Made available in DSpace on 2016-08-29T15:38:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_5991_Talita Araujo_Análise da diversidade e efeito de borda na assembléia de borboletas frugívoras da Reserva Biológica de Sooretama.pdf: 1332489 bytes, checksum: 6c52f3990c1cb11d8d427fc2ffef0c8d (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Considerada um dos 34 hot spots de biodiversidade do planeta, a Mata Atlântica encontra-se em grande parte ameaçada principalmente devido os processos de fragmentação florestal. Sendo os efeitos de borda uma das conseqüências da fragmentação que mais afetam o remanescente florestal e sua biota. Dentro desse contexto o presente estudo teve como objetivo inventariar as espécies de borboletas frugívoras que ocorrem na Reserva Biológica de Sooretama ES, e verificar como as espécies se distribuem em termos de riqueza, abundancia, diversidade e similaridade ao longo de um gradiente ambiental formado a partir da borda em direção o interior do fragmento, testando a hipótese de que os efeitos de borda tem influencia nessa distribuição. As amostragens foram realizadas na Reserva Biológica de Sooretama, que fica entre os municípios de Linhares, Sooretama e Jaguaré, região norte do estado do Espírito Santo, nos meses de abril, jullho e agosto de 2011. Foram utilizadas armadilhas modelo Van Someren-Rydon, contendo uma mistura de caldo de cana com banana, fermentados 48 horas antes de serem utilizados como isca. Em cada período de amostragem as armadilhas permaneceram abertas por quatro dias consecutivos, e os exemplares capturados foram coletados e acondicionados adequadamente para posterior montagem e identificação. Foram coletados 199 exemplares distribuídos em 32 espécies pertencentes a seis subfamílias de Nymphalidae. A curva de acumulação de espécies não estabilizou e o estimador de riqueza Bootstrap demonstrou que a fauna de borboletas frugívoras não foi totalmente amostrada. Verificou-se através de uma Análise de Aderência por meio do Teste G, que a abundancia e a riqueza ao longo do gradiente estabelecido não era uniforme entre os pontos de amostragem, sendo demonstrado através dos índices de similaridade maior semelhança entre os pontos de amostragem mais próximos entre si. Através da Análise de Correspondência Detrended (DCA), ficou demonstrado dois agrupamentos distintos entre os pontos de amostragem, sendo esses agrupamentos denominados BORDA e INTERIOR, evidenciando uma composição de espécies mais semelhante dentro de cada agrupamento. O que pode indicar que os efeitos de borda afetam a distribuição das espécies dentro da assembléia de borboletas frugívoras, tendo sido verificado pelo presente estudo, maior riqueza, abundância e diversidade de espécies a partir de 1000m até 2500 m.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_8157_Jardel Leno.pdf: 2092708 bytes, checksum: 22f89331f4c95b938fe5b90b2b285a72 (MD5) Previous issue date: 2014-09-11 / Na última década, várias rotas de reutilização de resíduos de embalagens cartonadas têm sido propostas na literatura. Dentre os processos de recuperação, a pirólise de resíduos cartonados vem se destacando devido à possibilidade de obtenção de produtos com elevado valor agregado, como os óleos parafínicos e barras de alumínio. Recentemente, o leito de jorro tem sido investigado como um reator promissor para a pirólise de sólidos, devido sua alta eficiência energética. Entretanto para que a pirólise ocorra de forma adequada é imprescindível a realização de um procedimento totalmente investigativo da dinâmica do escoamento de ar em meio aos resíduos no leito de jorro cônico. Assim, este estudo tem como objetivo analisar o comportamento fluidodinâmico do compósito PEBD/AL (em forma de pellet, ds = 2,58 mm) e as misturas de compósito PEBD/AL e areia (ds = 2,58 mm), em um leito de jorro cônico. Os dados experimentais de queda de pressão são medidos por um transdutor de pressão diferencial. Estes são endereçados a uma interface A/D, da National Instruments. A comunicação USB permite que os dados sejam processados em um computador pelo programa de aquisição de dados desenvolvido em linguagem de programação gráfica utilizando o Labview 10.0. Os dados de velocidade do ar são obtidos pelo inversor de frequência que acompanha a unidade experimental. O modelo Euleriano é utilizado nas simulações para descrever o fluxo de ar-sólido em leito de jorro cônico. As equações do modelo são abordadas utilizando a técnica de dinâmica dos fluidos computacional com o método de volumes finitos, utilizando uma malha estruturada bidimensional para discretização do domínio. Os resultados obtidos com a inserção da turbulência (k- ɛ, disperso) ao modelo subestimam os valores experimentais, onde os dados de velocidade de mínimo jorro (Vmj), queda de pressão de mínimo jorro (ΔPmj) e queda de pressão máxima no leito (ΔPmax) apresentaram desvio percentual máximo igual a -13,5; -9,5 e -23% respectivamente. Qualitativamente, os perfis de porosidade são fisicamente consistentes e estão de acordo com os relatados na literatura. Palavras-chave: Pirólise. Energia. Fluidodinâmica computacional. Embalagens cartonadas. Resíduos sólidos.

Orientador : Prof. Dr. Ricardo Antônio Tanhofer / Coorientador : Prof. Dr. Luiz Cláudio Fernandes / Dissetação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa: Curitiba, 01/07/2016 / Inclui referências : f. 73-82;86-87 / Área de concentração / Resumo: A lesao medular (LM) mais comum e a traumatica, este tipo de patologia danifica a medula e pode alterar a fisiologia de todo o organismo. As respostas do organismo na tentativa de reparo acabam aumentando ainda mais os danos causados por esta lesao. Os mecanismos de tratamento da LM ainda sao limitados, e a qualidade de vida juntamente com a expectativa de vida sao drasticamente alteradas. O conhecimento sobre intervencoes que sejam capazes de atuar metabolicamente na tentativa de reduzir os efeitos pos-lesao pode desempenhar papel crucial ao individuo, entretanto, nao existe tratamento efetivo para minimizar os efeitos dessa lesao. Por outro lado, acidos graxos poli-insaturados (AGPI) tem demonstrado efeitos promissores em casos de LM. Ratos da linhagem Wistarforam submetidos a lesao medular induzida por trauma. Os animais eram divididos em 9 grupos: Falso operado (SHAM), lesao medular sem tratamento (LM), lesao medular tratado com omegaven, e cada grupo subdividido nos tempos (48h, 72h e 14d). Nos animais tratados eram administradas 3 doses de omegaven, sendo a primeira dosetres horas apos o dano medular. Os animais controle (SHAM) tiveram a vertebra retirada, e os animais lesao medular nao tiveram tratamento algum. Foram analisados o perfil metabolico do figado e as caracteristicas correspondente a massa umida de alguns tecidos. A administracao destas doses na fase aguda da LM foi capaz de modificar o metabolismo lipidico de acidos graxos no figado. Palavras-chave: Lesao medular; omega-3; metabolismo. / Abstract: Spinal cord injury (SCI) is the most common traumatic, this type of pathology damage the cord and can change the physiology of the organism. The responses of the body in an attempt to repair turn further increasing the damage caused by this lesion. The LM handling mechanisms are still limited, and the quality of life along with the life expectancy is drastically changed. Knowledge of interventions are capable of metabolically act in an attempt to reduce post-injury effects may play a crucial role in the individual, however, there is no effective treatment to minimize the effects of injury. Furthermore, polyunsaturated fatty acids (PUFAs) have shown promising effects in cases of SCI. Wistar rats were subjected to spinal cord injury-induced trauma. The animals were divided into 9 groups: False operated (SHAM), spinal cord injury without treatment (LM), spinal cord injury treated with Omegaven, and each group subdivided in time (48h, 72h and 14d). Treated animals were administered 3 doses of Omegaven, the first dose being three hours after the spinal cord injury. Control animals (SHAM) were withdrawn the vertebra, and spinal cord injury the animals have not had any treatment. We analyzed the metabolic liver profile and corresponding features a wet mass of some tissues. The administration of these doses in acute SCI is capable of modifying the lipid metabolism of fatty acids in the liver. Keywords: Spinal cord injury; Omega 3; metabolism.

Orientadora: Profª. Drª. Antônio Carlos L. Campos / Coorientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto Matias / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 19/12/2016 / Inclui referências: f. 75-82 / Resumo: Introdução: A cicatrização é um processo complexo que resulta na formação de novo tecido para o reparo de uma solução de continuidade. A desnutrição e as deficiências nutricionais específicas podem ter grande impacto no resultado final de feridas cirúrgicas ou traumáticas. Estudos mostram que o uso do ácido graxo poliinsaturado ômega-3 pode criar um microambiente mais favorável à cicatrização de feridas. Em outros, devido à sua capacidade de competir pela produção de eicosanoides menos pró-inflamatórios, foi relatado prejuízo à cicatrização. Portanto a influência do ômega-3 sobre a cicatrização cutânea permanece indefinida. Objetivo: Avaliar o processo de cicatrização da ferida excisional e incisional da pele de ratos sob o efeito do uso da suplementação nutricional com ácido graxo ômega-3. Método: Sessenta ratos fêmeas foram divididos aleatoriamente em 4 grupos de 15 (Epre, Eper, Cpre, Cper) conforme o lipídeo de suplementação (E - óleo de peixe e C - óleo de soja) e o momento de suplementação (pre - somente nos 7 dias antecedentes ao procedimento, per - 7 dias antes e 7 dias após o procedimento). A suplementação do óleo (peixe ou soja) foi administrada através de gavagem diariamente, além da dieta ad libitum. Sob anestesia geral, após 7 dias de suplementação nutricional inicial, as ratas foram submetidas a procedimento cirúrgico com confecção de ferida em dorso (2x2cm) que foi deixada cicatrizar por segunda intenção, e ferimento incisional (5cm) no ventre, fechado por meio de sutura. Fotografou-se de forma padronizada a ferida no pós-operatório imediato, assim como no 1º,3º, 5º e 7º dias para cálculo de área e taxa de contração da ferida. Após a eutanásia no 7º dia, a ferida do dorso foi enviada para estudo imunoistoquímico (miofibroblasto e neovasos) e de colágeno. A ferida do ventre foi submetida a teste tensiométrico utilizando máquina universal de ensaio mecânico Emic®. Os resultados foram analisados estatisticamente, com nível de significância de 5%. Resultados: O peso dos animais não mostrou diferença significativa entre os grupos. Na análise da contração nos primeiros dias após o procedimento, o grupo Cpre apresentouse com maiores taxas de contração da ferida (p= 0,017 para diferença 1PO- 3PO e p=0,004 para diferença 3PO-5PO). O grupo Epre mostrou as maiores taxas de contração na avaliação entre o período de pós-operatório imediato e o 7º dia (p= 0,002). O estudo tensiométrico (força máxima e de ruptura) não mostrou diferença entre os grupos, assim como as análises de miofibroblasto e neoangiogênese. Houve associação entre maior força tênsil com maior número de miofibroblastos para o grupo Epre (p=0,011) e maior força com maior número de CD34 para o grupo Cpré (p=0,03). Para o colágeno, não houve diferença entre os momentos "pré" e "per", somente entre os grupos experimento e controle, com o primeiro apresentando maior quantidade de colágeno tipo III (imaturo - p<0,001). Conclusão: A utilização da suplementação enteral com ômega-3 em ratos sem desnutrição não altera o peso, força tênsil da cicatriz, quantidade de miofibroblastos e neoangiogênese. Promove maior taxa de contração da ferida e atraso na deposição de colágeno maduro, em relação à suplementação com óleo de soja. Palavras-chave: Cicatrização. Ácidos Graxos Ômega-3 Estado Nutricional. Rato. Colágeno. Miofibroblastos. Resistência à Tração. / Abstract: Background: Healing is a complex process that results in new tissue formation for repair of a continuity solution. Malnutrition and specific nutritional deficiencies can have a major impact on the final outcome of surgical or traumatic wounds. Some studies show that the use of omega-3 polyunsaturated fatty acid can create a microenvironment that is more conducive to wound healing. In others, due to its ability to compete for the production of less proinflammatory eicosanoids, damage to healing has been reported. Therefore, the influence of omega-3 on cutaneous healing remains undefined. Aim: To evaluate the healing process of excisional and incisional wounds of the skin of rats under the effect of nutritional supplementation with omega-3 fatty acid. Method: Sixty female rats were randomly divided into four groups of 15 (Epre, Eper, Cpre, Cper) according to the supplementation lipid (E - fish oil and C - soybean oil) and the moment of supplementation (pre - 7 days prior to the procedure, per - 7 days before and 7 days after the procedure). Oil supplementation (fish or soybean) was administered through orogastric gavage daily, in addition to the ad libitum diet. Under general anesthesia, after 7 days of initial nutritional supplementation, the rats were submitted to a surgical procedure with a wound on the back (2x2cm) that was allowed to heal by second intention, and incisional wound (5cm) in the abdomen, closed by suture. The wound was photographed in a standardized way in the immediate postoperative period, as well as in the 1st, 3rd, 5th and 7th days to calculate the area and rate of wound contraction. After euthanasia on the 7th day, the back wound was sent to immunohistochemical study (myofibroblasts and neoangiogenesis) and collagen study. The abdomen wound was submitted to a tensile test using the Emic® universal mechanical test machine. The results were statistically analyzed, with a significance level of 5%. Results: The weight of the animals did not show any significant difference between the groups. In the analysis of the contraction in the first days after the procedure, the Cpre group presented with higher rates of wound contraction (p = 0.017 for 1PO-3PO difference and p = 0.004 for 3PO-5PO difference). The Epre group showed the highest rates of contraction in the evaluation between the immediate postoperative period and the 7th day (p = 0.002). The tensiometric study (maximum and rupture force) showed no difference between groups, as well as the myofibroblast and neoangiogenesis analyzes. There was an association between greater tensile strength with greater number of myofibroblasts for the Epre group (p = 0.011) and higher strength with greater number of CD34 for the Cpre group (p = 0.03). For the collagen, there was no difference between the "pre" and "per" moments, only between the experimental and control groups, with the first showing higher levels of collagen type III (immature - p <0.001). Conclusion: The use of enteral supplementation with omega-3 in rats without malnutrition does not alter the weight, tensile strength of the scar, myofibroblasts and neoangiogenesis. It promotes a higher rate of wound contraction and a delay in the deposition of mature collagen in relation to soybean oil supplementation. Key-Words: Wound-Healing. Fatty Acids Omega-3. Nutritional Status. Rats. Collagen. Myofibroblasts.Tensile Strength.

Ce travail de thèse sur les milieux poreux est axé sur deux parties. La première concerne l'étude numérique de l'écoulement d'un fluide Newtonien ou non-Newtonien au sein d'un système fluide/poreux. L'approche à un seul domaine qui consiste à écrire l'équation de Navier-Stokes incluant le terme de Darcy-Brinkman-Forchheimer est adoptée dans cette étude. La relation entre le gradient de pression et la vitesse débitante linéaire dans le cas de Darcy où le fluide est Newtonien, est obtenue. Cette relation est étendue dans le cas non-Darcy où le fluide est non Newtonien. L'influence des nombres de Darcy et de Forchheimer sur la structure de l'écoulement est montrée. Dans la seconde partie, une étude de stabilité linéaire et numérique de la convection naturelle de fluides viscoélastiques saturant une couche poreuse horizontale chauffée par un flux constant est réalisée. Une étude d'instabilité primaire et secondaire nous a permis de montrer que pour un fluide Newtonien, la convection monocellulaire perd sa stabilité au profit des rouleaux longitudinaux. Dans le cas des fluides viscoélastiques, on trouve que l'élasticité du fluide induit la sélection des rouleaux transversaux propagatifs. Une solution numérique basée sur un schéma aux différences finies est venue conforter ces résultats analytiques. / The present thesis on porous media concentrates in two parts. The first concerns the numerical study of the flow of a Newtonian or a non-Newtonian fluid within a fluid/porous system. The approach of a single domain, which consists of/in writing the Navier-Stokes equation including the Darcy-Brinkham-Forchheimer term, is chosen in this study. The linear relation between the pressure gradient and the bulk velocity in the Darcy case, for which the fluid is Newtonian, is obtained. This relation is extended to the non-Darcy case, for which the fluid is non-Newtonian. The influence of Darcy and Forchheimer numbers on the structure of the flow is presented. In the second part, linear stability and numerical analysis of the natural convection of viscoelastic fluids saturating a horizontal porous layer heated by a constant flux is performed. A primary and secondary instability study allowed to show that, for a Newtonian fluid, the unicellular convection loses its stability to the benefit of longitudinal rolls. In the case of viscoelastic fluids, the elasticity of the fluid leads to the selection of propagation transverse rolls. A numerical solution based on a finite difference scheme has reinforced these analytical results.

Resumo não disponível.

A enzima indol-3-glicerol fosfato sintase (IGPS) catalisa a formação irreversível do anel do composto 1-o-carboxifenilamino desoxiribulose-5-fosfato (CdRP), através de uma decarboxilação e de uma desidratação, liberando o composto indol-3-glicerol fosfato (IGP), o quinto passo na via de biossíntese do triptofano. Neste trabalho, é descrita a clonagem, expressão, purificação e caracterização cinética da IGPS, além da identificação de um intermediário reacional. Para a realização destes estudos, o substrato da enzima (CdRP) foi sintetizado quimicamente, purificado e caracterizado espectroscopicamente e espectrometricamente. A fluorescência do CdRP mostrou-se dependente de pH, possivelmente devido ao efeito de transferência intramolecular de prótons no estado excitado (ESIPT). Efeitos de temperatura foram analisados, indicando uma energia de ativação de 8.4 kcal mol-1 para a reação catalisada pela IGPS. Efeitos isotópicos de solvente mostraram que a transferência de próton é apenas modestamente limitante para a reação, e estudos de inventário de prótons demonstraram que apenas um próton é responsável pelo efeito isotópico de solvente observado. Perfis de pH foram realizados para avaliar a presença de catálise ácido-base, mostrando que um resíduo desprotonado de pKa aparente igual a 6.0 é necessário para a catálise e que um resíduo com pKa aparente igual a 6.8 é necessário para a ligação do CdRP. Sugerimos que ambos os pKa estejam reportando para um mesmo resíduo, que poderia ser um glutamato conservado em todas as IGPS caracterizadas até o presente. Um modelo é proposto para explicar o ESIPT, assim como uma seqüência cinética baseada nos perfis de pH. Para identificar possíveis intermediários reacionais, a técnica de ESI-MS foi empregada para estudar a reação catalisada pela IGPS, e um intermediário químico foi interceptado e caracterizado. / The enzyme indole-3-glycerol phosphate synthase (IGPS) catalyzes the irreversible ring closure of 1-o-carboxyphenylamino deoxyribulose-5-phosphate (CdRP), through a decarboxylation and a dehydration, releasing indole-3-glycerol phosphate (IGP), the fifth step in the biosynthesis of tryptophan. In the present work, we describe cloning, expression, purification, and kinetic characterization of IGPS. In order to perform kinetic studies, CdRP was chemically synthesized, purified, and espectroscopically and spectrometrically characterized. CdRP fluorescence was pH-dependent, probably owing to excited-state intramolecular proton transfer (ESIPT) effect. Temperature effects were analyzed, indicating an activation energy of 8.4 kcal mol-1 for the IGPS catalyzed reaction. Solvent isotope effects showed that a proton transfer is only modestly limiting for the reaction, and proton inventory studies pointed to a single proton responsible for the observed solvent isotope effect. pH-rate profiles were carried out to probe for acid/base catalysis, showing that a deprotonated residue with an apparent pKa of 6.0 is required for catalysis and a deprotonated residue with an apparent pKa of 6.8 is necessary for CdRP binding. It was suggested that both apparent pKa report on the same residue, which might be a glutamate conserved amongst all IGPS characterized so far. A model is proposed to explain the ESIPT, and a kinetic sequence is suggested based on the pH-rate profiles. ESIMS was employed to identify possible chemical intermediates of the IGPS catalyzed reaction, and one chemical intermediate was intercepted and characterized.

A proteína gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) é uma enzima essencial na via da glicólise e da gliconeogênese, catalisando a fosforilação oxidativa do substrato gliceraldeído-3-fosfato em 1,3- bifosfoglicerato na presença de NAD+ e fosfato inorgânico, sendo também capaz de catalisar a reação inversa. A enzima é um homotetrâmero, tendo monômeros com massa de 36 kDa. Além desta atividade, a proteína pode ainda desempenhar outras funções importantes em vários processos celulares. A partir da descrição da expressão diferencial do gene gpdh1 (GAPDH) do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae em condições que mimetizam a infecção, desenvolvemos este estudo para caracterizar a sua possível participação em outros processos celulares. Diversas análises foram realizadas para caracterizar o gene gpdh1 e sua proteína cognata. Os padrões de expressão, tanto em nível transcricional como em nível protéico foram avaliados sob condições de regulação fisiológica, evidenciando um padrão de regulação hierárquico em resposta às diferentes fontes de carbono adicionadas a culturas do fungo. Utilizando 2D-SDS-PAGE, anti-soro anti GAPDH e espectrometria de massas, identificamos isoformas de GAPDH sendo expressas pelo fungo, sendo uma majoritária. Com base nos relatos encontrados na literatura de localização da proteína GAPDH na superfície celular de diferentes patógenos, direcionamos o trabalho no sentido de verificar a localização sub-celular da GAPDH em Metarhizium. Utilizando técnicas de imuno-microscopia, mostramos a localização na superfície celular dos diferentes estágios de desenvolvimento do fungo. Mostramos também que a GAPDH localizada na superfície celular mantém a sua atividade enzimática. Utilizando ensaios de adesão de conídios de M. anisopliae em asas de insetos (Dysdercus peruvianus), mostramos que a GAPDH pode desempenhar uma função importante no processo de adesão do fungo na superfície do hospedeiro. Este trabalho descreve pela primeira vez a presença de isoformas de GAPDH, a sua localização na superfície celular e sua possível participação na adesão ao hospedeiro. / GAPDH is essential in glycolysis and gluconeogenesis pathways and catalyzes the oxidative phosphorylation of glyceraldehyde-3-phosphate into 1,3- biphosphoglycerate in the presence of nicotinamide adenine nucleotide (NAD+) and inorganic phosphate, as well as the reverse reaction. The enzyme is an homotetramer of 36 kDa subunits. GAPDH has other important roles in various cellular processes. The gene gpdh1 (GAPDH) was found to display differential expression during growth of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae cultured in conditions mimicking host infection. This led us to search for other possible functions of the GAPDH in the fungus. Therefore, we characterized the expression patterns of GAPDH, both at the transcription and protein level; we characterized isoforms of the protein; we immunolocalized GAPDH in different cell types and assayed its participation in adhesion to host surface. The expression of transcripts and GAPDH is hierarchily regulated by the carbon source available in the cultures (glucose, glycerol, ethanol and complex substrates, such as chitin and cuticle). By using 2D-SDS-PAGE, anti- GAPDH serum and mass spectrometry, isoforms of the protein were detected. As GAPDH has been reported at cell surface of pathogenic microorganisms, we directed efforts to localize GAPDH in Metarhizium. By using immunomicroscopy we showed the presence of GAPDH at the surface of the different developmental cell types of the fungus. We have also shown that the GAPDH at cell surface has enzyme activity. In adhesion assays, using Metarhizium conidia and insect wings (Dysdercus peruvianus), we showed that the GAPDH may be important during the adhesion step of the fungus to the host during infection. In this work, for the first time, we show that GAPDH from Metarhizium anisopliae has isoforms; that the active GAPDH is present at the fungal cell surface and is probably important for fungal to host adhesion.

Kynurenine 3-monooxygenase (KMO) is a flavoprotein which has been implicated in Huntington’s disease, Alzheimer’s disease and acute pancreatitis. Recently there has been important research published about this enzyme including the structure of a truncated Saccharomyces cerevisiae KMO enzyme and KMO inhibition studies in animal models of disease. In previous work from this research group the complete Pseudomonas fluorescens KMO enzyme has been successfully crystallised both with and without the substrate, L-kynurenine, from which significant insights were gained into function and the potential role of domain movement. To examine substrate binding in KMO and to consolidate previous structural studies, key residues in the active site have been investigated using site directed mutagenesis, crystallography and kinetic analysis using steady-state techniques. This analysis has identified the interactions between the enzyme and the substrate and provides a basis for inhibitor design. The residues implicated in substrate binding are N369, Y404 and R84. For N369 and Y404, minor changes to the amino acid in the mutations N369S and Y404F were shown to cause a decrease in binding affinity of the substrate but the enzyme remained active. For the mutations Y404A and R84K enzyme activity was significantly affected. Crystal structures of N369S, Y404F and R84K were also obtained. Another residue in the active site studied was H320 which is the only amino acid to differ in the active sites of the human and Pseudomonas fluorescens enzymes. This residue was therefore of interest to determine whether the bacterial enzyme used in this work is likely to be a good model for the human enzyme, which has not yet been successfully isolated in significant quantities for in vitro research. Modifying this residue to obtain H320F KMO revealed that this residue does not have a significant role in substrate binding. Potent inhibitor molecules have been studied with this enzyme and shown in kinetic assays to have nanomolar Ki values. These inhibitors are the most potent inhibitors studied with Pseudomonas fluorescens to date and continue previous inhibitor studies carried out with this enzyme. This group of inhibitors contain different substituents in the part of the molecule shown to bind closest to the C-terminal domain of the protein. These novel inhibitors do not allow the flavin to be reduced by NADPH (which results in unwanted peroxide production) unlike a number of previously studied molecules and therefore have the potential to be clinically useful. This research therefore answers many questions about this enzyme, in particular about the role of particular residues in the active site, substrate recognition and inhibition of this important drug target.

Syftet med studien är att undersöka lekens utsträckning i undervisningen från förskoleklass till åk 1–2. Studien är kvalitativ. Metoden som används är intervjuer med sex lärare, detta för att undersöka en enskild grupp lärares subjektiva tankar och åsikter. För att undersöka studiens syfte har tre frågeställningar formulerats. Den första frågeställningen i vilken utsträckning leken används som ett pedagogiskt redskap i undervisningen. Resultatet presenteras i två grafer, där det sammanlagda resultatet visar en kraftig minskning av lekens utsträckning i undervisningen efter förskoleklass. Den andra frågeställningen som har formulerats är när leken används i undervisningen, detta för att undersöka lekens generella användningsområde för den enskilda läraren. Studien visar att det främst är rolleken som dominerar i ämnena bl.a. i svenska och engelska. Inom matematiken används främst spel som färdighetsträning. Den tredje frågeställningen som formulerats är vilket syfte lärarna har med att använda sig av lek i undervisningen.  Studiens resultat visar att lärarnas syfte med lek är att utmana och avdramatisera elevernas kunskapskrav samt att ge eleverna en varierad undervisning.   Studien redovisar utifrån litteraturstudier lekens betydelse och hur leken sammanfaller med lärande och utveckling, vilket koppas till min empiriska undersökning. I studien har lekens betydelse presenterats ur en kognitiv psykologisk teori samt ur ett sociokulturellt perspektiv, med utgångspunkt från Jean Piaget och Lev Vygotskij. Studien har även belyst lekens omfattning i förskolans- och grundskolans läroplan. Jämförelserna mellan förskolan och grundskolans läroplan visar att leken tar betydligt mindre plats efter det att eleverna lämnar förskoleklass.