La douleur neuropathique est un syndrome secondaire à une maladie ou à une lésion affectant le système nerveux somatosensoriel. Les causes biologiques de ces comorbidités ne sont pas clairement établies. En utilisant un modèle murin de douleur neuropathique, nous avons cherché à amplifier l'inhibition nerveuse médiée par les récepteurs GABAA afin de tenter de réduire les symptômes douloureux neuropathiques et les troubles émotionnels associés. Pour cela nous avons utilisé l’étifoxine, un anxiolytique non benzodiazépinique qui possède une action originale sur les récepteurs GABAA mais, surtout, semble avoir des effets secondaires limités comparativement à d'autres molécules comme les benzodiazépines par exemple. Son effet passe par la potentialisation directe du récepteur GABAA (site modulateur situé sur les sous-unités β2 et β3) mais aussi par une action indirecte : la stimulation de la production de neurostéroïdes 3α-réduits capables de potentialiser la fonction des récepteurs GABAA. Quelques rares études ont montré que les neurostéroïdes endogènes, surtout ceux réduits en position 3α comme l'allopregnanolone (THP, allotétrahydroprogestérone) ou le THDOC (tétrahydrodéoxycorticostérone), pouvaient réduire les symptômes douloureux. Les effets obtenus dans ces études sont similaires à ceux issus d’injections exogènes des mêmes composés. / Neuropathic pain is associated with significant co-morbidity, including anxiety and depression, which impact considerably on the overall patient experience. Several lines of evidence suggest that anxiolytics may be of interest to alleviate pain symptoms and the associated negative emotions in chronic pain states. Among them, the non-benzodiazepine anxiolytic etifoxine (EFX: stresam™) has an interesting pharmacological profile. In patients, it has a weak sedative action, with limited functional tolerance and dependence, and without cognitive declines. In this study, we aim at analyzing the preclinical therapeutic potential of etifoxine on the anxiodepressive consequences of neuropathic pain.

L'addiction est une affection chronique emmaillée de rechutes, caractérisée principalement par des comportements compulsifs de recherche et de consommation de drogue. Il s'agit d'une pathologie grave et fréquente. Les sujets qui parviennent à se désengager de ces compulsions sont considérés comme abstinents. Les études épidémiologiques montrent que l'abstinence, notamment pour les opiacés est fortement associée à une prévalence accrue de la dépression. Le but de mon travail de thèse était d'aborder spécifiquement la cooccurrence des troubles dépressifs et addictifs. J'ai participé à l'élaboration d'un modèle murin de cette comorbidité, et nous nous sommes focalisés sur l'addiction aux opiacés, en particulier l'héroïne. Suite à un traitement chronique par l'héroïne et au cours de l'abstinence paraissent progressivement des comportements apparentés à la dépression. Ce traitement chronique à l'héroïne modifie le fonctionnement du système sérotoninergique et l'activité du récepteur opioïde kappa (Article publié: Distinct mu, delta, and kappa opioid receptor mechanisms underlie low sociability and depressive-­like behaviors during heroin abstinence). Les déficits comportementaux observés peuvent être prévenus et reversés par un traitement antidépresseur ciblant le system sérotoninergique ou en inhibant l'activité du récepteur opioïde kappa avec un antagoniste, dans des portions similaires (Manuscript submis: Kappa opioid receptor antagonism prevents and reverses heroin abstinence-­induced social deficit with similar efficacy compared to chronic antidepressant treatment). Notre étude nous permet de proposer que le récepteur opioïde kappa constitue un acteur majeur à l'interface de l'addiction et de la dépression(Revue publié: The kappa opioid receptor: from addiction to depression, and back). / Addiction is a chronic, relapsing disorder and is mainly described as compulsive craving and consumption of a drug in spite of adverse consequences. Individuals who have achieved to refrain from such compulsive behaviour are considered abstinent, but present symptoms reminiscent of depression. Epidemiological studies report that abstinence, particularly from opiates, strongly associates with higher prevalence of depression. Aim of my thesis was to specifically address the co-­occurrence of opiate addiction and major depression in preclinical research. Thus, I have contributed to develop a mouse model of opiate abstinence, and in particular extend our model of morphine abstinence to heroin. Following exposure to escalating doses of heroin, abstinent mice progressively exhibit a depressive-­like phenotype, revealed by low sociability., and show altered serotonergic and kappa opioid receptor signaling (Published article: Distinct mu, delta and kappa opioid receptor mechanisms underlie low sociability and depressive-­like behaviors during heroin abstinence).Importantly, these behavioural deficits can be both prevented and reversed by antidepressant treatment targeting serotonergic signaling, or inhibiting the activity of the kappa opioid receptor withan antagonist, with similar efficacy (Submitted article: Kappa opioid receptor antagonism prevents and reverses heroin abstinence-­induced social deficit with similar efficacy compared to chronic antidepressant treatment). Altogether, our results allow us to propose the kappa opioid receptor is a major player at the interface of addiction and depression (Published review: The kappa opioid receptor: from addiction to depression, and back).

Une étape critique au cours du développement de médicaments est la mesure ou la prédiction des concentrations du médicament dans un tissu cible, qui peuvent ensuite être liées à des mesures de leur efficacité ou leur toxicité. Les concentrations de médicaments ne pouvant être mesurées dans le cerveau humain, ils doivent être simulés ou prédits en utilisant des approches alternatives de modélisation. L'objectif de cette thèse est de développer in silico des approches de prédiction combinant à la fois des données précliniques in vitro et in vivo dans un modèle physiologique structuré, avec une stratégie translationnelle afin de permettre la simulation de concentrations totales et libres des médicaments dans le cerveau humain. Des modèles pharmacocinétiques physiologiques (PBPK) ont été développés dans cette thèse et évalués pour des médicaments de référence déjà sur le marché, et pour un médicament en cours de développement clinique dans l'industrie pharmaceutique. Ces modèles ont été développés à partir de stratégies de type « Bottom-up » sur la base de données in vitro pour la prédiction de la distribution des médicaments dans le cerveau et comparées à des méthodes de type «top-down » en utilisant des données in vivo. Cette thèse est une thèse sur article construite à partir de 5 articles scientifiques qui sont soit publiés soit en cours de soumission. Le premier article est une revue de la littérature publiée dans le Journal de l'AAPS. Cette revue discute les modèles PBPK disponibles actuellement et a permis d’élaborer des hypothèses de travail dans cette thèse afin de proposer des améliorations de ces modèles. Le deuxième article un article de recherche original publié dans Molecular Pharmaceutics. Cet article vise à démontrer l'élaboration d'une approche cohérente de modélisation pharmacocinétique chez le rat qui peut s’adapter en fonction de la quantité et de la qualité des données obtenues in vivo au cours du développement des médicaments. Un arbre de décision a été construit pour faciliter le paramétrage et la structure appropriée du modèle en fonction des données disponibles. Le troisième article est un article de recherche original publié dans Journal of Pharmaceutical Sciences. Cette étude porte sur le développement d'un modèle PBPK pour la prédiction de la pénétration cérébrale des médicaments, dans lequel son transfert à travers la BHE a été traité de façon mécanistique en séparant les paramètres régissant la quantité (perméabilité) à travers la BHE de sa liaison dans le tissu cérébral. Une stratégie de type vitro - vivo en fonction de la perméabilité des médicaments à travers les monocouches cellulaires in vitro a été proposé afin d'extrapoler la composante de transport actif du composé à l’aide de facteurs d’extrapolation (RAF). Deux autres articles sont en cours d’écriture ou soumis. Ces articles viennent compléter les approches de PBPK pour les médicaments du SNC décrites dans les deux autres articles originaux. Une dernière partie de la thèse constitue la discussion qui met très clairement en évidence l'importance du choix d’une approche de modélisation appropriée ou mieux encore la combinaison des approches fondées sur les connaissances physiologiques, les données expérimentales et les applications prévues dans le développement du médicament. L'avantage du paramétrage mécanistique dans ces modèles PBPK est qu’il améliore leur prédictivité et la simulation de différences inter-espèces. Cette thèse a considérablement contribué à démontrer la nécessité d’associer des données in vitro à des données in vivo dans la structuration des modèles PBPK qui se révèlent alors comme des outils précieux pour la prédiction de la pharmacocinétique cérébrale chez l'homme. / A critical step during drug development is the measurement or the prediction of drug concentrations in the target tissue, which can then be linked to measures of drug efficacy or toxicity. Drug concentrations cannot be directly measured in the human brain, and must be simulated or predicted using alternative modeling approaches. The objective of this thesis is to develop in silico approaches to predict BBB penetration of drugs, combining in vitro and in vivo preclinical data in a physiologically structured model, with a translational strategy to allow the simulation of total and free drug concentrations in the human brain. Physiologically based pharmacokinetic (PBPK) models were developed and evaluated for reference molecules already on the market, as well as for a drug currently under clinical development within the pharmaceutical industry. These models were developed based on both ‘bottom-up’ (model parameter values predicted from in vitro data) and ‘top-down’ (model parameters estimated from in vivo data) strategies. This thesis is comprised of 5 scientific papers which are either published or submitted to peer-reviewed journals. The first article is a review of the literature, published in the AAPS journal. This review discusses the currently published PBPK models available for the mechanistic prediction of BBB penetration of drugs, and proposes a strategy for in vitro-in vivo (IVIVE) extrapolation. The second article is an original research article published in Molecular Pharmaceutics. This article aims to show the development of a coherent pharmacokinetic modeling approach in the rat which can be adapted based on the quantity and quality of data obtained in vivo during the development of new drugs. A decision tree was constructed to enable the appropriate parameterization and model structure based on the available data. The third article is an original research article published in Journal of Pharmaceutical Sciences. This article was based on the development of a PBPK model for the mechanistic prediction of BBB penetration of drugs, in which the active and passive components of permeability were considered separately, as well as the intra-brain tissue binding parameters. An in vitro-in vivo strategy was proposed to extrapolate the active transport component using a relative activity factor (RAF) to account for in vitro-in vivo differences in transporter activity and/or abundance. Two additional articles are either submitted or under preparation. These articles extend the PBPK approaches described in the previous two published original research articles. The final part of this thesis consists of a discussion which emphasizes clearly the importance of the appropriate choice of modeling approach, or even better, a combination of approaches based on physiological knowledge, experimental data and knowledge gathered during the course of drug development. The advantage of mechanistic parameterization of PBPK models is the improved ability for inter-species extrapolation for the subsequent simulation of free or total drug concentrations within the human brain. This thesis has considerably contributed to this rapidly evolving field of CNS drug research and development, showing the importance of combining in vitro and in vivo data within a physiologically based model structure, thus providing a valuable tool for the quantitative prediction of the penetration of drugs in the human brain.

The impact of the intestine in determining the oral bioavailability of drugs has been extensively studied. Its large surface area, metabolic content and positioning at the first site of exposure for orally ingested xenobiotics means its contribution can be significant for certain drugs. However, prediction of the exact metabolic component of the intestine is limited, in part due to limitations in validation of in vitro tools as well as in vitro-in vivo extrapolation scaling factors. Microsomes are a well established in vitro tool for extrapolating hepatic metabolism, however standardised methodologies for preparation in the intestine are limited, in light of complexities in preparation (e.g. presence of multiple non-metabolic cells, proteases and mucus). Therefore, the aims of this study were to establish an optimised method of intestinal microsome preparation via elution in the proximal rat intestine, and to determine microsomal scaling factors by correcting for protein losses during preparation. In addition, to assess species in another preclinical species (dog) and human as well as assessing and regional differences in scaling factors and metabolism. Following optimisation of a reproducible intestinal microsome preparation method in the rat, the importance of heparin in limiting mucosal contamination was established. These microsomes were characterised for total cytochrome P450 (CYP) content, and CYP and uridine 5′-diphosphate glucuronosyltransferase (UGT) activities using maker probes of testosterone and 4-nitrophenol. Loss corrected microsomal scaling factors between two pools of n=9 rats was 9.6±3.5 (recovery 33%). A broad range of compounds (n=25) in terms of metabolic activity and physicochemical properties were screened in rat intestinal microsomes. The prediction accuracy relative to in house generated or literature in vivo estimates of the fraction escaping intestinal metabolism (FG) through in vitro-in vivo extrapolation of observed metabolism and the derived scaling factors and either Caco-2 permeability of physicochemical permeability estimates utilising the Qgut model. In the dog, regional differences in intestinal scaling factors and metabolic activities were explored, as well as relationships between the proximal intestine and liver in matched donors. Positive correlations in both hepatic activity and microsomal scalars were observed. Robust scaling factors were established using the 3 microsomal markers. A total of 24 compounds were screened for hepatic and intestinal metabolism in order to make in vivo estimates of FG, the fraction escaping hepatic metabolism (FH) and oral bioavailability (F). Estimates based on Caco-2 and physicochemical based scaling, as well as utilising a commercial PBPK software platform (ADAM model, Simcyp® v12) were broadly similar with generally reduced prediction accuracy in proximal physicochemical based Qgut scaling, and improved predictions using Caco-2 Qgut or PBPK approaches. Worse predictions were observed for compounds with high protein binding, transporter substrates and/or CYP3A inhibitors. Regional metabolism demonstrated peak metabolism in the proximal intestine, before declining distally. Human intestinal microsomes were prepared for jejunum and ileum tissue. Although samples were limited, regional differences in metabolic activities and scaling factors were also assessed, using correction markers and activity in 23 compounds. In all, 20 compounds overlapped between all three species. Comparison in Fa.FG between rat and human CYP3A substrates showed a modest relationship, however relationships between species and human were generally poor given the observed differing metabolic contributions of testosterone and 4-NP metabolite formation between species limited the observed relationships between species. However, within species, good estimates of oral bioavailability were observed. This is the largest know interspecies comparison of intestinal metabolism and scaling factors with microsomes prepared within the same lab.

Nous avons identifié, un ligand de Wnt, Wnt5a, comme faisant partie intégrante du complexe mTORC1, qui régule la fonction lysosomal et favorise le trafic intracellulaire du cholestérol. En diminuant l’activité de mTORC1 et en activant l’axe autophagie-lysosome, Wnt5a adapte les concentration du cholestérol intracellualire aux besoins de la cellule. Wnt5a favorise l’export du cholestérol depuis les endosomal/lysosomal (LELs) vers le réticulum endoplasmique (RE), limite l’accumulation intracellulaire du cholestérol, et protège contre l’athérosclérose. D’un point de vue mécanistique, Wnt5a se lie aux membranes riches en cholestérol et interagit spécifiquement avec la protéine membranaire Niemann-Pick C1 (NPC1), la protéine soluble Niemann-Pick C2 (NPC2), deux protéines lysosomales qui régulent l’export du cholestérol à partir des LELs. En conséquence, l’absence de Wnt5a inhibe la fonction lysosomale et l’autophagie, ainsi que la sortie du cholesterol hors des LELs. Ceci resulte en l’accumulation de larges corps d’inclusion intracellulaires, de larges LELs riches en cholestérol, d’une diminution du cholestérol au niveau du RE. / We identified the Wnt ligand, Wnt5a, as a member of the nutrient/energy/stress sensor, mTORC1 scaffolding complex, which drives lysosomal function and promotes cholesterol trafficking. By decreasing mTORC1 activity and by activating the autophagy-lysosomal axis, Wnt5a senses changes in dietary cholesterol supply, promotes endosomal/lysosomal (LELs) cholesterol egress to the endoplasmic reticulum (ER), and protects against atherosclerosis. Moreover, Wnt5a binds cholesterol-rich membranes and specifically interacts with two lysosomal proteins Niemann–Pick C1 and Niemann–Pick C2 that regulate cholesterol export from LELs. Consequently, absence of Wnt5a decoupled mTORC1 from variations in LELs sterol levels, and this resulted in accumulation of large intracellular inclusion bodies, large LELs and low ER cholesterol.

This thesis describes the developmental expression and anatomical distribution of Copine-6, a neuron specific member of the Copine family of calcium-dependent phospholipid-binding proteins, in rodent brain. A polyclonal antibody targeting the full Copine-6 sequence has been characterised prior to its employment for the immunohistochemical analysis of rodent embryonic and adult brain tissue. Several different Copine-6 labelled neuron populations in the neocortex, hippocampus and olfactory bulbs were discovered, and one of these with an unusual ‘spiny’ morphology in the adult rodent corpus callosum, bordering the neurogenic subventricular zone and rostral migratory stream, was studied in detail. A full molecular characterisation of these Copine-6 ‘spiny’ neurons showed that these cells are mature, GABAergic, axonless interneurons with putative synaptic communication, unusual for their location in the white matter close to the region of adult neurogenesis. A full bromodeoxyuridine (BrdU) birth-dating analysis was performed, which indicated an early embryonic birthdate for the Copine-6 spiny cells. This timeframe is typical of cortical GABAergic interneurons suggesting that their unusual positioning is programmed from embryogenesis. Furthermore, electron microscopic analysis of these Copine-6 interneurons in Chapter 5 confirms that indeed these cells contain vesicles and are synaptically integrated as postsynaptic recipients. The presence of vesicles in the architecturally dendritic processes is suggestive of dendro-dendritic signalling by these cells. Observations from electron microscopic nanoparticle labelling also showed that the Copine-6 protein is restricted to the plasma membrane, smooth endoplasmic reticulum, and multi-vesicular bodies. These embryonically generated Copine-6 labelled axonless interneurons are a novel neuron population in the corpus callosum, and the presence of vesicles in the dendritic processes of these cells suggests that they might have a novel communication mechanism.

Studies have been conducted to highlight the anti-inflammatory and immunosuppressive properties of cannabinoids and also their potentials for cartilage repair and regeneration. Various wound healing techniques can be used to investigate the mechanisms of chondrocyte repair in monolayers or three dimensional tissue constructs. The effect of different concentrations of the synthetic cannabinoids WIN55, 212-2 (WIN-2), URB602 and HU-308 with and without their antagonists on the wound healing of chondrocyte monolayers was investigated using a simple scratch assay model. The three cannabinoids were found to increase wound healing of chondrocyte monolayers, but at different rates. WIN55, 212-2 at a concentration of 1μM had the highest effect of increasing both migration and proliferation of chondrocytes cultured in a chondrogenic media, which increased the rate of wound closure. It was also found that treating the cells with 2μM of any of the cannabinoids lead to a decrease in cell proliferation and the rate of wound closure. These findings were further investigated, by studying the effect of WIN-2 on nitric oxide (NO) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) expressed by wounded chondrocyte monolayers. Moreover, expression of collagen type-I, collagen type-II, fibronectin and S100 proteins were detected using immunofluorescence and verified quantitatively using ELISA based techniques, following treatment with 1μM and 2μM of WIN-2, for both 2D monolayers and 3D sheets. Treating chondrocytes with 1μM of WIN-2 significantly increased collagen type-II, fibronectin and S100, and significantly reduced collagen type-I compared to control groups in monolayers and chondrocyte cell sheets. On the other hand, both concentrations of WIN-2 significantly reduced the expression of the inflammation markers NO, and MMP-2, in a dose dependent manner. These findings highlight the potential use of the synthetic cannabinoid for improving the rate of wound closure as well as acting as an antiinflammatory agent, which could be used to enhance tissue engineering protocols aimed at cartilage repair.

La mélatonine est connue pour agir directement sur l’horloge circadienne. L’agomélatine est un antidépresseur présentant des propriétés agonistes MT1/MT2 et antagonistes 5-HT2C. Tout d’abord, nous avons évalué les effets de l’agomélatine, de la mélatonine et d’un antagoniste 5-HT2C sur deux sorties de l’horloge (rythme de la mélatonine endogène et de la température corporelle). Les résultats obtenus suggèrent une action centrale de l’agomélatine et de la mélatonine, directement sur l’horloge via les récepteurs MT1/MT2, en induisant une augmentation de l’amplitude et une avance de phase du rythme de mélatonine. Pour la température corporelle, l’ensemble des drogues augmente l’amplitude du rythme, suggérant une action des propriétés agonistes MT1/MT2 et/ou antagonistes 5-HT2C de l’agomélatine. Puis, l’étude sur l’expression du gène horloge Per1, a révélé un effet supérieur de l’agomélatine par rapport à la mélatonine, mais seulement le jour du traitement. L’agomélatine pourrait agir sur la machinerie moléculaire de l’horloge, ce qui reste à exploiter davantage. Ces nouvelles données contribuent à une meilleure compréhension des mécanismes d’action de l’agomélatine. / Melatonin is known to act directly on the circadian clock. Agomelatine is an antidepressant with MT1/MT2 agonist and antagonist 5-HT2C properties. First, we evaluated the effects of agomelatine, melatonin and 5-HT2C antagonist on two clock outputs (rhythm of endogenous melatonin and body temperature). The results suggest a central action of agomelatine and melatonin, directly on the circadian clock via MT1/MT2 receptors, inducing an increase on the amplitude and a phase advance of the rhythm of melatonin. For body temperature, all drugs increased the amplitude of the rhythm, this suggest an action of MT1/MT2 agonist and antagonist 5-HT2C properties of agomelatine. Secondly, the study on the expression of clock gene Per1 revealed a greater effect of agomelatine compared to melatonin, but only on the day of treatment. Agomelatine could act on the molecular machinery of the clock, but requires further investigations. These new data allow a better understand of the mechanisms action of agomelatine.

L'un des enjeux majeurs de la recherche anti-cancéreuse est de développer de nouvelles thérapies en direction des tumeurs réfractaires aux traitements conventionnels. Dans ce contexte, l'identification récente de l'activité anti-tumorale PPARgamma-indépendante des thiazolidinediones ouvre de nouvelles perspectives thérapeutiques. Au sein du laboratoire, il a été montré qu'un analogue inactif de la TGZ, la delta2-TGZ, induit une dégradation protéasome-dépendante du récepteur alpha aux oestrogènes de manière PPARgamma-indépendante. A partir de ces données, les objectifs de ma thèse ont été 1) de participer à la caractérisation de nouveaux composés à activité anti-cancéreuse 2) de mieux comprendre les mécanismes PPARgamma-indépendants mis en jeu dans l'effet anti-cancéreux des TZD. Lors de ce travail de thèse, nous avons caractérisé de nouveaux composés plus efficaces que la delta2-TGZ pour l'inhibition de la prolifération des cellules cancéreuses mammaires MCF-7 et MDA-MB-231 et faiblement toxiques sur des cultures primaires d'hépatocytes humains. De plus, nous avons montré que la delta2-TGZ est capable d'induire un stress du réticulum endoplasmique à des temps précoces dès 3 heures et une apoptose à des temps plus tardifs 48 heures. Cependant, nous n'avons pas pu conclure à l'existence d'un lien entre les deux mécanismes. Enfin, nous avons montré que la biotinylation d'un ligand naturel de PPARgamma, la 15d-PGJ2, accroît son effet anti-prolifératif sur les cellules cancéreuses mammaires MCF-7 et MDA-MB-231 et conduit à un stress du réticulum endoplasmique et à une mort par apoptose. Ces effets sont partiellement dépendants de PPARgamma pour le stress du réticulum endoplasmique mais strictement PPARgamma-indépendants pour l'apoptose. Ce travail pourrait permettre de constituer de nouveaux outils thérapeutiques dans le traitement du cancer du sein / One of the main goals of the anti-cancer research is to develop new therapeutic option for resistant tumor. In this context, the recent discovery of thiazolidinedione devoid of PPARgamma activity with a strong anti-cancer effect opens new perspectives. In a previous study, the laboratory showed that an inactive derivative of PPARgamma, the delta2-TGZ, induce a proteasome-dependent degradation of estrogen receptor alpha in PPARgamma-independent way. Thus, during my thesis we aimed 1) to participate in the study of new compounds less toxic and more effective to inhibit the proliferation of mammary cancer cells, 2) to better understand PPARgamma-independent mechanisms involved in the anti-cancer effect of the TZD. In the present work, we characterise new compounds more effective than delta2-TGZ to inhibit the proliferation of the breast cancer cells MCF-7 and MDA-MB-231 and are less toxic on primary culture of human hepatocytes. We pursued the study on mechanisms involved in PPARgamma-independent anti-proliferative activity of delta2-TGZ. We showed that delta2-TGZ is able to induce endoplasmic reticulum stress as soon as 3 hours and apoptosis in later times 48 hours of treatment. Nevertheless we could not conclude of the existence of a link between these two pathways. Finally, we studied the effect of the biotinylation of a natural ligand of PPAR?: the 15d-PGJ2. This modification drive to an increased effect of the 15d-PGJ2 on the anti-proliferative effect of breast cancer cells, reticulum endoplasmic stress and death by apoptosis. These effects are partially PPARgamma-dependent for reticulum endoplasmic stress and only PPARgamma-independent for apoptosis. This work highlighted new promising tools of breast cancers treatment

La voie d’administration d’un vaccin et le modèle préclinique dans le lequel il est évalué sont des facteurs majeurs qui contribuent à son succès chez l’homme. Dans ce contexte, la découverte que la voie transcutanée (TC) induit une réponse immunitaire puissante a fait de la vaccination antitumorale TC une stratégie prometteuse. Une évaluation complémentaire du candidat vaccin dans un modèle de souris humanisée (Hu-SPL-NSG), plus prédictif de la réponse humaine, est aussi nécessaire. L’objectif de cette thèse est i) d'optimiser des constructions liposomiques peptidiques incorporant un agoniste de TLR pour la voie TC et ii) d’évaluer leur immunogénicité dans le modèle Hu-SPL-NSG. Ainsi, nous avons fait varier la nature de l’agoniste de TLR et la déformabilité de la vésicule liposomique, et avons rajouté une molécule de ciblage des cellules dendritiques. L’immunogenicité de ces formulations par voie TC a ensuite été évaluée chez la souris. Enfin, nous avons testé la capacité d’une construction liposomique modèle à induire une réponse cellulaire et humorale dans le modèle Hu-SPL-NSG. L’ensemble de ces travaux a fourni une première preuve de concept sur la faisabilité de la vaccination antitumorale TC par des liposomes et de son applicabilité chez l’homme. / A vaccine administration route and the preclinical model in which it is evaluated are major factors that contribute to its success in humans. In this context, the discovery that the transcutaneous (TC) route induces a powerful immune response has made the TC tumor-specific vaccination a promising strategy. Further evaluation of candidate vaccines in a humanized mouse model (Hu-SPL-NSG), more predictive of the human response, is also needed. The objective of this thesis is to (i) optimize liposomal constructs incorporating peptides and a TLR agonist for the TC pathway and (ii) evaluate their immunogenicity in the Hu-SPL-NSG model. Thus, we have varied the nature of the TLR agonist and the deformability of the liposomal vesicle, and have added a dendritic cell targeting molecule. Immunogenicity of these formulations by the TC route was then evaluated in mice. Finally, we tested the ability of a model liposomal construct to induce a cellular and humoral response in the Hu-SPL-NSG model.All of this work provided a first proof of concept on the feasibility of TC tumor-specific vaccination by liposomes and its applicability in humans.