Está estabelecido que o processo de glicosilação é essencial para a conformação estrutural e função efetora dos anticorpos. Entretanto, não está completamente claro como diferenças nos carboidratos ligados aos anticorpos podem interferir na sua atividade biológica. Foi previamente descrito que anticorpos IgG1 murinos podem ser divididos em anafiláticos ou não-anafiláticos, de acordo com a sua capacidade de induzir in vivo reação de anafilaxia. Somado a isso, foi verificado que a cadeia de oligossacarídeos N-ligada à molécula de IgG1 é fundamental para a manutenção da sua função efetora. O objetivo do presente trabalho é estudar diferenças estruturais entre os subtipos de IgG murinos que poderiam determinar a sua atividade biológica. O seqüenciamento dos nucleotídeos que codificam os domínios CH2 e CH3 dos dois subtipos de IgG1 permitiu constatar homologia de 100% dessas regiões nas duas moléculas estudadas. Entretanto, ao analisar o padrão de carboidratos N-ligados aos anticorpos IgG1 foi observado maior conteúdo de ácido siálico e fucose na cadeia N-ligada ao anticorpo anafilático em relação à do não-anafilático. Contudo, a remoção de resíduos de ácido siálico por tratamento enzimático do anticorpo IgG1 anafilático resultou na perda da capacidade desta molécula de induzir desgranulação celular in vitro e reação anafilática in vivo, semelhante ao anticorpo IgG1 deglicosilado. Em contraste, a remoção de fucose não afetou a sua função anafilática. A análise por PCR em tempo real da expressão dos genes das enzimas envolvidas no processo de glicosilação das proteínas revelou menor expressão gênica de algumas glicosidases, principalmente as sialiltransferases, no hibridoma e linfócitos B secretores do subtipo IgG1 não-anafilático em relação ao obtido no hibridoma e linfócitos B que secretam a IgG1 anafilática. Além disto, foi observada menor atividade enzimática das sialiltransferases obtidas do hibridoma produtor da IgG1 não-anafilática em relação à do hibridoma que produz a IgG1 anafilática. Em conjunto, estes resultados comprovam que a capacidade de anticorpos IgG1 murinos de induzir anafilaxia é diretamente dependente do conteúdo de ácido siálico presente na cadeia de oligossacarídeos ligada à região Fc do anticorpo, além disso sugerem fortemente que essa maior sialilação observada no tipo anafilático seja resultante da maior expressão gênica destas enzimas e assim da sua atividade enzimática no momento da síntese dos anticorpos. / It is well established that the glycosylation process is essential for the structural conformation and effector function of the antibodies. However, it is quite clear how differences in the carbohydrates attached to the antibodies may interfere with their biological activities. It was previously reported that murine IgG1 antibodies can be divided into anaphylactic or nonanaphylactic according to their ability to induce anaphylaxis. Furthermore, it was demonstrated that the oligosaccharide chain N-linked to the IgG1 is essential for its conformation and biological activity. The objective of this work is to study structural differences between these subtypes of murine IgG1 that could determine their biological activity. The sequencing of the nucleotides encoding the CH2 and CH3 domains of these two subtypes of IgG1 showed 100% of homology in the Fc regions of these molecules. In contrast, the analysis of the carbohydrates N-linked to the IgG1 antibodies demonstrated higher sialic acid and fucose contents in the chain attached to the anaphylactic antibody than in the nonanaphylactic IgG1. However, the removal of sialic acid residues by enzymatic treatment of anaphylactic IgG1 antibody resulted in the abrogation of its ability to induce mast cells degranulation in vitro and anaphylactic reaction in vivo as observed to deglycosylated IgG1 antibody. On the other hand, the removal of fucose did not change the anaphylactic activity. The analysis by real time PCR of the gene expression of enzymes that are involved in the protein glycosylation showed lower gene expression of some glycosyltransferases, mainly sialyltransferases, in the hybridoma and B lymphocytes that produce the non-anaphylactic IgG1 compared to those verified in the hybridoma and B cells producer of the anaphylactic IgG1. Furthermore, it was verified lower enzymatic activity of sialyltransferases purified from the hybridoma producer of the non-anaphylactic IgG1 in relation to the hybridoma producer of the anaphylactic antibody. Together, these results prove that the ability of murine IgG1 to induce anaphylaxis is directly dependent of the sialic acid content in the carbohydrate core attached to the antibody Fc region. It is also strongly suggested that this higher sialylation observed in the anaphylactic IgG1 may be resultant of the higher gene expression and enzymatic activity of some sialyltransferases during the antibody synthesis.

Anticorpos antieritrocitários são produzidos contra um ou mais epítopos presentes na superfície dos glóbulos vermelhos. A pesquisa de anticorpos irregulares consiste em expor os anticorpos circulantes do indivíduo a antígenos conhecidos in vitro. Nos casos dos doadores de sangue, a legislação vigente determina a realização da pesquisa de anticorpo irregular (PAI), não exigindo, porém, a determinação da especificidade do anticorpo, e os componentes plasmáticos e os concentrados de plaquetas, cuja presença de anticorpos irregulares fora evidenciada, não devem ser utilizados para transfusão. O presente estudo caracterizou o perfil imunohematológico referente à presença de anticorpos irregulares em doadores de sangue do Instituto Paranaense de Hemoterapia e Hematologia Ltda., no período de abril de 2008 a dezembro de 2015, e avaliar: (i) a prevalência de doadores de sangue voluntários que apresentam PAI positiva, (ii) a especificidade dos aloanticorpos identificados, (iii) a prevalência dos aloanticorpos em doadores de acordo com o sexo e a faixa etária. O projeto de pesquisa foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa. As informações sobre resultado da PAI, especificidade do anticorpo, sexo e idade disponíveis no sistema informatizado do Instituto Paranaense de Hemoterapia e Hematologia Ltda. foram acessadas. As análises estatísticas foram realizadas utilizando-se o teste exato de Fisher e valores de p<0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Foram analisados 155.834 doadores. Em 474 (0,3%) doadores foram detectados anticorpos irregulares, dos quais, 358 doadores apresentaram resultados conclusivos (25% sexo masculino e 75% feminino). Os anticorpos de maior frequência foram anti-D (23%, n=83), anti-M (15%, n=55), anti-K (12,2%, n=44), anti-E (11,7%, n=42) e antiDia (11,7%, n=42). As associações de diferentes anticorpos ocorreram em 14,8% (48) da população estudada, sendo a mais frequente, anti-D + anti-C (n=19). A frequência de anticorpo irregular na população feminina foi significativamente maior que na masculina para as especificidades anti-D (p=0,0191) e anti-M (p=0,0005). O grupo de doadores com idade menor a 40 anos apresentou uma frequência estatisticamente maior de anticorpos irregulares com especificidades anti-M (p=0,0008) e anti-Dia (p=0,0176) quando comparado ao grupo de doadores com idade maior ou igual a 40 anos. Entre os 86 doadores do sexo masculino, a prevalência de anti-Dia foi significativamente maior na população masculina com idade inferior10 a 40 anos quando comparado aos doadores com idade maior ou igual a 40 anos (p=0,0273). O resultado obtido induz a suspeita de um provável IgM de origem natural considerando que esta população de doadores masculinos apresenta baixa chances de aloimunização por transfusão e não tem histórico de gestacional. A definição da prevalência e especificidade de aloanticorpos em doadores de sangue pode indicar a necessidade de um protocolo que defina a conduta frente ao doador com objetivo de proteção do doador de sangue e otimização do serviço de hemoterapia em relação às coletas de sangue realizadas / Anti-erythrocyte antibodies are produced against one or more epitopes present on the surface of red blood cells. The search for irregular antibodies consists in exposing the subject\'s circulating antibodies to known antigens in vitro. In the case of blood donors, the current Brazilian legislation determines that the irregular antibody test (PAI) must be checked in all blood donores, but does not require the determination of the specificity of the antibody, and the plasma components and the platelet concentrates from blood donors with irregular antibodies should not be used for transfusion. The present study characterized the immunohematology profile for the presence of irregular antibodies in blood donors from the Instituto Paranaense de Hemoterapia e Hematologia Ltda., from April 2008 to December 2015, in order to evaluate: (i) the prevalence of donors with irregular antibodies, (ii) the specificity of the alloantibodies identified, (iii) the prevalence of alloantibodies in donors according to gender and age group. The research project was approved by the Ethics Committee. PAI result, antibody specificity, sex and age data were collected from the system of the Instituto Paranaense de Hemoterapia e Hematologia Ltda. Statistical analyzes were performed using Fisher\'s exact test and values of p <0.05 were considered statistically significant. A total of 155,834 donors were analyzed. In 474 (0.3%) donors, irregular antibodies were detected, of which 358 donors presented conclusive results (25% male and 75% female). The most frequent antibodies were anti-D (23%, n = 83), anti-M (15%, n = 55), anti-K (12.2%, n = 44), anti-E (7%, n = 42) and anti-Dia (11.7%, n = 42). The associations of different antibodies occurred in 14.8% (48) of the study population, being the most frequent anti-D + anti-C (n = 19). The frequency of irregular antibody in the female population was significantly higher than in the male for the anti-D (p = 0.0191) and anti-M (p = 0.0005) specificities. The group of donors less than 40 years of age presented a statistically higher frequency of irregular antibodies with anti-M (p = 0.0008) and anti-Dia specificities (p = 0.0176) when compared to the group of donors aged 40 years or older. Among the 86 male donors, the prevalence of anti-Dia was significantly higher in the male population under 40 years of age when compared to those aged 40 years or older (p = 0.0273). This result induces the suspicion of a probable IgM of natural origin considering that this population of male donors has low chances of transfusion alloimmunization and has no gestational history. The definition of the prevalence and specificity of alloantibodies in blood donors may indicate the need for a12 protocol that defines the conduct towards the donor for the purpose of protecting the blood donor and optimizing the hemotherapy service in relation to the blood collections performed.

Anticorpos monoclonais (AcMo) contra proteínas do vírus da raiva (RABV) foram produzidos para adequar a caracterização antigênica dos isolados no Brasil. Foram selecionados dois isolados de morcegos insetívoros, sendo um de Nyctinomops laticaudatus e outro de Eptesicus furinalis que apresentaram perfis não compatíveis (NC) com os pré-estabelecidos. As suspensões virais foram adaptadas para crescimento em cultura de células N2A. Para o preparo de AcMo foram utilizadas como antígeno as ribonucleoproteínas dos isolados selecionados. Foram obtidos dois AcMo, o 3A7 e o 4E10. Analisando 57 isolados de RABV com esses AcMo, o 3A7 reagiu com 21 (36,84%) e o 4E10 com 25 (43,85%). Dos 13 isolados caracterizados como variante antigênica 3 (Desmodus rotundus) o 3A7 reagiu com 8 (61,53%) e o 4E10 com 11 (84,61%). Dos 9 isolados com perfil NC em morcegos o 3A7 reagiu com 5 (55,55%) e o 4E10 com 4 (44,44%). Os anticorpos produzidos poderão auxiliar na complementação do painel existente de caracterização antigênica o que poderá aprimorar a vigilância epidemiológica da doença. / Monoclonal antibodies (MAb) against the rabies virus (RABV) proteins were produced to improve the antigenic characterization of the isolates in Brazil. Two isolates from insectivorous bats were selected; one was from the species Nyctinomops laticaudatus and the other from Eptesicus furinalis, which showed non-compatible (NC) profiles from pre-established ones. The viral suspensions were adapted for growth in N2A cells. Ribonucleoproteins from selected isolates were used as antigen for the preparation of Mab. We obtained two Mab, the 3A7 and the 4E10. Of the 57 RABV isolates analyzed with these MAb, the 3A7 reacted with 21 (36.84%) and 4E10 with 25 (43.85%). Of the 13 isolates characterized as antigenic variant 3 (Desmodus rotundus), the 3A7 MAb reacted with 8 (61.53%) and 4E10 with 11 (84.61%). Of the nine isolates with the profile NC of bats the 3A7 reacted with 5 (55.55%) and the 4E10 with 4 (44.44%). The antibodies produced may help to complement the existing panel to antigenic characterization which could improve the disease epidemiological surveillance.

As gastroenterites ainda são um importante problema de saúde pública nos países em desenvolvimento e as Escherichia colí são as principais causas de diarréias. Adultos brasileiros apresentam anticorpos reativos com E. colí enteropatogênica (EPEC), que apresenta muitas semelhanças com E. colí enterohemorágica (EHEC) e pode ser responsável por complicações como a síndrome hemolítica urêmica e a colite hemorrágica. Ambas as bactérias apresentam um mecanismo patogênico comum: a formação da lesão \"attaching and effacing\" nos microvilus dos enterócitos, mediadas por fatores de virulência, como Intimina, Tir e as Esps. Os lipopolissacarídeos (LPS) são componentes da membrana externa das bactérias gram-negativas, incluindo E. colí. A infecção por EHEC 0157 resulta na produção de anticorpos séricos antiLPS 0157, que geralmente são indicativos de infecção recente. Neste trabalho, nós investigamos a presença de anticorpos séricos IgG e IgM anti-EHEC 0157:H7, EHEC 0111:H- e EPEC 0111:H- em adultos brasileiros, da Grande São Paulo. Amostras de soro foram coletadas de 200 adultos saudáveis, doadores de sangue, e um pool foi formado com 100 amostras. Anticorpos foram determinados em 100 amostras individuais por ELlSA com bactérias íntegras e anti-LPS para a determinação de anticorpos específicos anti-LPS 0111 e 0157 com o \"pool\" de soro como controle, em relação às concentrações de IgG e IgM totais determinadas simultaneamente. Os resultados foram submetidos a análise estatística. O repertório de anticorpos IgG e IgM para as três bactérias foi investigado por \"immunoblotting\" (18). A presença de anticorpos anti-bacterianos e anti-LPS foi confirmada. Existe uma correlação positiva entre os anticorpos reativos com as três bactérias, e entre os anticorpos anti-bactéria e anti-LPS. As concentrações de IgM anti-LPSs foi mais alta que IgG, o que está de acordo com o mecanismo imune esperado para um antígeno timo-independente. As concentrações de anti-LPS 0157 foram altas, apesar da baixa freqüência da bactéria 0157 em nosso meio. Os ensaios de 18 mostraram anticorpos reativos com bandas antigênicas sugestivas de fatores de virulência. A origem destes em nossa população poderia ser o contato com bactérias da microbiota ou do ambiente, de animais ou alimentos. Alternativamente, nossa população pode estar exposta à EHEC mais freqüentemente do que imaginado até agora. / Gastroenteritis is still an important public health problem in developing countries and Escherichia coli are frequent agents of diarrhea. Brazilian adults present antibodies reactive with the principal virulence factors of enteropathogenic E. coli (EPEC), which have many genetic and antigenic similarities with enterohemorrhagic E. coli (EHEC), that may be responsible for complications following diarrhea, as haemolytic uremic syndrome (HUS) and hemorrhagic colitis (HC). Both bacteria present a common pathogenic mechanism, with the formation of “attaching and effacing" lesion in microvilis’ enterocytes, mediated by virulence factors codified by the patogenicity island LEE, as Intimin, Tir e Esps. Lipopolysaccharides (LPS) are components of outer membrane and important virulence factors of Gram-negative bacteria including E. coli. The infection with EHEC O157 results in the production of serum antibodies to the O157 LPS antigens, and usually they are indicators of recent infection. In this work we investigated IgG and IgM serum antibodies reactive with EHEC O157:H7, EHEC O111:H- and EPEC O111:H- antigens in healthy Brazilian adults, living in São Paulo. Serum samples were collected from 200 healthy adults (blood donors) and a pool was formed with 100 samples. The antibody levels were determined by ELISA for 100 individual serum samples by means of a whole cell ELISA with the three bacteria and an anti-LPS ELISA for the determination of the concentrations of specific antibodies anti-LPS O111 and O157, using the serum pool as control, in relation to the total IgG and IgM concentrations determined simultaneously. The results were submitted to statistical analysis. The repertoire of IgG and IgM antibodies to the three bacteria was investigated by immunoblotting (IB). The presence of anti-bacterial and anti-LPS seric antibodies was confirmed. There is a positive correlation between the titers of antibodies reactive with the three bacteria and between anti-bacteria and anti-LPS antibodies. The concentrations of IgM anti-LPSs were significantly higher than IgG, which is in accordance with the immune mechanism expected to a thymus-independent antigen. Surprisingly the concentrations of anti-LPS O157 were high taking into account the low frequency of O157 bacteria isolation in our country. The IB assays showed the presence of antibodies, mainly IgG, reactive with many antigenic bands suggestive of virulence factors. The origin of anti-EHEC antibodies in our population could be the contact with microbiota or environment bacteria, and animal or human E. coli strains, pathogenic or not. Alternatively, our people may be exposed to EHEC more frequently than previously thought.

Estudos anteriores mostraram um efeito supressivo do extrato de Ascaris suum (Asc) nas respostas humoral e celular a um antígeno heterólogo. O fracionamento deste extrato por gel filtração possibilitou a identificação de picos distintos, constituídos de proteínas de alto peso molecular (PI) e baixo peso molecular (Plll), sendo o efeito supressivo de Asc restrito aos componentes de PI. Com relação à produção de anticorpos contra estes componentes, verificou-se que PI é capaz de induzir preferencialmente a síntese de lgG1 não-anafilática e baixos títulos de lgE e de lgG1 anafilática. Considerando que estes resultados foram obtidos no 8º día após a imunização dos animais, propusemos-nos a estudar a indução de anticorpos anafiláticos por PI em fases mais tardias da resposta imune e sua regulação por citocinas. Os nossos resultados mostraram que a indução da lgG1 anafilática anti-PI é mais tardia e regulada parcialmente por IL-4, tanto na resposta primária como secundária. A produção de lgE é totalmente dependente de IL-4. Devido à heterogeneidade presente em nossos animais, pudemos constatar apenas uma tendência de regulação negativa de IL-12 e IFN -&#947; sobre a produção dos anticorpos lgG1 anafiláticos e lgE, no início da resposta primária. Entretanto, nossos resultados mostraram um efeito importante da IL-10, em conjunto com IFN-&#947;, na inibição da síntese de anticorpos anafiláticos anti-PI, tanto na resposta primária como secundária. Com relação à lgG1 não-anafilática anti-PI, sua indução parece depender de IFN-&#947; apenas na resposta primária. / Previous studies have shown a suppressive effect of Ascaris suum extract (Asc) on humoral and cell-mediated immune responses to a non-related antigen. After fractionation of this extract by gel filtration, two peaks were identified according to their molecular weights, and the suppressive effect was associated with proteins of high molecular weight (PI). PI induces high levels of non-anaphylactic lgG1 and low levels of lgE and anaphylactic lgG1. Since these results were obtained 8 days after immunization, the aim of this work was to follow the production of anti-PI anaphylactic antibodies during the primary as well as the secondary antibody response. We algo studied the modulation of the anaphylactic antibody production by cytokines. Pl-specific anaphylactic lgG1 was produced lately in the primary response and was partially dependent on IL-4, including the secondary response. lgE was not produced in the absence of IL-4 at any time. IL-12 and IFN- &#947; exerted a slight negative effect on Pl-specific anaphylactic lgG1 and lgE antibody production in the beginning of the primary response. In contrast, IL-10 together with IFN- &#947; had a profound inhibitory efíect on the synthesis of these antibodies in the primary and secondary responde. The production of Pl-specific non-anaphylactic lgG1 antibodies depended upon IFN- &#947; only in the prímary response.

Adenocarcinomas e distroglicanopatias são doenças graves que estão associadas a quadros de hipoglicosilação de mucinas tumorais, como a MUC1 (transmembrane glycoprotein Mucin 1) e de mucinas de ?-distroglicana (?-DG). Um dos mais importantes desafios associados à terapia anti-câncer refere-se ao desenvolvimento de estratégias terapêuticas que permitam o direcionamento da ação de drogas anti-tumorais para a célula cancerosa com o objetivo de evitar o acometimento de células saudáveis. Nessa linha, é crucial a construção de sistemas de liberação de medicamentos sítio específicos por meio de marcadores tumorais. Quanto ao diagnóstico das distroglicanopatias, atualmente este se baseia principalmente na observação de manifestações clínicas, biópsias musculares e medidas enzimáticas, sendo que os anticorpos monoclonais disponíveis no mercado não são específicos para a condição do músculo distrófico. Dessa forma, mucinas tumorais e mucinas de ?-DG modificadas tem sido consideradas potenciais alvos para o desenvolvimento de novas estratégias diagnósticas e/ou terapêuticas aplicáveis a estas doenças. Para este trabalho, foram sintetizados, em fase sólida, glicopeptídeos miméticos de MUC1 e ?-DG hipoglicosilados, os quais foram utilizados como ferramenta de busca por novos anticorpos recombinantes. Estes antígenos foram imobilizados em uma placa e sobre eles foi aplicada uma biblioteca de fragmentos de anticorpos (Fabs) humanos recombinantes para o desenvolvimento do processo de seleção pela tecnologia de Phage Display. Após quatro rounds consecutivos de seleção, os genes codificadores dos Fabs da biblioteca não selecionada e selecionada foram sequenciados e analisados in silico na plataforma ATTILA. Esta análise permitiu rastrear o enriquecimento dos domínios VH e VL durante a seleção, além de possibilitar a escolha de inúmeros clones para produção. Para este trabalho, quatro fragmentos de anticorpos scFvs recombinantes inéditos para a mucina tumoral MUC1 e ?-DG hipoglicosilados foram desenhados e clonados em vetor de expressão pET29(a) contendo um marcador de identificação (peptídeo FLAG) e outro de purificação (cauda de histidina). A expressão de um scFv recombinante anti-MUC1 foi realizada em E. coli BL21-DE3 pela adição de 0,5mM de IPTG com indução a 20ºC por 16 horas. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade em resina de níquel, seguida de gel filtração, sendo estas etapas monitoradas por SDS-PAGE. A identificação imunoquímica da proteína recombinante foi confirmada por Western Blot, utilizando o anticorpo anti-FLAG. Entende-se que este trabalho, por meio da produção de novas ferramentas biotecnológicas, poderá cooperar para o desenvolvimento de novas formas abordagens diagnósticas e/ou terapêuticas para tumores e distroglicanopatias. / Adenocarcinomas and dystroglycanopathies are serious diseases associated with hypoglycosylation of tumoral mucins, such as MUC1 (transmembrane glycoprotein Mucin 1) and ?-dystroglican mucins (?-DG). One of the most important challenges associated with anti-cancer therapy is the development of therapeutic strategies that allow the targeting of anti-tumor drugs to the cancer cell in order to avoid the involvement of healthy cells. In this regard, the construction of site-specific drug delivery systems by tumor markers is crucial. The diagnosis of dystroglicanopathies are currently based on the observation of clinical manifestations, muscle biopsies and enzymatic measures, and the available monoclonal antibodies are not specific for the dystrophic muscle condition. Thus, tumoral mucins and modified ?-DG mucins have been considered potential targets for the development of new diagnostic and/or therapeutic strategies applicable to these diseases. For this work, glycoproteins MUC1 and ?-DG hypoglycosylated mimetics were synthesized by solid phase reaction, and were used as a search tool for new recombinant antibodies. These antigens were immobilized in a plate and a library of recombinant human antibody (Fabs) fragments was applied thereon for the development of the screening process by Phage Display technology. After four consecutive rounds of selection, the Fabs coding genes from the unselected and selected library were sequenced and analyzed in silico on ATTILA platform. This analysis allowed us to track the enrichment of the VH and VL domains during selection process, and also presented several option of clones to choose for production. For this work, four novel fragments of recombinant scFvs antibodies specific for tumoral mucin MUC1 and ?-DG hypoglycosylated were designed and cloned into pET29 (a) expression vector containing an identification marker (FLAG peptide) and a purification tag (histidine tail). Expression of a recombinant anti-MUC1 scFv was performed on E. coli BL21-DE3 by the addition of 0.5 mM of IPTG with induction at 20°C for 16 hours. Purification was performed by affinity chromatography on nickel resin, followed by gel filtration, these steps being monitored by SDS-PAGE. Immunochemical identification of the recombinant protein was confirmed by Western Blot, using the anti-FLAG antibody. It is understood that this work, through the production of new biotechnological tools, could cooperate for the development of new forms of diagnostic and/or therapeutic approaches for tumors and dystroglicanopathies.

O objetivo deste experimento foi verificar a influência de diferentes níveis de inclusão nas rações de frangos de corte de vitamina E (Vit E) (0, 12 e 120mg/kg) e do zinco (Zn) (0, 40 e 400mg/kg), isolados e associados, sobre resposta imunológica humoral das aves e sua influência sobre o desempenho e rendimento de carcaça. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso em esquema fatorial 3 X 3, com 9 tratamentos e 4 repetições. Para tanto, utilizaram-se 1440 pintos de um dia de idade, metade de cada sexo, distribuídos em 36 parcelas experimentais com 40 aves cada. Os frangos foram criados de 1 a 42 dias de idade, vacinados contra a doença de Newcastle, cepa LaSota, no 14º dia de vida e foram abatidos aos 43 dias de idade. A resposta imunológica humoral dos frangos foi avaliada mediante os testes ELISA e HI no período pré-vacinal aos 14 dias de idade, e pós-vacinal aos 28, 35 e 41 dias de idade das aves. Os dados de desempenho e rendimento de carcaça foram submetidos à análise de variância realizada pelo PROC GLM do SAS. Os dados referentes à resposta imunológica humoral foram analisados através do PROC MIXED do SAS. O aumento da suplementação de zinco na dieta dos frangos de corte resultou em melhoria significativa (p<0,05) no ganho de peso diário das aves no período total de criação, e no ganho médio de peso vivo dos frangos nas fases inicial e de crescimento e no período total de criação. O consumo de ração pelos frangos foi influenciado pelos níveis de Zn utilizados em todas as fases e no período total de criação dos frangos, observando-se uma diminuição da ingestão alimentar nos frangos que receberam 400mg/kg de Zn, exceto na fase final de criação. Os tratamentos utilizados não influenciaram a conversão alimentar, a mortalidade e os parâmetros do rendimento de carcaça. A interação entre os maiores níveis do Zn e da Vit E na ração proporcionou os maiores títulos de anticorpos mediante o uso do teste ELISA, referentes aos 14º, 28º, 35º e 41º dias de idade dos frangos. O aumento dos níveis do Zn e da Vit E isolados na ração promoveu maiores títulos de anticorpos hemaglutinantes, através do teste HI, referentes ao 14º, 28º e 35º dias de idade dos frangos. No 41º dia de idade das aves, a interação entre os maiores níveis de Zn e Vit E, proporcionou os maiores títulos de anticorpos. / The objective of this experiment was to verify the influence of different inclusion levels in the rations of broilers of vitamin E (Vit E) (0, 12 and 120mg/kg) and of the zinc (Zn) (0, 40 and 400mg/kg), isolated and associated, on humoral immune response of the birds and her influence on the performance and carcass yield.The used experimental design was it of blocks at random in factorial outline 3 x 3, with 9 treatments and 4 repetitions. For so much, it was used 1440 chicks of a day of age, half of each sex, distributed in 36 experimental portions with 40 birds each. The chickens were created from 1 to 42 days of age, vaccinated against the disease of Newcastle, stump LaSota, in the 14th day of life and they were slaughtered to the 43 days of age. The humoral immune response of the chickens was evaluated by the tests ELISA and HI in the period pre vaccinal to the 14 days of age, and post vaccinal to the 28, 35 and 41 days of age of the birds. The performance data and carcass yield were submitted to the variance analysis accomplished by PROC GLM of the SAS. The referring data to the humoral immune response were analyzed through PROC MIXED of the SAS. The increase of the supplementation of zinc in the diet of the broilers resulted in significant improvement (p<0,05) in the earnings of daily weight of the birds in the total period of creation, and in the medium earnings of alive weight of the chickens in the phases initial and of growth and in the total period of creation. The ration consumption for the chickens was influenced by the levels of zinc used in all of the phases and in the total period of creation of the chickens, being observed a decrease of the alimentary ingestion in the chickens that received 400mg/kg of Zn, except in the final phase of creation. The used treatments didn\'t influence the alimentary conversion, the mortality and the parameters of the carcass yield. The interaction among the largest levels among the Zn and of the Vit E in the ration provided the largest titles of antibodies by the use of the test ELISA, regarding the 14th, 28th, 35th and 41st days of age of the chickens. The increase of the levels of the Zn and of the Vit E isolated in the ration promoted larger titles of antibodies hemagglutinants, through the HI test, regarding the 14th, 28th and 35th days of age of the chickens. In the 41st day of age of the birds, the interaction among the largest Zn levels and of Vit E, it provided the largest titles of antibodies.

As toxinas LT são expressas por linhagens de Escherichia coli enterotoxigênicas e possuem marcantes efeitos adjuvantes. No entanto, não se conhece se a exposição prévia à toxina afeta sua atividade adjuvante durante imunizações subsequentes. Assim, o presente estudo avaliou o impacto da imunidade pré-existente nas propriedades inflamatórias e adjuvantes da LT quando inoculada pela via subcutânea. Como antígeno modelo, empregou-se a proteína NS1 do vírus dengue e duas abordagens experimentais distintas: (i) incubação in vitro de LT com anticorpos anti-LT e com o receptor gangliosídio (GM1) antes da administração em camundongos não imunizados em conjunto com a proteína NS1 do vírus dengue; (ii) imunização com NS1 coadministrada à LT em camundongos previamente expostos à LT. Foram avaliados os efeitos inflamatórios locais e os efeitos adjuvantes por meio da resposta imunológica humoral anti-NS1. Nossos resultados indicam que a imunidade prévia contra a LT não afeta seu potencial inflamatório e atividade adjuvante. Além disto, a exposição ao receptor GM1 reduziu as reações inflamatórias locais sem, no entanto, reduzir os efeitos adjuvantes de LT. / LT toxins are expressed by enterotoxigenic Escherichia coli strains and display strong adjuvant effects. Nonetheless, the impact of preexisting immunity on the on LT adjuvant activities is still unknown. Thus, the present study evaluated the impact of pre-existing immunity in the inflammatory and adjuvant properties of LT after subcutaneous administration. the NS1 of dengue virus was employed as a model antigen and two experimental approaches were evaluated: (i) in vitro incubation of LT with LT-specific antibodies and the ganglyoside receptor (GM1) before administration to naïve mice in combination with NS1; (ii) immunization with NS1 co-administered with LT in mice previously exposed to LT. The local inflammatory effects induced by LT were evaluated as wel as the adjuvant effects by means of NS1-specific humoral response. Our results indicate that the LT pre-existing immunity does not affect the inflammatory and adjuvant activities of the toxin. In addition, exposure to GM1 reduced the local inflammatory reactions without affecting the toxin adjuvant effects.

Nos últimos anos, estudamos vários aspectos da resposta imune naturalmente adquirida em indivíduos de diferentes áreas endêmicas da Região Amazônica expostos à malária. Para isso, utilizamos proteínas recombinantes baseadas em antígenos de formas sanguíneas de P. vivax, os quais têm sido considerados candidatos à vacina contra a malária vivax. No presente trabalho, nossos estudos imunoepidemiológicos concentraram-se em 396 indivíduos de uma comunidade rural da Amazônia ocidental brasileira, localizada no Estado do Acre, com o objetivo de realizar um estudo transversal e longitudinal da resposta de anticorpos contra um painel de proteínas recombinantes derivadas de merozoítos de P. vivax (MSP119, AMA-1, MSP3&#945; e MSP3&#946;). Para isso, os soros desses indivíduos foram testados por ELISA quanto ao reconhecimento das quatro proteínas recombinantes. As proporções de indivíduos na linha de base com anticorpos IgG contra MSP119, AMA- 1, MSP3&#945; e MSP3&#946; foram de 59,8%, 50,0%, 23,5% e 26,5%, respectivamente. Dentre esses indivíduos, apenas 10,9% tinham infecções por P. vivax, P. falciparum ou malária mista. No grupo de infectados por P. vivax, a proporção de respondedores foi maior para as proteínas recombinantes MSP119 e AMA-1, atingindo 78,6%, em ambos os casos. A proporção de indivíduos com anticorpos para cada uma das proteínas associou-se com o maior tempo de exposição à malária, exceto para a MSP3&#946;. Além disso, a positividade foi mais alta nas áreas de maior risco de transmissão. Não observamos associações relevantes entre o genótipo do antígeno Duffy dos indivíduos e presença de anticorpos para as proteínas estudadas. No estudo longitudinal, observamos um aumento da prevalência de respondedores durante a parasitemia patente, sendo de 81,9%, 80,9%, 31,9% e 48,9% para a MSP119, AMA-1, MSP3&#945; e MSP3&#946;, respectivamente. Em conclusão, nossos resultados confirmam a alta antigenicidade dessas proteínas, o que pode ser de grande importância para futuros ensaios clínicos na região. / In recent years we studied various aspects of the naturally acquired immune response in individuals from different endemic areas of the Amazon region exposed to malaria. For this purpose we used recombinant proteins based on P. vivax blood stage antigens considered candidates for a vaccine against vivax malaria. In the present study, we focused on 396 individuals from a rural community in western Brazilian Amazon located at the state of Acre. We conducted a transversal and longitudinal study of the antibody response to a panel of recombinant proteins representing P. vivax merozoites surface antigens (MSP119, AMA-1, MSP3&#945; and MSP3&#946;). The sera of these individuals were tested by ELISA for the recognition of the four antigens mentioned above. The proportions of individuals at the baseline with IgG antibodies to MSP119, AMA-1, MSP3&#945; and MSP3&#946; were 59.8%, 50.0%, 23.5% and 26.5%, respectively. Among these individuals, 10.9% had patent malaria infections with either P. vivax or P. falciparum or both. Among individuals with patent P. vivax infection, the frequency of responders was high for MSP119 and AMA-1, (78.6% in both cases). Except in the case of MSP3&#946;, the proportion of individuals with antibodies to each protein correlated with the time of malaria exposure. Also, the positivity was higher in areas of higher transmission levels. No relevant association was found between the Duffy genotypes and presence of antibodies to the different antigen. In longitudinal study, we observed an increased prevalence of responders during patent parasitemia, 81.9% 80.9% 31.9% and 48.9% to MSP119, AMA-1, MSP3&#945; and MSP3&#946;, respectively. In conclusion, our results confirm the high antigenicity of these proteins, which can be of great importance for future clinical trials in the region.

Linfoma é uma neoplasia maligna originária dos linfócitos. Podem atingir regiões nodais e extranodais, este último ocorrendo mais comumente em casos de linfoma não-Hodking (LNH) e raramente em linfomas de Hodking (LH). Na cavidade oral, o linfoma é classificado como a terceira neoplasia mais comumente encontrada depois do Carcinoma epidermóide e tumores de glândula salivar. O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) é o subtipo mais comum de LNH na cavidade oral, e ocorre mais comumente em região do palato e gengiva marginal. O diagnóstico do linfoma requer um estudo imuno-histoquímico, incluindo anticorpos específicos para maior precisão. O presente trabalho fez um levantamento de todos os casos de linfoma oral diagnosticados no Serviço de Patologia Cirúrgica da FOUSP de maneira retrospectiva no período de 1997 a 2017. Foram analisadas as fichas de pedido de exame e diagnóstico histopatológico. Através da coleta de dados foi possível a visualização do perfil dos casos presentes e de um painel imuno-histoquimico mínimo encontrados no acervo da Faculdade de Odontologia da USP. Concluímos que em um laboratório de patologia Oral com recursos limitados, os anticorpos LCA, CD20, CD3 e Plasma cell são de grande valia para diagnosticar a maior parte dos principais linfomas que acometem a cavidade oral. / Lymphoma is a malignant neoplasm originating from lymphocytes. They may reach nodal and extranodal regions, the latter occurring most commonly in cases of non-Hodgkin\'s lymphoma (NHL) and rarely in Hodgkin\'s lymphoma (LH). In the oral cavity, lymphoma is classified as the second neoplasm most commonly found after spinous-cell carcinoma. Diffuse large B-cell lymphoma (LDGCB) is the most common subtype of NHL in the oral cavity, and occurs mostly in the palate and marginal gingiva. Diagnosis of lymphoma requires an immunohistochemical study, including specific antibodies for greater accuracy. The present study made a survey of all cases of oral lymphoma diagnosed in the Department of Surgical Pathology of FOUSP, retrospectively, in the period from 1997 to 2017. The files of the application for examination and histopathological diagnosis were analyzed. Through the collection of data it was possible to visualize the profile of the present cases and a minimal immunohistochemical panel found in the collection of the Faculty of Dentistry of USP. We conclude that in an oral pathology laboratory with limited resources, the LCA, CD20, CD3 and Plasma cell antibodies are of great value to diagnose some of the main lymphomas that affect the oral cavity.