Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-12T14:31:33Z No. of bitstreams: 1 Daniel Barreto de Siqueira.pdf: 3778062 bytes, checksum: faa268306d4bf0951fa52fd432892c68 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-12T14:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Barreto de Siqueira.pdf: 3778062 bytes, checksum: faa268306d4bf0951fa52fd432892c68 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / In order to improve the environmental health of ecosystems and the health of human and animal populations, studies about possible pathogens transmitted by wild rodents and marsupials are essential to pursue new strategies to prevent and control the spread of diseases. The aim of this study was to determine the seroprevalence of antibodies against Toxoplasma gondii in seven species of wild marsupials and seven species of wild rodents captured in seven areas of the Atlantic Forest in the State of Pernambuco, in the Northeast of Brazil. Between December 2007 and March 2009, we captured a total of 397 animals: 223 marsupials and 174 rodents, male and females of different age groups. The serum blood samples were tested using the Modified Agglutination Test (MAT) containing tachyzoites that were inactivated in formalin and 2-mercaptoetanol. The cutoff was set at 1:25. Antibodies against T. gondii were determined in 15/223 (6.7%) of marsupial blood samples 10/174 (5.7%) of rodent blood samples. Antibody titles were: 25 in six marsupials and six rodents, 50 in seven marsupials and three rodents; and 500 in two marsupials and one rodent. Serum of the following species of marsupials presented positive results: 11.7% (9/77) Didelphis albiventris, 10.0% (1/10) Monodelphis domestica, 9.5% (2/21) Metachirus nudicaudatus,3.8% (1/26) Didelphis aurita, 2.3% (1/43) Marmosa murina and 2.3% (1/43) Marmosa demerarae. Serum samples of the following species of rodents presented positive results 33.3% (3/9) Rattus rattus, 8.3% (2/24) Nectomys rattus, 5.5% (2/36) Akodon cursor and 3.0% (3/100) of Thrichomys laurentius. Regarding the site of capture, positive animals were captured in 75.0% (6/8) of sites. The results of this study are the first record of anti-T. gondii antibodies in marsupials and rodents in Northeastern Brazil. The detection of antibodies against T. gondii in the serum of marsupials and rodents in the Atlantic Forest of Pernambuco suggests that the agent has spread in the biome and indicates previous infection of animals that had positive serum test results. The results of this study suggest that small mammals can play an important role in the epidemiological chain of T. gondii in the Atlantic Forest of Pernambuco, in the Northeast of Brazil. / A intensificação de estudos dos possíveis patógenos transmitidos por marsupiais e roedores se faz necessária para buscar estratégias de prevenção e controle das enfermidades, visando à saúde ambiental dos ecossistemas e da população humana e animal. O objetivo desta pesquisa foi determinar a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em sete espécies de marsupiais e em sete espécies de roedores silvestres capturados em oito áreas de Mata Atlântica do Estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Entre dezembro de 2007 e março de 2009, foram capturados 397 animais, sendo 223 marsupiais e 174 roedores, machos e fêmeas, de idades variadas. Os soros sanguíneos foram testados pelo Teste de Aglutinação Modificada (MAT) utilizando taquizoítos inativados na formalina e 2-mercaptoetanol, e ponto de corte na diluição de 1:25. Anticorpos anti-T. gondii foram verificados em 6,7% (15/223) de marsupiais e 5,7% (10/174) de roedores com títulos de 25 (seis marsupiais e seis roedores), 50 (sete marsupiais e três roedores) e 500 (dois marsupiais e um roedor). Com relação às espécies de marsupiais, 11,7% (9/77) de Didelphis albiventris, 10,0% (1/10) de Monodelphis domestica, 9,5% (2/21) de Metachirus nudicaudatus, 3,8% (1/26) de Didelphis aurita, 2,3% (1/43) de Marmosa murina e 2,3% (1/43) de Marmosa demerarae foram soropositivos. Dosroedores, foram soropositivos 33,3% (3/9) de Rattus rattus, 8,3% (2/24) de Nectomys rattus, 5,5% (2/36) de Akodon cursor e 3,0% (3/100) de Thrichomys laurentius. Sobre a procedência, observou-se que 75,0% (6/8) das áreas de captura havia animais soropositivos. Os resultados dessa pesquisa representam o primeiro registro de anticorpos anti-T. gondii em marsupiais e roedores silvestres no Nordeste do Brasil. A ocorrência de anticorpos anti-T. gondii indicou uma infecção prévia dos animais soropositivos e a dispersão do parasita nos fragmentos de Mata Atlântica da Região Metropolitana do Recife. Os resultados mostraram que os marsupiais e roedores possuíram um papel na cadeia epidemiológica de T. gondii na Mata Atlântica de Pernambuco.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T13:28:06Z No. of bitstreams: 1 Judas Tadeu Francisco de Oliveira.pdf: 429614 bytes, checksum: 8bf29fa25c66f1b36259c87f3bd1bafd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T13:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Judas Tadeu Francisco de Oliveira.pdf: 429614 bytes, checksum: 8bf29fa25c66f1b36259c87f3bd1bafd (MD5) Previous issue date: 2011-02-15 / In the epidemiological chain of transmission of American cutaneous leishmaniasis (ACL), canines and equines have close association with the disease in the human population, where these animals can act as reservoirs of ACL, contributing to the maintenance of the disease. Thus, this study aimed to determine the frequency of anti-Leishmania Viannia braziliensis in dogs and horses in areas where the American cutaneous leishmaniasis (ACL) in the city of Cabo de Santo Agostinho, Pernambuco, and to evaluate the clinical characteristics of naturally infected by L. (V) braziliensis. For this purpose, initially was performed a search of the human cases in the city of Cabo, in areas with occurrence of ACL, from the collection of data in the investigation forms System Diseases Information and Notification (SINAN). In possession of the notifications, the properties and/or homes were visited for the application of an investigative questionnaire for ACL. All these dogs and horses underwent physical examinations and clinical trials and subsequent blood collection to obtain serum to be used in Immunofluorescence Assay (IFA). The results of serological survey revealed the presence of 14.11% (23/163) of seropositive dogs without, however, statistically significant (2 2 = 2.971). The presence of 18.27% (17/93) of seropositive horses also suggests the involvement of these domestic animals in the disease cycle in the city of Cabo de Santo Agostinho, although the real role of participation requires further studies. It can be concluded with the results of this study that dogs with different clinical characteristics and presence of antibodies to L. (V) braziliensis reinforce the need for better clinical and epidemiological investigation of these animals in the city of Cabo de Santo Agostinho, with the aim of adopting control measures for the ACL. / Na cadeia epidemiológica de transmissão da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), os caninos e os equídeos apresentam estreita associação com a doença na população humana, onde estes animais podem atuar como reservatórios de LTA, contribuindo para a manutenção da doença. Sendo assim, objetivou-se neste trabalho determinar a frequência de anticorpos anti- Leishmania Viannia braziliensis em caninos e equídeos em áreas de ocorrência da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no município do Cabo de Santo Agostinho, Pernambuco, além de avaliar as características clínicas dos animais com infecção natural pela L. (V) braziliensis. Para tanto, inicialmente foi realizada uma busca dos casos humanos no município do Cabo, nas áreas com ocorrência de LTA, a partir da coleta dos dados contidos nas fichas de investigação do Sistema de Informações de Agravos e Notificações (SINAN). Em posse das notificações, as propriedades e/ou casas foram visitadas para aplicação de um questionário investigativo para LTA. Todos os caninos e equídeos presentes foram submetidos a exames físicos e clínicos, e posterior coleta de sangue para obtenção do soro a ser utilizado na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). O resultado do inquérito sorológico revelou a presença de 14,11% (23/163) de caninos sororreagentes sem, entretanto, diferenças estatisticamente significantes (2 = 2,971). A presença de 18,27% (17/93) de equídeos sororreagentes sugere também a participação dos referidos animais domésticos no ciclo da doença no município do Cabo de Santo Agostinho, embora o real papel dessa participação necessite de estudos mais específicos. Pode-se concluir com os resultados deste trabalho que caninos com diferentes características clínicas e com presença de anticorpos anti- L. (V) braziliensis reforçam a necessidade de uma melhor investigação clínica e epidemiológica destes animais no município do Cabo de Santo Agostinho, com a finalidade de adoção de medidas de controle para a LTA.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-20T16:23:56Z No. of bitstreams: 1 Nadja Maria Silva de Lira.pdf: 228880 bytes, checksum: 833b8ae499f105afffcba24ea6169946 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-20T16:23:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nadja Maria Silva de Lira.pdf: 228880 bytes, checksum: 833b8ae499f105afffcba24ea6169946 (MD5) Previous issue date: 2009-02-23 / In Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) changes of urine patterns and the presence of anti-Leishmania sp. antibodies in it may reflect an immunomediated glomerular lesion. The goal of this study was to evaluate the physical, chemical and microbiological aspects of urine and also verify the presence of anti-Leishmania antibodies in the urine of dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi by using cystocentesis. Urine specimens were collected from 20 dogs, which all of them were serologically positive for Leishmania sp by ELISA test. Out of 20 samples, 70% showed different patterns of colors, follow by pH values changes (45%) and protein and blood contents (50%). Microorganisms were isolated in 35% of urine samples, with prevalence of Staphylococus spp. (20%), Shigella sonnei (15%), Streptococus spp. (5%) and Providencia stuartii (5%). On the other hand ELISA test was run in 22 samples by using serial dilutions (1:100, 1:50 and 1:25). The results showed that 4.54 % of the samples were positive at dilutions of 1:50 and 1:25. These data showed that protein and blood contents determination and the cystitis could be sugestive signs to evaluate in CVL, but also indicated the detection of antibodies in urine of CVL may be a good tool, but the sensibility and specificity must to be estimate in order to use this kind of test. / Na Leishmaniose Visceral Canina (LVC) mudanças nos padrões da urina e a presença de anticorpos anti-Leishmania sp. podem refletir uma lesão glomerular imunomediada.O objetivo deste estudo foi avaliar os aspectos físicos, químicos e microbiológicos da urina, e também, verificar a presença de anticorpos anti-Leishmania na urina de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi, utilizando a técnica de cistocentese. Foram coletadas amostras de urina de 20 cães sorologicamente positivas para Leishmania sp. pelo teste ELISA. Das 20 amostras, 70% apresentaram alterações na cor, seguidas por alterações nos valores de pH (45%) e presença de proteínas e sangue (50%). Microorganismos foram isolados em 35% das amostras de urina, com prevalência de Staphylococus spp (20%), Shigella sonnei,(15%), Streptococus spp, (5%) e Providencia stuartii (5%). Por outro lado, o teste ELISA foi executado em 22 amostras de urina utilizando diluições seriadas (1:100, 1:50 e 1:25). Os resultados mostraram que 4,54% das amostras foram positivas em diluições de 1:50 e 1:25. Estes dados mostraram que a determinação de proteínas e sangue, como também, a cistite podem ser sinais sugestivos para avaliar a LVC, mas também indicou que a detecção de anticorpos na urina de cães com LVC pode ser uma boa ferramenta no diagnóstico, entretanto, maiores estudos devem ser realizados para estimar a sensibilidade e especificidade a fim de utilizar este tipo de teste.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-21T14:47:00Z No. of bitstreams: 1 Rafael Lima de Oliveira.pdf: 312568 bytes, checksum: 45b29c2e75fa734e4b695db3a93916d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-21T14:47:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rafael Lima de Oliveira.pdf: 312568 bytes, checksum: 45b29c2e75fa734e4b695db3a93916d9 (MD5) Previous issue date: 2012-02-23 / Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis transmitted by sand flies caused by several Leishmania species and that can infect humans and domestic and wild animals. In Brazil, the growth in the number of cases of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is associated with the adaptation of its vector and dispersion of Leishmania infantum among domestic and wild hosts in urban and periurban areas. The objective of this work contribute to the epidemiological study of CVL in the state of Pernambuco by identification of the frequency IgG antibodies anti-Leishmania infantum in free-living and captives crab-eating foxes (Cerdocyon thous) and domestic dogs (Canis familiaris) from Conservation Unit of the State of Pernambuco and its surroundings. Blood samples were obtained of 107 animals, 18 crabeating foxes (four free-living and 14 captives) and of 89 dogs (85 domiciled and four strays). Bone marrow samples were obtained of nine crab-eating foxes and three dogs. The IFAT and ELISA were performed on blood samples of 107 dogs and PCR was performed on 12 samples of bone marrow. Of the 18 crab-eating foxes examined, one (5.5%) were seropositive to the ELISA and 89 dogs examined, 29.21% were positive by IFAT, 35.95% positive by ELISA and 19.10% were positive in both tests simultaneously. None of the samples was positive by PCR. It is concluded that the presence of IgG antibodies anti-L. infantum in a free-living crabeating fox and in a stray dog in the wild environment suggested the existence of a local sylvatic cycle of Leishmania infantum in one of the areas of study. The presence of seropositive dogs inside and around of these wild areas indicated that animals can act as dispersers of the infectious agent to humans and to the non-infected dogs. This is the first occurrence of IgG antibodies to Leishmania infantum in free-living crab-eating fox and dogs trapped inside of the Conservation Units of the State of Pernambuco, Brazil. / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose transmitida por flebotomíneos, sendo causada por diversas espécies de Leishmania e que podem infectar seres humanos, e animais domésticos e selvagens. No Brasil, o crescimento no número de casos de Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é associado com a adaptação de seu vetor e a dispersão da Leishmania infantum entre os hospedeiros domésticos e silvestres no ambiente urbano e periurbano. Objetivou-se com este trabalho contribuir com o estudo epidemiológico da LVC no Estado de Pernambuco, mediante a identificação da frequência anticorpos IgG anti-Leishmania infantum em raposas (Cerdocyon thous) de vida livre e de cativeiro e em cães domésticos (Canis familiaris) oriundos de Unidades de Conservação do Estado de Pernambuco e no seu entorno. Ao todo, foram obtidas amostras de sangue de 107 animais, sendo 18 raposas (quatro de vida livre e 14 de cativeiro) e de 89 cães (85 domiciliados e quatro errantes). Em nove raposas e três cães também foram obtidas amostras de medula óssea. Os testes de RIFI e ELISA foram realizados nas 107 amostras de sangue dos canídeos e a PCR foi realizada nas 12 amostras de medula óssea. Das 18 raposas examinadas, uma (5,5%) foi soropositiva ao ELISA e dos 89 cães examinados, 29,21% foram soropositivos pela RIFI, 35,95% pelo ELISA e 19,10% foram soropositivos em ambos os testes simultaneamente. Nenhuma das amostras foi positiva na PCR. Concluiu-se que a ocorrência de anticorpos IgG anti-L. infantum em uma raposa de vida livre e um cão errante no mesmo ambiente silvestre sugeriu a existência de um ciclo silvático da Leishmania infantum em uma das áreas de estudo. A presença de cães soropositivos no interior e no entorno de áreas silvestres indicou que estes animais podem atuar como dispersores do agente infeccioso para populações humanas e para cães não infectados. Esta é a primeira ocorrência de anticorpos IgG anti-Leishmania infantum em raposa de vida livre e em cães capturados no interior de Unidades Conservação do Estado de Pernambuco, Brasil.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2832_1.pdf: 6876816 bytes, checksum: 8be9ca4e152088654137e1e30041bdb6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / A Síndrome Pulmonar Cardiovascular por Hantavirus (SPCVH) e a peste (bacteriose causada pela Yersinia pestis) são zoonoses que compartilham os mesmos roedores silvestres como reservatórios e cujas formas oligossintomáticas e respiratórias podem dificultar o diagnóstico clínico-epidemiológico em humanos. Apesar da sua relevância como problema de saúde pública, o conhecimento acerca da hantavirose no nordeste brasileiro é escasso, o que justificou a realização desse estudo de soroprevalência em amostras de soros de roedores capturados no nordeste do Brasil, em áreas focais de peste, e em profissionais que atuam nas atividades de vigilância e controle da peste. O estudo envolveu um total de 62 amostras de soro de profissionais dos estados de Pernambuco e Rio Grande do Norte e de 674 amostras de soro de roedores capturados nas atividades da rotina do Programa de Controle da Peste nos Estados do Ceará, Pernambuco, Rio Grande do Norte, Bahia e Rio de Janeiro, entre os anos de 2000 a 2010 (depositadas na soroteca do Serviço de Referência Nacional em Peste do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães). As amostras de soro de roedores pertenciam às espécies: Akodon cursor (26), Calomys expulsus (01), Holochilus sciureus (06), Necromys lasiurus (291), Nectomys squamipes (24), Oligoryzomys nigripes (52), Oryzomys subflavus (143), Oryzomys ratticeps (04), Oxymicterus judex (05), Wiedomys pyrrhorhinos (1), Galea spixii (42), Thrichomys apereoides (44), Mus musculus (01) e Rattus rattus (34). Os soros de roedores foram analisados por ensaio imunoenzimático (ELISA) para detecção de anticorpos da classe IgG usando a proteína N recombinante do vírus Araraquara ou o kit IBMP EIE IgG HANTEC (ICC/FIOCRUZ/PR). As amostras humanas foram submetidas à análise por ELISA para hantavírus e por hemaglutinação passiva e inibição da hemaglutinação para pesquisa de anticorpos anti proteína F1 de Y. pestis. As análises revelaram a presença de anticorpos para hantavírus em seis amostras de soros de roedores: um A. cursor e três O. nigripes da Serra dos Órgãos-RJ e dois N. lasiurus da Serra da Ibiapaba-CE. Este foi o primeiro relato da presença de anticorpos contra hantavírus em roedores nesses estados. Nenhuma amostra dos animais provenientes da Bahia, Rio Grande do Norte e Pernambuco apresentou anticorpos contra hantavírus e nenhum dos profissionais do estudo foi reagente para hantavírus. A presença de anticorpos antipestosos foi detectada em dois profissionais sem que houvesse registro de quaisquer manifestações clínicas sugestivas do agravo, enfatizando o risco imanente das atividades em campo e laboratoriais, o que implica maior rigor no desenvolvimento dessas práticas

Orientador : Lucila Costallat Ricci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_YliriaFerreirada_M.pdf: 8250034 bytes, checksum: 4153a375169220d327ec671517b9ecc7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Cepas de Escherichia coZi podem apresentar mecanismos e fatores de virulência diversos podendo causar no homem, principalmente, infecções intestinais. Desta forma, tendo-se como base os dados clínicos, expressão de mecanismos e de fatores de virulência, dados epidemiológicos, sorotipagem e análises moleculares, dentre outros, as cepas de E. coZi diarreiogênicas humanas podem ser classificadas em pelo menos sete grupos de enteropatogenicidade. Com relação ao grupo diarreiogênico representado pela E. coZi enterotoxigênica (ETEC), a identificação destes patógenos incluem a pesquisa das enterotoxinas STa e/ou LT e a expressão de fatores de colonização (FC). Estes últimos, também denominados de adesinas, permitem a colonização da bactéria à mucosa do intestino delgado, podendo variar morfológica e antigenicamente. Vários FC já foram identificados e caracterizados em cepas ETEC isoladas de diferentes regiões geográficas. Em trabalhos anteriores, a runbria PCF02 foi identificada, caracterizada e purificada a partir de 2 cepas ETEC LT+ pertencentes ao sorogrupo 02, isoladas no nosso meio. Na seqüência dos trabalhos, a partir da fimbria purificada, 9 hibridomas secretores de anticorpos monoclonais reativos com PCF02 foram obtidos, seus isotipos determinados e soluções ascíticas dos mesmos preparadas e tituladas em provas de Western blotting e ELISA. Após a padronização da prova de Inibição do ELISA, desenvolvida com MAbs dos isotipos IgA (4) e IgG2b (5) e pools dos mesmos, mais 5 amostras diarreiogênicas de E. coZi foram identificadas como sendo PCFO2+. Possível homologia (analogia) de epítopos com CFAIII foi verificada com estes MAbs, através de observações em imunomicroscopia. Neste trabalho, dando continuidade aos estudos relacionados ao PCFO2, procurou-se inicialmente reavaliar-se a metodologia de purificação e comprovar-se a Prova de Inibição do ELISA padronizada para a identificação desta fimbria, além de verificar-se possíveis homologias de epítopos entre PCF02 e outros FC, descritos como os mais freqüentemente identificados em cepas ETEC isoladas de fezes humanas. Com base nos resultados obtidos, comprovou-se que MAbs do isotipo IgA reconhecem epítopos distintos dos MAbs IgG2b, uma vez que estes últimos são capazes de reagirem com uma segunda subunidade de 15 kDa de PCF02, em provas de Westem blotting. Esta nova subunidade desta fímbria talvez deva corresponder ao "tip" da mesma. Pelos experimentos desenvolvidos verificou-se que apenas as amostras 312-2 e 312-3, dentre as cinco cepas identificadas inicialmente como PCF02+, expressavam realmente esta fímbria apresentando, também, a fração de 15kDa. Quanto às amostras D242 e D243, estas demonstraram pertencer ao complexo CF AIIV expressando CS5 e CS6 sendo que esta última subunidade apresenta epítopos idênticos aos expressos em PCF02. Quanto às amostras pertencentes ao sorogrupo 02, nenhuma reação inespecífica foi verificada. Portanto, a Prova de Inibição do ELISA desenvolvida com MAbs do isotipo IgG2b demonstrou ser adequada não só para a identificação das duas subunidades de PCF02 expressas em cepas ETEC, como também de amostras ETEC do complexo CF AIIV, que sempre expressam a subunidade CS6 / Abstract: Some strains of Escherichia coZi may expresses differents mechanisms and virulences factors representing one of several highly adapted clones wich together have evolved the ability to cause a broad spectrum of human and animal diseases. With respect to enteric diarrheal diseases caused by E. coZi strains, seven categories of diarrheagenic E. coZi isolated from human stool cultures have been classified, based on clinical observations, mechanisms, virulence factors, epidemiologic studies, serotypes and molecular analysis. The group represented by enterotoxigenic E. coZi (ETEC) is identified by ST and or L T enterotoxins production and expression of colonization factors (CF). These adhesins allow bacteria colonization on the surface of the small bowel mucosa. Detection of CF in alI ETEC strains identified in the differents geographic regions of the world is impractical because of their great number and heterogeneity. Previous studies, a new putative colonization factor (PCF) was characterized in isolates of ETEC from human diarrheical stools at Ouro Preto (MG) Brazil, expressing just L T and belonging to sorogroup 02. This fimbriae was named PCF02, and with this purified antigen nine hybridomas secreting MAbs (monoclonal antibodies) against PCF02 were produced. For standardization of Inhibition ELISA Test to identify PCF02 in enterotoxigenics strains pools of these MAbs, belonging to isotypes 19A (4) and IgG2b (5), were tested using this immune reaction. After testes new five ETEC strains presented positive results to PCF02, alI belonging to serogroup 02. The aim of this study included improvement of the purification methods of this fimbriae and evidences confirming sensibility and specificity of Inhibition ELISA Test in PCF02 identification. The objectives propossed also included study of possible epitopes similarity between this fimbriae and the most frequently CF reported in epidemiological studies. Ours results confumed that Mabs belonging to 19A and IgG2b isotypes reacted with differents epitopes of PCFO2. With respect to IgG2b a new subunit or adhesin presenting about 15 kDa was identified in Westem blotting reactions in semi-purified proteic extraction of PCFO2 strain. Regarding to Inhibition ELISA Test developed with MAbs belonging to both isotypes datas confirmed expression of PCFO2 just by 312-2 and 312-3 isolates. Antigenic similarities was demonstrated between CS6 belonging to CF AIIV complex and PCFO2. Results demonstrated that D242 and D243 expresse CS5 and CS6. We conclude that the Inhibition ELISA Test developed with MAbs of isotype IgG2b were able to identify not just ETEC strains expressing PCFO2 but also expressing CS6, representing an important tool for the identification of these adhesins / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Laura Sterian Ward / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T07:53:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_AnaPaulaCarneiroDos_M.pdf: 2998875 bytes, checksum: 9fd6ce397ec8eae4d85db8afcd041e9e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Fragmentos de anticorpos recombinantes têm se tornado ferramentas importantes em diversas áreas, tais como: Biologia Molecular, Farmacêutica e pesquisa Médica. Avanços recentes estão relacionados à aplicação desses anticorpos na oncologia, com estratégias diagnósticas e terapêuticas para diferentes carcinomas. Neste estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais scFv foi construída utilizando RNA total de sangue periférico de 25 pacientes com Carcinoma Diferenciado da Tireóide. Essa biblioteca scFv foi selecionada utilizando os métodos Bioppaning and Rapid Analysis of Selective Interactive Ligands (BRASIL) e Phage display contra células tumorais de tireóide, com o objetivo de encontrar ligantes específicos a superfície celular tumoral. Os clones selecionados foram identificados por Dot blotting, e a reatividade contra proteínas de tumor, adenoma e bócio foi analisada por Elisa. O clone scFv-C1 apresentou melhor reatividade pelas proteínas tumorais e foi escolhido para a imunoistoquímica. Esta foi realizada com lâmina de Micro-arranjo de tecido (TMA) com duzentos e vinte nove casos de tireóide, sendo 110 Carcinomas, 52 Adenomas Foliculares, 49 Bócios e 18 tecidos normais de tireóide. O anticorpo scFv-C1 reagiu especificamente aos tecidos de câncer, com reatividade ao citoplasma das células tumorais, foi capaz de distinguir o Grupo Câncer do Controle (Bócio, Adenoma e tireóide normal) com significância estatística (p<0,0001) e entre os carcinomas reagiu melhor com os tumores pequenos (TNM 1 e 2) e com pouca agressividade (p=0,050). O fragmento de anticorpo scFv-C1 pode ser um potencial candidato a biomarcador para o diagnóstico do Câncer de tireóide / Abstract: Recombinant antibody fragments have become important tools in several fields, including molecular biology, pharmaceutical and medical research. In this study, a human single-chain variable fragment (scFv) antibody library was constructed using total RNA of leukocyte cells obtained from blood of patients with well differentiated thyroid carcinoma. This scFv antibody library was selected using the Biopanning and Rapid Analysis of Selective Interactive Ligands method (BRASIL) and Phage display technology against tumor thyroid cells, aiming to find specific cell-surface binders. The selected clones were identified by dot blot and ELISA assays and their reactivity analyzed against tumor, goiter and adenoma proteins. One clone (scFv-C1) presented the highest reactivity ratio between cancer and the control group (goiter and adenoma) and was chosen for further analysis. Immunohistochemistry was performed by means of Tissue Microarray with two hundred and twenty-nine thyroid cases (110 carcinomas, 52 follicular adenomas, 49 goiters and 18 normal tissues) including 38 papillary, 42 follicular and 30 variant follicular in the carcinoma group. The scFv-C1 reacted specifically to cancer tissues sections, showed strong reactivity with cytoplasm and was able to distinguish cancer to control groups (goiter, adenoma and normal thyroid) with_statistically significance (p<0,0001). The scFv-C1 fragment antibody described here may be a potential biomarker candidate for diagnostics and prognostics of thyroid cancer / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A vasectomia, como mÃtodo de contracepÃÃo, poderà ser revertida em situaÃÃes especiais, atravÃs dos procedimentos cirÃrgicos; porÃm, o desenvolvimento de respostas humorais auto-imunes pÃs-vasectomia, em alguns, poderà ser um impeditivo para restaurar a fertilidade. Neste contexto, investigaÃÃes sobre a incidÃncia e evoluÃÃo das respostas auto-imunes em vasectomizados poderÃo oferecer subsÃdios, tanto para a compreensÃo da infertilidade auto-imune associada à vasectomia, quanto para avaliaÃÃo do sucesso nos esforÃos para restauraÃÃo da fertilidade nestes indivÃduos. Foram selecionados 20 voluntÃrios com desejo manifesto de se submeterem à vasectomia; encaminhados, na sua maioria, pela Maternidade Escola Assis Chateaubriand. As vasectomias foram realizadas pelo autor da pesquisa, no AmbulatÃrio de Cirurgia da Faculdade de Medicina. Amostras de sangue e sÃmen foram colhidas antes e 30, 90 e 180 dias apÃs a vasectomia, e a presenÃa das IgG e IgA, avaliada no Centro de ReproduÃÃo Assistida do Cearà (CONCEPTUS), atravÃs do Imunobead Test (IBT), com o mÃtodo direto para amostras prÃ-cirÃrgicas de sÃmen e o mÃtodo indireto para as amostras seminais posteriores e as de soro. Os anticorpos foram detectados nos soro e/ou sÃmen, nas positividades de >0% (todas as reaÃÃes positivas) e &#8805; 20% de espermatozÃides ligados Ãs imunoglobulinas. Foram estudadas: i) avaliaÃÃes comparativas das incidÃncias das IgG e/ou IgA , ii) evoluÃÃes dos tÃtulos dos anticorpos em funÃÃo do tempo, e iii) anÃlises dos sÃtios de ligaÃÃo dos anticorpos nos espermatozÃides de voluntÃrios. Nenhuma das amostras prÃ-vasectomia revelou presenÃa de anticorpos antiespermatozÃides; porÃm IgG e IGA estavam presentes no soro e sÃmen simultaneamente nas amostras pÃs-vasectomia da maioria dos indivÃduos, revelando crescimento progressivo de 30 atà 180 dias. A presenÃa conjunta dos anticorpos sempre se mostrou predominante. Na positividade de >0%, 25% dos vasectomizados eram positivos em 30 dias, com IgG ou IgA presentes, individualmente, em poucos. Em 90 dias, 60% dos vasectomizados revelou presenÃa dos anticorpos, o que aumentou para 85% em 180 dias. A positividade de &#8805; 20% nÃo foi encontrada em nenhum dos indivÃduos. Em exames de soro, isoladamente, a positividade de &#8805; 20% aumentou de um indivÃduo em 30 dias, para trÃs em 90 dias, e para quatro (25%) em 180 dias. No sÃmen, esta positividade nÃo foi detectada em nenhum indivÃduo. AvaliaÃÃes dos tÃtulos de anticorpos (% de espermatozÃides ligados aos anticorpos), revelaram que as IgG e IgA aumentaram progressivamente com tempo, tanto no soro quanto no sÃmen, com a IgG sempre na dianteira; atingindo, aos 180 dias, os valores mÃdios de 7,90% (mediana â 5%) e 6,35% (mediana - 4,50%); respectivamente para IgG e IgA. A peÃa intermediÃria (PI) e cauda do espermatozÃide, nesta ordem, foram os principais sÃtios de ligaÃÃo das IgG e IgA. Esses resultados mostram que um nÃmero significativo de atà 85% dos vasectomizados desenvolve as IgG e IgA antiespermatozÃides nos primeiros 180 dias; com a positividade crescente que alcanÃa &#8805; 20% em alguns; o que poderÃ, em tese, comprometer as tentativas futuras de restauraÃÃo da fertilidade nestes indivÃduos. / The contraceptive method of vasectomy can be reversed, in certain circumstances, through surgical procedures; but the incidence of autoimmune antisperm humoral responses in some vasectomized individuals may impede attempts to restore fertility. In this context, investigations on the incidence and evolution of autoimmune responses in vasectomized individuals may contribute for the understanding of autoimmune infertility associated with vasectomy, as also for the assessment of viability of restorative surgeries for fertility. Twenty individuals who have requested voluntary vasectomy for contraception, most referred by the Assis Chateaubriand School of Maternity of the Federal University of CearÃ, were selected for the study. Surgical vasectomy was performed by the author, in the Ambulatory ward of the Faculty of Medicine. Blood and semen samples were collected from the individuals prior to, and 30, 90 and 180 days after vasectomy. Antisperm IgG and IgA were evaluated in the Center for Assisted Reproduction of Cearà (CONCEPTUS), by âImmunobeadâ technique (IBT), using the direct method for the detection of antibodies in pre-vasectomy seminal samples, and the indirect IBT for evaluation of antibodies in semen samples after vasectomy, and for sera. Antibody presence was measured as >0% (all positive results) and &#8805; 20% of spermatozoa bound to antibodies. The parameters studied were: i) comparative evaluations of the incidences of IgG and/or IgA in serum and/or semen; ii) evolution of the titers of these antibodies with time; and iii) the sites of binding of the antibodies in the spermatozoa of volunteers. All the pre-vasectomy serum and semen samples were devoid of antisperm antibodies; however, IgG and/or IgA were present in post-vasectomy serum and semen samples in a majority of individuals, in increasing numbers from 30 to 180 days. The simultaneous presence of IgG and IgA was always predominant. At >0% positivity, 25% of the individuals were positive in 30 days, with IgG or IgA individually present in very few. In 90 days, 60% of the vasectomized were positive, rising to 85% in 180 days. No positive reactivity was detected for &#8805; 20%. Evaluation of antibodies in serum individually showed that positive results at &#8805; 20% increased from one (30 days) to three in 90days, and to four in 180 days. In semen, this positivity was not detected. The evaluation of antibody titers (% of spermatozoa bound to antibodies) revealed increase of IgG and IgA with time both in serum and semen, with the former always ahead of IgA, and reaching mean values at 180 days of 7,9% (median â 5%) and 6,35% (4,5%); respectively for IgG and IgA. The midpiece and the tail of spermatozoa were the principal binding sites, in that order, for both IgG and IgA. These results show that up to 85% of individuals develop antisperm antibodies in 180 days after vasectomy, with a steadily increasing level of positivity reaching &#8805; 20% in some; which may potentially compromise efforts to restore fertility in them.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-05T15:16:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Alana Batista Fernandes.pdf: 1845250 bytes, checksum: 5a81b4935b1849b58c0184317d0b69cf (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-05T15:17:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Alana Batista Fernandes.pdf: 1845250 bytes, checksum: 5a81b4935b1849b58c0184317d0b69cf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-05T15:17:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Alana Batista Fernandes.pdf: 1845250 bytes, checksum: 5a81b4935b1849b58c0184317d0b69cf (MD5) Previous issue date: 2016-04-19 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Chikungunya virus (CHIKV) is an RNA virus (family Togaviridae, genus Alphavirus) transmitted to humans through the bite of female mosquitoes Aedes aegypti and Aedes albopictus. The clinical onset in CHIKV infection is most often characterized by fever and joint pain, and so far there is no specific antiviral therapy or vaccine for the treatment of the infection. The diagnosis of CHIKV infection is based on clinical and laboratory findings, with the latter being performed by virus isolation, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), serology, and rapid tests: To produce a recombinant antigen through the cloning and expression of the capsid protein (C) of CHIKV in order to detect anti-CHIKV antibodies in human serum samples by immunoenzymatic assay. A synthetic gene (gBlock), specifically designed for this study, corresponding to the protein C (400 base pair) of Chikungunya virus, was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and then cloned into pGEM-T Easy system-Escherichia coli. The transformant clones were sequenced, and recombinant products were digested using the restriction endonucleases EcoRI and BamHI, and then subcloned and expressed in the vector pET-23a+ Escherichia coli BL21 (DE3). The recombinant protein C expression and the molecular weight were determined by SDS-PAGE and Dot Blot and purified by affinity chromatography using nickel column. A immunoenzymatic assay was performed using the recombinant antigen to detect IgM and IgG antibodies in sera from patients with CHIKV infection confirmed by the National Reference Laboratory of the Ministry of Health, as well as sera from patients tested positive for Mayaro virus, Dengue virus and Cytomegalovirus infection. The derived recombinant protein showed size and antigenicity compatible with the native protein C from the CHIKV; a concentration of 0.342 ng/mL of recombinant protein C was obtained using the pET-23a+ E. coli BL21 (DE3); the affinity chromatography using nickel column was effective to obtain the soluble protein C, confirmed by the Bradford method; the immunoenzymatic assay using the recombinant antigen showed cross-reactivity to others Alphavirus pathogens. The results indicate that the expression system pET-23a+ E. coli BL21 (DE3) was effective to produce the recombinant protein C of CHIKV, however the antigen was not sensitive enough to detect only the CHIKV infection. / O vírus Chikungunya (CHIKV) é um vírus de RNA (família Togaviridae, gênero Alphavirus), transmitido aos seres humanos através da picada de mosquitos fêmeas de Aedes aegypti e Aedes albopictus. O início das manifestações clínicas da infecção por CHIKV na maioria das vezes é caracterizada por febre e dor nas articulações, e até agora não existe uma terapia antiviral específico ou vacina para o tratamento da infecção. O diagnóstico da infecção CHIKV é baseado em achados clínicos e laboratoriais, com o último sendo realizada por isolamento do vírus, transcrição reversa-polimerase reação em cadeia (RT-PCR), sorologia e testes rápidos. Para produzir um antígeno recombinante através da clonagem e expressão da proteína do capsídeo (C) de CHIKV de modo a detectar anticorpos anti-CHIKV em amostras de soro humano, por ensaio imunoenzimático. Um gene sintético (gBlock), especificamente concebidos para esse estudo, correspondente à proteína C do capsídeo (400 pares de bases) do vírus Chikungunya, foi amplificado por reação em cadeia da polimerase (PCR) e, em seguida, clonado em pGEM-T Easy sistema de Escherichia coli. Os clones transformantes foram sequenciados, e os produtos recombinantes foram digeridos com as endonucleases de restrição EcoRI e BamHI, e depois subclonado e expresso no vector pET-23a+ e Escherichia coli BL21 (DE3). A expressão da proteína C recombinante e o peso molecular foram determinados por SDS-PAGE e Dot Blot e purificado por cromatografia de afinidade utilizando uma coluna de níquel. Um ensaio imunoenzimático foi realizada utilizando o antígeno recombinante para detecção de anticorpos IgM e IgG em soros de pacientes com infecção CHIKV confirmados pelo laboratório nacional de referência do Ministério da Saúde, bem como soros de pacientes positivos para o vírus Mayaro, vírus da dengue e citomegalovírus infecção. O derivado da proteína recombinante mostrou tamanho e antigenicidade compatível com a proteína C nativa do CHIKV; uma concentração de 0,342 ng / mL de proteína C recombinante foi obtido utilizando o pET-23a+ de E. coli BL21 (DE3); a cromatografia de afinidade utilizando uma coluna de níquel foi eficaz para obter a proteína C solúvel, confirmada pelo método de Bradford; o ensaio imunoenzimático utilizando o antígeno recombinante mostrou reatividade cruzada com outros agentes patogénicos de Aphavírus. Os resultados indicam que o sistema de expressão pET-23a+ de E. coli BL21 (DE3) foi eficaz para produzir a proteína C recombinante de CHIKV, no entanto, o antígeno não foi suficientemente sensível para detectar apenas a infecção CHIKV.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-01-25T14:50:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Luana Kelly Lima Santana.pdf: 2499614 bytes, checksum: 94374bcf1be6d3610725ac792c811734 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-01-25T14:50:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Luana Kelly Lima Santana.pdf: 2499614 bytes, checksum: 94374bcf1be6d3610725ac792c811734 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-25T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Luana Kelly Lima Santana.pdf: 2499614 bytes, checksum: 94374bcf1be6d3610725ac792c811734 (MD5) Previous issue date: 2016-10-20 / Immunosensor is an immune system based on the interaction of antigen-antibody recognition, which involves immobilizing antigens or antibodies on the transducer surface, with consequent emission of signals during this molecular recognition interaction. The types of transducers are available physicochemical or integrated microsystems, optical, electrochemical, thermometric, piezoelectric, magnetic or micromechanical. Several immunosensors are being developed to simplify the detection process, reduce the analysis time, improve the sensitivity and reduce costs. Among the detection techniques electrochemical generates high quality data and is suitable for detection of cytokines, proteins, enzymes and other substances. The literature that supported the review was based on papers published in the last 20 years (1996-2016), obtained from Scientific databases like ScienceDirect, Capes, Scopus, and Lilacs and at the end we selected 2,332 articles, which used the technique electrochemistry. Among the advantages of this technique are the diversity of options that are available to the public in terms of electrodes, instruments, reagents and enzyme markers. In addition to having low electrochemical interferences in complex clinical or food sample, reduction or elimination of washing steps or the addition of external reagents coupled with the low cost and ease of instrumentation used for fast diagnosis, prevention and treatment of many diseases including infectious and autoimmune diseases. / Imunossensor é um sistema baseado na interação imune de reconhecimento antígeno-anticorpo, que envolve imobilização de antígenos ou anticorpos sobre a superfície transdutora, com consequente emissão de sinais durante essa interação de reconhecimento molecular. Os tipos de transdutores disponíveis são os físico-químicos ou microssistemas integrados, ópticos, eletroquímicos, termométricos, piezoelétricos, magnéticos ou micromecânicos. Diversos imunossensores estão sendo desenvolvidos para simplificar os processos de detecção, diminuir o tempo de análise, melhorar a sensibilidade e reduzir custos. Dentre as técnicas de detecção a eletroquímica gera dados de elevada qualidade e é indicada para detecção de citocinas, proteínas, enzimas e outras substâncias. A pesquisa bibliográfica que subsidiou essa revisão foi baseada em trabalhos publicados nos últimos 20 anos (1996 a 2016), obtidos nas Bases de dados Científicos como ScienceDirect, Periódicos Capes, Scopus e Lilacs e, ao final foram selecionados 2.332 artigos, que utilizaram a técnica eletroquímica. Dentre as vantagens dessa técnica têm-se a diversidade de opções que estão disponíveis para o público em termos de eletrodos, instrumentos, marcadores enzimáticos e reagentes. Além de apresentarem pequeno nível de interferências eletroquímicas em amostras clínicas ou alimentares complexas, redução ou eliminação de etapas de lavagem ou adição de reagentes externos acoplados com o baixo custo e a facilidade de uso de instrumentação para o diagnóstico rápido, prevenção e tratamento de muitas doenças, incluindo doenças infecciosas e autoimunes.