O objetivo do trabalho foi avaliar a capacidade de cepas de bactérias ácido-láticas (BAL) em remover a aflatoxina M1 (AFM1) em solução tampão fosfato salina (TFS) e em amostras de leite. Nos ensaios com TFS, verificou-se a influência do tempo de contato (15 min. ou 24 horas) entre as células de sete cepas de BAL e AFM1, as diferenças entre a eficiência de remoção das bactérias viáveis e inviabilizadas termicamente, e a estabilidade do complexo BAL/AFM1 formado. As três cepas de BAL com maior percentual (> 33%) de remoção da AFM1 nos ensaios com TFS foram re-avaliadas utilizando-se leite UHT (ultra-high-temperature) desnatado artificialmente contaminado com AFM1. Para isso, foram utilizadas somente células inviabilizadas termicamente, verificando-se o efeito da temperatura (4ºC ou 37ºC) sobre a capacidade de remoção da toxina por 15 minutos. A remoção média da AFM1 pelas cepas de BAL em TFS variou entre 5,60±0,45 e 45,67±1,65% (n=3), sendo que as células inviáveis obtiveram percentuais de remoção de AFM1 significativamente maiores que as células viáveis, em ambos os tempos de contato analisados (15 min. ou 24 horas), não havendo diferença significativa entre os tempos. Observou-se que o complexo BAL/AFM1 obtido nos ensaios com TFS é instável, pois 40,57±4,66 a 87,37±1,82% da AFM1 retida pela bactéria foram recuperados em solução após a lavagem do complexo com TFS. As três cepas de BAL com maior percentual de remoção da AFM1 em TFS (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus e Bifidobacterium lactis) não apresentaram diferenças significativas nos ensaios com leite UHT a 37ºC. Somente B. lactis apresentou maior capacidade de remover a AFM1 do leite UHT a 4ºC. Os resultados demonstraram que a remoção de AFM1 empregando-se as BAL em alimentos é viável para reduzir as concentrações da toxina a níveis seguros. Entretanto, estudos adicionais são necessários a fim de investigar os mecanismos envolvidos na remoção da toxina pelas BAL com vistas à aplicação em indústrias de alimentos. / The purpose of this study was to evaluate the ability of strains of lactic acid bacteria (LAB) to remove aflatoxin M1 (AFM1) in phosphate buffer saline (PBS) and in milk samples. In the assays with PBS, the influence of contact time (15 min. or 24 hours) between the cells of seven LAB strains and AFM1 was evaluated, as well as the differences between the removal efficiency of viable and non-viable (heat-killed) bacteria, and the stability of AFM1/LAB complex produced. The three LAB strains with the highest percentage (> 33%) of AFM1 removal in the tests with PBS were reevaluated using UHT (ultra-high-temperature) skimmed milk spiked with AFM1. For these assays, only non-viable bacterial cells were used for checking the effect of temperature (4ºC or 37ºC) on the toxin removal capacity during 15 min. The mean AFM1 removal by LAB strains in PBS ranged from 5.60±0.45 and 45.67±1.65% (n=3). Non-viable cells showed AFM1 removal percentages significantly higher than viable cells in both contact times (15 min. or 24 hours), although there were not significant differences between these contact times. The AFM1/LAB complex resulted from the tests with PBS was unstable, as 40.57±4.66 to 87.37±1.82% of AFM1 retained by the bacteria were recovered in solution after washing the complex with PBS. The three LAB strains with the highest percentage of AFM1 removal in the PBS assays (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus and Bifidobacterium lactis) showed no significant differences in the UHT skimmed milk assays at 37ºC. Only B. lactis had greater ability to remove AFM1 in UHT milk at 4ºC. The results demonstrated that the removal of AFM1 by using LAB in foods is viable to reduce the toxin concentrations until safe levels. However, additional studies are needed to investigate the mechanisms involved in the toxin removal by LAB aiming its application in food industries.

Foi pesquisada a habilidade de carunchos Sitophilus zeamais em veicular esporos de Aspergillus flavus e Fusarium verticillioides e a conseqüente produção de micotoxinas. Grãos de milho foram mantidos em frascos conectados por uma mangueira formando um sistema fechado (lados A e B) e divididos em seis grupos: G1 (milho + caruncho - Lado A); G2 (Milho + A. flavus - Lado A); G3 (milho + A. flavus + caruncho - Lado A); G4 (milho + F. verticillioides - Lado A), G5 (milho + F. verticillioides + caruncho - Lado A) e G6 (milho + A. flavus + F. verticillioides + caruncho - Lado A). O lado B continha grãos estéreis. Após 10, 20 e 30 dias de incubação foram realizadas: pesagem, atividade de água, microbiota fúngica, determinação de micotoxinas, análise nutricional, microscopia eletrônica de varredura e PCR-RT em tempo real. Frente aos resultados obtidos constata-se a importância do Sitophillus zeamais como vetor de fungos e a importância de boas práticas de manipulação e armazenamento de grãos, visando reduzir os riscos de contaminação e deterioração. / The weevils Sitophilus zeamais ability was examined to propagate spores of Aspergillus flavus and Fusarium verticillioides and the production of mycotoxins. Corn grains was conserved in flasks connected by a rubber to form a closed system (side A and B) and divided in six groups: G1 (corn + weevil - side A); G2 (corn + A. flavus - side A); G3 (corn + A. flavus + weevil - side A); G4 (corn + F. verticillioides - side A), G5 (corn + F. verticillioides + weevil - side A) e G6 (corn + A. flavus + F. verticillioides + weevil - side A). The side B contained sterile grains. After 10, 20 and 30 days of incubation were realized: weighing, activity water, mycoflora, determination of mycotoxins, nutritional analysis, scanning electron microscope and Real time PCR-RT. In front of the results was observed the importance of Sitophilus zeamais like a fungus vector and the importance of Good Manufacturing Practices and Stores of grains, to reduce the risks of contamination and deterioration.

O objetivo da pesquisa foi avaliar os efeitos da AFB1 e FB1, isoladas e associadas e com ou sem a inclusão de um antioxidante (cúrcuma) em frangos de corte, utilizando-se os seguintes tratamentos (T): T1 (controle): 0 AFB1 + 0 FB1 + 0 Cúrcuma; T2: 0 AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T3: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Cúrcuma; T4: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T5: 0,5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 0 Cúrcuma; T6: 0,5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T7: 0,5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Cúrcuma; T8: 0,5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma. Os parâmetros avaliados incluíram: conversão alimentar, ganho de peso, consumo alimentar, proteínas séricas, hematologia, enzimas hepáticas, histopatologia de vísceras, resposta vacinal, resíduos de aflatoxinas e fumonisina em vísceras e músculos. Os dados foram analisados como um fatorial 2 x 2 x 2 por análise de variância. Não houve interação significativa para os três fatores analisados no desempenho zootécnico, porém houve diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. A AST e LDH foram as únicas variáveis significativas para a interação de todos os fatores (AFB1, FB1 e CMT), porém as outras variáveis, exceto a GGT, apresentaram diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. As lesões histopatológicas no fígado, rim e bursa de Fabricius foram aumentando gradualmente do tratamento controle até o tratamento contendo adição de aflatoxina e fumonisina, com ou sem cúrcuma, sendo que o efeito mais severo foi observado nos órgãos desses tratamentos. Não houve diferença significativa com a inclusão da cúrcuma. Não houve nenhuma variável significativa para a interação de todos os fatores avaliados para a biometria dos órgãos, porém fígado, rim e coração apresentaram diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. Nenhuma variável foi significativa para a interação de todos os fatores avaliados para o hemograma aos 21 dias, porém aos 42 dias, leucócitos, linfócitos e basófilos apresentaram diferença significativa para a interação de todos os fatores. Não houve diferença estatística para a interação dos três fatores analisados para os títulos de anticorpos para a doença de Newcastle. Os resíduos de FB2 no fígado e AFB2 no músculo peitoral foram as únicas variáveis significativas para a interação de todos os fatores analisados. Os resultados obtidos indicam que não houve efeito da cúrcuma na diminuição dos efeitos deletérios da aflatoxina e fumonisina. / The objective of this research project was to evaluate the effects of AFB1 and FB1, alone or in combination and associated or not with an antioxidant (turmeric) in broiler chickens, using the following treatments (T): T1 (control): 0 AFB1 + 0 FB1 + 0 Turmeric; T2: 0 AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T3: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Turmeric; T4: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T5: 0.5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 0 Turmeric; T6: 0.5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T7: 0.5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Turmeric; T8: 0.5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Turmeric. The parameters evaluated included: feed conversion, weight gain, food intake, serum proteins, hematology, liver enzymes, histopathology of viscera, vaccine response and residues of aflatoxin and fumonisin in tissues of viscera and muscles. Data were analyzed as a 2 x 2 x 2 factorial by analysis of variance. There was no significant interaction for the three analyzed factors on the performance, but there were significant differences in the diets containing aflatoxin when compared to the other diets, for all variables analyzed. AST and LDH were the only significant variables for the interaction of all factors (AFB1, FB1 e CMT), but other variables, with the exception of GGT, showed significant difference in diets containing aflatoxin when compared to other diets for all the variables analyzed. Histopathological lesions in the liver, kidney and bursa of Fabricius were gradually increased from the control treatment to aflatoxin and fumonisin treatment, with or without turmeric, with the most severe effect being observed in the organs of these treatments. There was no significant variable for the interaction of all factors evaluated for organ biometry, but liver, kidney and heart showed a significant difference in diets containing aflatoxin when compared to other diets for all variables analyzed. No variable was significant for the interaction of all factors evaluated for the blood test at 21 days, but at 42 days leukocytes, lymphocytes and basophils showed significant differences for the interaction of all factors. There was no statistical difference for the interaction of all factors analyzed for antibody titers to Newcastle disease. The residues of FB2 in the liver and AFB2 in the pectoral muscle were significant for the interaction of all the factors. The results showed no effect of turmeric powder in reducing the deleterious effects of aflatoxin and fumonisin.

O aproveitamento de células vivas de leveduras – Saccharomyces cerevisiae – como probiótico, e, componentes extraídos da parede celular desta levedura, como aditivos, para desejadas funções, têm sido objeto de interesse cada vez maior, pelos resultados promissores até então obtidos e, concomitantemente, pelo excedente de biomassa de leveduras gerado pela indústria de etanol e cerveja no Brasil. Por estes motivos, foram conduzidos dois experimentos, um com o objetivo de investigar a possibilidade de utilizar o milho como um veículo alternativo para a levedura S. cerevisiae – como probiótico, e outro, com o propósito de estudar a capacidade de reduzir danos promovidos pelas aflatoxinas, das leveduras vivas, das termolisadas e mananoligossacarídeos. O primeiro experimento foi montando em um arranjo fatorial 2x2x5, constituído de duas concentrações de leveduras (1 e 2%), grãos de milho com dois teores de umidade (16 e 20%) e 5 períodos de armazenamento (0, 15, 30, 90 e 110 dias), distribuído ao acaso, com 4 repetições. O outro estudo, foi um bioensaio, conduzido durante 28 dias, com ratos Wistar, em um experimento com delineamento inteiramente casualizado, com 7 tratamentos e 5 repetições. A concentração de células aplicadas nos grãos de milho não influenciou a viabilidade das leveduras durante o armazenamento. A umidade do substrato interferiu no desenvolvimento da viabilidade, e que, em substratos com maiores teores de umidade foram observadas menores médias de viabilidade durante o armazenamento. A viabilidade das células de leveduras permaneceu constante por 30 dias e aos 90 dias em armazenamento foram observadas reduções no número de células viáveis. As leveduras apresentaram viabilidade de 70% aos 110 dias em armazenamento. A inoculação de leveduras vivas em grãos de milho, visando a sua utilização como probiótico, é uma técnica viável. Os tratamentos com levedura termolisada e mananoligossacarídeos não foram capazes de reduzir os danos promovidos pelas aflatoxinas em nível de hepatócitos. As leveduras vivas foram capazes de reduzir os danos promovidos pelas aflatoxinas em nível celular. / The utilization of live cells of yeasts - Saccharomyces cerevisiae - as probiotic, and, extracted components of the cellular wall of this yeast, as addictive, to desired functions, have been object of interest, due the promising results until then obtained and, simultaneously, for the excess of biomass of yeasts generated by the etanol and beer industry in Brazil. For these reasons, two experiments were led, one with the objective of investigate the possibility to use the corn as an alternative vehicle for the yeast S. cerevisiae - as probiotic, and other, with the purpose of studying the capacity to reduce damages promoted by the aflatoxins of the live yeasts, termoliseds and mananoligossacarides. The first experiment was mounted in a factorial arrangement 2x2x5, constituted of two concentrations of yeasts (1 and 2%), corn grains with two moisture contents (16 and 20%) and 5 storage periods (0, 15, 30, 90 and 110 days), random arrangement, with 4 replications. The other study, was a bioassay, led during 28 days, with rats Wistar, in completely randomzed desing, with 7 treatments and 5 repetitions. The concentration of applied cells in the corn grains did not influence the viability of the yeasts during the storage. The moisture of the substrate interfered in the development of the viability, and that in substrate with bigger moisture contents smaller viability averages were observed during the storage. The viability of the cells of yeasts remains constant for 30 days and to the 90 days in storage reductions were observed in the number of viable cells. The yeasts presented viability from 70% to the 110 days in storage. The inoculation of live yeasts in corn grains, aiming its use as probiotic, is a viable technique. The treatments with yeast termolised and mananoligossacarídes were not capable of reducing the damages promoted by the aflatoxins in hepatocites level. The live yeasts were capable to reduce the damages caused by the aflatoxins in cellular level.

As aflatoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos toxigênicos das espécies Aspergillus flavus, A. parasiticus e A. nomius. São amplamente encontradas em matérias-primas de rações animais, em especial o milho, e têm a capacidade de levar a quadros clínicos agudos ou crônicos de aflatoxicose, caracterizados por, desde a morte por hepatite aguda até a diminuição do desempenho zootécnico por diminuição de peso ou consumo de ração. A aflatoxina B1 tem sido considerada o metabólito mais perigoso, uma vez que possui alto poder hepatotóxico, além de ser mutagênica e carcinogênica. Atualmente a ciência trabalha rumo à descoberta de substâncias que sejam indicadoras confiáveis de contaminação por componentes tóxicos em homens e em animais, os chamados biomarcadores, que medem uma mudança celular, biológica ou molecular em um meio biológico (tecidos humanos, células ou fluídos) que fornecem informação a respeito de uma doença ou exposição a uma determinada substância. Sua detecção pode auxiliar na identificação, no diagnóstico e no tratamento de indivíduos afetados que podem estar sob risco, mas ainda não exibem os sintomas. Sendo assim, com o auxílio de análises que confirmem a patogenicidade da aflatoxina B1 (determinação da atividade de enzimas hepáticas, da avaliação da função renal, de hematologia, da dosagem de minerais séricos e da avaliação de desempenho zootécnico), o objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicabilidade da determinação de resíduos hepáticos de aflatoxinas e do aduto sérico AFB1-lisina na avaliação da eficiência de adsorventes em frangos de corte. Utilizou-se 240 pintos de 1 dia, machos, de linhagem Cobb 500®, distribuídos aleatoriamente em 4 dietas experimentais: Controle Negativo: Ração Basal (RB); RB + 0,5% de adsorvente ((aluminosilicato de cálcio e sódio hidratado/HSCAS); RB + 0,5% de adsorvente + 500 µg de AFB1/kg de ração e; RB + 500 µg de AFB1/kg de ração.Os resultados experimentais mostram que o efeito deletério da AFB1, na concentração utilizada, é mais pronunciado que os efeitos protetores do HSCAS sobre os parâmetros de saúde dos animais. Não houve ação efetiva do adsorvente utilizado sobre quase nenhuma variável estudada, apenas para a redução das lesões histopatológicas em fígado, na redução da concentração de gama-glutamiltransferase (GGT), fósforo e aumento da contagem de hemáceas aos 21 dias de idade. Porém, influenciou positivamente a redução de resíduos hepáticos de aflatoxina G1 aos 21 dias e as concentrações de AFB1-lisina sérica aos 21 e aos 42 dias de idade. Estes dados são importantes porque permite concluir que, embora sintomatologicamente o HSCAS não tenha exercido função efetiva, molecularmente foi capaz de mostrar de eficácia sobre os alguns biomarcadores de aflatoxinas no organismo das aves / Aflatoxins are secondary metabolites produced by toxigenic fungi of the species Aspergillus flavus, A. parasiticus and A. nomius. They are widely found in raw materials of animal feed, in particular corn, and have the ability to lead to clinical cases of acute or chronic aflatoxicosis, characterized by acute hepatites leading to death until lower performance by decreased weight or feed intake. Aflatoxin B1 has been considered the most dangerous metabolite, since it has high hepatotoxic power, besides being mutagenic and carcinogenic. Nowadays science works toward the discovery of substances that are reliable indicators of contamination by toxic components in humans and animals, called biomarkers, which measure a cell change, biological or molecular in a biological medium (human tissues, cells or fluids) that provide information regarding a disease or exposure to a particular substance. Its detection can assist in the identification, diagnosis and treatment of affected individuals who may be at risk, but still do not exhibit symptoms. Thus, with the help of analysis that confirm aflatoxin B1 pathogenicity (determination of liver enzymes activity, assessment of renal function, hematology, dosage of serum minerals and evaluation of animal performance), the objective of this work was to evaluate the applicability of the determination of aflatoxin liver residues and serum AFB1-lysine adduct in the evaluation of the adsorbents efficiency in broiler chickens. Two hundred and fourty day-old male chicks, Cobb 500® lineage, were randomly distributed into 4 experimental diets: Negative Control: Basal Feed (BF); BF + 0.5% adsorbent (hydrated sodium calcium aluminosilicate/HSCAS); RB + 0.5% adsorbent + 500 µg AFB1/kg of feed; and RB +500 µg AFB1/kg of feed. The experimental results show that the deleterious effect of AFB1, at the concentration used, is more pronounced that the protective effects of HSCAS on animal health parameters. There was no effective action of the adsorbent used on almost any variable studied, only for the reduction of the histopathological lesions in the liver, reduction of gamma-glutamyltransferase (GGT) and phosphorus concentration, and increased count of red blood cells at 21 days. However, influenced positively the reduction of aflatoxin G1 liver residues at 21 days and the concentrations of serum AFB1-lysine at 21 and 42 days. These are important data because they allow to conclude that, although symptomatically the HSCAS has not exercised effective function, molecularly was able to show some efficacy on aflatoxin biomarkers in the birds body

O projeto avaliou os efeitos da aflatoxina B1 (AFB1) e fumonisina B1 (FB1), isoladas e associadas, sobre a produtividade e a qualidade dos ovos de codornas poedeiras (Coturnix coturnix japonica). Duzentas e oitenta e oito aves, adquiridas com idade de 8 semanas, foram subdivididas em 6 grupos experimentais (48 aves por grupo) e submetidas a 6 tipos de tratamentos, constituídos por rações contendo AFB1 e FB1 nas concentrações: (0 AFB1+0 FB1), (0 AFB1+10 mg/kg FB1), (50 &microg/kg AFB1+0 FB1), (50 µg/kg AFB1+10 mg/kg FB1), (200 µg/kg AFB1+0 FB1), e (200 µg/kg AFB1+10 mg/kg FB1). As aves foram alimentadas durante 140 dias (5 ciclos de 28 dias). Os parâmetros de produtividade foram avaliados semanalmente, através do consumo de ração, peso dos ovos, índice de conversão alimentar e curva de produção. A qualidade dos ovos foi avaliada a cada ciclo de 28 dias, cada ovo produzido nesse dia foi analisado individualmente para a determinação do valor de unidade Haugh, gravidade específica e percentual do peso da casca. Ao final do 5º período experimental, o peso médio dos ovos foi significativamente menor (p < 0,05) nas aves alimentadas com 10 mg FB1/kg, 50 &microg/kg AFB1, 200 µg/kg AFB1 e com o tratamento de associação de 10 mg FB1/kg + 50 µg/kg AFB1. Em relação à produção de ovos, as codornas alimentadas com 10 mg FB1/kg apresentaram uma diminuição significativa (p < 0,05), ao final do 3º, 4º e 5º ciclos. O consumo médio diário de ração foi significativamente menor (p< 0,05) nas aves alimentadas com 10 mg FB1/kg, ao final do 4º e 5º ciclos, enquanto que os níveis de 50 ou 200 µg/kg AFB1 provocaram uma diminuição significativa (p < 0,05), ao final do 5º período experimental. Ao final do 1º, 2º e 5º ciclos, o consumo médio de ração foi significativamente menor (p< 0,05) nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg + 50 µg/kg AFB1. Os índices de conversão alimentar e os valores de Unidades Haugh não foram afetados (p > 0,05) pelos tratamentos. A gravidade específica dos ovos foi significativamente menor (p < 0,05) ao final do 5º ciclo, nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg + 200 µg/kg AFB1. Observou-se uma diminuição significativa (p < 0,05) na porcentagem do peso de casca, nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg ao final do 1º ciclo, entretanto, houve um aumento significativo (p < 0,05) nos tratamentos com 200 µg/kg AFB1 e também com 10 mg/kg FB1 + 50 µg/kg AFB1 ao final do 1º ciclo. Já ao final do 5º ciclo, o aumento na porcentagem de peso de casca (p < 0,05) ocorreu somente nas aves tratadas com 10 mg/kg FB1 + 200 µg/kg AFB1. Os resultados demonstraram que a administração prolongada de FB1 e AFB1, isoladas ou associadas nos níveis utilizados no presente experimento, pode causar prejuízos econômicos aos produtores de ovos de codornas. / This study evaluated the individual and combined effects of aflatoxin B1 (AFB1) and fumonisin B1 (FB1) on egg quality and performance of laying Japanese quail (Coturnix coturnix japonica). Two hundred twenty-eight birds were purchased at 8 week of age and randomly distributed into 6 experimental groups and given rations containing AFB1 and FB1 at the following levels: (0 AFB1+0 FB1), (0 AFB1+10 mg/kg FB1), (50 &microg/kg AFB1+0 FB1), (50 &microg/kg AFB1+10 mg/kg FB1), (200 &microg/kg AFB1+0 FB1), e (200 &microg/kg AFB1+10 mg/kg FB1). The birds were fed for 140 days (5 28-day laying periods). Each treatment consisted of four replicates of twelve quail. Egg production and individual egg weight were checked daily. Feed consumption and feed utilization were determined weekly. Eggs laid in the last day of each 28-day laying period were collected and submitted to individual analysis for specific gravity, Haugh units and percent egg shell. Results showed that average egg weight at the end of the fifth cycle was significantly lower (p < 0,05) for groups fed 10 mg FB1/kg, 50 &microg/kg AFB1, 200 &microg/kg AFB1 and also for the group fed 10 mg FB1/kg + 50 &microg/kg AFB1. Average egg production significantly decreased (p < 0,05) for groups fed 10 mg FB1/kg by the end of the third, fourth and fifth cycles. Feed consumption was significantly lower (p < 0,05) for group exposed to 10 mg FB1/kg, by the end of fourth and fifth cycles, whereas birds fed 50 or 200 &microg/kg AFB1 showed a significant decrease (p < 0,05) on feed consumption, by the end of fifth cycle. Birds exposed to 10 mg FB1/kg + 50 &microg/kg AFB1 also showed lower values (p < 0,05) of feed consumption, by the end of first, second and fifth cycles. Feed utilization and Haugh units were not affected (p > 0,05) by AFB1 and FB1. Average egg specific gravity was significantly lower (p < 0,05) for group fed 10 mg FB1/kg + 200 &microg/kg AFB1, by the end of fifth cycle. Percent egg shell was significantly lower (p < 0,05) for group exposed to 10 mg FB1/kg, by the end of the first cycle, however, birds exposed to 200 &microg/kg AFB1 and also to 10 mg/kg FB1 + 50 &microg/kg AFB1, showed a significantly increase (p < 0,05) of percent egg shell, by the of the first cycle. Percent egg shell was significantly higher (p < 0,05) for group fed 10 mg/kg FB1 + 200 &microg/kg AFB1 , by the end of fifth cycle. The results obtained in the present study showed that the prolonged administration of FB1 and AFB1, singly or combined at the levels checked, may cause economic losses to the quail egg producers.

Mutação 249Ser no TP53 no Carcinoma Hepatocelular (CHC), frequente em países da África e Ásia, é uma evidência molecular de exposição à aflatoxina. O objetivo deste estudo é analisar a freqüência de 249Ser em 74 amostras de CHC no Brasil. A mutação foi analisada por RFLP e sequenciamento. A presença de vírus da hepatite B (VHB) foi analisada por PCR em tempo real. 249Ser foi encontrada em 13/74 (28%) e VHB em 13/74 (16%). A mutação foi encontrada em maior freqüência em tumores indiferenciados (OR = 2,415, IC = 1,001 - 5,824). O tamanho médio de tumores com 249Ser foi de 9,4 cm contra 5,5 cm de amostras sem a mutação (p=0,012). Não foi encontrada relação entre VHB e 249Ser. Os resultados indicam que 249Ser é um fator importante na carcinogênese do CHC no Brasil sendo associada à uma forma maior e menos diferenciada de tumor. / TP53 249Ser mutation has been proved a molecular evidence for aflatoxin-related Hepatocellular Carcinoma (HCC) and is frequent in Africa and Asia. The aim of our study was to analyze the frequency of 249Ser mutation in HCC from Brazil. We studied 74 samples of paraffin embedded HCC. 249Ser mutation was analyzed by RFLP and sequencing. Presence of HBV DNA was determined by Real-Time PCR. 249Ser was found in 21/74 (28%) samples while HBV DNA was found in 13/74 (16%). Poorly differentiated HCC was more likely to have 249Ser mutation (OR = 2.415, IC = 1.001 - 5.824). The mean tumor size of 249Ser HCC was 9.4 cm versus 5.5cm on wild type (p=0.012). HBV DNA was not related with 249Ser. Results indicate that 249Ser is an important factor of HCC carcinogenesis in Brazil and is associated with large and poorly differentiated tumors.

La mutation R249S (mutant p.R249S) du gène TP53, caractéristique de l'exposition à l'aflatoxine B1 (AFB1), est la plus fréquente dans les carcinomes hépatocellulaires (CHC) et est dans la plupart des cas associée à une infection chronique par le virus de l'hépatite B (VHB). En effet, il existe une synergie entre ces deux facteurs de risque, augmentant ainsi le risque de développer un CHC. Dans une première partie, nous avons étudié les mécanismes moléculaires de cette synergie dans différents modèles cellulaires puis dans une deuxième partie nous avons utilisé une approche épidémiologique pour étudier l'interaction entre la mutation R249S et le VHB. Nous avons tout d'abord montré que p.R249S avait perdu ses fonctions liées à p53wt. D'autre part, p.R249S était capable de former un complexe protéique avec l'oncoprotéine virale HBx dans les cellules de CHC PLC/PRF/5. Dans la deuxième partie de ce travail, nos résultats montrent que la mutation R249S est détectable dans l'ADN du sérum de sujets asymptomatiques de Gambie rurale (Afrique de l'Ouest). Notre travail met en évidence des variations temporelles quantitatives de la mutation R249S. Ces variations dépendent des niveaux d'exposition d'AFB1 mais également de la présence du VHB, suggérant une interaction entre l'AFB1 et le VHB. Enfin, dans une autre étude menée en Gambie et basée sur le recrutement de sujets ayant développés un CHC ou non (contrôles) nos résultats montrent que la mutation R249S est fortement associée au gène HBX complet dans les CHC. Cette association pourrait ainsi expliquer en partie l'effet synergique observé entre l'AFB1 et le VHB. A terme, une cible critique pourrait être identifiée pour des interventions préventives ou thérapeutiques précoces sur les CHC dans les régions de forte incidence / R249S mutation (mutant p.R249S) of TP53 gene, characteristic of the exposure to aflatoxin B1, is the most frequent TP53 mutation in hepatocellular carcinoma (HCC) and is highly associated with chronic hepatitis B virus infection (HBV). Indeed, a synergistic effect exists between these two main risk factors, thus increasing the risk to develop HCC. In a first part, we have studied the molecular mechanisms of this synergy in different cellular models and then, in a second part we have used an epidemiology-based approach to investigate the interaction between the R249S mutation and HBV. Firstly, we have shown that p.R249S has lost p53wt functions. Moreover, p.R249S formed a protein complex with the oncoprotein HBx from HBV in the HCC cell line PLC/PRF/5. In the second part, our results show that R249S mutation is detectable in plasma DNA of asymptomatic subjects from the rural Gambia (West Africa). Our work shows quantitative variations of R249S mutation that are dependent on the levels of exposition to AFB1 but also on the presence of HBV, suggesting an interaction between AFB1 and HBV. Finally, in another study performed in The Gambia and based on subjects with HCC or not (controls), our results show that R249S mutation is highly associated with HBX complete gene in HCC. Therefore this association could explain in part the synergistic effect observed between AFB1 and HBV. Eventually, a critical target may be identified for preventive or early therapeutic interventions on HCC of high-incidence regions

Le travail réalisé au cours de cette thèse a porté sur le développement de biocapteurs électrochimiques d’affinité, sensibles et sélectifs, pour la détection de l’ochratoxine A (OTA) et l’aflatoxine M1 (AFM1). Les biocapteurs développés reposent sur l’association de différents nanomatériaux pour une meilleure performance analytique. Pour construire notre transducteur, nous avons associé le polypyrrole à des dendrimères poly(amido-amine) PAMAM, ce qui a permis d’avoir de très bon rendements grâce au propriétés électriques du polypyrrole et à l’augmentation de la surface active due à la structure tridimensionnelle des dendrimères. L’utilisation d’aptamères spécifiques pour la détection des différentes mycotoxines a permis leur détection et quantification à des concentrations de l’ordre des nM, ainsi que l’élargissement des gammes dynamiques. Nous avons pu démontrer grâce à l’utilisation de dendrimères de différentes tailles que la sensibilité des biocapteurs ne provient pas uniquement de l’affinité qui existe entre les biorécepteurs et leurs molécules cibles, mais aussi des propriétés physico-chimiques du biocapteur. / This aim of this work is to develop ultrasensitive electrochemical biosensors with high affinity toward ochratoxine (OTA) and aflatoxine M1 (AFM1). In order to obtain the best analytical performances, we associated nano-materials in the transducer construction: conducting polypyrrole polymer and poly(amido-amine) dendrimères. Thanks to this association, we benefited from the conducting material’s electrical properties, and the large active detection surface dendrimers. For the bimolecular sensing part, we used specific DNA aptamers which allowed us to quantify mycotoxines at nM concentrations. In addition, the different aptamer based biosensors present a very large dynamic ranges. We also demonstrated through the use of different sizes of dendrimers, that the sensitivity depend not only in the affinity between bioreceptors and their target molecules, but also in the physico-chemical properties of the biosensor.

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la principale forme de cancer primitif du foie. Le CHC présente des variations d'incidence géographique qui reflètent les variations de prévalence des infections chroniques par les virus de l'hépatite B (VHB) et/ou C (VHC), ainsi que l'exposition alimentaire aux aflatoxines. Dans les régions de haute incidence, une mutation spécifique au le codon 249 du gène TP53 est très fréquemment détectée dans les CHC et a été proposée comme un marqueur moléculaire de l'exposition aux aflatoxines. La protéine mutée correspondante, p.R249S, interagit avec l'oncogène viral HBx, qui module la réplication virale, la prolifération et la survie cellulaire. Des séquences HBX sont détectables dans l'ADN génomique de plus de 80% des CHC liés au VHB. Nous avons étudié les associations de mutation R249S avec les caractéristiques moléculaires de HBX et la progression du CHC en utilisant des spécimens obtenus dans deux études cas-témoins développées Thaïlande et en Gambie. Nos résultats démontrent (1) que la mutation R249S est préférentiellement associée aux CHC qui se développent en l'absence de cirrhose hépatique préexistante ; (2) que la mutation est associée à la présence de polymorphismes dans l'intron 1 de TP53, suggérant l'influence de facteurs de susceptibilité génétique sur la formation des mutations ; (3) que la mutation est généralement associée à la rétention dans les cancers de séquences de HBX complètes. Ces résultats suggèrent que la protéine mutée p.R249S coopère avec HBx pour favoriser le développement de CHC sans cirrhose, et que la susceptibilité à la formation de cette mutation est influencée par la structure polymorphique de TP53 / Hepatocellular carcinoma (HCC) is the main form of primary liver cancer. HCC presents geographical variations in incidence that reflect variations in the prevalence of chronic infections by hepatitis B virus (HBV) and / or C (HCV) and dietary exposure to aflatoxins. In areas of high incidence, a specific mutation at codon 249 of TP53 gene is frequently detected in HCC and has been proposed as a molecular hallmark of aflatoxin exposure. The corresponding mutated protein p.R249S, interacts with the viral oncogene HBx, which modulates viral replication, proliferation and cell survival. HBX sequences are detectable in the genomic DNA of more than 80% of HBVrelated HCC. We investigated the associations of mutation R249S with the molecular characteristics of HBX and progression of HCC using specimens obtained in two case-control studies developed in Thailand and in The Gambia. Our results demonstrate (1) that the mutation R249S is preferentially associated with HCC that develop in the absence of pre-existing liver cirrhosis, (2) that the mutation is associated with the presence of polymorphisms in intron 1 of TP53, suggesting influence of genetic susceptibility factors on the formation of mutations, (3) that the mutation is usually associated with the retention of cancers with complete HBX sequences. These results suggest that the mutated protein p.R249S cooperates with HBx to promote the development of HCC without cirrhosis, and that susceptibility to the formation of this mutation is influenced by the polymorphic structure of TP53