Orientador: Carmelinda Schmidt Unterkircher / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Keila Maria Roncato Duarte / Banca: Luiz Antonio Guimaraes Cabral / Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Resumo: O presente estudo teve como objetivo a produção de um anticorpo monoclonalreativo com leveduras do gênero Candida. Esplenócitos de camundongosBALB/c previamente imunizados com Candidaforam fusionados in vitro comcélulas de mieloma Sp2-0Ag14 e os híbridos resultantes mantidos em cultura a37°C com 5% de C02. Os sobrenadantes das células em crescimento foram testados por ELISA para a produção de anticorpos. Os pontos positivos {0,29%)foram clonados para obter-se o anticorpo monoclonal e posteriormenteexpandidos in vivo emperitônio de camundongo. O anticorpo produzido peloclone foi purificado e isotipado. O anticorpo monoclonal foi denominado 76C e éuma lgMK. O 76C é dirigido para um epítopo de mananoproteína da paredecelular de Candida, cuja natureza ainda não foi completamente elucidada. Oanticorpo 76C foi analisado por DOT SLOT contra diferentes cepas de Candidareagindo positivamente com 87,5% das amostras testadas. O anticorpomonoclonal (76C) será uma ferramenta útil no estudo sorológico de pacientescom candidose invasiva. / Abstract: The aim of this study was to obtain a reactive monoclonal antibody against Candida albicans. Spleen celIs of BALB/c mice previously immunized withCandida were fused in vitro with mielorna cells Sp2-0Ag14. The resultant hybridcells were kept in culture medium at 5% C02.The suspension growing cells were tested by ELISA to check the antibodies titer. The positive colonies were cloned to achieve the monoclonal antibody and further expanded in mice peritoneum. The antibody produced was purified and isotope. The monoclonal antibody was denominated 76C. The 76C was directed against mannoprotein molecules from Candida cell surface, which has not yet been completely investigated to find outlhe specific nature of epitope. The antibody 76C was analyzed by DOT BLOTagainst different Candida species and there were positives results in 87,5% of the tested samples_ The monoclonal antibody 76C will be a useful tool to investigate oligomannoside epitope from mannan and could be applied in sera diagnosis in invasive candidiasis and in studies of glicidic epitope / Doutor

Orientador: Elenice Deffune / Resumo: Diante do crescente uso de células-tronco em medicina regenerativa aliada a importância de diagnóstico rápido, os imunossensores surgem como ferramentas que propiciam rapidez, seletividade e sensibilidade. Foi investigada a construção de um imunossensor para identificação de células-tronco mesenquimais de coelho frente à inexistência no mercado, de marcadores específicos para a espécie. Com o objetivo de identificar a célula-tronco mesenquimal (CTM) em amostras biológicas, foi proposto a construção de filmes pela técnica layer-by-layer (LbL) com solução de quitosana e anticorpo monoclonal de especificidade anti-CD90 produzido home made (HM) para aplicação em imunossensores eletroquímicos. Inicialmente foi caracterizado o anticorpo monoclonal produzido por técnicas imunoquímicas. A classe do anticorpo produzido é IgG1. O crescimento dos filmes foi confirmado por voltametria cíclica (VC) pela área dos voltamogramas. A distorção dos voltamogramas foi observada com maior adsorção em 4 bicamadas, considerado como cobertura completa do eletrodo. Foi padronizado e produzido o biofilme de 4 bicamadas para fixação dos anticorpos monoclonais murinos anti-CD90 HM com solução de quitosana 0,2%. A análise dos resultados obtidos com imunossensor comparando-se com a citometria de fluxo identifica a elevada sensibilidade do mesmo para a confirmação da presença de CTM em amostras biológicas, havendo necessidade de mais desenvolvimento para a quantificação das células. A partir de uma concent... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-11Bitstream added on 2014-06-13T18:31:47Z : No. of bitstreams: 1 millen_dd_me_botfmvz.pdf: 639274 bytes, checksum: cd47f616a6044fb18da77875d3325af1 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Esse estudo, conduzido no confinamento experimental da UNESP – Botucatu, foi realizado para testar anticorpos contra as bactérias ruminais S. bovis e F. necrophorum e várias cepas de bactérias proteolíticas sobre o desempenho e incidências de paraqueratose ruminal (IPR) e abscesso hepático em bovinos jovens com diferentes graus de sangue Zebu. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial 3X2 em parcelas subdivididas com três repetições (4 animais/baia), aonde três grupos genéticos (24 Tri-Cross (TC) - ½ Brangus, ¼ Angus, ¼ Nelore; 24 Canchim (CC) - ⅝ Charolais, ⅜ Nelore e 24 Nelores (NE)) e dois aditivos alimentares (anticorpos policlonais – 10 ml/cabeça/dia (AP) e monensina sódica – 30 mg/kg de dieta (MN)) foram as variáveis estudadas em três períodos de coleta de dados, correspondentes as três dietas com níveis crescentes de concentrado (73, 82 e 85%). Não houve interação (P>0,05) entre os grupos genéticos e os aditivos alimentares estudados. Animais suplementados com AP apresentaram similares (P>0,05) ganho de peso diário (GPD), ingestão de matéria seca em quilos (IMSKG), conversão alimentar (CA) e custo para ganhar um quilo de peso vivo que aqueles suplementados com MN. A ingestão de matéria seca em porcentagem do peso vivo (IMSPV) foi maior (P<0,05) para animais suplementados com AP que aqueles suplementados com MN. As IMSPV e IMSKG foram maiores na dieta de 73% de concentrado (P<0,05) para animais suplementados com AP e não diferiram entre os aditivos alimentares para as outras duas dietas (P>0,05). Conforme as dietas propostas, GPD e IMSPV diminuíram (P<0,05) e CA e IMSKG aumentaram, linearmente, durante o estudo (P<0,05). Animais suplementados com AP apresentarem menor (P=0,09) IPR que àqueles suplementados com MN. TC e CC apresentaram maiores (P<0,05) IMS e GDP e melhor (P<0,05) CA que NE. Rumens de NE mostraram, significativamente (P<0,05), maiores IPR que TC e CC. / This study, conducted at the São Paulo State University feedlot, Botucatu Campus, Brazil, was designed to test antibodies against S. bovis, F. necrophorum, and several strains of proteolytic bacteria (RMT) on performance and parakeratosis and liver abscesses incidences of Bos indicus-based types (BIBT). The experiment was designed as a split plot 3X2 factorial scheme, replicated thrice (4 bulls/pen), in which 24 8-mo-old bulls (297 kg) of each of three BIBT: 3-way cross (½ Brangus, ¼ Angus, ¼ Nellore; TC), Canchim (⅝ Charolais, ⅜ Nellore; CC), or Nellore (NE) were fed one of two diets containing either monensin (MO) at 30 mg/kg of diet or RMT at 10 mL/head/d and evaluated in increasing levels of concentrate (73, 82 and 85%). There were no interactions (P>0.05) between breed type and feed additives. Bulls fed RMT had similar (P>0.05) average daily gain (ADG), dry matter intake in kilos (DMIKG), cost to gain one kilo of body weight and feed conversion (FC) as those fed MO. When analyzed as percentage of BW, bulls fed RMT consumed (P<0.05) more feed than those fed MO. DMIKG and DMIBW were higher in 73% concentrate but did not differ in the others two diets evaluated. According to diets offered, ADG and DMIBW were reduced (P<0.05) and DMIKG and FC (P<0.05) were increased as the level of concentrate in the diet got higher. Bulls fed RMT to have lesser (P=0.09) rumen parakeratosis scores than those fed MO. TC and CC had greater (P<0.05) DMI and ADG, and better (P<0.05) FC than NE. Rumens from NE bulls had greater (P<0.05) parakeratosis scores than CC and TC. Just one liver abscess was found in this study what led to conclude as no abscesses incidence. Feeding RMT enhanced intake of Bos indicus-based bulls fed 73% concentrate diet while maintaining rumen health, and permitting performance similar to that of bulls fed monensin. RMT could be an eventual substitute if monensin was really prohibited.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T18:21:09Z : No. of bitstreams: 1 inacio_jc_me_botfm.pdf: 9052728 bytes, checksum: 924e48540d09685b61abdb2d6903fb6d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A pesquisa em Biologia Celular, depende de técnicas laboratoriais que possam ser usadas para estudar a estrutura e função celular. Importantes avanços na compreensão das células têm sucedido diretamente o desenvolvimento de novas técnicas, que permitiram novos meios de investigação. Uma grande inovação da indústria biotecnológica é a produção de anticorpos monoclonais que são de extrema importância na área médica . Todas as células do organismo apresentam um conjunto de marcadores de superfície que caracterizam a singularidade biológica e a marca das células que os contêm. Contudo, as células-tronco mesenquimais (CTMs) apresentam poucos marcadores imunofenotípicos específicos, sendo sua caracterização estabelecida pela identificação de um perfil de marcadores específicos e não específicos. Essa imunofenotipagem é realizada com a utilização de anticorpos monoclonais que reconhecem esses antígenos de superfície da membrana celular, conforme demonstrado em estudos contemporâneos. O importante avanço da Terapia Celular em diferentes espécies animais tem alavancado à produção de anticorpos monoclonais para a caracterização fenotípica das célulastronco, sejam de origem hematopoiéticas ou de outros tecidos, por exigentes critérios de qualidade. Para o sucesso terapêutico há que se definir o perfil fenotípico das células a serem utilizadas na Terapia Celular, bem como proceder à quantificação das mesmas. Tendo em vista a inexistência no mercado de reagentes para coelhos e o elevado custo de aquisição para a espécie humana, o objetivo desta pesquisa foi desenvolver uma ferramenta diagnóstica explorando seu potencial de uso.Foi realizada a caracterização de dois clones de anticorpos monoclonais dirigidos contra antígenos expressos em células-tronco mesenquimais de coelhos, produzidos previamente no protocolo MSC, através de estudo... / Research in Cell Biology, depends on laboratory techniques that can be used to study the structure and cellular function. Important advances in understanding the cells have happened directly the development of new techniques, which enabled new ways of investigation. Breakthrough biotechnology industry is the production of monoclonal antibodies that are of extreme importance in the medical field. All body cells have a set of surface markers that characterize the biological uniqueness and mark cells that contain them. However, the mesenchymal stem cells (MSCs) have few specific immunophenotypic markers, and their characterization established by identifying a profile of specific markers and nonspecific. This immunophenotype is performed with the use of monoclonal antibodies that recognize these surface antigens of the cell membrane, as demonstrated in contemporary studies. The important advance in cell therapy in different species has underpinned the production of monoclonal antibodies for the phenotypic characterization of stem cells, they originate in hematopoietic or other tissues, exacting standards of quality. Therapeutic success is defined as the phenotypic profile of cells to be used in cell therapy, as well as the quantification of them. Given the lack of reagents on the market for rabbits and the high cost to human beings, the goal of this research was to develop a diagnostic tool for exploring its potential use. The characterization of two clones of monoclonal antibodies directed against antigens expressed in mesenchymal stem cells from rabbits, previously produced in the MSC protocol, through study with five samples of bone marrow and fat of animals expanded in culture so watching the speech recognition phenotype of the cells and the level of recognition of clones against 5 different passages of cell culture.The production of monoclonal antibody directed against antigens... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:55:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4759.pdf: 1559938 bytes, checksum: 260ce4d3262af22c55535d2799cede81 (MD5) Previous issue date: 2012-02-23 / Universidade Federal de Sao Carlos / The large scale production of monoclonal antibodies is the Biotechnology field that has achieved the biggest advances and realizations over the last 20 years, especially in the area of diagnosis and therapeutic applications. The world market of products for clinical diagnosis reached the value of US$ 19.0 billions in 2008 and continues to grow at a rate of 5 % per year. The development of bioprocesses of high productivity in large scale production of monoclonal antibodies (MAbs) depends on the determination and optimization of various kinetic and metabolic parameters of hybridomas. The aim of this study was to analyze kinetic and metabolic characteristics of murine hybridomas for production of immunoglobulins for blood typing by the ABO system, of great interest to the Brazilian public health. Three strains of murine hybridomas named ED7, ED9 and TAN generated in a brazilian research center to produce the antibodies anti-A, anti-B and anti-A,B, respectively, were evaluated for this purpose. Using only two lineage, ED7 and ED9, because of presenting bigger potential and stability for production of AMs in large scale, experiments of cultivation were carried out in spinner flask of 500 mL and in biorreator (Bioflo-110) of 2L, using culture media RPMI 1640 and MAb Quantum Yield-BD, both with addition of 10 % v/v of fetal bovine serum. The first one being the medium of origin of the hybrid clones, in some cases supplemented with amino acids (Gln, Met, Cys, Ser, Lys and Pro), and the second, a new alternative medium to which the hybridomas had to be adapted before the cultivation experiments. The results showed the need for additional nutritional balance of the media, especially RPMIS, to meet the nutritional demands of the two hybridomas. Through nutritional balance and cultivation in better controlled conditions in the bioreactor, it was possible to raise the maximum specific growth rate &#956;max from 0.0304 ± 0.0014 h-1 to ±0.0329 0.002 h-1 and the productivity of AM from 0.031 mg/L.h to 0.077 mg/L.h with the lineage ED7. With the lineage ED9 the &#956;max decreased from 0.0412 ± 0.0024 h-1 to 0.0373± h-1 but increased the productivity of AM from 0.030 mg / L.h to 0.040 mg / L.h. On the other hand, agglutination tests showed that the antibodies were functional and with titles stable and within normal limits. Despite the gains in productivity of the two AMs, the results highlighted a typical problem found in vitro cultivation of hybridomas, which is characterized by deregulation of its metabolism in the presence of high concentrations of glucose and glutamine, conduzing to overproction of the metabolites lactate and amonia. Because of this, one can predict that the future development of the bioprocess for the production of anti-A and anti-AB has to go through a stage of evaluation and system optimization in fed batch cultivation. / A produção em larga escala de anticorpos monoclonais é o campo da Biotecnologia que tem conseguido os maiores avanços e realizações ao longo dos últimos 20 anos, especialmente na área de diagnóstico e de aplicações terapêuticas. O mercado mundial de produtos para diagnóstico clínico atingiu o valor de US$ 19,0 bilhões em 2008 e continua crescendo a um ritmo de 5% ao ano. O desenvolvimento de bioprocessos de alta produtividade em larga escala para produção de anticorpos monoclonais (AMs) depende da determinação e otimização de vários parâmetros cinéticos e metabólicos dos hibridomas. A finalidade deste trabalho foi analisar características cinéticas e metabólicas de hibridomas murinos para produção de imunoglobulinas para tipagem sanguinea pelo sistema ABO, de grande interesse para a saúde pública Brasileira. Três linhagens de hibridomas murinos denominadas ED7, ED9 e TAN obtidas num centro de pesquisa brasileiro para produzir os anticorpos anti-A, anti-B e anti-AB, respectivamente, foram avaliados com essa finalidade. Utilizando apenas as duas linhagens, ED7 e ED9, por apresentarem maior potencial e estabilidade para produção de AMs em larga escala foram realizados experimentos de cultivo em batelada em frasco spinner de 500 mL e em biorreator (Bioflo-110) de 2L, utilizando meios de cultura RPMI 1640 e Mab Quantum Yield-BD, ambos com adição de 10% v/v de soro fetal bovino. O primeiro sendo meio de origem dos clones híbridos, em alguns casos teve que ser suplementado com aminoácidos (Gln, Met, Cys, Ser, Lys e Pro) e, o segundo, um meio alternativo ao qual tiveram que ser adaptados os hibridomas sem suplementos antes dos experimentos de cultivo em regime de batelada. Os resultados mostraram a necessidade de balanceamento nutricional adicional dos meios, especialmente do RPMIS, para satisfazer as demandas nutricionais dos dois hibridomas. Mediante balanceamento nutricional e cultivos em condições melhor controladas em biorreator conseguiu-se incrementar a taxa especifíca máxima de crescimento &#956;max de 0,0304±0,0014 h-1 para 0,0329±0,002 h-1 e a produtividade de AM de 0,031 mg/L.h para 0,077 mg/L.h com a linhagem ED7. Com a linhagem ED9, o &#956;max diminuiu de 0,0412±0,0024 h-1 para 0,0373±0,0019 h-1 mas a produtividade de AM aumentou de 0,030 mg/L.h para 0,040 mg/L.h. Por outro lado, testes de aglutinação mostraram que os AMs estavam funcionais e com títulos estáveis e dentro dos limites aceitáveis. Apesar dos ganhos em produtividade dos dois AMs, os resultados permitiram constatar um problema típico encontrado no cultivo in vitro de hibridomas que se caracteriza por desregulação de seu metabolismo na presença de altas concentrações de glicose e glutamina, o que provoca produção exacerbada dos metabólitos lactato e amônia. Em função disto, pode-se prever que o futuro do desenvolvimento do bioprocesso de produção de anti-A e anti-AB tenha que passar por uma etapa de avaliação e otimização em sistema de cultivo de batelada alimentada.

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-04. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:08Z : No. of bitstreams: 1 000870645_20170104.pdf: 242400 bytes, checksum: 9d69e8bb5f77471c03c024ed5ca56917 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-01-06T13:21:19Z: 000870645_20170104.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-01-06T13:22:02Z : No. of bitstreams: 1 000870645.pdf: 525092 bytes, checksum: 20064957cf347be120a7f3cbbb1f7137 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Dogs infected with Leishmania infantum showed a reduction in the number of lymphocytes T. PD-1 (Programmed cell death 1) a new member of the B7-CD28 family, it is expressed by cells of the immune system and its binding to PD-L1 (CD274) or PD-L2 (CD273) induces deactivation of T cells or apoptosis. This study aimed to evaluate the PD-1 expression and its ligands as well as their role in T lymphocyte induction of apoptosis, TNF-α and IL-4 secretion, nitric oxide production and parasite load in dogs with visceral leishmaniasis. We observed that in canine visceral leishmaniasis PD-1 and its ligands involved in induction of apoptosis of T lymphocytes, are regulating the nitric oxide production, TNF-α, IL-4, as well as the parasitic load. This study helps to clarify the mechanism of immune response and immunotherapeutic drugs such as blocking monoclonal antibodies that can influence the LVC / FAPESP: 2013/066849

Orientador: Sandro Roberto Valentini / Co-orientador: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Andréia Machado Leopoldino / Banca: Mari Cleide Sogayar / Banca: Érico Tosoni Costa / Resumo: A proteína MxA humana é membro da superfamília de GTPases dinaminas. De maneira geral, as chamadas proteínas Mx estão presentes na grande maioria dos organismos vertebrados, estudados até o momento, e possuem dois domínios estruturais, chamados GTPase e CID-GED (stalk), além da capacidade de homooligomerização e associação com membranas intracelulares. Além disso, as proteínas Mx são produzidas unicamente após a sensibilização celular por interferons do tipo I e III. Entre as propriedades funcionais de MxA, destaca-se a sua vasta atividade contra diferentes vírus de RNA e DNA, incluindo o vírus influenza e membros da família dos buniavírus. Além disso, o silenciamento gênico de MxA está associado ao fenótipo de imortalização celular em uma série de neoplasias. Assim, MxA desperta o interesse por ser uma das proteínas chave nas respostas mediadas por interferons e por estar envolvida no controle da proliferação celular. Recentemente, por meio de rastreamento de duplo-híbrido, utilizando uma biblioteca de cDNA preparada a partir de cérebro fetal humano, foi possível mostrar que MxA interage com fatores envolvidos no processo de SUMOilação de proteínas e na formação de corpúsculos nucleares denominados PMLNB e com uma série de proteínas relacionadas com o controle da transcrição e apoptose. Neste estudo, foi investigada a interação entre MxA e as proteínas envolvidas nos processo de SUMOilação. Assim, foi possível confirmar a interação física entre a proteína MxA e os ligantes Ubc9 e SUMO1, por ensaios de coimunoprecipitação. A seguir, através de ensaios de duplo-híbrido, foi possível determinar que a região EIL (E67-interacting Loop) de SUMO1 e o domínio CID-GED de MxA estão envolvidos na interação entre essas proteínas e que esta interação independe de sequências SIM (SUMO-interacting motif) presentes em MxA. Ainda, foi possível determinar que Ubc9 interage diretamente com ... / Abstract: The human MxA protein is a member of the superfamily of GTPases dynamins. The so called Mx proteins are present in the majority of the vertebrate organisms investigated so far and contain two structural domains, named GTPase and CID-GED (stalk), besides the capabilities of homo-oligomerization and association with intracellular membranes. Moreover, the Mx proteins are strictly produced upon cell sensibilization with type I and III interferons. The vast antiviral activity against RNA and DNA viruses, including the Influenza virus and members of the bunyaviridae family, is among the functional properties of MxA. Moreover, MX1 epigenetic silencing is associated with cellular immortalization in neoplasias. Therefore, the study of MxA is of great interest as it is a key component of the Interferon-mediated pathways and cell proliferation control. Recentely, in a two-hybrid screen using a fetal brain cDNA library, it was possible to reveal that MxA interacts with proteins related to the post-translational modification process named SUMOylation and to the assemble of the nuclear bodies named PML-NBs and with proteins implicated in the control of transcription and apoptose. In this study, it was investigated the interaction between MxA and the components of the protein SUMOylation pathway. It was possible to confirm the physical interaction between MxA and Ubc9 and SUMO1, using co-immunopreciptation assay. Then, using the yeast two-hybrid system, it was possible to determine that the EIL (E67-interacting loop) region on SUMO1 interacts with the CID-GED domain of MxA without the requirement of the SIM sequences (SUMO-interacting motif) present in MxA. Moreover, it was determined that Ubc9 interacts with the GTPase domain of MxA and that MxA homo-oligomerization is important for its interaction with SUMO1 and Ubc9. Also, we were able to demonstrate for the first time that the protein MxA undergoes SUMOylation by SUMO1, SUMO2 and SUMO3. Finally, it ... / Doutor

Orientador: Germano Francisco Biondi / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Cáris Maroni Nunes / Banca: Márjorie de Assis Golim / Banca: Marli Leite de Moraes / Banca: Milton Hissashi Yamamura / Resumo: A cisticercose bovina é uma zoonose cosmopolita e presente nos rebanhos bovinos de corte no Brasil, que ocorre em países em desenvolvimento, onde a infraestrutura sanitária inadequada e as más práticas na criação de gado permitem a contaminação de pastagem e água com fezes humanas contendo ovos do parasita. Os prejuízos financeiros decorrem da condenação ou tratamento (salga ou da congelação) das carcaças infectadas, dependendo da intensidade da infecção. O diagnóstico da cisticercose bovina é realizado durante o abate, pela inspeção das carcaças e realização de cortes em locais de predileção do parasita como a língua, masseter, coração e diafragma. Assim, a fim de promover o diagnóstico ante-mortem e permitir o tratamento adequado de animais infectados, muitos estudos foram realizados utilizando-se técnicas de detecção de anticorpos ou antígenos em amostras de soro bovino. O teste ELISA baseado em anticorpos monoclonais (MAbs) para a detecção de antígeno circulante (Ag-ELISA) tem sido estudado, mas apresenta baixa sensibilidade em animais com infecção leve, e permite a sua realização apenas em laboratórios bem equipados. O uso de biossensores em medicina tem crescido nos últimos anos, permitindo a detecção e quantificação de metabólitos, bem como o uso de diversos biopolímeros como matriz de imobilização como quitosana e fibroína da seda. Imunossensores são biossensores cuja resposta bioquímica relaciona-se à interação antígeno-anticorpo, que podem ser utilizados para detectar anticorpos ou antígenos, tendo sido utilizados no diagnóstico de enfermidades. Nesta pesquisa, desenvolveu-se o primeiro imunossensor para o diagnóstico da cisticercose bovina, com filmes produzidos camada por camada (LbL) contendo um MAb dirigido contra antígeno bruto de metacestódeos de T. saginata (TAEB) e fibroína de seda (SF), imobilizados, que mostrou-se promissor ... / Abstract: Bovine cysticercosis is a cosmopolitan zoonosis and very widespread in the Brazilian beef cattle. Cysticercosis usually occurs in developing countries, where poor sanitation and bad raising cattle practices allows the contamination of the pasture and water with human feces containing eggs. The financial losses are due to condemnation or treatment (salting or freezing) of infected carcasses, depending on the intensity of infection. Diagnosis of bovine cysticercosis is routinely done during slaughter by meat inspection of carcasses and incisions in predicted sites of muscles such as tongue, masseter, heart and diaphragm. Thus, in order to promote the ante-mortem diagnosis and allow appropriate treatment of infected animals, many studies have been performed using techniques to detect antibodies or antigens in bovine serum. ELISA using monoclonal antibodies (MAbs) for the detection of circulating antigen (Ag-ELISA) has been studied, but presents low sensitivity in animals with low parasite burden, and allows its realization only in well-equipped laboratories. The use of biosensors in medicine has grown in recent years, allowing detection and quantification of numerous metabolites, such as immobilization matrix having the most diverse biopolymers such as chitosan and silk fibroin. Immunosensors are biosensors which biochemical response is related to antigen-antibody interaction and can be used to detect antibodies or antigens, and has been tested for diseases diagnosis. In this research, we developed the first immunosensor for bovine cysticercosis diagnosis, produced with layer-by-layer (LbL) films containing a monoclonal antibody against crude Taenia saginata metacestode antigens (TAEB) and silk fibroin (SF) immobilized. Immunosensor showed to be a promising tool for further application in the ante-mortem bovine cysticercosis diagnosis / Doutor

Resumo:Cães infectados com Leishmania infantum, apresentam uma redução do número de linfócitos T. PD-1(programmed cell death 1) um novo membro da família B7-CD28, é expresso por células do sistema imune e sua ligação a PD-L1 (CD274) ou PD-L2 (CD273) induz à desativação dos linfócitos T ou à apoptose. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão de PD-1 e seus ligantes bem como sua função na indução de apoptose de linfócitos T, secreção de TNF-α e IL-4, óxido nítrico e na carga parasitária em cães com leishmaniose visceral. Observamos que na leishmaniose visceral canina PD-1 e seus ligantes participam na indução da apoptose celular de linfócitos T, estão regulando a produção de óxido nítrico, TNF-α, IL-4, além da carga parasitária. Esse estudo ajuda a esclarecer o mecanismo da resposta imunológica e drogas imunoterapeuticas como anticorpos monoclonais bloqueadores que podem influenciar na LVC / Abstract:Dogs infected with Leishmania infantum showed a reduction in the number of lymphocytes T. PD-1 (Programmed cell death 1) a new member of the B7-CD28 family, it is expressed by cells of the immune system and its binding to PD-L1 (CD274) or PD-L2 (CD273) induces deactivation of T cells or apoptosis. This study aimed to evaluate the PD-1 expression and its ligands as well as their role in T lymphocyte induction of apoptosis, TNF-α and IL-4 secretion, nitric oxide production and parasite load in dogs with visceral leishmaniasis. We observed that in canine visceral leishmaniasis PD-1 and its ligands involved in induction of apoptosis of T lymphocytes, are regulating the nitric oxide production, TNF-α, IL-4, as well as the parasitic load. This study helps to clarify the mechanism of immune response and immunotherapeutic drugs such as blocking monoclonal antibodies that can influence the LVC / Orientador:Valéria Marçal Felix de Lima / Banca:Alexandra Ivo de Medeiros / Banca:Caris Maroni Nunes / Mestre

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-10-18T20:47:29Z No. of bitstreams: 1 CleaMariaDaCostaMoreno_TESE.pdf: 2665324 bytes, checksum: d9736b49d9faed0679213f9fa1e1e36b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-10-24T00:04:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CleaMariaDaCostaMoreno_TESE.pdf: 2665324 bytes, checksum: d9736b49d9faed0679213f9fa1e1e36b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-24T00:04:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CleaMariaDaCostaMoreno_TESE.pdf: 2665324 bytes, checksum: d9736b49d9faed0679213f9fa1e1e36b (MD5) Previous issue date: 2017-06-26 / Ap?s vinte e seis anos de implanta??o da poliquimioterapia para o tratamento da hansen?ase no Brasil, ainda ? encontrado um n?mero significativo de casos nos servi?os de sa?de, condi??o que levou as autoridades sanit?rias a assumi-la como uma doen?a negligenciada. As consequ?ncias dessa neglig?ncia s?o graves para as pessoas acometidas, uma vez que a demora na chegada aos servi?os, frequentemente, ocasiona comprometimento de nervos, inclusive com incapacidades e deformidades desenvolvidas. Este estudo objetiva avaliar se os n?veis de anticorpos anti-Mycobacterium leprae est?o associados ao desenvolvimento de incapacidades em pacientes com hansen?ase. Trata-se de um estudo de abordagem quantitativa, com delineamento seccional, descritivo e anal?tico, com verifica??o da exist?ncia de associa??o entre a quantidade dos anticorpos espec?ficos da doen?a e a presen?a de incapacidades. Os sujeitos foram arrolados no per?odo de janeiro de 2014 a dezembro de 2015. O protocolo desta pesquisa foi submetido ? aprecia??o pelo Comit? de ?tica em Pesquisa da Universidade Federal do Rio Grande do Norte e aprovado de acordo com registro do CAAE no. 0042.0.051.051-09 e Parecer 280/2012. A coleta foi realizada com os pacientes registrados pelo Programa de Controle da Hansen?ase, dos setores de dermatologia do Hospital Universit?rio Onofre Lopes e do Hospital Estadual Giselda Trigueiro, ambos considerados refer?ncia para o tratamento da doen?a no Estado do Rio Grande do Norte. Os resultados evidenciam que o n?mero de casos novos ? crescente. Da amostra estudada 56% eram do sexo masculino e 44%, feminino; destes, 65,7%, Multibacilares e 34,3%, Paucibacilares. A faixa de idade mais atingida foi de 51 a 70 anos (41%). Dos pacientes que apresentaram Grau 2 de incapacidade, 92,3% eram do sexo masculino e, destes, 58,3% tinham mais de 60 anos. Verificou-se que a quantidade de anticorpos espec?ficos para a doen?a est? fortemente associada ao desenvolvimento de incapacidades, principalmente em pacientes do sexo masculino e em idade mais avan?ada. / After twenty-six years of implantation of polychemotherapy for the treatment of leprosy in Brazil, a significant number of cases are still found in health services, a condition that led the health authorities to assume it as a neglected disease. The consequences of this neglect are serious for people affected, since delayed arrival in services often leads to nerve involvement, including disability and deformities. This study aims to assess whether anti-Mycobacterium leprae antibody levels are associated with the development of disabilities in leprosy patients. This is a quantitative, cross-sectional, descriptive and analytical approach, with an association between the amount of disease-specific antibodies and the presence of disabilities. The subjects were enrolled from January 2014 to December 2015. The protocol of this research was submitted to the Ethics Research Committee of the Federal University of Rio Grande do Norte and approved according to the CAAE registration no. 0042.0.051.051-09 and Opinion 280/2012. The patients were enrolled in the Leprosy Control Program, from the dermatology departments of the Onofre Lopes University Hospital and the Giselda Trigueiro State Hospital, both of which were considered a reference for the treatment of the disease in the State of Rio Grande do Norte. The results show that the number of new cases is increasing. Of the sample studied, 56% were male and 44% female; Of these, 65.7%, Multibacillary and 34.3%, Paucibacillary. The most affected age range was 51 to 70 years (41%). Of the patients who presented Grade 2 disability, 92.3% were males and, of these, 58.3% were over 60 years old. It has been found that the amount of antibodies specific for the disease is strongly associated with the development of disabilities, especially in males and older patients.