La emergencia y diseminación de resistencias a antimicrobianos supone un problema para la salud pública y la sanidad animal puesto que pone en serio peligro la eficacia del principal tratamiento contra las infecciones bacterianas. Por este motivo son especialmente interesantes los estudios centrados no sólo en la identificación de los determinantes de resistencia, sino también de los mecanismos que intervienen en su dispersión. En este contexto, la presente Tesis Doctoral profundiza en la incidencia y caracterización molecular de elementos genéticos implicados en la captura, diseminación y mantenimiento de genes de resistencia a antimicrobianos por cepas de serotipos no tifoideos de Salmonella enterica, un patógeno bacteriano que, por su carácter zoonótico, podría estar ocupando un lugar relevante como donador y receptor de genes de resistencia. Los puntos desarrollados en este trabajo fueron fundamentalmente tres:1.- Se demostró el importante papel que juegan los integrones de clases 1 y 2, constatando su presencia en un gran número de cepas multirresistentes (mayoritariamente clínicas), aisladas en el Principado de Asturias y el resto de España. Dos hechos destacables fueron: a) la nueva descripción de los integrones de clase 1 con las regiones variables: 2300 pb/estX-smr-aadA1 y 2100 pb/dfrA1-597pb-aadA24; y b) la primera identificación de integrones de clase 2 en los serotipos S. Virchow, S. Grumpensis, S. Panama y S. Worthington. Se confirmó la asociación de estas unidades genéticas con elementos transponibles, observando diferentes configuraciones integrón de clase 1-transposón tipo Tn21 o integrón de clase 2-transposón tipo Tn7. Además, en la mayoría de los casos estas estructuras se encontraban localizadas en plásmidos conjugativos de gran tamaño, a veces portadores de resistencias adicionales no asociadas a integrones.2.- Dada la creciente emergencia de las resistencias a cefalosporinas de tercera y cuarta generación, se rastrearon β-lactamasas de espectro extendido (BLEEs) y enzimas plasmídicas tipo AmpC en cepas alemanas procedentes de alimentos y animales. Subrayar que la familia de cefotaximasas CTX-M-1 era la más frecuente, y se encontraba asociada a secuencias de inserción tipo ISEcp1. Tanto los genes de BLEEs como de enzimas AmpC, se localizaban en plásmidos de tamaño variable, la mayoría conjugativos.3.- Otro hecho alarmante, dentro del panorama de la multirresistencia, es la aparición de plásmidos híbridos de virulencia-resistencia. En esta Tesis Doctoral se identificó y caracterizó parcialmente un plásmido, denominado pUO-SeVR1, que se encontró en un aislamiento de S. Enteritidis, el serotipo con mayor incidencia en infecciones humanas. Los resultados obtenidos sugieren que deriva de pSEV (el plásmido de virulencia específico de S. Enteritidis) por haber adquirido genes de resistencia asociados a un integrón y a diversos elementos transponibles. A la vez se desvelan algunos de los mecanismos que controlan la transmisión estable del plásmido dentro de la población bacteriana. Esta Tesis Doctoral ilustra el concepto de "ingeniería evolutiva" que, aplicado en este contexto, refleja la importancia que las secuencias "acompañantes" de un gen y sus propiedades combinatorias tienen en la adaptabilidad bacteriana. / The emergence and dissemination of antimicrobial resistance is a worrisome problem for human and veterinary medicines, threatening the effectiveness of the main treatment against the bacterial infections. For this reason, studies focused not only on the identification of the resistance determinants but also on the mechanisms involved in their spread, are especially interesting. In this context, this Doctoral Thesis analyzed the incidence and molecular characterization of mobile genetic elements related to the capture, maintenance and dissemination of antimicrobial resistance genes. For this purpose, multidrug resistant strains belonging to different non-typhoidal serovars of Salmonella enterica were studied. This bacterial pathogen, because of its zoonotic quality, might perform a relevant function as donor and recipient of resistance genes. The main objectives developed in this work were the following:1.- The important role played by class 1 and class 2 integrons was demonstrated by ascertaining their presence in many multidrug resistant strains (mostly from clinical origin), isolated in the Principality of Asturias and the rest of Spain. Two remarkable facts were: a) the new description of class 1 integrons with the variable regions: 2300 bp/estX-smr-aadA1 and 2100 bp/dfrA1-597bpaadA24; and b) the first identification of class 2 integrons in serovars S. Virchow, S. Grumpensis, S. Panama and S. Worthington. The linkage between these genetic units and transposable elements was also established, finding different class 1 integron-Tn21-like transposon or class 2 integron-Tn7-like transposon configurations. Moreover, in most cases these structures were located on large conjugative plasmids, some of them carrying additional non integron-associated resistances.2.- Due to the increasing emergence of the resistance to the third- and fourth-generation cephalosporins, the presence of extended spectrum β-lactamases (ESBLs) and plasmidic AmpC enzymes was analyzed in German isolates of animal and food origin. The CTX-M-1 family was the prevalent, and was associated with insertion sequences ISEcp1-like. The ESBL and AmpC encoding genes were in all cases located on plasmids of variable sizes, mainly self-transferable.3.- Another alarming trend in the multidrug resistance background, is the emergence of virulence-resistance hybrid plasmids. In this Doctoral Thesis, the identification and partial characterization of the plasmid pUO-SeVR1 (found in a S. Enteritidis isolate) was carried out. The results obtained suggest that it derived from pSEV (the virulence plasmid specific of S. Enteritidis), through acquisition of resistance genes associated with a class 1 integron and diverse transposable elements. Some mechanisms involved in the stable inheritance of the plasmid were also identified.This Doctoral Thesis illustrates the concept of "evolutionary engineering" which, used in this context, shows the significance that "adjacent" sequences to a particular gene and their combinatorial properties have in the bacterial adaptability.

Objetivos: (i) caracterizar los mutantes delecionados en las rutas de consumo/producción de acetato y determinar las consecuencias de su deleción a distintos niveles celulares, (ii) estudiar la regulación in vivo del metabolismo de acetato por acetilación de proteínas en E. coli , (iii) describir el contexto genómico de los genes de las enzimas responsables de la acetilación de proteínas en E. coli (cobB y patZ) y estudiar su regulación transcripcional, (iv) discernir el papel de la acetilación de proteínas en las diferencias metabólicas observadas entre las cepas de E. coli K12 y BL21, (v) identificar los patrones de acetilación de proteínas en distintas condiciones y fondos genéticos en E. coli y (vi) caracterizar la funcionalidad de la acetilación de proteínas en el metabolismo del acetato y la regulación transcripcional. Metodología: durante esta Tesis se utilizaron la cepa de Escherichia coli BW25113 y sus mutantes delecionados en algunos genes de interés. Además se utilizaron técnicas para determinar expresión génica (RT-PCR, DNA-microarrays y vectores sonda de promotor), actividades enzimática en extractos crudos y enzimas purificadas, western blot, cuantificación de metabolitos por HPLC y espectrometría de masas de alta resolución para proteómica. Resultados. La deleción de la mayor vía de producción de acetato alteró el metabolismo central a distintos niveles, desde la transcripción a los niveles energéticos celulares, mostrando la conexión de este metabolismo y el central, y también mostrando la importancia de un funcionamiento equilibrado de este metabolismo. La sirtuina CobB y la acetiltransferasa PatZ alteraron la actividad in vivo de la enzima acetil-CoA sintetasa. El gen cobB se expresa constitutivamente mientras que la expresión génica de patZ se activa transcripcionalmente por el factor de transcripción CRP, al igual que el gen de la enzima acetil-CoA sintetasa, teniendo dos sitios de unión en su región aguas arriba de su secuencia. La ausencia de las proteínas CobB y PatZ en la cepa BL21 alteró mas severamente el metabolismo del acetato que en la cepa K12. Esto indicó que probablemente la regulación diferencial de estas enzimas puede ser la clave de porque ambas cepas tienen un metabolismo del acetato distinto. La actividad desacetilasa de CobB es global y contribuye a la desacetilación de numerosos substratos , generando un gran efecto sobre la fisiología. La acetilación de la isocitrato liasa contribuye al ajuste fino del ciclo del glioxilato y la acetilación de la lisina 154 de RcsB previene la unión de este factor de transcripción al ADN. Este último efecto de la acetilación activa la biosíntesis de flagelos y proteínas relacionadas con la motilidad, e incrementa la susceptibilidad a estrés. La deleción de la proteín-acetiltransferasa patZ aumenta la acetilación en cultivos con acetato. Esto sugiere que tal vez el papel de esta proteína sea regular los niveles de agentes acetilantes en la célula. Este hecho esto explicaría la activación transcripcional simultanea de los genes de patZ y su sustrato acs. Conclusiones. Los resultados presentados en esta Tesis ofrecen nuevos aspectos de las funciones del metabolismo del acetato y la acetilación de proteinas en E. coli. El metabolismo de acetato está directamente unido al metabolismo central, regulando los niveles de metabolitos clave como el acetil-CoA y el acetil-fosfato, que son clave para la acetilación enzimática y química de los residuos de lisina de las proteínas. Esta regulación post-traduccional es importante para el control del metabolismo pero también en otras funciones celulares como pueden ser la movilidad y la supervivencia a estrés. La proteín-acetiltransferasa PatZ no es responsable, directamente, de la mayor parte de las acetilaciones en E. coli, pero juega un papel importante en la regulación de la acetilación química en E. coli. Summary Objectives: (i) to characterise knockout mutants of the acetate producing/consuming pathways and to determine the consequences of the deletion at different metabolic levels; (ii) to study the regulation in vivo of the acetate metabolism by protein lysine acetylation in E. coli; (iii) to describe the genomic context of the genes that encode for the enzymes involved in protein lysine acetylation in E. coli (cobB and patZ) and to study their transcriptional regulation; (iv) to decipher the role of lysine acetylation in the different acetate metabolism observed between the BL21 and K12 E.coli strains; (v) to identify protein acetylation patterns in different growing conditions and genomic backgrounds; (iv) and to characterise the function of protein lysine acetylation in acetate metabolism and transcriptional regulation. / Methodology: the strain Escherichia coli BW25113 and its knockout mutants deleted in the pathways of interest were used during this PhD thesis. Several techniques were used in order to achieve the objectives mentioned above, such as RT-PCR, promoter probe plasmids, DNA microarray, enzyme activities in cell crude extracts and purified enzymes, metabolite measurement by HPLC and High resolution MS proteomics. Results and discussion. The deletion of the main acetate-producing pathway altered central metabolism at different levels, from the transcripts to the energetic levels, showing the link between this metabolism and central carbon metabolism, and also the importance of a proper-balance of acetate metabolism. The sirtuin CobB and the acetyltransferase PatZ altered the activity of acetyl-CoA synthetase in vivo. the cobB gene is expressed constitutively while the patZ gene expression is activated transcriptionally by the transcription factor CRP, similarly to what has been described for the acetyl-CoA synthetase gene, having two putative binding sites in its upstream region. The absence of the CobB and PatZ protein in the BL21 strain altered more severely the acetate metabolism than in the K12. This indicates that probably the differential metabolic regulation of these enzymes could be the key for this different acetate production. Further, the deacetylase activity of CobB is global, contributes to the deacetylation of a big number of substrates and has a major impact on bacterial physiology. Acetylation of isocitrate lyase contributes to the fine-tuning regulation of the glyoxylate shunt and the acetylation of lysine 154 of RcsB prevents DNA binding. This last effect activates flagella biosynthesis and motility proteins, and increases susceptibility to acid stress. Besides, deletion of the acetyltransferase patZ increased acetylation especially in acetate cultures. These results suggest that the role of PatZ could be the regulation of the levels of acetylating agents in the cell. In fact this last finding would explain the simultaneous transcriptional activation of the protein acetyltransferase (patZ) and acetyl CoA synthetase (acs). Conclusions. The results presented in this PhD thesis offered new insights into the roles of acetate metabolism and lysine acetylation in E. coli. Acetate metabolism is linked to central metabolism regulating the levels of key metabolites, such as acetyl-CoA and acetyl-phosphate, both having been shown involved in protein lysine acetylation. This post-translational modification mechanism is important in the control of metabolism, but also in other important physiological roles such as motility and stress survival. Also, the protein acetyltransferase, PatZ, is not a major protein-acetyltransferase in E. coli, but rather might play a role in the regulation of chemical acetylation in E. coli.

EPA's legal authority to regulate greenhouse gas emissions under the Clean Air Act is reviewed. While EPA clearly does not have the authority to implement the precise terms of the Kyoto Protocol, arguments could be put forward to support the Agency's claim that it has the authority to control such pollutants. However, the Clean Air Act's legislative history, a textual analysis of the Act, judicial precedents and political considerations all provide compelling arguments for the EPA to seek additional legislation before attempting to regulate greenhouse gases. Even a generous interpretation of existing provisions would prohibit trading in greenhouse gas emissions permits and therefore contradicts the Administration's own preferred approach to addressing climate change which favors employing market mechanisms to help reduce the costs of carrying out reductions. Moreover, the participation of developing countries in an emissions control regime, which has been stipulated by the Senate and endorsed by the Administration, would also remain unaffected since the Clean Air Act is only designed to address local and regional pollution. Concerns over backdoor implementation of the Kyoto Protocol and EPA's attempts to regulate emissions help explain the political attacks on the agency's efforts to pursue research, education, and non-regulatory solutions to the climate change problem. / Includes bibliographical references. / Abstract in HTML and technical report in PDF available on the Massachusetts Institute of Technology Joint Program on the Science and Policy of Global Change website (http://mit.edu/globalchange/www/)

Se ha estudiado variabilidad genética en el musgo Funaria hygrometrica y su relación con los procesos de adaptación al cambio climático en la alta montaña Mediterránea de Sierra Nevada (España). Para ello se han secuenciado cuatro regiones del ADN (espaciadores nuclear ITS1 e ITS2, la región cloroplastidial rps3-rpl16 y la mitocondrial rpl5-rpl16). Asimismo se han usado dos técnicas de fingerprinting (microsatélites y AFLP). Se ha aplicado el método de exploración del genoma sobre los datos AFLP para detectar loci sometidos a selección. Se han desarrollado con éxito nuevos cebadores y/o se han modificado otros para mejorar la amplificación PCR en las regiones rps3-rpl16 e ITS. Los resultados obtenidos han mostrado una alta variabilidad genética y han revelado la existencia de dos linajes divergentes en Funaria hygrometrica. Asimismo, los niveles significativos de la prueba de Mantel han sugerido que Funaria hygrometrica posee una variación adaptativa a lo largo de Sierra Nevada. / The genetic variability in the common cord moss Funaria hygrometrica and its relation to climate change adaptation processes in Mediterranean high mountain of Sierra Nevada (Spain) were studied. Four DNA regions were sequenced (ITS1 and ITS2 nuclear spacers, rps3-rpl16 chloroplast DNA region, and rpl5-rpl16 mitochondrial intergenic spacer). Two fingerprinting techniques (microsatellites and AFLP) were used to complement the sequence data. A genome scan method was applied on the AFLP data in order to find loci under selection. New and/or modified primers were developed to improve the PCR amplification for the nuclear ITS spacer and the chloroplast rps3-rpl16 region. The results obtained showed a high genetic variability and revealed the existence of two divergent lineages of Funaria hygrometrica. Based on the statistical Mantel test, the significant levels of correlation suggested that Funaria hygrometrica possesses an adaptive variation along Sierra Nevada Mountains.

Ranunculus parnassiifolius L. is an orophilous plant distributed throughout Central and Southwestern Europe (Cantabrian Mountains, Pyrenees and Alps), where at least five taxa have traditionally been recognized. However, the latest researches in this polyploid complex have shown the complexity of its evolutionary history. The aim of this study was to assess the diversity throughout its distribution range (including material from the type localities) and reassess the current systematics applied to the group, using several molecular techniques: ITS (Internal Transcribed Spacer), PCR-RFLP (Restriction Fragment-Length Polymorphisms), cpDNA (sequencing of coding and non-coding plastid regions), AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism), RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat); multivariate morphometric analyses and genome size estimation based on flow cytometric measurements. One of the most relevant results is the existence of numerous arguments to support the separation of the R. parnassiifolius subsp. cabrerensis from the polyploid complex R. parnassiifolius s.l., and it should consequently be treated as an independent species (R. cabrerensis versus R. parnassiifolius) and in fact it constitutes an evolutionary line in itself. Finally, we propose a new evolutionary scenario within the group and suggest conservation strategies

La cepa 357 fué aislada en el año 2002 de una muestra de arena (Praia da Seda,Galicia, España) contaminada con petróleo del Prestige. Esta cepa, presuntamente afiliada al grupo Roseobacter, fue capaz de crecer utilizando naftaleno como única fuente de carbono y energía. Ante la falta de información genética y bioquímica sobre degradación de naftaleno en el grupo Roseobacter, decidimos abordar el trabajo presentado en esta tesis. Así, se ha confirmado taxonómicamente la afiliación de la cepa 357 a la especie Citreicella aestuarii. A continuación, utilizando técnicas genómicas, fisiológicas y analíticas, se ha caracterizado el potencial metabólico de la cepa 357 en el contexto del grupo Roseobacter. Además, se ha definido fisiológica, genética y bioquímicamente la vía catabólica del naftaleno. Así, C. aestuarii 357 es capaz de metabolizar el naftaleno vía salicilato y gentisato. Adicionalmente, hemos demostrado la capacidad de la cepa 357 de crecer con dibenzotiofeno como fuente única de carbono, energía y azufre. / Strain 357 was isolated in 2002 from an oil-polluted sand sample from Praia da Seda (Galicia, Spain). This strain, a plausible member of the Roseobacter clade, was able to grow using naphthalene as sole carbon and energy source. Due to the lack of genetic and biochemical information about naphthalene degradation in Roseobacter, the work presented in this PhD Thesis was started. Thus, it has been taxonomically demonstrated that strain 357 is a member of the Citreicella aestuarii species. Using physiology, genomic and analytical techniques the metabolic potential of strain 357 in the context of the Roseobacter clade has been characterized. Furthermore, it has been demonstrated that C. aestuarii 357 is able to metabolize naphthalene via salicylate and gentisate. Finally, it has been proven that strain 357 is able to use dibenzothiophene as unique carbon, energy and sulfur source.

El Objetivo general de la presente Tesis Doctoral fue el de estudiar la participación de la neurotransmisión glutamatérgica y del GHB en la adicción a los opiáceos y a la cocaína. En primer lugar hemos pretendido observar la contribución de estos dos sistemas de neurotransmisión en los efectos que la morfina presenta sobre las conductas sociales. Nuestra hipótesis fue que la afectación del sistema glutamatérgico, concretamente bloqueando los receptores NMDA (utilizando Memantina y MK-801) así como la facilitación de la neurotransmisión GABAérgica, mediante la administración de GHB (ácido gammahidroxibutírico) podrían modificar los efectos que sobre las conductas sociales ejerce la morfina. Igualmente nos planteamos estudiar si tanto los síntomas físicos como los motivacionales, medidos mediante el Condicionamiento Aversivo de Lugar (CAL), observados en el síndrome de abstinencia a la morfina, podían verse modificados por las acciones anteriormente mencionadas sobre el sistema glutamatérgico o GABAérgico. También hemos observado el papel del de estos dos sistemas de neurotransmisión sobre lasacciones reforzantes de la cocaína. Hemos estudiado el papel sistema glutamatérgico y del GHB sobre los efectos reforzantes de la cocaína, la adquisición, la expresión y el restablecimiento (recaída) mediante el condicionamiento de la preferencia de lugar (CPL) inducido por esta droga. Mediante esta serie de estudios tratamos de explorar el papel de estos sistemas de neurotransmisión tanto en los efectos reforzantes, como en la recaída en el consumo de cocaína. / The main aim of the present Doctoral Thesis was to study the participation of the glutamatergic neurotransmission and GHB in the addiction to opiates and cocaine. Firstly, we observed the contribution of these two systems of neurotransmission to the effects that morphine presents on social behaviours. Our hypothesis was that the impairment of the glutamatergic system by blocking the NMDA receptors (using Memantine and MK-801) as well as the facilitation of the GABAergic neurotransmission, by GHB administration (gamma-hydroxybutyric acid) could modify the effects that morphine exerts on social behaviours. Likewise, we studied whether the physical as well as the motivational symptoms, measured by means of Conditioned Place Aversion (CPA), observed in the morphine wtihdrawal syndrome, could be modified by the previously mentioned actions on the glutamatergic or GABAergic systems. We have also studied the role of these two neurotransmission systems in the rewarding actions of cocaine. We examined the influence of the glutamatergic system and GHB on the acquisition, expression and reinstatement (relapse) of the cocaine-induced conditioned place preference (CPP). With these studies we explored the role of these neurotransmission systems in the cocaine-rewarding effects and the relapse to cocaine consumption. Our results show that memantine administration significantly increased motor activity without modifiying the antiaggressive effect of morphine. Memantine blocked the physical and motivational symptoms of the morphine withdrawal, whereas MK-801 was more effective in blocking only the motivational symptoms of this withdrawal syndrome evaluated by the CPA procedure. On the other hand, we could observe that GHB potentiates morphine-induced effects on social behaviours, counteracting the hyperactivity induced by this opiate, and ameliorating the physical as well as motivational aspects of the morphine withdrawal syndrome. In addition, we have observed that GHB has no synergic action on the rewarding effects of cocaine, evaluated by the CPP procedure, It blocked the cocaine-seeking behaviour (relapse) when it was administered during the acquisition or the expression of the conditioning or with a "priming" dose of cocaine. Also we have observed that NMDA and AMPA receptors blockaded by memantine and CNQX administration prevented the acquisition and expression of cocaine-induced CPP but did not show the ability to block the relapse induced by "priming" administration of this same drug. The present study indicates that glutamatergic neurotransmission plays an important role in the establishment of morphine dependency, as is observed by the reduction of the physical and motivational signs in the morphine withdrawal after the administration of NMDA receptor blockers. Our results also indicate a clear interaction between the opiate and GABAergic systems, since GHB (a GABA metabolite) interacts with morphine, having an additive effect on morphine-affected social behaviours but counteracting morphine-induced increases in motor activity. We have confirmed that GHB is a useful tool capable of ameliorating both the physical as well as motivational aspects of opiate witdrawal. Also we verified that the relapse in cocaine-seeking behaviour could be blocked by GHB when administered during the acquisition of the conditioning procedure, the expression, or even, jointly with a priming dose of cocaine. Finally, the glutamatergic system also plays a role in the acquisition and expression of the cocaine-induced CPP, but not so in the reinstatement of this preference by a priming dose of cocaine. Our results can help to better understand the underlying neurobiological phenomena in the drugs addictive behaviour and the possible use of memantine and GHB in the treatment of addiction, suggesting their importance as therapeutic tools in the addiction to opiates and psychoestimulants (cocaine).

Se exponen los trabajos realizados sobre especies del género Culicoides, vectores del virus de la lengua azul. Durante el desarrollo de la tesis se presentan estudios de comparación de trampas, en los que se llevó a cabo la captura de los vectores e indicaron que las trampas Onderstepoort o mini-CDC, dependiendo de la época del año, fueron las más adecuadas para la captura de estos insectos. Se realizaron ensayos insecticidas con deltametrina para intentar controlar las poblaciones de vector y se observó que las distintas especies de Culicoides fueron muy sensibles al contacto con este insecticida. La evaluación en campo demostró su efectividad ya que incrementó el porcentaje de mortalidad de los insectos significativamente. También se analizó la capacidad de Culicoides imicola (vector principal en África y sur de Europa) de infectarse oralmente con distintos serotipos del virus y se comprobó que este vector se infectó con tres de los cuatro serotipos ensayados.

En aquesta Tesi s'estudiaren les variacions de les comunitats bacterianes marines en relació a la distància a la costa i la seva utilització com àrees recreatives (platges i ports). També s'analitzaren els canvis estacionals que es produeixen a les diferents poblacions detectades. I es compararen els resultats de les poblacions detectades amb canvis espacials i temporals de diferents paràmetres fisicoquímics analitzats. Es detectaren canvis poblacionals importants a dins i fora de les zones recreatives, a més, les poblacions majoritàries detectades a les zones d'impacte coincidien a diferents àrees geogràfiques de l'illa de Mallorca. Aquestes determinacions podrien permetre la utilització d'aquestes poblacions com a bioindicadors d'aigües costaneres que presenten un impacte antropogènic. El més innovador d'aquest estudi es l'aplicació dels Sistemes d'Informació Geogràfica (SIG) en l'àmbit de la microbiologia ambiental per a conèixer la repercussió dels impactes generats per l'ús de la costa.

Klebsiella pneumoniae és un bacil Gram negatiu que causa infeccions del tracte urinari així com pneumònies adquirides en la comunitat i nosocomials. La membrana externa de les bactèries Gram negatives està formada pel lipopolisacàrid (LPS). El LPS és una molècula formada per un polisacàrid, amb càrrega negativa, ancorat a una regió hidrofòbica, el lípid A, que posseeix característiques d’endotoxina i és, per tant, immunoestimuladora. Els sistemes de transducció de senyals de dos components en bactèries detecten canvies en l’ambient i regulen l’expressió de gens que modifiquen l’estructura del lípid A per tal de mantenir l’homeòstasi de la cèl•lula bacteriana, augmentar la resistència en front als pèptids catiònics o modular la resposta immune de l’hoste. En resultats previs del nostre laboratori va posar-se de manifest que la xaperona Hfq regula les modificacions del lípid A a Yersinia enterocolitica O8. En aquesta tesi doctoral posem de manifest que aquest fet no sols es dóna a Y. enterocolitica si no que Hfq també participa en la regulació de les modificacions dels lípid A tant a Salmonella Typhimurium com a K. pneumoniae. En la segona part d’aquesta tesi doctoral hem caracteritzat l’estructura de lípid A que K. pneumoniae expressa in vivo, durant una infecció, sense la necessitat de realitzar un pas previ d’aïllament bacterià en medis de cultiu tradicionals. Durant una infecció pulmonar, K. pneumoniae expressa un lípid A que es caracteritza per la presència d’una cadena de 2-hidroximiristat com acilació secundària. Les nostres observacions indiquen que el lípid A que K. pneumoniae expressa en el pulmó és menys inflamatori que el lípid A que la bactèria expressa quan creix en medis de cultiu tradicionals. A més a més, el lípid A que K. pneumoniae expressa in vivo juga un importantíssim paper conferint a la bactèria resistència en front als pèptids antimicrobians. / Klebsiella pneumoniae es un bacilo Gram negativo que causa infecciones del tracto urinario así como neumonías adquiridas en la comunidad y nosocomiales. La membrana externa de las bacterias Gram negativas se compone del lipopolisacárido (LPS). El LPS es una molécula formada por un polisacárido, cargado negativamente, anclado a un dominio hidrofóbico, el lípido A, que posee propiedades de endotoxina y, por tanto, es inmunoestimulador. Los sistemas de transducción de señales de dos componentes en bacterias detectan cambios en el ambiente y regulan la expresión de genes que remodelan la estructura del lípido A para mantener la homeóstasis de la célula bacteriana, aumentar su resistencia a péptidos catiónicos o modular la respuesta inmune del huésped. En resultados previos de nuestro laboratorio se puso de manifiesto que la chaperona Hfq participa en la regulación de las modificaciones del lípido A en Yersinia enterocolitica. En esta tesis doctoral se ha puesto de manifiesto que este hecho no sólo ocurre en Y. enterocolitica si no que también Hfq participa en la regulación de las modificaciones del lípido A tanto en Salmonella Typhimurium como en K. pneumoniae. En la segunda parte de esta tesis doctoral se ha caracterizado la estructura de lípido A que expresa K. pneumoniae in vivo durante una infección sin la necesidad de aislar la bacteria previamente en medios de cultivo tradicionales. Durante una infección pulmonar, K. pneumoniae expresa una estructura de lípido A caracterizada por la presencia de una cadena de 2-hidroximiristato como acilación secundaria. Nuestras observaciones indican que el lípido A expresado en el pulmón es menos inflamatorio que el expresado cuando la bacteria crece en medios de cultivo tradicionales. Además, el lípido A expresado por K. pneumoniae in vivo juega un importante papel en la resistencia de la bacteria frente a péptidos antimicrobianos. / K. pneumoniae is a Gram negative bacterium which causes urinary tract infections as well as community-acquired and nosocomial pneumonia. Lipopolysaccharide (LPS) is the major component of the outer membrane of Gram negative bacteria. LPS is a negatively charged polysaccharide anchored to a hydrophobic region, the endotoxic lipid A. In bacteria, two component transduction systems detect environmental changes and trigger the expression of genes responsible for lipid A modifications. Lipid A remodelling helps maintaining cellular integrity, confers resistance to many antimicrobial peptides as well as modulates host’s immune response. Previous results from our laboratory showed that Hfq regulates lipid A modifications in Yersinia enterocolitica O8. In this doctoral thesis we demonstrate that Hfq also regulates lipid A modifications in other Enterobacteriaceae such as Salmonella Typhimurium and K. pneumoniae. In a second study, we have characterised for the first time the lipid A structure expressed by K. pneumoniae in vivo during a lung infection without the need of a previous isolation step on traditional culture media. During the course of a lung infection, K. pneumoniae expresses a lipid A characterised by the presence of a 2-hydroxymiristate as a secondary acylation. Our results show that the lipid A expressed by K. pneumoniae in vivo in the lung is less inflammatory than the lipid A expressed when cultured on traditional culture media. Furthermore, this lipid A found in the lung plays a major role conferring resistance to antimicrobial peptides.