The energy metabolism of most tumor cells relies on aerobic glycolysis (Warburg effect) characterized by an increased glycolytic flux that is accompanied by the increased formation of the cytotoxic metabolite methylglyoxal (MGO). Consequently, the rate of detoxification of this reactive glycolytic byproduct needs to be increased in order to prevent deleterious effects to the cells. This is brought about by an increased expression of glyoxalase 1 (GLO1) that is the rate-limiting enzyme of the MGO-detoxifying glyoxalase system. Here, we overexpressed GLO1 in HEK 293 cells and silenced it in MCF-7 cells using shRNA. Tumor-related properties of wild type and transformed cells were compared and key glycolytic enzyme activities assessed. Furthermore, the cells were subjected to hypoxic conditions to analyze the impact on cell proliferation and enzyme activities. Our results demonstrate that knockdown of GLO1 in the cancer cells significantly reduced tumor-associated properties such as migration and proliferation, whereas no functional alterations where found by overexpression of GLO1 in HEK 293 cells. In contrast, hypoxia caused inhibition of cell growth of all cells except of those overexpressing GLO1. Altogether, we conclude that GLO1 on one hand is crucial to maintaining tumor characteristics of malignant cells, and, on the other hand, supports malignant transformation of cells in a hypoxic environment when overexpressed.

Les canaux TRPC6 sont des canaux cationiques non sélectifs qui peuvent être activés par le diacylglycérol (DAG). Ils sont présents dans de nombreux tissus et types cellulaires, notamment dans le cortex de souris embryonnaire (à E13). Des expériences d'imagerie calcique réalisées sur des neurones de cortex de souris en culture ont révélé la présence de canaux cationiques activés par le DAG. Ils sont perméables aux ions Ca2+, Na+, Ba2+ et Mn2+. L'entrée de Ca2+ via ces canaux est indépendante de la protéine kinase C et elle est bloquée par le SKF-96365 et le Gd3+. Par ailleurs, l'acide flufénamique augmente l'amplitude des réponses calciques induites par le DAG. Des expériences d'électrophysiologie réalisées avec la technique du patch-clamp en configuration cellule entière ont montré que l'hyperforine, un activateur des canaux TRPC6, donne naissance à un courant cationique non sélectif, confirmant ainsi l'existence de canaux de type TRPC6 dans les neurones corticaux. Des analyses quantitatives en spectrométrie d'émission atomique à plasma couplé inductif, en spectrométrie d'absorption atomique et en fluorescence X avec la nanosonde synchrotron (µ-SXRF) révèlent que la surexpression de TRPC6 dans les cellules HEK-293 s'accompagne d'une augmentation du contenu intracellulaire en zinc, en soufre et en manganèse. Les résultats obtenus avec des sondes fluorescentes sensibles au zinc et au fer indiquent que les canaux TRPC6 peuvent transporter ces cations. Par ailleurs, les expériences en µ-SXRF montrent que l'activation des canaux TRPC6 en présence de fer induit une accumulation de ce métal dans les cellules HEK et les neurones. Au cours de notre étude, nous avons également mis en évidence l'action de deux agents (l'acide flufénamique et l'hyperforine), couramment utilisés pour modifier l'activité des canaux TRPC6, sur la physiologie mitochondriale et l'homéostasie des métaux. En effet, l'acide flufénamique et l'hyperforine non seulement modifient le fonctionnement des canaux TRPC6 mais ils exercent aussi une action de type découplante sur les mitochondries, provoquant une libération de Ca2+ et de Zn2+ à partir de ces organelles.

The energy metabolism of most tumor cells relies on aerobic glycolysis (Warburg effect) characterized by an increased glycolytic flux that is accompanied by the increased formation of the cytotoxic metabolite methylglyoxal (MGO). Consequently, the rate of detoxification of this reactive glycolytic byproduct needs to be increased in order to prevent deleterious effects to the cells. This is brought about by an increased expression of glyoxalase 1 (GLO1) that is the rate-limiting enzyme of the MGO-detoxifying glyoxalase system. Here, we overexpressed GLO1 in HEK 293 cells and silenced it in MCF-7 cells using shRNA. Tumor-related properties of wild type and transformed cells were compared and key glycolytic enzyme activities assessed. Furthermore, the cells were subjected to hypoxic conditions to analyze the impact on cell proliferation and enzyme activities. Our results demonstrate that knockdown of GLO1 in the cancer cells significantly reduced tumor-associated properties such as migration and proliferation, whereas no functional alterations where found by overexpression of GLO1 in HEK 293 cells. In contrast, hypoxia caused inhibition of cell growth of all cells except of those overexpressing GLO1. Altogether, we conclude that GLO1 on one hand is crucial to maintaining tumor characteristics of malignant cells, and, on the other hand, supports malignant transformation of cells in a hypoxic environment when overexpressed.