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Padronização Farmacognóstica e Atividade Antifúngica do Óleo Essencial de Ageratum conyzoide L.SANTOS, Rafaela Ferreira dos 24 February 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-24T19:12:18Z
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Previous issue date: 2015-02-24 / CNPQ / Ageratum conyzoides L. (Asteraceae), conhecida vulgarmente como mentrasto ou catinga de bode e utilizado na medicina popular, como purgante, antitermico, anti-inflamatorio, analgesico, anestesico, antiulcerogenico, antidiarreico, hemorragico e contra disturbios mentais. Poucos estudos acerca do controle de qualidade da materia prima vegetal e da atividade antifungica do oleo essencial foram relatados na literatura. Dessa forma, objetivou-se a realizacao de uma padronizacao farmacognostica, nos ambitos farmacobotanico, quimico e fisico-quimico alem da avaliacao da atividade antifungica. Realizaram-se cortes transversais para analise microscopica da folha, peciolo, caule e raiz; nas folhas foram realizados ainda cortes paradermicos. Seguindo a Farmacopeia Brasileira realizaram-se ensaios fisico-quimicos. Atraves de Cromatografia em Camada Delgada (CCD) foram identificados os grupos de metabolitos. Foi realizada extracao por hidrodestilacao e caracterizacao por Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas do oleo essencial das folhas calculando-se o seu rendimento. Avaliou-se a atividade antifungica do oleo essencial frente a especies de Candida. A raiz apresenta epiderme uniseriada com celulas irregulares no parenquima cortical, raios xilematicos bem desenvolvidos e parenquima medular com formas celulares variadas. O caule tem a epiderme unisseriada, com tricomas tectores pluricelulares e sistema vascular colateral. A folha e anfiestomatica com estomatos anisociticos em sua maioria. O mesofilo e assimetrico com uma camada de parenquima palicadico. A nervura central tem contorno biconvexo. A triagem fitoquimica revelou mono e sesquiterpenos, triterpenos e esteroides, flavanoides, cumarinas e alcaloides. O teor de umidade 12,1%, os teores de cinzas totais e insoluveis em acido foram de 9,8 e 1,07% respectivamente. A granulometria permitiu classificar o po como moderadamente grosso. O rendimento do oleo essencial foi de 0,16% (p/v). Os constituintes majoritarios foram Precoceno I e ƒÀ-cariofileno. O oleo de A. conyzoides demonstrou atividade antifungica para diferentes especies de Candidas dentre elas C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis, C. guilliermondii, C. parapsilisis, Candida famata e C. albicans. Dessa forma, com a caracterizacao farmacognostica e atividade antifungica para Candida confirmada, A. conyzoides pode ser considerado um material vegetal em potencial para a elaboracao de novos antifungicos. / Ageratum conyzoides L. (Asteraceae), commonly known as ―mentrasto‖ or ―catinga de bode‖ is used in traditional medicine, as a laxative, antipyretic, anti-inflammatory, analgesic, anesthetic, anti-ulcerogenic, anti-diarrheal, antihemorrhagic and against mental disorders. In the literature are few scientific studies concerning the quality control of the raw material from the plant and the antifungal activity of its oil. Therefore, a Pharmacognostic standardization covering the areas of pharmacobotanic, chemistry and physic-chemistry was performed, as well as an evaluation of the antifungal activity. For a microscopic analysis, the leaf, petiole, stem and root were transversely sectioned; further, paradermal sections were undertaken in the leaves. Complying with the Brazilian Pharmacopeia, physic-chemical trails were performed. The identification of metabolites groups was performed through Thin Layer Chromatography (TLC). The essential oil from the leaves was extracted by hydrodistillation and characterized by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry, and then its yield was calculated. The antifungal activity of the essential oil was evaluated in resistance to some Candida species. The root presents uniseriate epidermis with irregular cells in the cortical parenchyma, well developed xylem and medullary parenchyma with diverse cellular forms. The stem exhibits uniseriate epidermis, with multicellular tector trichomes and collateral vascular system. The leaf is anfiestomatic with anisocytic stomats mostly. The mesophyll is asymmetric with a layer of palisade parenchyma. The central rib has biconvex contour. The phytochemical screening revealed mono and sesquiterpenes, triterpenes and steroids, flavonoids, cumarins and alkaloids. The moisture content of 12.1%, and the levels of total ash and acid-insoluble were 9.8 and 1.07%, respectively. The granulometry classified the powder as moderately thick and the yield of essential oil was 0.16% (w/v). The major constituents were preconeno I and β-caryophyllene. The A. conyzoides oil displayed antifungal activity to several species of Candida, among them C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis, C. guilliermondii, C. parapsilisis, C. famata and C. albicans. Hence, with the pharmacognostic characterization and antifungal activity for Candida confirmed, A. conyzoides can be considered a potential plant material for the development of new antifungal agents.
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Isolamento, identificação e atividade inseticida de constituintes químicos de Ageratum conyzoides / Isolation, identification and insecticide activity of the chemical constituents in Ageratum conyzoidesMoreira, Márcio Dionizio 14 March 2001 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-08T17:23:31Z
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Previous issue date: 2001-03-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho objetivou isolar, identificar e estudar a atividade inseticida de compostos presentes na planta Ageratum conyzoides. Os extratos hexânicos e alcoólicos das plantas anis (Ocimum celore L.), arruda (Ruta graveolens L.), cordão de frade (Leonotis nepetaefolia L.), datura (Datura estramonium L.), erva balieira (Cordia verbenaceae L.), hortelã (Mentha piperita L.), melão-de-são- caetano (Mormodica charantia L.) e mentrasto (A. conyzoides L.) tiveram sua atividade inseticida testada e apenas o extrato hexânico da planta A. conyzoides apresentou atividade. O dossel desta planta foi submetido à extração, a frio, com hexano. O extrato obtido foi sucessivamente fracionado por cromatografia em coluna de sílica gel para isolamento e purificação dos constituintes químicos. As frações tiveram sua atividade inseticida monitorada por meio de testes de toxicidade para Diaphania hyalinata (L.), Diaphania nitidalis (Cramer) (Lepidoptera: Pyralidae), Musca domestica (L.) (Diptera: Muscidae), Rhyzopertha dominica (F.) (Coleoptera: Bostrychidae), Sitophilus zeamais (Motschulsky) (Coleoptera: Curculionidae) e Tuta absoluta (Meyrick) (Lepidoptera: Gelechiidae). Os compostos 5,6,7,8,3’,4’,5’-heptametoxiflavona; 5,6,7,8,3’-pentametoxi-4’,5’-metilenodioxiflavona e cumarina foram identificados através de espectroscopia no infravermelho, RMN de 1H, RMN de 13 C, incluindo as técnicas de PENDANT, DEPT, HMQC, HMBC e NOE. Foram isolados deste extrato os flavonóides 5,6,7,8,3’-pentametoxi-4’,5’- metilenodioxiflavona e 5,6,7,8,3’,4’,5’- heptametoxiflavona e a cumarina. As curvas dose-mortalidade para a cumarina, foram obtidas por análise de próbite. O flavonóide 5,6,7,8,3’- pentametoxi- 4’,5’- metilenodioxiflavona não apresentou atividade inseticida aos insetos testados. O composto 5,6,7,8,3’,4’,5’- heptametoxiflavona, apresentou baixa atividade inseticida para T. absoluta, D. hyalinata, e R. dominica. A cumarina apresentou alta atividade inseticida para T. absoluta, D. hyalinata, S. zeamais, R. dominica e M. domestica. A ordem crescente de susceptibilidade a cumarina é R. dominica < S zeamais < D. hyalinata < M. domestica < T. absoluta. / This work was carried out to phytochemical investigation of leafs of Ageratum conyzoides. The insecticide activity of the hexanic and alcoholic extracts of the plants anise (Ocimum celore L.), herbe grace (Ruta graveolens L.), lion's-ear (Leonotis nepetaefolia L.), datura (Datura estramonium L.), erva balieira (Cordia verbenaceae L.), mint (Mentha piperita L.), balsam apple (Mormodica charantia L.) and mentrasto (A. conyzoides L.) were tested, and only the hexanic extract of the plant A. conyzoides presented some activity. This plant canopy was submitted to cold extraction with hexane. The obtained extract was successively fractionated by gel-silica column chromatography for isolation and purification of the chemical constituents. The fraction insecticide activities were monitored by toxicity tests for Diaphania hyalinata (L.), Diaphania nitidalis (Cramer) (Lepidoptera: Pyralidae), Musca domestica (L.) (Diptera: Muscidae), Rhyzopertha dominica (F.) (Coleoptera: Bostrychidae), Sitophilus zeamais (Motschulsky) (Coleoptera: Curculionidae) and Tuta absoluta (Meyrick) (Lepidoptera: Gelechiidae). The compounds 5,6,7,8,3',4',5'- heptamethoxyflavone; 5,6,7,8,3'-pentamethoxy-4',5'-methilenedioxyflavone coumarin were identified through infrared spectroscopy, 1H-NMR and 13 and C-RMN, including the PENDANT, DEPT, HMQC, HMBC and NOE techniques. The flavonoids 5,6,7,8,3'-pentamethoxy-4',5'-methilenedioxyflavone; 5,6,7,8,3',4',5- heptamethoxyflavone and coumarin were isolated from this extract. The mortality-dose curves for coumarin were obtained by probite analysis. The flavonoid 5,6,7,8,3 '-pentamethoxy-4',5'-methilenedioxyflavone did not show any insecticide activity to the tested insects. The compound 5,6,7,8,3',4',5'- heptamethoxyflavone presented low insecticide activity for T. absoluta, D. hyalinata and R. dominica. The coumarin showed high insecticide activity for T. absolute, D. hyalinata, S. zeamais, R. dominica and M. domestica. The susceptibility increasing order to coumarin is R. dominica <S zeamais <D. hyalinata <M. domestica < T. absoluta. / Não foi localizado o cpf do autor.
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Estudo do efeito anti-inflamatório da Ageratum conyzoides L., suas frações e compostos isoladosVigil, Silvana Virginia Gagliotti January 2016 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:07:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2016 / Ageratum conyzoides L. é utilizada na medicina popular brasileira como agente anti-inflamatório. Os objetivos deste estudo foram: I) Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto (EB), das frações: etanol (EtOH-F), hexano (HEX-F), acetato de etila (AcOEt-F) e diclorometano (DCM-F) e dos compostos isolados 5'-metoxi nobiletina (MeONOB), 1,2-benzopirona (BP) e eupalestina (EP) da A. conyzoides L.; II) Elaborar uma revisão sistemática sobre o efeito anti-inflamatório das cumarinas (in vitro e in vivo). Neste estudo, foi utilizado o modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos. Os parâmetros analisados foram: leucócitos, concentrações de: proteínas do exsudato, mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), metabólitos do óxido nítrico (NOx) e citocinas (IL-10, IL-17A, IL-6, TNF-a, IFN-y, MCP-1) e fosforilação de p65 NF-kB (p-p65 NF-kB), p38 MAPK (p38 e p-p38 MAPK) e ERK (p-ERK). Para revisão sistemática, foi realizada a pesquisa de literatura publicada entre 01/01/2005 e 31/12/2015, nas bases de dados PUBMED, MEDLINE, Web of Science e Scopus, utilizando os termos 'anti-inflammatory' e 'coumarin' e 'in vivo' ou 'in vitro'. EB, frações e compostos isolados inibiram leucócitos, as concentrações de proteínas do exsudato de MPO, ADA e NOx (p<0,05). EB, EtOH-F e os compostos isolados inibiram as concentrações de IL-17A, IL-6, TNF-a e IFN-y (p<0,05). EB, EtOH-F, MeONOB e BP reduziram as concentrações de MCP-1 (p<0,01). EB, EtOH-F e BP aumentaram as concentrações de IL-10 (p<0,05). Os compostos isolados inibiram p-p65 NF-kB e p-p38 MAPK (p<0,01). Em relação à revisão sistemática, a maioria dos estudos utilizou ensaios in vitro. Os estudos avaliaram principalmente citocinas, edema, estresse oxidativo, células inflamatórias, NOx, NF-kB, MAPK, MPO e COX-2. A. conyzoides L. possui importante atividade anti-inflamatória e seu mecanismo de ação parece estar associado à inibição da fosforilação de p65 NF-kB e p38 MAPK. Os compostos isolados MeONOB, BP e EP e as cumarinas podem ser considerados importantes candidatos para o desenvolvimento de novos fármacos anti-inflamatórios.<br> / Abstract : Ageratum conyzoides L. is used in Brazilian folk medicine as an anti-inflammatory agent. The aims of this study were: I) Evaluate the anti-inflammatory effect of the crude extract (CE), of the fractions: ethanol (EtOH-F), hexane (HEX-F), ethyl acetate (EtOAc-F) and dichloromethane (DCM-F) and of the isolated compounds 5'-methoxy nobiletin (MeONOB), 1,2-benzopyrone (BP) and eupalestin (EP) from A. conyzoides L.; II) Make a systematic review about the anti-inflammatory properties of coumarins (in vitro and in vivo). In this study, the model of pleurisy induced by carrageenan was used, in mice. The parameters analysed were: leukocytes, concentrations of the exudate protein, of myeloperoxidase (MPO), of adenosine deaminase (ADA) and of nitric oxide metabolites (NOx), cytokines levels (IL-10, IL-17A, IL-6, TNF-a, IFN-y, MCP-1), and phosphorylation of p65 NF-kB (p-NF-kB p65), p38 MAPK (p38 and p-p38 MAPK) and ERK (p-ERK). For the systematic review, it was carried out the research of literature published between January 1, 2005 and December 31, 2015, in PUBMED, MEDLINE, Web of Science and Scopus using the keywords: 'anti- inflammatory' and 'coumarin' and 'in vivo' or 'in vitro'. CE, fractions and isolated compounds inhibited leukocyte, protein concentrations of the exudate, MPO, ADA and NOx concentrations (p<0.05). CE, EtOH-F and isolated compounds significantly reduced IL-17A, IL-6, TNF-a and IFN-y levels (p<0.05). CE, EtOH-F, MeONOB and BP significantly reduced MCP-1 levels (p<0.01). CE, EtOH-F and BP increased IL-10 levels (p<0.05). The isolated compounds reduced p-p65 NF-kB and p-p38 MAPK (p<0.01). In relation to the systematic review, most of the studies used in vitro assays. The studies focused mainly in cytokines, oedema, oxidative stress, inflammatory cells, NOx, NF-kB, MAPK, MPO, and COX-2. A. conyzoides L. has important anti-inflammatory activity and its mechanism of action seems to be associated with the inhibition of phosphorylation of p65 NF-kB and p-p38 MAPK. The isolated compounds MeONOB, BP and EP and coumarins may be considered important candidates for the development of new anti-inflammatory drugs.
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Estudo farmacobotânico de seis espécies de uso medicinal no nordeste brasileiro.Malheiros, Sarah Guimarães de Lima 10 February 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Medicinal plant is any plant that has, in one or more organs, substances that can be used for therapeutic purposes or which are precursor of semi-synthetic drugs. Natural products and their derivatives represent more than 50% of all drugs in clinical use worldwide, being higher plants supplying at least 25% of the total. Although the growing use of medicinal plants has been very large in recent decades, there is still a significant lack of research data in this area, especially with regard to quality control of herbal drugs. This work aimed the pharmacobotanical study of six angiosperms medicinal species commonly used in northeastern Brazil, in order to support the quality control of their herbal drugs, since the morphological and anatomical data for these species are scarce, although the pharmacological importance of each is well-defined. For this purpose, we performed morphological and anatomical studies of roots, stems and leaves and ultra-structural study of leaves surfaces of Ageratum conyzoides, Justicia pectoralis, Cnidoscolus urens, Cnidoscolus infestus, Aristolochia papillaris e Aristolochia birostris. The results showed, especially the anatomical data, such as contour epidermal cell wall, types of stomata, trichome type and distribution and organization of vascular bundles, showed particular and distinctive characters of each species. The morphoanatomic analysis of the species in study allowed the characterization of each one, providing basis for their correct identification and distinction of closely related and morphologically similar species. / Planta medicinal é todo e qualquer vegetal que possui, em um ou mais órgãos, substâncias que podem ser utilizadas com fins terapêuticos ou que sejam precursores de fármacos semissintéticos. Os produtos naturais e seus derivados representam mais de 50% de todas as drogas de utilização clínica em todo o mundo, sendo as plantas superiores fornecedoras de pelo menos 25% desse total. Embora o crescimento do uso de plantas medicinais tenha sido evidente nas últimas décadas, há ainda uma significante carência de dados de pesquisas nesta área, especialmente no que diz respeito ao controle de qualidade de drogas vegetais. Este trabalho teve por objetivo o estudo farmacobotânico de seis espécies de angiospermas medicinais de uso comum no nordeste brasileiro, de forma a subsidiar o controle de qualidade de suas drogas vegetais, uma vez que os dados morfoanatômicos para essas espécies são escassos, embora a importância farmacológica de cada uma esteja bem definida. Para tanto, foram realizados estudos morfológicos e anatômicos de raízes, caules e folhas, e estudo ultraestrutural das superfícies foliares de Ageratum conyzoides, Justicia pectoralis, Cnidoscolus urens, Cnidoscolus infestus, Aristolochia papillaris e Aristolochia birostris. Os resultados encontrados, especialmente os dados anatômicos, como contorno da parede celular epidérmica, tipos de estômatos, tipo e distribuição de tricomas e organização dos feixes vasculares, evidenciaram caracteres particulares e distintivos de cada espécie. As análises morfoanatômicas das espécies em estudo possibilitaram a caracterização de cada uma delas, fornecendo subsídio para sua correta identificação e distinção das espécies próximas e morfologicamente semelhantes.
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Analysis of plant gene expression responses to the pathogen and natural genetic engineer Agrobacterium tumefaciens /Ditt, Renata Fava. January 2004 (has links)
Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2004. / Vita. Includes bibliographical references (p. 84-109).
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An?lise da composi??o qu?mica, atividade citot?xica e inibi??o de citocinas in vitro de prepara??es de partes a?reas da planta ageratum fastigiatumFreitas, Beth?nia Alves de Avelar 13 September 2013 (has links)
Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-17T15:38:43Z
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Previous issue date: 2013 / Ageratum fastigiatum ? uma planta utilizada na medicina popular como anti-inflamat?rio e analg?sico, no entanto, poucos estudos foram realizados a fim de detalhar os mecanismos envolvidos nessa atividade. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-inflamat?ria in vitro do ?leo essencial e do extrato dicloromet?nico de A. fastigiatum. Pela t?cnica de exclus?o do azul de tripam por citometria de fluxo foram determinadas concentra??es n?o t?xicas das prepara??es de A. fastigiatum. As concentra??es n?o t?xicas do ?leo essencial foram 5x10-3 e 1x10-2 ?L/mL. Essas concentra??es foram utilizadas para a pesquisa do potencial anti-inflamat?rio do ?leo essencial, medido por meio da an?lise do perfil de citocinas pro (TNF- ? e IFN- ?) e anti-inflamat?rias (IL-10), em culturas de leuc?citos humanos estimulados e n?o estimulados com PMA (acetato de forbol miristato) . Os dados demonstraram que ambas as concentra??es inibiram o percentual de linf?citos-TNF+ nas culturas estimuladas com PMA. A an?lise cromatogr?fica em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM) revelou como principais constituintes no ?leo essencial as subst?ncias ?-pineno (7,51%), limoneno (5,9%), ?xido de cariofileno (13,59%), 1,2 ep?xido humuleno (8,41%) e 1,6-humulanodien-3-ol (17,71%). O extrato dicloromet?nico de A. fastigiatum, na concentra??o 20 ?g/mL, n?o apresentou toxicidade aos leuc?citos do sangue perif?rico humano e reduziu o percentual de linf?citos-TNF-?+ e linf?citos-IFN-?+ nas culturas estimuladas com o PMA. Este extrato foi fracionado em coluna de Sephadex LH-20 (150 g). Na an?lise de citocinas, a fra??o 10 (AFDM 10), na concentra??o 10 ?g/mL, demonstrou efeito anti-inflamat?rio in vitro reduzindo a frequ?ncia de linf?citos-TNF-?+ e a prolifera??o de linf?citos estimulados com PHA (fitohemaglutinina). Sugere-se que parte da atividade anti-inflamat?ria de A. fastigiatum se d? pela inibi??o que os constituintes da planta promovem sobre a ativa??o de leuc?citos. / Tese (Doutorado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT
Ageratum fastigiatum is a plant used in folk medicine as topical anti-inflammatory and analgesic agent. However, few studies have been conducted with this plant in order to detail the molecular mechanisms involved in its biological activities. Therefore, main purpose of the present study was to investigate the anti-inflammatory activity of the essential oil and leaf rinse dichloromethane of A. fastigiatum extract. The cytotoxicity of the compounds was assessed by means of trypan blue exclusion. The essential oil at 5x10-3 e 1x10-2 ?L/ did not present cytotoxic activity. These two concentrations were used for investigating the anti-inflammatory potential of the essential oil, by analyzing the pro-inflammatory (TNF-? and IFN-?) and anti-inflammatory (IL-10) cytokine profiles on human leukocyte cultures stimulated and non-stimulated with PMA (phorbol myristate acetate). The data obtained by flow cytometry demonstrated that both concentrations decreased the percentage of lymphocytes ?TNF-? + on the cell cultures stimulated with PMA. In the non-stimulated cell cultures there were no changes in the percentage of IL-10+ cells. The gas phase chromatography coupled with mass spectrometry analysis (GC/MS) revealed that the main compounds present in oil samples were: ?-pinene (7.51%), limonene (5.9%), caryophyllene oxide (13.59%), 1,2 humulene epoxide (8.41%) and 1,6-humulanodien-3-ol (17.71%). The dichloromethane extract of A. fastigiatum, obtained from the washing leaves, at the concentration 20 ?g/mL, did not presented cytotoxicic action on the human peripheral blood leukocytes. Following the same protocol performed to cytokines analysis used before, we observed that the dichloromethane A. fastigiatum extract also decreased the percentage of lymphocytes-TNF-? + and IFN-?+ on the cell cultures stimulated with PMA. This extract after fractionated on Sephadex LH-20 . The dichloromethane A. fastigiatum fraction (AFDM 10) at 10 ?g/mL reducing the frequency of lymphocytes-TNF-?+. Furthermore AFDM 10 decreasing the proliferation of lymphocytes stimulated with PHA (phytohemagglutinin). It is concluded that part of the anti-inflammatory activity of A. fastigiatum is give by inhibiting the plant constituents on promoting the activation of leukocytes.
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Efeito do extrato etan?lico de Ageratum fastigiatum (Gardn.) R. M. King et H. Rob. e de sua fra??o sobre a produ??o de citocinas e prolifera??o de linf?citos humanos, in vitroCosta, Lucas de Abreu 13 May 2016 (has links)
?rea de concentra??o: Ci?ncias Fisiol?gicas. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-01-09T16:47:50Z
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Previous issue date: 2016 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A planta Ageratum fastigiatum (Gardn.) R. M. King et H. Rob. ? comumente utilizada na medicina popular da regi?o do Vale do Jequitinhonha como anti-inflamat?rio e analg?sico. Em virtude do papel do sistema imune e de fatores inflamat?rios sol?veis na etiologia e no mecanismo fisiopatol?gico de diversas doen?as inflamat?rias, este trabalho teve como objetivo investigar par?metros relacionados ? atividade anti-inflamat?ria do extrato etan?lico de A. fastigiatum e de uma fra??o derivada desse extrato. A identifica??o dos constituintes qu?micos da fra??o do extrato etan?lico de A. fastigiatum foi realizada por meio da Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia com Detectores de Arranjo de Diodo acoplada ? espectrometria de massas (CLAE-DAD-MS) seguida pela Espectrometria de Massas em Tandem com ioniza??o por electrospray (ESI-MS/MS). A t?cnica de exclus?o com azul de tripan foi utilizada para determina??o da viabilidade das culturas de c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMC) incubadas por 8, 24 e 120 horas com o extrato etan?lico, a fra??o e o solvente Dimetilsulf?xido (DMSO). Na avalia??o do perfil proliferativo de linf?citos pela t?cnica de citometria de fluxo, PBMC estimuladas com o mit?geno Fitohemaglutinina (PHA) foram incubados por 120 horas na aus?ncia ou presen?a de diferentes concentra??es n?o t?xicas dos componentes citados. Para an?lise da produ??o das citocinas pr?-inflamat?rias, PBMC tratadas ou n?o com diferentes concentra??es n?o t?xicas do extrato etan?lico de A. fastigiatum, da fra??o e do solvente DMSO foram incubadas por 8 horas e estimulada nas ?ltimas 4 horas com Miristato Acetato de Forbol (PMA), utilizando a t?cnica de citometria de fluxo, linf?citos totais, c?lulas CD4+ e CD8+ foram avaliados quanto ? produ??o de IFN-?, TNF-? e IL-2. De acordo com nossos resultados, a concentra??o de DMSO, para todas as culturas celulares tratadas com o extrato etan?lico ou sua fra??o, foi definida como sendo 1% v/v para avalia??o da citotoxicidade e an?lise da produ??o de citocinas em linf?citos e de 0.5% v/v no ensaio de prolifera??o celular. Na an?lise fitoqu?mica da fra??o do extrato etan?lico foram identificados dois flavon?is nunca antes descrito na constitui??o qu?mica da planta, a 7-metil-quercetina e a Rhamnocitrina, tais compostos n?o alteraram os par?metros anti-inflamat?rios avaliados neste estudo. O extrato etan?lico, por sua vez, nas concentra??es de 6,25 e 12,5 ?g/mL reduziu significativamente a prolifera??o de linf?citos, ao mesmo tempo, nas concentra??es de 50 e 75 ?g/mL inibiu a produ??o das citocinas TNF-? e IL-2 em c?lulas CD8+, na maior concentra??o inibiu ainda a produ??o de IL-2 na popula??o de linf?citos totais. Sugere-se que o extrato etan?lico de A. fastigiatum possui componentes ativos agindo sinergicamente ou de forma isolada que contribuem para atividade anti-inflamat?ria atribu?da ? planta em seu uso na medicina popular. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2016. / Ageratum fastigiatum (Gardner.) R. M. King et H. Rob. is a plant commonly used in the folk medicine of the Jequitinhonha Valley as anti-inflammatory and analgesic. Because of the role of the immune system and soluble inflammatory factors in the etiology and pathophysiological mechanism of various inflammatory diseases, this study aimed to investigate parameters related to the anti-inflammatory activity of the ethanol extract of A. fastigiatum and a fraction derived from this extract. The identification of the chemical constituents of the fraction of ethanol extract of A. fastigiatum was performed by High Performance Liquid Chromatography with Efficiency Diode Arrangement detectors coupled to mass spectrometry (HPLC-DAD-MS) followed by Mass Spectrometry in Tandem with electrospray ionization (ESI-MS/MS). The exclusion technique with Trypan blue was used to determine the viability of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures, previously incubated for 8, 24 and 120 hours with the ethanol extract, the fraction and the solvent dimethylsulfoxide (DMSO). In the evaluation of the proliferative profile of lymphocytes using the flow cytometry technique, PBMC stimulated with the mitogen Phytohemagglutinin (PHA) were incubated for 120 hours in the absence or presence of different non-toxic concentrations of the mentioned components. In order to analyze the production of pro-inflammatory cytokines, PBMC treated or not with different non-toxic concentrations of the ethanolic extract of A. fastigiatum, of the fraction, and of the solvent DMSO was incubated for 8 hours and stimulated with phorbol myristate acetate (PMA) in the last 4 hours. Subsequently, total lymphocytes, CD4+ and CD8+ cells were assessed for production of IFN-?, TNF-? and IL-2, using flow cytometry. According to our results, the concentration of DMSO, for all cell cultures treated with ethanolic extract and its fraction was defined as 1% v/v for evaluation of cytotoxicity and analysis of cytokine production by lymphocytes, and 0.5% v/v to be used in the cell proliferation assay. In the phytochemical analysis of the fraction of ethanol extract, were identified two flavonols never before described in the chemical constitution of the plant, 7-methyl-quercetin and Rhamnocitrina. Such compounds did not modified the anti-inflammatory parameters evaluated in this study. The ethanol extract, on the other hand, in concentrations of 6.25 and 12.5 ?g/ml significantly reduced the proliferation of lymphocytes, while at concentrations of 50 and 75 ug/mL, it inhibited the production of TNF-? and IL-2 in CD8+, in addition, at the highest concentration it inhibited IL-2 production by total lymphocytes population. It is suggested that the ethanol extract of A.fastigiatum has active components acting synergistically or separately, resulting in the anti-inflammatory activity attributed to the plant by the folk medicine.
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