Orientador: Rosicleire Veríssimo Silveira / Resumo: O objetivo deste trabalho a incorporação de ácidos graxos essenciais nas membranas dos embriões de Astyanax altiparanae, visando a determinação de protocolos para a crioconservação de embriões desta espécie de peixe neotropical.Para realização do experimento foram selecionados 2400 espécimes deA. altiparanae. Um grupo foi alimentado com ração comum, denominado de Ração Comercial (RC), e outro alimentado com ração comum acrescida de 5% de óleo de peixe marinho, denominado de Ração Comercial com Óleo de peixe marinho (RC+O). No Capítulo I, foi realizado análise de ácidos graxos no fígado, gônada e embrião. E verificado a mobilização destes ácidos graxos e sua influência. No Capítulo IIverificamos a permeabilização do córion nos embriões quando expostos a solução de pronase-E 25mg/mL, por períodos de 10, 20, 30s. Também foi analisado a sensibilidade dos embriões RC e RC+O aos crioprotetores. Os embriões foram expostos a soluções de propileno glicol, metanol, dimetil sulfóxido, dimetil, formamida, dimetil acetamida e glicerol, por 20 minutos. Verificou-se a taxa de eclosão e viabilidade das larvas após a eclosão. No Capítulo III os embriões do grupo RC e RC+O foram vitrificados em solução de propileno glicol 5M, na fase de seis somitos.No capítulo IV buscou-se o resfriamento dos embriões de RC e RC+O a tempeturas de 15°C, 5°C e 0°C, por um período de 12h. Os embriões foram expostos a soluções sem crioprotetor, com propileno glicol 1M e 2M. / Abstract: The objective of this work was the incorporation of essential fatty acids in the membranes of the embryos of Astyanax altiparanae, aiming the determination of protocols for the cryopreservation of embryos of this neotropical fish species. For the experiment, 2400 specimens of A. altiparanae were selected. One group was fed with common ration, called Commercial Ration (CR), and the other was fed with common ration plus 5% of marine fish oil, called Commercial Ration with Marine Fish Oil (CR + O). In Chapter I, analysis of fatty acids in the liver, gonad and embryo was performed. And we verified the mobilization of these fatty acids and their influence. In Chapter II we verified the permeabilization of the chorion in the embryos when exposed to 25mg / mL pronase-E solution, for periods of 10, 20, 30s. The sensitivity of the CR and CR + O embryos to the cryoprotectants was also analyzed. The embryos were exposed to solutions of propylene glycol, methanol, dimethyl sulfoxide, dimethyl, formamide, dimethyl acetamide and glycerol for 20 minutes. The hatch rate and viability of the larvae after hatching were checked. In Chapter III the embryos of the CR and CR + O group were vitrified in 5M propylene glycol solution in the six somites phase. In Chapter IV, the cooling of the CR and CR + O embryos was sought at temperatures of 15 ° C, 5 ° C and 0 ° C for a period of 12 hours. The embryos were exposed to cryoprotectant solutions with 1M and 2M propylene glycol. / Doutor

Durante as últimas décadas a incidência de obesidade e diabetes tipo 2 vem aumentando assustadoramente, principalmente, em crianças. Recentes estudos sugerem que a hiperglicemia crônica, situação comum em diabéticos sem controle sobre a glicemia, altera mecanismos intracelulares, incluindo aumento na via dos polióis, ativação da proteína quinase C, aumento da via das hexosaminas e aumento na formação de produtos finais da glicação avançada (AGEs). Complicações vasculares como a nefropatia e a neuropatia são comumente encontradas em pacientes diabéticos, assim como falha na função cardíaca e hepática. Os AGEs estão relacionados com o aumento de: estresse oxidativo, dano ao ADN, citocinas pró-inflamatórias e resistência à insulina. Nos últimos anos muitas drogas têm sido testadas para prevenção ou diminuição dos efeitos das glicotoxinas, principalmente no diabetes, entretanto poucas obtiveram sucesso. Na presente tese, demonstramos que as glicotoxinas endógenas e exógenas afetam o metabolismo de alguns aminoácidos e o metabolismo energético do sistema nervoso central de maneira a prejudicar sua homeostase. Podemos concluir, também, que os Ω3- PUFAs demonstraram melhorar o estado redox no fígado e no rim de ratos diabéticos alimentados com uma dieta hiperlipídica aquecida. Estes resultados podem sugerir que os ácidos graxos poli-insaturados Omega 3 (Ω3-PUFAs) possam ser adjuvante no tratamento de algumas doenças como diabetes mellitus e resistência à insulina. / During the last decades the incidence of obesity and type 2 diabetes has increased alarmingly, especially in children. Some studies suggest that chronic hyperglycemia, a situation common in diabetics with no control over blood glucose levels, alters intracellular mechanisms, including increased polyol pathway, activation of protein kinase C, increased of Hexosamines pathway and increased formation of advanced glycation end products (AGEs). Vascular complications such as nephropathy and neuropathy are commonly found in diabetic patients, as well as cardiac and liver failure. AGEs are related to the increase: oxidative stress, DNA damage, proinflammatory cytokines and insulin resistance. In recent years several drugs have been tested for preventing or mitigating the effects of glycotoxins, especially in diabetes, but few have succeeded. In this thesis, we demonstrate that endogenous and exogenous glycotoxins affect metabolism of some amino acids and energy metabolism of the central nervous system in a manner detrimental homeostasis. We can also conclude that Ω3-PUFAs shown to improve the redox state in liver and kidney of diabetic rats fed a heated fat diet. These results may suggest that polyunsaturated fatty acids Omega 3 (Ω3-PUFAs) can be used as adjuvant in the treatment of some diseases such as diabetes mellitus and insulin resistance.

O presente estudo tem por objetivo investigar a influência da privação dietética de ácidos graxos ω3 no sistema glutamatérgico no hipocampo de ratos Wistar em parâmetros ontogenéticos e relacionados à neuroproteção. Os ratos foram alimentados, desde a gestação até a vida adulta, com duas dietas diferentes: uma dieta contendo ácidos graxos ω3 (grupo controle, C) e outra deficiente nestes ácidos graxos (grupo deficiente, D). Nos experimentos ontogenéticos, foram avaliados os imunoconteúdos das subunidades de receptores glutamatérgicos ionotrópicos do tipo NMDA (NR2 A/B) e AMPA (GluR1), bem como da isoforma alfa da cinase dependente de cálcio e calmodulina do tipo II (αCaMKII). Também foram avaliados a capacidade do glutamatode ligar-se a seus receptores e a captação de [3H]glutamato em fatias de hipocampo. Para investigar o efeito da privação de ácidos graxos ω3 na resposta cerebral frente à injúria isquêmica, fatias de hipocampo foram submetidas à privação de glicose e oxigênio (OGD), um modelo de isquemia in vitro. O grupo D apresentou imunoconteúdo reduzido de todas as proteínas avaliadas aos 02 dias de vida, o que foi sendo normalizado aos 21 dias (exceto pela αCaMKII) e aos 60 dias. O mesmo padrão foi observado na capacidade de ligação do glutamato aos seus receptores. Porém a captação de [3H]glutamato não foi afetada pelas dietas. Nos experimentos de OGD, o grupo D apresentou maior dano celular e uma queda na captação de [3H]glutamato mais acentuada que o grupo controle. Ainda, a privação de ácidos graxos ω3 influenciou a resposta celular anti-apoptótica após OGD, afetando a fosforilação das proteínas GSK3β e ERK1/2, mas não a fosforilação da Akt. Estes resultados sugerem que os ácidos graxos ω3 são importantes para o desenvolvimento do sistema glutamatérgico e para a proteção celular após dano isquêmico, além de ser importante para ativação de rotas de sinalização anti-apoptóticas. / The effect of dietary deprivation of essential omega-3 fatty acids on parameters of the glutamatergic system related to brain ontogeny and neuroprotection was investigated in this study. Rats were fed with two different diets: omega-3 diet (control group) and omega-3 deprived-diet (D group). In ontogeny experiments, it was evaluated the hippocampal immunocontent subunits of the of ionotropic glutamatergic receptor NMDA and AMPA (NR2 A\B and GluR1, respectively) and the alfa isoform of the calcium-calmodulin protein kinase tipe II (αCaMKII), as well as the binding and uptake of [3H]glutamate. To assess the influence of omega-3 fatty acids deprivation on brain responses to ischemic insult, hippocampal slices were submitted to oxygen and glucose deprivation (OGD), a model of in vitro ischemia. The D group showed lower immunocontent of all proteins analyzed at 02 days of life (P2) than the control group, and it was normalized at P21 (except for αCaMKII) and P60. The same pattern was found for [3H]glutamate binding, while [3H]glutamate uptake was not affected. In the OGD studies, the D group showed higher cell damage and stronger decrease in the [3H]glutamate uptake. Moreover, omega-3 deprivation influenced anti-apoptotic cell response after OGD, affecting GSK-3beta and ERK1/2, but not Akt phosphorylation. Taken together, these results suggest that omega-3 fatty acids are important for the glutamatergic development and cell protection after ischemia, and also seem to play an important role on activation of anti-apoptotic signaling pathways.

196 f. / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-03-22T15:41:41Z No. of bitstreams: 3 Sumário ate RESUMO.doc: 235008 bytes, checksum: e0a47f2738ffda0d3effb2ac8b888eed (MD5) REVISADA PÓS DEFESA - TEXTO.doc: 11879936 bytes, checksum: fc042cbf26b9c08de548029e8d4ee44a (MD5) CAPA + SUMÁRIO.doc: 357888 bytes, checksum: c492fcf8e42050995e494a3c7833f2f6 (MD5) / Rejected by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br), reason: colocar o ficheiro em pdf e um só arquivo on 2013-06-04T15:36:40Z (GMT) / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-06-04T15:44:19Z No. of bitstreams: 1 Tese Fernando Luiz T Rêgo.pdf: 3765555 bytes, checksum: 7cd41f5b29ef09138136a1ab969f6f18 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-06-04T15:45:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Fernando Luiz T Rêgo.pdf: 3765555 bytes, checksum: 7cd41f5b29ef09138136a1ab969f6f18 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-04T15:45:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Fernando Luiz T Rêgo.pdf: 3765555 bytes, checksum: 7cd41f5b29ef09138136a1ab969f6f18 (MD5) Previous issue date: 2012 / A visão sobre os ácidos graxos em pescados, nossa principal preocupação, teve como referencial os dados de alimentos de origem animal, vegetal e alimentos derivados dessas origens. Neste trabalho foram determinados os perfis de ácidos graxos em dez espécies de peixes a saber: ariacó, arraia, baiacu, guaricema (peixe inteiro e músculo escuro), rabo aberto, robalo, salmão, sardinha, xaréu, xixarro considerados relevantes para o consumo humano e comercialmente importantes para a população do estado da Bahia. As amostras foram adquiridas na cidade do Salvador/Ba e processadas no Laboratório de Pesquisa e Desenvolvimento em Química – LPQ do Instituto de Química da UFBA. Os extratos lipídicos daS amostras foram obtidos pelo método de Bligh&Dyer, concentrados e armazenadas em frações de 10g sob refrigeração até o momento da análise cromatográfica. Cada amostra teve seu perfil analisado por cromatografia a gás com detector de massa, a partir de padrões dos ácidos graxos caprílico, capríco, láurico, tridecanóico, miristoléico, mirístico, pentadecanóico, α-linolênico (ω-3), linoléico (ω-6), oléico, elaídico, esteárico icosapentaenóico (ω-3), araquidônico (ω-6), eicosaenoico, araquídico, heneicosaenóico, behênico, erúcico (ω-9), estabelecendo os somátórios dos ácidos graxos das séries ômega 3 e ômega 6 bem como as suas relações para cada espécies de peixe. As curvas analíticas nas faixas de concentração de 0,988 – 313,6 ppm, para cada um dos ácidos graxos, foram construídas mediante a injeção de 1,0µL de padrão externo, em 6 a 10 níveis, em faixas distintas de concentração com o objetivo de estudar a linearidade das respostas, determinar os limites de detecção e quantificação e, também, quantificar os analitos presentes nas amostras de peixes. As curvas analíticas apresentaram boa linearidade. O Coeficiente de Determinação (R2), de cada equação da reta, esteve acima de 0,990, possibilitando a quantificação dos compostos pelo método do padrão externo. As condições cromatográficas foram estabelecidas a partir de procedimentos descritos na literatura, da experiência anterior do grupo de pesquisa do LPQ em análise de ácidos graxos por CG-EM45, considerando as especificações da coluna cromatográfica. A detecção foi feita em um detector de massas, utilizando a técnica de ionização por impacto de elétrons, com energia de 70eV, nas seguintes condições: corte do solvente em 4,0 minutos (tempo de não ionização); temperatura da linha de transferência: 280 ºC; temperatura da fonte de íons a 250 ºC; modo de aquisição scan. Foi realizada a análise de componentes principais (PCA) e análise de agrupamento hierárquico (HCA) com o objetivo de verificar se as amostras de peixes analisadas formam grupos de similaridades distintos e o que leva a formação dos diferentes grupos. As maiores concentrações de ácidos graxos foram obtidas para os ácidos oléico, esteárico, mirístico e araquidônico sendo que os ácidos behênico, caprílico, cáprico e linoléico (ω-6) foram os de menores contrações. A relação ω6/ω3 apresentou resultados considerados recomendáveis na dieta humana para todos os peixes analisados. O destaque é para a amostra do músculo escuro da guaricema que expressou valores extremamente elevados em todo seu perfil de ácidos graxos, contudo o resultado da relação ω6/ω3 foi dentro da faixa dos recomendáveis pela literatura. Destes resultados concluímos, considerando que quanto menor a relação ω6/ω3 maiores os benefícios á saúde humana, que os peixes ariacó, arraia, baiacu, guaricema, rabo aberto, robalo, sardinha, xaréu e xixarro, da Baía de Todos os Santos e o salmão são os mais aconselhados para consumo em uma dieta saudável. Há ainda que considerar a possibilidade de beneficiamento do músculo dorsal escuro da guaricema como rica fonte em ácidos graxos. / Salvador

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-10-21T17:30:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 514500 bytes, checksum: de271ef0f6d6dddb183f81a3816210da (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-21T17:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 514500 bytes, checksum: de271ef0f6d6dddb183f81a3816210da (MD5) Previous issue date: 2003-04-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Foram determinadas as composições dos ácidos graxos de três peixes de água doce (tilápia do Nilo - Oreochromis niloticus; carpa comum - Cyprinus carpio e híbrido tambacu: tambaqui - Colossoma macropomum e pacu - Piaractus mesopotamicus). Os peixes foram avaliados na forma crua, assada e cozida à vapor, com pele e sem pele, nos tempos 0, 15, 30 e 45 dias de armazenamento sob congelamento. Os lipídios foram extraídos pelo método de Folch et al. (1957), esterificados pelo método Hartman e Lago (1973) e analisados por cromatografia gasosa (CG). Os ácidos palmítico (16:0) e oléico (18:1) foram os ácidos graxos presentes em maior proporção nos peixes estudados, considerando-se os tempos de estocagem e os modos de cocção. Foram verificados altos percentuais de ácidos graxos saturados (em média, 43,3 e 37,4%) para tilápia e tambacu, respectivamente) e monoinsaturados (em média 53,8%) para carpa. Os ácidos graxos polinsaturados foram encontrados em menor percentual (em média 17,5%) para tilápia. De maneira geral, a composição de ácidos graxos dos três peixes avaliados não apresentaram grandes variações em função do tempo de congelamento e do modo de preparo. Por outro lado, os percentuais dos ácidos graxos aumentaram com a retirada da pele, em todos os tempos de estocagem sob congelamento e modos de cocção. Os maiores percentuais de ácidos graxos polinsaturados foram encontrados na carpa assada, com e sem pele (23,3 a 27,3%); na tilápia cozida à vapor, com e sem pele (26,2 a 35,1%) e no tambacu cozido à vapor, com e sem pele (27,1 a 35,5%) após 45 dias de estocagem sob congelamento, indicando que a cocção e o congelamento exerceram um efeito positivo sobre o percentual deste grupo de ácidos graxos, de grande importância para a saúde humana. Os maiores percentuais de DHA e EPA foram encontrados nos peixes submetidos à cocção (úmida e seca), indicando que os métodos de cocção utilizados tiveram efeito positivo sobre os principais ácidos graxos polinsaturados da série ω-3. Concluiu-se que, dentre os peixes estudados, a tilápia, apesar do menor percentual de ácidos graxos polinsaturados encontrado, mostrou-se a mais promissora para a prescrição de dietas que requerem baixo teor de lipídios (0,79%), além de uma relação mais elevada entre os ácidos graxos da série ω-3/ω-6 (0,84). / The fatty acid composition of three fresh water fishes was determinated (Nile tilapia - Oreochromis niloticus; common carp - Cyprinus carpio and the hybrid tambacu: tambaqui - Colossoma macropomum with pacu - Piaractus mesopotamicus). Raw, steamed and roasted fishes were evaluated with or without skin at 0, 15, 30 and 45 days of freezing storage. The lipids were extracted by the method of Folch et al. (1957). Then, they were sterified by the method of Hartman and Lago (1973) and further analysed by gas chromatography (GC). Palmitic (16:0) and oleic (18:1) acids were found in the highest proportion in the fishes studied, irrespective to the cooking processes and the storage time. High levels of saturated fatty acids were found for tilapia and tambacu (43.3 and 37.4% on average, respectively) and monounsaturated fatty acids for carp (53.8% on average). Tilapia showed the lowest levels of polyunsaturated fatty acids - PUFA (17.5% on average). In general, the fish fatty acid composition did not change considerably due to either the cooking process or the freezing storage time. On the other hand, the fatty acid content increased with the skin removal, regardless to the cooking or the storage process. PUFA were found in higher concentrations in roasted carp (23.3 to 27.3%); steamed tilapia (26.2 to 35.1%) and in steamed tambacu (27.1 to 35.5%), with or without skin, after 45 days of freezing storage. This indicates that cooking and freezing improve the levels of PUFA, which are considered to exert a beneficial effect on human health. The higher levels of DHA and EPA were found in processed fishes (roasted or steamed), which suggests the positive effect of cooking in ω-3 PUFA. Among the fishes analysed, tilapia, although have shown the lowest PUFA level, seems to be the most promessing fish for low-fat diet prescription (0.79%), with the highest ω-3/ω-6 ratio (0.84). / Não foi localizado o cpf do autor.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28 / Alguns estudos apontam para o efeito benéfico do uso isolado de Ginkgo biloba ou ômega 3 na cognição de idosos. Desta forma, o objetivo desta pesquisa foi verificar se o uso associado destas duas substâncias potencializa a melhora cognitiva em mulheres idosas (n=43), de 60 a 70 anos, saudáveis e com escolaridade igual ou superior a oito anos. Realizou-se um estudo duplo-cego, placebo controlado e randomizado. As substâncias foram administradas por 3 meses, de acordo com o grupo de tratamento: placebo+placebo (n=12), ginkgo+placebo (n=10), ômega3+placebo (n=11) e, ômega3+ginkgo (n=10). Os comprimidos continham 80 mg de extrato seco de Ginkgo biloba e as cápsulas, 1 g de óleo de peixe (rico em ômega 3). Exames laboratoriais, testes cognitivos e escalas para ansiedade, depressão e qualidade de vida foram aplicadas no início e ao final do tratamento. Não encontramos melhoras na funções cognitivas avaliadas em nenhum dos quatro grupos. A ação conjunta de uma série de fatores podem ser destacados para auxiliar a compreensão dos resultados finais, como o tempo de tratamento, doses insuficientes das substâncias, alta escolaridade das idosas e pequeno número de sujeitos em cada grupo. A comparação da literatura com nossos achados demonstrou que não há um consenso sobre os testes cognitivos a serem utilizados, as doses e tempo de uso das duas substâncias. / Several studies point to the beneficial effect of Ginkgo biloba and omega 3 on cognition in the elderly. The objective of this research was to verify whether the combined use of these substances enhances the cognitive functioning. The study was conceived as a double-blind, placebo-controlled, randomized trial. Altogether, 43 subjects between 60 and 70 years old, female, healthy, with more than 8 years of formal education, have ingested substances on a daily basis, for three months, according to the assigned treatment group: placebo+placebo (n=12), ginkgo+placebo (n=10), ômega3+placebo (n=11), ômega3+ginkgo (n=10), in the form of capsules that could contain 80 mg of ginkgo, 1 gram of fish oil (rich in omega 3) or placebo. Unlike other studies, we found no improvement in cognition of/in any of the four groups. The hypotheses suggested are: time of treatment or insufficient doses of substances. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O presente estudo tem por objetivo investigar a influência da privação dietética de ácidos graxos ω3 no sistema glutamatérgico no hipocampo de ratos Wistar em parâmetros ontogenéticos e relacionados à neuroproteção. Os ratos foram alimentados, desde a gestação até a vida adulta, com duas dietas diferentes: uma dieta contendo ácidos graxos ω3 (grupo controle, C) e outra deficiente nestes ácidos graxos (grupo deficiente, D). Nos experimentos ontogenéticos, foram avaliados os imunoconteúdos das subunidades de receptores glutamatérgicos ionotrópicos do tipo NMDA (NR2 A/B) e AMPA (GluR1), bem como da isoforma alfa da cinase dependente de cálcio e calmodulina do tipo II (αCaMKII). Também foram avaliados a capacidade do glutamatode ligar-se a seus receptores e a captação de [3H]glutamato em fatias de hipocampo. Para investigar o efeito da privação de ácidos graxos ω3 na resposta cerebral frente à injúria isquêmica, fatias de hipocampo foram submetidas à privação de glicose e oxigênio (OGD), um modelo de isquemia in vitro. O grupo D apresentou imunoconteúdo reduzido de todas as proteínas avaliadas aos 02 dias de vida, o que foi sendo normalizado aos 21 dias (exceto pela αCaMKII) e aos 60 dias. O mesmo padrão foi observado na capacidade de ligação do glutamato aos seus receptores. Porém a captação de [3H]glutamato não foi afetada pelas dietas. Nos experimentos de OGD, o grupo D apresentou maior dano celular e uma queda na captação de [3H]glutamato mais acentuada que o grupo controle. Ainda, a privação de ácidos graxos ω3 influenciou a resposta celular anti-apoptótica após OGD, afetando a fosforilação das proteínas GSK3β e ERK1/2, mas não a fosforilação da Akt. Estes resultados sugerem que os ácidos graxos ω3 são importantes para o desenvolvimento do sistema glutamatérgico e para a proteção celular após dano isquêmico, além de ser importante para ativação de rotas de sinalização anti-apoptóticas. / The effect of dietary deprivation of essential omega-3 fatty acids on parameters of the glutamatergic system related to brain ontogeny and neuroprotection was investigated in this study. Rats were fed with two different diets: omega-3 diet (control group) and omega-3 deprived-diet (D group). In ontogeny experiments, it was evaluated the hippocampal immunocontent subunits of the of ionotropic glutamatergic receptor NMDA and AMPA (NR2 A\B and GluR1, respectively) and the alfa isoform of the calcium-calmodulin protein kinase tipe II (αCaMKII), as well as the binding and uptake of [3H]glutamate. To assess the influence of omega-3 fatty acids deprivation on brain responses to ischemic insult, hippocampal slices were submitted to oxygen and glucose deprivation (OGD), a model of in vitro ischemia. The D group showed lower immunocontent of all proteins analyzed at 02 days of life (P2) than the control group, and it was normalized at P21 (except for αCaMKII) and P60. The same pattern was found for [3H]glutamate binding, while [3H]glutamate uptake was not affected. In the OGD studies, the D group showed higher cell damage and stronger decrease in the [3H]glutamate uptake. Moreover, omega-3 deprivation influenced anti-apoptotic cell response after OGD, affecting GSK-3beta and ERK1/2, but not Akt phosphorylation. Taken together, these results suggest that omega-3 fatty acids are important for the glutamatergic development and cell protection after ischemia, and also seem to play an important role on activation of anti-apoptotic signaling pathways.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A doença da urina do xarope do bordo (DXB) é um distúrbio metabólico hereditário em que ocorre o acúmulo dos aminoácidos de cadeia ramificada (AACR) leucina, isoleucina e valina, e de seus α-cetoácidos de cadeia ramificada (CACR) α-cetoisocaproico, α-cetometilvalérico e α-cetoisovalérico. Pacientes com DXB podem apresentar, entre outros sintomas, prejuízo neurológico. No entanto, a fisiopatologia subjacente a este dano cerebral permanece pouco esclarecida. Muitas estratégias terapêuticas, incluindo antioxidantes, são estudadas na tentativa de contribuir para o tratamento destes pacientes. Neste contexto, os ácidos graxos (AG) da família ômega-3, conhecidos por atuarem na estrutura e manutenção do sistema nervoso central, estão sendo amplamente estudados e recomendados para gestantes. Adicionalmente ao seu papel estrutural, estes AG são utilizados por atuarem como anti-inflamatórios e antioxidantes. O objetivo do presente estudo foi investigar, mediante dois protocolos de administração, os efeitos do ômega-3 sobre o dano ao DNA, através do ensaio cometa, em hipocampo, estriado e córtex cerebral da prole de ratos com DXB. No primeiro protocolo, investigou-se a suplementação materna com ômega-3 (0,8 g/kg peso corporal) durante o período pré-natal e seus efeitos sobre a prole. No segundo protocolo, investigou-se o tratamento de ratos infantes com ômega-3 (0,1 g/kg peso corporal) no período pós-natal. O modelo crônico de DXB aplicado à prole foi induzido quimicamente pelo pool de AACR (15,8 μL/g peso corporal). Os resultados mostraram que a suplementação materna com ômega-3 durante o período pré-natal não preveniu os danos causados ao DNA no cérebro da prole com DXB. Por outro lado, quando o ômega-3 foi utilizado como tratamento pós-natal, esse reverteu os danos ao DNA nas estruturas cerebrais hipocampo, estriado e córtex dos ratos com DXB. De acordo com estes resultados, pode-se concluir que os metabólitos acumulados na DXB causam dano ao DNA e que o ômega-3 apresentou efeito protetor quando administrado no período pós-natal. Assim, sugere-se que o ômega-3 possa ser utilizado como um possível adjuvante ao tratamento da DXB.

Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / Modelos animais são importantes ferramentas para a investigação da fisiopatologia, de transtornos psiquiátricos, tais com o transtorno depressivo maior (TDM), assim como estudar os efeitos de fármacos antidepressivos. Embora a fisiopatologia do TDM ainda não esteja esclarecida o estresse oxidativo é apontado com um importante fator. Cerca de 50% dos pacientes com TDM não melhoram com os antidepressivos disponíveis. Assim, é importante a investigação de novas estratégias terapêuticas. Deste modo, este estudo teve como objetivo investigar novas estratégias com potencial antidepressivo usando o ômega-3, o ácido fólico, a N-acetilcisteína (NAC), a cetamina e a minociclina para prevenir ou reverter alterações comportamentais e cerebrais induzidas pelo estresse no início da vida ou tardio. Para induzir o estresse no início da vida ratos Wistar foram privados dos cuidados maternos durante os 10 primeiros dias de vida. Para induzir o estresse tardio ratos Wistar foram submetidos ao modelo de estresse crônico moderado (ECM) por 40 dias. Para prevenir os efeitos do estresse o tratamento foi feito via oral por 20 dias com ômega-3 (0,72 g/kg), ácido fólico (50 mg/kg) e NAC (20 mg/kg). Para reverter os efeitos do estresse o tratamento foi feito via intraperiotoneal com uma única dose de cetamina (15 mg/kg), e por 15 dias com minociclina (25 mg/kg) e amitriptilina (10 mg/kg). Após foi realizado o teste do nado forçado e analisado parâmetros de estresse oxidativo no córtex pré-frontal (CPF), hipocampo, amígdala e núcleo accumbens. O tratamento com cetamina, minociclina, amitriptilina, ômega-3 e ácido fólico foram capazes de exercer efeitos antidepressivos no teste do nado forçado. Porém, esses efeitos antidepressivos foram dependentes do modelo de estresse pelos quais os animais foram expostos. Em determinadas regiões cerebrais algumas estratégias de tratamento apresentaram um efeito pró-oxidante. Porém, a maioria das estratégias usadas nesse estudo exerceram efeitos antioxidantes, como relatado pela diminuição do dano em proteínas, lipídeos, concentração de nitrito/nitrato e da atividade da mieloperoxidase (MPO). Além disso, um aumento da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) também foram evidentes após o tratamento com estratégias de prevenção e reversão. Em conclusão, os efeitos antidepressivos da cetamina, minociclina, ômega-3 e ácido fólico no presente estudo podem ser associados, pelo menos em parte, aos seus efeitos antioxidantes e neuroprotetores em animais submetidos ao estresse no início da vida ou tardio.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do titulo de Doutor em Ciências da Saúde. / Schizophrenia is a severe psychiatric condition, whose onset of symptoms is early, usually in adolescence. Searching for effective strategies to treat the disease, studies with Omega-3 supplementation have demonstrated preventive effects in patients at high risk of developing the disease. In this context, the present study aimed to test the hypothesis that omega-3 polyunsaturated fatty acids prevent behavioral and biochemical changes in rats subjected to the animal model of schizophrenia induced by ketamine. The research used a total of 60 young male Wistar rats, aged between 28 and 30 days weighing between 80 g and 150g. Rats were initially divided into two groups (30animals per group) to supplementation with Omega-3 or vehicle for 21 days. From the fifteenth day, both groups were again divided to treatment with saline or ketamine (25mg/kg) administered once a day to the twentieth day. At the end, the following groups were formed: vehicle +saline, saline+Omega, vehicle +ketamine, ketamine+Omega. On the last day of intervention (51 days later), the animals were killed by decapitation and the brain structures (striatum, hippocampus and prefrontal. cortex) were dissected, frozen in liquid nitrogen and kept at-80°C for subsequent biochemical analyzes. The analysis is encompassed tests as testing prepulse inhibition, analysis of oxidative stress, gene expression and activity of the enzyme acetylcholinesterase, BDNF level sand interleukins. The results indicate that supplementation of Omega-3 was able to prevent the reduction in prepulse inhibition induced by treatment with ketamine. In addition, Omega-3 is capable of modulating the antioxidant response in brain structures through changes in antioxidant enzymes. Similarly, Omega-3 prevents damage to lipids and proteins induced by treatment with ketamine, and it was able to partially prevent the increasing in the acetylcholinesterase enzyme activity induced by ketamine. BDNF levels are decreased one hour after the last injection only in the prefrontal cortex of rats treated with ketamine alone, whereas rats treated with ketamine and supplemented had this effect prevented after one hour, but not 24 hours of after the last injection. These evidences confirm our hypothesis that the polyunsaturated fatty acid omega-3 prevents biochemical and behavioral changes in animals subjected to the animal model of schizophrenia induced by ketamine. Further studies are necessary to elucidate the mechanisms by which the Omega-3 prevents such alterations associated with schizophrenia in humans. / A esquizofrenia é uma condição psiquiátrica grave, com fisiopatologia complexa. O surgimento dos sintomas da doença é precoce, geralmente na adolescência. Na busca de estratégias eficazes no tratamento da doença, estudos com suplementação de ômega-3 têm demonstrado efeitos preventivos em pacientes com alto risco de desenvolvimento da doença. Nesse contexto, o presente estudo objetivou testar a hipótese de que o ácido graxo poli-insaturado ômega-3 previne alterações comportamentais e bioquímicas em animais submetidos ao modelo animal de esquizofrenia induzido por administração de cetamina. A pesquisa utilizou um total de 60 ratos wistar machos jovens, com idade entre 28 e 30 dias pesando entre 80g e 150g. Os ratos foram inicialmente divididos em dois grupos (30 animais por grupo) para a suplementação com Ômega-3 ou veículo durante 21 dias. A partir do décimo quinto dia, ambos os grupos foram novamente divididos para tratamento com salina ou cetamina (25mg/kg), administrada uma vez ao dia até o vigésimo primeiro dia. Ao final, foram formados os seguintes grupos: Veículo+salina, Ômega+salina, Veículo+cetamina, Ômega+cetamina. No último dia de intervenções (51° dia) os animais foram mortos por decapitação e as estruturas cerebrais (estriado, hipocampo e córtex pré-frontal.) foram dissecadas, congeladas em nitrogênio líquido e mantidas em freezer -80ºC para análises bioquímicas posteriores. As análises englobaram testes como: teste de inibição por prepulso, análise do estresse oxidativo, atividade e expressão gênica da enzima acetilcolinesterase, níveis de BDNF e interleucinas. Os resultados indicam que a suplementação com Ômega-3 foi capaz de prevenir a diminuição da inibição por prepulso induzida pelo tratamento com cetamina. Além disso, o Ômega-3 é capaz de modular a resposta antioxidante nas estruturas cerebrais através de alterações nas enzimas antioxidantes. Da mesma forma, o Ômega-3 previne dano em proteínas e lipídios induzidos pelo tratamento com cetamina. A respeito da enzima acetilcolinesterase, a suplementação com Ômega-3 foi capaz de prevenir parcialmente o aumento da atividade da enzima induzido pela administração de cetamina. Os níveis de BDNF mostram-se diminuídos uma hora e 24 horas após a última injeção de cetamina somente em córtex pré-frontal de ratos tratado com cetamina isoladamente, enquanto ratos suplementados e tratados com cetamina apresentam diminuição dos níveis de BDNF somente após 24 horas da última injeção. Em contraste, ambas as intervenções (suplementação e tratamento) induziram respostas similares nos níveis de interleucinas (IL1β e IL6) tanto uma hora como 24 horas após a morte. Estas evidências confirmam a nossa hipótese de que o ácido graxo poli-insaturado Ômega-3 previne alterações comportamentais e bioquímicas em animais submetidos ao modelo animal de esquizofrenia induzido por administração de cetamina. Ainda, sugere-se que novos estudos sejam desenvolvidos para elucidar os mecanismos pelos quais o Ômega-3 previne tais alterações associadas à esquizofrenia em humanos.