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Análise de microRNAs músculo específicos em frações plasmáticas antes e após corrida de meia maratona

Oliveira Júnior, Getúlio Pereira de 07 August 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-09-28T12:36:49Z No. of bitstreams: 1 2012_GetulioPereiraOliveiraJunior.pdf: 1488728 bytes, checksum: 866c712e69e173d60de805b39b1e1412 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-03T13:59:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_GetulioPereiraOliveiraJunior.pdf: 1488728 bytes, checksum: 866c712e69e173d60de805b39b1e1412 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-03T13:59:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_GetulioPereiraOliveiraJunior.pdf: 1488728 bytes, checksum: 866c712e69e173d60de805b39b1e1412 (MD5) / O papel do exercício físico de endurance é bem estabelecido na promoção da saúde e proteção contra doenças, principalmente aquelas associadas ao sistema cardiovascular. No entanto, são pouco conhecidos os mecanismos moleculares relacionados a esta importante atividade física para a saúde humana. Os miRNAs apareceram na literatura científica nos últimos 19 anos e hoje são caracterizados com importantes efetores no controle da expressão gênica em nível pós-transcricional. Mais recentemente, a partir de 2008, os miRNAs foram identificados no soro ou plasma e diferentes padrões tem sido relacionados com estados patológicos diversos sendo estudados como biomarcadores promissores. Estes miRNAs circulantes têm o potencial de serem transferidos horizontalmente de um tecido para outro, levando mensagens ainda não bem compreendidas pela comunidade cientifica. Neste projeto, foi analisado o nível de 5 miRNAs (miR-16, -let-7a, -1, -133a, -206) circulantes em duas frações plasmáticas (sobrenadante e vesicular) de 10 atletas recreacionais após a corrida de meia maratona (21 km), assim como foi analisada a estabilidade desses miRNAs após o tratamento com proteinase K. Os resultados mostraram diminuição dos miRNAs miR-16, miR-1, miR-133a, leve aumento no miR-let7a e um grande aumento no miR-206 na fração vesicular após a corrida. O tratamento com proteinase K levou a forte redução nos níveis plasmáticos de miR-16 e miR-133a na fração sobrenadante do plasma indicando que estes miRNAs podem estar circulando no plasma associados à complexos proteicos. Já os miR-let7a, miR-1 e miR-206 não apresentaram forte redução nos níveis plasmáticos nas frações sobrenadante e vesicular do plasma após o tratamento com Proteinase K indicando que estes miRNAs circulam no plasma associados à vesículas lipídicas. Os resultados encontrados sugerem que os níveis plasmáticos de miR-206 associado a fração vesicular aumentam fortemente como resposta ao exercício físico de endurance, sendo o miRNA músculo específico estudado que apresentou maior resposta após o estímulo do exercício. Seria importante compreender os genes alvos regulados pelo miR-206 e também os tecios alvos das microvesículas transportadoras de miR-206 e assim buscar entender os possíveis mecanismos deste miRNA na adaptação ao exercício físico de endurance, assim como sua participação nos benefícios causados pela atividade física. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The role of endurance exercise is well established in health promotion and protection against diseases, especially those associated with the cardiovascular system. However, little is known about the molecular mechanisms related to how physical activity is essential for human health. MiRNAs appeared in the scientific literature over the past 19 years, and today are characterized by important effectors in the control of gene expression in post-transcriptional level. More recently, from 2008, miRNAs have been identified in serum or plasma and different patterns have been correlated with various disease states being studied as promising biomarkers. These circulating miRNAs have the potential to be transferred horizontally from one tissue to another, taking messages not yet well understood by the scientific community. In this project, we analyzed the level of five circulating miRNAs (miR-16,-let-7a, -1,-133a, -206) into two plasma fractions (supernatant and vesicular) of 10 recreational athletes after running a half marathon (21 km), as well as the stability of such miRNAs after treatment with proteinase K. The results showed a decrease of miRNAs miR-16, miR-1, miR-133a, slight increase in let7a and a very large increase in miR-206 in the vesicular fraction after the marathon. The treatment with proteinase K led to a strong decrease in plasma levels of miR-16 and miR-133a in the plasma supernatant fraction indicating that this circulating plasma miRNAs may be associated with protein complexes. Otherwise, miR-let7a, miR-1 and miR-206 had no substantial reduction in plasma levels in the supernatant and vesicular plasma fractions after treatment with proteinase K, which indicates that these miRNAs circulate in plasma associated with the lipid vesicles. The results suggest that plasma levels of miR-206 associated with vesicular fraction increases strongly in response to endurance exercise, being the muscle-specific miRNA studied that showed higher response after the exercise stimulus. It would be important to understand the target genes regulated by miR-206 and also the tissue targets of microvesicles carriers of miR-206 and thus seek to understand the possible mechanisms of miRNA in adaptation to endurance exercise, as well as their participation in the benefits caused by physical exercise.
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Identificação de RNAs não-codificadores por modelos de covariância com prioris Dirichlet adaptadas a grupos de ncRNAs com estruturas secundárias similares = Identifying non-coding RNAs using covariance models with Dirichlet priors specific to groups of ncRNAs of similar secondary structures / Identifying non-coding RNAs using covariance models with Dirichlet priors specific to groups of ncRNAs of similar secondary structures

Lessa, Felipe Almeida 24 August 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Exatas, Departamento de Ciência da Computação, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-12-13T13:01:52Z No. of bitstreams: 1 2012_FelipeAlmeidaLessa.pdf: 5150375 bytes, checksum: 4edd5817b50694327530a7458871646a (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-12-20T12:24:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_FelipeAlmeidaLessa.pdf: 5150375 bytes, checksum: 4edd5817b50694327530a7458871646a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-20T12:24:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_FelipeAlmeidaLessa.pdf: 5150375 bytes, checksum: 4edd5817b50694327530a7458871646a (MD5) / RNAs não-codificadores (ncRNA) são macromoléculas biológicas que, apesar de não codificarem proteínas, realizam funções regulatórias importante nas células. A ferramenta Infernal é principal referência em buscas de ncRNAs por homologia, e o banco de dados Rfam um dos mais importantes repositórios de ncRNAs. Neste trabalho, mostramos que há clusters de famílias de ncRNAs estruturalmente bem similares no Rfam, adaptamos a ferramenta Infernal com novas distribuições a priori específicas a certos grupos de famílias de ncRNAs baseados nesses clusters e mostramos que essas prioris específicas a certos grupos podem tornar o Infernal mais sensível e específico. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Non-coding RNA (ncRNA) molecules do not code for proteins, but instead play an important regulatory role in cells. Infernal is the main tool for homology searches for ncRNAs, and Rfam is one of the main ncRNA databases. On this work, we show that there are clusters of structurally very similar ncRNA families on Rfam, adapt Infernal with new priors constructed especially for certain groups of ncRNA families (based on these clusters) and show that these group-specific priors may improve Infernal’s specificity and sensitivity.
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Transformação genética de feijão-caupi (Vigna unguiculata L. Walp) visando à introdução de genes de resistência a viroses

Sousa, Andréa Rachel Ramos Cruz 26 March 2013 (has links)
Tese (doutorado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-03T10:38:20Z No. of bitstreams: 1 2013_AndreaRachelRamosCruzSousa.pdf: 2391353 bytes, checksum: f365e3ff1bb9b770b9d24960c68272a9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-07-03T11:48:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AndreaRachelRamosCruzSousa.pdf: 2391353 bytes, checksum: f365e3ff1bb9b770b9d24960c68272a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-03T11:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AndreaRachelRamosCruzSousa.pdf: 2391353 bytes, checksum: f365e3ff1bb9b770b9d24960c68272a9 (MD5) / O feijão-caupi (Vigna unguiculata L. Walp.) é conhecido nas regiões Norte e Nordeste do Brasil como feijão-de-corda, feijão-verde, feijão macassar ou feijão-de-praia. É uma planta muito importante na alimentação humana por ser fonte natural de proteínas, calorias, vitaminas e minerais. Dentre as doenças que mais causam perdas para a cultura destacam-se as viroses, e dentre elas o mosaico severo (Cowpea severe mosaic virus- CPSMV) que pode levar a perdas de até 100% da produção nas áreas afetadas, e a virose causada pelo Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), que tem importância devido à sua ampla ocorrência. O presente trabalho teve como objetivo a obtenção de plantas de feijão-caupi geneticamente modificadas (GM) resistentes ao CPSMV e ao CABMV, por meio da estratégia RNA interferente. Nesse trabalho foram obtidas 15 linhagens GM, sendo testadas 14 delas para avaliar a resistência aos vírus. Algumas linhagens apresentaram alta resistência para as condições de inoculação severa sem alteração na produção de vagens e sementes viáveis, enquanto que para as plantas controle a inoculação severa resultou na morte de todas as plantas. As linhagens GM também apresentaram tolerância ao herbicida imazapyr na concentração de 200 g.ha-1, o que foi considerado um resultado promissor, tendo em vista que a cultura do feijão-caupi atualmente encontra-se em expansão no cenário agrícola nacional. Nos testes de Southern blot, northern blot e dot blot foi confirmada a integração dos transgenes no genoma das linhagens, assim como a presença dos pequenos RNA interferentes, o que tem relação direta com a alta tolerância apresentada para os vírus. A análise da progênie realizada pelo teste qui-quadrado não demonstrou padrão de segregação Mendeliana na geração F1. Isso pode ser explicado devido à ocorrência de quimerismos nos transformantes primários (F0). Os resultados obtidos sugerem a possibilidade de utilização das melhores linhagens GM em experimentos em nível de campo visando selecionar genotipos promissores que possam fazer parte de programas de melhoramento da cultura. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cowpea (Vigna unguiculata L. Walp.), known as feijão-de-corda, feijão-verde, or feijão macassar and feijão-de-praia in the North and Northeastern regions of Brazil, is an important crop for human nutrition. Besides serving as a natural source of protein and energy, it is rich in vitamins and minerals. Although it is a widespread crop which can be grown in areas of extreme climatic and environmental conditions, it is confronted with certain problems like pests and diseases among others. Among diseases that devastate the crop are those caused by Cowpea severe mosaic virus (CPSMV) and Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), which together may cause 100% losses in production. This work sought to develop a strategy using RNA interference to generate genetically modified (GM) cowpea plants which are resistant to CSMV and CABMV. Fifteen (15) GM lines were obtained, of which 14 were tested for resistance against the viruses. While some of the lines showed high degree of resistance without any alteration in seed pod development and seed germination, control plants died soon after inoculation with the viruses. The GM lines were also tolerant to the herbicide imazapyr at a concentration of up to 200 g/ha, showing potential in the production system of cowpea given the continuous nationwide expansion of the crop. Southern blot analysis confirmed the integration of the transgenes inserted in the genome of the lines. We also detected small interfering RNAs (siRNAs) responsible for gene silencing of the viruses and thus conferring resistance to the plant. Progeny analysis using chi-square test did not show Mendelian segregation in F1 generation. This may be attributable to the possible existence of chimeras in the primary transformants (F0). These results may be applied in field experiments using superior lines developed here for breeding programs involving the crop.
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Análise molecular em pacientes com neoplasias hematopoiéticas : alterações cromossômicas e expressão do gene SIDT1

Magalhães, Stenia Gonçalves 03 July 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-11-12T13:47:22Z No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-20T13:20:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-20T13:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_SteniaGoncalvesMagalhaes_Parcial.PDF: 33635 bytes, checksum: c1ca8c430aea7ee69607855309d66338 (MD5) / A leucemia é um grupo heterogêneo de neoplasias hematológicas resultante de várias alterações genéticas. A análise das alterações cromossômicas em pacientes com leucemia tem uma aplicação direta no diagnóstico, prognóstico e tratamento. Além disso, o estudo da expressão gênica oferece uma importante fonte para compreender as consequências moleculares das alterações genéticas em leucemia. Os objetivos desse trabalho foram: (a) identificar a presença de alterações cromossômicas em pacientes ao diagnóstico com hipótese de LLA B, LMA e LMC atendidos no Hospital de Base do Distrito Federal, possibilitando a incorporação do protocolo de diagnóstico molecular; (b) analisar o perfil da expressão do gene SIDT1 em amostras clínicas leucêmicas ao diagnóstico, linhagens de células leucêmicas e em indivíduos não leucêmicos. Deste modo, a detecção das alterações cromossômicas foi realizada em 48 amostras com suspeita de leucemia. As alterações cromossômicas recorrentes detectadas foram: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) e BCR-ABL1, p210 (9). A análise quantitativa da expressão do gene SIDT1 foi realizada em 80 amostras a partir de três grupos de pacientes leucêmicos (LLA, LMA e LMC) antes de iniciar o tratamento, sete linhagens de células leucêmicas (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, REH, HL-60 e K562) e amostras de indivíduos não leucêmicos, as quais foram utilizadas como controle. Os resultados da análise demonstraram que o gene SIDT1 foi regulado negativamente nas sete linhagens de células leucêmicas humanas analisadas, principalmente para as linhagens de células 697, REH e HL-60 quando comparado com as amostras não leucêmicas. A linhagem celular K562 não apresentou qualquer expressão do gene SIDT1. Nas amostras clínicas analisadas também foi observado que o gene SIDT1 foi regulado negativamente principalmente na LMA. O estudo das alterações cromossômicas possibilitou incorporar a metodologia de diagnóstico molecular no Hospital de Base do Distrito Federal, como exame de rotina dos pacientes com suspeita de leucemia para auxiliar na avaliação dos pacientes. Estudos futuros são necessários para compreender a desregulação do gene SIDT1 ocasionada por diferentes tipos de alterações cromossômicas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leukemia is a heterogeneous group of hematologic malignancies resulting from multiple genetic alterations. The analysis of chromosomal abnormalities in leukemia patients has a direct application in the diagnosis, prognosis and treatment. Furthermore, the study of gene expression provides an important source for understanding the molecular consequences of genetic alterations in leukemia. The aims of this study were: (a) to identify the presence of chromosomal abnormalities in patients with a presumptive diagnosis of B ALL, AML and CML treated at Hospital de Base do Distrito Federal, enabling the incorporation of molecular diagnostic protocol; (b) to analyze the expression profile of SIDT1 gene in clinical samples of leukemia patients at diagnosis, leukemic cell lines and in non-leukemic. Therefore, the detection of chromosomal abnormalities was performed on 48 samples of suspected leukemia. The recurrent chromosomal alterations were detected: BCR-ABL1, p190 (1), E2A-PBX1 (1), PML-RAR_ (2) and BCR-ABL1, p210 (9). Quantitative analysis of SIDT1 gene expression was performed in 80 samples from three groups of leukemia patients (ALL, AML and CML) before starting treatment, seven lines of leukemic cells (697, RS4, 11, Nalm-6, Jurkat, HEK, HL-60 and K562) and non-leukemic samples from individuals, which were used as controls.. The analysis results showed that the SIDT1 gene is negatively regulated in the seven human leukemia cell lines examined, especially for cell lines 697, HL-60 and REH when compared to the non-leukemic samples. The K562 cell line showed no expression of the SIDT1 gene. SIDT1 gene has also been observed to be negatively regulated in the samples, especially in AML. The study of chromosomal abnormalities allowed to incorporate the molecular diagnostics methodology in the Hospital de Base do Distrito Federal, as a routine examination for patients with suspected leukemia to assist in the evaluation of patients. Future studies are needed to understand the dysregulation of SIDT1 gene caused by different types of chromosomal alterations.
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Estudo teórico das contribuições energéticas envolvidas na formação dos complexos : [Mg(H2O)n-base nucleica]2+

Oliveira, Vytor Pinheiro January 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-04-07T15:28:39Z No. of bitstreams: 1 2013_VytorPinheiroOliveira.pdf: 3505319 bytes, checksum: b33b0f7e6c2abf22d80df49de484fb7b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-04-28T16:28:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_VytorPinheiroOliveira.pdf: 3505319 bytes, checksum: b33b0f7e6c2abf22d80df49de484fb7b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-28T16:28:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_VytorPinheiroOliveira.pdf: 3505319 bytes, checksum: b33b0f7e6c2abf22d80df49de484fb7b (MD5) / Atualmente, apenas estudos teóricos de alto nível são capazes de tratar de maneira acurada interações específicas entre o Mg2+ e os ácidos nucleicos. Esses estudos são importantes para desvendar o papel do Mg2+ no dobramento e no mecanismo de reação de ribozimas. O presente trabalho tem como objetivo definir uma estratégia computacional capaz de descrever as contribuições energéticas envolvidas nas reações de complexação do Mg2+ com as bases nucleicas timina, uracila, guanina, citosina e adenina nos sistemas [Mg(H2O)n-base nucleica]2+ (n=6,5 e 4) com a melhor razão possível entre acurácia e custo computacional. A combinação entre as energias eletrônicas de reação obtidas pelo método MP2(FC)/6-31+G(2d,p) e as correções térmicas do cálculo de frequência B3LYP/6-311G(2d,d,p) foram capazes de fornecer resultados semelhantes ao método de alto custo computacional CBS-QB3. As contribuições do solvente foram estimadas pelo modelo de contínuo CPCM; porém a definição da cavidade do solvente nos métodos PCM pode gerar desvios absolutos e relativos difíceis de serem estimados. Independentemente do modo de coordenação, o magnésio interagiu mais fortemente com os sítios O2 da citosina, O6 e N7 da guanina e mais fracamente com sítios da adenina, timina e uracila. Também observou-se que a aproximação de pares empregada por campos de força subestimou a energia de interação dos sistemas [Mg(H2O)5-base nucleica]2+ em até 40% e mesmo no solvente contínuo os efeitos de polarização e transferência de cargas entre o metal e as bases nucleicas foram significativos. A estratégia computacional aqui definida poderá ser aplicada a sistemas análogos, assim como a sistemas maiores que envolvam interações similares. Os resultados apresentados poderão ser utilizados para parametrizar e validar outros métodos de menor custo computacional, como campos de força clássicos e métodos semi-empíricos. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Currently, only high-level theoretical studies are able to treat specific interactions between Mg2+ and the nucleic acids accurately. These studies are important to unveil the role of Mg2+ in the folding and in the reaction mechanism of ribozymes. The present work is aimed at defining a computational strategy capable of describing the energies involved in the complexation reaction of Mg2+ with nucleic bases thymine, uracil, guanine, cytosine and adenine, in [Mg(H2O)n-nucleobase]2+ (n=6,5 and 4) systems with the best possible ratio between accuracy and computational cost. The combination between reaction electronic energies obtained at MP2(FC)/6-31+G(2d,p) level with thermal corrections calculated by B3LYP/6-311G(2d,d,p) frequencies were able to provide results similar to the high computational cost CBS-QB3. The solvent contributions were estimated using the CPCM. However, the electrostatic cavities definitions can produce absolute and relative errors in solution free energies difficult to be evaluated. Regardless of the coordination mode, magnesium interacted stronger at the cytosine O2, O6, and guanine N7 sites and weaker in adenine, thymine and uracil sites. It was also noted that the pairwise additive approach used by force fields underestimated the binding energy of [Mg(H2O)5-nucleobase]2+ systems by as much as 40% and even in the continuum solvent, polarization and charge transfer effects between metal and nucleic bases are significant. The method defined herein can be applied to study analog systems, as well as larger systems involving similar interactions. The presented results can be used to parameterize and validate other methods of lower computational cost, such as semi-empirical and classical force fields.
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Desenvolvimento de sistemas para transformação genética de mamona (ricinus communis l.) – as bases para o silenciamento da ricina.

Sousa, Natália Lima de 04 September 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2013. / Submitted by Marina Lima (marinalm34@gmail.com) on 2014-09-12T14:18:16Z No. of bitstreams: 1 2013_NataliaLimadeSousa.pdf: 3031304 bytes, checksum: 04e83c6b880e77c6b74afc2aa6d85b3f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-09-12T14:38:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_NataliaLimadeSousa.pdf: 3031304 bytes, checksum: 04e83c6b880e77c6b74afc2aa6d85b3f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-12T14:38:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_NataliaLimadeSousa.pdf: 3031304 bytes, checksum: 04e83c6b880e77c6b74afc2aa6d85b3f (MD5) / A mamona (Ricinus communis L.) é uma oleaginosa de grande importância na indústria por seu óleo apresentar características únicas como alta viscosidade, densidade e estabilidade. A torta de mamona é o subproduto de maior importância da cultura usada principalmente como adubo, com grande potencial de uso como ração animal. No entanto, a presença de ricina (proteína tóxica) no endosperma das sementes da mamona, inviabiliza a utilização em larga escala do seu principal subproduto, sendo necessário um processo de destoxificação da torta. Porém os vários métodos que têm sido desenvolvidos não são viáveis ao nível industrial por serem caros ou ineficientes. Uma alternativa para a redução do teor de ricina nas sementes de mamona é o silenciamento do gene da ricina por RNA interferente, mas os trabalhos de transformação genética de mamona na literatura são escassos e a cultura de tecidos da mamona precisa ser aperfeiçoada. O objetivo deste trabalho foi desenvolver sistemas de transformação genética de mamona e otimizar a cultura de tecidos para produzir plantas transgênicas. Embriões zigóticos maduros da cultivar EBDA-MPA-34 foram cultivados em meio MS suplementado com diferentes citocininas, BAP (0,5 mg.L-1; 2,5 mg.L-1 ou 5,0 mg.L-1) ou TDZ (0,5 mg.L-1; 1,0 mg.L-1 ou 2,5 mg.L-1) e controle (sem fitorregulador). Três explantes por tratamento foram analisados por microscopia eletrônica de varredura após diferentes períodos de cultivo para avaliar a indução de gemas. As cultivares BRS Nordestina, BRS Paraguaçu e EBDA-MPA-34 foram utilizadas para transformação genética usando genes marcadores que conferem tolerância ao IMZ ou higromicina em vetores para bombardeamento ou transformação via agrobactéria, respectivamente. Ambos os vetores contêm uma construção de RNAi onde a região mais conservada do gene da ricina foi clonada de forma repetida e invertida para formar a estrutura de grampo, e está sob domínio do promotor 35SCaMV. Os sistemas de biobalística e A. tumefaciens foram utilizados para transformar embriões zigóticos maduros de mamona previamente induzidos na presença de diferentes citocininas. Foram obtidos seis brotos transformados via biobalística, um da variedade BRS Nordestina confirmado por PCR e os outros cinco da variedade EBDA-MPA-34 expressando gus. Para promover superbrotamento em mamona o melhor fitorregulador foi TDZ e dentre as cultivares testadas a EBDA-MPA-34 foi a melhor opção para transformação genética nas condições testadas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Castor bean (Ricinus communis L.) is an oilseed crop of great importance in the industry because of the oil unique features like the high viscosity, density and stability. The castor meal is the most important byproduct of the culture, being used mainly as a fertilizer, with great potential for use as animal feed. However, the presence of ricin (a toxic protein) in the endosperm of the seeds of castor bean, prevents the large scale use of its main by-product, requiring detoxification process of the meal. However the various methods that have been developed are not viable at industrial level because they are expensive or inefficient. An alternative to reducing the amount of ricin in the seeds of castor beans is the ricin gene silencing by RNA interference, but the genetic transformation of castor literature is scarce and the tissue culture of castor needs to be improved. The aim of this study was to develop genetic transformation systems for castor and optimize tissue culture to produce transgenic plants. Mature zygotic embryos of cultivar EBDA-MPA-34 were cultured on MS medium supplemented with different cytokinins, BAP (0.5 mg L-1, 2.5 mg L-1 or 5.0 mg L-1) or TDZ (0.5 mg L-1, 1.0 mg L-1 or 2.5 mg L-1) and control (without plant regulator). Three explants per treatment were analyzed by scanning electron microscopy after different periods of cultivation to assess bud induction. Cultivars BRS Nordestina, BRS Paraguaçu and EBDA-MPA-34 were used for genetic transformation using marker genes that confer resistance to hygromycin or imazapyr in vectors for transformation via Agrobacterium or biolistic, respectively. Both vectors contain a RNAi construct where the most conserved region of the ricin gene has been cloned and inverted repeatedly to form the clamp structure and is under the control of the promoter 35SCaMV. Biolistic and A. tumefaciens systems were used to transform mature zygotic embryos of castor previously induced in the presence of different cytokinins. Six transgenic plants were obtained via biolistic one of the variety BRS Nordestina was positive by PCR and another five of the variety EBDA-MPA-34 expressing gus. To promote the best shoots in castor plant regulator TDZ and is among the cultivars tested EBDA-MPA-34 was the best option for genetic transformation in the conditions tested.
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Detecção e caracterização do rotavírus em Aracaju/Sergipe, Brasil, 2010 a 2012

Rodrigues, Alda 27 May 2014 (has links)
Rotavirus diarrhea is still an important cause of mortality in children worldwide, responsible each year for about 500,000 deaths. The introduction of the vaccine against the virus could lead to a reduction in morbidity and mortality associated with rotavirus. In Brazil, the Rotarix ® rotavirus vaccine, which contains the genotype G1P [8], was included in the national programme of immunization since March 2006. This project aims to evaluate clinical and epidemiological data related to infection by RVA, rotavirus genotypes prevalent. The research project is a cross-sectional study in which children with acute diarrhoea were recorded prospectively from 2010 to 2012. The location of collection of fecal samples was the Hospital of urgency of Sergipe in Pediatric Emergency sector, in Aracaju/SE. The clinical and epidemiological information was obtained through a questionnaire. The clinical severity was determined by a scoring system 20, calculated from the survey point. It was verified the episodes of acute diarrhea and stool samples collected for research and genotyping of rotavirus by ELISA and RT-PCR method.Descriptive statistical calculations were carried out to define the epidemiology of rotavirus. EIA positive results were found in 78 of the 790 samples. The most frequent genotype was G2 P [4], followed by the G8 genotype P [4], P [8] G1, G3 P [8], G1 P [6]. Mixed infections were detected G2 P [4] P [8], P [4] and G1G2 G2G8 P [4] and in general there was a cocirculação of different genotypes in the years studied, moreover, shows an alternation between the genotypes every year. The results obtained in this study observed a variability of positive cases distributed, confirming that the seasonality in the region is not remarkable. Therefore, new strains of rotavirus are emerging and associated with severe diarrhea. For this reason, monitoring is required to follow changes in the epidemiology of rotavirus. / A diarreia por rotavírus ainda é uma importante causa de mortalidade infantil em todo o mundo, sendo responsável a cada ano por cerca de 500.000 mortes. A introdução da vacina contra o vírus pode levar a uma redução da morbidade e mortalidade associadas ao rotavírus. No Brasil, a Rotarix®, a vacina contra o rotavírus, que contém o genótipo G1P[8], foi incluído no programa nacional de imunizações em março de 2006. Este projeto teve como objetivo avaliar dados clínicos, epidemiológicos e genótipos predominantes relacionados à infecção por RV-A. O projeto de pesquisa é um estudo transversal em que as crianças com diarreia aguda foram registrados prospectivamente a partir de 2010 a 2012. O local de coleta das amostras fecais foi o Hospital de Urgência de Sergipe no setor de Urgência Pediátrica, em Aracaju/SE. A gravidade clínica foi determinada por um sistema de pontuação 20, calculado a partir do ponto de questionário. Foram verificados os episódios de diarreia aguda e coletadas amostras de fezes para pesquisa e genotipagem de rotavírus pelo método ELISA e RT-PCR. Cálculos estatísticos descritivos foram realizados para definir a epidemiologia do rotavírus. Resultados positivos foram encontrados em 78 das 790 amostras. O genótipo mais frequente foi G2P[4], seguido do genótipo G8P[4], G1P[8], G3P[8], G1P[6]. Foram detectadas infecções mistas G2 P[4] P[8], G1G2 P[4] e G2G8 P[4] e de um modo geral observou-se uma cocirculação de distintos genótipos nos anos estudados, além disso, nota-se uma alternância entre os genótipos a cada ano. O resultado obtido neste estudo observou uma variabilidade dos casos positivos distribuídos, confirmando que a sazonalidade na região não é marcante. Portanto, novas cepas de rotavírus estão surgindo e associados à diarreia grave. Por esta razão, a vigilância contínua é necessária para acompanhar as mudanças na epidemiologia do rotavírus.

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