SILVA, T. S. J. S. Desenvolvimento e otimização do extrato padronizado de Spondias mombin (cajazeira): atividades anti-inflamatória e anti-herpes do extrato e da geraniina. 2016. 111 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-23T11:21:54Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_tsjsilva.pdf: 1692766 bytes, checksum: 141374b429e17c077e6a1b008818a767 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-23T11:22:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_tsjsilva.pdf: 1692766 bytes, checksum: 141374b429e17c077e6a1b008818a767 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T11:22:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_tsjsilva.pdf: 1692766 bytes, checksum: 141374b429e17c077e6a1b008818a767 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Spondias mombin L. (Anacardiaceae) is a large-sized tree, fruit, common in western India, Mexico, Peru, Brazil and popularly known as cajazeira. All parts have been used by traditional medicine. The plant is part of REPLAME (List of Medicinal Plants) the state of Ceará and project Vivas pharmacies with the indication for the treatment of herpes. The aim of this study was to develop a standardized fitoproduto from the leaves of S. mombin, and evaluate its potential anti-inflammatory and antiviral (Herpes simplex 1). For that were initially established the method of preparation (drying oven with circulation / air renewal) at 60 ± 5 ° C for 4 hours and the specifications for quality control of plant drug (DV). The extraction method for obtaining a standardized extract of S. mombin was dynamic maceration for 2.5 h at 30 ° C and relative DV: solvent (30% ethanol in water) 0.3, wherein the total phenol content ( FT: 17.52 mg / mL), dry (RS: 7.12%, w / v) and chromatographic profile by HPLC-DAD (chlorogenic acid - AC: 0.83 mg / ml and Geraniina - GR: 7, 37 mg / ml). In the evaluation of potential anti-inflammatory, S. mombin extract (ESM) (1, 10, 50, 100 ug / ml) partially inhibited the release of MPO (Myeloperoxidase) induced by PMA (Folbol-12-myristate-13-acetate ), with best effect seen at the highest concentration (% inhibition: 50.4), while the standard GR (1, 10, 25, 50 and 100 ug / ml) induced a dual effect, increasing neutrophil degranulation induced by PMA in smaller concentrations (1 - 25 mg / mL) and this inhibits (40.3 and 83.5%) in higher concentrations (50 and 100 ug / ml). As the concentration of 200 / ml ESM showed cytotoxicity in human neutrophils in the MTT test. In the assessment of cytotoxicity on Vero cells, the ESM showed CC50 = 1680 mg / mL and CC50 GR = 392.5 mg / mL, whereas the standard PFA (phosphonoformic acid) showed CC50 = 392.5 mg / mL. In the evaluation of the antiviral potential, the ESM was more potent with IC 50 = 342.5 ug / ml compared to GR (IC 50 = 417.5 ug / ml) and PFA (IC50 = 570 ug / ml), and had an index selectivity (IS) next to the PFA. The IS GR was 0.94. The results obtained in this study allowed to establish, in an unprecedented manner, methods and specifications for the production and quality control of both the DV as the ESM. Furthermore, both ESM as geraniina (bioactive marker) possess anti-inflammatory activity and anti-herpes (herpes simplex 1) / Spondias mombin L. (Anacardiaceae) é uma árvore de porte elevado, frutífera, frequente no Oeste da Índia, México, Peru, Brasil e conhecida popularmente como cajazeira. Todas as suas partes têm sido utilizadas pela medicina tradicional. A planta faz parte da REPLAME (Relação de Plantas Medicinais) do estado do Ceará e do projeto Farmácias Vivas com a indicação para o tratamento da herpes. O objetivo do presente estudo foi desenvolver um fitoproduto padronizado a partir das folhas de S. mombin, e avaliar seu potencial anti-inflamatório e antiviral (Herpes simplex 1). Para isso, inicialmente, foram estabelecidos o método de preparação (secagem em estufa com circulação/ renovação de ar) a 60 ± 5 ºC por 4 horas e as especificações para o controle de qualidade da droga vegetal (DV). O método extrativo para obtenção do extrato padronizado de S. mombin foi a maceração dinâmica por 2,5 h, a 30 °C e relação DV:solvente (etanol 30 % em água) de 0,3, caracterizado pelo teor de fenóis totais (FT: 17,52 mg/mL), resíduo seco (RS: 7,12 %, p/v) e perfil cromatográfico por CLAE-DAD (Ácido clorogênico - AC: 0,83 mg/mL e Geraniina - GR: 7,37 mg/mL). Na avaliação do potencial anti-inflamatório, extrato de S. mombin (ESM) (1, 10, 50, 100 μg/mL) inibiu parcialmente a liberação de MPO (Mieloperoxidase) induzida por PMA (Folbol-12-miristato-13-acetato), sendo observado melhor efeito na maior concentração (% inibição: 50,4), enquanto que o padrão GR (1, 10, 25, 50 e 100 μg/mL) promoveu um efeito dual, ampliando a desgranulação de neutrófilo induzida por PMA nas menores concentrações (1 – 25 μg/mL) e inibindo esta (40,3 e 83,5 %) nas maiores concentrações (50 e 100 μg/mL). Apenas a concentração de 200 μg/mL do ESM mostrou citotoxicidade em neutrófilos humanos no teste do MTT. Na avaliação da citotoxicidade em células VERO, o ESM apresentou CC50= 1680 μg/mL e a GR CC50 = 392,5 μg/mL, enquanto que o padrão PFA (Ácido fosfonofórmico) apresentou CC50 = 392,5 μg/mL. Na avaliação do potencial antiviral, o ESM foi mais potente com CI50 = 342,5 μg/mL em relação a GR (CI50= 417,5 μg/mL) e PFA (CI50= 570 μg/mL), e teve um índice de seletividade (IS) próximo ao do PFA. O IS da GR foi de 0,94. Os resultados obtidos no presente estudo permitiram estabelecer, de maneira inédita, métodos e especificações para a produção e controle de qualidade tanto da DV quanto do ESM. Além disso, tanto o ESM quanto a geraniina (marcador bioativo) possuem atividade anti-inflamatória e anti-herpes (Herpes simplex 1)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T05:09:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 279151.pdf: 2245447 bytes, checksum: a45d313ab0cdd8f206af85a4660f0aac (MD5) / A Cecropia glaziovii Sneth, popularmente conhecida como embaúba, é utilizada na medicina popular visando os efeitos diurético, anti-hipertensivo, antiinflamatório, expectorante, antiasmático e antitérmico. Esta planta é principalmente encontrada em áreas de reflorestamento e na Mata Atlântica brasileira. O presente trabalho tem como objetivo a padronização de soluções extrativas de Cecropia glaziovii e posterior-mente realizar um estudo preliminar para a encapsulação dos extratos padronizados em um sistema microestruturado. A influência dos fatores tecnológicos como teor etanólico, tempo e temperatura sobre a extração de compostos fenólicos foi avaliada para os métodos estudados, macera-ção e decocção. As soluções foram preparadas utilizando delineamento fatorial 22 com ponto central e avaliadas quanto ao seu resíduo seco, pH, teor de fenólicos totais, teor de ácido clorogênico e ácido cafeico, sendo estas duas substâncias consideradas como marcadores químicos e doseados por metodologia validada de CLAE. Os extratos obtidos com 20% de etanol apresentaram elevada concentração de ácido cafeico, substância que praticamente não está presente nas outras soluções extrativas. Em função deste resultado, foram realizados estudos para avaliação da influência da temperatura e da presença de conservante sobre os teores dos marcadores químicos durante o processo extrativo, sendo para isto elaborados dois delineamentos fatoriais 23. A atividade dos extratos brutos no tratamento do diabetes e da hipertensão foi avaliada. Os extratos obtidos por maceração foram efetivos na redução da glicemia em ratos hiperglicêmicos e apresentaram surpreendente atividade vasorrelaxadora. A atividade farmacológica serviu como fator de escolha dos extratos a serem microencapsulados em sistema polimérico, utilizando a técnica de dupla emulsão (A/O/A) com evaporação/extração do solvente. Para avaliação da interferência dos diferentes fatores na formulação das micropartículas foi utilizado o delineamento fatorial 24. As micropartículas foram avaliadas quanto ao seu rendimento, formação, aparência, tamanho e eficiência de encapsulação. / Cecropia glaziovii Sneth, known as embaúba, is used in folk medicine as diuretic, antihypertensive, anti-inflammatory, expectorant, as relief for asthma and fever. This plant is mainly found in reforestation areas and Brazilian Atlantic Rain Forest. The present work aims to develop Cecropia glaziovii padronized extracts and lately perform preliminary extracts encapsulation in microstructured system. The influence of some technological factors as ethanol concentration, time and temperature extraction above phenolic compounds was evaluated in studied methods, maceration and decoction. The extractive solutions were prepared employing a 22 factorial design with central point and evaluated as dry residue, pH, total phenolics content, chlorogenic and caffeic acids concentration, both considered as chemical markers and the assay was carried out by HPLC validated methodology. In the 20% ethanolic extracts a great amount of caffeic acid was observed, compound that was not detected in the extracts with higher ethanolic concentrations. In order to investigate this result, the influence of temperature and the presence of a preservative on chemical markers content during extraction process were evaluated according to a two 23 factorial designs. The antidiabetic and antihypertensive activity of the extracts were evaluated. The extracts obtained by maceration reduced glucose level on blood samples in hyperglycemic rats and showed surprisingly vasodilator activity. The pharmacological activity was used as a factor to choose the extracts for microencapsulation in polymeric system, using double emulsion technique (W/O/W) with solvent evaporation/extraction. In order to investigate the influence of different factors in microparticles formulation a 24 factorial design was performed. Microparticles were evaluated as yield, formation, aspect, size and encapsulation efficiency.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:14:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 307641.pdf: 1121625 bytes, checksum: f430b29441897c6bb1ffa2550b016eac (MD5) / A erva-mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil., Aquifoliaceae) é uma espécie vegetal nativa da América do Sul, amplamente utilizada nesta região por seu potencial industrial na preparação de bebidas, chás e produtos dermocosméticos. Suas propriedades estão diretamente relacionadas à presença de metabólitos secundários, como as saponinas, as metilxantinas e os compostos fenólicos. O presente trabalho teve como objetivo investigar a influência da idade das folhas e da luminosidade nos teores de metilxantinas, ácido clorogênico, fenólicos totais e na atividade de captação de radicais livres de extratos aquosos das folhas de Ilex paraguariensis A. St. Hilaire em uma população situada em Chapecó, Santa Catarina. As análises quantitativas foram realizadas por espectrofotometria no UV/Vis e por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Os resultados mostraram uma grande variabilidade nos teores de todos os metabólitos avaliados. A intensidade luminosa em condições naturais não alterou significativamente (P > 0,05) os teores de cafeína, teobromina, ácido clorogênico e fenólicos totais, assim como a atividade de captação de radicais livres dos extratos. Por outro lado, a idade das folhas demonstrou influência significativa (P < 0,05) nos teores de cafeína, metilxantinas totais e fenólicos totais dos extratos avaliados. Adicionalmente, a atividade de captação de radicais livres dos extratos também foi influenciada significativamente (P < 0,05) pela idade das folhas, havendo uma correlação inversa entre os valores de EC50 e os teores de compostos fenólicos totais. Por fim, o ácido clorogênico não se caracterizou como um marcador químico eficiente, no que tange a atividade antioxidante, para a espécie vegetal Ilex paraguariensis. / Yerba-mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil., Aquifoliaceae) is a South American native specie, widely used for its industrial potential in the preparation of drinks, teas and cosmetics. Its properties are directly related to the presence of secondary metabolites, such as saponins, methylxanthines and phenolic compounds. This study aimed to investigate the influence of leaf age and luminosity on the contents of methylxanthines, chlorogenic acid, total phenolics and on the free radical scavenging capacity of the aqueous extracts from of Ilex paraguariensis A. St. Hilaire leaves, in a population from Chapecó, Santa Catarina. Quantitative analyses were performed by UV/Vis and by high performance liquid chromatography (HPLC). The results showed a great variability in all metabolites content measured. The light intensity under natural conditions did not change significantly (P > 0,05) the caffeine, theobromine, chlorogenic acid and total phenolic content, as well as the free radical scavenging capacity. On the other hand, the age of leaves showed significant influence (P < 0,05) on the caffeine, methylxanthines, and total phenolic content of the evaluated extracts. Additionally, the free radical scavenging capacity was also significantly affected (P < 0,05) by the leaf age, with an inverse correlation between the EC50 values and the total phenolic content. Finally, the chlorogenic acid was not characterized as an efficient chemical marker, regarding to the antioxidant activity for I. paraguariensis species.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-07T19:42:41Z No. of bitstreams: 1 2015_MauroGuilhermeFerreiraBezerra.pdf: 2582296 bytes, checksum: e849e260dd47d8b2a120d7e38d2c55e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-01-15T19:20:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_MauroGuilhermeFerreiraBezerra.pdf: 2582296 bytes, checksum: e849e260dd47d8b2a120d7e38d2c55e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-15T19:20:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_MauroGuilhermeFerreiraBezerra.pdf: 2582296 bytes, checksum: e849e260dd47d8b2a120d7e38d2c55e9 (MD5) / Este estudo investiga a síntese e caracterização de nanoblendas magnéticas a base de Poli (ácido clorogênico) e Poli (ácido labdânico) obtidos do extrato de folhas de Cecropia obtusa e de Leonotis nepetifolia. Para obtenção da nanoblenda magnética, primeiramente, realizou-se a síntese das nanopartículas magnéticas de magnetitas pelo método de coprecipitação, extração alcoólica e polimerização dos ácidos graxos extraídos das folhas por meio de tratamento térmico e ainda a complexação das nanopartículas com os biopolímeros sintetizados. A caracterização foi realizada usando as seguintes técnicas: difração de raios X; microscopia eletrônica de transmissão; microscopia eletrônica de varredura; espectroscopia ultravioleta e visível; espectroscopia infravermelho próximo; espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier. Os resultados obtidos permitem descrever os parâmetros físico químicos, sugerindo a obtenção de uma nanoestrutura com características hibridas e parâmetros magnético-ópticos detectáveis como: identificação dos planos cristalinos, forma e diâmetro médio das nanopartículas, espectros de absorção, energia e reflexão dos grupos moleculares dos biopolímeros e da nanoblenda. Acredita-se que o prosseguimento dos estudos para a cerca das propriedades dessa nanoblenda permitirão identificar aplicações em diversas áreas como, por exemplo: medicina, nanotecnologia, entre outros. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study investigates the synthesis and the characterization of the magnetic nanoblends constituted of Poly (Chlorogenic acid) and poly (Labdânico acid) obtained from leaves extract of Cecropia obtusa and Leonotis nepetifolia. To obtain the magnetic nanoblenda, at first, there is the synthesis of the magnetic nanoparticles of magnetite using the coprecipitation process, the alcohol extraction and polymerization of fatty acid extracted from leaves by the heat treatment, also the complexation of nanoparticles with synthesized biopolymers. The characterization was made using the following techniques: X-ray diffraction; transmission electron microscopy; scanning electron microscopy; UV and visible spectroscopy; Infrared spectroscopy next; Infrared spectroscopy per Fourier transform. The results obtained allow to describe the physical and chemical parameters, suggesting the obtaining a hybrid nanostructure with characteristics and magnetic optical parameters detectable such as: identification of crystal planes, shape, and average diameter of the nanoparticles, absorption spectra, reflection energy and the molecular groups of the biopolymer and nanoblends. It is believed that the continuation of scientific studies about some of the properties of nanoblends will identify applications in several areas as, for example: medicine, nanotechnology, among others.

Ácido clorogênico (ACG) é o termo utilizado para designar um grupo de compostos fenólicos oriundos da reação de esterificação entre ácidos hidroxicinâmicos (p-cumárico, caféico e ferúlico) e ácido quínico. São amplamente encontrados em produtos naturais e exercem ações antioxidantes, citotóxicas, antitumorais, antibacterianas, antifúngicas e antiinflamatórias. Apesar da descrição dos seus efeitos antiinflamatórios em diferentes modelos experimentais, a literatura é carente quanto suas ações específicas em funções inflamatórias de neutrófilos. Assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos do ACG sobre funções de neutrófilos in vitro. Neutrófilos foram obtidos do lavado peritoneal de ratos Wistar, machos, 4 horas após a injeção local de glicogênio de ostra a 1% e foram incubados, na presença ou ausência de LPS, com ACG nas concentrações de 25, 50, 100 ou 1000 &#181;M. A viabilidade celular (exclusão por trypan-blue), a secreção de citocinas e prostaglandina E2 (ensaio imunoenzimático); a produção de óxido nítrico (reação de Griess); a expressão de moléculas de adesão (citometria de fluxo); a aderência e a quimiotaxia foram avaliadas. Os resultados obtidos mostraram que o ACG não afetou as secreções do fator de necrose tumoral-&#945;,de interleucina 1&#946;, do óxido nítrico e de prostaglandina E2 em condições basais ou após estimulação pelo LPS. Diferentemente, a incubação com ACG inibiu a aderência de neutrófilos à cultura primária de célula endotelial de microcirculação de ratos e a quimiotaxia in vitro frente ao peptídeo formilado (N-formilmetionil- leucil-fenilalanina). Estes últimos efeitos podem estar associados à ação do ACG sobre a expressão de moléculas de adesão, já que o ACG elevou a expressão de L-selectina e reduziu as expressões de &#946;2 integrina e da molécula de adesão plaqueta e endotélio. Os dados obtidos não foram dependentes de alterações da viabilidade celular. Em conjunto, os resultados mostram que o ACG possui efeito direto sobre funções de neutrófilos responsáveis pela interação ao endotélio microvascular e pela migração orientada em resposta a estímulo inflamatório. Estes efeitos podem contribuir, pelo menos em parte, para redução da migração de neutrófilos para focos de inflamação na vigência de tratamento com ACG amplamente descrita na literatura. / Chlorogenic acid (CGA) is the term utilized to design a group of phenolic compounds from the sterification reaction between the hydroxycinnamic acids (p-coumaric, caffeic and ferulic acid) and the quinic acid. They are largely found in natural products and exert anti-oxidant, citoxic, anti-tumoral, anti-bactericidal, anti-fungicidal and anti-inflammatory activity. Besides the description of its anti-inflammatory effect in different experimental models, the literature is scarse regarding its specific actions in neutrophil inflammatory functions. Therefore, the aim of this present work was to investigate the CGA effects on neutrophils functions in vitro. Neutrophils were obtained from the peritoneal lavage of male Wistar rats four hours after a local injection of oyster glycogen 1% and were incubated, in the presence or absence of LPS, with CGA in the concentrations of 25, 50, 100 or 1000 &#181;M. The cellular viability (trypan-blue exclusion), the cytokines secretions (enzyme-linked immunosorbend assay), production of nitric oxide (Greiss reaction); adhesion molecules expression (flow citometry), adherence and chemotaxis in vitro were assessed. The results shows that the CGA did not affect the secretion of the tumor necrosis factor-&#945; , of nitric oxide and prostaglandin E2 and only the incubation with 50&#181;M of CGA inhibited the secretion of Interleukin 1&#946; after stimulation with LPS. Differently, the incubation with CGA inhibited the adherence of neutrophils on the primary culture of endothelial cell from the micro-circulation of rats and the chemotaxis in vitro against formylated peptide (fenyl-metyl-leucyl-alanin). This lasts effects might be associated with the action of CGA on the expression of adhesion molecules, hence this compound was capable of elevate the expression of L-selectin and reduce the expression of &#946;2 integrin and PECAM-1. The data here obtained are not dependent of cellular viability alterations. In conjunct, the data here obtained shows that the CGA has direct effect on neutrophils functions responsible of the interaction with the micro vascular endothelium and the oriented migration in response to an inflammatory stimuli. These effects can contribute, at least in part, to the decreased neutrophil migration in the inflammatory focus in the presence of CGA treatment.

A imunidade inata é um mecanismo ativado rapidamente para permitir a defesa do organismo contra injúrias de diferentes origens. No entanto, a exacerbação do processo inato é prejudicial ao hospedeiro e pode levar a cronicidade do processo. Os neutrófilos são as células importantes na resposta inata, que após exercerem suas ações no processo, devem ser eliminadas para o retorno da homeostasia. Nesta fase, os neutrófilos entram em apoptose e são fagocitados por macrófagos residentes. O ácido clorogênico (ACG) é componente frequente de alimentos, em especial em grãos, e apresentam propriedades anticancerígenas, antimutagênicas, antipiréticas, antifúngicas, antioxidantes, analgésicas e anti-inflamatórias. Neste último contexto, as ações do ACG na instalação do processo têm sido bem demonstradas, mas seu potencial de interferir com a resolução da inflamação ainda é fragmentária. Desta forma, o presente trabalho visou avaliar os mecanismos de ação do ACG na resolução da inflamação, focando nos mecanismos de morte dos neutrófilos, de fagocitose e \"killing\" de macrófagos. Para tanto, foram empregados camundongos, adultos, machos da linhagem Swiss. Neutrófilos peritoneais foram recrutados 4 horas após injeção local de glicogênio de ostra 1% e macrófagos peritoneais foram obtidos 96 horas após a injeção local de tioglicolato de sódio a 3%. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento com ACG por 24 horas, na concentração 1, 10, 50 e 100 mM, aumentou a porcentagem de número de neutrófilos apoptóticos e não alterou a porcentagem de neutrófilos em necrose; a incubação de ACG por 1 hora, na concentração 1, 10, 50 e 100 mM, com macrófagos peritoneais aumentou a capacidade destas células fagocitarem neutrófilos apoptóticos; reduziu a secreção do tumor de necrose tumoral (TNF-alfa), não alterou a secreção de interleucina-10 e não interferiu com as expressões de MHC-II e de CD36. Em conjunto, os dados obtidos sugerem que o ACG pode controlar a resolução da inflamação por induzir a apoptose de neutrófilos e a fagocitose destes por macrófagos. / Innate immunity is a rapidly activated mechanism to allow the body\'s defense against injuries from different origins. However, exacerbation of innate process is detrimental to the host and can lead to chronic process. Neutrophils are important cells in innate response, which after performing their actions in the process, should be eliminated for the return of homeostasis. At this stage, the neutrophils undergo to apoptosis and are phagocytosed by resident macrophages. The chlorogenic acid (CGA) is a frequent component of foods, in particular grain, and it has anticancer, antimutagenic, antipyretic, antifungal, antioxidant, anti-inflammatory and analgesic properties. In this latter context, the actions of the ACG in the initial phases of the inflammatory process have been well documented, but its potential to interfere with the resolution of inflammation is still fragmented. Thus, the present study aimed to evaluate the mechanisms of action of ACG in the resolution of inflammation, focusing on mechanisms of neutrophil death and phagocytosis of macrophages. Hence, Swiss adult, male mice were employed as donor of neutrophils and macrophages. Peritoneal neutrophils were recruited 4 hours after local injection of 1% oyster glycogen and used for assessment of cell death mechanism, besides being used as apoptotic cells to be phagocyted. Peritoneal macrophages recruited 96 hours after the injection of 3% thioglycollate medium were used to 1) phagocytosis assay 2) Quantification of inflammatory mediators in the supernatant 3) quantification of MHC-II and CD36. The results showed that treatment with ACG, during 24 hours, at concentrations of 1, 10, 50 or 100 mM increased the percentage of apoptotic neutrophils and did not induced necrosis; incubation of macrophages during 1 hour with 1, 10, 50 or 100 mM increased the capacity of these cells to phagocyte apoptotic neutrophils; reduced tumor secretion of tumor necrosis factor (TNF-alpha) and did not alter the secretion of interleukin-10, and did not interfere with the expression of MHC-II and CD36. Together, these data suggest that the ACG can control the resolution of inflammation, by interfering with events in neutrophils and macrophages.

A epilepsia é uma enfermidade, caracterizada por eventos cerebrais paroxísticos auto-sustentados e recorrentes, que apresenta manifestações eletro-clínicas e neuropatológicas únicas, que podem alterar a estrutura e funcionamento do encéfalo, cujas manifestações são diferentes entre si. Afeta cerca de 50 milhões de pessoas no mundo. Modelos animais e ferramentas biológicas são importantes para se entender lesões neuroniais. Sabe-se que logo depois da administração de Li-Pilo em ratos - status epilepticus (SE), inicia-se uma cadeia de eventos neuroquímicos, como a produção de radicais livres,dentre outros, que podem piorar ou perpetuar as crises posteriores. A utilização de agentes antioxidantes, com ação no Sistema Nervoso Central pode significar uma alternativa co-adjuvante na prevenção das epilepsias secundárias, de animais de laboratório e talvez em humanos. Neste trabalho avaliou-se a ação antioxidativa e neuroprotetora do ácido clorogênico (AC), in vivo, em ratos submetidos ao SE. Comparou-se ademais o efeito do AC com o efeito de um antioxidante, o acido ascórbico. Ao tratar os animais com AC (30 mg/kg), houve uma diminuição significativa (50%), [F (7, 40)= 14,42; P < 0,0001], da produção de MDA, importante produto da peroxidação lipídica; assim como uma diminuição significativa (72%), [F (7,40)= 11,26; P < 0,0001], na atividade da SOD, enzima que atua como agente antioxidante endógeno. A ação do AC, diminuindo a concentração de MDA (49%), que é um dos substratos da SOD, levaria a uma menor taxa de SOD (59%). Pensando no que acontece com um fármaco que iniba essa cascata de peroxidação, esses resultados estão de acordo com a literatura, na qual se ressalta que a ação da SOD pode estar diretamente relacionada com a presença do MDA. E o mais importante, constatou-se que o AC (30 mg/kg) protegeu as células hipocampais, ou seja, diminuiu significativamente a perda de células nas regiões CA3 [F (4,25)= 15,55; P < 0,0001] (48%), e no hilus do hipocampo [F (4,25)= 6,276, P<0,0001] (75%). Da mesma forma, houve uma diminuição significativa de neurônios em degeneração (Fluoro Jade C+) na CA3 [F(2,15)= 40,90; P<0,0001]. Podemos concluir que o AC é um eficiente inibidor da proliferaçãode agentes oxidantes, que levam à morte celular, quando comparado com o ácido ascórbico, no hipocampo de ratos Wistar, quando induzido o SE com Li-Pilo. Portanto, sendo neuroprotetor / Epilepsy is a disorder characterized by paroxysmal self-sustained and recurrent brain events, featuring electro-clinical and neuropathological phenomena unique, which may change the structure and functioning of the brain, whose manifestations are different. It affects about 50 million people worldwide. Animal models and are important biological tools for understanding neuronal injury. It is known that soon after the administration of Li-Pilo in rats - status epilepticus (SE), starts a chain of neurochemical events such as the production of free radicals, among others, that may worsen or perpetuate the subsequent seizures. The use of antioxidant agents acting on the central nervous system can alternatively mean a co-adjuvant in secondary preven-tion of epilepsy, laboratory animals and possibly humans. In our study we evaluated the antioxi-dative action and chlorogenic acid (CA) neuroprotective using Litio-Pilocarpine in vivo, in rats. It compared the effects of CA in addition to the effect of an antioxidant, ascorbic acid. By treating the animals with CA (30 mg / kg), a significant decrease in [F (7, 40) = 14.42; P <0.0001], the production of MDA, important product of lipid peroxidation; as well as a significant decrease in [F (7,40) = 11.26; P <0.0001] (50%), the activity of SOD, an enzyme that acts as an endogenous antioxidant. The action of CA, decreasing the concentration of MDA (49%), which is one of the SOD substrates, would lead to a lower rate of SOD (72%). Thinking about what happens to a drug that inhibits this peroxidation cascade, these results are consistent with the literature, in which it points out that the action of SOD can be directly related to the presence of MDA. Furthermore, it was found that the CA (30 mg / kg) protected the hippocampus cells, or significantly decreased cell loss in CA3 [F (4,25) = 15.55; P <0.0001] (59%), and hilus regions of the hippocampus [F (4,25) = 6.276, P <0.0001] (48%). Likewise, a significant reduction in neu-ronal degeneration (Fluoro Jade C +) in the CA3 [F (2,15) = 40.90; P <0.0001] (75%). We con-clude that the CA is an effective inhibitor of the proliferation of oxidizing agents, leading to cell death when compared to the ascorbic acid in the hippocampus of Wistar rats when induced SE with Li-Pilo. However, CA was neuroprotector in this model.

A imunidade inata é um mecanismo ativado rapidamente para permitir a defesa do organismo contra injúrias de diferentes origens. No entanto, a exacerbação do processo inato é prejudicial ao hospedeiro e pode levar a cronicidade do processo. Os neutrófilos são as células importantes na resposta inata, que após exercerem suas ações no processo, devem ser eliminadas para o retorno da homeostasia. Nesta fase, os neutrófilos entram em apoptose e são fagocitados por macrófagos residentes. O ácido clorogênico (ACG) é componente frequente de alimentos, em especial em grãos, e apresentam propriedades anticancerígenas, antimutagênicas, antipiréticas, antifúngicas, antioxidantes, analgésicas e anti-inflamatórias. Neste último contexto, as ações do ACG na instalação do processo têm sido bem demonstradas, mas seu potencial de interferir com a resolução da inflamação ainda é fragmentária. Desta forma, o presente trabalho visou avaliar os mecanismos de ação do ACG na resolução da inflamação, focando nos mecanismos de morte dos neutrófilos, de fagocitose e \"killing\" de macrófagos. Para tanto, foram empregados camundongos, adultos, machos da linhagem Swiss. Neutrófilos peritoneais foram recrutados 4 horas após injeção local de glicogênio de ostra 1% e macrófagos peritoneais foram obtidos 96 horas após a injeção local de tioglicolato de sódio a 3%. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento com ACG por 24 horas, na concentração 1, 10, 50 e 100 mM, aumentou a porcentagem de número de neutrófilos apoptóticos e não alterou a porcentagem de neutrófilos em necrose; a incubação de ACG por 1 hora, na concentração 1, 10, 50 e 100 mM, com macrófagos peritoneais aumentou a capacidade destas células fagocitarem neutrófilos apoptóticos; reduziu a secreção do tumor de necrose tumoral (TNF-alfa), não alterou a secreção de interleucina-10 e não interferiu com as expressões de MHC-II e de CD36. Em conjunto, os dados obtidos sugerem que o ACG pode controlar a resolução da inflamação por induzir a apoptose de neutrófilos e a fagocitose destes por macrófagos. / Innate immunity is a rapidly activated mechanism to allow the body\'s defense against injuries from different origins. However, exacerbation of innate process is detrimental to the host and can lead to chronic process. Neutrophils are important cells in innate response, which after performing their actions in the process, should be eliminated for the return of homeostasis. At this stage, the neutrophils undergo to apoptosis and are phagocytosed by resident macrophages. The chlorogenic acid (CGA) is a frequent component of foods, in particular grain, and it has anticancer, antimutagenic, antipyretic, antifungal, antioxidant, anti-inflammatory and analgesic properties. In this latter context, the actions of the ACG in the initial phases of the inflammatory process have been well documented, but its potential to interfere with the resolution of inflammation is still fragmented. Thus, the present study aimed to evaluate the mechanisms of action of ACG in the resolution of inflammation, focusing on mechanisms of neutrophil death and phagocytosis of macrophages. Hence, Swiss adult, male mice were employed as donor of neutrophils and macrophages. Peritoneal neutrophils were recruited 4 hours after local injection of 1% oyster glycogen and used for assessment of cell death mechanism, besides being used as apoptotic cells to be phagocyted. Peritoneal macrophages recruited 96 hours after the injection of 3% thioglycollate medium were used to 1) phagocytosis assay 2) Quantification of inflammatory mediators in the supernatant 3) quantification of MHC-II and CD36. The results showed that treatment with ACG, during 24 hours, at concentrations of 1, 10, 50 or 100 mM increased the percentage of apoptotic neutrophils and did not induced necrosis; incubation of macrophages during 1 hour with 1, 10, 50 or 100 mM increased the capacity of these cells to phagocyte apoptotic neutrophils; reduced tumor secretion of tumor necrosis factor (TNF-alpha) and did not alter the secretion of interleukin-10, and did not interfere with the expression of MHC-II and CD36. Together, these data suggest that the ACG can control the resolution of inflammation, by interfering with events in neutrophils and macrophages.

Ácido clorogênico (ACG) é o termo utilizado para designar um grupo de compostos fenólicos oriundos da reação de esterificação entre ácidos hidroxicinâmicos (p-cumárico, caféico e ferúlico) e ácido quínico. São amplamente encontrados em produtos naturais e exercem ações antioxidantes, citotóxicas, antitumorais, antibacterianas, antifúngicas e antiinflamatórias. Apesar da descrição dos seus efeitos antiinflamatórios em diferentes modelos experimentais, a literatura é carente quanto suas ações específicas em funções inflamatórias de neutrófilos. Assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos do ACG sobre funções de neutrófilos in vitro. Neutrófilos foram obtidos do lavado peritoneal de ratos Wistar, machos, 4 horas após a injeção local de glicogênio de ostra a 1% e foram incubados, na presença ou ausência de LPS, com ACG nas concentrações de 25, 50, 100 ou 1000 &#181;M. A viabilidade celular (exclusão por trypan-blue), a secreção de citocinas e prostaglandina E2 (ensaio imunoenzimático); a produção de óxido nítrico (reação de Griess); a expressão de moléculas de adesão (citometria de fluxo); a aderência e a quimiotaxia foram avaliadas. Os resultados obtidos mostraram que o ACG não afetou as secreções do fator de necrose tumoral-&#945;,de interleucina 1&#946;, do óxido nítrico e de prostaglandina E2 em condições basais ou após estimulação pelo LPS. Diferentemente, a incubação com ACG inibiu a aderência de neutrófilos à cultura primária de célula endotelial de microcirculação de ratos e a quimiotaxia in vitro frente ao peptídeo formilado (N-formilmetionil- leucil-fenilalanina). Estes últimos efeitos podem estar associados à ação do ACG sobre a expressão de moléculas de adesão, já que o ACG elevou a expressão de L-selectina e reduziu as expressões de &#946;2 integrina e da molécula de adesão plaqueta e endotélio. Os dados obtidos não foram dependentes de alterações da viabilidade celular. Em conjunto, os resultados mostram que o ACG possui efeito direto sobre funções de neutrófilos responsáveis pela interação ao endotélio microvascular e pela migração orientada em resposta a estímulo inflamatório. Estes efeitos podem contribuir, pelo menos em parte, para redução da migração de neutrófilos para focos de inflamação na vigência de tratamento com ACG amplamente descrita na literatura. / Chlorogenic acid (CGA) is the term utilized to design a group of phenolic compounds from the sterification reaction between the hydroxycinnamic acids (p-coumaric, caffeic and ferulic acid) and the quinic acid. They are largely found in natural products and exert anti-oxidant, citoxic, anti-tumoral, anti-bactericidal, anti-fungicidal and anti-inflammatory activity. Besides the description of its anti-inflammatory effect in different experimental models, the literature is scarse regarding its specific actions in neutrophil inflammatory functions. Therefore, the aim of this present work was to investigate the CGA effects on neutrophils functions in vitro. Neutrophils were obtained from the peritoneal lavage of male Wistar rats four hours after a local injection of oyster glycogen 1% and were incubated, in the presence or absence of LPS, with CGA in the concentrations of 25, 50, 100 or 1000 &#181;M. The cellular viability (trypan-blue exclusion), the cytokines secretions (enzyme-linked immunosorbend assay), production of nitric oxide (Greiss reaction); adhesion molecules expression (flow citometry), adherence and chemotaxis in vitro were assessed. The results shows that the CGA did not affect the secretion of the tumor necrosis factor-&#945; , of nitric oxide and prostaglandin E2 and only the incubation with 50&#181;M of CGA inhibited the secretion of Interleukin 1&#946; after stimulation with LPS. Differently, the incubation with CGA inhibited the adherence of neutrophils on the primary culture of endothelial cell from the micro-circulation of rats and the chemotaxis in vitro against formylated peptide (fenyl-metyl-leucyl-alanin). This lasts effects might be associated with the action of CGA on the expression of adhesion molecules, hence this compound was capable of elevate the expression of L-selectin and reduce the expression of &#946;2 integrin and PECAM-1. The data here obtained are not dependent of cellular viability alterations. In conjunct, the data here obtained shows that the CGA has direct effect on neutrophils functions responsible of the interaction with the micro vascular endothelium and the oriented migration in response to an inflammatory stimuli. These effects can contribute, at least in part, to the decreased neutrophil migration in the inflammatory focus in the presence of CGA treatment.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T23:17:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 296786.pdf: 1619266 bytes, checksum: 4c4959b572f948a62f2ff59a3e260ce3 (MD5) / O Brasil é atualmente o maior produtor mundial de café, representando 30% do mercado, com um volume equivalente a soma dos outros seis países de maior produção. A grande produção e também o consumo de café levam a geração de uma enorme quantidade de resíduos. Devido à importância dos diferentes compostos presentes nos resíduos de café, a obtenção de extratos a partir dessas fontes seria uma alternativa de agregação de valor de valor a um subproduto agroindustrial tão abundante. Assim, o objetivo deste estudo foi a obtenção de extratos de casca e de borra de café, utilizando tecnologia supercrítica e métodos de extração a baixa pressão, a fim de avaliar o potencial antioxidante e a composição dos extratos, e ainda fazer a determinação dos parâmetros cinéticos do processo de ESC. Os extratos obtidos pelos métodos a baixa pressão (soxhlet e ultrassom) mostraram maiores rendimentos quando comparados à extração supercrítica. O potencial antioxidante foi avaliado pelos métodos DPPH, ABTS e Folin-Ciocalteau, sendo que os melhores potenciais antioxidantes foram verificados para os extratos de casca de café obtidos à baixa pressão. A quantificação e identificação dos extratos foram avaliadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Os principais compostos identificados foram cafeína e ácido clorogênico.