Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 423613.pdf: 493712 bytes, checksum: f0aaf16c071b57eefd3ee2352c888ec8 (MD5) Previous issue date: 2009-03-17 / O melanoma maligno cut?neo se encontra entre as neoplasias que mais aumentam em incid?ncia anual no mundo. V?rios fatores v?m sendo estudados na determina??o de progn?stico, entre eles, a espessura de Breslow, os n?veis de Clark, a presen?a de ulcera??o e a taxa de prolifera??o celular. Esta ?ltima vem ganhando import?ncia nas ?ltimas publica??es, como um fator capaz de determinar a positividade de linfonodo sentinela, al?m do progn?stico. Pouco tem sido estudado, no entanto, seu papel enquanto vari?vel isolada. Este trabalho tem por objetivo estudar a exist?ncia de rela??o preditora entre a Taxa de Prolifera??o Celular (TPC) e a Positividade do Linfonodo Sentinela ( PLS). Foi realizado, para tanto,estudo transversal envolvendo a avalia??o dos exames anatomopatol?gicos de 109 pacientes atendidos pelo Programa Melanoma do HSL-PUCRS no per?odo de Outubro de 2006 at? Outubro de 2008. Foi realizado teste de Chi-Quadrado e Regress?o Log?stica Bin?ria visando identifica??o de vari?vel com capacidade preditora de desfecho, ou seja, Positividade ou Negatividade de Linfonodo Sentinela. As vari?veis que demonstraram valor independente em rela??o ao desfecho foram a Espessura de Breslow ( p = 0,001) e N?veis de Clark ( p = 0,047). A Taxa de prolifera??o celular apresentou rela??o inferior a 5%, com o valor de p mais pr?ximo do desejado ( p = 0,07) em pacientes com Breslow 1-2 mm e idade inferior a 40 anos. Em conclus?o, o taxa de prolifera??o celular dos melanomas malignos cut?neos n?o mostrou rela??o com o desfecho pretendido enquanto vari?vel independente. Este fen?meno estat?stico nos leva a crer que a TPC ? o que chamamos de vari?vel de grupo, ou seja, contribui junto com um grupo de vari?veis para um determinado desfecho. ? poss?vel que, em um grupo selecionado de pacientes com espessura intermedi?ria ( 1-2mm ) e idade jovem ( abaixo de 40 anos), se possa predizer a positividade ou n?o de um g?nglio previamente a realiza??o de pesquisa de linfonodo sentinela.

La dérégulation de la transcription résultant de mutations des molécules clés des voies de signalisation est une caractéristique des cancers. Dans les mélanomes, les facteurs de transcription MITF et BRN-2 contrôlent la survie, la prolifération, la différenciation et la migration/invasion cellulaire, avec une forte expression de MITF caractérisant les cellules les plus différenciées. BRN-2 est surexprimé dans les cellules de mélanomes où il peut réprimer l’expression de MITF conduisant ainsi les cellules vers un phénotype moins différencié et plus invasif. Comment BRN-2 est régulé est une question majeure. Nous avons montré que l’expression de BRN-2 est modulée en réponse aux variations des concentrations en oxygène et glucose et que cet effet est en partie médié par la PI3K. L’inhibition de la voie PI3K réduit l’invasion des cellules de mélanome et diminue l’expression des protéines BRN-2 et PAX3. PAX3 régule l’expression de BRN-2 par liaison directe sur son promoteur. Ces résultats suggèrent, qu’en plus des voies β-caténine/LEF1 et BRAF/MAPK, la voie PI3K régule l’expression de BRN-2 et pourrait jouer un rôle majeur dans le changement du phénotype prolifératif à invasif / Deregulation of transcription arising from mutations in key signaling molecules is a hallmark of cancer. In melanoma, MITF and BRN-2 transcription factors control survival, proliferation, differentiation and migration/ invasiveness, with high levels of MITF being a characteristic of differentiated melanocytes. BRN-2 represses MITF expression, thereby driving cells to a less differentiated and more invasive phenotype. How BRN-2 is regulated is therefore a key issue. We showed that up-regulation of BRN-2 expression in response to glucose involves the PI3K pathway. Inhibition of PI3K reduces invasiveness and decreases the levels of BRN-2 and PAX3. We showed that PAX3 regulates BRN-2 expression by direct binding on its promoter. Altogether, our results highlight a crucial role for the PI3K pathway in regulating BRN-2 expression and imply that PI3K signaling may be a key determinant of melanoma subpopulation diversity and prime cells for a proliferative to invasive phenotype switch.

Orientador: Ana Gabriela Sálvio / Resumo: Introdução: O melanoma é um tipo de câncer de pele agressivo, gerando diferentes comportamentos ao diagnóstico, dependendo da situação emocional do indivíduo. O modo como o paciente recebe o diagnóstico pode estar associado à personalidade e sua relação com a vida. Objetivo: Identificar as características emocionais e as dimensões da personalidade do paciente com melanoma no momento diagnóstico. Métodos: Foram selecionados 30 pacientes no momento do diagnóstico de melanoma e 30 sem diagnóstico oncológico sendo, ambos os grupos submetidos à avaliação psicológica através de dois instrumentos: Escala de Ansiedade e Depressão (HADS) e Inventário Fatorial de Personalidade (IFP II). Resultados: Neste estudo os sintomas de ansiedade e depressão não tiveram significância estatística e foram sintomas predominantes no grupo controle do que no grupo melanoma. Na interpretação e análise de correspondência do IPF II deste estudo as variáveis estatisticamente significativas que caracterizam os pacientes com melanoma foram Assistência, Afago, Deferência, Afiliação, Persistência e Autonomia. A dimensão Ordem é característica no que se refere aos estádios clínicos mais avançados (III e IV). Discussão: Neste trabalho não observa uma associação direta de sintomas de ansiedade e depressão na fase diagnóstica, ponto que merece atenção na escuta clínica e evolução do tratamento. Notamos as pessoas com melanoma a tendência abandono de si e busca de reconhecimento, para manter o trabalho, boa execuç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Melanoma is a type of aggressive skin cancer, generating different behaviors at diagnosis, depending on the individual's emotional situation. How the patient receives the diagnosis may be associated with personality and its relation to life. Objective: To identify the emotional characteristics and personality dimensions of the patient with melanoma at the moment of diagnosis. Methods: 30 patients were selected at the time of diagnosis of melanoma and 30 without oncological diagnosis. Both groups were submitted to psychological evaluation through two instruments: Anxiety and Depression Scale (HADS) and Factorial Personality Inventory (IFP II). Results: In this study the symptoms of anxiety and depression were not statistically significant and were predominant symptoms in the control group than in the melanoma group. In the interpretation and correspondence analysis of the IPF II of this study, the statistically significant variables that characterize patients with melanoma were Assistance, Cuddling, Deference, Affiliation, Persistence and Autonomy. The Order dimension is characteristic for the more advanced clinical stages (III and IV). Discussion: This study does not observe a direct association of anxiety and depression symptoms in the diagnostic phase, a point that deserves attention in clinical listening and treatment evolution. We note that people with melanoma tend to abandon themselves and seek recognition, to keep the job, good execution and admiration of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A inexistência de um agente terapêutico único satisfatório para o tratamento do melanoma metastático e a potencialidade do quimioterápico 5FU (5-fluorouracil) motivou esta pesquisa, a qual teve por objetivo o desenvolvimento tecnológico de sistemas carreadores micro-/ e nanoestruturados contendo 5FU a fim de aumentar sua eficácia terapêutica e reduzir a toxicidade por meio da administração pulmonar. Duas formulações pulverulentas foram desenvolvidas com polímeros naturais, sulfato de condroitina e hidroxipropil-metil-celulose, denominadas 5FU-MS e 5FU-NS, utilizando as técnicas de aspersão e atomização vibracional piezoelétrica, respectivamente. Ambas as formulações foram avaliadas quanto às características físicas e químicas, perfil toxicológico in vivo (C. elegans e em ratos Wistar), e penetração e biodisponibilidade no tecido pulmonar pela quantificação da fração livre de fármaco por microdiálise pulmonar. A análise físico-química revelou a obtenção de partículas micrométricas para 5FU-MS e submicrométricas para 5FU-NS, com diâmetros médios de partícula de 2,546 ± 0,07 m e 0,652 ± 0,03 m, e fração respirável (FR%) de 55,12 ± 2,98 e 76,84 ± 0,07, respectivamente. Ambas demonstraram características e propriedades adequadas para administração pulmonar, com capacidade de deposição nas porções média e profunda. A toxicidade das formulações avaliada em C. elegans considerou o percentual de morte, desenvolvimento, DL50 e produção de ROS para os nematodos sob tratamento agudo e crônico. Os resultados evidenciaram redução significativa da toxicidade proporcionada pela redução da taxa de morte e maior desenvolvimento dos grupos tratados com as formulações 5FU-MS e 5FU-NS em comparação ao fármaco livre, sugerindo perfis de segurança satisfatórios para administração. Além disso, 5FU-MS revelou-se um agente pró-oxidante, representando um diferencial promissor deste sistema, podendo alcançar maior sensibilização das células tumorais com menores doses. A toxicidade pulmonar aguda foi avaliada pela análise de LDH e proteínas totais no fluido de lavagem bronco-alveolar (BALF) após a administração combinada das formulações 5FU-MS e 5FU-NS para administração como um sistema terapêutico único (5FU-MS/NS), e análise de dano tecidual pulmonar em ratos. Os resultados da análise bioquímica e histológica indicaram o baixo potencial de indução de lesão tecidual a partir da administração pulmonar combinada das formulações, em relação ao fármaco livre. A análise do perfil farmacocinético por microdiálise pulmonar evidenciou o êxito no desenvolvimento dos sistemas carreadores, tornando possível duplicar o t1/2 do 5FU e aumentar significativamente a biodisponibilidade no tecido pulmonar. Os resultados obtidos indicam a eficiência das formulações 5FU-MS e 5FU-NS em alcançar os benefícios terapêuticos do fármaco 5FU com menores doses e maiores intervalos de administração. Este trabalho de tese apresenta uma abordagem promissora na terapia de neoplasias com recorrência de metástase pulmonar. / The absence of a single therapeutic agent suitable for the treatment of metastatic melanoma and the potential of 5FU chemotherapy (5-fluorouracil) motivated this study, which aimed the development of carrier systems based on micro-/ and nanostructures containing 5FU to increase the therapeutic efficacy and reduce toxicity of this drug by pulmonary administration. Two different formulations of dry powders were developed with natural polymers, chondroitin sulfate and hydroxypropyl-methyl-cellulose, denomined 5FU-MS and 5FU-NS, using the spray-drying and vibrational piezoelectric atomization techniques, respectively. Both formulations were evaluated in terms of physico-chemical characteristics, in vivo toxicological behaviors (C. elegans and in Wistar rats), bioavailability and penetration in the lung tissue by quantifying of drug free fraction by lung microdialysis. The physicochemical analysis showed that were obtained as micrometric (5FU-MS) and submicron particles (5FU-NS), with average diameters of particle 2.546 ± 0.07 m and 0.652 ± 0.03 m, and respirable fraction (FR%) of 55.12 ± 2.98 and 76.84 ± 0.07, respectively. Both showed suitable characteristics and properties for pulmonary delivery, with deposition capacity in the middle and deep lung portions. The toxicity of the formulations evaluated in C. elegans considered the death rate, body development, DL50 and production of ROS to nematodes under acute and chronic treatment. The results showed significant reduction of toxicity, reducing the death rate and greater development of the groups treated with 5FU-MS and 5FU-NS formulations compared to the free drug, suggesting satisfactory safety profile for administration. In addition, 5FU-MS proved to be a pro-oxidant agent, representing a promising differential of this system which can achieve greater sensitization of tumoral cells with lower doses. Acute pulmonary toxicity was evaluated by analyzing LDH, and total protein in the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) after combined administration of 5FU-MS formulations and 5FU-NS for administration as a single therapeutic system (5FU-MS/NS) and analysis of lung tissue damage in rats. The results of biochemical and histological analysis indicated the low potential to induce tissue damage from the pulmonary administration of combined formulations, compared to free drug. Analysis of the pharmacokinetic profile for pulmonary microdialysis showed the successful development of carrier systems, making it possible to double the t1/2 of 5FU and significantly increase bioavailability in lung tissue. The results indicate the effectiveness of the formulations 5FU-MS and 5FU-NS in achieving the therapeutic benefits of the drug 5FU at lower doses and higher dosing intervals. This thesis work presents a promising approach to cancer therapy with lung metastasis recurrence.

>Magister Scientiae - MSc / Tyrosinase is an enzyme widely distributed in the biosphere and is found in many species of bacteria, fungi, animals, and plants; it is associated with melanin production. Even though it possesses many beneficial properties such as photoprotection, but overproduction causes undesirable effects such melasma, solar lentigines etc. Therefore, tyrosinase enzyme inhibitors are of far-ranging importance in cosmetics, medicinal products, and food industries. This study is aimed to test anti-tyrosinase activity in 37 plants from 20 families using mushroom tyrosinase inhibition method; each plant was extracted with methanol. The results showed that 17 plant extracts, exerted a considerable level of in vitro tyrosinase inhibition comparable to positive controls of kojic acid in the same solvent systems when evaluated spectrophotometrically. Among plant extracts, those that showed an inhibition rate >50 % at 50 μg/ml and ˃60 % at 200 μg/ml were A. karroo (Hayne.), A. afra Jacq. Ex Willd, C. geifolia (L.), E. racemosa (L.), H. petiolare Hilliard & B.L.Burt, M. quercifolia (L.), M. communis (L.), P. rigida (Wikstr.), P. ecklonii (Benth.), P. ericoides (L.), S. Africanacaerulea (L.), S. Africana-lutea (L.), S. antarcticus (Willd.), S. lucida (L.) F.A.Barkley, S. hamilifolius (L.), S. furcellata R.Br and T riparia which exhibited great anti-tyrosinase activity.

Le mélanome est un cancer de la peau agressif et au mauvais pronostic. Si de nouvelles solutions thérapeutiques efficaces ont été développées, les taux de réponses sont variables et transitoires. Découvrir de nouveaux mécanismes oncogéniques dans cette pathologie reste donc nécessaire. Durant mes travaux, j’ai pu démontrer que la protéine tyrosine-kinase FES est exprimée dans les mélanocytes normaux. Cette expression est largement perdue dans un panel de lignées cellulaires de mélanome, au niveau protéique et transcriptionnel ainsi que dans des cultures primaires d’échantillons de patients. La perte de FES est due à une hyper-méthylation de son promoteur et est réversible. En ré-exprimant FES de manière stable dans deux lignées cellulaires de mélanomes, j’ai montré que cette réexpression entraînait une diminution des capacités oncogéniques des cellules. De plus, en analysant les données d’une cohorte de mélanomes (TCGA), j’ai pu établir qu’une diminution importante ou une perte d’expression de FES se retrouve dans près de 40% des patients, et qu’elle est corrélée à une hyper-méthylation du gène FES. Les patients ayant une faible expression de FES présentent un moins bon pronostic soulignant l’importance de ce phénomène. Enfin, en croisant un modèle murin déficient pour le gène Fes avec un modèle de mélanome, nous observons que les tumeurs sous fond Fes KO sont plus prolifératives et plus volumineuses.Ainsi, par des analyses in vitro, sur des données de patients ou en croisant des modèles murins, j’ai pu démontrer que FES est exprimée au niveau des mélanocytes normaux et y exerce un rôle de suppresseur de tumeur. / Among skin cancers, melanoma is the most aggressive and has the worst prognosis. In the last years, new therapeutic tools have been developed but responses differ between patients and are often transient due to resistance mechanisms. This highlights the need to improve understanding of molecular mechanisms of the disease. During my thesis, I have shown for the first time that FES tyrosine kinase is expressed in normal melanocytes, and that its expression is lost at the protein and RNA levels in most melanoma cell lines. The same result is observed in a panel of 12 patients’ short-term cultures. The lack of expression is due to FES promoter hyper-methylation and can be reverted using a hypomethylating agent. By restoring FES expression in two melanoma cell lines, I observe a decrease of oncogenic properties of the cells. Moreover, the analysis of the TCGA data on melanoma indicate that FES expression is strongly decreased or lost in about 40% of patients, and that this loss of expression is correlated with FES promoter methylation. Importantly, patients with low level of FES mRNA have poor prognosis compared to FES expressing patients. Finally, Fes knock-out mice crossed with an inducible melanoma mouse model indicate that tumors proliferation and size are more important under a Fes KO background.In conclusion, by using melanoma cells in vitro, data from melanoma patients and mouse models, I have demonstrated that FES is expressed in normal melanocytes and clearly plays a tumor suppressor role.in melanoma.

Nas últimas décadas, é intensa a procura de uma explicação genética sobre a origem, crescimento e progressão do melanoma cutâneo. A tentativa de encontrar uma ligação direta entre as mutações gênicas e a origem da doença tem sido o objetivo dos pesquisadores dedicados ao estudo dessa neoplasia. Diversos métodos são utilizados na busca de uma avaliação prognóstica para a progressão do melanoma, citando-se, entre eles, a pesquisa do linfonodo sentinela, a imunoistoquímica, as técnicas moleculares e a técnica de microarray. A necessidade de estabelecer um método, com excelente sensibilidade e especificidade, tem levado os pesquisadores a buscarem melhores evidências. É importante para esses estudos a obtenção de dados confiáveis sobre as técnicas, progressão e sobrevida livre de doença. Por meio da imunoistoquímica, técnica relativamente simples e de baixo custo, a expressão da proteína p16 pode ser analisada e correlacionada com o prognóstico da doença. No melanoma cutâneo, a expressão da proteína diminui, à medida que aumenta sua agressividade, ou seja, é forte nos nevos e melanomas in situ, e fraca ou ausente nos melanomas metastáticos. Em alguns estudos, a comparação com outros marcadores é analisada. A finalidade deste estudo é fazer uma revisão da literatura internacional sobre o uso da proteína p16 como fator prognóstico para o melanoma, bem como avaliar a importância das alterações do gene p16INK4a, co-responsáveis pela gênese e evolução do melanoma.

Melanoma é um tipo maligno de lesão de pele pigmentada, e atualmente está entre os tipos de câncer existentes mais perigosos. Entretanto, diferenciar casos malignos de benignos é uma tarefa difícil mesmo para experientes especialistas, e um sistema de diagnóstico auxiliado por computador pode ser uma ferramenta bastante útil. Normalmente, este sistema inicia por um pré-processamento da imagem, isto é, remoção de artefatos indesejados, como pelos, sardas ou efeitos de sombreamento. A seguir, o sistema executa uma etapa de segmentação, identificando as bordas da lesão. Por fim, baseando-se na área da imagem identificada como lesão, diversas feições são computadas e uma classificação é gerada. Neste tese, apresentada na forma de uma coleção de artigos publicados, nós apresentamos técnicas para automaticamente executar todos estes passos, resultando em um pré-diagnóstico para uma lesão de pele pigmentada baseado apenas em uma imagem convencional (uma simples fotografia). Nós testamos nossos métodos em bases de imagens públicas e atingimos melhores resultados de segmentação e classificação que os demais métodos presentes na literatura. / Melanoma is a type of malignant pigmented skin lesion, and currently is among the most dangerous existing cancers. However, differentiating malignant and benign cases is a hard task even for experienced specialists, and a computer-aided diagnosis system can be an useful tool. Usually, the system starts by pre-processing the image, i.e. removing undesired artifacts such as hair, freckles or shading effects. Next, the system performs a segmentation step to identify the lesion boundaries. Finally, based on the image area identified as lesion, several features are computed and a classification is provided. In this Thesis, presented as a collection of published papers, we detail approaches to automatically execute all these steps, resulting in a pre-diagnosis for a pigmented skin lesion based only in a standard camera image (i.e. a simple color photograph). We tested our methods on publicly available datasets and achieved better segmentation and classification results than methods previously proposed in the literature.

Adolescents and Young Adults (AYAs) ages 15-39 years with cancer have received little attention in the medical and health fields, resulting in a lack of progress for this age group. Little is known about the unique biologic, epidemiologic, and psychosocial issues that play an integral role in the AYA cancer journey. The purposes of this study were to use the Tennessee Cancer Registry for all new cancer cases from 2004-2008 to determine 1) the main types of cancer that affect AYAs in TN, 2) the predictors of late-stage diagnosis of melanoma, and 3) the factors that predict a total thyroidectomy for cancer treatment. A total of 8,097 cancer cases were diagnosed in AYAs in Tennessee from 2004-2008. The five main cancer types were breast cancers, melanomas, thyroid cancers, lymphomas, and testicular cancers and accounted for over 50% (N=4,269) of cancers in AYAs in Tennessee during the study period. Females were significantly more likely to be diagnosed with melanomas (age adjusted incidence rate (AIR) 14.01, 95% CI 12.96-15.06) and thyroid cancers (AIR 13.39, CI 12.37-14.42) compared to males (AIR 8.08, CI 7.28-8.88 and AIR 3.50, CI 2.98-4.03, respectively). All cancer types increased with age. Individuals with government insurance (OR 8.41, CI 3.04-23.27) and those 15-19 years of age (OR 6.30, CI 1.74-22.86) had the highest risk of late-stage melanoma. Significant predictors of a using total thyroidectomy for thyroid cancer treatment included regional/distant stage cancer at diagnosis (OR 2.80, CI 1.34-5.85) compared to localized stage, papillary carcinoma (OR 2.64, CI 1.02-6.83) and papillary adenocarcinoma (OR 3.56, CI1.37-9.19) histology types compared to follicular adenocarcinoma, and residence in non-Appalachian Tennessee (OR 2.07, CI 1.26-3.42) compared to Appalachian TN. An increased awareness of cancer types that affect AYAs in Tennessee will provide a basis for developing public health campaigns for cancer prevention and control in this population. This research serves as a first step in using state-based cancer registries to identify the unique characteristics of cancer in AYAs and will set the stage for future state-based research in this underserved population.

Skin cancer is a major public health concern, and tanning remains a modifiable risk factor. Multidimensional influences, including psychosocial, individual, environmental, and policy-related factors, create the milieu for individuals to engage in tanning. Parents and physicians can modify the behavior of teens and young adults using strategies based on harm reduction. Environmental and policy-related factors similar to those used to limit smoking by restricting access of minors to cigarettes in the United States in the 20th century need to be created. Federal regulations can restrict direct advertising and the excise tax can be increased to a prohibitive amount. Social networking may assist with affect regulation.