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Prospecção de enzimas de degradação de materials vegetal em fungos endofíticos

Marques, Natália Paganini [UNESP] 16 August 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-16Bitstream added on 2014-06-13T19:08:55Z : No. of bitstreams: 1 marques_np_me_araiq_parcial.pdf: 117061 bytes, checksum: 111016526ed0a98902d9d6c8b01f9d3b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-22T12:53:53Z: marques_np_me_araiq_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-22T12:54:47Z : No. of bitstreams: 1 000721712_20150917.pdf: 105117 bytes, checksum: bd9855c12b3ec4afdcb5547ce783e4e6 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-09-17T16:31:32Z: 000721712_20150917.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T16:32:27Z : No. of bitstreams: 1 000721712.pdf: 835904 bytes, checksum: fd7bf1792a2e5436543d83a39fa9040f (MD5) / Os fungos filamentosos são conhecidos por sua notável capacidade de produção de enzimas, particularmente as de degradação de material vegetal. O campo de aplicações industriais destas enzimas tem crescido consideravelmente, especialmente em relação às celulases, que tem sido extensivamente estudadas visando à sacarificação da celulose para a obtenção de etanol de segunda geração. Os fungos endofíticos estão entre os potenciais produtores de enzimas de degradação de material vegetal, são pouco estudados neste sentido e, uma vez que colonizam os tecidos vegetais, suas enzimas devem apresentar características interessantes do ponto de vista do ataque aos componentes da parede celular. Dentro deste contexto, o presente estudo teve por finalidade a prospecção de celulases, xilanases, pectinases e amilases entre fungos endofíticos, bem como estudos da produção e das características das enzimas. Inicialmente, 14 fungos endofíticos foram cultivados por fermentação estado sólido (FES) em bagaço de cana-de-açúcar e farelo de trigo (1:1 m/m), durante 7 dias, a 28 °C. Nesta etapa, 8 fungos se destacaram na produção de celulases e foram posteriormente cultivados, em FES, em outras misturas de substratos lignocelulósicos. Os isolados Botryosphaeria sp. AM01 e Saccharicola sp. EJC04 foram os mais versáteis em relação à produção das enzimas em diferentes meios, sendo selecionados para dar continuidade ao trabalho. A partir desta etapa foram focadas as produções de celulases e xilanases, visando à aplicação destas enzimas em trabalhos futuros envolvendo a sacarificação de materiais lignocelulósicos. O substrato selecionado foi composto por farelo de algodão e farelo de trigo e a influência do tempo de cultivo, da concentração de inóculo e da umidade inicial do substrato foram avaliadas, pelo cultivo em... / Filamentous fungi are known for their remarkable ability for enzymes production, particularly those for plant material degradation. The field of industrial applications of these enzymes has increased considerably, particularly regarding to cellulases which have been extensively studied for cellulose saccharification aiming the production of second generation ethanol. Endophytic fungi are among the potential producers of enzymes for plant material degradation. They are underexplored in this sense and, once they colonize the plant tissues. Their enzymes should present interesting features from the point of view of the attack to the cell wall components. In this context, the present study had as purpose the prospecting of cellulases, xylanases, pectinases and amylases among endophytic fungi, as well as studies of the enzymes production and characteristics. As an initial evaluation of enzymes production, 14 endophytic fungi were cultivated under solid state fermentation (SSF) in sugar cane bagasse and wheat bran (1:1 w/w), for 7 days, at 28 ºC. In this phase, 8 fungi stood out and were subsequently cultivated by SSF, in other mixtures of lignocellulosic substrates. The isolates Botryosphaeria sp. AM01 and Saccharicola sp. EJC04 were the most versatile in relation to enzymes production on different substrates and were selected to continue the work. From this stage on the productions of cellulases and xylanases were focused, aiming the application of these enzymes in future studies involving the saccharification of lignocellulosic materials. The selected substrate was composed by cotton bran and wheat bran and the influence of cultivation time, concentration of inoculum and substrate initial moisture were evaluated, by FES.For almost all the enzymes produced by the two fungi, the peak of production occurred in 192h or... (Complete abstract click electronic access below)
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Prospecção de enzimas de degradação de materials vegetal em fungos endofíticos /

Marques, Natália Paganini. January 2013 (has links)
Orientador: Daniela Alonso Bocchini Martins / Banca: Hamilton Cabral / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Resumo: Os fungos filamentosos são conhecidos por sua notável capacidade de produção de enzimas, particularmente as de degradação de material vegetal. O campo de aplicações industriais destas enzimas tem crescido consideravelmente, especialmente em relação às celulases, que tem sido extensivamente estudadas visando à sacarificação da celulose para a obtenção de etanol de segunda geração. Os fungos endofíticos estão entre os potenciais produtores de enzimas de degradação de material vegetal, são pouco estudados neste sentido e, uma vez que colonizam os tecidos vegetais, suas enzimas devem apresentar características interessantes do ponto de vista do ataque aos componentes da parede celular. Dentro deste contexto, o presente estudo teve por finalidade a prospecção de celulases, xilanases, pectinases e amilases entre fungos endofíticos, bem como estudos da produção e das características das enzimas. Inicialmente, 14 fungos endofíticos foram cultivados por fermentação estado sólido (FES) em bagaço de cana-de-açúcar e farelo de trigo (1:1 m/m), durante 7 dias, a 28 °C. Nesta etapa, 8 fungos se destacaram na produção de celulases e foram posteriormente cultivados, em FES, em outras misturas de substratos lignocelulósicos. Os isolados Botryosphaeria sp. AM01 e Saccharicola sp. EJC04 foram os mais versáteis em relação à produção das enzimas em diferentes meios, sendo selecionados para dar continuidade ao trabalho. A partir desta etapa foram focadas as produções de celulases e xilanases, visando à aplicação destas enzimas em trabalhos futuros envolvendo a sacarificação de materiais lignocelulósicos. O substrato selecionado foi composto por farelo de algodão e farelo de trigo e a influência do tempo de cultivo, da concentração de inóculo e da umidade inicial do substrato foram avaliadas, pelo cultivo em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Filamentous fungi are known for their remarkable ability for enzymes production, particularly those for plant material degradation. The field of industrial applications of these enzymes has increased considerably, particularly regarding to cellulases which have been extensively studied for cellulose saccharification aiming the production of second generation ethanol. Endophytic fungi are among the potential producers of enzymes for plant material degradation. They are underexplored in this sense and, once they colonize the plant tissues. Their enzymes should present interesting features from the point of view of the attack to the cell wall components. In this context, the present study had as purpose the prospecting of cellulases, xylanases, pectinases and amylases among endophytic fungi, as well as studies of the enzymes production and characteristics. As an initial evaluation of enzymes production, 14 endophytic fungi were cultivated under solid state fermentation (SSF) in sugar cane bagasse and wheat bran (1:1 w/w), for 7 days, at 28 ºC. In this phase, 8 fungi stood out and were subsequently cultivated by SSF, in other mixtures of lignocellulosic substrates. The isolates Botryosphaeria sp. AM01 and Saccharicola sp. EJC04 were the most versatile in relation to enzymes production on different substrates and were selected to continue the work. From this stage on the productions of cellulases and xylanases were focused, aiming the application of these enzymes in future studies involving the saccharification of lignocellulosic materials. The selected substrate was composed by cotton bran and wheat bran and the influence of cultivation time, concentration of inoculum and substrate initial moisture were evaluated, by FES.For almost all the enzymes produced by the two fungi, the peak of production occurred in 192h or... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Atividades enzimáticas presentes em intestino de Nasutitermes coniger: detecção, caracterização e modulação por lectinas termiticidas

Lima, Thâmarah de Albuquerque 16 April 2012 (has links)
Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-26T13:50:28Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Thâmarah_Completo.pdf: 3630312 bytes, checksum: 254c44fa854f1e011380abdfbfb972af (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T13:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Thâmarah_Completo.pdf: 3630312 bytes, checksum: 254c44fa854f1e011380abdfbfb972af (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-04-16 / CNPq, FACEPE, CAPES e UFPE / Nasutitermes corniger é uma espécie de cupim-praga que causa danos em diversas construções. Enzimas digestivas possuem várias aplicações biotecnológicas e podem constituir alvos para o controle de insetos. O presente trabalho descreve a detecção das atividades de celulases (endoglucanase, exoglucanase e β-glicosidase), hemicelulases (β- xilosidase, α-L-arabinofuranosidase e β-xilanase), α-amilase, e proteases (tripsina-símile, quimotripsina-símile, calicreína-símile e do tipo queratinase) em extratos de intestino de operários e soldados de N. corniger. As atividades enzimáticas foram avaliadas após incubação dos extratos de intestino em diferentes temperaturas e valores de pH e com lectinas termiticidas de Myracrodruon urundeuva. A adaptabilidade desta espécie de cupins para digerir materiais lignocelulósicos foi evidenciada pelos altos valores de atividade de endoglucanase e β-xilanase. Zimografia para proteases do extrato de operários revelou que polipeptídeos de 22, 30 e 43 kDa hidrolisaram caseína. Efeito de inibidores na atividade enzimática mostrou que serino proteases foram as principais proteases presentes no intestino de operários e soldados. As atividades tripsina-símile e calicreína-símile foram detectadas em maiores níveis. Os resultados dos ensaios de estabilidade frente ao aquecimento e pH revelam a presença de aparatos digestivos distintos entre operários e soldados. As lectinas de M. urundeuva afetaram diferentemente as atividades enzimáticas e sua atividade termiticida pode estar relacionada com a modulação de enzimas digestivas. O presente trabalho é uma etapa inicial no estudo do aparato digestivo de N. corniger e estimula a purificação e avaliação do potencial biotecnológico dessas enzimas.
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Determinação e caracterização de amido de cana-de-açucar e adequação de metodologia para determinação de alfa-amilase em açucar bruto / Determination and characterization on sugarcane starch and adequacy of the methodology for the residual a-amylase determination in raw sugar

Figueira, Joelise de Alencar 12 August 2018 (has links)
Orientador: Helia Harumi Sato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-12T17:11:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueira_JoelisedeAlencar_M.pdf: 2054069 bytes, checksum: 8eeb2cd2b576292162f4f29767ec1896 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O presente trabalho visou à determinação da quantidade de amido em caldo de algumas variedades de cana-de-açúcar (RB86-7515, SO83-2847, RB72-454, SP80-3280 e RB85-5536) durante uma safra (período de Abril a Novembro de 2007), estudo de algumas características do amido de cana-de-açúcar e a adequação de metodologia para a determinação de atividade de a-amilase residual em açúcar bruto. A variedade de cana-de-açúcar RB86-7515 apresentou maior teor de amido durante toda safra entre as variedades analisadas. Não foi observado correlação entre o índice pluviométrico e as temperaturas da região e o teor de amido encontrado nas variedades de cana-de-açúcar. Na análise dos grânulos de amido por microscopia eletrônica de varredura (MEV) o amido de cana-de-açúcar apresentou forma esférica e diâmetro na faixa de 1-3 mm, tamanho muito inferior quando comparado ao amido de batata, mandioca e milho. Os amidos de cana-de-açúcar, milho, batata e amido solúvel complexados com iodo apresentaram maior absorção na faixa de 540 a 620 nm. O amido de cana-de-açúcar in natura mostrou maior susceptibilidade à enzima glicoamilase em relação aos amidos de milho ceroso, mandioca e batata. O amido de cana-de-açúcar mostrou susceptibilidade à enzima amilolítica desramificante pululanase que hidrolisa as ligações a-1,6 glicosídicas de modo similar ao amido de arroz ceroso, que apresenta alto teor de amilopectina. O amido de cana-de-açúcar mostrou susceptibilidade às a-amilases de Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis e Aspergillus oryzae de modo similar aos outros amidos testados produzindo glicose; maltose; maltotriose; maltotetraose, maltopentaose e a-dextrinas limite. Para a adequação da metodologia para a determinação de a-amilase em açúcar bruto foram testados os métodos de Bernfeld baseado na determinação de açúcares redutores, método Iodométrico baseado na descoloração do complexo amido-iodo, método de Phadebas baseado na hidrólise do amido complexado com corante Cibacron Blue F3GA e o método usando-se o substrato BPNPG7 (benzylidene blocked r-nitrophenyl maltoheptaoside, Megazyme, Ireland) baseado na hidrólise do substrato e liberação do r-nitrofenol. O método de Bernfeld se mostrou mais adequado para a quantificação de a-amilase residual em açúcar bruto / Abstract: The aim of this work was to quantitatively determine sugarcane starch in five varieties of sugarcane (RB86-7515, SP83-2847, RB72-454, SP80-3280 and RB85-5536) during one harvest (May to November 2007), and study some of the characteristics of sugarcane starch. The variety RB86-7515 showed a higher starch content than the other varieties analyzed throughout the entire harvest. No correlation between the temperature, pluviometric index and starch level was found in any of the samples of sugarcane juice. The sugarcane starch granules examined under the scanning electron miscroscope showed a spherical shape with a diameter between 1-3 mm, smaller than the starch granules of maize and cassava. The sugarcane, corn, potato and soluble starches formed complexes with iodine, which showed greater absorption in the range from 540 to 620 nm. The crude sugarcane starch showed greater susceptibility to the enzyme glucoamylase than the waxy corn, cassava and potato starches. The sugarcane starch showed a susceptibility to debranching by the amylolytic enzyme pululanase, which hydrolyzed the a-1,6 glucosidic linkages in a way similar to waxy corn starch, which contains a high amount of amylopectin. The sugarcane starch showed susceptibility to the a-amylases from Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis and Aspergillus oryzae, similar to the other starches tested, producing glucose, maltose, maltotriose, maltotetraose, maltopentaose and a-limit dextrins. This work aimed to adequate the methodologies used to determine residual a-amylase in raw sugar. The Bernfeld method is based on the determination of the reducing sugars by an iodometric method based on discoloration of the starch-iodine complex. The Phadebas method is based on the hydrolysis of the starch polymer dyed with Cibachron Blue F3GA, and the method using BPNPG7 r ¿ nitrophenyl maltoheptaoside (benzylidene blocked maltoheptaoside, Megazyme, Ireland) is based on the hydrolysis of the substrate, releasing p-nitrophenol. These three methods were tested for the determination of residual a-amylase in raw sugar, and the Bernfeld method was shown to be more adequate / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos
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Caracterização e síntese dos inibidores de α-amilase do feijão (Phaseolus vulgaris) / Characterization and synthesis of alpha amylase inhibitor from beans (Phaseolus vulgaris)

Iguti, Antonia Miwa 30 April 1993 (has links)
Inibidores de alfa amilase de feijão (Phaseolus vulgaris) foram caracterizados. O inibidor da variedade Jalo apresentou peso molecular de 50kDa (por filtração em gel), ponto isoelétrico de 4,75 e 9,6% de carboidratos. O inibidor da variedade Argentino apresentou peso molecular de 48kDa, ponto isoelétrico de 4,90 e 7,6% de carboidratos. Ambos inibidores apresentaram pH ótimo de interação com alfa amilase pancreática de porco de 5,0 e, a pH 6,9, a complexação com a mesma enzima se deu na proporção de 1:1. Esses resultados, mais a composição de aminoácidos, indicaram que as características desses inibidores são semelhantes às de outros já purificados de diferentes variedades de feijão. As principais diferenças entre o IA do Jalo e do Argentino, foram observadas através de termogramas, do teor de carboidratos e dos ensaios imunológicos. Além disso, são sintetizados entre 20 e 30 dias após a floração, sendo que o processo ocorre simultaneamente ao da síntese das proteínas de reserva do grão. Inibidores purificados das variedades Jalo, Argentino e Rico 23, em diferentes fases do desenvolvimento, indicaram ausência de grandes alterações estruturais durante esse processo. / α-amylase inhibitors of bean (Phaseolus vulgaris) were characterized. The amylase inhibitor from Jalo had molecular weight of 50 kDa (by gel filtration), an isoeletric point of 4.75 and a carbohydrate content of 9.6%. Argentino presented molecular weight of 48 kDa, an isoeletric point of 4.90 and a carbohydrate content of 7.6%. The optimum pH for inhibition of porcine pancreatic α-amylase for both inhibitors was about 5.0 and they formed 1:1 stoichiometric complex. These results and the amino acid composition indicated that these inhibitors have characteristics similar to others already purified from beans. They were synthesized between 20 and 30 days after anthesis and this process occurred simultaneously to the storage proteins synthesis. Purified inhibitors from seeds in different phases of development indicated lack of great structural changes during this process.
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Influência da aplicação de ácido indol-3-acético na expressão dos receptores de etileno e na atividade de duas enzimas relacionadas ao metabolismo de amido em bananas / Influence of the indole-3-acetic acid levels on expression of ethylene receptors and on activity of starch -metabolizing enzymes in bananas

Foresto, Mariana Faulin 28 June 2012 (has links)
A literatura têm indicado que a via metabólica de degradação de amido em bananas é regulada tanto por etileno quanto por auxinas, dentre outros fatores. Visando melhor entender o mecanismo pelo qual isso ocorre, acompanhou-se o amadurecimento de bananas infiltradas com ácido indol-3-acético (AIA) utilizando um modelo de infiltração do hormônio em fatias do fruto. Foram avaliados os níveis de AIA endógeno, a evolução na degradação de amido e síntese de açúcares solúveis, a ocorrência de alterações na transcrição e atividade das enzimas β-amilase e DPE2 e a possível correlação destes eventos com alterações na via de transdução de sinal de etileno - hormônio reconhecidamente responsável por desencadear a ativação do metabolismo degradatório de amido durante o amadurecimento. Nos frutos tratados com AIA, os resultados apontaram atraso na degradação de amido e no acúmulo de açúcares solúveis; as variações nos níveis de atividade e de transcritos de β-amilase nos grupos controle e tratado foram semelhantes; contudo, no grupo tratado a evolução destes processos ocorreu com atraso em relação ao controle. Os níveis de transcritos de DPE2, mais expressivos no início do amadurecimento em ambos os grupos, foram sustentados por mais tempo nos frutos tratados; a atividade, no entanto, parece ter sido sensivelmente inibida pelo tratamento com AIA. Os perfis de transcritos dos receptores de etileno ERS3 e ETR1 apontam que os mesmos foram fortemente afetados pelo tratamento. Assim, os resultados sugerem que modificações no padrão de sinalização do etileno podem ser parte do mecanismo pelo qual AIA afeta o perfil de transcritos e atividade de β-amilase e DPE2, provocando, em consequência, atraso no processo de mobilização da reserva de amido na banana e também na síntese de açúcares. / The literature indicates that the starch degradation in bananas is probably regulated by ethylene and auxins, among other factors. To understand the mechanisms involved, we followed the ripening of banana slices infiltrated with indole-3-acetic acid (AIA). We measured the evolution of endogenous AIA levels and starch degradation, as well as shifts in transcription and activity of β-amilase and DPE2 and their possible correlation with alterations in the ethylene signal transduction path. In AIA-treated slices, results indicated delay in starch degradation and acummulation of soluble sugars; the changes in β-amilase transcripts and activity levels in control and treated groups were similar, although they were delayed for the AIA-treated group, when compared to control. DPE2 transcript levels, stronger in the earlier stages of rippening in both groups, were sustained longer in AIA-treated bananas; on the other hand, its activity seems to has been severely inhibited by the AIA treatment. The transcript profiles of ERS3 and ETR1 ethylene receptors indicate that they were both strongly affected by the treatment. In this way, the results sugest that modifications in the ethylene signaling pathway may be part of the mechanism by which high level of AIA affects the profile of transcripts and activities of β-amilase and DPE2, inducing the delay in the mobilization of the starch reserve of the bananas, as well as the sugar synthesis.
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Influência da aplicação de ácido indol-3-acético na expressão dos receptores de etileno e na atividade de duas enzimas relacionadas ao metabolismo de amido em bananas / Influence of the indole-3-acetic acid levels on expression of ethylene receptors and on activity of starch -metabolizing enzymes in bananas

Mariana Faulin Foresto 28 June 2012 (has links)
A literatura têm indicado que a via metabólica de degradação de amido em bananas é regulada tanto por etileno quanto por auxinas, dentre outros fatores. Visando melhor entender o mecanismo pelo qual isso ocorre, acompanhou-se o amadurecimento de bananas infiltradas com ácido indol-3-acético (AIA) utilizando um modelo de infiltração do hormônio em fatias do fruto. Foram avaliados os níveis de AIA endógeno, a evolução na degradação de amido e síntese de açúcares solúveis, a ocorrência de alterações na transcrição e atividade das enzimas β-amilase e DPE2 e a possível correlação destes eventos com alterações na via de transdução de sinal de etileno - hormônio reconhecidamente responsável por desencadear a ativação do metabolismo degradatório de amido durante o amadurecimento. Nos frutos tratados com AIA, os resultados apontaram atraso na degradação de amido e no acúmulo de açúcares solúveis; as variações nos níveis de atividade e de transcritos de β-amilase nos grupos controle e tratado foram semelhantes; contudo, no grupo tratado a evolução destes processos ocorreu com atraso em relação ao controle. Os níveis de transcritos de DPE2, mais expressivos no início do amadurecimento em ambos os grupos, foram sustentados por mais tempo nos frutos tratados; a atividade, no entanto, parece ter sido sensivelmente inibida pelo tratamento com AIA. Os perfis de transcritos dos receptores de etileno ERS3 e ETR1 apontam que os mesmos foram fortemente afetados pelo tratamento. Assim, os resultados sugerem que modificações no padrão de sinalização do etileno podem ser parte do mecanismo pelo qual AIA afeta o perfil de transcritos e atividade de β-amilase e DPE2, provocando, em consequência, atraso no processo de mobilização da reserva de amido na banana e também na síntese de açúcares. / The literature indicates that the starch degradation in bananas is probably regulated by ethylene and auxins, among other factors. To understand the mechanisms involved, we followed the ripening of banana slices infiltrated with indole-3-acetic acid (AIA). We measured the evolution of endogenous AIA levels and starch degradation, as well as shifts in transcription and activity of β-amilase and DPE2 and their possible correlation with alterations in the ethylene signal transduction path. In AIA-treated slices, results indicated delay in starch degradation and acummulation of soluble sugars; the changes in β-amilase transcripts and activity levels in control and treated groups were similar, although they were delayed for the AIA-treated group, when compared to control. DPE2 transcript levels, stronger in the earlier stages of rippening in both groups, were sustained longer in AIA-treated bananas; on the other hand, its activity seems to has been severely inhibited by the AIA treatment. The transcript profiles of ERS3 and ETR1 ethylene receptors indicate that they were both strongly affected by the treatment. In this way, the results sugest that modifications in the ethylene signaling pathway may be part of the mechanism by which high level of AIA affects the profile of transcripts and activities of β-amilase and DPE2, inducing the delay in the mobilization of the starch reserve of the bananas, as well as the sugar synthesis.
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Caracterização e síntese dos inibidores de α-amilase do feijão (Phaseolus vulgaris) / Characterization and synthesis of alpha amylase inhibitor from beans (Phaseolus vulgaris)

Antonia Miwa Iguti 30 April 1993 (has links)
Inibidores de alfa amilase de feijão (Phaseolus vulgaris) foram caracterizados. O inibidor da variedade Jalo apresentou peso molecular de 50kDa (por filtração em gel), ponto isoelétrico de 4,75 e 9,6% de carboidratos. O inibidor da variedade Argentino apresentou peso molecular de 48kDa, ponto isoelétrico de 4,90 e 7,6% de carboidratos. Ambos inibidores apresentaram pH ótimo de interação com alfa amilase pancreática de porco de 5,0 e, a pH 6,9, a complexação com a mesma enzima se deu na proporção de 1:1. Esses resultados, mais a composição de aminoácidos, indicaram que as características desses inibidores são semelhantes às de outros já purificados de diferentes variedades de feijão. As principais diferenças entre o IA do Jalo e do Argentino, foram observadas através de termogramas, do teor de carboidratos e dos ensaios imunológicos. Além disso, são sintetizados entre 20 e 30 dias após a floração, sendo que o processo ocorre simultaneamente ao da síntese das proteínas de reserva do grão. Inibidores purificados das variedades Jalo, Argentino e Rico 23, em diferentes fases do desenvolvimento, indicaram ausência de grandes alterações estruturais durante esse processo. / α-amylase inhibitors of bean (Phaseolus vulgaris) were characterized. The amylase inhibitor from Jalo had molecular weight of 50 kDa (by gel filtration), an isoeletric point of 4.75 and a carbohydrate content of 9.6%. Argentino presented molecular weight of 48 kDa, an isoeletric point of 4.90 and a carbohydrate content of 7.6%. The optimum pH for inhibition of porcine pancreatic α-amylase for both inhibitors was about 5.0 and they formed 1:1 stoichiometric complex. These results and the amino acid composition indicated that these inhibitors have characteristics similar to others already purified from beans. They were synthesized between 20 and 30 days after anthesis and this process occurred simultaneously to the storage proteins synthesis. Purified inhibitors from seeds in different phases of development indicated lack of great structural changes during this process.
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Análise da ingestão alimentar e amilase salivar de adolescentes obesos submetidos a um programa de tratamento /

Brunholi, Claudia de Carvalho. January 2017 (has links)
Orientador: Ismael Forte Freitas Júnior / Banca: Marjori Leiva Camparoto / Banca: Giovana Rampazzo Teixeira / Resumo: A obesidade é um problema de saúde pública mundial, caracterizada como uma doença crônica inflamatória e além de estar associada à diversas complicações, tem acometido cada vez mais crianças e adolescentes. A obesidade pode ser causada por fatores genéticos e comportamentais e, dentre os comportamentais, a ingestão alimentar inadequada e a pratica insuficiente de exercício físico são os mais comuns. Devido ao intenso desenvolvimento que ocorre durante a adolescência, os hábitos cotidianos podem ser influenciados, em especial, os hábitos alimentares. A amilase salivar é uma enzima que digere os carboidratos (CHO) em partículas menores ainda na cavidade oral e tem sido considerada um potente marcador biológico envolvido na ingestão alimentar devido sua ação sobre a percepção do gosto dos alimentos, as preferências alimentares e a resposta glicêmica e insulínica pós-prandial. Para tratar a obesidade, a orientação nutricional e a prática de exercício físico sistematizada é cada vez mais indicada e, dentre as modalidades de exercício, o intervalado de alta intensidade (high intensity interval training - HIIT) tem sido eficaz para reduzir gordura corporal. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi analisar e correlacionar a ingestão alimentar, a concentração de amilase salivar e gordura corporal de adolescentes obesos submetidos a um programa de tratamento para obesidade. Adolescentes obesos (IMC= 33,82 ±6,23 Kg/m2; n= 21, 13,83 ±1,85 anos) de ambos os gêneros realizaram avali... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Obesity is a worldwide public health problem, characterized as a chronic inflammatory disease and in addition to being associated with several complications, has been affecting more and more children and adolescents. Obesity can be caused by genetic and behavioral factors and, among the behavioral ones, inadequate food intake and insufficient physical exercise are the most common. Due to the intense development that occurs during adolescence, daily habits can be influenced, especially, eating habits. Salivary amylase is an enzyme that digests carbohydrates (CHO) into smaller particles still in the oral cavity and has been considered a potent enzyme involved in food intake due to its action on the perception of food taste, food preferences and glycemic response, and Postprandial insulin. To address obesity, nutritional counseling and the practice of systematic exercise are increasingly indicated and, among the exercise modalities, high intensity interval training (HIIT) has been effective in reducing body fat. Thus, the objective of the present study was to analyze and correlate food intake, salivary amylase concentration and body fat of obese adolescents submitted to a treatment program. Obese adolescents (BMI= 33,82 ± 6,23 kg/m2, n= 21, 13,83± 1,85 years) of both genders performed body composition and sexual maturation, biochemical saliva and blood tests, questionnaires food intake and parental education level and maximum pre and post-program effort test. The treatment program consisted of 20 weeks of nutritional counseling and 16 weeks of HIIT... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Utilização de óleos funcionais associado à enzima amilolítica na alimentação de vacas em lactação / Use of functional oils associated with the amylolytic enzyme in feeding lactating cows

Silva, Guilherme Gomes da 21 July 2017 (has links)
Foram realizados dois experimentos para comparar os efeitos da Monensina (MON, DSM Nutritional Products Ltd.), uma mistura de óleos funcionais (OF; Crina® Ruminants, DSM Nutritional Products Ltd.) isoladamente ou associado com enzima amilolítica (OFA; Crina- Ronozyme Rumistar™) em dietas de vacas em lactação. No experimento 1, oito vacas holandesas multíparas (576 ± 100 Kg peso corporal, e 146,5 ± 35,1 dias em lactação e 35.1 ± 4,0 kg/d de produção de leite no início do experimento) canuladas no rúmen foram distribuídas em quadrado latino replicado com períodos experimentais de 21 dias para determinar os efeitos da MON, OF e OFA sobre a digestibilidade dos nutrientes, fermentação ruminal, síntese de proteína microbiana, metabolitos sanguíneos, produção e composição do leite, utilização de energia e nitrogênio de vacas em lactação. Os tratamentos nos experimentos foram: controle (CON), sem aditivo; monensina (MON), adição de 13mg/Kg MS de monensina; óleos funcionais (OF), fornecimento de 44 mg Crina/Kg MS e óleos funcionais associado a enzima amilolítica (OFA), adição de 44 mg Crina/Kg e 330 KNU de enzima com atividade amilolítica por Kg de MS. Os dados foram analisados através de contrastes ortogonais para avaliar o efeito de aditivos (C1), comparar ionóforo com óleos funcionais (C2) e óleos funcionais isolados ou combinados com enzima amilolítica (C3). Embora não tenha sido encontrado efeito sobre a ingestão de nutrientes, os aditivos tenderam a aumentar (P=0,058) a digestibilidade da proteína bruta. No entanto, MON tendeu a aumentar (P=0,085) a digestibilidade da fibra em detergente neutro em comparação a OF e OFA. Os aditivos diminuíram (P=0,026) a concentração de nitrogênio amoniacal (NH3-N) no rúmen, notadamente a MON e OFA. Os tratamentos contendo OF apresentaram menor pH (P=0,017) e maior NH3-N no rúmen (P=0,004). Não foram encontradas diferenças na produção e composição do leite, mas o fornecimento de aditivos melhorou a eficiência produtiva (P= 0,004). No experimento 2, trinta vacas multíparas da raça holandesa (574±68 Kg peso corporal, 30.9±4,1 Kg/dia de produção de leite e 152,2 ± 54,1 dias em lactação no início do experimento) foram distribuídas em um delineamento em blocos ao acaso em três tratamentos: MON, OF e OFA, previamente descrito no experimento 1. Os tratamentos foram proporcionados ao longo de 9 semanas. Contrates ortogonais foram utilizados para comparar MON com óleos funcionais isolados ou com amilase. Não foram observadas diferenças na ingestão de nutrientes e digestibilidade quando comparado MON com os tratamentos com OF. No entanto, tratamentos contendo óleos funcionais tendem a aumentar (P=0,062) a ingestão de MS das vacas. Não foi observado efeito de interação tempo tratamento. Os tratamentos contendo óleos funcionais apresentaram menor teor de lactose e proteína no leite (P≤0.039) em comparação a MON. Concluindo, todos os aditivos tiveram pequeno efeito sobre a digestibilidade e ingestão de nutrientes, sem alterar a produção de leite das vacas. Contudo, os aditivos diminuíram a concentração de amônia ruminal, em especial a MON. Não foi encontrado efeito sinérgico quando se combinou óleos funcionais com enzima amilolítica. / Two experiments were carried out to compare the effects of monensin (MON, DSM Nutritional Products Ltd.,), a blend of functional oils (FO; Crina® Ruminants, DSM Nutritional Products Ltd.) alone or associated with amylolytic enzyme (FOA; Crina- Ronozyme Rumistar™) in a dairy cow diet. In experiment 1, eight multiparous Holstein cows (576±100 kg LW, 146±35 DIM, and 35.1±4.0 kg/d milk yield at the start of experiment, cannulated in the rumen were assigned into a replicated Latin square experiment design with 21-d periods in order to determine the effects of MON, FO or FOA on nutrient digestibility, ruminal fermentation, microbial protein synthesis, blood metabolites, milk yield and composition, energy and nitrogen utilization of dairy cows. Treatments in experiments were: control (CON), with no additive; MON, addition of 13 mg monensin/kg diet DM; FO, provision of 44 mg Crina/kg diet DM and FOA, addition of 44 mg Crina and 330 KNU of enzyme with amylolytic activity per kg diet DM. Data were analyzed through orthogonal contrasts to evaluate the effect of additives (C1), compare ionophore with functional oils (C2), and contrast functional oils alone or with amylolytic enzyme (C3). Although no effects were found on nutrient intake, additives tended to increase (P=0.058) crude protein digestibility. Yet, MON tended to increase (P=0.085) neutral detergent fiber digestibility in comparison with FO and FOA. Additives decreased (P=0.026) ammonia nitrogen concentration (NH3-N) in rumen, notably due to MON and FOA. Treatments containing FO showed lower (P=0.017) pH and higher (P=0.004) NH3-N in rumen. No differences were found on milk yield and composition, but the provision of additives improved (P=0.04) productive efficiency (kg milk ÷ kg DM intake) of cows. In experiment 2, thirty multiparous Holstein cows (574±68 kg LW, 152,2±54,1 DIM and 30.9±4.1 kg/d milk yield at the start of experiment) were assigned to a randomized block design experiment and distributed to three treatments: MON, FO or FOA, as previously described in Experiment 1. Treatments were provided throughout 9 weeks. Orthogonal contrasts were also used to compare MON with functional oils (C1) and essential oils alone or with amylase(C2). No differences were detected on nutrient intake and digestibility when comparing MON with FO-treatments. However, treatments containing functional oils tended to increase (P=0,062) DM intake of cows. No treatment by time interaction effect was observed. Treatments containing functional oils had lower (P≤0.039) lactose and protein content in milk than MON. In conclusion, all additives had small effect on nutrient intake and digestibility, without altering milk production of cows. Nonetheless, feed additives decreased ammonia concentration in rumen notably because of MON. No synergetic effect was found when combining FO with amylolytic enzyme.

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