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ANU Library - Publicly Available Digital Theses (ADT) / Australian National University Library - Publicly Available Digital Theses Digital Theses (Australian Digital Theses

Australian National University, Division of Information, Library, danny.kingsley.edu.au, Digital thesis coordinator 31 December 2005 (has links)
ANU Library Australian Digital Thesis Program.
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ANDROID MOBILE APPLICATION FOR HOSPITAL EXECUTIVES

Nalagatla, Vihitha 01 March 2017 (has links)
Hospitals are the largest and most complex organizations where health care is provided. Safe and effective patient care services in hospitals depend on the efficient decisions made by hospital executives. The main task of hospital executives is to ensure the hospital can provide high quality patient care and services. “Android Mobile Application For Hospital Executives” is an Android application used for displaying hospital performance metrics on a daily basis. This application allows hospital executives to review and monitor hospital operational data with ease of access and in a portable manner. Thus, reducing the effort of the hospital executives to perform their tasks.
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Extração de conhecimento simbólico de redes neurais.

Nagamine, Fábio Seitoku 23 February 2005 (has links)
Made available in DSpace on 2016-06-02T19:06:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFSN.pdf: 851804 bytes, checksum: 8737c4ce5b2b975298245b266ca9fc6f (MD5) Previous issue date: 2005-02-23 / The fact that Artificial Neural Networks (ANNs) are not able to explain, in a symbolic way, neither their decisions or the knowledge embedded in its connections and architecture is a well-known limitation. This work investigates several methods of knowledge extraction from ANNs proposed in the literature. More specifically, it focuses on four different approaches for knowledge extraction that are detailed and criticized and, for each of them, discusses a possible implementation. Also, a taxonomy for methods of rule extraction from ANNs, found in the literature, is detailed. An extension of this taxonomy aiming at a more useful, refined and versatile version is proposed. The main goal of the work, however, is to approach knowledge extraction from ANN in a critical way, analyzing each of the four methods concerning, mainly, their scopes, limitations and effective contribution to improving readability and easy understanding. / O fato das Redes Neurais (RNs) serem incapazes de explicar, de maneira simbólica, as decisões fornecidas ou o conhecimento embutido em suas conexões e arquitetura é uma limitação já bastante conhecida. Este trabalho investiga diversos métodos de extração de conhecimento de RNs propostos na literatura. Mais especificamente, o trabalho concentrase em quatro diferentes abordagens para extração de conhecimento que são detalhadas, criticadas e, para cada uma delas, discutida uma possível implementação. Adicionalmente, uma taxonomia para classificação de métodos de extração de regras de RNs, encontrada na literatura, é detalhada. A partir dessa taxonomia, são sugeridos refinamentos que visam tornar a taxonomia mais útil, refinada e versátil. O objetivo principal do trabalho é abordar a extração do conhecimento de RNs de uma maneira crítica, analisando cada uma dos quatro métodos, principalmente com relação ao escopo de atuação, limitações e contribuição efetiva para a melhoria da legibilidade e compreensão das RNs.
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Propuesta de un sistema de control de gestión para ADT Security y Services S.A.

Díaz Vega, Martha 07 1900 (has links)
TESIS PARA OPTAR AL GRADO DE MAGÍSTER EN CONTROL DE GESTIÓN / El trabajo de tesis para obtener el grado académico de Magister en Control de Gestión que se presenta a continuación, consiste en la generación de una propuesta de un Sistema de Control de Gestión para la empresa ADT Security Services S.A., compañía dedicada a entregar soluciones de seguridad a sus clientes, por medio del servicio de monitoreo de alarmas. ADT Security Services S.A., es una empresa internacional, que se incorpora al mercado nacional en el año 2000. Durante estos casi 18 años, la empresa ha ido creciendo y evolucionando, teniendo que constantemente adaptarse a las nuevas exigencias y necesidades del mercado, a través de procesos de mejora continua. A raíz de lo anterior, se hace necesario incorporar un sistema de gestión, que permita dar cumplimiento a la propuesta de valor de forma rentable para la empresa, mediante la definición de objetivos estratégicos y el alineamiento entre estos y las personas que ejecutan la estrategia a través de los distintos procesos. La metodología utilizada, será en base al modelo de Robert S. Kaplan y David P. Norton, desarrollando principalmente tres conceptos: la formulación estratégica, el desarrollo de la estrategia y el alineamiento organizacional. Se comienza este trabajo con el análisis inicial y reformulación, si corresponde, de las declaraciones estratégicas, para continuar con el análisis interno y externo que permitan la obtención de fortalezas, debilidades, oportunidades y amenazas de la empresa. En seguida se lleva a cabo la formulación de la propuesta de valor con la cual la compañía buscará diferenciarse de sus competidores, para posteriormente realizar la definición y análisis crítico del modelo de negocios. Lo anterior será la base para la generación del mapa estratégico el cual permite identificar visualmente los objetivos de la empresa dividiéndolo en cuatro perspectivas: recursos, procesos, clientes y financieros, además de las conexiones de estos. Una vez que queden claros los objetivos estratégicos, se construirá el Cuadro de Mando Integral general de la empresa, definiéndose los indicadores claves para cada objetivo definido en el mapa estratégico, con sus respectivas metas, encargados e iniciativas estratégicas. En seguida se realizará el desdoblamiento estratégico para la gerencia de recursos humanos y la sub gerencia de monitoreo a través de la creación de sus respectivos Tableros de Control y Gestión, los que se van a relacionar con programas de incentivos para los trabajadores basado en el desempeño, con la finalidad de conseguir el alineamiento estratégico de los mismos.
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Aplicação de transistores orgânicos na fabricação de inversores lógicos digitais / Organic transistors and their application in organic logic inverters

Cardoso, Lilian Soares 09 December 2016 (has links)
Esta tese tem por objetivo o desenvolvimento de metodologias eficientes e de baixo custo para ajustar as propriedades elétricas de OFETs de canal p e de canal n, a fim de possibilitar a fabricação do circuito complementar orgânico, semelhante a uma estrutura CMOS. O desempenho do circuito complementar fabricado foi otimizado, e também foi confeccionado por impressão um OFETs de canal operando em baixas tensões. Para a fabricação do CMOS orgânico foi proposto um método baseado na seleção adequada do solvente da camada dielétrica para ajustar o desempenho elétrico dos OFETs de canal p e de canal n. Os solventes, MEK, nBA e DMSO foram selecionados para a dissolução do PMMA por apresentarem diferenças nos valores de momento de dipolo, de ponto de ebulição e de graus de ortogonalidade em relação as camadas semicondutoras de P3HT e de P(NDI2OD-T2) dos OFETs. A análise dos resultados dos OFETs de canal p e de canal n demonstrou que a metodologia proposta é adequada tanto para o ajuste das propriedades elétricas destes dispositivos quanto para a otimização do desempenho dos mesmos. Os melhores desempenhos elétricos para os OFETs de canal p e de canal n foram obtidos quando utilizados o DMSO e o MEK como solventes do PMMA, respectivamente, devido à perfeita ortogonalidade destes solventes em relação às camadas semicondutoras. Os OFETs de canal p que utilizaram o DMSO e os OFETs de canal n que utilizaram o nBA foram os que apresentaram desempenhos elétricos semelhantes, sendo portanto aplicados na fabricação do CMOS. Valores de ganho entre 6,8 e 7,8 e de margem de ruído entre 28,3 V e 34,5 V foram obtidos para inversores complementares fabricados nesta etapa do trabalho. OFETs de canal p utilizando uma blenda de PTAA: diF TES ADT como camada semicondutora, o PEDOT:PSS como eletrodos dreno/fonte e o P(VDF-TrFE-CFE) como camada dielétrica também foram fabricados neste trabalho. A técnica de blade-coating foi utilizada para a deposição dos eletrodos dreno/fonte e da camada semicondutora, ao passo que a técnica de spray-coating foi utilizada para a deposição da camada dielétrica. Da análise dos resultados foi possível inferir que a utilização de um dielétrico com elevada constante dielétrica (K), como o P(VDF-TrFE-CFE), possibilita o funcionamento dos transistores a baixas tensões (≤ 8 V), porém com valores de mobilidade reduzidos devido à elevada desordem dipolar na interface provocada por este dielétrico. Para minimizar esses efeitos, uma fina camada de um polímero fluorado foi depositada entre a camada semicondutora e a dielétrica pela técnica de blade-coating, constituindo assim uma bicamada dielétrica nos OFETs. Dos resultados das medidas elétricas dos OFETs constituídos pela bicamada dielétrica foi observada permanência do funcionamento destes dispositivos a tensões inferiores a 8 V com desempenho elétricos superiores a resultados já publicados na literatura. Por fim, inversores lógicos unipolares com transistores de carga foram fabricados com os OFETs que utilizaram a bicamada dielétrica, sendo obtidos valores de ganho entre 1,2 e 1,6 e de margem de ruído entre 56% e 68,5% de ½ VDD. / This thesis aimed to develop an efficient and low cost method to adjust the electrical properties of p- and n-channel OFETs to allow us to build an organic CMOS and the optimization of printed p-channel OFETs to work at low voltages. We proposed a method to fabricate the organic CMOS, based on the careful selection of dielectric solvent, which was adjusted to obtain the best performance of p- and n-channel OFETs. The dielectric solvents as MEK, nBA and DMSO were selected to dissolve the PMMA dielectric polymer due their different physical properties as dipole moment and boiling point and because they showed slightly different degrees of orthogonality to the P3HT and P(NDI2OD-T2) semiconductor layers of the OFETs. The results showed that the careful selection of the dielectric solvent not only allows to tune the electrical characteristics of the p- and n-channel OFETs, but also to improve the performance of these devices. The best performances were achieved when DMSO and MEK were used as dielectric solvents of the p and n-channel OFETs, respectively, as result of the perfectly orthogonality of these solvents to the semiconductor layers. P-channel OFETs using DMSO and n-channel OFETs using nBA showed similar electrical characteristics and thus, they were used to construct the organic CMOS. The organic complementary inverters showed high gain and noise margin values in the range of 6,8 to 7,8 and 28,3 V to 34,5 V, respectively. Printed p-channel OFETs were also fabricated, in which the blend PTAA:diF TES ADT was used as semiconductor channel, PEDOT:PSS as the drain/source electrodes and P(VDF-TrFE-CFE) as the dielectric layer. The blade-coating technique was used to deposit the source/drain electrodes and the semiconductor layer, while the spray-coating technique was used to deposit the dielectric layer. It was observed that using high-k dielectric as P(VDF-TrFE-CFE) enable to reduce the operating voltage of the OFETs (≤8 V), however, this high-k dielectric also reduced the field effect mobility due the dipolar disorder at the semiconductor/dielectric interface. To minimize the dipolar issue at the interface, we inserted a thin fluoropolymer dielectric layer by blade-coating between the semiconductor and the high-k dielectric layers, thus constituting a dielectric bilayer on the OFETs. From the electrical measurements of the OFETs with the dielectric bilayer, it was observed that the devices were still working at 8 V and they also showed better performance in comparison to results already published. Finally, organic unipolar inverters with load transistors were fabricated using the p-channel OFETs with the dielectric bilayer and they showed reasonable performance, with gain and noise margin in the range of 1,2 to 1,6 and 56% e 68,5% of ½ VDD, respectively.
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Aplicação de transistores orgânicos na fabricação de inversores lógicos digitais / Organic transistors and their application in organic logic inverters

Lilian Soares Cardoso 09 December 2016 (has links)
Esta tese tem por objetivo o desenvolvimento de metodologias eficientes e de baixo custo para ajustar as propriedades elétricas de OFETs de canal p e de canal n, a fim de possibilitar a fabricação do circuito complementar orgânico, semelhante a uma estrutura CMOS. O desempenho do circuito complementar fabricado foi otimizado, e também foi confeccionado por impressão um OFETs de canal operando em baixas tensões. Para a fabricação do CMOS orgânico foi proposto um método baseado na seleção adequada do solvente da camada dielétrica para ajustar o desempenho elétrico dos OFETs de canal p e de canal n. Os solventes, MEK, nBA e DMSO foram selecionados para a dissolução do PMMA por apresentarem diferenças nos valores de momento de dipolo, de ponto de ebulição e de graus de ortogonalidade em relação as camadas semicondutoras de P3HT e de P(NDI2OD-T2) dos OFETs. A análise dos resultados dos OFETs de canal p e de canal n demonstrou que a metodologia proposta é adequada tanto para o ajuste das propriedades elétricas destes dispositivos quanto para a otimização do desempenho dos mesmos. Os melhores desempenhos elétricos para os OFETs de canal p e de canal n foram obtidos quando utilizados o DMSO e o MEK como solventes do PMMA, respectivamente, devido à perfeita ortogonalidade destes solventes em relação às camadas semicondutoras. Os OFETs de canal p que utilizaram o DMSO e os OFETs de canal n que utilizaram o nBA foram os que apresentaram desempenhos elétricos semelhantes, sendo portanto aplicados na fabricação do CMOS. Valores de ganho entre 6,8 e 7,8 e de margem de ruído entre 28,3 V e 34,5 V foram obtidos para inversores complementares fabricados nesta etapa do trabalho. OFETs de canal p utilizando uma blenda de PTAA: diF TES ADT como camada semicondutora, o PEDOT:PSS como eletrodos dreno/fonte e o P(VDF-TrFE-CFE) como camada dielétrica também foram fabricados neste trabalho. A técnica de blade-coating foi utilizada para a deposição dos eletrodos dreno/fonte e da camada semicondutora, ao passo que a técnica de spray-coating foi utilizada para a deposição da camada dielétrica. Da análise dos resultados foi possível inferir que a utilização de um dielétrico com elevada constante dielétrica (K), como o P(VDF-TrFE-CFE), possibilita o funcionamento dos transistores a baixas tensões (≤ 8 V), porém com valores de mobilidade reduzidos devido à elevada desordem dipolar na interface provocada por este dielétrico. Para minimizar esses efeitos, uma fina camada de um polímero fluorado foi depositada entre a camada semicondutora e a dielétrica pela técnica de blade-coating, constituindo assim uma bicamada dielétrica nos OFETs. Dos resultados das medidas elétricas dos OFETs constituídos pela bicamada dielétrica foi observada permanência do funcionamento destes dispositivos a tensões inferiores a 8 V com desempenho elétricos superiores a resultados já publicados na literatura. Por fim, inversores lógicos unipolares com transistores de carga foram fabricados com os OFETs que utilizaram a bicamada dielétrica, sendo obtidos valores de ganho entre 1,2 e 1,6 e de margem de ruído entre 56% e 68,5% de ½ VDD. / This thesis aimed to develop an efficient and low cost method to adjust the electrical properties of p- and n-channel OFETs to allow us to build an organic CMOS and the optimization of printed p-channel OFETs to work at low voltages. We proposed a method to fabricate the organic CMOS, based on the careful selection of dielectric solvent, which was adjusted to obtain the best performance of p- and n-channel OFETs. The dielectric solvents as MEK, nBA and DMSO were selected to dissolve the PMMA dielectric polymer due their different physical properties as dipole moment and boiling point and because they showed slightly different degrees of orthogonality to the P3HT and P(NDI2OD-T2) semiconductor layers of the OFETs. The results showed that the careful selection of the dielectric solvent not only allows to tune the electrical characteristics of the p- and n-channel OFETs, but also to improve the performance of these devices. The best performances were achieved when DMSO and MEK were used as dielectric solvents of the p and n-channel OFETs, respectively, as result of the perfectly orthogonality of these solvents to the semiconductor layers. P-channel OFETs using DMSO and n-channel OFETs using nBA showed similar electrical characteristics and thus, they were used to construct the organic CMOS. The organic complementary inverters showed high gain and noise margin values in the range of 6,8 to 7,8 and 28,3 V to 34,5 V, respectively. Printed p-channel OFETs were also fabricated, in which the blend PTAA:diF TES ADT was used as semiconductor channel, PEDOT:PSS as the drain/source electrodes and P(VDF-TrFE-CFE) as the dielectric layer. The blade-coating technique was used to deposit the source/drain electrodes and the semiconductor layer, while the spray-coating technique was used to deposit the dielectric layer. It was observed that using high-k dielectric as P(VDF-TrFE-CFE) enable to reduce the operating voltage of the OFETs (≤8 V), however, this high-k dielectric also reduced the field effect mobility due the dipolar disorder at the semiconductor/dielectric interface. To minimize the dipolar issue at the interface, we inserted a thin fluoropolymer dielectric layer by blade-coating between the semiconductor and the high-k dielectric layers, thus constituting a dielectric bilayer on the OFETs. From the electrical measurements of the OFETs with the dielectric bilayer, it was observed that the devices were still working at 8 V and they also showed better performance in comparison to results already published. Finally, organic unipolar inverters with load transistors were fabricated using the p-channel OFETs with the dielectric bilayer and they showed reasonable performance, with gain and noise margin in the range of 1,2 to 1,6 and 56% e 68,5% of ½ VDD, respectively.
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Effects of Two-Way Left-Turn Lane on Roadway Safety

Peng, Haolei 22 March 2004 (has links)
Two-way left-turn lane (TWLTL) is one of the common median treatments on the roadway. It is found that a number of crashes reported in Florida State are related to TWLTLs. This research focused on evaluating the effect of TWLTLs on these crashes by using the statistical crash prediction model that can estimate the expected number of crashes on TWLTLs. The crash database for analysis was extracted from the Florida Traffic Crash Database based on the TWLTL section list provided by FDOT and combined with some traffic characteristics. It consisted of totally 1688 sample sections within a three-year period from 1996 to 1998. Based on the crash database, distribution fittings for Poisson, Negative Binomial and Lognormal regression were conducted for average number of crashes. According to the results, statistical crash predictive model was developed to estimate the average number of crashes. Negative Binomial regression was applied with four variables, ADT, access density, posted speed and number of lanes for the TWLTL sections. The regression parameters were estimated by using maximum likelihood method with statistical software. The findings of the analysis indicated that all of the variables adopted in the predictive model significantly affect the occurrence of crashes. And the average number of crashes increases with the increase of ADT, access density and number of lanes, while with the decrease of posted speed. After that, the goodness-of-fit of developed model was performed in term of Pearson's R-square and likelihood ratio index. The results showed that the Negative Binomial regression model could explain the relationship between the variables and the crash occurrence In the third part, an approach was developed to identify the TWLTL sections with safety concern. For an undivided roadway, the approach can be carried out to judge if the TWLTL is appropriate to be selected as the median treatment. During the process, the whole database was divided into six categories according to the posted speed and number of lanes. By adopting the selected percentile value from the distribution of average number of crashes for each category in the predictive model, the critical ADT values according to specific access density, number of lane and posted speed level for each category were calculated and tabulated. With the comparison of the actual ADT value and the critical ADT value, if the actual ADT is higher than the critical value, the TWLTL section is determined as the critical section, which means the TWLTL is not appropriate to be selected as the median treatment in this roadway section.
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Vias de inibição da apoptose em macrófagos J774 infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi / Apoptosis inhibition pathways in J774 macrophages infected by Leishmania (L.) chagasi

Souza, Edna Barbosa de 17 August 2006 (has links)
Macrófagos infectados com Leishmania são protegidos de apoptose, entretanto não se conhece o mecanismo de transdução de sinal intracelular que interfere neste processo de morte. Neste trabalho, células J 774 em cultura, com privação de nutrientes, sofrem apoptose, a qual aumenta na presença dos indutores camptotecina (CPT) ou fator de necrose tumoral recombinante (rTNF). Estas células quando infectadas com amastigotas ou promastigotas de Leishmania (L.) chagasi (5 parasitos/uma célula) são protegidas de apoptose. Avaliando as possíveis vias intracelulares envolvidas nesse processo, observamos que a privação de nutrientes altera o potencial de membrana da mitocôndria, havendo reversão com a infecção tanto com promastigotas e amastigotas, entretanto a reversão da alteração do potencial de membrana induzida por rTNF só foi observada com infecção com promastigotas. Tanto a atividade de caspase 3, como a detecção de caspase 3 clivada induzidas por H202 são revertidas com a infecção com promastigotas ou amastigotas. Quando analisamos a expressão de poli (ADP ribose) polimerase (PARP), em relação às células sem indução, a indução por CPT não levou ao aumento da PARP de 116 kDa, mas, aumento da banda de 24 kDA. Por outro lado, a infecção por amastigota de Leishmania (L.) chagasi em células J774 levou à diminuição da expressão de PARP de 116 kDa, mas aumento da de 24 kDa. Nas células infectadas por promastigotas de Leishmania (L.) chagasi, observamos uma diminuição da banda de 116 kDa, aparecimento de uma molécula de 89kDa e diminuição da expressão da de 24 kDa. Nas células sob indução por CPT, a infecção levou a resultados similares, exceto a diminuição da molécula de 24 kDa quando infectado por amastigota. Avaliando-se a influência da proteína do choque térmico de 83 kDa de Leishmania infantum, como possível fator que interferiria no processo de apoptose, observamos que a fagocitose de bactérias Escherichia coli (M15) contendo plasmídio com gene de HSP83 expressando essa proteína, leva a diminuição da apoptose nessas células, mesmo quando induzidas por CPT ou rTNF. Nossos dados mostram que a infecção de macrófagos J774 in vitro por Leishmania (L.) chagasi, interfere no processo de apoptose afetando diversas vias de sinalização intracelular de apoptose, tanto extrínsecas quanto intrínsecas, sendo que promastigota é mais efetiva em inibir apoptose nesta linhagem macrofágica. / Macrophages infected by Leishmania are protected from apoptosis, however the mechanism of intracellular signal transduction that interferes in this death process remains unknown. In this work, J774 cells in culture, under nutrient deprivation undergo apoptosis, which is increased in the presence of inducers: camptothecin (CPT) or recombinant tumoral necrosis factor (rTNF). These cells infected by amastigotes or promastigotes of Leishmania (L.) chagasi (5 parasites per cell) are protected from apoptosis. Evaluating the possible intracellular pathways involved in this process, we observed nutrient deprivation alters the mitochondrial membrane potential, reversed by both amastigote and promastigote infection, in contrast, mitochondrial membrane potential was altered by rTNF and it was reversed only by promastigotes. Both caspase 3 activity and caspase 3 cleavage detection induced by H2O2 are reversed with amastigote or promastigote infection. When we analysed the expression of poly (ADP-ribose) polymerase, related to no induced cells . CPT induction didnLt increase 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Otherwise, Leishmania (L.) chagasi amastigote infection in J774 cells decreased 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Incells infected by Leishmania (L.) chagasi , we observed a decrease of 116 kDa fragment, appearance of a 89 kDa fragment and a decreasing of a 24 kDa fragment. In the cells under CPT induction similar results were found, except a decreasing of a 24 kDa when infected by amastigote. Evaluating the Leishmania (L.) infantum Heat Shock Protein of 83 kDa, as a possible factor that interferes in the apoptosis process, we observed that a phagocytosis of Escherichia coli (M15) bacteria with a HSP83 gene within a plasmid expressing this protein induced by isopropyl β - D- tiogalactopiranosideo (IPTG), considerably diminished apoptosis in these cells even when induced by CPT or rTNF. Our data show that Leishmania (L.) chagasi infection in J774 macrophages in vitro notoriously interferes in the apoptosis process affecting several intracellular pathways involved in both extrinsic and intrinsic pathways, more prominently with promastigote in this macrophage cell lineage.
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A Refinement-Based Methodology for Verifying Abstract Data Type Implementations

Divakaran, Sumesh January 2015 (has links) (PDF)
This thesis is about techniques for proving the functional correctness of Abstract Data Type (ADT) implementations. We provide a framework for proving the functional correctness of imperative language implementations of ADTs, using a theory of refinement. We develop a theory of refinement to reason about both declarative and imperative language implementations of ADTs. Our theory facilitates compositional reasoning about complex implementations that may use several layers of sub-ADTs. Based on our theory of refinement, we propose a methodology for proving the functional correctness of an existing imperative language implementation of an ADT. We propose a mechanizable translation from an abstract model in the Z language to an abstract implementation in VCC’s ghost language. Then we present a technique to carry out the refinement checks completely within the VCC tool. We apply our proposed methodology to prove the functional correctness of the scheduling-related functionality of FreeRTOS, a popular open-source real-time operating system. We focused on the scheduler-related functionality, found major deviations from the intended behavior, and did a machine-checked proof of the correctness of the fixed code. We also present an efficient way to phrase the refinement conditions in VCC, which considerably improves VCC’s performance. We evaluated this technique on a simplified version of FreeRTOS which we constructed for this verification exercise. Using our efficient approach, VCC always terminates and leads to a reduction of over 90% in the total time taken by a naive check, when evaluated on this case-study.
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Vias de inibição da apoptose em macrófagos J774 infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi / Apoptosis inhibition pathways in J774 macrophages infected by Leishmania (L.) chagasi

Edna Barbosa de Souza 17 August 2006 (has links)
Macrófagos infectados com Leishmania são protegidos de apoptose, entretanto não se conhece o mecanismo de transdução de sinal intracelular que interfere neste processo de morte. Neste trabalho, células J 774 em cultura, com privação de nutrientes, sofrem apoptose, a qual aumenta na presença dos indutores camptotecina (CPT) ou fator de necrose tumoral recombinante (rTNF). Estas células quando infectadas com amastigotas ou promastigotas de Leishmania (L.) chagasi (5 parasitos/uma célula) são protegidas de apoptose. Avaliando as possíveis vias intracelulares envolvidas nesse processo, observamos que a privação de nutrientes altera o potencial de membrana da mitocôndria, havendo reversão com a infecção tanto com promastigotas e amastigotas, entretanto a reversão da alteração do potencial de membrana induzida por rTNF só foi observada com infecção com promastigotas. Tanto a atividade de caspase 3, como a detecção de caspase 3 clivada induzidas por H202 são revertidas com a infecção com promastigotas ou amastigotas. Quando analisamos a expressão de poli (ADP ribose) polimerase (PARP), em relação às células sem indução, a indução por CPT não levou ao aumento da PARP de 116 kDa, mas, aumento da banda de 24 kDA. Por outro lado, a infecção por amastigota de Leishmania (L.) chagasi em células J774 levou à diminuição da expressão de PARP de 116 kDa, mas aumento da de 24 kDa. Nas células infectadas por promastigotas de Leishmania (L.) chagasi, observamos uma diminuição da banda de 116 kDa, aparecimento de uma molécula de 89kDa e diminuição da expressão da de 24 kDa. Nas células sob indução por CPT, a infecção levou a resultados similares, exceto a diminuição da molécula de 24 kDa quando infectado por amastigota. Avaliando-se a influência da proteína do choque térmico de 83 kDa de Leishmania infantum, como possível fator que interferiria no processo de apoptose, observamos que a fagocitose de bactérias Escherichia coli (M15) contendo plasmídio com gene de HSP83 expressando essa proteína, leva a diminuição da apoptose nessas células, mesmo quando induzidas por CPT ou rTNF. Nossos dados mostram que a infecção de macrófagos J774 in vitro por Leishmania (L.) chagasi, interfere no processo de apoptose afetando diversas vias de sinalização intracelular de apoptose, tanto extrínsecas quanto intrínsecas, sendo que promastigota é mais efetiva em inibir apoptose nesta linhagem macrofágica. / Macrophages infected by Leishmania are protected from apoptosis, however the mechanism of intracellular signal transduction that interferes in this death process remains unknown. In this work, J774 cells in culture, under nutrient deprivation undergo apoptosis, which is increased in the presence of inducers: camptothecin (CPT) or recombinant tumoral necrosis factor (rTNF). These cells infected by amastigotes or promastigotes of Leishmania (L.) chagasi (5 parasites per cell) are protected from apoptosis. Evaluating the possible intracellular pathways involved in this process, we observed nutrient deprivation alters the mitochondrial membrane potential, reversed by both amastigote and promastigote infection, in contrast, mitochondrial membrane potential was altered by rTNF and it was reversed only by promastigotes. Both caspase 3 activity and caspase 3 cleavage detection induced by H2O2 are reversed with amastigote or promastigote infection. When we analysed the expression of poly (ADP-ribose) polymerase, related to no induced cells . CPT induction didnLt increase 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Otherwise, Leishmania (L.) chagasi amastigote infection in J774 cells decreased 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Incells infected by Leishmania (L.) chagasi , we observed a decrease of 116 kDa fragment, appearance of a 89 kDa fragment and a decreasing of a 24 kDa fragment. In the cells under CPT induction similar results were found, except a decreasing of a 24 kDa when infected by amastigote. Evaluating the Leishmania (L.) infantum Heat Shock Protein of 83 kDa, as a possible factor that interferes in the apoptosis process, we observed that a phagocytosis of Escherichia coli (M15) bacteria with a HSP83 gene within a plasmid expressing this protein induced by isopropyl β - D- tiogalactopiranosideo (IPTG), considerably diminished apoptosis in these cells even when induced by CPT or rTNF. Our data show that Leishmania (L.) chagasi infection in J774 macrophages in vitro notoriously interferes in the apoptosis process affecting several intracellular pathways involved in both extrinsic and intrinsic pathways, more prominently with promastigote in this macrophage cell lineage.

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