Made available in DSpace on 2012-09-05T18:23:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 171.pdf: 2152393 bytes, checksum: b0b6fe8b0d3480409f4208b986d3d728 (MD5) Previous issue date: 2003 / O ecossistema aquático é habitado por mexilhões, animais filtradores que refletem a qualidade ambiental através da sua análise microbiológica. Neste estudo pretendeu-se avaliar a presença de patógenos, clássicos (Salmonella sp.) e emergentes (Vibrio vulnificus, Aeromonas hydrophila e Plesiomonas shigelloides), a partir de mexilhões in natura e pré-cozidos isolados de uma Estação Experimental de Cultivo de Mexilhões situada em Jurujuba, Niterói, Rio de Janeiro. Embora, não tenha sido identificado o patógeno Salmonella sp., as análises laboratoriais realizadas permitiram o isolamento de diversas espécies de microrganismos pertencentes às famílias Vibrionaceae e Aeromonadaceae, algumas com relevante potencial patogênico (Vibrio parahaemolyticus, V. vulnificus e A. hydrophila). Diversos microrganismos isolados apresentaram perfil de resistência a antimicrobianos utilizados na clínica humana (ampicilina, tetraciclina, nitrofurantoína, sulfametoxazol-trimetoprim e pefloxacina). Considerando a relevância epidemiológica dos agentes patogênicos identificados e os resultados obtidos nesta investigação, faz-se urgente alertar as autoridades sanitárias quanto à presença desses patógenos na cadeia alimentar e no ambiente. Dada sua capacidade de causar enfermidades diversas nas populações humanas após consumo de mexilhões in natura ou pré-cozidos, torna-se premente e de extrema importância o desenvolvimento de estratégias de vigilância epidemiológica e sanitária, assegurando, entre outras medidas, o monitoramento constante dos mexilhões oriundos da Baía de Guanabara, no sentido de prevenir ou minimizar os riscos nas diferentes etapas da sua extração e comercialização.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:10:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341611.pdf: 1154196 bytes, checksum: 8f2e1b9eabee7a3abb69c40523417795 (MD5) Previous issue date: 2015 / Doenças parasitárias e bacterianas são comuns em peixes cultivados e responsáveis por altas taxas de mortalidade e perdas econômicas. Antibióticos e quimioterápicos são utilizados para o tratamento dessas doenças em peixes. Porém, sua utilização tem trazido efeitos negativos, tanto para o meio ambiente como para a saúde humana. Por isso, é importante a busca por novos medicamentos, e a utilização de produtos de origem vegetal como fonte de substâncias bioativas é uma alternativa promissora. O urucum, Bixa orellana, destaca-se por apresentar diversas atividades biológicas, como antioxidantes, antimicrobiana, anti-helmíntica e anti-inflamatória. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do extrato acetônico das sementes do urucum em juvenis de tambaquis, Colossoma macropomum infectados por patógenos. Neste trabalho foram realizados dois ensaios, a de fim de avaliar a eficácia antimicrobiana e antiparasitária sobre Aeromonas hydrophila e Anacanthorus spathulatus de tambaqui. Primeiramente, foi avaliada a eficácia in vitro e in vivo do extrato das sementes de urucum contra parasitos branquiais Monogenea e parâmetros sanguíneos de tambaqui. O segundo avaliou os parâmetros sanguíneos de tambaquis tratados com extrato das sementes de urucum após infecção por A. hydrophila e Monogenea. O presente estudo fornece subsídios para a substituição de quimioterápicos e antibióticos por produtos de origem vegetal, no tratamento dessas enfermidades em peixes de uma forma que minimize os impactos causados ao meio ambiente e a saúde humana.<br> / Abstract : Parasitic and bacterial diseases are common in farmed fish and responsible for high mortalities and economic losses. Antibiotics and chemoterapics are normaly used for treating these diseases in fish. However, their use have provoked negative effects either to the environment or to human health. Therefore, the search for new medicines is important and the use of vegetal products as source of bioactive substances is a promising alternative. Annatto, Bixa orellana, highlights by presenting several biological activities as antioxidant, antimicrobial, anthelminthic and antiinflammatory. The aim of this study was to evaluate the effects of acetonic extract of annatto seeds in juveniles of tambaqui, Colossoma macropomum infected by pathogens. Two assays were perfomed to evaluate the antimicrobial and antiparasitic efficacy on Aeromonas hydrophila and Anacanthorus spathulatus of tambaqui. Firstly, the in vitro and in vivo efficacy of annatto seeds extract against Monogenea gill parasites and blood parameters of tambaqui were studied. The second evaluated the blood parameters of tambaqui treated with annatto seeds extract after infection with A. hydrophila and Monogenea. The present study provides assistance to replace antibiotics by products of vegetal source to treat fish diseases in order to minimize the impacts caused in the environment and human health.

Orientadora : Profª. Drª. Cynthia M. T. Fadel-Picheth / Coorientadora : Profª. Drª. Leda Chubatsu / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 30/11/2016 / Inclui referências : f. 66-79 / Área de concentração: Análises Clínicas / Resumo: Aeromonas são bacilos gram-negativos capazes de causar infecções em humanos que variam de diarreia a septicemia e raramente meningite. As espécies mais frequentemente associadas com infecções são A. hydrophila, A. caviae e A. veronii sobria, enquanto A. trota é raramente isolada de amostras clínicas e ainda é pouco estudada. A identificação dessas bactérias ao nível de espécie é difícil e requer a utilização de métodos moleculares para confirmação. O objetivo desse trabalho foi caracterizar isolados clínicos de Aeromonas previamente identificados através de testes microbiológicos e realizar o sequenciamento e anotação do genoma da estirpe A. trota 1999LCR. Oitenta e cinco Aeromonas foram analisadas através do sequenciamento de gyrB o que permitiu identificar as seguintes espécies: A. caviae (33), A. hydrophila (24), A. veronii bv sobria (22), A. media (4), A. aquariorum e A. trota 1 estirpe cada. A espécie A. media só foi identificada através do sequenciamento de gyrB. A concordância dos resultados da identificação convencional e molecular foi de 83,5%. Setenta e nove perfis de eletroforese em campo pulsado distintos foram observados entre 90 Aeromonas analisadas indicando elevada diversidade genética entre elas. Apenas 3 clusters, formados respectivamente por A. caviae (2 estirpes), A. veronii sobria (5 estirpes) e A. hydrophila (7 estirpes), foram identificados. Em relação às características fenotípicas 90 estirpes (100%) apresentaram motilidade tipo swimming, 51 (57%) motilidade tipo swarming e 63 (70%) a capacidade de formar biofilme. Estes resultados indicam que as bactérias analisadas expressam características associadas com adesão, etapa importante no processo de colonização. O sequenciamento da estirpe A. trota 1999LCR foi realizado utilizando os sequenciadores 454 GS Junior e Illumina Miseq, a montagem do genoma foi realizada com o software SPADES v.3.5.0 e a anotação automática com o programa Rapid Annotation of microbial genomes using Subsystems Technology (RAST) versão 4.0. O tamanho do genoma foi estimado em 4.33Mb alocados em 18 contigs, e conteúdo de C+G de 60%. A anotação automática do genoma identificou 3877 sequências codificadoras, 128 tRNAs e 4 operons de rRNA. Utilizando o RAST e a busca manual com BLASTP para determinantes de virulência já descritos em outras espécies de Aeromonas diversos genes associados com virulência foram identificados no genoma da estirpe 1999LCR. Destaca-se a presença de genes que codificam os flagelos polar e lateral, em concordância com os resultados de swimming e swarming desta bactéria; toxinas incluindo AerA (aerolisina), hemolisina III, hemolisina termoestável e hemolisina cupin-like, que podem estar associadas com a atividade hemolítica, previamente descrita, da bactéria contra eritrócitos humanos. Genes que codificam um Sistema de Secreção Tipo 6 (SST6), associado com atividades citotóxicas, apoptose e escape da fagocitose em outras espécies de Aeromonas, também foram identificados. Outras características associadas com virulência identificadas incluem adesinas, enterotoxina citotônica Alt, várias enzimas previamente associadas com invasão de tecidos do hospedeiro e um inibidor da lisozima da família Ivy que poderia proteger a bactéria da atividade lítica da enzima. Portanto, diversos genes que podem participar na patogênese da bactéria, foram identificados no genoma de A. trota 1999LCR. / Abstract: Aeromonas are gram-negative bacilli capable of causing infections in humans ranging from diarrhea to septicemia and rarely meningitis. The species most frequently associated with infections are A. hydrophila, A. caviae and A. veronii sobria, while A. trota is rarely isolated from clinical samples and is still poorly studied. The identification of these bacteria at the species level is difficult and requires the use of molecular methods for confirmation. The objective of this work was to characterize clinical isolates of Aeromonas previously identified through microbiological tests and to carry out the sequencing and annotation of the genome of A. trota strain 1999LCR. Eighty-five Aeromonas were analyzed by gyrB sequencing which allowed the identification of the following species: A. caviae (33), A. hydrophila (24), A. veronii bv sobria (22), A. media (4), A. aquariorum and A. trota 1 strain each. The A. media species was identified only through the gyrB sequencing. The agreement between results of the conventional and molecular identification was 83.5%. Seventy-nine distinct pulsed field electrophoresis profiles were observed among the 90 Aeromonas analyzed indicating high genetic diversity between them. Only 3 clusters, formed by A. caviae (2 strains), A. veronii bv sobria (5 strains) and A. hydrophila (7 strains) were identified. In relation to the phenotypic characteristics, 90 strains (100%) exhibited the swimming motility, 51 (57%) the swarming motility, and 63 (70%) the ability to form biofilm. These results indicate that these bacteria are able to express characteristics associated with adhesion, an important step in the colonization process. Sequencing of the A. trota strain 1999LCR was performed using the 454 GS Junior and Illumina Miseq sequencers; assembly of the genome was performed with SPADES software v.3.5.0 and automatic annotation with Rapid Annotation of microbial genomes using Subsystems Technology (RAST) version 4.0. The genotype size was estimated in 4.33 Mb allocated in 18 contigs with C + G content of 60%. The genome automatic annotation identified 3877 coding sequences, 128 tRNAs and 4 rRNA operons in A. trota 1999LCR.Using RAST and the manual search with BLASTP for virulence determinants already described in other species of Aeromonas several genes associated with virulence were identified in the genome of strain 1999LCR. Among them are genes encoding the polar and lateral flagella, what is in agreement with the results of swimming and swarming motility of this bacterium; toxins including AerA (aerolysin), hemolysin III, thermostable hemolysin and cupin-like hemolysin, which may be associated with the previously described hemolytic activity of the bacterium against human erythrocytes. Genes encoding a Type 6 Secretion System (SST6), associated with cytotoxic activities, apoptosis and escape of phagocytosis in other Aeromonas species, have also been identified. Other virulence-associated traits identified include adhesins, the cytotonic enterotoxin Alt, various enzymes previously associated with invasion of host tissues, and an inhibitor of lysozyme from the Ivy family that could protect the bacteria from lytic activity of that enzyme. Therefore, several genes that may participate in the pathogenesis of the bacterium were identified in the genome of A. trota 1999LCR.

Orientadora : Profa. Dra. Cyntia M.T. Fadel Picheth / Co-orientadores : Profa. Dra. Leda S. Chubatsu, Prof. Dr. Luciano Huergo / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 01/03/2012 / Bibliografia: fls. 59-68 / Área de concentração: Análises clínicas / Resumo: Aeromonas spp. são bactérias capazes de causar uma série de infecções em humanos, variando de diarréia não complicada até meningite e septicemia. Escherichia coli fazem parte da microbiota intestinal de humanos, onde são benéficas para o hospedeiro. No entanto existem estirpes patogênicas capazes de causar infecções intestinais, denominadas E. coli diarreiogênicas (DEC), e extra-intestinais (ExPEC) como as E. coli uropatogênicas (UPEC). O objetivo desse trabalho foi caracterizar estirpes de Aeromonas spp. e E. coli através de Espectrometria de Massa MALDI-TOF. Foram analisadas 99 estirpes de Aeromonas spp. e 143 estirpes de E.coli, incluindo comensais isoladas da microbiota intestinal, patotipos, e estirpes de referência. As bactérias foram cultivadas em ágar MacConkey por 18 horas, a 36±1°C, ao ar. O extrato celular preparado a partir de ~10 colônias foi utilizado para análise. O ácido ?-ciano-4-hidroxicinâmico (10 mg/ml) dissolvido em acetonitrila:ácido trifluoroacético 2,5% (1:1) foi utilizado como matriz. Alíquotas dos extratos foram analisadas em espectrômetro de massa MALDI-TOF-MS (Autoflex; Bruker Daltonics) equipado com um laser de nitrogênio (337nm) (Bruker Daltonics). Os íons positivos foram obtidos utilizando uma aceleração de 20Hz no modo linear. Os espectros resultaram da soma dos íons obtidos de 100 tiros do laser em 10 posições diferentes da amostra. A aquisição dos espectros foi realizada de forma manual com uma resolução mínima de 600 arb e máxima de 1500 arb e analisados em uma faixa de relação carga/massa (m/z) de 3.000 a 20.000 Da.O processamento dos espectros foi realizado utilizando o software Flex Analysis v. 3.0 (Bruker Daltonics).Para E. coli os ensaios foram feitos em triplicata, e para Aeromonas spp em triplicata e em duas datas diferentes. Os espectros gerados foram analisados com o software Speclust gerando a lista de picos em comum e um dendrograma. Os picos m/z 4259, 5051, 6304 foram detectados em todas as estirpes de Aeromonas analisadas, o que indica que podem ser marcadores para bactérias deste gênero. O pico m/z 9180 foi observado em Aeromonas spp e E. coli, mas é importante para a identificação de Aeromonas. A espectrometria de massa MALDI-TOF foi capaz de diferenciar as espécies de Aeromonas. Dois picos, m/z 5380 e 7271, foram encontrados em todas as estirpes de E. coli analisadas. Os picos m/z 4364, 5095, 6253, 6314, 9060 e 9532 foram observados em 92 a 99% das E. coli. Estes picos são importantes para identificar E. coli. Foi possível diferenciar o grupo das E. coli comensais e das UPEC das demais categorias dessa bactéria. A metodologia de MALDI-TOF tem capacidade para distinguir as bactérias estudadas, no entanto é necessário otimizar a metodologia para distinguir maior número dos grupos de E. coli. / Abstract: Aeromonas spp are bacteria associated with human infections varying from diarrhea to meningitis and septicemia. Escherichia coli are part of intestinal microbiota of humans where are beneficial to host. However there are several pathogenic strains able to cause intestinal infections, called diarrheagenic E. coli (DEC), and extra-intestinal infections (ExPEC), as uropathogenic E. coli (UPEC). The aim of this work was to characterize Aeromonas and E. coli strains using MALDI-TOF Mass Spectrometry. We analyzed 99 Aeromonas strains, and a total of 143 E. coli including commensal, pathotypes and reference strains. Bacteria were grown overnight on MacConkey agar at 36±1°C, under air. Cells extracts were prepares with ~10 colonies. Alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid (10mg/ml) in acetonitrile:2,5% trifluoroacetic acid (1:1) was used as matrix. Aliquots of extracts were analyzed in a MALDI-TOF mass spectrometer (Autoflex, Bruker Daltonics) equipped with a nitrogen laser (337 nm). The positive ions were obtained with a 20 Hz acceleration in linear mode. The spectra were obtained from the sum of 100 laser shots in 10 different positions of sample. Acquisition of spectra was performed manually with a minimum resolution of 600 and maximum of 1500 arb, in a range of 3000 - 20000 Da. Processing of spectra was done with Flex Analysis v.3 (Bruker Daltonics). For E.coli tests were realized in triplicates, and for Aeromonas spp in triplicates and at 2 different days. The spectra were analyzed with software SPECLUST which generated lists of common peaks and a dendrogram. Peaks m/z 4259, 5051, 6304 were found in all Aeromonas strains, indicating that may be markers for the genera. Peak m/z 9180 was found in Aeromonas spp and also in E. coli, but is also important to identification of Aeromonas. MALDI-TOF mass spectrometry allowed to distinguish Aeromonas species. In E. coli, peaks m/z 5380 and 7271 were found in all strains. Peaks m/z 4364, 5095, 6253, 6314, 9060 and 9532 were detected in 92 to 99% of E. coli. All these peaks are important to identify E. coli strains. In addition, commensal E. coli strains and UPEC strains were distinguished from other categories of these bacteria. The MALDI-TOF metodology has the ability to distinguish the bacteria studied, however it should be optimized to achieve this objective.

O gênero Aeromonas representa um importante grupo de patógenos emergentes responsáveis por diversas afecções em animais e em humanos. Nestes, as Aeromonas têm sido associadas a infecções intestinais e extraintestinais em pessoas imunocompetentes e comprometidas, tanto na comunidade como em ambiente hospitalar. É de consenso geral que a resistência a antibióticos nessas bactérias pode vir a representar um problema potencial no tratamento das infecções. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a freqüência de resistência a distintos antibióticos em bactérias do gênero Aeromonas isoladas de humanos e de suínos, com ênfase na resistência a antibióticos -lactâmicos. Foram avaliados um total de 62 isolados, frente a um painel de 15 antibióticos, evidenciando-se uma elevada percentagem de bactérias resistentes a mais de três antibióticos -lactâmicos, além de alta resistência à tetraciclina, ao cotrimazol e ao cloranfenicol. Entre os antibióticos testados, os mais eficazes contra as Aeromonas foram os ciprofloxacina, os gentamicina e os tobramicina. Alta freqüência de Aeromonas resistentes à tetraciclina e ao cotrimazol foi evidenciada em isolados de suínos, mostrando a importância da pressão de seleção exercida por uso indiscriminado desses antibióticos nas rações. A maior parte dos isolados com resistências múltiplas apresentou plasmídios conjugativos e alguns plasmídios de baixo peso molecular; os quais, em princípio, podem estar associados à resistência a antibióticos. Entre os isolados com resistência a vários antibióticos -lactâmicos, um apresentou características fenotípicas de ESBL. A análise, através de PCR, confirmou a presença de três genes de -lactamases de espectro expandido (TEM, CTX e ampC) neste isolado. Os genes TEM e CTX foram transferidos por conjugação para E. coli, junto com a resistência ao cloranfenicol e à gentamicina, indicando que todos esses genes se encontram em plasmídio conjugativo. A análise da atividade -lactamásica em três isolados mostrou que a mesma é muito elevada em bactérias desse gênero. No isolado portador de ESBLs, as metalo--lactamases são responsáveis pela maior parte da atividade penicilinásica e apenas por uma pequena parte da atividade sobre cefotaxima. Constatou-se ainda que a atividade -lactamásica de Aeromonas é inibida por temperaturas acima de 40C, apresentando um decréscimo linear da atividade em função do tempo. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-07-04T14:20:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Adriana de Carli.pdf: 955154 bytes, checksum: 51d920df359e3b8b5871fd0d4d679bd0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-04T14:20:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Adriana de Carli.pdf: 955154 bytes, checksum: 51d920df359e3b8b5871fd0d4d679bd0 (MD5) / The genus Aeromonas represents an important group of emergent pathogens responsible for several disorders in animals and humans. In humans there are associated with intestinal and extra-intestinal infections in immunocompetent and compromised person of the community and hospital settings. It is of general concern that antibiotic resistance will potentially become a problem among Aeromonas strains causing infections. In this sense, the objective of the present work was to evaluate the frequency of resistance to different antibiotics in Aeromonas isolated from humans and suines, with enfasis in the resistance to -lactamic antibiotics. A total of 62 isolates were evaluated against a panel of 15 antibiotics showing high percentage of resistance to more than three -lactam antibiotics, as well as resistance to tetracycline, cotrimazol and cloranphenicol. The most efficient antibiotics against Aeromonas were ciprofloxacin, gentamicin, and tobramicin. High frequency of tetracyclin and cotrimazol resistance was evidenced among suine isolates, showing the selection pressure effect exerced by the indiscriminate use of these antibiotics on feed. Most isolates with multiple resistance harbored conjugative plasmids and some exhibited low molecular plasmids, that may be associated with antibiotic resistance. Among isolates with multiple resistance to -lactam antibiotics, one showed a characteristic ESBL phenotype. PCR analysis confirmed the presence of three extended spectrum -lactamase genes (TEM, CTX, and ampC) in this isolate. The TEM and CTX genes were transferred by conjugation to E. coli, together with the resistances to chloranphenicol and gentamicin, indicating that all these genes are present in a conjugative plasmid. The analysis of -lactamase activity in three isolates showed that is very high in this Aeromonas. In the isolate with ESBLs, the metalo--lactamases are responsible for the main penicillinasic activity but just for a small part of the activity on cefotaxime. The -lactamasic activity of Aeromonas is inhibited by temperatures over 40C, showing a linear decrease on the activity in function of time.

O gênero Aeromonas representa um importante grupo de patógenos emergentes responsáveis por diversas afecções em animais e em humanos. Nestes, as Aeromonas têm sido associadas a infecções intestinais e extraintestinais em pessoas imunocompetentes e comprometidas, tanto na comunidade como em ambiente hospitalar. É de consenso geral que a resistência a antibióticos nessas bactérias pode vir a representar um problema potencial no tratamento das infecções. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a freqüência de resistência a distintos antibióticos em bactérias do gênero Aeromonas isoladas de humanos e de suínos, com ênfase na resistência a antibióticos -lactâmicos. Foram avaliados um total de 62 isolados, frente a um painel de 15 antibióticos, evidenciando-se uma elevada percentagem de bactérias resistentes a mais de três antibióticos -lactâmicos, além de alta resistência à tetraciclina, ao cotrimazol e ao cloranfenicol. Entre os antibióticos testados, os mais eficazes contra as Aeromonas foram os ciprofloxacina, os gentamicina e os tobramicina. Alta freqüência de Aeromonas resistentes à tetraciclina e ao cotrimazol foi evidenciada em isolados de suínos, mostrando a importância da pressão de seleção exercida por uso indiscriminado desses antibióticos nas rações. A maior parte dos isolados com resistências múltiplas apresentou plasmídios conjugativos e alguns plasmídios de baixo peso molecular; os quais, em princípio, podem estar associados à resistência a antibióticos. Entre os isolados com resistência a vários antibióticos -lactâmicos, um apresentou características fenotípicas de ESBL. A análise, através de PCR, confirmou a presença de três genes de -lactamases de espectro expandido (TEM, CTX e ampC) neste isolado. Os genes TEM e CTX foram transferidos por conjugação para E. coli, junto com a resistência ao cloranfenicol e à gentamicina, indicando que todos esses genes se encontram em plasmídio conjugativo. A análise da atividade -lactamásica em três isolados mostrou que a mesma é muito elevada em bactérias desse gênero. No isolado portador de ESBLs, as metalo--lactamases são responsáveis pela maior parte da atividade penicilinásica e apenas por uma pequena parte da atividade sobre cefotaxima. Constatou-se ainda que a atividade -lactamásica de Aeromonas é inibida por temperaturas acima de 40C, apresentando um decréscimo linear da atividade em função do tempo. / The genus Aeromonas represents an important group of emergent pathogens responsible for several disorders in animals and humans. In humans there are associated with intestinal and extra-intestinal infections in immunocompetent and compromised person of the community and hospital settings. It is of general concern that antibiotic resistance will potentially become a problem among Aeromonas strains causing infections. In this sense, the objective of the present work was to evaluate the frequency of resistance to different antibiotics in Aeromonas isolated from humans and suines, with enfasis in the resistance to -lactamic antibiotics. A total of 62 isolates were evaluated against a panel of 15 antibiotics showing high percentage of resistance to more than three -lactam antibiotics, as well as resistance to tetracycline, cotrimazol and cloranphenicol. The most efficient antibiotics against Aeromonas were ciprofloxacin, gentamicin, and tobramicin. High frequency of tetracyclin and cotrimazol resistance was evidenced among suine isolates, showing the selection pressure effect exerced by the indiscriminate use of these antibiotics on feed. Most isolates with multiple resistance harbored conjugative plasmids and some exhibited low molecular plasmids, that may be associated with antibiotic resistance. Among isolates with multiple resistance to -lactam antibiotics, one showed a characteristic ESBL phenotype. PCR analysis confirmed the presence of three extended spectrum -lactamase genes (TEM, CTX, and ampC) in this isolate. The TEM and CTX genes were transferred by conjugation to E. coli, together with the resistances to chloranphenicol and gentamicin, indicating that all these genes are present in a conjugative plasmid. The analysis of -lactamase activity in three isolates showed that is very high in this Aeromonas. In the isolate with ESBLs, the metalo--lactamases are responsible for the main penicillinasic activity but just for a small part of the activity on cefotaxime. The -lactamasic activity of Aeromonas is inhibited by temperatures over 40C, showing a linear decrease on the activity in function of time.

Aeromonas hydrophila ML09-119 is an important fish pathogen that severely affects channel catfish aquaculture. To better understand this strain’s virulence factors, outer membrane vesicles (OMVs) were isolated, and their proteome was assessed. Using transmission electron microscopy and dynamic light scattering, OMVs were shown to be monodispersed particles with an average diameter of 120.33 nm. OMV proteins were identified using mass spectrometry, and analysis of the resulting proteome of 74 proteins revealed that many originated from the cytoplasm, but there was an enrichment of outer membrane, periplasmic, and extracellular proteins compared to the total proteome. The majority of the functional classifications were associated with bacterial metabolism. Of the predicted virulence factors, several had a putative function in adherence, and there were type III secretions system proteins as well as three secreted exotoxins. Overall, our data reveal new insights into A. hydrophila OMVs and their potential roles in physiology and virulence.

The aspects of the biology of Aeromonas hydrophila with respect to a striped mullet (Mugil cephalus L.0 nursery were examined. A. hydrophila density in the natural water was found to be strongly correlated with turbidity and weakly correlated with water temperature. No correlations were found between A. hydrophila density and water depth, dissolved oxygen, pH, total alkalinity, specific conductivity, or phytoplankton chlorophyll concentration. A. hydrophila density/g dry weight of stomach content were found to be correlated with chlorophyll concentration/g dry weight stomach content. The survivability of striped mullet after capture was found to be primarily related to stress. Stressed striped mullet tended to become infected by A. hydrophila more readily. The mortality of transported striped mullet was reduced with the use of quinaldine, a fish tranquilizer, and by reducing crowding during transport.

Orientador: Julieta Rodini Engrácia de Moraes / Banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Rogério Salvador / Resumo: Aeromonas hydrophila é patógeno oportunista com potencial de infecção para mamíferos, peixes e humanos, cosmopolita e emergente em infecções hospitalares de humanos. O complexo Aeromonas hydrophila formado por várias subespécies apresenta variedade antigênica que dificulta o diagnóstico da infecção pelo uso de anticorpos monoclonais. Pelo exposto, o objetivo deste trabalho foi o de produzir uma imunoglobulina Y policlonal purificada em gema de galinhas poedeiras, imunizadas com proteínas de membrana bacteriana e testar sua eficácia nos ensaios de imuno-histoquímica para identificação de bactérias no fígado e rim de Piaractus mesopotamicus infectados experimentalmente. Os resultados mostraram que a técnica foi eficaz uma vez que as aves produziram anticorpos específicos anti-A. hydrophila no soro e na gema, com aumento significativo (p<0,05) e progressivo dos títulos até 60 dias, que se mantiveram detectáveis no teste ELISA até 90 dias após a terceira imunização. As análises de imuno-histoquímica foram efetivas para detecção de colônias de A. hydrophila no coração, fígado, rim, encéfalo e baço de P. mesopotamicus com anticorpos IgY específico. Os resultados permitiram concluir que a imunoglobulina Y produzida em ovos de galinha foi eficaz no diagnóstico de aeromonose na espécie de peixe testada / Abstract: Among the aeromonas complex, Aeromonas hydrophila has the potential to infect mammals, fish, and humans. It is a cosmopolitan, opportunistic and emerging pathogen in nosocomial infections in humans. This bacteria complex formed by several subspecies also presents antigenic variety, which makes diagnosis difficult to be done with the use of monoclonal antibodies. The aim of this work was to produce polyclonal immunoglobulin Y purified from yolk of laying hens, immunized with bacterial membrane proteins, and to test its effectiveness in immunohistochemistry of A. hydrophila cells in the liver and kidney of experimentally infected Piaractus mesopotamicus. The results showed that the laying hens produced specific anti-A. hydrophila antibodies in serum and yolk, with a significant (p<0,05) and progressive increase of titles at 60 days, which were maintained until 90 days after the third detectable immunization in the ELISA test. The immunohistochemistry was positive for detection of colonies of A. hydrophila in liver and P. mesopotamicus in heart, liver, kidney, brain and spleen with the use of specific IgY antibodies. Therefore, the immunoglobulin produced in chicken eggs was effective in diagnosing aeromonas in P. mesopotamicus / Mestre

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.