Das maligne Melanom ist ein häufiger Tumor, der bei rechtzeitiger Diagnosestellung eine gute Prognose aufweist. In dieser Arbeit wird die Frage untersucht, ob bestimmte Risikofaktoren die Tumordicke zum Zeitpunkt der Entdeckung des Melanoms, und damit die Prognose, beeinflussen. Werden Patienten mit bekanntem hohen Risiko effektiv erkannt und wird dadurch ein Melanom in einem frühen Stadium mit geringerer Tumordicke entdeckt? Gibt es Faktoren, die dazu führen, dass Melanome besonders spät und damit prognostisch ungünstig entdeckt werden? In dieser Arbeit wurden 347 Patienten mit malignem Melanom zu Risikofaktoren und Diagnosefindung befragt. Die Ergebnisse der Befragung wurden dann statistisch mit der Tumordicke der Melanome korreliert. Es konnte gezeigt werden, das signifikant dünnere Tumore bei Patienten mit bekanntem Hochrisikoprofil, wie heller Hauttyp und viele -besonders atypische- Nävi diagnostiziert wurden. Patienten in der Hochrisikosprechstunde der Dermatologie der Universitätsmedizin Göttingen hatten signifikant dünnere Tumoren und sind offenbar effektiv in Früherkennungsmaßnahmen integriert. Es konnte ebenfalls gezeigt werden, dass Patienten mit niedrigem Schulabschluss, höherem Lebensalter und männlichem Geschlecht signifikant häufiger dickere Tumoren zum Zeitpunkt der Diagnosestellung aufwiesen. Diese Patienten müssen intensiver motiviert werden an Früherkennungsmaßnahmen teilzunehmen.

Das maligne Melanom zählt zu den aggressivsten und behandlungsresistentesten aller Krebsarten. In den letzten 20 Jahren hat sich die Rate der Melanom-Erkrankungen innerhalb der weißen Bevölkerung verdreifacht. Mittlerweile liegen eine Reihe von Untersuchungen zu den molekularbiologischen Mechanismen der Entwicklung und Progression des malignen Melanoms vor. Aktuelle Forschungsvorhaben beschäftigen sich vor allem mit der Identifizierung Melanom-spezifischer Biomarker, die diagnostische und prognostische Informationen liefern sowie die Entwicklung einer zielgerichteten, kombinierten und individualisierten Therapie des metastasierenden Melanoms ermöglichen. In diesem Kontext soll die vorliegende Arbeit einen weiteren Beitrag zum Verständnis der Metastasierungskaskade und der daran beteiligten Proteine leisten. Aufgrund der Überexpression in einer Reihe von Tumoren und seiner geringen Molmasse von lediglich 11,5 kDa bietet sich das S100A4-Protein als Marker mit hoher prognostischer Signifikanz für verschiedene Tumorentitäten an. Jedoch ist die Beteiligung von S100A4 bei der Ausbildung des invasiven Tumorphänotyps noch nicht vollständig aufgeklärt. S100A4 besitzt zahlreiche intra- und extrazelluläre Bindungspartner, wobei die Metastasierung scheinbar ausschließlich durch das extrazelluläre Protein beeinflusst wird. S100A4 wechselwirkt extrazellulär beispielsweise mit dem Rezeptor für fortgeschrittene Glykierungsendprodukte (RAGE). Ziel dieser Arbeit war es, speziell die Bedeutung von S100A4 und seiner Interaktion mit RAGE für das prometastatische Verhalten von Melanomzellen in vitro und in vivo näher zu charakterisieren. Darüber hinaus sollte die Beteiligung von S100A4 bei der Gehirn-Metastasierung untersucht werden, wobei insbesondere die Regulierung der Endothelzell-Permeabilität und der transendothelialen Migration der Melanomzellen im Vordergrund stand. Im Rahmen dieser Arbeit wurde gezeigt, dass S100A4 und die Interaktion mit RAGE die prometastatischen Eigenschaften der A375-Melanomzellen förderte. Zudem verringerte extrazelluläres S100A4 die Zell-Integrität von Gehirn-Endothelzellen und erleichterte somit die Durchdringung der Blut-Hirn-Schranke. Diese Erkenntnis lässt sich möglicherweise auf andere Blut-Gewebe-Schranken übertragen. Die In-vivo-Orientierungsstudie zeigte, dass S100A4- und RAGE-überexprimierende Zellen zu einer verstärkten disseminierten Metastasierung führten, wobei sich zwei unterschiedliche Verteilungsmuster ergaben. Darüber hinaus führten beide Zelllinien vereinzelt zur Bildung von Gehirnmetastasen, wodurch sich die intrakardiale Injektion durchaus als Modell für weitere Therapiestudien mit dem Augenmerk der S100A4-RAGE-stimulierten Metastasierung eignet. Die genauere Kenntnis regulativer Mechanismen bei der Synthese und Sekretion von S100A4 sowie die pathophysiologische Differenzierung der S100A4-Interaktion mit RAGE eröffnen neue Wege, die S100A4-vermittelten Effekte therapeutisch zu beeinflussen. Daraus lassen sich möglicherweise neue zielgerichtete Radionuklid-basierte Therapieansätze für das metastasierende Melanom ableiten.

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Background. Skin cancer is the most common form of cancer in the United States. The main modifiable risk factor for skin cancer is exposure to excessive sun and UV radiation. More than 90% of all skin cancers are known to be caused by sun exposure. However, studies on excessive sun and UV exposure are limited. The purpose of this study was to examine risk and protective factors affecting sun protection behaviors of adult women in the United States. Methods. Data on U.S. adult women (n=17,425) from the 2003 National Health Information Survey (NHIS) was analyzed. Sun protection behaviors were assessed using three variables: use of sunscreen, staying in the shade, and wearing protective clothing when outside for an hour or more on a very sunny day. Demographic characteristics, risk and preventive factors such as visit to the general doctor, visit to the dentist, most recent mammogram, most recent pap smear, vigorous exercise, cigarette use, and alcohol use were examined using multiple logistic regression. Results. Only 45% of the respondents indicated that they consistently use sunscreen or stay in the shade when outside on a very sunny day for an hour or more and 15.8% of the respondents reported that they consistently wore protective clothing. The adjusted logistic regression analyses indicated that race, age, education, income, geographic region, employment status, exercise, history of cancer, tobacco use, and alcohol use were statistically significant predictors for participation in the sun protection behaviors. Conclusions. A majority of the U.S. adult female population do not use protection from excessive sun. Education programs for sun protection behaviors should target young, low income women with less than high school education who participate in other health risk behaviors, such as tobacco and alcohol use. Furthermore, sun protection education should be incorporated with other health education messages that target at risk populations.

Le mélanome acro-lentigineux (ALM) est le 4ème sous-type histologique de mélanome et représente moins de 10% des mélanomes. Beaucoup de controverses entourent ce sous-type rare, comme un plus mauvais pronostic. L’objectif de notre travail était de mieux caractériser l’ALM sur le plan épidémiologique, clinique, histologique, et évolutif et d’identifier d’éventuels facteurs pronostiques. Entre 1996 et 2004, 126 cas d’ALMs (6% des mélanomes) ont été répertoriés et suivis dans le service de dermatologie de l’Hôpital de l’Hôtel-Dieu, Lyon. Toutes les lames histologiques ont été récupérées et systématiquement relues. Les analyses statistiques ont été réalisées par comparaison de sous-groupes, calculs et comparaison des courbes de survie par la méthode de Kaplan-Meier et le test de Log-Rank, et recherche de facteurs pronostiques indépendants en utilisant le modèle de régression logistique de Cox. La survie médiane sans récidive et spécifique étaient respectivement de 10,1 et 13,5 ans. Le taux de survie à 5 ans était de 76%. Dans la première partie de notre travail, nous avons étudié toutes les caractéristiques épidémiologiques et cliniques de l’ALM, afin de mieux comprendre l’histoire clinique. Les hommes avaient un plus mauvais pronostic ainsi que les formes achromiques. La seconde partie est une étude détaillée des particularités anatomo-pathologiques des ces tumeurs, avec une évaluation de leur signification pronostique. L’analyse multivariée des facteurs pronostiques a permis de souligner l’impact de l’index mitotique et de la présence de microsatellites en histologie. Enfin, la troisième partie de notre travail avait pour but de préciser les critères dermoscopiques d’aide au diagnostic de l’ALM, dont le retard diagnostique est fréquent. A partir d’une des plus grandes séries de cas d’ALM, notre travail souligne le caractère distinct de ce sous-type de mélanome, dont le mauvais pronostic est vraisemblablement lié à un stade avancé au diagnostic, la dermoscopie constituant une aide précieuse pour un diagnostic plus précoce. / Acral Lentiginous Melanoma (ALM) is the fourth main histological subtype of melanoma and accounts for less than 10% of all melanomas. Many controversies surround this rare subtype, as a poorer prognosis. The aim of our study was to investigate the distinctive epidemiological, clinical and histological characteristics and outcome of ALM, and to evaluate their prognostic values in order to identify independent prognostic factors. Between 1996 and 2004, 126 patients with ALMs (6% of all melanomas) were retrieved and followed up at the Department of Dermatology, Hôtel-Dieu University Hospital, Lyon, France. All histological material were systematically reexamined. Statistical analysis was performed by comparing the baseline characteristics of subgroups with appropriate tests. ALM-specific and disease-free survivals were estimated using the Kaplan-Meier method and compared using the Log-Rank test. A Cox proportional hazards model was used to identify independent prognostic factors. The median disease-free and ALM-specific survivals were 10.1 and 13.5 years, respectively. The 5-year survival rate was 76%. In the first part of this study, we reviewed patient demographics, the initial presentation of the lesion, and clinical outcome. Male gender and amelanosis were significantly associated with a poorer prognosis. The second part is a detailed analysis of histopathological features, with evaluation of their prognostic value. The presence of microsatellites and a high mitotic rate appeared to be of particular importance in predicting the outcome of ALM. Then, the third part emphasized all dermoscopic features of ALM, in order to improve recognition of suspicious cases and to permit an earlier diagnosis. This large register-based review of ALM shows that ALM is an unusual subtype of melanoma that exhibits distinctive epidemiological, clinical and pathological features. The classical poorer prognosis is mainly due to a more advanced stage at the time of diagnosis. Dermoscopy could be helpful to improve the diagnostic accuracy in such locations.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology and toxicology Student: Lucie Rozkydalová Supervisor of Diploma thesis: Prof. PharmDr. František Štaud, PhD. Specialized supervisor: Pr. Pierre Cuq PharmD. PhD., Laure-Anaïs Vincent Title of diploma thesis: Differential resistance of melanoma to vinca-alkaloids Malignant melanoma (MM) represents the most dangerous and very aggressive skin tumor with fast development of drug resistance which is the main obstacle in successful treatment of MM. According to previous studies (microarray data analysis), KIT gene, which plays key role in melanoma pathophysiology, was chosen as one of the potential causes of failure of treatment by vinca alkaloids (VAs) because of its complete underexpression in melanoma CAL1 resistant cells (CAL1R-VAs) in comparison with parental cells (CAL1-wt). Moreover, KIT also interacted with NF-κB and cyclin D1-2 proteins involved in chemoresistance of melanoma - inside molecular network built using IPA software. Although KIT underexpression in resistant CAL1 R-VAs cell lines were confirmed (qRTPCR), KIT repression using specific siRNA transfection did not show any effect on in vitro sensibility of CAL1-wt cells to VAs. It signifies that KIT is not directly involved in melanoma resistance...

Introduction. Sunbeds emit ultraviolet (UV) radiation to produce a cosmetic tan and are classified by the World Health Organization as first-group carcinogens: they have been significantly associated with increased risk of melanoma and non-melanoma skin cancer. Despite this, controversies still exist: since sunbeds are able to increase serum vitamin D, the sunbed industry relentlessly tries to promote them as a safe therapeutic measure; and some authors have recently expressed scepticism about the carcinogenicity of sunbeds. Moreover, differences between European countries in terms of prevalence of use have not been extensively studied and a better understanding of the determinants of use in Europe is much needed. Similarly, the association of sunbed use with skin cancer risk factors is poorly understood. Euromelanoma is a skin cancer prevention campaign conducted all over Europe. It offers a once-a-year screening during which participants’ data, including sunbed use and phenotype, are collected via questionnaires.Objectives. To thoroughly describe prevalence, determinants, and risks associated with sunbed use in Europe. To this aim we performed literature reviews (3 publications) and an extensive analysis of the Euromelanoma database, which included data from 30 European countries (2 publications).Methods. For the 3 reviews we searched the most used databases for any literature published in English using all pertinent keywords. As for the 2 Euromelanoma studies, participants filled in questionnaires about demographics and risk factors, including type/duration of sunbed use. Multivariate analyses adjusted for all confounders were employed to assess factors independently associated with sunbed use in each country.Results. Our reviews showed that: (i) European sunbed users are typically young women, sun seekers, and smokers, mostly from northern countries, going to tanning studios with aesthetic motives, although exceptions exist; (ii) in case of vitamin D deficiency, the risk/benefit ratio is clearly in favour of vitamin D supplementation instead of sunbed use; (iii) all epidemiological criteria for causality apply to the relationship between sunbed use and melanoma. The Euromelanoma studies included 227,888 individuals (67.4% females, median age 44) from 30 countries. Overall prevalence of sunbed ever use was 10.6%. Prevalence was higher in northern, sun-deprived countries, with the exception of Italy and Spain. Females displayed higher prevalence than males in all countries. Geographic particularities were found in four regions: Iberian (prevalence ten times higher in Spain than Portugal), Balkan (prevalence disproportionately higher among women), Baltic (highest prevalence among young adults), and Scandinavian (highest prevalence among adolescents). Ever sunbed use was independently associated with nevus count >50 [summary odds ratio (SOR)=1.05 (1.01-1.10)], atypical nevi [SOR=1.04 (1.00-1.09)], lentigines [SOR=1.16 (1.04-1.29)], and suspicion of melanoma [SOR=1.13 (1.00-1.27)]. Conclusions. After a thorough literature revision, we concluded that the debate over whether sunbed use contributes to melanoma should be definitively closed and that sunbeds are not a safe option to increase vitamin D levels. The Euromelanoma analysis on sunbeds and skin cancer risk factors suggests that avoidance/discontinuation of sunbed use should always be encouraged, especially, but not exclusively, for individuals with high-risk phenotypes. The data about prevalence/determinants of sunbed use have public health relevance for future, tailored interventions aimed at reducing indoor tanning in Europe. / Introduction. Les bancs solaires émettent des radiations ultraviolettes (UV) pour induire un bronzage cosmétique. Ils sont classés par l’Organisation Mondiale de la Santé comme carcinogènes de premier groupe: ils sont significativement associés à un risque accru de mélanome et de cancers cutanés non-mélanome. Malgré ça, des controverses existent toujours :comme leur utilisation permet d’accroitre le taux sérique de vitamine D, l’industrie du bronzage artificiel n’a cessé de les promouvoir comme thérapeutique sans danger et certains auteurs ont récemment mis en doute la carcinogénicité des bancs solaires. Par ailleurs, les différences entre les pays européens en terme de prévalence et de facteurs déterminant l’utilisation des bancs solaires n’ont pas été clairement étudiées. De la même façon, la relation entre bronzage artificiel et facteurs de risque de cancérisation cutanée reste floue. Euromelanoma est une campagne pan-européenne annuelle de prévention de cancers cutanés, où des questionnaires récoltent les données des participants (usage des bancs solaires, phénotype et informations cliniques inclus).Objectifs. Décrire de manière approfondie la prévalence, les déterminants et les risques associés à l’utilisation des bancs solaires en Europe. Dans ce but, nous avons réalisé des revues de littérature (3 publications) et une analyse extensive de la base de données Euromelanoma qui couvre 30 pays européens (2 publications).Méthodes. Pour les 3 revues, nous avons cherché dans toute la littérature publiée en anglais sur les moteurs de recherche les plus utilisés, en employant des mots clés pertinents. Les participants des 2 études Euromelanoma ont rempli des questionnaires colligeant les facteurs démographiques et de risque, le type et la durée d’utilisation des bancs solaires. Des analyses multi-variées ont permis d’évaluer les facteurs indépendamment associés à l’usage des bancs solaire dans chaque pays.Résultats. Les revues de littérature ont montré que :(i) les utilisateurs européens sont typiquement des femmes jeunes/adultes, amatrices de soleil, fumeuses, ressortissantes des pays nordiques, motivées par des raisons esthétiques et préférant les centres de bronzage, même si des exceptions existent ;(ii) dans le cas d’une carence en vitamine D, le rapport risque/bénéfice est clairement en faveur de la supplémentation en vitamine D plutôt que du bronzage artificiel ;(iii) tous les critères épidémiologiques de causalité s’appliquent à la relation entre les bancs solaires et le mélanome. Les études Euromelanoma ont été réalisées sur 227,888 individus (67.4% femmes, âge médian 44 ans) issus de 30 pays. La prévalence globale d’utilisation des bancs solaires était 10.6%, mais était plus élevée dans les pays nordiques et non ensoleillés, l’Italie et l’Espagne faisant exception. Dans tous les cas, les femmes avaient une prévalence d’utilisation plus élevée que les hommes. Des particularités géographiques ont été relevées dans 4 régions :la péninsule ibérique (prévalence 10 fois plus élevée en Espagne qu’au Portugal), les Balkans (disproportions excessives de prévalence entre femmes et hommes), les pays baltiques (la prévalence la plus élevée chez les jeunes/adultes), et scandinaves (la prévalence la plus élevée chez les adolescents). Avoir utilisé au moins une fois un banc solaire était indépendamment associé avec :un nombre de naevi >50 [summary odds ratio (SOR)=1.05 (1.01-1.10)], la présence de naevi atypiques [SOR=1.04 (1.00-1.09)] et des lentigines [SOR=1.16 (1.04-1.29)] et la suspicion de mélanome [SOR=1.13 (1.00-1.27)]. Conclusions. La revue complète de la littérature nous permet d’affirmer que le débat sur la relation causale entre bancs solaires et mélanome doit être clos et que leur utilisation pour corriger un déficit sérique en vitamine D n’est pas sans danger. L’analyse Euromelanoma sur l’utilisation des bancs solaires et les facteurs de risque de cancer cutané suggère que le bronzage artificiel devrait toujours être dissuadé, spécialement mais pas exclusivement chez les individus avec des phénotypes à haut risque. Les données de la prévalence et des facteurs déterminant l’utilisation des bancs solaires constituent un intérêt de santé publique et devraient permettre de cibler les actions nécessaires à la réduction du bronzage artificiel en Europe. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Das translationell kontrollierte Tumorprotein (TCTP) ist ein hochkonserviertes, ubiquitär in Eukaryonten vorkommendes Protein. Seine Bezeichnung geht auf die erstmalige Beschreibung in Tumorzellen zurück und weist zugleich auf seine besondere translationelle Regulation hin. Das zugehörige Gen wird als TPT1 bezeichnet und befindet sich beim Menschen auf dem langen Arm des Chromosom 13. Eine pathophysiologische Bedeutung für TCTP wurde bei Tumorerkrankungen, Erkrankungen des allergischen Formenkreises sowie bei Infektionen durch Parasiten beschrieben. Für diese Arbeit wurde zur Untersuchung grundlegender Regulationsphänomene die TCTP-mRNA des Kaninchens als geeignetes Modell ausgewählt. Es wurden die volllangen TCTP-mRNA1 und 2, die sich in der Länge ihrer 3'UTR unterscheiden, sowie Deletionsvarianten, denen die UTR-Abschnitte fehlen, kloniert. In Proteinbindungsstudien (Electromobility Shift Assays, UV-Crosslinking-Experimente, RNA-Affinitätschromatographie) wurden potentielle Bindungsfaktoren der TCTP-UTRs analysiert. Die an der mRNA des Kaninchens erarbeiteten Ergebnisse wurden durch Untersuchungen an humanen Melanomzellen ergänzt. In in vitro Translationsexperimenten wurde gezeigt, dass die Regulation der TCTP-mRNA durch ihre 5'UTR und 3'UTR2 vermittelt wird. In RNA-Bindungsstudien konnte eine Reihe potentieller Bindungsfaktoren der UTRs charakterisiert werden. Bei Verwendung von Extrakten aus verschiedenen Kaninchengeweben zeigten sich deutliche gewebsspezifische Unterschiede. Frühere Untersuchungen hatten gezeigt, dass es in der Melanomzelllinie MeWo bei der Ausbildung einer Chemoresistenz zu einer Expressionssteigerung des TCTP kommt. In einem ersten Schritt wurde der Beitrag von Transkription und Translation in vergleichenden Northern und Western Blot Analysen untersucht. Auf mRNA-Niveau findet man in den resistenten Zellen eine deutliche Steigerung der Expression im Vergleich zu den sensiblen Zellen. Der mRNA-Menge in den chemosensiblen Zellen steht eine vergleichsweise geringe Menge an Protein gegenüber. Folglich liegt die mRNA in diesen Zellen in einem inaktiven Zustand vor. Es konnten drei Cytoskelettproteine gamma-Actin, beta-Tubulin und alpha-Actinin als Bindungspartner der TCTP-3'UTR in den Melanomzellen identifiziert werden. Eine Bedeutung von TCTP für die Entstehung der Chemoresistenz lässt sich aufgrund seiner anti-apoptotischen Wirkung vermuten. Die Regulation der TCTP-Translation stellt bei durch Cytostatika hervorgerufener Hemmung der Transkription einen wichtigen Pathomechanismus in chemoresistenten Melanomzellen dar. / The translationally controlled tumor protein (TCTP) is a highly conserved protein expressed in all eukaryotic organisms. It was first described in tumor cells showing a special regulation of translation. The chromosomal localisation of the respective human gene TPT1 has been determined (13q14). TCTP has been implicated in cellular processes such as cell growth and apoptosis. Its medical importance has been shown in malignant transformation, allergic reactions and immunity against parasitic organisms. In order to investigate basic mechanisms of translational regulation the rabbit TCTP-mRNA was chosen due to its high homology to its human counterpart. The TPT1 gene is transcribed into two TCTP-mRNAs differing in the length of their 3'untranslated regions. These two mRNAs and variants missing the untranslated regions were cloned into expression vectors. In Electro mobility shift assays, UV-crosslinking assays and RNA affinity purification several TCTP-mRNA binding factors were characterised. Furthermore, the role of TCTP in human chemoresistant melanoma cells was investigated. In cell-free translation assays the importance of the 5'UTR and 3'UTR2 was shown. However, in wheat germ extracts the regulation of the TCTP-mRNA mediated by its 5'UTR is less important. In Electro mobility shift assays and UV-crosslinking assays with radiolabelled transcripts of the untranslated regions great variations in tissue-specific protein binding were found. Recently, TCTP had been implicated in the development of chemoresistance in the human melanoma cell line MeWo. As a first step, the contribution of transcriptional and translational regulation was analysed by comparing TCTP-expression in Northern and Western blot assays. Transcription of the TPT1 gene is increased in chemoresistant melanoma cells whereas translation is inhibited in those cells susceptible to chemotherapeutic agents. Three proteins, gamma-actin, beta-tubulin and alpha-actinin, were identified as factors binding to the TCTP-3'UTR in melanoma cells. For the interaction of these cytoskeleton components their ability to bind intracellular calcium ions could be of great importance. The role of TCTP in the development of chemoresistance can be explained by its anti-apoptotic function. In conclusion, the regulation of TCTP-translation when transcription is blocked by inhibitors of DNA-function is an important mechanism to overcome the effect of these anti-proliferative agents.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-06-19T11:36:44Z No. of bitstreams: 1 470792 - Texto Completo.pdf: 1695613 bytes, checksum: bfea5d57cf26d524d5b14d7d3ac84cdc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-19T11:36:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 470792 - Texto Completo.pdf: 1695613 bytes, checksum: bfea5d57cf26d524d5b14d7d3ac84cdc (MD5) Previous issue date: 2014-03-12 / Melanoma is one of the most aggressive malignant tumors, and its incidence has been increasing steadily in recent years. Usually in the early stages, treatment for melanoma is local surgery with reasonable efficiency. However, treatments such as chemotherapies for advanced melanoma have limited benefits, prolonging the patient's life in a few months. Thus the search for more effective therapies for melanoma is necessary. More recent studies suggest that tumor immune response conducted by subtypes of CD4+ T helper cells subsets have an important role in cancer control. According to tumor infiltrating Th17 and Treg cellsand the cytokines they secrete the tumor microenvironment profile may be suggested anti or pro-tumor activities or exerted by these cells. In this study, we investigated the transcriptional markers of CD4+Foxp3+ T cells and CD4+ROR?t+ T cells in draining lymph nodes of animals throughout the melanoma tumor growth and evaluate whether the combined action of cisplatin (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) and TLR2 (peptidoglycan) or TLR3 (acid-Polyribosilic Polyribocytidilic) or TLR4 (lipopolysaccharide) agonists, can change these parameters. The animals were injected with melanoma cell line B16F10 and according tumor progression the tumor draining lymph node (TDLN) were excised for analysis of Treg and Th17 cells by flow cytometry. Furthermore, we analyzed the survival of animals treated with combined therapies. We found an increase in the percentage and absolute number of Th17 and Treg cells in TDLN according tumor progression, which was consistent with previous studies. Our results indicate that treatment with cisplatin promotes tumor growth by increasing Treg and Th17 cells. Treatment with CDDP plus TLR2 agonist significantly decreases the percentage of Th17 cells in TDLN. We demonstrated here, that combinated CDDP and TLR3 or TLR4 agonist therapy impairs tumor growth and modulate the frequency of these cells by decreasing the percentage of CD4+Foxp3+ T cells. In addition, this combination also showed a modest increase insurvivalof the melanoma bearing mice. These results showed that TLRs agonists may be used in combination with cisplatin as a potential adjuvant capable impair tumor growth in melanoma bearing mice. / Melanoma ? um dos tumores malignos mais agressivos, e sua incid?ncia vem aumentando continuamente nos ?ltimos anos. Geralmente em est?gios iniciais, o tratamento para melanoma ? local, por cirurgia, com razo?vel efic?cia. Contudo, os tratamentos para melanoma em est?gios avan?ados por quimioterapia t?m benef?cios limitados, prolongando a vida do paciente em poucos meses. Assim se faz necess?ria a busca por terapias mais efetivas para melanomas. Estudos mais recentes sugerem que a resposta imunol?gica tumoral realizada pelos subtipos de c?lulas T CD4+ auxiliares possuem papel importante no controle do c?ncer. Conforme o infiltrado tumoral de c?lulas Th17 e Treg e o perfil de citocinas que elas secretam no microambiente tumoral, pode-se sugerir atividades anti ou pr?-tumorais exercidas por essas c?lulas. Neste estudo, n?s investigamos os marcadores transcricionais de c?lulas T CD4+Foxp3+ e c?lulas T CD4+ROR?t+ em linfonodos drenantes de animais com melanoma ao longo do crescimento tumoral e avaliamos se a a??o combinada de cisplatina (cis-diamino-dichloro-platin, CDDP) com agonistas de TLR2 (Peptidoglicano) ou TLR3 (?cido Polyribosilic-Polyribocytidilic) ou TLR4 (Lipopolissacar?deo) podem alterar esses par?metros. Os animais foram injetados com c?lulas de melanoma linhagem B16F10 e conforme a progress?o tumoral os linfonodos drenantes tumorais (TDLN) foram excisados para an?lise de c?lulas Th17 e Treg por citometria de fluxo. Al?m disso, analisamos a sobrevida dos animais com a a??o combinadas das terapias. Encontramos um aumento na porcentagem e n?mero absoluto de c?lulas Th17 e Treg no TDLN conforme a progress?o tumoral o qual foi condizente com estudos anteriores. Nossos resultados indicam que o tratamento apenas com cisplatina, promove o crescimento tumoral atrav?s do aumento de c?lulas Th17 e Treg. O tratamento de cisplatina com agonista de TLR2 diminui consideravelmente a porcentagem de c?lulas Th17 no TDLN. Demonstramos aqui que a combina??o de terapias utilizando CDDP juntamente com agonistas de TLR3 ou TLR4, prejudica o crescimento tumoral e pode modular a frequ?ncia dessas c?lulas atrav?s da diminui??o na porcentagem de c?lulas TCD4+Foxp3+. Adicionalmente, essa combina??o tamb?m mostrou um modesto aumento na sobreviv?ncia dos animais. Esses resultados mostram que agonistas de TLRs podem ser utilizados em combina??o com cisplatina como potencial adjuvante capaz de induzir inibir o crescimento tumoral em modelo de melanoma murino.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 423613.pdf: 493712 bytes, checksum: f0aaf16c071b57eefd3ee2352c888ec8 (MD5) Previous issue date: 2009-03-17 / O melanoma maligno cut?neo se encontra entre as neoplasias que mais aumentam em incid?ncia anual no mundo. V?rios fatores v?m sendo estudados na determina??o de progn?stico, entre eles, a espessura de Breslow, os n?veis de Clark, a presen?a de ulcera??o e a taxa de prolifera??o celular. Esta ?ltima vem ganhando import?ncia nas ?ltimas publica??es, como um fator capaz de determinar a positividade de linfonodo sentinela, al?m do progn?stico. Pouco tem sido estudado, no entanto, seu papel enquanto vari?vel isolada. Este trabalho tem por objetivo estudar a exist?ncia de rela??o preditora entre a Taxa de Prolifera??o Celular (TPC) e a Positividade do Linfonodo Sentinela ( PLS). Foi realizado, para tanto,estudo transversal envolvendo a avalia??o dos exames anatomopatol?gicos de 109 pacientes atendidos pelo Programa Melanoma do HSL-PUCRS no per?odo de Outubro de 2006 at? Outubro de 2008. Foi realizado teste de Chi-Quadrado e Regress?o Log?stica Bin?ria visando identifica??o de vari?vel com capacidade preditora de desfecho, ou seja, Positividade ou Negatividade de Linfonodo Sentinela. As vari?veis que demonstraram valor independente em rela??o ao desfecho foram a Espessura de Breslow ( p = 0,001) e N?veis de Clark ( p = 0,047). A Taxa de prolifera??o celular apresentou rela??o inferior a 5%, com o valor de p mais pr?ximo do desejado ( p = 0,07) em pacientes com Breslow 1-2 mm e idade inferior a 40 anos. Em conclus?o, o taxa de prolifera??o celular dos melanomas malignos cut?neos n?o mostrou rela??o com o desfecho pretendido enquanto vari?vel independente. Este fen?meno estat?stico nos leva a crer que a TPC ? o que chamamos de vari?vel de grupo, ou seja, contribui junto com um grupo de vari?veis para um determinado desfecho. ? poss?vel que, em um grupo selecionado de pacientes com espessura intermedi?ria ( 1-2mm ) e idade jovem ( abaixo de 40 anos), se possa predizer a positividade ou n?o de um g?nglio previamente a realiza??o de pesquisa de linfonodo sentinela.