Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Resumo: O remodelamento ósseo é um processo complexo que depende do balanço entre formação e reabsorção óssea, mecanismo regulado pelas células ósseas e fatores sistêmicos, como o Sistema Nervoso Simpático (SNS). Os mediadores deste sistema são capazes de regular o metabolismo ósseo através dos receptores adrenérgicos expressos na superfície dos osteoblastos. Entretanto, o papel dos receptores β-adrenérgicos ainda não está totalmente elucidado no processo de diferenciação osteogênica. Objetivos: avaliar o papel dos receptores β-adrenérgicos na diferenciação osteoblástica de células tronco mesenquimais da medula óssea de ratos normotensos e espontaneamente hipertensos (SHR). Métodos: Ratos machos Wistar e SHR (10 semanas) foram utilizados para a coleta da medula óssea a partir do fêmur, as quais foram plaqueadas em garrafas de cultivo celular e depois em placas de 24 poços, onde receberam o meio osteogênico (MO: MEM, mais 50 µg/mL de ácido ascórbico, 10 mM de β-glicerofosfato e 10-8 M de dexametasona), e o tratamento com Isoprenalina (0,01 µM), Carvedilol (1 µM), antagonista adrenérgico não seletivo, ou Nebivolol (0,1 µM), antagonista β1-adrenérgico. O ensaio de proliferação celular (MTT) e a atividade de fosfatase alcalina (Fal) foram realizados nos dias 7, 10 e 14. A mineralização foi avaliada no dia 14 através do vermelho de Alizarina. A expressão gênica dos marcadores osteogênicos e dos receptores β1 e β2 adrenérgicos foi avaliada no dia 7 por RT-PCR em tempo real. A atividade pro... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-25Bitstream added on 2014-06-13T20:07:26Z : No. of bitstreams: 1 araujo_dn_dr_jabo.pdf: 567500 bytes, checksum: bbf5f199afa8e9062527ea8384197179 (MD5) / Este estudo teve por objetivo analisar quais os fatores ambientais, comportamentais e genéticos que afetam a produção de leite e o fluxo lácteo de búfalas (Bubalus bubalis). Os dados foram coletados durante dois anos em 3 fazendas leiteiras participantes do projeto de controle leiteiro realizado pelo Departamento de Zootecnia da Universidade Estadual Paulista em Jaboticabal, no Estado de São Paulo. No primeiro artigo descreveu-se as médias e as curvas de fluxo lácteo para búfalas e foram estimados parâmetros genéticos para a produção de leite, tempo de ordenha e fluxo lácteo em modelo multicaracterística com inferência bayesiana. No segundo artigo destacou-se a análise da relação de manejo aversivo com reatividade de búfalas na ordenha e os possíveis efeitos desta reatividade sobre as características de produção e rotina de ordenha em búfalas. No terceiro artigo verificou-se a existência de polimorfismos nos genes da ocitocina e do receptor adrenérgico α1A e suas possíveis associações com produção de leite, fluxo lácteo e tempo de ordenha. Os resultados sugeriram que a variação genética da produção de leite, fluxo lácteo e tempo de ordenha são suficientes para efeitos de seleção, sendo que a seleção de uma das características influenciará as outras no mesmo sentido. Observou-se que a reatividade das búfalas e as ações dos retireiros não influenciam as características de produção. E que os polimorfismos encontrados nos genes ocitocina e receptor adrenérgico α1A não se mostram associados às características de produção em búfalas / This study aims to analyze which environmental, behavioral and genetic aspects affect the milk production and milk flow of water buffaloes (Bubalus Bubalis). The data was collected in a period of two years in three dairy farms that were participating in the Dairy Bubaline Test Program developed by the Animal Science Department of São Paulo State University, FCAV, Jaboticabal, SP, Brazil. The first paper described the average and milk flow curves of water buffaloes and genetics parameters were estimated for the milk production, milking speed and milk flow in a multiple-trait analysis with bayesian inference. The second paper highlights an analysis of the relation between the aversive handling with the reactivity of water buffaloes in the milking process and the possible effects of this reactivity on the traits of production and the milking process routine in water buffaloes. The third paper verifies the existence of polymorphisms in the genes of oxytocin and of adrenergic receptor α1A and it's possible associations with milk production, milk flow and milking speed. The results suggest that the genetic variation of the milk production, milk flow and milking speed are sufficient for selection purposes, considering that the selection of one of the characteristics will influence the others in the same way. It was noticed that the reactivity of water buffaloes and the activities of the stockpersons has no influence on the other production characteristics. And also that the polymorphisms found in the genes of oxytocin and of the adrenergic receptor α1A do not show themselves associated to production characteristics in water buffaloes, except for the effect of the α1A over production of protein

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T03:48:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T20:45:47Z : No. of bitstreams: 1 290970.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Neste estudo investigamos os efeitos da injeção intracerebroventricular (icv) de BRL37344 (agonista seletivo de receptores ß3-adrenérgicos, nas doses de 2 e 20 nmol), e SR59230 A (antagonista seletivo de receptores ß3-adrenérgicos, nas doses de 10 e 50 nmol) sobre a ingestão de alimento em ratos submetidos ao jejum de 24 horas. Os animais também foram previamente tratados por via ICV com o veículo ou o antagonista do receptor ß3-adrenérgicos (SR59230A na dose de 50 nmol), administrados 10 min antes da injeção ICV do agonista ß3-adrenérgicos (BRL37344 na dose de 20 nmol) ou veículo, com o objetivo de determinar a seletividade dos efeitos provocados pelo BRL37344 e SR59230A sobre ingestão de alimentos e avaliação de risco. Após as injeções, cada animal foi colocado na caixa de registro para avaliar os comportamentos ingestivos e não-ingestivos, como a avaliação de risco. Os resultados mostraram que a injeção ICV de BRL37344 na dose de 20 nmol provoca redução no consumo de alimento 1h após o tratamento. O tratamento ICV com ambas as doses de SR59230A diminuiu a freqüência de avaliação de risco. A injeção prévia via ICV de SR59230A aboliu a resposta hipofágica induzida pelo BRL37344. A presença do agonista do receptor ß3-adrenérgico suprimiu a redução na frequência de avaliação de risco, um comportamento relacionado à ansiedade, que neste estudo foi provocada pelo antagonista SR59230A de receptores ß3-adrenérgicos . A duração, a freqüência e latência para iniciar a alimentação, bem como a duracão e a frequência dos outros comportamentos não ingestivos não foram afetados pelos diferentes tratamentos. Esses resultados, demonstram que a resposta hipofágica provocada pelo BRL3744 é seletivamente mediada por receptores ß3-adrenérgicos encontrados no sistema nervoso central e além disso, sugerem a participação desses receptores adrenérgicos nos circuitos neurais centrais que controlam o comportamento de ansiedade. / Involvement of â3- adrenergic receptors in the control of food intake in rats (dissertation). Florianopolis; Masters in Neurosciences, Universidade Federal de Santa Catarina, 2011. This study examined the alteration in food intake evoked by intracerebroventricular (icv) injection of BRL37344 (a selective agonist of â3-adrenergic receptors) in 24 h-fasted rats at the doses of 2 nmol and 20 nmol. The effects on food intake of icv injection of SR59230A (a selective antagonist of â3-adrenergic receptors) at the doses of 10 nmol and 50 nmol was also investigated. The icv injection of saline (vehicle) was used as control. The animals were also treated with the VEH or with the antagonist of â3-adrenergic receptor (SR59230A at a dose of 50 nmol) administered icv 10 min before the injection of the â3- adrenergic agonist (BRL37344 at the dose of 20 nmol) or the VEH, in order to determine the selectivity of the effects evoked by the adrenergic agonist on food intake or the selectivity of the effects evoked by the antagonist on risk assessment behavior. The results showed that the icv injection of BRL37344 at the dose of 20 nmol evoked a reduction in food intake 1 h after the treatment .While the icv injetion with both doses of SR59230A failed to affect food intake, this treatment reduced the frequency (number/30 min) of risk assessment , an ethological parameter related to anxiety. Pretreatment with SR59230A abolished the hypophagic response induced by BRL37344. On the other hand, the â3-adrenergic receptor agonist suppressed in the reduction in frequency of risk assessment caused by the antagonist of these receptors. Feeding duration, frequency and latency to start feeding were not affected by the different treatments. These results show that the hypophagic response caused by BRL3744 is selectively mediated by â3 adrenergic receptors found in the central nervous system. Moreover, they suggest the involvement of these receptors in the central circuits that control anxiety.

Memoria para optar el título de Bioquímico / El síndrome de ovario poliquístico (PCOS) es una patología neuroendocrina muy común en mujeres en edad fértil y está relacionada con más del 75% de los casos de infertilidad anovulatoria. Aunque la etiología del PCOS se desconoce, en este último tiempo se ha acumulado mucha evidencia que señala a los nervios simpáticos del ovario como un componente importante en la patología. De hecho, en el modelo de ovario poliquístico inducido por la administración de una dosis única de valerato de estradiol se observó una activación de los nervios simpáticos del ovario, reflejado en un aumento del contenido y en la liberación de noradrenalina (NA) de los terminales nerviosos. Se cree que el PCOS puede ser adquirido en etapas tempranas, como lo demuestran experimentos realizados en ratas en donde se les administró EV en el período neonatal y prepuberal. En ambos casos hubo una activación de la inervación simpática. Para probar la hipótesis de una activación temprana de los nervios simpáticos como factor etiológico, en el presente trabajo se administró isoproterenol (ISO), un agonista beta adrenérgico, en dosis crecientes de 125µg/kg peso (1X), 10X y 1000X, para remedar un tono adrenérgico aumentado a ratas neonatas y se vio cómo se afectaba la función reproductiva de este órgano cuando las ratas llegaron al estado adulto. Como resultado del tratamiento se adelantó el inicio de la pubertad en las ratas tratadas con la dosis 1000X de ISO. Aunque no regular, todos los grupos tratados presentaron ciclicidad estral y los niveles de esteroides plasmáticos no se vieron afectados en las ratas tratadas respecto al grupo control. Se observó una disminución en el contenido de NA en ovario en la dosis 1000X de ISO, mientras que el contenido de NGF ovárico aumentó en las dosis 1X y 1000X. Al parecer, la administración neonatal de ISO no produjo cambios permanentes en la foliculogénesis y esteroidogenesis, ya que es probable que la ventana en que se estimuló no fuera la adecuada para cambiar el desarrollo folicular. Sin embargo, se verificaron cambios importantes en las catecolaminas adrenales y en el tamaño del corazón por efecto del tratamiento. El adelantamiento del inicio de la pubertad nos indica que la estimulación adrenérgica podría modificar la sincronización del eje hipotálamo-hipófisis-ovario / The polycystic ovary syndrome (PCOS) is the most frequent neuroendocrine disease in women during their reproductive years and corresponds to 75% of the anovulatory fertility cases. Although the ethiology of PCOS remains unknown, a sizeable body of evidence points to the ovarian sympathetic innervation as a major component of the disease. Indeed, in the PCO model induced by the injection of a single dose of estradiol valerate, an activation of the ovarian sympathetic nerves has been demonstrated, as indicated by the increase in norepinephrine content and release from the nerve terminals. As it is suggested in epidemiologic studies in women and later confirmed in rats, it is believed that the PCOS can be developed in early stages of life. Neonatal and prepubertal rats injected with a single dose of estradiol valerate developed PCOS in the adult life. In both cases, an activation of the ovarian sympathetic nerves occurs. To test the hypothesis of an early activation of ovarian sympathetic nerves as an ethiological factor of PCOS, in the present study we administered increasing doses of the beta-adrenergic agonist isoproterenol (ISO) in concentration of 125 μg/kg of body weight (ISO 1X), ISO 10X and ISO 1000X, to simulate an enhanced adrenergic tone in neonatal rats and to study the ovarian reproductive function when adults. The results show an early onset of puberty in the rats treated with the ISO 1000X dose. Although non-regular, all of the treated rats show estrous ciclicity and the plasma steroids levels did not change in the treated rats compared to the control group. The NE content in the ovary decreased in the ISO 1000X treated rats, while the NGF content in the ovary increase in the ISO 1X and in the ISO 1000X treated rats. It seems that the neonatal administration of ISO did not produce long term effects in the foliculogénesis and esteroidogenesis. It is quite possible that the window in which the stimulation occurs was not the most indicated to change the follicular development. However, the adrenal and heart function was “programmed” by the neonatal ISO administration. In addition, the early onset of puberty indicates that the adrenergic stimulation could modify the synchronization of the hypothalamus-hipophysis-ovary axis

Orientador: Angelina Zanesco / Banca: Luiz Osorio Silveira Leiria / Banca: Leandro Pereira de Moura / Banca: Fabiola Taufic Monica Iglesias / Banca: Gilberto de Nucci / Resumo: O sistema nervoso simpático desempenha importante papel no sistema cardiovascular e no metabolismo, sendo que os receptores adrenérgicos do subtipo β3 (β3 -AR) estão amplamente distribuídos em diferentes células, encontrando-se especialmente no tecido cardíaco, musculatura lisa e tecido adiposo. Esses receptores estão relacionados a diversas ações fisiológicas, como relaxamento da musculatura lisa vascular e não vascular, lipólise do tecido adiposo branco e termogênese do tecido adiposo marrom. Por outro lado, a importância dos β3 -AR no tecido adiposo perivascular (PVAT) e regulação do tono vascular não é conhecida. O mirabegron (YM-178) é um agonista β₃-AR seletivo, atualmente desenvolvido por Astellas Pharma Inc., e aprovado desde 2012 pelos EUA, para tratamento de bexiga hiperativa, considerando a ação dos receptores β₃-AR no relaxamento do músculo liso. Contudo não existe nenhum estudo envolvendo o mirabegron nos parâmetros cardiometabólicos plasmáticos e no metabolismo do tecido adiposo e em modelos de obesidade. Objetivos: Analisar os efeitos do tratamento de Mirabegron (Mira), um agonista β₃-AR seletivo, por duas semanas em parâmetros cardiometabólicos e reatividade vascular na presença ou ausência de PVAT de camundongos obesos. Métodos: Camundongos C57BL/6J foram divididos em grupos controle veículo (CTR), controle tratado com Mira (CTR+MIRA), obeso alimentado com dieta hiperlipídica (HFD 12 semanas) tratado com veículo (OB) e obeso tratado com Mira (OB+MIRA). Mira f... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sympathetic nervous system plays an important role in the cardiovascular system and metabolism. In particular, the β3 subtype adrenergic receptors (β3-AR) are widely distributed in different cells, especially in cardiac tissue, smooth muscle and adipose tissue. These receptors are related to several physiological actions, such as vascular and non-vascular smooth muscle relaxation, lipolysis and thermogenesis. In addition, β3-AR participates in the increasing of the number of mitochondria at specific sites of white adipose tissue, called browning of white adipose tissue. Finally, it is not known whether these receptor subtypes may play a role in regulation of the perivascular adipose tissue (PVAT) vasomotricity. Despite these important actions involving these receptor population, studies involving selective β3-AR agonists on obesity state are scarce. Mirabegron (YM-178) is a selective β₃-AR agonist, currently developed by Astellas Pharma Inc. and approved since 2012 by the USA for overactive bladder treatment, considering the action of β₃-AR receptors on smooth muscle relaxation. Intrestingly, there is no study involving the effects of mirabegron on cardiometabolic parameters, adipose tissue metabolism in obesity models. Objectives: To examine the effects of Mirabegron (Mira) treatment, for two weeks on cardiometabolic parameters and vascular reactivity in the presence or in the absence of PVAT in obese mice. Methods: C57BL / 6J mice were divided into vehicle control (CTR), Mi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O suicídio constitui-se hoje um grave problema de saúde pública em diversos países. Muitos suicídios ocorrem de forma inesperada e outros, mesmo esperados por seu risco, parecem ser imprevisíveis. Apenas uma minoria é desencadeada por eventos estressantes em pessoas com uma vida emocional saudável e, nesses casos, o risco de um comportamento suicida é geralmente temporário e potencialmente prevenido. Entre os fatores associados aos atos suicidas está o início ou piora de uma doença psiquiátrica aguda, como a depressão e o abuso de substâncias (62). A depressão é uma condição clínica normalmente difícil de ser tratada. Dados da literatura demonstram que, tanto a depressão quanto fatores genéticos, podem ser fatores desencadeantes ou contribuidores para o comportamento suicida e a tentativa de suicídio. A participação de determinado polimorfismo pode favorecer ou fornecer uma vulnerabilidade maior a determinados indivíduos, quando submetidos a condições específicas de estresse, os quais podem tentar o suicídio.Com o objetivo de determinar se o polimorfismo N251K do gene do receptor α2Aadrenérgico pode fornecer uma vulnerabilidade maior a pacientes deprimidos para a tentativa de suicídio, determinamos a freqüência deste polimorfismo em pacientes deprimidos que tentaram o suicídio e comparamos com a freqüência de uma amostra controle. A análise foi realizada a partir de DNA genômico de 123 pacientes e 197 controles. O estudo foi realizado através da técnica de PCR alelo específico descrita por Sequeira e cols. (70). Não encontramos nenhum paciente portador do alelo K na amostra, mas encontramos dois controles heterozigotos para o polimorfismo. Os resultados da freqüência do polimorfismo na amostra controle (0,5%) foram semelhantes aos dados encontrados na literatura, exceto quando os dados foram comparados com a população negra americana (p=0,0005). Os dados encontrados demonstram que o polimorfismo N251K não está relacionado com a tentativa de suicídio (p=0,526, IC 95%). O polimorfismo investigado em nosso estudo representa apenas uma parte de todo o gene, nosso resultado negativo não exclui a influência de outros polimorfismos ou genes relacionados com o metabolismo da noradrenalina e a vulnerabilidade para a tentativa de suicídio em pacientes portadores de depressão. A descoberta de novos polimorfismos e genes de susceptibilidade ao suicídio pode ajudar na adequação da terapia de pacientes com depressão. / Nowadays suicide constitutes a severe public health problem worldwide. Many suicides occur unexpectedly and others, even when expected due to its risk seem to be unpredictable. A minority is triggered by stressing events in persons with an emotional healthy life and, in these cases, the risk of a suicidal behavior is generally temporary and potentially preventable. Amongst the factors associated with suicide acts is the beginning or worsening of an acute psychiatry disorder such as depression and substance abuse (62). Depression is a clinical condition usually difficult to be treated. Data from literature demonstrates that both depression and genetic factors can be triggering factors or contribute to the suicidal behavior and suicide attempt. The participation of a specific polymorphism can provide a greater vulnerability to certain individuals, when submitted to specific conditions of stress. With the objective of determining if the N251K polymorphism in α2adrenoceptor gene can be linked to suicide attempt, we determined the frequency of this polymorphism in depressed patients who attempted suicide and compared to a control sample. Genomic DNA from 123 patients and 197 controls were used in the analysis. The study was performed using allele specific PCR according to Sequeira and cols. (70). We did not find any patients carrying the K allele, nevertheless, two controls were heterozygous for this polymorphism with a frequency of (0.5%). This was similar to other findings in the literature, except when data were compared to an African American population (p=0.0005). Our data demonstrate that N251K polymorphism is not related to suicide attempt in the sample studied (p=0.526, IC 95%). This polymorphism represents a needle in the stack regarding the genetic involvement in suicide attempt. The negative results obtained do not exclude the influence of other polymorphisms or genes related to the metabolism of noradrenalin and vulnerability to suicide attempt in depressed patients. The analysis and discovery of other susceptibility genes to suicide can aid in the adequacy of therapies for patients with depression

Resumo não disponível

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Ciências Fisiológicas, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 291256.pdf: 1148218 bytes, checksum: e96961ced447701e3f55deb3b79e5b0a (MD5) / Estudos prévios do nosso laboratório mostraram que a injeção de clonidina (CLON), agonista de receptor .-2 adrenérgico no núcleo mediano da rafe (NMR) provoca aumento da ingestão de alimento em ratos saciados. Por outro lado, a administração de fenilefrina (FEN), agonista de receptor .-1 adrenérgico, no NMR, não provoca alteração no consumo alimentar, provavelmente devido a presença de elevada atividade adrenérgica e manutenção de um tônus inibitório persistente (possivelmente serotonérgico) sobre a ingestão de alimento em animais saciados. O objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos da injeção de FEN no NMR em ratos que exibem menos influências centrais inibitórias sobre a ingestão de alimento, como é o caso da privação de alimento. Em adição os efeitos da CLON no NMR também foram investigados. Foram utilizados 165 ratos Wistar (Rattus norvergicus), peso entre 270-310g com cânulas guia cronicamente implantadas 2 mm acima no NMR e divididos em dois grupos experimentais: ratos em restrição de 15g de ração/dia durante 7 dias e ratos submetidos a jejum noturno. Após a injeção intra NMR de FEN ou CLON o rato foi colocado na caixa de ingestão contendo ração granulada e água previamente pesados. Os comportamentos ingestivos e não ingestivos foram registrados digitalmente por 30 minutos. Os comportamentos foram analisados através do programa Etholog 2.25 e classificados conforme Halford (1998). O posicionamento da agulha injetora no NMR foi verificado por análise histológica. Os resultados mostraram que o tratamento com FEN (6 e 20 nM/L) nos ratos em jejum noturno provocou redução na ingestão de alimento, aumento na latência para iniciar o consumo e redução na duração da resposta de ingestão de alimento. Nos ratos em restrição de alimento de 15g de ração/dia por 7 dias a injeção de FEN (6 e 20 nM/L) induziu a redução na ingestão de alimento e a dose de 6 nM/L também causou diminuição na freqüência da ingestão de alimento. Esses dados reforçam a hipótese que a ativação de receptores adrenérgicos do NMR estimula uma influência inibitória sobre a ingestão de alimento que é menos ativa durante a privação de alimento. / Previous studies from our laboratory showed that clonidine (CLON) injection, á-2 adrenergic receptor agonist, into the median raphe nucleus (NMR) provoduced increased food intake in satiated rats. Moreover, phenylephrine (PHE) administration, á-1 adrenergic receptor agonist, into the NMR did not change feeding behavior, may be due to the presence of a high adrenergic activity and maintenance of persistent inhibitory tone (possibly serotonergic) on food intake in satiated animals. The purpose of this study was to investigate PHE effects into NMR in animals that exhibit less central inhibitory influences on food intake, such as food deprivation. In addition CLON effects into NMR investigated too. Was used 165 male Wistar Rats (Rattus norvegicus) weighing 270-310g with guide cannula chronically implanted 2mm above of NMR and divided in two experimental groups: rats maintained with 15g of lab chow/day during 7 days and rats submitted to overnight fasting. After PHE or CLON injection into the NMR the rat was placed in feeding chamber containing rodent chow and water measured previously. Ingestive and non-ingestive behaviors were recorded digitally for 30 minutes. The behaviors was analyzed with EthoLog 2.25 program and classified according to Halford (1998). The Cannula placement into the NMR was observed by histological analysis. The results showed in overnight fast group, the PHE treatment (6 and 20 nM/L) into NMR caused reduction in food intake, increase latency to start feeding and decrease in feeding duration. In rats maintained with 15g of lab chow/day during 7 days the PHE injection (6 and 20 nM/L) induced reduction in food intake and 6 nM/L dose caused also a decrease in food intake frequency. These data confirm the hypothesis that adrenergic receptors activation of NMR stimulates an inhibitory influence on food intake that is less present during food deprivation.

LINHARES, B.L Avaliação in vitro do efeito relaxante de inibidores de fosfodiesterases e agonista beta-adrenérgico em bexiga de camundongos utilizando modelo experimental de hiperatividade detrusora. 2016. 65 f. Dissertação (Mestrado Ciências Médico-Cirúrgicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará. Fortaleza, 2016. / Submitted by Luciene Oliveira (luciene@ufc.br) on 2017-06-27T16:31:56Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_bll.pdf: 2116968 bytes, checksum: 14aeab4af294ec57b668adf85753c334 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-28T11:40:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_bll.pdf: 2116968 bytes, checksum: 14aeab4af294ec57b668adf85753c334 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T11:40:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_bll.pdf: 2116968 bytes, checksum: 14aeab4af294ec57b668adf85753c334 (MD5) Previous issue date: 2016-10-20 / Overactivity bladder syndrome has classically been treated with antimuscarinics. However, frequent adverse systemic effects have led to the search for new therapeutic options. β3- adrenoceptor (β3-AR) agonists relax the detrusor smooth muscle (DSM) by the adenylyl cyclase pathway, increasing cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Rolipram, a selective type 4 phosphodiesterase inhibitor (IPDE4), elevates intracelular cAMP levels by supressing hydrolysis. Phosphodiesterase type 5 inhibitors (IPDE5), such as tadalafil, relax DSM by the nitric oxide/cyclic guanosine monophosphate pathway (NO/cGMP). It has been hypothesized that the inhibition of phophodiesterases could potentiate the relaxing effect of β3-AR agonists. The main objective of this study is to evaluate in vitro the effects of the combination of a β3-AR agonist with two different phosphodiesterase inhibitors (IPDE4 and IPDE5) in a experimental model of detrusor overactivity. The experiments were performed on bladder strips of mice and divided in two phases. The following drugs were used: BRL 37344 (β3-AR agonist), tadalafil (IPDE5) and rolipram (IPDE4). In the first phase, after potassium-induced contraction, strips isolated from naive mice were exposed to increasing concentrations of each study drug. In another series of experiments, prior to contraction, strips were incubated with either tadalafil or rolipram and then increasing concentrations of BRL 37344 were added. In the second phase, the same protocol was performed with animals treated with L-NAME for 30 days. Chronic L-NAME administration leads to detrusor overactivity by NO deprivation. Cumulative concentration-response curves were constructed. In the first phase, preincubation with tadalafil increased the relaxing response of BRL 37344 in two concentrations. Pretreatment with rolipram had no effect on the relaxation obtained with BRL 37344. In LNAME- treated mice, rolipram showed the best relaxation when compared to the other drugs. In these animals, rolipram increased the relaxing response of BRL 37344 in almost all concentrations, but no synergistic effect with tadalafil was observed. Phosphodiesterase inhibitors associated with the already proven effective β3-AR agonists may represent a new approach for patients with storage symptons. In our experimental model, the relaxing effect of the β3-AR agonist was potentiated by IPDE4 but not by IPDE5, suggesting cAMP plays an important role in DSM relaxation. Keywords: Detrusor smooth muscle. β3-adrenoceptor agonist. Phosphodiesterase inhibitors. / Tratamento da hiperatividade detrusora (HD) tem sido classicamente feito com antimuscarínicos. No entanto, seus frequentes efeitos adversos têm levado à procura por novas opções terapêuticas. Agonistas adrenérgicos beta-3 seletivos relaxam o músculo liso detrusor (MLD) através da via da adenilato ciclase, aumentando a adenosina monofosfato cíclica intracelular (AMPc). O rolipram, inibidor específico da fosfodiesterase tipo 4 (IPDE4), aumenta os níveis de AMPc, inibindo sua hidrólise. Inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (IPDE5), como a tadalafila, relaxam o MLD através da via do óxido nítrico/guanosina monofosfato cíclico (NO/GMPc). Tem-se sugerido que o uso combinado dessas drogas pode levar a uma potencialização do efeito relaxante. O principal objetivo deste estudo é avaliar in vitro os efeitos da associação de um agonista adrenérgico beta-3 seletivo com dois diferentes inibidores de fosfodiesterases (IPDE4 e IPDE5) em um modelo experimental de hiperatividade detrusora. Os experimentos foram divididos em duas fases e realizados em banho de órgãos com fragmentos de bexiga de camundongos. As substâncias utilizadas foram o BRL 37344 (agonista adrenérgico beta-3 seletivo), tadalafila (IPDE5) e rolipram (IPDE4). Na primeira fase, os tecidos de animais sem tratamento prévio eram submetidos à exposição de concentrações crescentes de cada uma das drogas estudadas após contração com KCL. Foram também realizados experimentos em que os tecidos eram pré-incubados com tadalafila ou rolipram para posterior adição do beta-3 adrenérgico. Em uma segunda fase, foi realizado o mesmo protocolo experimental com animais tratados com L-NAME por 30 dias. L-NAME foi usado para causar experimentalmente HD nos camundongos pela depleção de NO. Foram construídas curvas concentração-resposta para cada um dos experimentos. Na primeira fase, a pré-incubação com tadalafila aumentou o efeito relaxante do BRL 37344 apenas em duas concentrações (p < 0,05). A pré-incubação com rolipram não aumentou o efeito relaxante do BRL 37344. Nos animais tratados com L-NAME, o rolipram apresentou o maior efeito relaxante quando comparadas as drogas isoladamente. Neste grupo de animais, o rolipram aumentou o efeito relaxante do BRL 37344 em praticamente todas as concentrações, enquanto não foi observado efeito aditivo com a tadalafila. Os inibidores das fosfodiesterases, associados aos já comprovadamente eficazes beta-3 agonistas, podem representar uma nova abordagem dos pacientes com sintomas de armazenamento. No modelo deste estudo, o IPDE4 potencializou o efeito relaxante do agonista adrenérgico beta-3 seletivo, o que não foi observado com o IPDE5, sugerindo um importante papel da via do AMPc no relaxamento do detrusor de camundongos.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:00:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 329729.pdf: 1294677 bytes, checksum: ba08177546cfad8c54fd1c59d7f7a5a5 (MD5) Previous issue date: 2014 / Estudos prévios em nosso laboratório sugerem que a injeção de adrenalina (AD) no núcleo mediano da rafe (NMR) diminui a ingestão de alimentos em ratos em restrição alimentar e aumenta a ingestão em ratos saciados. A injeção de agonista a-2 adrenérgico no NMR provoca aumento da ingestão de alimento em ratos saciados. Por outro lado, a administração de agonista a-1 adrenérgico, no NMR, não provoca alteração no consumo alimentar, provavelmente devido à presença de elevada atividade adrenérgica e manutenção de um tônus inibitório persistente (possivelmente serotonérgico) sobre a ingestão de alimento em animais saciados. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão da proteína Fos e sua co-localização com neurônios serotonérgicos após a injeção de AD no espaço intracerebroventricular (ICV) em ratos saciados. Foram utilizados 84 ratos Wistar com cânulas-guia cronicamente implantadas no ventrículo lateral (VL) ou 4º ventrículo (4V). Primeiramente, foram feitas curvas dose/resposta para a escolha da dose mais efetiva de AD sobre os comportamentos ingestivos. Após a injeção de AD no VL ou 4V, avaliou-se os comportamentos ingestivos e não ingestivos durante 30 minutos e a quantidade de comida e água consumida foram mensuradas. Os resultados mostraram que a dose de 20 nmol de AD injetada no VL e a dose de 60 nmol de AD injetada no 4V, foram as mais efetivas sobre os comportamentos ingestivos, aumentando a ingestão de alimentos. Após, novos grupos experimentais foram feitos com as doses escolhidas no VL e 4V, e realizaram-se reações imunoistoquímicas para proteína Fos e serotonina (5-HT) no NMR e núcleo dorsal da rafe (NDR), e para Fos em núcleo hipotalâmicos. Os resultados apontaram que, após administração de AD 20 nmol no VL, ocorreu aumento na expressão de Fos no núcleo paraventricular do hipotálamo (NPV) e hipotálamo ventromedial (HVM) e um aumento de Fos e sua co-localização com 5-HT no NDR. Nenhuma modificação estatiscamente significante no NMR foi observada. Os resultados após a administração de AD 60 nmol no 4V indicaram que houve apenas aumento de duplas marcações no NDR, não sendo observada nenhuma alteração no NMR. Os dados presentes neste trabalho mostram que a injeção de AD ICV aumenta a ingestão de alimentos em ratos saciados. A expressão de Fos e duplas marcações no NDR demonstra atividade neuronal serotonérgica e não-serotonérgica nesta região. No entanto, não obtivemos evidências de que uma modificação na neurotransmissão adrenérgica em ratos saciados modificasse a expressão de Fos no NMR e que os efeitos adrenérgicos sobre a ingestão de alimentos sejam mediados por ativação de neurônios serotonérgicos deste núcleo.<br> / Abstract: Previous studies from our laboratory have shown that adrenaline (AD) injection into the median raphe nucleus (NMR) decreased food intake in food-restricted rats and increases food intake in free-feeding rats. Injection of a-2 adrenergic agonist into the NMR produced increases food intake in satiated rats. Moreover, a-1 adrenergic agonist administration into the NMR do not change feeding behavior, may be due to the presence of a high adrenergic activity and maintenance of a persistent inhibitory tone (possibly serotonergic) on food intake in satiated animals. The aim of the present study was to evaluate the Fos protein expression and its colocalization in serotonergic neurons after intraventricular (ICV) injection of AD in free-feeding rats. A guide cannula was chronically implanted in the lateral ventricle (VL) or fourth ventricle (4V) of 84 male wistar rats. First, curves dose/response were made to choose the most effective dose of AD on ingestive behavior. After AD injection in VL or 4V, we assessed ingestive and non ingestive behaviors for 30 minutes and the amount of food and water consumed. The results showed that a dose of AD 20 nmol injected into the VL and a dose of AD 60 nmol injected into the 4V, were the most effective on changing the ingestive behavior. After, new experimental groups were made with the selected VL and 4V doses, and immunohistochemical reactions were performed to measure Fos protein and serotonin (5-HT) in NMR and NDR, and Fos expression in the hypothalamic nuclei. The results showed that administration of AD 20 nmol in VL increased Fos expression in NPV and HVM hypothalamic nuclei and increased Fos and its colocalization with 5-HT in the NDR. No statistically significant change was observed in NMR. The results after administration of AD 60 nmol in 4V showed an increase of double staining on the NDR, but no changes were observed in NMR. The data presented in this paper show that AD ICV injections increases food intake in free-feeding rats. The expression of Fos and double staning on the NDR showed serotonergic and non-serotonergic neuronal activity in this region stimulated by AD. However, we did not obtain evidence that a change in adrenergic neurotransmission in satiated rats modifies the Fos expression in NMR and that the adrenergic effects on food intake are mediated by the activation of serotonergic neurons in this nucleus.