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Expressão gênica do corpo lúteo após pulsos intrauterinos com doses baixas de prostaglandina E1 e F-2 alfa em vacas / Gene expression in the corpus luteum following intrauterine pulses of low doses of prostaglandins E1 and F-2 alpha in cattleOchoa, Julián Camilo [UNESP] 29 September 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-09-29 / Em ruminantes a luteólise natural é caraterizada pela liberação de vários pulsos de prostaglandina F2alfa (PGF) produzidos pelo útero. A PGF é o hormônio luteolítico, enquanto a prostaglandina E1 (PGE1) é considerada um mediador luteoprotetor. Em estudos anteriores, infusões com doses baixas de PGF no útero com intervalos de 6 horas (h) resultou em regressão do corpo luteo (CL). A proposta deste experimento é desenvolver um modelo para avaliar o efeito de baixas doses de PGE1, também infundidas no lúmen uterino sobre a resposta luteal à PGF intrauterina (IU). Vacas no dia 10 do ciclo estral receberam infusões IU de salina (0,1 ml de salina + 0,1 ml de DMSO), PGE (2 mg de PGE1 em 0,1ml de DMSO) ou PGF (0,25 mg of PGF em 0,1 ml de salina) em intervalos de 6 h em um desenho experimental 2 X 2. Portanto os animais foram agrupados em quatro tratamentos: SALINA (4 infusões de salina; n=5), PGE (4 infusões de PGE1; n=5), PGF (4 infusões de PGF; n=5) e PGE+PGF (4 infusões de PGE1+PGF; n=5). As concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram dosadas por radioimunoensaio e o volume luteal foi determinado por ultrassonografia transretal. As concentrações circulantes de PGFM e PGEM foram dosadas antes e 10 minutos após as primeiras duas infusões. Biopsias luteais foram coletadas de cada vaca 30 minutos após cada infusão para determiner a expressão de genes em resposta a cada tratamento. As concentrações circulantes de PGFM 10 minutos após as infusões foram maiores em vacas que receberam tratamentos com PGF e PGE+PGF em comparação com as vacas tratadas com salina e PGE. Da mesma forma, as concentrações de PGEM 10 minutos após cada infusão foram maiores em vacas tratadas com PGE e PGE+PGF em comparação com vacas dos grupos salina e PGF. As concentrações de P4 diminuiram no grupo PGF em comparação com o grupo Salina no tempo 12-h (48,9% do controle) após a primeira infusão de PGF, no tempo 24-h (20,2% do controle), e em todos tempos subsequentes (P < 0,05). Não foram encontradas diferenças nas concentrações circulantes de P4 entre os grupos Salina, PGE e PGF+PGE. Houve também uma diminuição do volume luteal entre o grupo PGF e os outros três grupos que foi observada nos tempos 24-h (56,4% do controle), 48-h (30,6% do controle), e 72-h (20,4% do controle) após o tratamento com PGF (P<0.05). Não houve diferenças no volume luteal entre os tratamentos salina, PGE e PGE+PGF. Por tanto, infusões IU simultâneas de baixas doses de PGE1 bloquearam a ação luteolitica de pulsos IU de PGF em vacas, como observado nas mudanças circulantes de P4 e volume luteal. Análises da expressão génica nas biopsias luteais coletadas após o terceiro pulso de PGF, indicam o padrão tipico de expressão de genes em resposta ao tratamento com PGF (FGF2, EGR1, FOS e FAS aumentaram; PTGFR, VEGFA, NR5A1 e STAR diminuiram) e o tratamento PGE+PGF bloqueou completamente as mudanças na expressão destes genes. Infusões IU de PGF e PGE1 parecem ser um excelente modelo para determiner o padrão de expressão de genes envolvidos no efeito luteoprotetor da PGE1. / In ruminants, natural luteolysis is characterized by the release of several pulses of prostaglandin F2alpha (PGF) produced by the uterus. Prostaglandin F2alpha is the luteolytic hormone, whereas prostaglandin E1 (PGE1) is considered to be a luteoprotective mediator. In previous studies, low doses of PGF infused into the uterus at 6 hour (h) intervals resulted in regression of the corpus luteum (CL). This study was designed to develop a model to study the effect of low doses of PGE1, also infused into the uterine lumen, on the luteal responses to intrauterine (IU) PGF. Cows on day 10 of the estrous cycle received IU infusions of saline (0,1 ml of saline + 0,1 ml of DMSO), PGE (2 mg of PGE1 in 0,1ml of DMSO) or PGF (0,25 mg of PGF in 0,1 ml of saline) at 6-h intervals in a 2 X 2 experimental design. Thus, there were four treatment groups: SALINE (4 saline infusions; n=5), PGE (4 PGE1 infusions; n=5), PGF (4 PGF infusions; n=5), and PGE+PGF (4 PGE1+PGF infusions; n=5). Radioimmunoassay was used to measure circulating progesterone (P4) concentrations and luteal volume was determined by transrectal ultrasonography. Circulating concentrations of PGFM and PGEM were measured before and 10 minutes after the first two infusions. A luteal biopsy was collected from each cow at 30 minutes after each infusion for later determination of gene expression in response to each treatment. Circulating concentrations of PGFM 10 minutes after infusions were greater in cows receiving treatments with PGF and PGE+PGF than in Saline or PGE-treated cows. In the same way, concentrations of PGEM 10 minutes after infusions, were greater in cows that were treated with PGE and PGE+PGF than in saline and PGF-treated cows. Concentrations of P4 in the PGF group decreased compared to those in the saline group by 12-h (48.9% of control) after first infusion of PGF, at 24-h (20,2% of control), and all subsequent time points (P < 0,05). No differences in circulating P4 concentrations were found between Saline, PGE, and PGF+PGE. There was also a decrease of luteal volume between the PGF group and the other three groups that was detectable at 24 (56,4% of control), 48 (30,6% of control), and 72 (20,4% of control) h after PGF treatment (P<0.05). There were no differences in luteal volume between Saline, PGE, or PGE+PGF. Thus, simultaneous IU infusion of a low dose of PGE1 blocked the luteolytic actions of IU PGF pulses in cattle, as measured by changes in circulating P4 and luteal volume. Analyses of gene expression in the luteal biopsy taken after the third PGF pulse indicate a typical pattern of gene expression in response to the PGF treatments (FGF2, EGR1, FOS and FAS increased; PTGFR, VEGFA, NR5A1 and STAR decreased) and that simultaneous PGE1 treatment completely blocked these gene expression changes. Thus, IU infusion of PGF and PGE1 seems to provide an excellent model for determining the patterns of gene expression involved in the luteoprotective effect of PGE1.
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Perfil do RNAm da proteína transportadora de prostaglandina (PGT) no endométrio equino in vivo e sobre influência embrionária in vitro / mRNA to PGT profile in the equine endometrium in vivo, and under embryonic influence in vitroJuliana Nascimento 28 January 2011 (has links)
Nas éguas cíclicas, a luteólise ocorre entre os dias 14 e 16 após ovulação, pela ação da PGF2ά endometrial. Entretanto, durante a gestação, a luteólise deve ser bloqueada, ao mesmo passo que a ação da PGE2 deve ser estimulada. Ambos hormônios possuem baixa difusão pela membrana plasmática, sendo necessária a presença da proteína transportadora de prostaglandina (PGT) para o influxo e efluxo destes hormônios nas células. Os objetivos deste experimento foram identificar e relacionar o RNAm da PGT no endométrio de éguas cíclica e gestante aos 14 dias (experimento 1) e avaliar o perfil do RNAm para PGT no endométrio eqüino em final de diestro sob efeito de secreção embrionária (experimento 2). Para o experimento 1, um ciclo estral de 11 éguas foi acompanhado. Seis éguas não foram inseminadas e somente detectado o tempo de ovulação e cinco foram inseminadas. Biópsias endometriais foram realizadas quando detectado folículo pré-ovulatório (≥35mm de diâmetro) e edema endometrial (E0; n=6), sete (E7; n=6) e quatorze (E14; n=6) dias após ovulação nas fêmeas cíclicas e aos quatorze dias de gestação (EG; n=4) nas fêmeas gestantes. No experimento 2, 5 embriões eqüinos de 13,5 dias de idade foram coletados, cultivados por 24 horas em ambiente com temperatura e CO2 controlados e o meio condicionado embrionário (MCEE) gerado foi armazenado a -80ºC. Em seguida, amostras endometriais de sete éguas cíclicas aos 14 dias pós ovulação foram coletadas por biópsia uterina e cultivadas por 24 horas, em ambiente com temperatura e CO2 controlados, na presença do MCEE. O RNA total foi extraído de todas as amostras endometriais e amplificado pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), de um passo. A abundância relativa média dos transcritos foi submetida a análise de variância e as médias foram separadas pelo teste LSD (P<0,05). No experimento 1, o RNAm da PGT em tecido equino foi identificado, de maneira que as quantidades relativas deste gene foram similares entre E0, E7, E14 e EG. No experimento 2, o MCEE não modificou a quantidade de RNAm para PGT no endométrio em fase final do diestro. / In cyclic mares, luteolysis occurs between the 14th and 16th days after ovulation, due to endometrial PGF2ά However, in pregnant mares luteolysis must be blocked, whereas the PGE2 action must be stimulated. Both hormones have low diffusion through the plasma membrane, wherein the Prostaglandin Transporter Protein (PGT) is needed to influx and efflux of these hormones in the cells. The objectives of this experiment are to identify and to relate with the mRNA to PGT in the endometrium of cyclic and pregnant mares (experiment 1) and to evaluate the mRNA profile to PGT in equine endometrium at end of diestrous, under embryonic secretion effect (experiment 2). In the experiment 1, one estrous cycle of 11 mares (5 to 12 years old) was examined. Six mares were not inseminated and only the time of ovulation was recorded, and five mares were inseminated. Endometrial biopsies were performed when pre-ovulatory follicles (diameter ≥ 35mm) and endometrial edema were detected (E0; n=6), seven (E7; n=6) and fourteen days (E14; n=6) after ovulation in cyclic mares, and fourteen days after ovulation in pregnant mares (EG; n=4). In the experiment 2, five embryos of 13,5 days of age were collected, cultured during 24 hours in controlled temperature and CO2 and the embrionic conditioned medium (ECM) was stored at -80ºC. After that, endometrium samples of 7 mares at fourteen days after ovulation were collected by uterine biopsy and they were cultured during 24 hours, in controlled temperature and CO2, with ECM. Total RNA was extracted and submitted to amplification by one step real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). The abundance relative average of trancripts was submitted to variance analysis and averages were separated by LSD test (P<0,05). In the experiment 1 the mRNA to equine PGT was identified so that the relative quantities of this gene were equal among E0, E7, E14 e EG. In the experiment 2, the ECM did not modify the mRNA quantity to PGT in the endometrium at end of diestrous.
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Parâmetros reprodutivos de fêmeas caprinas tratadas com os hormônios hCG, progesterona, eCG e cloprostenol / Induction and synchronization of estrus and the gestation rate in does treated with hCG, progesterone, eCG and cloprostenolProsperi, Claudio Pories 26 March 2004 (has links)
Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-12T18:51:51Z
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Previous issue date: 2004-03-26 / Este trabalho foi realizado com os seguintes objetivos: A) Estudar a eficiência reprodutiva das cabras das raças Alpina e Saanen tratadas com hormônios. Neste trabalho, cabras em lactação, das raças Alpina (83) e Saanen (60), na estação de acasalamento, induzidas pelo programa de fotoperíodo artificial, foram distribuídas em dois tratamentos, após a cobrição. As cabras do tratamento 1 (controle ou T1) receberam solução salina (1 mL) e as do tratamento 2 (tratadas ou T2) receberam 250 UI de hCG, via intramuscular (1 mL), no terceiro dia no pós-estro. A taxa de gestação, detectada por exame ultra-sonográfico realizado no 35 o dia após a cobrição, das cabras das raças Alpina e Saanen, controles e tratadas, foi de 80,35 e 70,27%, e 72,73 e 81,48%, respectivamente. O hCG não afetou a taxa de gestação dos animais dentro de tratamentos nem entre raças, e a taxa média de gestação foi de 77,2 e 75,0 % para os controles e tratados, respectivamente. Também a duração média das gestações nas cabras não foi afetada pelo tratamento (P>0,05), sendo 151 ± 3 dias (34) para os animais do T1 e 151 ± 2 dias (47) para os de T2. As amostras de sangue para análise da concentração plasmática de progesterona (P4) foram coletadas de cinco cabras Alpinas por tratamento, no dia do estro (dia 0), no dia de aplicação do hCG ( dia 3), e nos dias 8, viii15, 21, 42 e 60 após o estro. Não houve diferença na concentração plasmática média de P4 entre os tratamentos (P>0,05), sendo 5,84 ng/mL nos animais-controle e de 5,76 ng/mL nos animais tratados, porém houve diferença em relação aos dias de coleta (P<0,05); B) Verificar a efetividade da redução do tempo de permanência da esponja intravaginal impregnada com acetato de medroxiprogesterona (60 mg de MAP) sobre a indução e sincronização do estro. Foram utilizadas 28 fêmeas Saanen nulíparas, 17 não- lactantes e 46 em lactação (91 animais), fora da estação de acasalamento, distribuídas aleatoriamente em dois tratamentos (T1: 14 nulíparas, 8 não-lactantes e, 21 lactantes, e T2: 14 nulíparas, 9 não-lactantes e 25 lactantes). Nestes tratamentos, as esponjas intravaginais foram mantidas por seis e nove dias, respectivamente. Independentemente do tratamento, 24 horas antes da retirada das esponjas, os animais receberam 200 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) e 25 μg de análogo de prostaglandina F 2á , (cloprostenol = PGF). Não se verificou diferença em relação à taxa de manifestação de estro entre as cabras dos tratamentos dentro das categorias (P>0,05), sendo nulíparas 78,57 e 85,71%, não-lactantes 87,50 e 66,67%, e lactantes 85,71 e 88,00% no T1 e T2, respectivamente. O início do estro e sua duração não variaram com o tratamento (P>0,05), apenas apresentando diferença de acordo com a categoria animal, visto que, as cabras nulíparas entraram em estro mais cedo que as não-lactantes e as lactantes (P<0,05), com valores de 25,36; 49,21; e 42,77 horas após a retirada da esponja, respectivamente. A duração do estro foi maior nas cabras nulíparas que nas lactantes, 35,0 vs 23,7 horas (P<0,05), mas não diferiu das não-lactantes (28,2 horas) e as duas últimas não diferiram entre si (P>0,05). A percentagem de cabras gestantes não diferiu entre os tratamentos (P>0,05), sendo de 72,97% no T1 e de 73,68% no T2. O número de crias ao parto não diferiu entre as cabras dos tratamentos (P>0,05), sendo de 1,82±0,13 e de 1,58±0,16 no T1 e T2, respectivamente; C) 1 - Verificar, a eficácia da PGF em provocar o retorno ao estro das cabras (13), quando aplicado no terceiro dia no pós- estro. A taxa de retorno ao estro foi de 66,00 e 70,00% para as cabras Saanen e Alpina, respectivamente (P>0,05), com taxa média geral de 69,23%, durante a estação de acasalamento induzida por fotoperíodo artificial. A taxa de gestação avaliada no 35 o dia após a cobrição por ultra-sonografia foi de 87,5%; C) 2 - Comparar o protocolo padrão (T1), que emprega duas aplicações de 125 μg PGF intervaladas de dez dias, com o protocolo de tempo reduzido (T2), cujas aplicações são intervaladas de sete dias, durante a estação reprodutiva natural. No sétimo dia, aplicaram-se nos animais duas doses intervaladas de 10 horas, totalizando 250 μg de PGF. A taxa de indução de estro foi similar para as cabras do T1 e T2, sendo de 87,50 e 75,00%, respectivamente, após a primeira aplicação, porém, após a segunda aplicação verificou-se uma taxa de 66,6% e 100,0% para as de T1 e de T2, respectivamente. O intervalo tratamento-início do segundo estro foi menor para o protocolo reduzido, em relação ao padrão (28,86±5,40 x 46,50±7,55 horas, P<0,05). Não houve diferenças entre a duração do estro (36,00±27,28 e 34,29±12,83 horas) e o tempo decorrido do início do estro à ovulação (31,50±27,44 e 27,43±7,63 horas) e nem para o número de ovulações (1,25±0,50 e 1,86±0,69) entre as cabras do T1 e o T2, respectivamente (P>0,05); C) 3 - Comparar a taxa de indução, o intervalo e a duração do estro em cabras das raças Saanen e Alpina, utilizando-se dois protocolos com intervalos de aplicações de PGF de sete dias, sendo T1 com duas aplicações de 125 μg de PGF no sétimo dia, intervaladas de 10 horas e o T2 com uma única aplicação de 125 μg de PGF no sétimo dia, durante o período de transição entre a estação de reprodução natural e a de anestro estacional . As cabras apresentaram taxa de retorno ao estro inferior aos experimentos anteriores, sendo 55,56 e 44,44% de estros no T1 e T2, respectivamente, mas a taxa de resposta à segunda aplicação de PGF foi de 80,00 e 100,00% de estros no T1 e T2, respectivamente, com média geral de 88,89%. Não houve diferenças do intervalo tratamento-início de estro e duração do estro, tanto após a primeira quanto após a segunda aplicação (dia sete), com observação de menor duração média de estro (27,00±11,86 horas) nas cabras dos dois tratamentos, quando comparado aos outros experimentos. Concluiu-se que o hCG aplicado no terceiro dia após o estro não altera a concentração plasmática de P4 e não melhora a taxa de gestação das cabras. A redução da duração do tempo de tratamento com MAP em cabras da raça Saanen foi eficiente em induzir e sincronizar o estro. O corpo lúteo de cabras das raças Alpina e Saanen é sensível à ação da PGF no terceiro dia de sua formação, e o protocolo de tempo reduzido (sete dias) é igualmente eficaz em induzir e sincronizar o estro. / This work was realized with the following objectives: A) To study the reproductive efficiency of the Alpine and Saanen breed goats, treated with hormones. In the first experiment were used 83 Alpine and 60 Saanen dairy goats, during the artificial photoperiod induced breeding season program. The animals were allocated in two treatments, after mating, treatment 1 (T1): the goats received identical volume of saline solution intramuscularly (1 mL), and in treatment 2 (T2): the animals received 250 IU of hCG (1 mL) in the third day after estrus. The gestation rate detected by ultrasound equipment in the thirty fifth day after mating, for the Alpine and Saanen goats in T1 and T2 treatments were: 80.35 and 70.27, 72.73 and 81.48%, respectively, and did not differ among themselves (P>0.05). The gestation rate means were: 77.20 and 75.00% for the controls and treated animals, respectively. The goats gestation length were not affected by the hCG treatment compared to the control animals (151±2 x 151±3 days). Blood samples from 5 Alpine does per treatment were collected at the estrus time (day 0) and on days 3, 8, 15, 21, 42 and 60 after estrus, for progesterone plasma determination. The progesterone concentration means were 5.84 and 5.76 ng/mL for the control and treated does, respectively, and was not affected by the treatment (P>0.05). A xisignificant differences in relation to the days of collections (P<0.05) were observed; B) To check the efficacy of reducing the insertion time of the intravaginal sponge impregnated with 60 mg of medroxiprogesterone acetate (MAP) on the induction and synchronization of estrus. Ninety one animals whose estrus were induced by the use of intravaginal sponges, were allocated randomly into two treatments. In the treatment one (T1, n = 43), 14 nuliparous, 8 non-lactating and 21 lactating, and in T2 (n = 43) 14 nuliparous, 9 non-lactating, and 25 lactating goats, the intravaginal sponges were left in situ for six and nine days, respectively. Besides, animals from both treatments received 200 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG) 24 hours before sponge withdrawal and 25 μg of prostaglandin F 2á analogue (cloprostenol). The percentage of animals showing estrus between the treatments did not differ, being 78.57, 85.71 and 87.50 and 66.67, 85.71 and 88.00% for the nuliparous, non-lactating and lactating ones, for T1 and T2, respectively. The onset of estrus and its duration did not vary among animals in the treatments, but the nulíparous does started estrus earlier than non-lactating and lactating ones 25.36, 49.21 and 42.77 hours (P<0.05) after the sponge withdrawal. The estrus duration was greater for nulíparous goats 35.09 hours comparing to the lactating ones 23.65 (P<0.05), but did not differ from non-lactating 28.21 hours and the last two ones did not differ between themselves (P>0.05). The gestation rate and litters size means were: 72.97 and 73.68% and 1.82±0.13 and 1.58±0.16 kids for T1 and T2 animals, respectively and were not affected by the treatment (P>0.05); C) 1 – To check the efficacy of PGF to induce the estrus in the goats, when applied in the third day after estrus, during breeding season induced by the photoperiod. The estrus rate was 66.00 and 70.00%, for Alpine and Saanen does, respectively (P>0.05), with a general mean of 69.23%. The gestation rate, by ultrasonography, in the 35 th day after mate was 87.50%; C) 2 - To compare the standard protocol (T1 ; two doses of 125 μg at 10 days interval day 0 and day 10), with the short time protocol (three doses of 125 μg of PGF) at 7 days interval (day 0, day 7 with two doses with 10 hours interval) during the normal breeding season. After the first application, the estrus return rate was similar among the does in the two protocols (87.50 and 75.00%), respectively, and after the second application the return rate was 66.67% for the standard protocol and 100.00% for the short time protocol. The interval PGF injection to the onset of the second estrus was shorter for the short time protocol than the standard one, (28.86±5.40 x 46.50±7.55 hours, P<0.05). The estrus duration, the interval from estrus-ovulation and the numbers of ovulation did not xiidiffer among the animals from the reduced and standard protocol (36.00±27.28 and 34.29±12.83 hours, 31.50±27.44 and 27.43±7.63 hours and 1.25±0.50 and 1.86±0.69, respectively, P>0.05); C) 3 – To compare two reduced protocols (T) of seven days for the Saanen and Alpine breed goats for the induction and synchronization of estrus, during the transition period, between the normal breeding season and the anestrous season. In the first one (T1) the animals received two injections of 125 μg of PGF at seven days interval (day 0 and day 7), and in the second one (T2) the animals received three injections of 125 μg PGF (day 0 and two doses at day 7 with 10 hours interval). The does, in this experiment, showed a smaller estrus rate than in the two previous experiments, with 44.44 and 55.56 % for the T1 and T2, respectively, but the estrus rate after the 7 th day application was 100.00 and 80.00 % for T1 and T2 does, with a general mean of 88.89%. The does interval treatment-estrus and the duration of estrus did not differ between the first and the second applications of PGF, but the mean estrus duration of 27.00±11.86 hours in this experiment, was smaller than in the previous two ones. It is concluded that the corpora lutea of the does after the third day of life span is sensitive to the action of the PGF, and the short time protocol for 7 days is effective to induce and synchronize the estrus.
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Efeitos do 17β-estradiol na abundância de transcritos para enzimas envolvidas na síntese de PGF2α endometrial em fêmeas bovinas no final do diestroFeltrin, Isabella Rio January 2020 (has links)
Orientador: Claudia Maria Bertan Membrive / Resumo: Em bovinos, o 17β-estradiol (17β-E2) estimula a expressão de receptores de estradiol (ER) e ocitocina (OXTR) no endométrio. A ativação de OXTR induz a ativação de uma complexa cascata que resulta na síntese de PGF2α. A hipótese é que o tratamento com 17β-E2, 15 dias após o estro (D15), modula a expressão gênica das proteínas quinase (PKC) e fosfolipase A2 (PLA2), ambas envolvidas na síntese de PGF2α e dependentes de cálcio. Objetivou-se neste estudo determinar os efeitos do 17β-E2 na abundância de trancritos (PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 e PTGS2) diretamente envolvidos na síntese de PGF2α. Novilhas (N=50), não prenhes, cíclicas, foram sincronizadas pela inserção de um dispositivo de liberação intravaginal contendo 0,558g de progesterona (P4), pela administração de 1 mg de benzoato de estradiol e 0,075 mg de D-Cloprostenol, ambos intramuscular (IM). Após 6 dias, foi injetado 0,075 mg de D-Cloprostenol, IM. Após 48 horas, o dispositivo contendo P4 foi removido e 0,150 mg de D-Cloprostenol foi administrado IM. Nesta ocasião, um adesivo foi inserido na base da cauda para a identificação dos estros (Boviflag Red Estrus Detector - ABS Pecplan) e observações de estro foram realizadas nos próximos 4 dias. Participaram do experimento somente novilhas identificadas em estro (D0 = dia do estro) e que ovularam (N=46). Entre D14 e D23, a área do corpo lúteo (CL; cm2), fluxo sanguíneo (%) e as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram avaliadas diariamente. No D15, as novi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In cattle, 17β-estradiol (17β-E2) stimulates expression of estradiol (ER) and oxytocin receptor (OXTR) in the endometrium. The activation of OXTR leads to the induction of a complex cascade of molecular activation resulting in PGF2α synthesis. The hypothesis was that 17β-E2 treatment on day 15 (D15) after estrus modulates the gene expression of protein kinase (PKC) and phospholipase A2 (PLA2), both directly involved in the synthesis of PGF2α and calcium dependent. The aim of this study was to determine the effects of 17β-E2 on the abundance of key transcripts (PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 and PTGS2) involved in PGF2α signaling and synthesis. Nelore heifers (N=50), don't pregnant, cyclic were synchronized by insertion an intravaginal release device containing 0.558g of progesterone (P4), and by the administration of 1 mg of estradiol benzoate and 0.075 mg de D-Cloprostenol, both intramuscularly (IM). After 6 days, 0.075 mg D-Cloprostenol was injected, IM. After 48 hours the P4 device was removed and 0.150 mg D-Cloprostenol was administered IM. On this occasion, an adhesive was inserted at the base of the tail for the identification of estrus (Boviflag Red Estrus Detector - ABS Pecplan) and estrous observation were made in the next 4 days. Participated in the experiment only the heifers identified in estrus (D0 = day of estrus) that ovulated (N=46). Between D14 and D23, corpus luteum (CL) area (cm2), blood flow (%), and progesterone (P4) plasmatic concentrations were eval... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Efeitos antagônicos da prostaglandina D2 e prostaglandina E2 na resposta imune durante infecção experimental por Histoplasma capsulatum / Opposite effects of prostaglandin D2 and prostaglandin E2 in immune response during experimental infection by Histoplasma capsulatum.Pereira, Priscilla Aparecida Tartari 30 October 2013 (has links)
O Histoplasma capsulatum é um fungo dimórfico, patogênico e responsável por graves lesões pulmonares. A infecção é adquirida pela inalação de conídios e posterior conversão para leveduras nos alvéolos e bronquíolos, onde são fagocitadas por macrófagos alveolares residentes e leucócitos que migram para o local da infecção. Recentemente, demonstramos que animais infectados com H. capsulatum e tratados com inibidor da síntese de prostaglandinas apresentaram diminuição de carga fúngica nos pulmões e baço, aumento da produção de nitrito e da fagocitose de leveduras por macrófagos alveolares, e maior sobrevivência, quando comparados com os animais somente infectados. Porém, neste estudo não foram determinados quais subtipos de prostaglandinas participam na patogênese da histoplasmose. Vários grupos de pesquisa têm demonstrado que PGD2 e PGE2 podem ter ações biológicas distintas quanto à remoção de microrganismos no hospedeiro. Desta maneira, é fundamental o entendimento do papel da PGD2 e da PGE2 nos mecanismos efetores dos macrófagos na defesa do hospedeiro, especialmente na histoplasmose. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar a participação da PGD2 e PGE2 na infecção experimental por H. capsulatum. Assim, demonstramos que a PGD2 aumentou a fagocitose e mecanismos microbicidas de macrófagos alveolares infectados in vitro com H. capsulatum. Observamos ainda que a 15dPGJ2, metabólito da PGD2, aumentou somente a fagocitose, e PGE2 inibiu os mecanismos efetores do macrófago. Mostramos ainda o aumento de BLT1 em macrófagos alveolares após adição de PGD2, e a possível ligação desta ao BLT1, e de LTB4 em DP2. Além disso, caracterizamos micropartículas de PLGA contendo PGD2 (MS-PGD2), e investigamos seus efeitos. O tamanho, carga elétrica e morfologia das micropartículas foram adequados para um tratamento intranasal e para fagocitose por macrófagos alveolares. As MS-PGD2 foram fagocitadas e capazes de ativar NF-B, e consequentemente, influenciar na produção de nitrito, IL-1, TNF-, IL-6 e TGF-. Com base nestes dados, avaliamos os efeitos do tratamento da MS-PGD2 ou da MS-PGE2 em animais infectados com H. capsulatum. Estas foram administradas via intranasal em animais infectados e tratados ou não com celecoxibe. Verificamos a diminuição da carga fúngica nos pulmões e baço, diminuição do infiltrador celular no espaço broncoalveolar e de citocinas inflamatórias no pulmão após tratamento com MS-PGD2. Contrariamente, após tratamento da MS-PGE2 observamos maior carga fúngica nos pulmões e baço, e aumento da inflamação no tecido e maior produção de IL-10. Além disso, demonstramos que no 21° dia após infecção, referente ao 7° dia após o término do tratamento com MS-PGD2, a carga fúngica manteve-se reduzida nos pulmões, comprovando assim a eficácia deste tratamento. Posteriormente, utilizando inibidores específicos, HQL-79 e CAY10526, mostramos respectivamente o papel protetor da PGD2 e o deletério da PGE2 na histoplasmose. Em conjunto, nossos dados contribuíram para o entendimento das funções antagônicas da PGD2 e PGE2 nesta micose. / Histoplasma capsulatum is a pathogenic dimorphic fungus and responsible for severe pulmonary lesions. Infection is acquired by inhalation of conidia and posterior conversion to yeasts in the alveoli and bronchioles, in which they are phagocyted by resident alveolar macrophages and leukocytes that migrate to the local infection. Recently, we demonstrate that mice infected by H. capsulatum and treated with inhibitor of prostaglandins synthesis presented a decrease in fungal burden in lungs and spleen, increase in nitrite production and uptake of yeasts by alveolar macrophages, and more survival, when compared with animals only infected. However, in this study, it was not determined what subtypes of prostaglandins participate in pathogenesis of histoplasmosis. Many research groups have demonstrated that PGD2 and PGE2 can have different biological effects regarding to microorganisms elimination in the host. Thus, it is primordial the understanding about the role of PGD2 and PGE2 on effector mechanisms of macrophages in host defense, especially in histoplasmosis. Therefore, the aim of this study was to investigate the role of PGD2 and PGE2 on experimental infection by H. capsulatum. So, we verify that PGD2 increased the uptake and microbicidal mechanisms of alveolar macrophages infected in vitro by H. capsulatum. 15dPGJ2, a PGD2 metabolite, increased only the phagocytosis, and PGE2 inhibited the effector mechanisms of macrophages. Among these results, we showed an increase of BLT1 expression on alveolar macrophages after addition of PGD2, and a possible binding of this mediator to BLT1, and of LTB4 to DP2. Later, as tool of therapeutic investigation, we used PGD2 encapsulation in biodegradable polymer, PLGA, in order to preserve its stability. Size, zeta potential and morphology were adequate for a possible intranasal treatment and uptake by alveolar macrophages. MS-PGD2 were phagocyted and able to activate NF-B, and consequently, to modulate nitrite, IL-1, TNF-, IL-6 and TGF- production. In this context, we purpose a treatment of the infection with MS-PGD2, in comparison to treatment with PGE2. MS-PGD2 were administrated via intranasal in infected mice, treated or not with celecoxib. We verify a decrease of fungal burden in lungs and spleen, less cellular infiltrate and decrease of some inflammatory cytokines. In contrast, after treatment of MS-PGE2, we observed greater fungal burden in the lungs and spleen, and an increase of the tissue inflammation and production of IL-10. Furthermore, we show that on day 21 after infection, referring to the 7th day after the treatment with MS-PGD2, fungal burden remained reduced in the lungs, thus proving the effectiveness of the treatment. Subsequently, using specific inhibitors, HQL-79 and CAY10526, respectively show the protective role of PGD2 and in deleterious to PGE2 in histoplasmosis. Together, our data contribute to the understanding of the antagonistic functions of PGD2 and PGE2 in this mycosis.
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Efeitos antagônicos da prostaglandina D2 e prostaglandina E2 na resposta imune durante infecção experimental por Histoplasma capsulatum / Opposite effects of prostaglandin D2 and prostaglandin E2 in immune response during experimental infection by Histoplasma capsulatum.Priscilla Aparecida Tartari Pereira 30 October 2013 (has links)
O Histoplasma capsulatum é um fungo dimórfico, patogênico e responsável por graves lesões pulmonares. A infecção é adquirida pela inalação de conídios e posterior conversão para leveduras nos alvéolos e bronquíolos, onde são fagocitadas por macrófagos alveolares residentes e leucócitos que migram para o local da infecção. Recentemente, demonstramos que animais infectados com H. capsulatum e tratados com inibidor da síntese de prostaglandinas apresentaram diminuição de carga fúngica nos pulmões e baço, aumento da produção de nitrito e da fagocitose de leveduras por macrófagos alveolares, e maior sobrevivência, quando comparados com os animais somente infectados. Porém, neste estudo não foram determinados quais subtipos de prostaglandinas participam na patogênese da histoplasmose. Vários grupos de pesquisa têm demonstrado que PGD2 e PGE2 podem ter ações biológicas distintas quanto à remoção de microrganismos no hospedeiro. Desta maneira, é fundamental o entendimento do papel da PGD2 e da PGE2 nos mecanismos efetores dos macrófagos na defesa do hospedeiro, especialmente na histoplasmose. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar a participação da PGD2 e PGE2 na infecção experimental por H. capsulatum. Assim, demonstramos que a PGD2 aumentou a fagocitose e mecanismos microbicidas de macrófagos alveolares infectados in vitro com H. capsulatum. Observamos ainda que a 15dPGJ2, metabólito da PGD2, aumentou somente a fagocitose, e PGE2 inibiu os mecanismos efetores do macrófago. Mostramos ainda o aumento de BLT1 em macrófagos alveolares após adição de PGD2, e a possível ligação desta ao BLT1, e de LTB4 em DP2. Além disso, caracterizamos micropartículas de PLGA contendo PGD2 (MS-PGD2), e investigamos seus efeitos. O tamanho, carga elétrica e morfologia das micropartículas foram adequados para um tratamento intranasal e para fagocitose por macrófagos alveolares. As MS-PGD2 foram fagocitadas e capazes de ativar NF-B, e consequentemente, influenciar na produção de nitrito, IL-1, TNF-, IL-6 e TGF-. Com base nestes dados, avaliamos os efeitos do tratamento da MS-PGD2 ou da MS-PGE2 em animais infectados com H. capsulatum. Estas foram administradas via intranasal em animais infectados e tratados ou não com celecoxibe. Verificamos a diminuição da carga fúngica nos pulmões e baço, diminuição do infiltrador celular no espaço broncoalveolar e de citocinas inflamatórias no pulmão após tratamento com MS-PGD2. Contrariamente, após tratamento da MS-PGE2 observamos maior carga fúngica nos pulmões e baço, e aumento da inflamação no tecido e maior produção de IL-10. Além disso, demonstramos que no 21° dia após infecção, referente ao 7° dia após o término do tratamento com MS-PGD2, a carga fúngica manteve-se reduzida nos pulmões, comprovando assim a eficácia deste tratamento. Posteriormente, utilizando inibidores específicos, HQL-79 e CAY10526, mostramos respectivamente o papel protetor da PGD2 e o deletério da PGE2 na histoplasmose. Em conjunto, nossos dados contribuíram para o entendimento das funções antagônicas da PGD2 e PGE2 nesta micose. / Histoplasma capsulatum is a pathogenic dimorphic fungus and responsible for severe pulmonary lesions. Infection is acquired by inhalation of conidia and posterior conversion to yeasts in the alveoli and bronchioles, in which they are phagocyted by resident alveolar macrophages and leukocytes that migrate to the local infection. Recently, we demonstrate that mice infected by H. capsulatum and treated with inhibitor of prostaglandins synthesis presented a decrease in fungal burden in lungs and spleen, increase in nitrite production and uptake of yeasts by alveolar macrophages, and more survival, when compared with animals only infected. However, in this study, it was not determined what subtypes of prostaglandins participate in pathogenesis of histoplasmosis. Many research groups have demonstrated that PGD2 and PGE2 can have different biological effects regarding to microorganisms elimination in the host. Thus, it is primordial the understanding about the role of PGD2 and PGE2 on effector mechanisms of macrophages in host defense, especially in histoplasmosis. Therefore, the aim of this study was to investigate the role of PGD2 and PGE2 on experimental infection by H. capsulatum. So, we verify that PGD2 increased the uptake and microbicidal mechanisms of alveolar macrophages infected in vitro by H. capsulatum. 15dPGJ2, a PGD2 metabolite, increased only the phagocytosis, and PGE2 inhibited the effector mechanisms of macrophages. Among these results, we showed an increase of BLT1 expression on alveolar macrophages after addition of PGD2, and a possible binding of this mediator to BLT1, and of LTB4 to DP2. Later, as tool of therapeutic investigation, we used PGD2 encapsulation in biodegradable polymer, PLGA, in order to preserve its stability. Size, zeta potential and morphology were adequate for a possible intranasal treatment and uptake by alveolar macrophages. MS-PGD2 were phagocyted and able to activate NF-B, and consequently, to modulate nitrite, IL-1, TNF-, IL-6 and TGF- production. In this context, we purpose a treatment of the infection with MS-PGD2, in comparison to treatment with PGE2. MS-PGD2 were administrated via intranasal in infected mice, treated or not with celecoxib. We verify a decrease of fungal burden in lungs and spleen, less cellular infiltrate and decrease of some inflammatory cytokines. In contrast, after treatment of MS-PGE2, we observed greater fungal burden in the lungs and spleen, and an increase of the tissue inflammation and production of IL-10. Furthermore, we show that on day 21 after infection, referring to the 7th day after the treatment with MS-PGD2, fungal burden remained reduced in the lungs, thus proving the effectiveness of the treatment. Subsequently, using specific inhibitors, HQL-79 and CAY10526, respectively show the protective role of PGD2 and in deleterious to PGE2 in histoplasmosis. Together, our data contribute to the understanding of the antagonistic functions of PGD2 and PGE2 in this mycosis.
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Avaliação da participação de mediadores lipídicos nas infecções experimentais induzidas por diferentes isolados de Mycobacterium tuberculosis de humanos / Evaluation of lipid mediators participation in the experimental infections induced by different isolates of Mycobacterium tuberculosis from human.Soares, Elyara Maria 13 September 2013 (has links)
Os mecanismos que conferem resistência do Mycobacterium tuberculosis (Mtb) à destruição pelo hospedeiro, além da sua capacidade em permanecer e/ou multiplicar-se no interior das células fagocitárias são ainda pouco compreendidos. Nosso grupo de pesquisa tem contribuído para o entendimento do papel dos mediadores lipídicos, que incluem prostaglandinas (PGs) e leucotrienos (LTs) na tuberculose. PGs inibem a resposta imune celular TH1, a produção de citocinas e a fagocitose, e assim facilita a infecção. LTs estão envolvidos no recrutamento de leucócitos, e na modulação da síntese de citocinas, no aumento da fagocitose e dos mecanismos microbicidas, e assim contribui para a eliminação da micobactéria. Neste projeto, avaliamos in vivo e in vitro a produção dos mediadores lipídicos induzidos por cepas de Mtb isolados de pacientes com tuberculose ativa. Demonstramos neste trabalho que macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV009 levam a maior produção de TNF- e nitrito, do que aqueles infectados com a cepa SV068. Em contraste, macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV068 induzem a produção de muito mais LTB4, quando comparado aos bacilos da cepa SV009. Obtivemos maior recuperação de unidades formadoras de colônia (UFC) de macrófagos alveolares tratados com MK886 e infectados com bacilos da cepa SV068; enquanto que mais UFCs foram recuperadas após o tratamento com ácido caféico e infecção com a cepa SV009. Com relação a formação de corpúsculos lipídicos (CLs), observamos um maior número destes quando macrófagos alveolares foram infectados com bacilos da cepa SV068. Ainda, observamos diminuição de CLs quando tratados com MK886 ou ácido caféico. Os bacilos da cepa SV068 foram mais fagocitados, mas os macrófagos não foram muito eficazes na atividade microbicida dos mesmos. Nos experimentos in vivo vimos que camundongos balb/c infectados com a cepa SV068 morrem mais e o tratamento com MK886 parcialmente os protege e a mortalidade não está relacionada com a maior carga bacilar no pulmão ou baço. Houve aumento no recrutamento de neutrófilos induzido pela infecção especialmente após infecção com os bacilos da cepa SV068, sendo que o tratamento com MK886 inibe significativamente o recrutamento quando comparado à infecção com os bacilos da cepa SV009. Células mononucleares também foram recrutadas e permaneceram aumentadas até o final do período observado, sem muitas diferenças significativas quando comparamos a infecção com os isolados SV009 e SV068. A produção de nitrito também encontrou-se elevada em animais infectados com bacilos da cepa SV068. A análise histopatológica dos pulmões dos animais infectados mostrou intensa reação inflamatória com maior comprometimento do parênquima pulmonar dos camundongos infectados bacilos da cepa SV068, com intensa deposição de colágeno e multiplicação bacilar. Encontramos diferenças significativas em relação à producão de citocinas IL-6, IL-10, IL-1, IFN-, TNF- and IL-12 após infecção de 30 e 60 dias com as cepas SV009 e SV068. Também mostramos que há diferenças na produção de LTB4 e PGE2 após 30 e 60 dias de infecção com as cepas SV009 e SV068 em células do camundongos balb/c. Experimentos com animais 129 e 5LO-/- infectados com as duas cepas também foram realizados, e vimos que os animais 5LO-/- são mais suscetíveis à infecção especialmente quando infectados com a cepa SV068. Sugerimos que as cepas são diferentes, mas dependentes de um conjunto de fatores, e nossos dados sugerem que dentre estes mecanismos a produção de TNF- e também de mediadores lipídicos (LTB4 e PGE2) estão envolvidos. / The mechanisms that confer resistance to Mycobacterium tuberculosis (Mtb) for destruction by the host, in addition to its ability to retain and/or multiply within phagocytic cells are still poorly understood. Our research group has contributed to the understanding of the role of lipid mediators, including prostaglandins (PGs) and leukotrienes (LTs) in tuberculosis. PGs inhibit Th1 cell immune response, cytokine production and phagocytosis, thus facilitating the infection. LTs are involved in the leukocytes recruitment, and modulation of cytokine synthesis, phagocytosis and microbicidal mechanisms enhancement, and contribute to the elimination of the mycobacteria. In this project, we evaluated in vivo and in vitro the lipid mediators production induced by Mtb strains isolated from patients with active tuberculosis. We demonstrated in this study that alveolar macrophages infected with bacilli from SV009 strain lead to an increase of TNF- production and nitrite, than those infected with the strain SV068. In contrast, alveolar macrophages infected with bacilli from SV068 strain induced more LTB4 production when compared to SV009 infection. We obtained higher recovery colony forming units (CFU) of alveolar macrophages treated with MK886 and infected with bacilli from SV068 strain; while more CFUs were recovered after treatment with caffeic acid and infection with bacilli from SV009 strain. Regarding the lipid bodies (LBs) formation, we observed a greater number of these structures, when alveolar macrophages were infected with bacilli from SV068 strain. Still, we observed a decrease of LBs when the macrophages were treated with MK886 and caffeic acid. Bacilli from SV068 strain were more phagocytosed, but macrophages were not very effective in the microbicidal activity. In the in vivo experiments we found that mice infected with SV068 strain die more than the other and MK886 treatment partially protects the mice, besides, the mortality is not related to the higher bacterial load in the lung or spleen. There was an increase in neutrophil recruitment induced after infection, especially after infection with SV068 strain, and treatment with MK886 significantly inhibits recruitment when compared to infection with SV009 strain. Mononuclear cells were also recruited and remained increased until the end of the observed period, without many significant differences when comparing infection with SV009 and SV068 strains. The nitrite production was also found greater in animals infected with bacilli from SV068 strain. Histopathological analysis of the infected mice lungs showed an intense inflammatory reaction with greater impairment of the mice lungs when infected with bacilli from SV068 strain with an intense collagen deposition and multiplication of bacilli. We suggest that the SV068 strain is more virulent and participates of the immune response by lipid mediators dependent mechanisms.
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Avaliação da expressão gênica de células da polpa dentária após estimulação com microesferas contendo mediadores lipídicos / Evaluation of gene expression in dental pulp cells after estimulation with microespheres containing lipid mediatorsSilva, Francine Lorencetti da 06 November 2015 (has links)
Durante a resposta inflamatória alguns mediadores lipídicos, destacando-se o Leucotrieno B4 (LTB4) e a Prostaglandina E2 (PGE2), são liberados no meio e desencadeiam uma série de eventos moleculares e celulares. Não diferentemente do que ocorre em outros tecidos, eventos inflamatórios na polpa também geram a produção destes mediadores lipídicos. Na polpa, entretanto, há presença de células-tronco que persistiram e permanecem indiferenciadas, mas com potencial capacidade de diferenciação em células odontoblast-like. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão de genes codificadores da síntese e mineralização da matriz dentinária, bem como avaliar a viabilidade celular diante de células indiferenciadas da polpa de camundongos (linhagem OD-21) após estimulação com microesferas de LTB4 e PGE2. Foram preparadas microesferas contendo os mediadores lipídicos (0,01 μM e 0,1 μM) pelo método de simples emulsão óleo-água seguido do processo de evaporação do solvente. Células OD-21 foram mantidas em cultura com os diferentes tratamentos por um período de estimulação de 24 horas para realização de teste de viabilidade celular (Ensaio Colorimétrico MTT). A seguir foi realizada avaliação da expressão gênica relativa dos genes Ibsp, Bmp2, Runx2, Alpl, Msx1 e Bglap pelo método de transcrição reversa e reação em cadeia de polimerase em tempo real (qRT-PCR), utilizando o sistema TaqMan® após estimulação por períodos de 3, 6, 24, 48 e 72 horas. Foi observado aumento significativo no número de células viáveis após um período de 24 horas de estimulação com microesferas contendo PGE2 a 0,1 μM. A estimulação com microesferas, porém, não induziu a expressão de Alpl, Msx1 e Bglap, mas o fez para os genes Ibsp, Bmp2 e Runx2, em períodos mais curtos de estimulação. A PGE2 encapsulada em microesferas foi capaz de modificar o padrão de expressão gênica de Bmp2 e Runx2 em cultura de células OD-21, sendo que o LTB4 mostrou um papel inibidor da expressão gênica de Ibsp. Estes resultados indicam que estes mediadores podem ser importantes no processo de proliferação e diferenciação de células da polpa dental. / During the inflammatory response some lipid mediators, especially Leukotriene B4 (LTB4) and Prostaglandin E2 (PGE2), are released into the environment and trigger a series of molecular and cellular events. Inflammatory events in the pulp also generate the production of these lipid mediators. However in the pulp there is the presence of stem cells that persisted and remain undifferentiated, but with ability to differentiate into odontoblast-like cells. The aim of to this study was to evaluate of gene expression encoding to the synthesis and mineralization of dentin matrix and to assess cell viability in undifferentiated cells of mice pulp (OD-21 strain) after stimulation with PGE2 and LTB4 microspheres. Microspheres containing lipid mediators were prepared (0.01 μM and 0.1 μM) using an oil-in water emulsion solvent extraction-evaporation process. OD-21 cells were maintained in culture with the different treatments during 24 hours for cell viability test (MTT colorimetric assay). After was made the evaluation of the relative gene expression of genes Ibsp, Bmp2, Runx2, Alpl, Msx1 and Bglap by reverse transcription method and real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR), using the TaqMan® system after stimulation for 3, 6, 24, 48 and 72 hours. There was a significant increase in the number of viable cells following a 24 hours stimulation with microspheres containing PGE2 0.1 μM. The microspheres stimulation did not induce the expression of Alpl, Msx1 and Bglap, but did in genes Ibsp, Runx2 and Bmp2, in shorter periods of stimulation. PGE2 microespheres modified the pattern of Bmp2 and Runx2 gene expression in OD-21 cell culture whereas LTB4 revealed an inhibitory effect on Ibsp expression. These findings indicate that lipid mediators might be important for dental pulp cell proliferation and differentiation.
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Mediadores envolvidos na resposta febril induzida pela RANTES / Mediators involved in the febrile response induced by RANTESMachado, Renes de Resende 12 February 2009 (has links)
Em estudo anterior, observamos que o Met-RANTES, antagonista de receptores CCR1 e CCR5 para quimiocinas, injetado pela via endovenosa (i.v.) reduziu a resposta febril induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, demonstrando o envolvimento da quimiocina RANTES (Regulada sob ativação, expressa e secretada por células T normais) nesta resposta. Além disso, a injeção intrahipotalâmica (i.h.) da RANTES dose-dependentemente aumentou a temperatura corporal de ratos, o qual foi caracterizado como febre, pois foi acompanhada de redução da temperatura da cauda, uma resposta termorregulatória para retenção de calor. Observamos também, que a RANTES aumenta a concentração de prostaglandinas no fluido cerebroespinhal (CSF) e que a febre por ela induzida é sensível aos inibidores não-seletivos para as ciclooxigenases e seletivo para COX-2 (Machado et al., 2007). No presente estudo, aprofundamos a investigação sobre os mediadores, incluindo as prostaglandinas, envolvidos na resposta febril induzida pela RANTES. Verificamos que o paracetamol reduziu, enquanto o diclofenaco de sódio aboliu a resposta febril induzida pela RANTES. Ainda, a injeção i.h. da RANTES promoveu significativa expressão do RNAm para COX-2 no hipotálamo, confirmando ser a COX-2 a enzima responsável pela síntese de prostaglandinas envolvidas no efeito pirogênico desta quimiocina. Através da administração de corante in situ e de cortes histológicos, pode-se averiguar o trajeto da cânula bem como a profundidade alcançada pela agulha durante a injeção na área pré-óptica hipotalâmica anterior (AH/POA). Padronizamos a dose do Met-RANTES (i.h.) que não seria capaz de alterar a temperatura retal dos animais. Posteriormente, avaliou-se o efeito de diferentes doses do Met-RANTES, administrado via intrahipotalâmica, na resposta febril induzida pelo LPS ou pela RANTES. Entretanto, nas doses administradas o pré-tratamento com o antagonista não foi capaz de reduzir a febre induzida por ambos os estímulos. Contudo, o Met-RANTES (i.v.) reduziu a febre induzida pelo TNF-alfa (i.h.), reproduzindo resultados anteriores. O pré-tratamento com Met-RANTES (i.v.) não modificou a febre induzida pela injeção central de interleucina (IL)-6, fator liberador de corticotropina (CRF) e bradicinina (BK). Adicionalmente, a injeção de LPS (i.v.) ou TNF-alfa (i.h.) elevou a concentração da RANTES no tecido hipotalâmico. Antalarmina (antagonista de receptores CRF1) e alfa-helical CRF9-41 (antagonista de receptores CRF1 e CRF2) que reduziram a febre induzida pelo CRF, não alteraram a febre induzida pela administração i.h. da RANTES. O antagonista de receptores B1 (DALBK) que reduziu a segunda fase da resposta febril induzida pela BK, não foi capaz de modificar a febre induzida pela RANTES. Da mesma forma, o antagonista de receptores B2 (Hoe-140) que reduziu a resposta febril induzida pela BK durante todo o período de experimentação, não modificou a febre promovida pela RANTES. Por outro lado, verificamos que o anticorpo anti-IL-6 administrado i.h. reduziu a febre induzida pela IL-6 e pela RANTES. Ainda, a injeção de LPS (i.v.) ou RANTES (i.h.) elevou a concentração de IL-6 no CSF, mas não de IL-1 e TNF-. A RANTES promoveu ativação do fator nuclear-kB (NF-kB) e aumentou a expressão do RNAm para as citocinas IL-1beta, TNF-alfa e IL-6 no hipotálamo dos animais. O pré-tratamento com Met-RANTES reduziu, na 2,5 e 6 h, a neutrofilia induzida pelo LPS. Em síntese, nossos resultados demonstram que durante a resposta febril induzida pelo LPS, este induz a síntese de TNF-alfa o qual promove a síntese da quimiocina RANTES que, ativando os receptores CCR1 e CCR5 promove a transmigração do NF-kB do citoplasma para o núcleo e a subseqüente síntese de IL-6 e de COX-2, esta última, a responsável pela síntese de prostaglandina E2 (PGE2), um dos mediadores finais da resposta febril induzida pelo LPS. Além disso, a RANTES parece ser um mediador da resposta de fase aguda, uma vez que, promove dois sinais importantes desta resposta, febre e neutrofilia. / We showed before that Met-RANTES, CCR1 and CCR5 receptor antagonist, intravenously injected (i.v.) reduced fever induced by lipopolysaccharide (LPS, E. coli), demonstrating the involvement of RANTES (Regulated on activation, normal T cells expressed and secreted) in this response. Also, intrahypothalamic (i.h.) injection of RANTES dose-dependently increased body temperature of rats, this increase was characterized as fever, because it was accompanied of a reduction in the tail skin temperature, a thermoregulatory response for heat retention. We also verified that RANTES increased the concentration of prostaglandin (PG)E2 in the cerebrospinal fluid (CSF), which was sensible to non-selective and selective blockers to cyclooxygenase (COX)-2 (Machado et al., 2007). In the present study, it was investigated which others mediators, including prostaglandins, are involved in the RANTES-induced fever. The effect of paracetamol and sodium diclofenac on fever induced by RANTES was also investigated. Paracetamol reduced, while sodium diclofenac abolished the RANTES-induced fever. The intrahypothalamic (i.h.) RANTES injection promoted a significant COX-2 mRNA expression in the hypothalamus, confirming the role of the COX-2 enzyme in the synthesis of prostaglandin involved in the pyrogenic effect of this chemokine. Through administration of dye in situ and histological analyses, we confirmed that the injection in the preoptic area of the anterior hypothalamus (AH/POA) was correct. Subsequently, we evaluated the effect of different doses of Met-RANTES (i.h.) in the fever induced by both LPS and RANTES. Centrally injected, Met-RANTES did not modify the fever induced by LPS or RANTES. On the other hand, Met-RANTES (i.v.) reduced TNF-alpha-induced fever, but did not modify the fever induced by interleukin (IL)-6, corticotrophin releasing factor (CRF) and bradykinin (BK). Additionally, the injection of LPS (i.v.) or TNF-alpha (i.h.) increased RANTES concentration in the hypothalamus. Antalarmin (a CRF receptor 1 antagonist) and alpha-helical CRF9-41 (CRF 1 and 2 receptor antagonist) that reduced CRF-induced fever did not modify the fever induced by RANTES (i.h.). DALBK (bradykinin B1 receptor antagonist) that reduced the second phase of BK-induced fever did not modify RANTES-induced fever. In the same way, Hoe-140 (bradykinin B2 receptor antagonist) that reduced the fever induced by BK during the whole period of observation, did not modify RANTES-induced fever. On the other hand, we verified that anti-rat IL-6 antibody (i.h.) reduced the fever induced by both IL-6 and RANTES. In addition, the administration of LPS (i.v.) or RANTES (i.h.) increased the CSF IL-6 concentration, but not of IL-1 and TNF-. RANTES promoted nuclear factor-kB (NF-kB) activation and increased IL-1beta, TNF-alpha and IL-6 mRNA expression in the hypothalamus. Pretreatment of the animals with Met-RANTES reduced the LPS-induced neutrophilia. In synthesis, our results suggest that in the fever induced by LPS, RANTES induces TNF- synthesis, which promotes the synthesis of RANTES that, activating CCR1/CCR5 receptors, promotes NF-kB transmigration of cytoplasm to the nucleus and subsequent synthesis of IL-6 and COX-2. The latter, in turn, is responsible by (PGE2) synthesis, one of the final mediators of the febrile response induced by LPS. Moreover, RANTES seem to be a mediator of the acute phase response since it promoted two important signs of this response, fever and neutrophilia.
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Efeitos do polifenol resveratrol na síntese de fatores vasoativos do endotélio em células endoteliais humanas da linhagem ECV304 / Polyphenol resveratrol effects on endtohelium vasoactive factor synthesis in human endothelial cells of ECV304 lineSalvador, Mirian Mendonça 28 August 2009 (has links)
A grande procura da humanidade por meios que favoreçam uma vida saudável tem impulsionado as pesquisas por novas substâncias capazes de satisfazer tais necessidades, e entre estas substâncias encontram-se os fitoestrógenos. Processos biológicos relacionados a Doenças Cardiovasculares (DCV) e outras doenças podem ser afetados por essas substâncias presentes em plantas. O fitoestrógeno resveratrol é um polifenol especialmente encontrado na uva e seus derivados, e sua ingestão tem sido associada à baixa taxa de mortalidade por câncer e DCV. Os fitoestrógenos das plantas possuem semelhança estrutural e funcional com o estrógeno, com propriedades que beneficiam o metabolismo celular através de ação antioxidante e antiagregante plaquetária. O endotélio é o principal alvo da ação dos estrógenos. Eles promovem a redução do engrossamento da parede vascular, aceleram o processo de reconstrução do endotélio após injúria vascular e favorecem a angiogênese. Os estrógenos diminuem a expressão de moléculas de adesão em resposta à citocinas e possuem efeito anti-apoptótico nas células endoteliais. Polifenóis são fitoestrógenos com alto potencial antioxidante presentes em frutas, grãos, vegetais, nozes e raízes. Estes compostos vêm sendo amplamente estudados por seus efeitos na supressão de tumores e na prevenção de DCV em modelos animais. Neste estudo, temos como objetivo geral avaliar a ação do resveratrol na produção de óxido nítrico e prostaglandina E2 em modelo in vitro de células endoteliais da linhagem ECV 304, bem como atividade antioxidante. O objetivo específico é determinar a melhor concentração do resveratrol em que se observa uma potente liberação de substâncias vasoativas e maior proteção contra radicais livres, conferindo proteção e prevenção de DCV. / The vast search of humanity for ways that favors a healthy life has driven the researches for substances capable of meeting such needs, and among these substances there are the phytoestrogens. Biological processes related to Cardiovascular Disease (CVD) and other illness can be affected by these substances present in plants. The phytoestrogen resveratrol is a polyphenol specially found in grapes and derivates, and its ingestion has been associated to low mortality rates by cancer and CVD. The plants phytoestrogens are similar structurally and functionally with estrogens, with properties that benefit cellular metabolism through their antioxidant and antiplatelet action. The endothelium is estrogen´s major target. They reduce thickening of the vascular wall, accelerate the reconstruction process of vascular endothelial after injury and promote angiogenesis. The estrogens decrease the expression of adhesion molecules in response to cytokines and have antiapoptotic effect on endothelial cells, and promotes raising in nitric oxide (NO) production. Polyphenols are phytoestrogens with high antioxidant effect present in fruits, grains, vegetables, nuts and roots. These compounds have been extensively studied due to their effect on tumors suppression and CVD prevention in animal models. In this study, we evaluated resveratrol´s action in nitric oxide production and prostaglandin E2 in in vitro model of endothelial cells ECV304, as well as it´s antioxidant activity. The specific objective is to determine the best concentration of resveratrol in which observes a potent liberation of vasoactive factors and the best anti free radical activity, leading to protection and prevention of CVD.
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