantes ASC0-t (teste: 193,00 ngxh/mL; referência: 191,66 ngxh/mL) e ASC0∞ (teste: 211,34 ngxh/mL; referência: 209,35 ngxh/mL). Assim como os parâmetros farmacocinéticos relativos à absorção de ciclobenzaprina, Cmax (teste: 7,16 ng/mL; referência: 6,95 ng/mL), tmax (teste: 4,61 h; referência: 4,48 h), Ka (referência: 0,79; teste: 0,67) e t(1/2)a (referência: 1,79 h; teste: 2,02 h). Os parâmetros farmacocinéticos relativos à eliminação plasmática de ciclobenzaprina Cl (teste: 31,15 L/h; referência: 31,73 L/h), Vd (teste: 1378,54 L e referência (1357,87 L), kß (referência: 0,08; teste: 0,08), t(1/2)ß (referência: 9,43 h; teste: 9,20 h), k&#947 (referência: 0,02; teste: 0,02) e t(1/2)&#947 (referência: 32,92 h; teste: 31,67 h) também apresentaram-se semelhantes entre os dois produtos. A análise multivariada realizada por meio da análise de variância (ANOVA), para a avaliação dos efeitos produto, grupo e período, revelou a ausência destes efeitos, indicando que o delineamento do estudo foi adequado. Os resultados do intervalo de confiança (I.C. 90 %) para a razão de Cmax (93,0 % - 112,0 %), ASC0-t(92,6 % - 111,1 %) e ASC0&#8734 (93,1 % - 110,4 %), encontram-se dentro dos limites estabelecidos pela ANVISA e FDA (80 - 125 %). A análise estatística dos parâmetros Cmax, ASC0-t e ASC0-&#8734 indicam que não há diferenças entre os dois produtos contendo 10 mg de cloridrato de ciclobenzaprina. Com base nos resultados deste estudo, conclui-se que os produtos avaliados são bioequivalentes e podem ser considerados intercambiáveis na terapêutica. / Cyclobenzaprine is a centrally acting muscle relaxant that has similarity with a tricyclic antidepressant. The purpose of this study was to evaluate the bioequivalence of two brands of cyclobenzaprine 10 mg tablets in healthy volunteers. The procedure of bioequivalence between test product (Miosan®) and reference product (Flexeril®) was a randomized, open and crossover study. The products were administered in a single oral dose of 10 mg of cyclobenzaprine hydrochloride to healthy volunteers. Blood samples were collected until 240 hours after administration and quantified by validated method using high-pressure liquid chromatography with mass spectrometric detection. The average plasmatic decay curves of test (Miosan&#174) and reference (Flexeril&#174) products were similar ASC0-t (test: 193,00 ngxh/mL; reference: 191,66 ngxh/mL), in the same way that absorption parameters Cmax (test: 7,16 ng/mL; reference: 6,95 ng/mL), tmax (test: 4,61 h; reference: 4,48 h), Ka (reference: 0,79; test: 0,67) e t(1/2)a (reference: 1,79 h; test: 2,02 h). The elimination parameters Cl (test: 31,15 L/h; reference: 31,73 L/h), Vd (test: 1378,54 L e reference (1357,87 L), k&#914 (reference: 0,08; test: 0,08), t(1/2)&#946 (reference: 9,43 h; test: 9,20 h), k&#947 (reference: 0,02; test: 0,02) e t(1/2)&#947 (reference: 32,92 h; test: 31,67 h) were similar between products too. The multivariate analysis accomplished trough analysis of variance (ANOVA), for assessment of product, group and period effects, revealed the absence of any of these effects in the present study, indicating that the crossover design was properly performed. The 90 % confidence intervals for the ratio of Cmax(93,0 % - 112,0 %), AUC0-t(92,6 % - 111,1 %) and AUC0&#8734 (93,1 % - 110,4 %) values for the test and reference products are within the 80 - 125 % interval proposed by ANVISA e FDA. Statistical analysis of Cmax, AUC0-t e AUC0-&#8734 parameters indicated no significant difference between two brands of 10 mg cyclobenzaprine hydrochloride products. Based in the results of this study, we can conclude that the two products are bioequivalent and can be considered interchangeable in the medical practice.

Bisfenóis, filtros UV de benzofenona, parabenos e antimicrobianos como triclocarban são amplamente utilizados em produtos alimentares, farmacêuticos, cosméticos e de cuidados pessoais e também são encontrados como contaminantes. A maioria destes compostos apresentam possíveis efeitos adversos à saúde, principalmente devido ao fato de sua potencial atividade desreguladora endócrina. Neste sentido, é crescente o interesse pelo desenvolvimento de métodos analíticos que sejam mais simples e que possam ter a capacidade de detecção do maior número de analitos possíveis simultaneamente para uso em estudos de biomonitoramento humano. O objetivo deste projeto foi desenvolver um novo método de preparo de amostras em microextração em sorvente empacotado (MEPS, do inglês \"microextraction by packed sorbent\") para a extração simultânea de substâncias potencialmente desreguladoras endócrinas (parabenos, bisfenóis, benzofenonas e triclocarban). Em 250 ?L de urina sintética (pH 5,3) foram adicionados os analitos a uma concentração de 20 ng/mL e diluídos com 250 ?L de água. Após este procedimento, os compostos foram extraídos manualmente da amostra de urina usando MEPS C18 com 5 ciclos de aspirar-dispensar de 100 ?L. A eluição dos analitos foi realizada utilizando 100 ?L (metanol/água 80:20), seguido de análise em LC-MS/MS. O cartucho MEPS, após a limpeza, foi reutilizado para extrações múltiplas sem a presença de efeito de memória. As separações cromatográficas foram conduzidas em uma coluna C18 a 40 °C. A fase móvel foi composta por um gradiente de metanol e água a uma vazão de 500 ?L/min. Os dados foram adquiridos no modo MRM com íons negativos como precursores. O método MEPS-LC-MS/MS proposto apresentou curva de calibração linear para todos os analitos com coeficiente de correlação (r) maior que 0,99 no intervalo do limite inferior de quantificação (LIQ) a 20,0 ng/mL. Os LODs variaram de 0,005-0,1 ng/mL e os LIQ variaram de 0,5-2,5 ng/mL. Além disso, a precisão foi expressa como o coeficiente de variação, onde os valores obtidos foram menores que 20% (n=3) nos LIQ e menores que 15% (n=3) nas concentrações de 10,0 e 20,0 ng/mL. A exatidão foi expressa na forma de erro padrão relativo, onde os valores obtidos não foram superiores a ±20% (n=3) para os LIQ e ±15% (n=3) nas concentrações 10,0 e 20,0 ng/mL. O procedimento MEPS proposto apresentou vantagens que incluem a possibilidade de extração e determinação simultânea de 16 analitos em urina, com redução dos volumes de amostra e solvente utilizados, além de vantagens como tempo reduzido de preparo de amostra, clean up da matriz e dispensa etapa prévia ao preparo de amostra / Bisphenol, benzophenone UV filters, parabens and antimicrobials as triclocarban are widely used in food, pharmaceuticals products, cosmetic and personal care products or they are fond as contaminants. Most of these compounds show possible health adverse effects, mainly due to the fact of its potential endocrine disrupting activity. Thus, there is an increasing interesting in new analytical method development that will be simple and able to detect largest number of analytes possible simultaneously to be used in human biomonitoring studies. The project goal was developed a new sample preparation methody in Microextraction in packed sorbent (MEPS) to simultaneous extraction followed by liquid chromatography coupled to mass spectrometry in tandem analysis (LC-MS/MS) of 16 substances potentially endocrine disrupting (parabens, bisphenols, benzophenones and triclocarban). In 250 ?L of synthetic urine (pH 5.3) were spiked with compounds at a concentration of 20 ng/mL and diluted with 250 ?L of water. After this procedure, the compounds were extracted manually from urine sample using MEPS C18 with 5 draw-eject 100 ?L cycles. The elution was performed using 100 ?L (methanol/water 80:20) followed by LC-MS/MS analysis. The MEPS cartridge, after cleaned, was used for multiple extractions without any carry-over effect. Chromatographic separations were carried out on a C18 column at 40 oC. The Mobile phase was composed by a gradient methanol and water at a flow rate of 500 ?L/min. Data were acquired the MRM mode with negative ions as precursors. The proposed MEPS-LC-MS/MS method showed calibration curve linear to all analytes with correlation coefficient higher than 0,99 in the range from low limit of quantification (LIQ) to 20,0 ng/mL. The LODs range from 0,005-0,1 ng/mL and LIQ range from 0,5 to 2,5 ng/mL. Moreover, the precision was reported as variation coefficient, where the values were less than 20% (n=3) to the LIQ and less than 15% (n=3) to 10,0 and 20,0 ng/mL concentrations. The accuracy was reported as relative standard error, where the values were less than ±20% to the LIQ and less than ±15% (n=3) to 10,0 and 20,0 ng/mL concentrations. The MEPS procedure proposed showed advantages including possibility to extraction and simultaneous determination of 16 analytes in urine, with sample and solvents volume reduction besides it shows advantages as time reducing in sample preparation, matrix clean up and dispense previous sample preparation step.

A aquicultura é um dos sistemas de produção de alimentos com maior crescimento no mundo todo. Reconhecidamente, os sistemas intensivos de produção animal para alimentos são favoráveis à propagação de doenças infecciosas devido à alta densidade populacional. Por esta razão, antimicrobianos (antibacterianos e antiparasitários) são largamente empregados na medicina veterinária, sendo que os resíduos destes podem permanecer nos alimentos de origem animal, acima de valores considerados seguros, quando não são respeitadas as boas práticas veterinárias. Este trabalho teve por objetivos: (i) desenvolver e avaliar o desempenho de um método analítico para a determinação simultânea de resíduos de quinolonas (enrofloxacina, ciprofloxacina e difloxacinas), tetraciclinas (clortetraciclina, tetraciclina e oxitetracilina), sulfonamidas (sulfadimetoxina, sulfametazina e sulfatiazol) e bezimadazóis (albendazol) em filés de duas espécies de peixe (tilápia e pacu) de importância comercial no Brasil, empregando a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas; (ii) aplicar o método nas análises de amostras de filés de peixes disponíveis comercialmente. O procedimento de preparação da amostra baseou-se no método QuEChERS. Foram avaliadas as influências da composição e volume da solução extratora empregada, variação dos sais utilizados no processo de salting-out e sorventes empregados na etapa de limpeza, visando-se obter a maior eficiência de extração simultânea dos fármacos de interesse em filé de pacu e tilápia. A melhor condição do método de extração foi: 5 g de filé de peixe homogeneizado; 10 mL de ACN:MeOH 1% de ácido fórmico como solvente extrator; 2 g de sulfato de magnésio e 0,5 g de cloreto de sódio; 150 mg mL-1 de sulfato de magnésio e 25mg mL-1 de PSA e C18 para a etapa de limpeza. As eficiências de extração obtidas para todos os resíduos variaram de 70 a 100%. Para a separação cromatográfica, foi empregada fase móvel composta por água (solvente A) e acetonitrila (solvente B), ambas contendo 0,5% de ácido fórmico, sob eluição por gradiente. Como fase estacionária, empregou-se a coluna XTerra C18 MS de dimensões 100 x 3,9 mm, 3.5 ?m. Foi utilizado um sistema de ionização por eletronebulização operando em modo positivo (ESI+), na interface entre o sistema cromatográfico e o espectrômetro de massas, sendo este composto por analisadores de massas do tipo triplo-quadrupolo operando no modo de Monitoramento de Reações Múltiplas (MRM - Multiple Reaction Monitoring). Nestas condições foi possível o monitoramento dos 10 analitos em uma corrida analítica com duração de 14 minutos. O desempenho do método foi avaliado mediante os seguintes parâmetros de validação: seletividade, linearidade, precisão, veracidade/recuperação limites de decisão e capacidade de detecção. Todos os resultados obtidos para os parâmetros avaliados atendem aos critérios de aceitação propostos pelo Manual de Garantia da Qualidade Analítica para Resíduos e Contaminantes em Alimentos, proposto pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, o que qualifica o método desenvolvido para os objetivos propostos no presente trabalho. O método foi aplicado na ánalise de 20 amostras de filés de peixes de ambas as espécies, adquiridas na cidade de Ribeirão Preto, SP. Todas as amostras analisadas não apresentaram resíduos dos fármacos alvo em níveis detectáveis pelo método empregado. / Aquaculture is one of the fastest growing food production system in the world. Admittedly, the practice of intensive systems of animal food production could lead to the spread of infectious diseases due to the high population density. For this reason, antimicrobials (antibacterials and antiparasitics) are widely used in veterinary medicine, and residues are in animal foods, above safe, when they are not respected as good veterinary practices. The aim of this Project was (i) develop and validated a analytical method for the simultaneous determination of residues of quinolonolones (enrofloxacin, ciprofloxacin and difloxacin), tetracyclines (chlortetracycline, tetracycline and oxitetracilina), sulfonamides (sulfadimethoxine, sulfamethazine and sulfathiazole) and bezimadazóis (albendazole) in fillet two species of fish (tilapia and pacu) of commercial importance in Brazil, employing high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry; (Ii) Apply the method in analyses of sample fillet of fish commercially available. The sample preparation procedure was based on the QuEChERS method. The influence of the composition and volume of the extractive solution used, variation of the salts used in the salting-out process and sorbents used in the cleaning step were evaluated, aiming to obtain the highest efficiency of simultaneous extraction of the drugs of interest in pacu and tilapia fillet. The best condition of the extraction method was: 5 g of homogenized fish fillet; 10 mL of ACN: MeOH 1% formic acid as the extractive solvent; 2 g of magnesium sulfate and 0.5 g of sodium chloride; 150mg mL-1 of MgSO4, 25mg mL-1 of PSA and 25mg mL-1 C18 for the cleaning step. The extraction efficiencies obtained for all residues ranged from 70 to 100%. For a chromatographic separation, the mobile phase was used composed of water (solvent A) and acetonitrile (solvent B), both containing 0.5% formic acid, under gradient elution. As the stationary phase, the XTerra C18 MS column of dimensions 10 x 2.1 mm, 3.5 ?m was used. one by eletronebulização ionization system at the interface between the chromatography system and mass spectrometry operating in positive mode was used (ESI +), with mass analyzers triple-quadrupole operating in Multiple Reaction Monitoring Mode (MRM - Reaction Multiple Monitoring). Under these conditions it was possible to monitor the 10 analytes in an analytical run of 14 minutes. The method was evaluated through the validation requirements: selectivity, linearity, precision, veracity / recovery decision limits and detection capacity. All the results obtained for the quality assurance system for Food Residues and Contaminants, proposed by Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, approved the developed method for the proposed objectives at this work. The method was applied to analysis of 20 samples of fish fillets from embassies as species, acquired in the retail market of Ribeirão Preto, SP. All analyzed samples showed no residues of the drugs above detectable levels by the method employed.

Espécies do gênero Eucalyptus sp. são as arbóreas mais plantadas no Brasil, onde desempenham importante papel econômico, social e ambiental. Estudos de como se dá a formação da madeira e sua composição química podem auxiliar na obtenção de árvores mais produtivas. Nesse sentido, estudos de metabolômica são interessantes pois podem associar a presença ou quantidade de um ou vários metabólitos à expressão de um fenótipo específico. As técnicas de análises por cromatrografia gasosa (GC-MS) e líquida (LC-MS) acopladas à espectrometria de massas são bastante empregadas em metabolômica pois possibilitam uma visão qualitativa e quantitativa dos metabólitos presentes em um organismo. Com isso, o objetivo deste trabalho foi identificar metabólitos diferencialmente abundantes em plantas superiores e inferiores quanto à produção de madeira em Eucalyptus grandis. O material vegetal utilizado foi fornecido pela empresa Suzano Papel e celulose e dividido em dois grupos. O grupo principal consistiu de clones com cinco anos originados a partir de uma progênie de irmãos completos de E. grandis. Amostras da região do câmbio, cerne e alburno de genótipos superiores e inferiores para produtividade da madeira foram utilizadas nas análises. Para a validação dos metabólitos identificados, um segundo grupo denominado grupo teste (GT) foi formado por clones com três e cinco anos, também com genótipos superiores e inferiores para produtividade de madeira. As amostras foram analisadas por GC-MS e por LC-MS. Para o processamento dos dados de GC-MS utilizou-se o programa ChromaTOF e o pacote TargetSearch e a identificação dos metabólitos foi obtida com o auxílio da biblioteca Golm Metabolome Database. Já para as análises de LC-MS, os dados brutos foram processados no programa MarkerLynx XS. As análises estatísticas dos dados de GC-MS e LC-MS foram realizadas com o auxílio do programa on-line MetaboAnalyst, utilizando-se a Análise de Componentes Principais (PCA) a Análise Discriminante por Mínimos Quadrados Parciais (PLS-DA). Além disso, os metabólitos diferencialmente abundantes foram ranqueados por meio do Índice de Importância da Variável (VIP). Pelas análises de GC-MS pode-se observar a presença de oito metabólitos (quatro desconhecidos, um alcano, um aminoácido, uma amina primária e um ácido graxo) no câmbio com abundância diferencial entre as árvores superiores e inferiores. No alburno foram encontrados nove metábolitos com abundância diferencial, dos quais três desconhecidos, dois açúcares, um flavonóide e dois ácidos graxos. Já no cerne oito metabólitos mostraram-se diferenciais sendo quatro desconhecidos, três açúcares e um ácido graxo. Para o grupo T houve a formação de grupos de acordo com a produtividade apenas para as árvores de 5 anos. Nas análises por LC-MS, considerando-se os dois modos de análises (positivo e negativo) foi possível encontrar 66, 28 e 27 metabólitos para as amostras de câmbio, alburno e cerne respectivamente. O grupo T não apresentou diferenças na abundância dos metabólitos em relação às árvores superiores e inferiores. A identificação desses metabólitos bem como das vias metabólicos que participam fornecerá valiosas informações para estudos de formação da madeira em E. grandis. / Species of the genus Eucalyptus sp. are the most planted trees in Brazil, where they play an important economic, social and environmental role. Studies of how the formation of wood and its chemical composition can help to obtain trees that are more productive. In this sense, metabolomics studies are interesting because they may associate the presence or quantity of one or more metabolites with the expression of a specific phenotype. The gas chromatography (GC-MS) and liquid chromatography (LC-MS) are very used in metabolomics because they allow a qualitative and quantitative view of the metabolites present in an organism. Therefore, the objective of this work was to identify differentially abundant metabolites in superior and inferior plants in relation to wood production in Eucalyptus grandis. The plant material used was supplied by Suzano Papel e Celulose and divided into two groups. The main group consisted of a progeny of five-year-old E. grandis full-siblings. Samples were collected from the cambium, heartwood and sapwood regions of upper and lower genotypes for wood productivity. In order to validate metabolites, the second group, called test group (GT) was formed by clones with three and five years, also with superior and inferior genotypes for wood productivity. The samples were analyzed by GC-MS and LC-MS. For the processing of the GC-MS data, the ChromaTOF program and the TargetSearch package were used. For the identification of the metabolites, the GMD library (The Golm Metabolome Database) was used. For the LC-MS, the raw data was processed in the MarkerLynx XS program. The statistical analyzes of GC-MS and LC-MS data were performed using the MetaboAnalyst online program, using Principal Component Analysis (PCA) and Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA). In addition, the differentially abundant metabolites were ranked using the Importance Index of the Variable (VIP). In GC-MS analysis, eight metabolites (four unknown, one alkane, one amino acid, one amine and one fatty acid) were found in the cambium with differential abundance in the superior and inferior trees. The sapwood presented nine metabolites with differential abundance, of which three unknown, two sugars, one flavonoid and two fatty acids. Besides, in the heartwood eight metabolites were differentials being four unknown, three sugars and one fatty acid. For the T group there was formation of groups according to productivity only for five years group. In the analyzes by LC-MS considering the two modes of analysis (positive and negative) was found 66, 28 e 27 metabolites in the cambium, the sapwood and the heartwood, respectively. The T group showed no difference in the abundance of the metabolites in relation to the upper and lower trees. The identification of these metabolites as well as the metabolic pathways involved will provide valuable information for wood formation studies in E. grandis.

O presente trabalho apresenta os dados obtidos no estudo para o desenvolvimento de método multirresíduo de pesticidas dos grupos de benzimidazol (carbendazim, tiabendazol e tiofanato metílico), carbamatos (aldicarbe, aldicarbe sulfona, aldicarbe sulfóxido, carbaril, carbofurano, metomil, metiocarbe, pirimicarbe, propoxur) e triazinas (atrazina e simazina) em amostras de milho verde. Os pesticidas foram extraídos em acetona, sob agitação, diluídos em água e injetados no sistema LC/MS/MS. A técnica analítica de quantificação e confirmação utilizada foi a Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de Massas em Tandem com ionização por Electrospray no modo positivo. A validação do método multirresíduo foi submetida em conformidade com a norma EC/2002/657 da Comunidade Européia. Para quantificação dos analitos utillizouse as curvas analíticas dos princípios ativos, nas concentrações que variaram de 0,04 a 8,0 ng/ml, correspondentes a 2,0 a 400 ?g.kg-1 na amostra. Para o estudo da recuperação, os pesticidas foram avaliados em cinco níveis, de ½ Limite de quantificação (LOQ) a 5 LOQ, correspondentes a níveis de fortificação de 4,0 a 200 ?g.kg-1 . Os resultados da recuperação apresentaram, em níveis aceitáveis, na faixa de 80 a 110% e com precisão satisfatórias, CV <=20%, com exceção de aldicarbe e de aldicarbe sulfona. Os limites de quantificação do método variaram de 8 a 40 ?g.kg-1 e os limites de detecção do método, de 0,2 a 2,9 ?g.kg-1. Os limites de quantificação do método atendem aos limites máximos de resíduos da legislação brasileira em vigor. Nas amostras estudadas, não foram encontrados resíduos de pesticidas acima do limite de quantificação do método. Por outro lado, todos os pesticidas, exceto carbaril e pirimicarbe, foram detectados em todas as amostras e em níveis acima dos limites de detecção do método. A alta incidência da presença de resíduos de pesticidas se deve possivelmente ao uso inadequado de agrotóxico, quando não autorizado o seu uso para a cultura de milho no Brasil ou proveniente de alguma contaminação, como o tratamento de agrotóxicos aplicados em outras culturas plantadas no mesmo solo. / The present work presents the results of a study of development about a multiresidue method for determining pesticides of the following groups in corn: benzimidazolic compounds (carbendazim, thiabendazol and methyl thiofanate), carbamates (aldicarb, aldicarb sulfone, aldicarb sulfoxide, carbaryl, carbofuran, methomyl, methiocarb, pirimicarb, propoxur), and triazines (atrazine and simazine). The pesticides were extracted in acetone under constant stirring, diluted in water and injected in the LC/MS/MS system. The analytical technique for quantification and confirmation was Liquid Chromatography coupled to tandem Mass Spectrometry with Electrospray ionization in the positive mode The validation of the multiresidue method underwent the European Community EC/2002/657 standard. For the quantification of the analytes, calibration curves of the substances in concentrations ranging from 0.04 to 8.0 ng/mL were used, corresponding to 2.0 to 400 ?g.kg-1 in the sample. For recovery tests, the pesticides were assessed on five levels, from ½ Limit of Quantification (LOQ) to 5 LOQ, corresponding to the fortification levels of 4.0 to 200 ?g.kg-1. The results of the tests showed a recovery of 80-110% with satisfactory precision, and CV <=20%, except for aldicarb and aldicarb sulfone. The limits of quantification of the method ranged from 8 to 40 ?g.kg-1 and the limits of detection ranged from 0.2 to 2.9 ?g.kg-1. The limits of quantification of the method meet the maximum residue limit allowed by the Brazilian law. In the studied samples, pesticide residues above the limit of quantification of the method were not found. On the other hand, all pesticides, except for carbaryl and pirimicarb, in all samples, were detected and level above the limits of detection of the method. The high incidence of residues of these pesticides is probably due to their inadequate use, since it is not allowed on corn cultures in Brazil, or any kind of contamination like the use of such pesticides on other cultures over the same soil.