Orientador: Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T00:33:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_ElaineCristinaLeite_M.pdf: 8127408 bytes, checksum: d26ef381b72f32412160809bdf847aed (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi estudar a distribuição da óxido nítrico sintase na junção neuromuscular (JNM) de camundongos normais e da linhagem mdx usando um anticorpo específico contra a enzima óxido nítrico sintase neuronal (anti-nNOS) e verificar possíveis alterações na expressão desta enzima nos músculos dos camundongos distróficos da linhagem mdx. Os músculos estemomastóide de camundongos adultos das linhagens mdx e C57BL/IO foram marcados com rodamina-a-bungarotoxina para observação dos receptores de acetilcolina (AChRs) e com anticorpo primário monoclonal anti-nNOS para localização da nNOS. A microscopia confocal de tluorescência demostrou que a nNOS estava localizada no sarcolema dos músculos esqueléticos de camundongos normais e mdx. Na JNM a nNOS foi detectada na região pré-sináptica, cobrindo os braços dos AChRs. Nos animais mdx, a expressão da nNOS estava reduzida no sarcolema e na região pré-sináptica. Em músculos controles desnervados, a nNOS continuou presente na região pré-sináptica e no sarcolema. Não foram observadas alteraçães qualitativas na expressão da enzima nos músculos desnervados. Esses resultados mostram que a nNOS está presente na região pré sináptica da JNM, provavelmente nas células de Schwann terminais e que a expressão da nNOS na JNM dos animais mdx está diminuída. A associação entre a nNOS e componentes juncionais, tais como as células de Schwann terminais, pode abrir novas perspectivas nos estudos da biologia dos músculos distróficos / Abstract: The airn of the present investigation was to study the distribution of nitric oxide synthase at the neuromuscular junction (NMJ) of mdx and normais animaIs by using a specific antibody against the neuronal isoform of nitric oxide synthase (nNOS) and verify whether nNOS expression was altered in dystrophic skeletaI muscle of mdx mice. Stemomastoid muscles of adult mdx and C57BL/IO mice were labened with rhodamin-a.-bungarotoxin for acetylcholine receptors (AChRs) detection and with anti-nNOS for nNOS observation. Fluorescence confocal microscopy demonstrated that nNOS immunoreactivity was mainly localized at the sarcolemma of normal and dystrophin-deficient skeletal muscles ftom mdx mice. At the NMJ, immunostaining was detected at the pre-synaptic region covering AChRs. In mdx animaIs, nNOS expression was greatly reduced in both sarcolemma and the pre-synaptic region. In controls denervated muscles, nNOS immunostaining was still present at the pre-synaptic region and at the sarcolemma. No qualitative changes in nNOS expression were observed in denervated muscles. These results show that nNOS is expressed at the pre-synaptic region of the NMJ, probably by terminal Schwann cens and that in muscles of mdx animaIs the junctional nNOS expression is also reduced. The association between nNOS and neuromuscular junction components, such as terminal Schwann cens, may open new perspectives to the better understanding of the biology of dystrophic muscles / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Heitor Moreno Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 YugarToledo_JuanCarlos_M.pdf: 19212530 bytes, checksum: f7040f40cfc7e9194c28b7aa358fc601 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O tabagismo, o diabete melito e a hipertensão arterial são reconhecidos como importantes fatores de risco para aterosclerose e doença cardiovascular precoce. Tabagistas de grau importante, diabéticos não-compensados e hipertensos não-controlados, neste estudo, mostraram reduzida vasodilatação arterial como resultado de disfunção endotelial. Avaliou-se o diâmetro e o fluxo da artéria braquial em resposta ao estímulo mecânico (dependente do endotélio) e farmacológico, pós-nitroglicerina (não- dependente do endotélio), em indivíduos saudáveis, tabagistas, diabéticos não- insulino-dependentes (tipo 2) não-compensados e hipertensos essenciais não- controlados. Níveis plasmáticos de nitritos/nitratos, GMPc e tromboxano B2foram quantificados. Sessenta pacientes (34M e 26F), com idade entre 22 e 65 anos (x=48.1) foram alocados em quatro grupos: 1) Controle: n=15; 2) Tabagistas de grau importante (maior que 20 cigarros por dia): n=15; 3) Diabéticos não-insulino-dependentes não-compensados glicemia>140rng/dl e hemoglobina glicosilada maior que 8.0%): n=15; 4) Hipertensos essenciaisnão-controlados: n=15. o diâmetro da artéria braquial foi mensurado pela técnica de uhra-sonografia de aha resolução antes e após hiperemia reativa e administração de nitroglicerina sublingual. Tabagistas de grau importante, diabéticos tipo 2 não-compensados e hipertensos essenciais não-controlados mostraram reduzida vasodilatação dependente do endotélio (8.0 ± 2.5%, 5.7±2.5% e 7.2±3.3%, respectivamente) comparados ao grupo-controle (12.0±3.3%)(P<0.001). Tabagistas tiveram uma resposta não-dependente do endotélio normal comparada ao grupo controle (25.0±78.3% vs 25.5±9.2%). Diabéticos tipo 2 não-compensados e hipertensos essenciais não-controlados tiveram reduzida resposta não-dependente do endotélio (17.2±6.8% e 16.9 ±6.9%, respectivamente) comparados ao grupo controle (25.59.2%) (P<0.005).Os níveis de GMPc e tromboxano B2não mostraram diferença nos quatro grupos, mas as concentrações de nitritos/nitratos estavam aumentadas em diabéticos, se comparados ao grupo-controle (266 ± 47 µ .1Mvs 125 ± 22 µ M)(P<0.005). Diminuição da resposta vasodilatadora dependente do endotélio foi semelhante em tabagistas, diabéticos tipo 2 não-compensados e hipertensos essenciais não-controlados, mas somente os tabagistas tiveram resposta não- dependente endotélio normal / Abstract: Cigarette smoking, non-insulin-dependent diabetes mellitus and essential hypertension are stablished risk factors for atherosclerosis and premature cardiovascular disease. Heavy smokers, uncompensated diabetics and patients with uncontrolled essential hypertension show impaired arterial vasodilatation which results ftom endothelial dysfunction, a key factor in early atherogenesis.We evaluated the brachial artery diameter and flow in response to mechanical (endothelium-dependent) and pharmacological (endothelium-independent) stimuli in healthy subjects and in groups with smoking, noninsulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM) and essential hypertension. Nitrite/nitrate, cGMP and thromboxane B2 levelswere quantified. sixty patients (34M and 26F) aged 22-65 years old (x =48.3) were classified into four groups: 1) Controls-n=15, 2) Heavy smokers-n=15, 3) Uncompensated diabeticsn= 15 (glycemia>140rng/dl and glycosylated haemoglobin >8.0 %), and 4) Patients with uncontrolled essential hypertension - n=15. Brachial artery diameter was measured by a high resolution ultrasound technique before and afier reactive hyperemia and glyceryl trinitrate (Nitrostat, 0.4 mg) administration. Heavy smokers, uncompensated diabetics and uncontrolled hypertensive patients showed impaired flow-dependent vasodilatation (8.0 ± 2.5%, 5.7 ± 2.5% and 7.2 ± 3.3%,respectively) compared to the controls (12.0 ± 3.3%)(p<0.001). Smokers had a normal endothelium-independent response compared to the controls (25.0 ± 78.3% vs 25.5 ± 9.2%). Uncompensated diabetics and patients with uncontrolled essential hypertension had an impaired endothelium independent response (17.2 ± 6.8% and 16.9 ± 6.9%, respectively) compared to the controls (25.5 ± 9.2%)(P<0.005). The levels of cGMP and thromboxane B2 were not different in the four groups, but nitrite/nitrate concentrations also were increased in diabetics compared to the controls (266 ± 47 µ M vs 125 ± 22 µ M) (P<0.005). Smokers, uncompensated diabetics and uncontrolled hypertensive patients showed a similar endothelium-dependent response, but only smokers had unimpaired endothelium-independent functions / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Heitor Moreno Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T14:49:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Favarelli_MairaHelenaCittadino_M.pdf: 1506546 bytes, checksum: df1664eb436c08e1fe377ca91fcc136c (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: É desconhecida a participação do endotélio na patogênese da hipertensão arterial HA resistente. Neste estudo, pacientes com HA diagnosticada como refratária ao tratamento foram encaminhados ao Ambulatório de Farmacologia Cardiovascular para confirmação diagnóstica baseada no seguinte método: monitorização arterial de pressão arterial por 24 horas (MAPA, sistema Space Labs ¿ USA), antes e após a administração oral vigiada dos fármacos prescritos pelo médico assistente do paciente, na presença do pesquisador. Hipertensos leves/moderados foram utilizados como controles. As alterações ocorridas no remodelamento vascular (em nível de vasos) foram obtidas pelo método ultrassonográfico. Através do ecocardiograma, foram estudadas as possíveis alterações a nível de miocárdio. Selecionou-se 60 voluntários, de ambos os sexos, com idade entre 18 e 60 anos alocados em grupos: 1) Controle (normotensos): n=15; 2) hipertensos leves: n=15 e 3) hipertensos refratários: n=15. Pela manhã, em jejum, antes da administração das medicações rotineiramente ingeridas pelos pacientes, foram coletadas amostras de sangue venoso (10 ml/amostra) para realização de exames bioquímicos. Todos os pacientes HAL e HR estavam devidamente medicados e controlados com as seguintes drogas anti-hipertensivas: Diuréticos tiazídicos, inibidores da enzima conversora de angiotensina (IECA), antagonistas de angiotensina II, bloqueadores de canais de cálcio e ß-bloqueadores. Foram realizadas nestas amostras a quantificação de tromboxano B2, GMPc e nitratos e nitritos pelo método ELISA. Análise de variância para medidas repetidas ou amostras independentes foram utilizadas para as variáveis descritas. Os pacientes foram observados pelo período de 12 meses, com retorno ambulatorial a cada dois meses. Verificou-se os seguintes resultados: a) a HVE no grupo HR demonstrou-se aumentada; b) o remodelamento também demonstrou-se aumentado; c) a determinação de tromboxano B2, GMPc e nitratos e nitritos foram similares nos três grupos estudados; d) a pressão de pulso teve aumento nos pacientes HR quando comparados com os demais grupos em estudo. Observação: O grupo de pacientes HAL não apresentou resultados de ultrassonografia de carótidas e de ecocardiograma. Não se observou correlação entre os marcadores bioquímicos endoteliais analisados e o remodelamento vascular / miocárdio em pacientes com HR. Entretanto, verificou-se aumento considerável na pressão de pulso nos pacientes com HR quando comparados com os demais grupos em estudo. Além disso, os pacientes HR tiveram massa do ventrículo esquerdo aumentada / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Antonio Roberto Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:09:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanella_CesarAugustoBueno_M.pdf: 20682837 bytes, checksum: c0f8e5f63d925ba85f94e349339b4f1c (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A ontogênese do cérebro ocorre através de um programa coordenado de eventos celulares, entre eles, divisão celular, migração neuronal, morte celular seletiva e diferenciação. A interrupção desses processos, ou de um deles, pode provocar anormalidades da arquitetura do córtex cerebral em desenvolvimento e de suas propriedades eletrofisiológicas. Uma manifestação de malformação relacionada ao desenvolvimento cortical é a epilepsia. Entre as lesões estruturais do SNC que causam epilepsia destacam-se as displasias corticais. No SNC, o NO é um importante neurotransmissor e participa da regulação de diversas funções cerebrais. O NO é sintetizado após ativação ou indução da enzima NOS, e no córtex cerebral ele é produzido sob demanda pela nNOS. No entanto, quando presente em altas concentrações, o NO, assim como o glutamato, podem iniciar uma cascata neurotóxica. Pode, também, ter papel importante na fisiopatologia da epilepsia. No presente trabalho, realizamos um estudo imunohistoquímico para mostrar a expressão da nNOS em displasias corticais e no córtex cerebral humano normal. Padronizamos um método para recuperação da antigenicidade de secções de tecido de córtex cerebral humano fixados em formalina e embebidos em parafina com tratamento em forno de microondas em tampão Tris-HCI 50 mM pH 9.5 , e que foi utilizado nos experimentos imunohistoquímicos. Os córtices displásicos mostraram nNOS-IR em neurônios por toda a espessura do córtex, om predomínio em duas camadas que correspondem às camadas III e V. A intensidade de marcação foi variável e com predomínio de marcação citoplasmática, embora alguns neurônios mostraram marcação nuclear. Fibras com varicosidade em toda espessura cortical apresentaram intensa nNOS IR. No córtex cerebral humano normal, neurônios nNOS imunorreativos foram encontrados, preferencialmente, nas camadas mais profundas da substância cinzenta e na substância branca. A camada I não mostrou neurônios nNOS imunorreativos. A nNOS-IR de corpos celulares neuronais teve predomínio de marcação citoplasmática. Um número expressivo de fibras apresentaram nNOS-IR por toda a espessura do córtex. Os tecidos displásicos utilizados em nossos estudos estão associados com epilepsia farmacologicamente intratável. Assumindo que a nNOS-IR detectada nos neurônios corresponda à forma cataliticamente ativa da nNOS, nós sugerimos que a liberação do NO por estes neurônios poderia ativar neurônios alvo aditivamente provocando uma hipersincronização, e eventualmente disparando uma descarga epiléptica / Abstract: Nitric oxide (NO) is a diffusible and reactive molecular messenger in the nervous, vascular and immune systems. NO is not stored, but rather synthesized on demand from the amino acid L-arginine by a family of isoenzymes, the nitric oxide synthases (NOS). NO is a mediator of many physiological roles. In the brain, NO acts as a neurotransmitter/neuromodulator and regulate many cerebral functions. NO also plays patophysiological roles such as in epilepsy and some neurodegenerative diseases. The heading of cortical dysplasia groups heterogenous disorders of development often associated with epilepsy. Some neocortical dysplasias are considered disorders of neuronal migration, which have variously been classified regarding their morfology or putative etiology. We describe here cytoarchitetonic alterations in displatic tissue from patients affected by pharmacologically resistant epilepsy, which were obtained at surgery for epilepsy. This study shows the distribution of nNOS immunoreactivity-like structures in displastic and normal neocortex. Normal cortex was obtained from patients without history of neurologic disease and evidence of neuropathologic changes. In the displastic cortex, cortical laminar disorganization was found in all cases. The strongest nNOS immunoreactivity was detected in the cytoplasm and nucleus of neurons in the deepest cortical layers and in the white matter. The normal cortex showed nNOS immunoreactivity predominantly in neurons of layers III e V. Varicose fibers were detected throughout both the normal and displastic cortex. Assuming that the nNOS immunoreactivity in the deepest cortical neurons of displastic neocortex corresponds to a catalytically active form of the enzyme, we suggest that the release of NO by them might additively activate target neurons, possibly via soluble guanylate cyclase, thereby leading to their hypersynchronization, and eventually triggering an epileptic discharge / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Jr / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T00:54:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sabha_Maricene_M.pdf: 1057952 bytes, checksum: 1ad4bb725f649c839a685c019ea9d370 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Fumar é um dos maiores fatores de risco para doenças coronarianas arteriais e causa disfunção endotelial. Além dos presumíveis efeitos autonômicos dependentes da nicotina, vários estudos têm demonstrado que fumar diminui a disponibilidade de óxido nítrico (NO) em artérias e veias. Nicotina está entre os diversos compostos contidos no cigarro que poderia ser responsável por esta resposta prejudicial do endotélio. Estudamos 9 não fumantes sadios e 12 fumantes sadios, eves/moderados, através da técnica da complacência da veia dorsal da mão. Curvas de dose resposta à bradicinina (BK) e nitroprussiato de sódio (NPS) foram construídas para testar o relaxamento dependente e independente do endotélio antes e durante o uso de adesivo de nicotina (21 mg). Pressão arterial média (PAM) foi medida, batimento a batimento, durante as 4 horas do estudo. Amostras de sangue foram coletadas para quantificar o tromboxano B2 (TXB2). . Co-administração de nicotina transdérmica reduziu a responsividade vascular à BK em veias de não fumantes (Emáx=88.0::!::17.9% e 54.3:t14.9%, respectivamente antes e após o adesivo de nicotina; p<O.05), semelhante aos fumantes (Emáx=56.3:t16.6%). Venodilatação induzida por NPS foi inalterada. PAM aumentou em ambos, fumantes e não fumantes. O uso de nicotina transdérmica aumentou a concentração de.TXB~ somente no grupo-controle. A nicotina poder ser a principal responsável pela função endotelial prejudicada em fumantes. As descobertas da presente investigação são específicas para veias humanas, mas podem ser aplicáveis às artérias, uma vez que o adesivo de nicotina aumentou a PAM em fumantes e não fumantes / Abstract: Cigarette smoking is a major risk tactor tor CAD (coronary arterial disease) and causes endothelial dystunction. Besides the presumable nicotine-dependent autonomic eftects, several studies have demonstrated that smoking decreases the nitric oxide (NO) availability in arteries and veins. Nicotine is among the numerous compounds contained in the cigarette smoke that c0uld be responsible tor this impaired endothelial response. We studied 09 healthy non-smokers and 12 healthy mild/moderate smokers with the dorsal hand vein compliance technique. Dose response curves to bradykinin (BK) and sodium nitroprusside (SNP), were constructed to test the endothelium -dependent and -independent relaxation betore and during the placement ot a nicotine patch (21 mg). MABP was measured beat-to-beat during the 4-hours study, Serial blood samples were drawn to assay thromboxane B2 (TXB2 ). .Transdermal nicotine co-administration reduced the vascular responsiveness to BK in nonsmokers' veins (Emax=88.0j: 17.9% and 54.3j: 14.9%, respectively betore and after nicotine patch; p<0.05), similar to smqkers (Ernax=56.3j: 16.6%). SNP-induced venodilatation was unaltered. MABP increased in both smokers and nonsmokers. The use ot transdermal nicotine increased the TxB2 concentrations only in the control group. Nicotine can be the major responsible tor impaired endothelial tunction in smokers. The tindings in the present investigation are specitic to human veins but may be applicable to arterial beds since nicotine patch simultaneously increased the MABP in both smokers and nonsmokers subjects / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Sergio de Albuquerque / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T06:13:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pontin_Karina_M.pdf: 6476173 bytes, checksum: 9da9eec541d3c0baf96a68556e8352c7 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os antimoniais são atualmente as drogas de escolha para o tratamento da Leishmaniose, porém apresentam problemas como uma grave toxicidade e situações de resistência parasitária. Muitos autores vêm averiguando a possibilidade dos produtos de origem vegetal e animal desempenharem importante papel na terapêutica desta enfermidade, promovendo uma menor toxicidade e custo inferior. No presente trabalho foi avaliada a atividade leishmanicida de um extrato da própolis, produto apiterápico, e de um bioterápico, medicamento homeopático, sobre as formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis, por meio de ensaios in vitro, e in vivo por meio do tratamento em animais Mus musculus experimentalmente infectados pelo parasita. Pelas observações decorrentes dos ensaios in vitro, a própolis apresentou sobre as formas promastigotas porcentagem de lise e valor de coeficiente de inibição (IC50) melhores, quando comparados com o controle positivo (anfotericina B). Tanto o bioterápico quanto a própolis não apresentaram resultados satisfatório sobre as formas amastigotas. Nos ensaios in vivo, durante os 90 dias de tratamento com os compostos em análise, foi verificada a variação do diâmetro médio das lesões dos camundongos Afus musculus infectados com L. (V.) braziliensis, observando uma diminuição no tamanho das lesões. Ambos os compostos apresentaram resultados favoráveis em relação ao controle negativo (solução de cloreto de sódio à 0,9%). Sabendo-se da importância da produção do óxido nítrico (NO) para o controle da infecção sobre diversos parasitas intracelulares, foi avaliada a capacidade de indução de NO pela própolis e pelo bioterápico, observando uma indução significativa apenas no caso da própolis. Tais achados são animadores para uma pesquisa mais aprofundada em relação a estes diferentes tipos de medicamentos, corno por exemplo, a caracterização química e o isolamento do princípio ativo da própolis, responsável pela atividade biológica, e a comprovação e padronização da metodologia homeopática no processo de inativação do bioterápico, a fim da melhoria da ação terapêutica / Abstract: Nowadays antimonials have been the drugs chosen for the Leishmaniosis treatment. Nevertheless, they have shown problems such as high toxicity and some parasite resistance occurrences. Many researchers have investigated the possibility that products from animal and vegetal origin may play an important role in the therapeutics of this disease, with less toxicity and lower prices. This work evaluates the leishmanicyd activity of propolis extract, an apitherapic product, and also of a biotherapic homeopathic drug over the Leishmania (Viannia) braziliensis promastigote and amastigote forms, through in vitro and in vivo assays by means of Mus Musculus animals treatment, which were experimentally infected. Resulting trom the in vitro assays, propolis revealed a better lysis percentage and inhibition coefficient (IC 50) over the promastigote forms when compared to positive control (anphotericin B). Both the biotherapic drug and propolis extract did not show reasonable results over amastigote fonns. Regarding to the in vivo assays, during a 90-day-treatement, a variation of the lesion mean diameter of the Mus Muscu/us mice infected by L.(V.) braziliensis was observed, there was a reduction in the lesion size. Both drugs showed good results in respect to negative control (0.9% saline solution). Being aware of the importance of NO production to control the infection on several intracellular parasites, the capacity of inducting NO production was evaluated using both propolis and biotherapics. An expressive induction was observed only concerning propolis. Such find encourages a further research on those drugs, for instance, the chemical characterization and the isolation of propolis active principles, responsible for its biological activity, as well as the standardization of homeopatic methodologies in the biotherapic inactivation with the pourposes of a better therapeutic drug action / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador: Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:40:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_LaisCalixto_M.pdf: 2754582 bytes, checksum: 3e5a0b76c65b57922b3dcf752598ce63 (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientador: Marta Helena Krieger / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo_KellyFabianeSantos_D.pdf: 4885891 bytes, checksum: 7925cc1e7a782f3c0eaf7c71580aabe1 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Aterogênese e a hipercolesterolemia são patologias envolvidas principalmente com a disfunção vascular, a qual se correlaciona diretamente com o aumento no nível de estresse oxidativo no ambiente vascular. Alterações na biodisponibilidade da molécula de óxido nítrico ("NO) e no sistema NOINO sintase, constituem-se eventos chave no processo aterogênico vascular. Assim, as restaurações destas alterações podem ser promovidas por doadores de NO. Recentemente, o reconhecimento de que os S-nitrosotióis atuam como fontes endógenas de. NO têm se tomado muito evidente. Eles podem ocorrer naturalmente no plasma ou ainda podem ser sintetizados quimicamente. Dentre estes últimos, elegemos o SNAC (S-nitroso-N-acetilcisteína) para nossas investigações. Em nosso primeiro estudo, caracterizamos o efeito hipotensor do SNAC em animais normotensos e hipertensos acordados. Os resultados mostraram que: i) O SNAC possui efeito hipotensor dose-dependente positivo, e parcialmente dependente do GMPc; ii) Seu efeito vasodilatador é mais potente e duradouro que o nitroprussiato de sódio (NPS); iii) A associação do NPS com N - acetil - L - cisteína (NAC) resultou em uma potencialização do efeito vasodilatador do NPS. Esses resultados indicam que o SNAC pode estar envolvido no mecanismo de vasodilatação promovido pelo NPS, atuando como um intermediário na doação de NO, por meio da reação de transnitrosação. Em nosso segundo estudo, caracterizamos o efeito anti aterogênico do SNAC em camundongos knockout para o receptor da LDL, sob dieta hipercolesterolêmica (20% gordura, 1,25 % colesterol e 0,5 % de ácido cólico). Os camundongos foram divididos em 3 grupos: controle, HC (dieta hipercolesterolêmica), SNAC+HC (0,51 Ilmol/Kg, i.p diariamente e dieta hipercolesterolêmica). Após duas semanas de tratamento, verificamos que camundongos sob dieta hipercolesterolêmica apresentaram as seguintes disfunções relacionadas ao início da aterogênese: i) alterações na motricidade vascular dependente e independente do endotélio, ii) aumento do estresse oxidativo, iii) desenvolvimento da área da lesão próxima a raiz da aorta, iv) aumento nos níveis de lípides plasmáticos e v) alterações no perfil lipídico, vi) aumento na expressão das NO sintases aórticas, vii) aumento na coloração para nitrotirosina. Após duas semanas de tratamento com SNAC e dieta hipercolesterolêmica, verificou-se uma prevenção de 55 % na formação da placa e uma restauração nas alterações desencadeadas pela dieta hipercolesterolêmica. As disfunções na motricidade vascular foram normalizadas e acompanhadas de uma redução no estresse oxidativo e na superexpressão das NOS constitutivas. Finalmente, nossos resultados mostraram que no início do processo aterosclerótico há alterações no sistema NOINO sintase e um aumento no estresse oxidativo. Essas alterações estão correlacionadas principalmente com o aumento no vasorelaxamento dependente do endotélio e com o aumento na expressão das NOS constitutivas. O SNAC mostrou ser uma droga promissora, pois pode reverter ou minimizar as alterações relacionadas com a fase inicial da aterosclerose / Abstract: Pathophysiology of the NO/NO synthase system and endothelium dysfunctional changes in early phases of the atherogenic process are incompletely understood. In hypercholesterolemic LDLr-/- mice, we addressed changes in endothelium-dependent relaxations, NO synthase expression and plaque burden in the absence or presence of the nitrosothiol NO donor S-nitroso-N-acetylcysteine (SNAC). Initially, we characterized the hypotensive effect of the S-nitroso-N-acetylcysteine (SNAC) in normotensive and hypertensive conscious rats. The results showed that i) SNAC reduced the medium arterial pressure in a dose-response manner in both normotensive and hypertensive animaIs; ii) At the same doses (ECso of SNAC), SNAC showed a vasodilator effect in normotensive rats more potent and more prolonged than that of sodium nitroprusside (SNP); iii) SNAC acts by both cGMP-dependent and cGMP-independent pathways; iii) It was also shown that the thiol N - acetyl - L - cysteine (NAC) potentiates the action of SNP in hypertensive rats, pointing to the mediation of thiols in the vasodilator action of SNP in this condition. Such mediation may involve the formation of a more potent thiol complex with the nitroprusside anion ar the transfer of.NO to NAC, generating SNAC as a primary vasoactive species. In the second study we characterized the SNAC effect on the endothelial dysfunction in hypercholesterolemic LDLr-/- rnice for two weeks. Increase in plasma cholesterol/triglyceride levels was accompanied by aortic root lesions. Aortic vasorelaxation to acetylcholine was paradoxically increased, while endothelium independent relaxations to sodium nitroprusside were decreased suggesting enhanced basal or stimulated NO release. This dysfunction was associated with enhanced aortic superoxide production and with increased levels of constitutive NOS isoform expression, particularly neuronal NOS. SNAC (O.51Ilmol/Kg i.p., per two weeks) treatment in HC mice (SNAC + HC ) decreased plaque extension by 55%, prevented the alterations in vasorelaxation and brought about a 20% decrease in cholesterol levels. In conc1usion, the present study disc1osed, in early stages of plaque development in LDLr-/- mice, particular changes in NO/NOS pathophysiology, characterized by increased endothelium-dependent vasorelaxation and increased constitutive NOS expression. Such changes were prevented by SNAC, which may therefore constitute a novel strategy to halt early plaque progression / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:13:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Colhone_MarcelleCarolina_M.pdf: 3874270 bytes, checksum: b5d79e5cde6aed06f67783a5f55086f1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: o fluxo sangüíneo alterado, isquemia, proliferação celular e a presença de microrganismos resultam em queda acentuada de pressão parcial de oxigênio (hipóxia) no tecido lesado. Macrófagos se adaptam a hipóxia, alterando seu metabolismo, produção de linfocinas pro-inflamatórias e atividade fagocítica. No presente trabalho comparamos os efeitos da hipóxia (5% de O2) e da normóxia (21 % de 02) na infecção de macrófagos com o protozoário parasita Leishmania amazonensis. Macrófagos de duas diferentes origens (linhagem celular murina 774 e macrófagos peritoneais murinos) expostos a hipóxia mostraram redução na porcentagem de células infectadas e no número de parasitas intracelulares por célula. A cinética da infecção indicou que a hipóxia não deprime a fagocitose de L. amazonensis, mas induz macrófagos a reduzirem o parasitismo intracelular. Além disso, a. hipóxia não age sinergicamente com interferon gama (lFN-y) elipopolissacarídeo (LPS) em macrófagos para induzir morte do parasita. Experimentos também demonstram ausência de correlação entre a produção de óxido nítrico e o controle da infecção em macrófagos sob condições hipóxicas. Proteínas do choque térmico de 70kDa (HSP70) é induzida por hipóxia em muitos tipos de células e contribui para sua sobrevivência durante exposição a condições hipóxicas. Análises da expressão de HSP70 em linhagem celular murina J774, expostas à hipóxia, mostram uma notável redução na expressão de HSP70. Macrófagos infectados com L. amazonensis também reduziram a expressão de HSP70. Macrófagos infectados com amastigotas de L. amazonensis sob condições hiperbáricas (HBO) (2 horas, 2,5 ATA, 100% 02) apresentaram significativa redução na porcentagem de células infectadas e no número de parasitas intracelulares por células. Todos os resultados fornecem evidências de que a hipóxia, que ocorre em várias condições patológicas, e a HBO, podem alterar a susceptibilidade de macrófagos a infecção com Leishmania / Abstract: The altered blood flow, isquemia, cell proliferation and the presence of microorganisms cause hypoxia (low pO2) in injured tissues. Macrophages adapt to hypoxia and alter their metabolism, pro-inflammatory Iymphokines production and phagocytosis activity. In the present study we compared the effect of 5% oxygen tension (hypoxia) and a normal tension of 21 % oxygen (normoxia) on macrophage infection by the protozoan parasite Leishmania amazonensis. Macrophages from two different sources (murine cell line J774 and murine peritoneal macrophages) exposed to hypoxia showed a reduction of the percentage of infected cells and of the number of intracellular parasites per cell. The kinetic of infection indicated that hypoxia did not depress L. amazonensis phagocytosis but induced macrophages to reduce intracellular parasitism. Furthermore, hypoxia did not act synergistically with gamma interferon (IFN-y) and bacterial lipopolisaccharides (LPS) in macrophages to induce parasite killing. Experiments also indicated no correlation between nitric oxide production and control of infection in macrophages under hypoxic condition. Heat shock protein 70 (HSP70) is induced by hypoxia in the most of mammalian cell types and contributes to their ability to survive during hypoxic episodes. Analyses of the Hsp70 in murine cell line J774 exposed to hypoxia indicated a notable reduction in HSP70 expression. Macrophages infected with L. amazonensis also showed a reduction in HSP70expression. Macrophages infected with L. amazonensis amastigotes under hyperbaric condition (HBO) (2 hours, 2,5 ATA, 100% 02) showed a significant decrease of the percentage of infected cells and number of intracellular parasites per cell. Taken together our results provided the first evidence that hypoxia, which occurs in various pathological conditions, and HBO treatment, can alter macrophage susceptibility to a parasite infection / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_Juliana_M.pdf: 6595425 bytes, checksum: 59be7d31d2a9cdf5b54ea675fec4f3f8 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Os eosinófilos estão envolvidos no processo de defesa do organismo contra infecções parasitárias e na patogênese de doenças alérgicas, imunológicas e neoplásicas. Estudos anteriores demonstraram a existência de uma via funcional NO/GMPc em eosinófilos de rato e humano que modulam a locomoção deste tipo celular. Os nucleotídeos cíclicos são capazes de modular o processo de ativação de leucócitos, mas seu papel na locomoção é ainda controverso. Este estudo foi realizado para investigar os efeitos do 5-ciclopropil-2-[1-(2-fluor-benzil)-1Hpirazolo[ 3,4-b]piridina-3-il]-pirimidina-4-ilamina (BAY 41-2272) sobre a quimiotaxia de eosinófilos humanos induzida por formil-metionil-Ieucil-fenilalanina (fMLP; 10-7 M) e também sobre os níveis de guanosina-3',5'-monofosfato cíclico (GMPc) e adenosina-3',5'-monofosfato cíclico (AMPc). Os eosinófilos foram incubados com BAY 41-2272 (0,1-10,0 J.LM)por um período de tempo curto (10 min) ou prolongado (90 min). A exposição dos eosinófilos ao BAY 41-2272 tanto por 10 ou 90 min inibiu acentuadamente a quimiotaxia destas células. Na concentração de 1 J.LMde BAY 41-2272, a inibição da quimiotaxia foi em torno de 50%, independente se as células foram incubadas por 10 ou 90 min com este composto. A exposição dos eosinófilos por 90 min ao BAY 41-2272 (1 J.LM)resultou em significante aumento dos níveis de GMPc e AMPc (7,1 :!: 0,2 e 94,8 :!: 1,5 nMl1,5 X 106cels, respectivamente) comparado com o protocolo de 10-min (3,0 :!: 0,2 e 47,3 :!: 1,3 nM/1,5 X 106cels, respectivamente). O aumento dos níveis de GMPc produzidos BAY 41-2272 foi abolido pela pré-incubação dos eosinófilos com o inibidor da guanilato ciclase solúvel 1H-[1,2,4]-oxidiazol[4,3-a] quinoxalin-1-one (ODQ). De acordo com o ensaio de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difenil tetrazolio bromida (MTT), não foi observado qualquer efeito citotóxico sobre os eosinófilos em nenhuma das condições experimentais utilizadas. Nossos resultados mostram que o efeito inibitório do BAY 41-2272 sobre a quimiotaxia de eosinófilos humanos induzida por fMLP em tempo curto ou prolongado de incubação, é acompanhado por significante elevação de GMPc e AMPc, mas nós não detectamos uma correlação direta entre a inibição de quimiotaxia e elevação dos níveis de nucleotídeos cíclicos / Abstract: Eosinophils are implicated in human defense mechanism against inflammatory disorders such as allergy, immunological and neoplasic diseases. Previous studies demonstrated a functional NO-cGMP pathway in the rat and human eosinophils that modulate the locomotion of this cell type. Cyclic nucleotides are able to modulate the processes responsible for leucocyte activation, but its role on eosinophillocomotion is still controversial. This study was designed to investigate the effects of the 5-cyclopropyl-2 [1-(2-fluoro-benzyl)-1Hpyrazolo[ 3,4-b]pyridin-3-yl]-pyrimidin-4-ylamine (BAY 41-2272) on formyl- . methionyl-Ieucyl-phenylalanine (fMLP; 10-7 M)-induced human eosinophil chemotaxis, cyclic guanosine-3',5'-monophosphate (cGMP) and cyclic adenosine- 3',5'-monophosphate (cAMP) levels. Human eosinophils were exposed to BAY 41- 2272 (0.1-10.0 J.1M) for either short (10 min) or prolonged (90 min) time periods. Exposition of eosinophils to BAY 41-2272 for either 10 or 90 min markedly inhibited the eosinophil chemotaxis. At 1 J.1Mof BAY 41-2272, inhibition of fMLP-induced eosinophil chemotaxis was about of 50% irrespective if cells were exposed for 10- or 90 min with this compound. Incubation of eosinophils for 90 min with BAY 41- 2272 (1 J.1M)resulted in significantly higher cGMP and cAMP levels (7.1 :!: 0.2 and 94.8 :!: 1.5 nMl1.5 X 106 cells, respectively) compared with the 10-min protocols (3.0 :!: 0.2 and 47.3 :!: 1.3 nM/1.5 X 106 cells, respectively). The BAY 41-2272- induced cGMP increases were abolished by pre-incubation of eosinophils with the soluble guanylate cyclase inhibitor -[1,2,4]-oxidiazolo[4,3-a] quinoxalin-1-one (ODQ). No eosinophil toxicity was observed in any experimental condition, according to 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay. Our findings show that inhibitory effects of fMLP-induced human eosinophil chemotaxis by BAY 41-2272 at short-term or prolonged exposition are accompanied by significant elevations of cGMP and cAMP, but we could not detect a direct correlation between chemotaxis inhibition and elevation of cyclic nucleotide levels / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia