SANTOS, V. N. Eletrodos de ouro modificados com complexos inorgânicos aplicados como sensores eletroquímicos para óxidos nítricos. 2012. 89 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-28T20:58:07Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_vnsantos.pdf: 1163292 bytes, checksum: c8814858ed9f2592fb05003fe92d3bad (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-12-22T16:28:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_vnsantos.pdf: 1163292 bytes, checksum: c8814858ed9f2592fb05003fe92d3bad (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:28:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_vnsantos.pdf: 1163292 bytes, checksum: c8814858ed9f2592fb05003fe92d3bad (MD5) Previous issue date: 2012 / The aim of this work is to study the surface modification of gold electrode with the trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+ (Au/trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+) and trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ (Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+) complexes ion, emplyoing the electrodeposition and self-assembled monolayer techniques, respectively; and evaluate the potentiality of these modified electrodes as electrochemical sensors for detection and quantification of NO. Cyclic voltammetry and electrochemical quartz crystal microbalance results suggest that the deposition of trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+ complex ion on the gold surface. Cyclic voltammetry and surface enhanced raman spectroscopy results confirm the modification of gold electrode surface by the trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ complex ion. Peak current (Ip) observed in cyclic voltammograms for the oxidation of NO on the modified electrodes were higher than that observed for the unmodified gold electrode, and the modified electrode Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ showed the highest Ip for the oxidation of NO. The values of detection limit and quantification limit obtained for the electrode Au/trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+ were 7.73 x 10-8 mol L-1 and 2.58 x 10-7 mol L-1, and for the electrode Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ were 5.15 x 10-8 mol L-1 and 1.72 x 10-7 mol L-1, respectively, being this values smaller by an order of magnitude as the same obtained for the unmodified gold electrode. Computational simulations suggest that the increase in Ip oxidation of NO on the electrode Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ is due to the interaction energy between molecules of NO and the complex trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+, adsorbed on the gold surface, to be stronger than the energy of interaction of NO with the gold surface. The dopamine and serotonin molecules and the nitrite ion interfere in electrochemical detection of NO and dopamine and serotonin showed greater interference in the detection of NO in relation to the nitrite ion. The electrode Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ showed the greatest stability when compared to the electrode Au/trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+. The results obtained in this work showed the potentiality of modified electrodes as sensors for deteccion and quantification of NO, among which stands out the electrode Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ due to the further intensification of the signal current for the oxidation of NO and provided greater stability. / O objetivo deste trabalho é estudar a modificação da superfície do eletrodo de ouro com os íons complexos trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+ (Au/trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+) e trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ (Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+), empregando as técnicas de eletrodeposição e formação de camadas auto-organizadas, respectivamente; e avaliar a potencialidade destes eletrodos modificados como sensores eletroquímicos para detecção e quantificação de NO. Os resultados de voltametria cíclica e de microbalança eletroquímica a cristal de quartzo sugerem a deposição do íon complexo trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+ sobre a superfície de ouro. Os resultados de voltametria cíclica e de espalhamento raman amplificado por superfície comprovam a modificação da superfície do eletrodo de ouro pelo íon complexo trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+. As correntes de pico (Ip) observadas nos voltamogramas cíclicos para a oxidação do NO sobre os eletrodos modificados foram maiores que as observadas para o eletrodo de ouro sem modificação, sendo que o eletrodo modificado Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ apresentou a maior Ip para a oxidação de NO. Os valores de limite de detecção e de quantificação obtidos para o eletrodo Au/trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+ foram de 7,73 x 10-8 mol L-1 e 2,58 x 10-7 mol L-1, e para o eletrodo Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ foram de 5,15 x 10-8 mol L-1 e 1,72 x 10-7 mol L-1, respectivamente, sendo estes valores menores em uma ordem de grandeza que os mesmos obtidos para o eletrodo de ouro não modificado. As simulações computacionais sugerem que o aumento de Ip da oxidação de NO sob o eletrodo Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ é devido à energia de interação entre as moléculas de NO e o complexo trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+, adsorvido na superfície de ouro, ser mais forte que a energia de interação do NO com a superfície de ouro. As moléculas dopamina e serotonina e o íon nitrito interferem na detecção eletroquímica de NO e a dopamina e a serotonina apresentaram maior interferência na detecção de NO em relação ao íon nitrito. O eletrodo Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+ apresentou maior estabilidade quando comparado ao eletrodo Au/trans-[Ru(NH3)4(tina)(SO4)]+. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram a potencialidade dos eletrodos modificados como sensores para detecção e quantificação de NO, dentre os quais se destaca o eletrodo Au/trans-[Fe(cyclam)(NCS)2]+, devido à maior intensificação no sinal de corrente para a oxidação de NO e a maior estabilidade apresentada.

MAIA, Juliana Lemos. Estudo da atividade antinociceptiva e possíveis mecanismos de ação do ácido oleanólico em modelos de nocicepção induzida por capsaicina e óleo de mostarda em camundongos. 2006. 107 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-12T13:53:41Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_jlmaia.pdf: 817614 bytes, checksum: 6cc0ba8a8528dc2702912f552d60f34b (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-13T16:16:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_jlmaia.pdf: 817614 bytes, checksum: 6cc0ba8a8528dc2702912f552d60f34b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-13T16:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_jlmaia.pdf: 817614 bytes, checksum: 6cc0ba8a8528dc2702912f552d60f34b (MD5) Previous issue date: 2006 / Oleanolic acid is a triterpene pentacyclic widely distributed in the plant kingdom. Different biologic activities have been reported including: antiinflammatory, hepatoprotective, gastroprotective and antinociceptive. This work was aimed to evaluate the antinociceptive effect of oleanolic acid in acute nociception models induced by capsaicin (20µl/ 1.6 μg) and mustard oil (0.75%, 50 µL/animal) in mice and to establish the likely mechanism(s) of action. Mice were pretreated orally with oleonolic acid (3, 10, 30 and 100 mg/kg) or vehicle, and the pain-related behavioral responses were analysed. The pain behavioral responses were significantly suppressed at doses 10, 30 and 100 mg/kg in acute nociception models induced by capsaicin and mustard oil. The maximal suppression (p<0.001) was observed at the dose of 30 mg/kg. In order to verify the possible mechanisms involved in the antinociceptive action of oleanolic acid in the capsaicin-induced nociception, the involvement of endogenous opioids, α2, nitric oxide and KATP channels were analyzed. The antinociception produced by OA (30 mg/kg, v.o.) was found to be significantly blocked in animals pre-treated with the opioid antagonist, naloxone (2 mg/kg, i.p.); the substrate for oxide nitric synthase, L-arginine (600 mg/kg, i.p.); or a KATP-channel blocker, glibenclamide (2 mg/kg, i.p.) but was unaffected by yohimbine (2 mg/kg, i.p.), an α2 -adrenoceptor antagonist. In order to verify the possible mechanisms involved in the antinociceptive action of oleanolic acid in the mustard oil-induced visceral pain model, opioid, α2 adreno and TRPV1 receptors were analyzed. The antinociceptive effect of oleanolic acid (30 mg/kg, v.o.) was significantly blocked (p<0.05) by pretreatment with the opioid antagonist, naloxone (2 mg/kg, i.p.), but the α2-adrenoceptor antagonist, yohimbine (2 mg/kg, s.c.), had no effect. Pretreatment with ruthenium red (3 mg/kg, s.c.), a non-competitive TRPV1 antagonist alone caused significant inhibition (p<0.01) of mustard oil-induced nociception but its co-administration with oleanolic acid produced neither antagonism nor potentiation of oleonolic acid antinociception. Further, to evaluate a possible motor impairment and motor incoordination effects related to oleanolic acid, open-field and rota-rod tests were performed. The data indicated that the treatment of animals with the oleanolic acid (30 mg/kg, v.o.) was unable to cause motor impairment or motor incoordination effects (p>0.05), being even able to reverse (p<0.05) a mustard oil-induced motor impairment in the open field test. The results taken together strongly suggest the therapeutic potential of oleanolic acid in oblitering nociception through the mechanisms that possibly involve the opioids, TRPV1 receptors, nitric oxide and KATP channels. / O ácido oleanólico é um triterpeno pentacíclico largamente encontrado em várias plantas medicinais. Essa substância demonstrou ter uma variedade de atividades farmacológicas, dentre as quais se destacam: antiinflamatória, hepatoprotetora, gastroprotetora e antinociceptiva. Este trabalho objetivou investigar a atividade antinociceptiva do ácido oleanólico em modelos de nocicepção aguda induzida por capsaicina (20µl/ 1,6 μg) e óleo de mostarda (0,75%, 50 µL/animal) em camundongos, além dos possíveis mecanismos de ação envolvidos. Camundongos foram pré-tratados com ácido oleanólico (3, 10, 30, 100 mg/kg, v.o.) ou veículo, e os comportamentos de dor foram analisados. As doses de 10, 30 e 100 mg/kg, v.o., foram capazes de reduzir os comportamentos dolorosos expressos pelos animais nos modelos de nocicepção induzida por capsaicina e óleo de mostarda, sendo o maior nível de inibição (p<0,001) encontrado na dose de 30 mg/kg. Na tentativa de desvendar os possíveis mecanismos de ação do ácido oleanólico no modelo de nocicepção induzido por capsaicina, avaliamos a participação dos receptores opióides, α2, óxido nítrico e canais de potássio. O efeito antinociceptivo do ácido oleanólico (30 mg/kg, v.o.) foi significantemente revertido pelo pré-tratamento com antagonista opióide, naloxona (2 mg/kg, i.p.); pelo doador de óxido nítrico, L-arginina (600 mg/kg, i.p.) e pela glibenclamida (2 mg/kg, i.p.), um antagonista dos canais de potássio. Por outro lado, o pré-tratamento com um antagonista α2, ioimbina (2 mg/kg, i.p.), não ocasionou a reversão da antinocicepção. Na tentativa de desvendar os possíveis mecanismos de ação do ácido oleanólico no modelo de nocicepção visceral induzida por óleo de mostarda, avaliamos a participação dos receptores opióides, α2 e TRPV1. O efeito antinociceptivo do ácido oleanólico (30 mg/kg, v.o.) foi significantemente revertido (p<0,05) pelo pré-tratamento com antagonista opióide, naloxona (2 mg/kg, i.p.), enquanto que o antagonista α2 , ioimbina (2 mg/kg, i.p.), não teve o mesmo efeito. O pré-tratamento com vermelho de rutênio (3 mg/kg, s.c.), um antagonista não competitivo do receptor TRPV1 causou inibição significativa da nocicepção (p<0,01) induzida pelo óleo de mostarda, entretanto a administração conjunta com o ácido oleanólico não produziu antagonismo nem potenciação da antinocicepção causada pelo ácido oleanólico. Para avaliar a existência de um impedimento locomotor ou de uma incoordenação motora, foram utilizados os testes do campo aberto e o teste do rota rod, respectivamente. Os dados indicaram que o tratamento com o ácido oleanólico (30 mg/kg, v.o.) não induziu (p>0,05) impedimento locomotor ou incoordenação motora nos animais, sendo ainda capaz de reverter (p<0,05) o impedimento locomotor induzido pelo óleo de mostarda no teste do campo aberto. Em conjunto os dados revelaram a efetividade do ácido oleanólico em modelos de nocicepção possivelmente envolvendo receptores opióides, TRPV1, óxido nítrico e canais de potássio.

CASTRO, Rondinelle Ribeiro. Hiperalgesia articular no modelo de osteoartrite por transecção do ligamento cruzado anterior em ratos : efeitos de inibidores da síntese de óxido nítrico e de polissacarídeos de elevado peso molecular. 2004. 167 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-15T12:40:49Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_rrcastro.pdf: 742166 bytes, checksum: f3e42ad064874e0887527f64149cda29 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-15T16:29:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_rrcastro.pdf: 742166 bytes, checksum: f3e42ad064874e0887527f64149cda29 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-15T16:29:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_rrcastro.pdf: 742166 bytes, checksum: f3e42ad064874e0887527f64149cda29 (MD5) Previous issue date: 2004 / Animal models have been employed for the study of osteoarthritis (OA), but the articular hyperalgesia has received little attention. In this study, we standardized a method to study hyperalgesia in an OA model in rats, through the anterior cruciate ligament transection (ACLT), as well as the role of Nitric Oxide (NO). High molecular weight (MW) polysaccharides, such as Hylan G-F 20, as a gel preparation, have been used to relive pain in OA patients. Whether their activity is due to the high MW or to the gel state (viscossuplementation) is a matter of debate. We used the ACLT model to evaluate the effect of a polysaccharide from gum guar (GG) in the hyperalgesia. Wistar rats were subjected to ACLT (OA group). The hyperalgesia was measured using the test for articular incapacitation (AI) in rats (Tonussi & Ferreira, 1992), until 28 days. The joint lavage was used for determining cell influx (CI) and NO levels. The activity of the inducible NO synthase enzyme (iNOS) was evaluated by immunohistochemistry of the synovia. The articular cartilage was evaluated by quantifying the glycosaminoglycans (GAG) content of the cartilage of the femoral condyles. The animals of the OA group were compared to a sham group and to naive animals. Animals of the OA group received indomethacin (2mg/kg/d s.c.), L-NAME (30mg/kg i.p.) or 1400W (0,5mg/kg/d s.c.), NOS inhibitors, 30 min before the surgery and until sacrifice, at 7 days (prophylactic intervention). Animals of the OA group were compared to sham and naive groups. Other animals of the OA group received L-NAME or 1400W 3 days after the surgery, until sacrifice, at 7 days (therapeutic intervention). Still other animals of the OA group received GG (100μg i. art.), as a gel or as solution, from 4 through 7 days of OA and were compared to both a sham group and to a group that received Hylan G-F 20 (100microg i. art.), as a gel. Control groups received the vehicles. The OA group displayed significantly increased AI during the first 7 days (P<0.001). There was no difference in CI among all groups. NO release, at 7 days, was increased in the OA group (P<0.05), that was associated with an increased activity of the iNOS in the synovia. The GAG content was significantly increased in the OA group, measured at 14 days (P<0.05). Indomethacin significantly reduced the AI, as compared to the OA group (P<0.05). L-NAME and 1400W reduced the AI, only when given prophylactically (P<0.01), that was reversed by the co-administration of L-NAME and L-arginine. GG, either as a gel or as a solution, as well as the Hylan G-F20, significantly reduced the AI (P<0.05), as compared to the OA group. This is the first demonstration of a model to study hyperalgesia, quantitatively, in OA experimental models. There is increased release of NO in the ACLT model, probably via iNOS activation. The administration of NOS inhibitors inhibits the AI only if given prophylactically. This is also the first demonstration that GG promotes analgesia in the ACLT model in rats. Moreover, the anti-nociceptive effect of polysaccharides, at least in this model, is independent of their colloidal state. / Modelos animais são usados para estudo da Osteoartrite (OA), mas a hiperalgesia articular tem sido pouco investigada. Nesse trabalho, padronizamos um método para estudo da hiperalgesia no modelo de OA em ratos, por transecção do ligamento cruzado anterior (TLCA) e investigamos a participação do Óxido Nítrico (NO). Polissacarídeos de alto peso molecular (PM), como o Hilano GF-20, na forma de gel, são usados para reduzir a dor em pacientes com OA, mas não está claro se sua ação é atribuível ao alto PM ou à forma em gel (viscossuplementação). Usamos o modelo de TLCA para avaliar o efeito de um polissacarídeo de goma guar (GG) na hiperalgesia. Ratos Wistar foram submetidos à TLCA (grupo OA). A hiperalgesia foi avaliada pelo teste de incapacitação articular (IA) para ratos (Tonussi & Ferreira, 1992), por até 28 dias. O exsudato articular foi usado para medida do influxo celular (IC) e da liberação de NO. A atividade da enzima NO sintase indutível (iNOS) foi avaliada por imunohistoquímica das sinóvias. A cartilagem articular foi avaliada pela quantificação dos glicosaminoglicanos (GAG) da cartilagem dos côndilos femorais. Os animais do grupo OA foram comparados a grupos falso-operados (Sham) e a controles normais (Naive). Animais do Grupo OA receberam indometacina (2mg/kg/d s.c.), L-NAME (30mg/kg i.p.) ou 1400W (0,5mg/kg/d s.c.), inibidores da NOS, 30 min antes da cirurgia e até o sacrifício, aos 7 dias (intervenção profilática). Outros animais do grupo OA receberam L-NAME ou 1400W a partir de 3 dias após a cirurgia, até o sacrifício, aos 7 dias (Intervenção terapêutica). Outros grupos OA receberam GG (100microg i. art.), como gel ou solução, dos 4 aos 7 dias de OA e foram comparados ao grupo sham e a um grupo que recebeu Hilano G-F 20 (100μg i. art.), como gel. Grupos controle receberam o veículo. O grupo OA apresentou IA significantemente maior durante os primeiros 7 dias (p<0,001). Não houve diferença no IC entre todos os grupos. A liberação de NO, aos 7 dias, foi maior no grupo OA (p<0,05), que foi associada a maior atividade da iNOS na sinóvia. A quantidade de GAG foi maior no grupo OA, medida aos 14 dias (p<0,05). Indometacina reduziu significantemente a IA, em relação ao grupo OA (p<0,05). L-NAME e 1400W inibiram a IA, apenas quando dados profilaticamente (p<0,01) sendo revertida pela co-administração de L-NAME e L-arginina. A GG, em gel ou solução, da mesma forma que o Hilano G-F 20, reduziu significantemente a IA (p<0,05), em relação ao grupo OA. Esta é a primeira demonstração de um modelo de estudo de hiperalgesia, de forma quantitativa, em modelos experimentais de OA. Existe aumento na liberação de NO no modelo de TLCA, provavelmente via ativação da iNOS. A administração de inibidores de NOS inibe a IA nesse modelo apenas se feita de forma profilática. Esta é também a primeira demonstração que a GG promove analgesia no modelo de TLCA em ratos. Ainda, o efeito antinociceptivo de polissacarídeos, pelo menos nesse modelo, independe do seu estado coloidal.

MENEZES, Adriana Magalhães Andrade de. Estudo do papel do s-nitrosoglutationa na doença periodontal experimental e na inflamação aguda. 2010. 157 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-18T12:30:29Z No. of bitstreams: 1 2010_tese_amamenezes.pdf: 3675524 bytes, checksum: 3ef8e4893baa266295dd1cd32e8aefb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-18T13:02:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_tese_amamenezes.pdf: 3675524 bytes, checksum: 3ef8e4893baa266295dd1cd32e8aefb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-18T13:02:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_tese_amamenezes.pdf: 3675524 bytes, checksum: 3ef8e4893baa266295dd1cd32e8aefb7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Periodontitis, a relevant cause of teeth loss in adults, is a chronic inflammatory disease characterized by alveolar bone resorption and collagen fibers and cementum destruction. S-nitrosogluthathione (GSNO) is considered to be an NO donor and to act as a reservoir of NO in vivo. The objective of this study was to investigate the effect of GSNO in experimental periodontal disease (EPD). EPD was induced by a nylon thread ligature surgically placed around the cervix of the second left maxillary molars of female Wistar rats. Animals were treated with 50μL GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1), PVP or saline subgingivally 30 minutes before periodontits induction and daily until sacrifice on 11th day. The parameters analysed were alveolar bone loss (ABL), bone alkaline phosphatase, myeloperoxidase (MPO), cytokines levels (IL-1β and TNF-α), malondialdeyhyde (MDA), reduced glutathione (GSH) content, nitrite/nitrate levels, and immunohistochemistry for metalloproteinase (MMP-1/8), inducible nitric oxide syntase (iNOS) and nuclear factor-κB (NFκB). In order to confirm the anti-inflammatory and antioxidant effect of GSNO was used the peritonitis and paw edema models. Peritonitis was induced by injection of 1 mL carrageenan (500 μL/cavity) or saline ip in naïve rats or in rats that received saline, PVP or GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1, ip) 1 hour prior to the carrageenan. After 4 hours, the animals were sacrificed for collection of the fluid peritoneal. Paw edema was induced by subplantar injection of carrageenan (500 g/paw). Saline, PVP or GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1, ip) were administered 1 hour before the inflammatory stimuli into the left hind paw. The animals were sacrificed 4 hours after the ip injection of carrageenan. The parameters analysed were volume of paw edema, migration of leukocytes for cavity peritoneal, MPO, cytokines (IL-1β and TNF-α), GSH and MDA. The GSNO in the concentrations of 0,5 and 2 mmol L-1 reduced ABL, MPO, inflammatory cytokines (IL-1β and TNF –α), nitrite/nitrate, and it increased GSH. GSNO 0,5 and 2 mmol L-1 also decreased the demarcation to MMP-1/-8, NOSi and NF -κB. However, just GSNO 2 mmol L-1 reduced MDA. Results similar were found in the peritonitis and in the paw edema, added to the fact that GSNO 0,5 and 2 mmol L-1 decreased the volume of the paw edema and the migration of leukocytes and neutrophils to the cavity peritoneal. These results show that GSNO has a protective effect on the experimental periodontal disease, peritonitis and paw edema by reducing inflammation and oxidative stress. / periodontite, importante causa de perda dentária em adultos, é uma doença inflamatória crônica caracterizada pela reabsorção do osso alveolar e das fibras colágenas, bem como destruição do cemento. O S-nitrosoglutationa (GSNO) é considerado um doador de NO e atua como reservatório de NO in vivo. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do GSNO na doença periodontal experimental (DPE). A DPE foi induzida passando-se um fio de náilon 3.0 em torno do segundo molar superior esquerdo de ratos Wistar fêmeas. Os animais foram tratados com 50 μl GSNO (0,5, 2 e 10 mmol L-1), PVP (polivinil pirrolidona, diluente do GSNO) ou salina subgengivalmente 30 minutos antes da indução da periodontite e diariamente até o dia do sacrifício no 11º dia. Foram analisados os seguintes parâmetros: índice de perda óssea (IPO), fosfatase alcalina óssea (FAO), mieloperoxidase (MPO), dosagem de citocinas (IL-1β e TNF-α), malondialdeído (MDA), glutationa reduzida (GSH), conteúdo de nitrito/nitrato (NOx) e imunohistoquímica para metaloproteinase-1/-8 (MMP-1/-8), óxido nítrico sintase induzida (NOSi) e fator de transcrição nuclear-κB (NF-κB). A fim de confirmar o efeito antiinflamatório e antioxidante do GSNO foram utilizados os modelos de peritonite e edema de pata. A peritonite foi induzida através da injeção de 1mL de carragenina ou salina (500 μL) na cavidade peritoneal 1 hora após a administração intraperitoneal (i.p.) de salina, PVP ou GSNO (0,5, 2 ou 10 mmol L-1). Após 4 horas, os animais foram sacrificados para coleta do fluido peritoneal. Para o edema de pata, salina, PVP ou GSNO (0,5, 2 ou 10 mmol L-1, i.p.) foram administrados uma hora antes da injeção de 0,1 mL de carragenina (500μg/pata) ou salina por via subplantar (sp) na pata traseira esquerda de cada rata. O sacrifício dos animais ocorreu 4 horas após a injeção do estímulo inflamatório. Os seguintes parâmetros foram analisados: volume do edema da pata, migração de leucócitos para cavidade peritoneal, MPO, IL-1β, TNF-α, GSH e MDA. O GSNO nas concentrações de 0,5 e 2 mmol L-1 reduziu o IPO, MPO, citocinas pró-inflamatórias IL-1β and TNF-α, nitrito/nitrato, e aumentou GSH. O GSNO nas concentrações de 0,5 e 2 mmol L-1 também diminuíram a imunomarcação para MMP-1/-8, NOSi e NF-κB. Contudo, apenas GSNO 2 mmol L-1 diminuiu MDA. Resultados semelhantes foram encontrados na peritonite e no edema de pata, acrescido de que o GSNO 0,5 e 2 mmol L-1 diminuiu tanto o volume do edema de pata como a migração de leucócitos e neutrófilos para a cavidade peritoneal. Esses resultados mostram que o GSNO possui efeito protetor na doença periodontal experimental, no edema de pata e na peritonite através da redução da inflamação e do estresse oxidativo.

NORÕES, Terentia Batista Sá de. Efeitos renais promovidos pelo veneno da serpente Bothrops atrox e liberação sistêmica de óxido nítrico. 2009. 85 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-16T18:57:19Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_tbsnorões.pdf: 1483149 bytes, checksum: f54b8b7008fbc363052e6bd8527ba216 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-18T13:02:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_tbsnorões.pdf: 1483149 bytes, checksum: f54b8b7008fbc363052e6bd8527ba216 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-18T13:02:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_tbsnorões.pdf: 1483149 bytes, checksum: f54b8b7008fbc363052e6bd8527ba216 (MD5) Previous issue date: 2009 / Snakes of the genera Bothrops are the most responsible for ophidian accidents occurred in Brazil, representing a serious public health problem due to their frequency, morbity and mortality rates. Envenomation caused by the species Bothrops atrox leads to systemic complication, which is responsible for the preliminary cause of death after ophidian accident. The aim of this work was to evaluate the pharmacological effects of the crude venom of Bothrops atrox (VBA), in perspective of elucidating the physiopathological mechanisms occurred in the tissues. First of all, the actions of VBA were evaluated in the renal perfusion system, in which the organ was exposed to the venom of B. atrox to evaluate possible renal parameters alterations. After the renal perfusion, the kidneys were submitted to histological analysis. The parameters were analyzed by ANOVA and Student t-test, with p<0,005. The results showed that VBA decreased the perfusion pressure (PP) and renal vascular resistance (RVR) significantly as in contrast with the urinary flow (UF) and glomerular filtration rate (GFR) which had a significant increase. It was observed both increase and reduction of the percentage of chloride and sodium transport, respectively. The histological alterations of the perfused kidneys were discrete, indicating the presence of proteinaceous substance in the glomeruli and tubules. An investigation was made - in an in vivo experiment - into the participation of nitric oxide (NO) in the systemic effects induced by VBA. There was an increase of the nitrite production in the blood of animals that received the VBA treatment. Pharmacological blockade with L-NAME was carried out and the increase of the nitrite production was nullified. Due to these results, we conclude that VBA causes alterations on renal parameters and it induces increase of the oxide production. / As serpentes do gênero Bothrops são responsáveis pela maior parte dos acidentes ofídicos ocorridos no Brasil, representando um sério problema de saúde pública pela freqüência com que ocorrem e pela morbidade e mortalidade que ocasionam. Envenenamento por serpente Bothrops atrox conduz à alteração sistêmica que é responsável pela causa preliminar de morte após acidente ofídico. Esse trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos farmacológicos do veneno bruto da serpente Bothrops atrox (VBA) na perspectiva de elucidação dos mecanismos fisiopatológicos causados aos tecidos. Primeiramente, avaliou-se as ações do VBA no sistema de perfusão renal, no qual o órgão era exposto à peçonha de B. atrox para se avaliar as possíveis alterações dos parâmetros renais. Após a perfusão renal, os rins foram submetidos à análise histológica. Os parâmetros foram analisados pelo ANOVA e Student t-test, com p<0,005. Os resultados encontrados demonstraram que VBA promoveu diminuição significativa na pressão de perfusão (PP) e na resistência vascular renal (RVR). O fluxo urinário (FU) e o ritmo de filtração glomerular (RFG) aumentaram significativamente. Foi observado aumento e diminuição do percentual de transporte de cloreto e sódio, respectivamente. As alterações histológicas dos rins perfundidos foram discretas, indicando presença de material proteináceo nos glomérulos e túbulos. Realizou-se uma investigação da participação do óxido nítrico (NO) nos efeitos sistêmicos causados por VBA, em um experimento in vivo. Houve um aumento na produção de nitrito no sangue dos animais tratados com VBA. Efetuou-se o bloqueio farmacológico com L-NAME e o aumento na produção de nitrito foi abolida. Através desses resultados conclui-se que o VBA causa alteração nos parâmetros renais e induz aumento na produção de óxido.

RIBEIRO, Bruna Mara Machado. Determinação de alterações comportamentais e mecanismos neuroinflamatórios no modelo neurodesenvolvimental de esquizofrenia induzida por desafio imune em ratos neonatos. 2013. 117 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T12:44:27Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_bmmribeiro.pdf: 1290233 bytes, checksum: 745091b5c12c8de08fddd5f6ddac92e8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T12:55:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_bmmribeiro.pdf: 1290233 bytes, checksum: 745091b5c12c8de08fddd5f6ddac92e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T12:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_bmmribeiro.pdf: 1290233 bytes, checksum: 745091b5c12c8de08fddd5f6ddac92e8 (MD5) Previous issue date: 2013 / Schizophrenia is a major mental disorder. This disorder can impair thought processes, volition, perception, affect and social interaction. The causes of schizophrenia are still unknown, ranging from genetic influences, environmental factors, and dysfunction of brain areas, pathophysiological alterations and neurodevelopmental impairments. This work aims to determine the behavioral and neuroinflammatory changes in a neurodevelopment model of schizophrenia induced by neonatal immune challenge induced by Poly I:C in rats. For this, Wistar rats of both sex in the periods of 5-7 days (neonates), 35 days (adolescents), 60 days (young adults) and 74 days (adulthood) were used. To determine the preventive and theraputical effects of Clozapine, this antipsychotic was administered to adolescent and adult rats, respectively. The behavioral data was presented as mean ± standard error of the mean (SEM) and analyzed by two-way ANOVA followed by Bonferroni test as post-hoc test. The Y-maze test, in turn, was analyzed by one-way ANOVA followed by Student Newman Keuls. Values were considered significant when p <0.05. The results showed that the administration of Poly I: C at a dose of 2.0 mg/kg to neonates from 5-7 post natal days was able to induce schizophrenia as observed in young adults and adulthood by decreases in the pencentage of prepulse inhibition (PPI) of the startle reflex. These animals also presented working memory deficits noticed by increases in the number of error displayed in the Y maze test. Adolescent poly I:C treated animals did not present significant behavioral alterations as compared to adult poly I:C animals. Evaluation of inducible nitric oxide synthase (iNOS) by immunohistochemical technique in rat brain tissues (PFC, hippocampus and striatum), showed an intense diffuse staining of iNOS in the tissues of the PFC and the striatum and a strong to moderate staining in the hippocampus of poly I:C adult animals when compared to the adult control group. However, a light staining was observed in adolescent animals when compared to other groups. There were differences in the intensity of staining between adolescent and adult Poly I: C animals, where the adult group showed higher intensity staining. Treatment with clozapine, in turn, decreased the staining of iNOS in some areas such as the hippocampus and PFC, being less evident in other as the striatum. These different results regarding the intensity of immunohistochemical stainning can be explained by the difference of dopaminergic receptors of the brain tissues studied. It is believed that these systems are modulated by nitric oxide. The evaluation by immunofluorescence for Iba-1 (a microglia marker) in the brain areas investigated, particularly in the hippocampus showed a decrease in the presence of ramifications and processes in the microglial cells from adult rats exposed to Poly I: C. In addition, the microglial cell bodies of the poly I:C adult rats were enlarged when compared to control adult animals, therefore indicating that adult poly I:C presented a higher microglial activation. In adolescent animals this activation was shown to be mild to moderate. Taken together, the current results showed, for the first time, an activation of microglial cells in adult animals submmited to the neonatal immune challenge accompanied by increases in iNOS staining. In addition, the atypical antipsychotic clozapine was able to revert poly I:C induced alterations indicating iNOS as a possible novel target for clozapine action. / A esquizofrenia é um grave transtorno mental. Este transtorno é capaz de comprometer o pensamento, vontade própria, percepção, afeito, e a interação social. As causas da esquizofrenia são ainda desconhecidas, variando desde influências genéticas, fatores ambientais, disfunções de áreas cerebrais, alterações fisiopatológicas e comprometimentos neurodesenvolvimentais. Este trabalho tem como principal objetivo determinar as alterações comportamentais e neuroinflamatórias no modelo neurodesenvolvimental de esquizofrenia induzida por desafio imune neonatal provocado por Poly I:C em ratos. Foram utilizados desde o nascimento ratos Wistar neonatos de ambos os sexos, nos seguintes períodos 5-7 dias (neonatos), 35 dias (adolescentes), 60 dias (adultos jovens) e 74 dias (adultos). Para a determinação dos efeitos preventivos ou terapêuticos da clozapina os animais foram tratados com o antipsicótico atípico na adolescência ou idade adulta, respectivamente. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média (EPM). Os dados comportamentais foram analisados por two-way ANOVA seguido pelo teste de Bonferroni como teste post-hoc. Os resultados do teste de Y-maze foram analisados por Two-way ANOVA no caso da avaliação de animais adolescentes e adultos seguido do teste de Bonferroni ou por One-way ANOVA seguido do teste de Student Newman Keuls no caso das avaliações dos animais na mesma idade. Valores significativos foram considerados quando p< 0,05. Os resultados mostraram que a administração intraperitoneal de Poly I:C 2,0 mg/kg em ratos Wistar neonatos (5º - 7° dia pós-natal), foi capaz de induzir um comportamento tipo-esquizofrenia na fase adulto jovem e adulto dos animais evidenciada por diminuições significativas do percentual de inibição pré-pulso (PPI) do reflexo do sobressalto. Estes animais também apresentaram aumento significativo no número de erros no teste de Y maze indicativo de comprometimento de memória de trabalho. As alterações comportamentais registradas nas idades adulto jovem e adulto não foram evidenciadas na adolescência dos animais. A avaliação por imunohistoquimica da enzima óxido nítrico sintase induzida (NOSi) nos tecidos cerebrais (CPF, CE e hipocampo), mostrou uma intensa marcação difusa nos tecidos do CPF e do CE e uma marcação de forte a moderada nas aréas do hipocampo de animais adultos submetidos ao desafio imune em comparação ao grupo adulto controle. Porém, uma leve marcação foi observada nos animais adolescentes, quando comparado aos demais grupos. Também foram observadas diferenças na intensidade de marcação entre os grupos adulto e adolescente tratados com Poly I:C, onde o grupo adulto apresentou maior intensidade de marcação. O tratamento com clozapina, por sua vez, foi capaz de reverter as alterações comportamentais e diminuir significativamente a marcação de NOSi em algumas áreas como o CPF e hipocampo, sendo menos evidente no corpo estriado. Os variados resultados de intensidade para as marcações imunohistoquímicas da NOSi podem ser justificados possivelmente pela diferença de receptores dopaminérgicos dos tecidos cerébrais estudados, onde se acredita que estes sistemas sofram influência moduladora direta do óxido nítrico. A avaliação por imunofluorescência para Iba-1 (marcador de micróglia) nas áreas cerebrais estudadas, principalmente no hipocampo demonstrou que as ramicações e os processos derivados das células microgliais dos ratos adultos expostos a Poly I:C apresentaram uma forte diminuição. Já o corpo celular microglial destes animais encontrava-se aumentado quando comparados aos animais adultos pertencentes ao grupo controle indicando, assim, uma elevada ativação microglial nos animais adultos desafiados com Poly I:C. Nos animais adolescentes tratados com Poly I:C esta ativação apresentou-se de forma leve a moderada. Em conclusão, os resultados do presente trabalho mostram de forma inédita a ativação de células microgliais em animais adultos submetidos ao desafio imune neonatal com poly I:C acompanhado por aumento na marcação de NOSi. A habilidade da clozapina em reverter as alteraçõs causadas pelo desafio imune em animais adultos indica a NOSi como novo possível alvo para a ação terapêutica da clozapina.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:28:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5711_1.pdf: 9976370 bytes, checksum: 3a6465f3bca56776f22c0f4faf69a8d3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Hipertensão porta devida à esquistossomose mansônica na forma hepatoesplênica (EHE) é tratada com sucesso pela esplenectomia e ligadura da veia gástrica esquerda (ELGE). Entretanto, após a retirada do baço, ocorre um aumento no risco da sepse fulminante pósesplenectomia (SFPE), causada pelo prejuízo à função imune normal por uma alteração do sistema fagocítico mononuclear (SFM). Assim, o auto-implante de tecido esplênico tem sido proposto, em crianças, com a finalidade de restaurar a função esplênica quando a esplenectomia é necessária. A estimulação do SFM causa a liberação de espécies reativas de nitrogênio, como o óxido nítrico (?NO), e de citocinas, como as interleucinas 6 (IL-6) e 12 (IL-12), que, juntos, têm um papel essencial na morte microbiana. Neste contexto, é importante também a ação da superóxido dismutase (SOD), enzima que transforma o superóxido em peróxido de hidrogênio, um potente produto microbicida. Este estudo de corte transversal teve o objetivo de avaliar a atividade funcional das células mononucleares do sangue periférico, empregando um ensaio in vitro em pacientes com EHE submetidos à ELGE e auto-implante de tecido esplênico em bolsa no omento maior, através da análise da produção de ?NO (&#956;mol/ml), IL-6 (&#956;g/ml), IL-12 (&#956;g/ml) e SOD (uSOD/mg proteína) no sobrenadante destas células. O grupo teste foi constituído de 19 pacientes com EHE submetidos, no Serviço de Cirurgia Geral da Cria nça, Hospital das Clínicas UFPE, à ELGE e auto-implante esplênico (EHE/ELGE/AI/G3). Os resultados foram comparados com três grupos, incluindo 12 pacientes com EHE não tratados (EHE/G1), 13 pacientes com EHE submetidos à ELGE (EHE/ELGE/G2) e 15 indivíduos sadios (CT/G4). Análise da produção de ?NO pelos monócitos mostrou resultados similares entre os grupos G2 (6,7 ± 0,4), G3 (7,4 ± 1,6) e G4 (8,2 ± 2,7). Entretanto, os pacientes do G1 produziram níveis baixos de ?NO (5,3 ± 1,3), quando comparados ao G3 (q= 4,285 p? 0,05) e G4 (q=5,837 p ? 0,01). Em relação à liberação de IL-6, os monócitos do G1 demonstraram reduzida habilidade em produzir esta citocina (468,0 ± 198,0), quando comparada ao G2 (628,6 ± 23,4; q=3,085 p? 0,05), G3 (632,9 ± 12,8; q=3,782 p? 0,05) e G4 (639,2 ± 32,2; q=4,332 p? 0,05). Ao contrário, nenhuma diferença estatística foi encontrada entre estes três grupos. A respeito da produção de IL-12, foram demonstradas altas quantidades desta citocina no G1 (4,6 ± 2,3), estatisticamente significante, em comparação com G2 (1,3 ± 0,6;q=4,695 p? 0,05), G3 (1,7 ± 1,3;q=4,353 p? 0,05) e G4 (2,2 ± 1,0;q=2,830 p? 0,05). Entretanto, não houve diferença estatística entre estes três grupos. A atividade da SOD foi significantemente maior no G1 (9,2 ± 3,8) e G2 (8,5 ± 3,2), em comparação com G4 (5,1 ± 2,1), enquanto sua atividade no G3 (7,3 ± 3,1) foi semelhante ao G4 (q=2,954 p? 0,05). Coletivamente, os resultados sugerem múltiplos padrões no perfil de resposta imune durante a EHE e igualmente após esplenectomia com ou sem auto-implante esplênico. Este estudo dá suporte à hipótese de que o auto- implante esplênico é capaz de manter a atividade do SFM, que pode ter contribuído para proteger os pacientes do grupo EHE/ELGE/AI da SFPE

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T20:53:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martinez_RaquelPardoZandavalli_M.pdf: 190598 bytes, checksum: 51202b64f20a2082ea054943eb7acee4 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A administração de doses altas ou moderadas do inibidor da síntese de NO, L-NAME, a ratos, causa hipertensão arterial, hipertrofia ventricular e fibrose miocárdica. O objetivo do presente estudo é avaliar os efeitos do enalapril e losartan nas mudanças estereológicas do ventrículo esquerdo causadas pela ingestão diária de baixa dose de L-NAME em ratos (7.5 mg/kg/dia). O enalapril (25 mg/kg/dia) e o losartan (30 mg/kg/dia) foram administrados a ratos machos Wistar (200 ± 18 g), adicionados à ingestão hídrica concomitantemente ao L-NAME. Os animais foram sacrificados aos 2 (N=44), 4 (N=45) e 6 (N=44) meses depois do tratamento. A atividade da cNOS foi inibida em 50% no grupo L-NAME, independentemente do tempo estudado. O tratamento com enalapril ou losartan, administrados individualmente, não mudaram a atividade da cNOS. A pressão sangüínea elevou em 13±1.2, 15±1.1 e 15±2 mmHg (P<0.05) nos ratos tratados com L-NAME aos 2, 4 e 6 meses, respectivamente, sendo tais alterações prevenidas pelo tratamento com enalapril ou losartan. A fração de volume (Vv), e a densidade de área (Sv) e de comprimento (Lv) da microcirculação nos ventrículos esquerdos foram significativamente reduzidas pelo L-NAME, sendo tais alterações prevenidas tanto pelo enalapril, quanto pelo losartan. A quantidade de tecido fibroso não foi alterada de modo significativo pelo tratamento com L-NAME. Em resumo, a redução marcante dos parâmetros vasculares cardíacos indicam a existência de intensa vasoconstrição coronariana nos ratos tratados com L-NAME, mesmo na vigência de modesta elevação da pressão arterial; indicando uma elevada sensibilidade da microcirculação coronariana ao NO / Abstract: Administration of high-to-moderate doses of the NO synthesis inhibitor L-NAME to rats causes arterial hypertension, ventricular hypertrophy and myocardial ischaemia. This study was designed to evaluate the effects of enalapril and losartan on the stereological changes in left ventricle caused by daily intake of a low dose of L-NAME in rats (7.5 mg/kg/day). Enalapril (25 mg/kg per day) and losartan (30 mg/kg per day) were given to male Wistar rats (200 ± 18 g) in the drinking water concomitantly to L-NAME. The animals were killed at 2 (N=44), 4 (N=45) and 6 (N=44) months after treatment. The bNOS activity was inhibited by 50% in the L-NAME group, irrespective of the studied time. Enalapril and losartan given alone had no effect on the bNOS activity. Blood pressure was elevated by 13±1.2, 15±1.1 and 15±2 mmHg (P<0.05) in L-NAME-treated rats at 2, 4 and 6 months, and this was prevented by enalapril or losartan. The volume density (Vv), surface density (Sv) and length density (Lv) of microcirculation in left ventricles were all significantly reduced by L-NAME, and all of these alterations were prevented by either enalapril or losartan. The amount of fibrous tissue in left ventricles was not significantly modified by the L-NAME treatment. In conclusion, a modest increase in mean arterial blood pressure caused by a partial reduction of cNOS activity may lead to a marked and prolonged coronary vasoconstriction, attesting the high sensitivity of the rat coronary microcirculation to NO / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Renato Giuseppe Giovanni Terzi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T11:16:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Iazzetti_PauloEduardo_D.pdf: 6413073 bytes, checksum: c899601479831f2cd9db1720dfe248a7 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Foi avaliado o efeito da hiperoxigenação hiperbárica (OHB) na sepse, utilizando-se o modelo de ligadura e punção cecal (LPC) em ratos. Realizaram-se estudos microbiológicos, hematológicos e dosagens plasmáticas dos seguintes mediadores: TNF, "Tumor Necrosis Factor", (imunoensaio tipo ELISA); nitrato e nitrito, catabólitos do óxido nítrico, (HPLC, "High Performance Liquid Cromatography") e corticosterona (radioimunoensaio), até doze horas de pós-operatório. Duas sessões (2 ATA, 120 min) efetuadas uma e seis horas após a cirurgia, permitiram uma diminuição significativa da taxa de mortalidade, de 75 % (LPC em ar ambiente) para 25 % (LPC tratado com OHB), em 24 horas. A OHB não alterou os tipos de bactérias identificadas em hemoculturas, nem a proporção de animais com culturas positivas. As bactérias mais freqüentes foram a Escherichia coli e Bacteroides sp. O número de animais com bacteremia positiva, a maioria doze horas pós-LPC, não se revelou um fator prognóstico consistente. Seis horas pós-LPC ocorreu considerável trombocitopenia e leucopenia, verificando-se redução nos neutrófilos e linfócitos circulantes, sem alterações nos monócitos, sugerindo um seqüestro de leucócitos específicos. Doze horas pós-LPC, houve recuperação significativa na contagem de neutrófilos no grupo exposto à OHB, apesar da maioria dos animais aprese~tarem-se bacterêmicos. O nível plasmático de TNF mostrou considerável variação individual, não havendo diferenças significativas entre os grupos, incluindo-se animais SHAM. A corticosterona apresentou-se elevaaa em todos os grupos, mantendo um ~lto e estável patamar entre seis e doze horas, com um valor de cinco vezes o normal, também sem diferenças expressivas entre os grupos. A sepse não justificou este aumento, uma vez que, animais SHAM também apresentaram doses elevadas do corticóide, indistinguíveis dos grupos sépticos. Houve um aumento do óxido nítrico plasmático em animais sépticos não tratados, o que não ocorreu naqueles expostos à OHB. Os resultados sugerem maior competência imunológica no grupo exposto à OHB, manifestada por menores níveis de mortalidade, seqüestro de neutrófilos e catabólitos do óxido nítrico, após doze horas de infecção. Como mecanismo protetor mais provável neste modelo, reforçaram-se as evidências de uma ação bacteriostática da OHB. Por outro lado, não foram verificados efeitos deletérios da OHB sobre os fatores analisados. Evidenciam-se a cinética dos neutrófilos e a dosagem de óxido nítrico sangüíneos como fatores importantes na fisiopatologia da sepse, neste modelo. A literatura recente destaca o papel da adesão e ativação de neutrófilos no desenvolvimento de disfunções de órgãos e, ainda, do óxido nítrico, na hipotensão refratária que determina o choque séptico. Embora este trabalho experimental não pretenda comprovar o uso da OHB em pacientes sépticos, seguramente é uma referência que permitirá novos estudos experimentais e clínicos, com o intuito de entender-se melhor a fisiopatologia da sepse e os mecanismos que definem o papel da OHB nesta grave patologia / Abstract: The effects of hyperbaric oxygen (HBO) were evaluated in a sepsis model, utilizating the cecalligation and puncture (CLP), in rats. Six and twelve hours post-CLP, microbiological and hematological studies were done and the levels of immunologic mediators were dosed in plasma: TNF - Tumor Necrosis Factor (ELISA assay), nitrite and nitrate - nitric oxide catabolites - (HPLC, High Performance Liquid Chromatography method) and corticosterone (radioimunnoassay method). Two HBO sessions (2 ATA, 120 min) initiated at one and six hours after surgery, decreased the mortality in 24 hours, from 75 % (CLP controls in air) to 25 % (CLP treated with HBO). The most common types of bacteria found in the blood were Escherichia co/i and Bacteroides sp. and with twelve hours the majority of animais had bacteremia, HBO did not change this bacterial pattem. The number of animais with positive bacteremia did not correlated with mortality and ,prognosis. Six hours folIowing CLP, an important reduction in platelets and leukopenia ocurred, in both groups, with a significant reduction in circulating neutrophils and limphocytes, but no monocyÍes, thus suggesting a differential sequestration. Twelve hours post-CLP, a considerable recovery was observed in neutrophil count in the OHB treatment group and the nitrite-nitrate levels do not change, altough the air control group had an important rise in nitrite-nitrate. Corticosterone remained high in ali groups, about five times ~he normal leveI. Low TNF and high corticosterone levels did not differ between groups, including SHAM groups. The results suggest a more efficient immunologic response in HBO treated rats, considering lower mortality rate, lower neutrophil sequestration and lower nitric oxide catabolytes levels. The most probable mechanism, responsible for this improved outcome, was the bacteriostatic HBO effect, alIowing a less severe bacterial dissemination. None detrimental or harrnful effects were observed in the HBO group, considering the analysed factors and outcome. The results emphasize the neutrophil kinetics and plasma nitric oxide catabolites as important indicators in the sepsis development. The recent literature highlights the neutrophil activation and adesion as major factors in the organs disfunction in sepsis, and the nitric oxide as a leading cause of hypotension and septic shock. Although this work do not intend to indicate HBO in the clinical setting, it is certanly a reference to alIow new clinical and experimental studies, in order to establish more detailed informations in the sepsis pathophysiology and the role of HBO in this condition / Doutorado / Doutor em Cirurgia

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T14:47:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_CleberEvandro_M.pdf: 2914205 bytes, checksum: c87dc7c36f4dc52cc15432dc39388316 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Tityus serrulatus é o escorpião mais perigoso da subfamília Tityinae no Brasil devido à alta I toxicidade de seu veneno e sua vasta distribuição nos centros urbanos da região sudeste do país. As manifestações clínicas mais importantes do envenenamento humano pelo veneno de Tityus serrulatus são dor local intensa acompanhada de queimação no local da picada podendo durar de poucos minutos a várias horas. Estas manifestações podem ser acompanhadas por disfunções autonômicas como vômitos profusos, taquicardia, alterações pupilares, sialorréia, taquipnéia, salivação, distúrbios da pressão arterial, tremores, etc. O veneno de Tityus serrulatus atua sobre as terminações nervosas do sistema nervoso autônomo estimulando a liberação de acetilcolina ou catecolaminas de diferentes órgãos e tecidos. Os tecidos eréteis de diferentes espécies animais são inervados por fibras nervosas excitatórias adrenérgicas, inibitórias colinérgicas e inibitórias não-adrenérgicas não-colinérgicas (NANC) que, por sua vez, desempenha papel importante nos mecanismos neurais envolvidos na ereção peniana através da liberação de óxido nítrico (NO). Assim, as fontes potenciais de produção de NO em corpo cavernoso de coelho são os nervos NANC bem como o endotélio que reveste a rede de capilares sinusóides presentes no tecido cavernoso. Devido à estimulação NANC causar. O relaxamento do corpo cavernoso, investigamos os efeitos do venepo de Tityus serrulatus no corpo cavernoso de coelho. Os efeitos do veneno do escorpião Tityus serrulatus e suas frações no corpo cavernoso de coelho isolado foram investigados através de ensaios biológicos em cascata. Os tecidos foram continuamente infundidos com indometamicina ( 5,6 µM) para inibir a geração de produtos da ciclooxigenase. O veneno bruto de Tityus serrulatus (400 mg) foi purificado em coluna CM- celulose-52. Veneno de Tityus serrulatus ( 3-100 µg), acetilcolina(Ach; 0,3 - 30 nmol), e gliceril trinitrato(GNT; 0,5 - 10 nmol) relaxaram as preparações pré- contraídas pela noradrenalina(3 µM) de modo dose-dependente. Os inibidores não-específicos da NO sintase (NOS) Nw?nitro-L-arginina metil éster (LNAME; 10 µM), Nw-nitro - monometil - L - arginine (L-NMMA; 10 µM) e NG-iminoetil - L -ornitina (L - NIO; 30 µM) aumentaram o tonus dos tecidos e inibiram os relaxamentos induzidos por ACh e pelo veneno de Tityus serrulatus sem afetar aqueles induzidos pelo GTN. O efeito inibitório inibitório foi revertido pela infusão de L - arginina (300 µM), mas não D-arginina (300 µM). O inibidor da NOS neuronaI1-(2-trifluorometilfenil) imidazol (TRIM, 100 µM) não afetou o tonus nem os relaxamentos induzidos por ACh, bradicinina (Bk), veneno de Tityus serrulatus e GTN. O TRIM foi aproximadamente 1000 vezes menos potente que o L-NAME em inibir a NOS cerebelar de coelho in vitro, cuja atividade é medida pela conversão de [3H]-L-arginina para [3H]-L-citrulina. O inibidor seletivo de guanilato ciclase solúvel H-[1,2,4] oxadiazolo [4,3,-alquinoxalín-1 ona] (ODQ; 30 µM) também aumentou o tonus basal dos tecidos e aboliu os relaxamentos induzidos pelos agonistas mencionados acima. O azul de metileno (30 µM) também inibiu os relaxamentos induzidos pelo veneno, porém, ao contrário do ODQ, a inibição foi irreversível. O inibidor de proteases aprotinína (TrasylolÒ; 10 µg.ml-1), o antagonista de receptores muscarínicos atropina (1µM) e o antagonista de receptores B2 Hoe 140 (D-Arg-[Hyp3,Thi5,D-Tic7,Oic8]-BK; 50 nM) não afetaram os relaxamentos de RbCC induzidos pelo veneno de Tityus serrulatus. Bloqueadores de canais de K+ como a glibenclamida (10µM), apamina (0.1 µM), charibdotoxina (0.1 µM) e tetraetilamônio (10 µM) também não afetaram os relaxamentos induzidos pelo veneno. Capsaicina (3 e 10 nmol) relaxou os tecidos de maneira dose-dependente e não taquifilática. O vermelho de rutênio (30 µM), inibidor das respostas induzidas pela capsaicina, reduziu marcadamente os relaxamentos de RbCC causados pela capsaicina, mas não afetou aqueles induzidosos pelo veneno. L-NAME (10 11M) não apresentou efeito sobre os relaxamentos induzidos pela capsaicina. Por outro lado, o bloqueador de canais de sódio tetrodotoxina (TTX; 1 µM) aboliu os relaxamentos de RbCC induzidos pelo veneno de Tityus serrulatus sem afetaram os induzidos por capsaicina, ACh e GTN. A TTX (1µM) também reverteu prontamente a resposta do veneno quando infundido durante a fase de relaxamento. Das treze frações obtidas do veneno bruto de Tityus serrulatus, apenas as frações X, XI e XII causaram relaxamento de RbCC de modo dose-dependente, cujo efeito foi marcadamente 'inibido na presença de L-NAME (10 µM) ou tetrodotoxina (1µM). Nós propomos, portanto que o veneno de Tityus serrulatus atua seletivamente sobre as fibras NANC, possivelmente nitrérgicas, e que o NO gerado no nervo se difunde através dos terminais relaxando o músculo liso vascular adjacente. Além disso, a NOS neuronal (bNOS) já foi detectada no pênis humano e de rato usando-se anticorpos NOS específicos e imunohistoquímica. A descoberta de que o TRIM, um inibidor seletivo para a bNOS em camundongos, não afetou a liberação de NO induzida pelo veneno de Tityus serrulatus, pode, refletir sua potência reduzida sobre a enzima do coelho / Abstract: Títyus serrufatus ís the most dangerous scorpíon of the subfamily Tityinae in Brazíl because of the high toxicity of its venom and its widespread distribution in populous urban centers of southeastern region of the country. The most important clinical manifestations of the human envenomation by Títyus serrulatus are intense local pain and an immediate local burning . sensation which may last from few minutes to several hours. These manifestations may be accompanied by autonomic dysfunctions such as vomiting, diaphoresis, tachycardia, mydriasis, tachypnea, excessive salivation, arterial pressure disturbances, tremors, etc. Tityus serrufatus . venom is known to act on nerve endings of the autonomic nervous system to stimulate the release of either acetylcholine or catecholamines from different organs and tissues. The erectile tissues from different animal species are innervated by adrenergic excitatory, cholinergic inhibitory and non-adrenergic non-cho!inergic (NANC) inhibitory nerve fibers which in ~ turn is believed to play a pivotal rore in the neural mechanisms involved in penile erection through the release of NO. Thus, the potential sources of NO production in the rabbit corpus cavernosum t preparation employed in this study are both NANC nerves and the endothelium covering the network of sinusoidal capillaries supplying the cavernosal tissue. Since NANC nerve stimulation . causes corpus cavernosum relaxation, we have investigated the effects of Tityu's serrulatus scorpion venom on the rabbit isolated corpus cavernosum. The effect of Tityus serrulatus scorpion venom and its fractions on the rabbit isollated corpus cavernosum (RbCC) was investigated using a bioassay cascade. The tissues were continuously infused with indomethacin (5.6 µM) to inhibit the generation of cyclooxygenase products. Dried Tityus serrufatus venom (400 mg) was purified using a CM-cellulose-52 column. Tityus serrufatus venom (3-100 1l9), acetylcholine (ACh; 0.3-30 nmol) and glyceryl trinitrate (GTN;0.5-10nmol) dose-dependently relaxed RbCC preparations precontracted with noradrenaline (3µM). The non-specific NO synthase (NOS) inhibitors Nw-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME; 10 µM), Nw-nitro-monomethyl-L-arginine (L-NMMA; 10 µM) and NG -iminoethyl-L-ornithine (L-NIO; . 30 µM) increased the tone of the RbCC tissues and markedly reduced both ACh- and Tityus serrulatus venom-induced RbCC relaxations without affecting those evoked by GTN. The inhibitory effect was reversed by infusion of L-arginine (300 µM), but not D-arginine (300 µM). The neuronal NOS inhibitor 1-(2-trifluoromethylphenyl) imidazole (TRIM, 100µM) affected neither the tone of the RbCC nor the relaxations induced by ACh, bradykinin (Bk), Tityus serrulatus venom and GTN. TRIM was approximately 1,000 times less potent than L-NAME in inhibiting rabbit cerebellar NOS ín vítro, as measured by the conversion of [3H]-L-arginine to [3H]-L-citrulline. The selective soluble guanylate cyclase inhibitor 1 H-[1 ,2,4] oxadiazolo [4,3,-alquinoxalin-1one] (OQD; 30 µM) also increased the basal tone of the RbCC and abolished the relaxations. induced by the agonists mentioned above. Methylene blue (30 µM) also inhibited the relaxations induced by Tityus serrulatus venom but, in contrast to OQD, the inhibition was irreversible. The protease inhibitor aprotinín (TrasylolÒ; 10µg.ml-1 the muscarini receptor antagonist atropine (1 IlM) and the bradykinín 82 receptor antagonist Hoe 140 (D-Arg-[Hyp3,Thi5,D-Tie, Oic8]-BK; 50 nM) did not affect the RbCC relaxations induced by Tityus serrulatus venom. Potassium channel antagonists such as glybenclamide (10 µM), apamin (0.1 µM), charybdotoxin (0.1 µM) and . tetraethylammonium (10 µM) also failed to affect the venom-induced relaxations. Capsaicin (3 and 10 nmol) relaxed the RbCC tissues in a dose-dependent and non tachyphylactic manner. Ruthenium red (30 µM), an inhibitor of capsaicin-induced responses, markedly reduced the RbCC relaxations caused by capsaicin, but failed to affect the RbCC . relaxations induced by Tityus serrulatus venom. L-NAME (10 µM) had no effect on the capsaicin induced RbCC relaxations. On the other hand, the sodium channel blocker tetrodotoxin (TTX; 1µM) abolisheçi the RbCC relaxations induced by Tityus serrulatus venom without affecting those evoked by capsaicin, ACh and GTN. Tetrodotoxin (1 µM) also promptly reversed the response to the venom when infused during the relaxation phase.The bioassay cascade of thirteen different toxin components purified from the Whole venom revealed that only fractions X, XI and XII caused dose-dependent RbCC relaxations and this was markedly reduced by either TTX (1 µM) or L-NAME (10 µM). We propose therefore that Tityus serrulatus venom acts selectively on NANC fibers, possibly nitrergic nerves, and that the NO generated in the nerve diffuses through the nerve endings to relax the adjacent vascular smooth muscle. Indeed, neuronal NOS (bNOS) has been detected in both the rat and human penis using an specific NOS antibody and immunohistochemistry. The findings that TRIM, a specific neuronal NOS inhibitor in the mouse, did not affect the NO release induced by Tityus serrulatus venom, may reflect its reduced potency on the rabbit enzyme / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas