A anóxia neonatal, considerada problema clínico mundial, é importante causa de lesão encefálica em neonatos que pode apresentar consequências graves e permanentes, como déficits cognitivos e comportamentais. O objetivo deste estudo foi analisar longitudinalmente possíveis alterações na morte, proliferação e diferenciação neuronais no hipocampo de ratos submetidos à anóxia neonatal. Para tanto, utilizamos modelo adaptado e validado em nosso laboratório. Os resultados mostraram que a anóxia neonatal causa morte neural em CA1 e CA2-3, detectadas pela maior quantidade de células TUNEL+ em CA1 e CA2-3 e FJB+ em CA2-3, além de diferentes tipos de morte neuronal em CA1 e GD, 24 horas após a anóxia,observadas por microscopia eletrônica. Houve aumento do volume de CA1 em P14 no grupo anóxia, porém o padrão de proliferação na zona subgranular não foi alterado. Enfim, a anóxia neonatal promoveu diminuição da neurogênese em animais adultos, o que poderia estar associado aos déficits de memória espacial e aprendizagem descritos em literatura para modelos similares. / Neonatal anoxia, considered a worldwide clinical problem, is a major cause of brain injury in neonates and may present serious and permanent consequences such as cognitive and behavioral deficits. The aim of this study was to analyze possible changes longitudinally in neural death, proliferation and neuronal differentiation in the hippocampus of rats submitted to neonatal anoxia. We used an adapted model validated in our laboratory. The results showed that neonatal anoxia cause neural death in CA1 and CA2-3 detected by the TUNEL+ cells in CA1 and CA2-3 and FJB+ in CA2-3, and different types of neuronal death in CA1 and GD 24 hours of anoxia, observed by electron microscopy. There was an increase in the volume of CA1 in the P14 anoxia group but the pattern of proliferation in the subgranular zone was not changed. Anyway, neonatal anoxia caused decrease in neurogenesis in adult animals, which could be associated with deficits in spatial memory and learning described in the literature in similar models.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2018-02-26T14:14:15Z No. of bitstreams: 2 Pâmela_Buratti2017.pdf: 1971935 bytes, checksum: 016f66981771eed7ce5ec50ed236c207 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-26T14:14:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Pâmela_Buratti2017.pdf: 1971935 bytes, checksum: 016f66981771eed7ce5ec50ed236c207 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-05-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cerebral palsy (CP) corresponds to a motor disorder, caused by non-progressive injury in the immature brain, resulting in changes in muscle tone, movement and postureThis study aimed to investigate the morphofunctional characteristics of the plantar muscle in an animal model of CP. To obtain the litters were used for paired adult Wistar rats (11 females and 06 males). The pregnant females were separated in: rats injected intraperitoneally with vehicle (100 μL of sterile saline) and rats injected intraperitoneally with lipopolysaccharide (LPS; 200 μg / kg LPS in 100 μL sterile saline). The injections were performed every 12 hours, from the 17th gestational day until the end of gestation (21st gestational Day). The male offspring were separated in: Control group (CG, n = 8) - pups of rats injected with saline solution during pregnancy, and CP group (CPG, n = 8) - pups of rats injected with LPS during pregnancy, submitted to perinatal anoxia and sensorimotor restriction. For perinatal anoxia, the pups were placed in a closed chamber, partially immersed in water at 37 °C ± 1, with a flow of 9 L/min of nitrogen (100%) for 20 minutes on the day of birth (postnatal day 0, P0). From the 1st to the 30th postnatal day (P1 to P30), the CPG animals were submitted to sensorimotor restriction for 16 hours/day. At 29 and 45 days of age, the animals were evaluated in the open-field test, being collected time of displacement, crossing, rearing and grooming frequency. At the 48th postnatal day the animals were weighed and the collection, measurement of weight and muscle length were performed. The muscle fibers were evaluated in histological sections submitted to Hematoxylin-Eosin (HE), NADH-TR reaction (Nicotinamide Adenine Dinucleotide - Tetrazolium Redutase) and transmission electron microscopy; intramuscular collagen was studied with Masson's trichrome staining; and the neuromuscular junctions (NMJs) ascertained by the Nonspecific Esterase reaction. The data were statistically evaluated using the parametric Student t-test and the non-parametric Mann-Whitney test, according to the Kolmogorov-Smirnov normality test.It was verified that when compared to CG the CPG presented: reduction in time of displacement, number of crosses and rearing at 29 days of age; in the time of displacement and rearing at 45 days of age; of body parameters (body weight, weight and length soleus muscle); of the nuclei/fiber and capillary/fiber relations; increased percentage of collagen; reduction of cross-sectional area of muscle fibers type I; increased counts of fibers type I; in the number of myofibrillar disorganization, of the Z line and dissolution of the Z line; and reduction in area, larger and smaller diameters of NMJs. It is concluded that the PC model used altered the morphological characteristics of the skeletal striated muscle, causing deficits in the locomotor activity of the animals, as evidenced by the results of the evaluation in the open field. / A paralisia cerebral (PC) corresponde a uma desordem motora, ocasionada por lesão não progressiva no cérebro imaturo, por conseguinte, acarreta alterações no tônus muscular, movimento e postura. Este estudo objetivou investigar as características morfofuncionais do músculo plantar em um modelo animal de PC. Na obtenção das ninhadas, ratos Wistar adultos foram utilizados para o pareamento (11 fêmeas e 06 machos) e as fêmeas prenhas foram agrupadas em: ratas injetadas intraperitonealmente com veículo (100 μL de solução salina estéril); e ratas injetadas intraperitonealmente com lipopolissacarídeo (LPS; 200 μg/kg de LPS em 100 μL de solução salina estéril), a cada 12 horas, a partir do 17º dia gestacional até o final da gestação (21º dia gestacional). Os filhotes machos foram separados em: Grupo controle (GC, n= 8), filhotes de mães injetadas com solução salina durante a gestação; e Grupo PC (GPC, n = 8), filhotes de mães injetadas com LPS na gestação, submetidos à anóxia perinatal e restrição sensório-motora. Para a anóxia perinatal, os filhotes foram colocados em uma câmara fechada, parcialmente imersa em água a 37°C±1, com fluxo de 9 L/min de nitrogênio (100%) durante 20 minutos no dia do nascimento (dia pós-natal 0, P0). Do 1º ao 30º dia pós-natal (P1 até P30), os animais do GPC foram submetidos à restrição sensório-motora durante 16 horas/dia. E, aos 29 e 45 dias de vida, os animais foram avaliados no teste de campo aberto, coletados os dados de tempo de deslocamento, cruzamento, frequências de erguidas (rearing) e de autolimpeza (grooming). No 48º dia pós-natal, os animais foram pesados e foi realizada a coleta, além das mensurações do peso e do comprimento muscular. As fibras musculares foram avaliadas em secções histológicas submetidas às técnicas de Hematoxilina-Eosina (HE), reação da NADH-TR (Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo – Tetrazolium Redutase) e microscopia eletrônica de transmissão. O colágeno intramuscular foi estudado com a coloração de Tricrômico de Masson e as junções neuromusculares (JNMs) foram averiguadas pela reação Esterase Inespecífica. Os dados foram avaliados estatisticamente com o teste paramétrico t de Student e teste não paramétrico Mann-Whitney, de acordo com o teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov. Verificou-se que, quando comparado ao GC, o GPC apresentou: redução significativa no tempo de deslocamento, no número de cruzamentos e no rearing aos 29 dias de idade; no tempo de deslocamento e no rearing aos 45 dias de idade; nos parâmetros corporais (peso corporal, peso e comprimento do músculo sóleo); nas relações núcleo/fibra e capilar/fibra; aumento na porcentagem de colágeno; redução da área de secção transversal das fibras musculares tipo I; aumento na contagem de fibras do tipo I; no número de desorganização miofibrilar, da linha Z e dissolução da linha Z; e redução na área, diâmetros maior e menor das JNMs. Conclui-se, portanto, que o modelo de PC utilizado alterou as características morfológicas do músculo estriado esquelético e causou déficits na atividade locomotora dos animas, comprovado pelos resultados da avaliação em campo aberto.

A hipóxia é capaz de alterar muitos mecanismos bioquímicos nas células endoteliais. Dentre eles, a indução da expressão endotelial de moléculas de adesão, como o fator de von Willebrand (FVW) que, em resposta ao estímulo, é secretado em sua forma mais ativa na interação com as plaquetas, o que pode resultar em trombose. Nas condições fisiológicas, o padrão multimérico do FVW no plasma é essencialmente determinado pela ADAMTS-13 (uma desintegrina e metaloproteinase com domínios trombospondina). Este estudo teve como objetivo verificar se a atividade da enzima ADAMTS-13, assim como as características do FVW relacionáveis a ela, poderiam estar alteradas na presença de hipoxemia comparativamente à condição de oxigenação normal. Este estudo longitudinal envolveu 56 pacientes portadores de cardiopatias congênitas cianogênicas, em idades entre um e sete anos, candidatos ao tratamento cirúrgico. Os pacientes foram avaliados no pré-cirúrgico (basal), no pós-operatório imediato (pós 48 horas) e após 30 dias de cirurgia, e foram divididos em dois grupos (A e B) baseado na saturação periférica de oxigênio (SpO2) no momento pós 30 dias. Foram determinados o antígeno do FVW e a análise das suas subunidades, a atividade da ADAMTS-13 e a presença de inibidores da ADAMTS-13. Os pacientes de ambos os grupos apresentaram aumento significante da SpO2, da concentração antigênica do FVW e da atividade da ADAMTS-13 nos momentos pós 48 horas e pós 30 dias em comparação com o momento pré (basal). As densidades normalizadas da subunidade principal do FVW (225 kDa) e do fragmento de 176 kDa apresentaram tendência ao aumento nos momentos pós 48 horas e pós 30 dias nos dois grupos. A razão entre a atividade da ADAMTS-13 e o FVW estava menor do que 1 no momento pós 48 horas, indicando consumo da enzima; entretanto, no momento pós 30 dias a razão fica 1:1, e o FVW se aproxima dos valores de referência. Verificamos ainda que 29% destes pacientes apresentaram inibidores contra a ADAMTS-13 no momento pré-operatório. Ainda explorando as variáveis SpO2, FVW:Ag, atividade da ADAMTS-13 e a composição das subunidades do FVW, foi feito um estudo de correlação linear entre estas variáveis. Observamos uma baixa correlação entre a enzima ADAMTS-13 e o FVW:Ag, e da enzima com os fragmentos do FVW de 176 e 140 kDa, principalmente no grupo B. No grupo A, esta correlação no momento pós 48 horas mostrou tendência a ser negativa. A maioria dos pacientes apresentou melhoras na saturação periférica de oxigênio. O aumento das variáveis estudadas no pós-operatório imediato pode ter ocorrido em função da cirurgia, que provavelmente ocasionou um quadro de lesão endotelial com inflamação, indicando que pode existir um equilíbrio entre o FVW e a ADAMTS-13 em níveis fisiológicos. Entretanto, este equilíbrio pode ser quebrado quando ocorre aumento do FVW, provavelmente por consumo da enzima. Parece-nos, portanto, que a ADAMTS-13 pode funcionar como um mecanismo de proteção a estes pacientes com tendência à trombose / Hypoxia has been shown to alter several biochemical mechanisms in endothelial cells. In addition, hypoxia induces the endothelial expression of adhesion molecules, including von Willebrand factor (VWF). Increased release of high-molecular-weight VWF multimers is associated with higher risk for thrombotic events. In physiological conditions, the multimeric pattern of plasma VWF is essentially determined by the action of ADAMTS-13 (a desintegrin and metalloprotease with thrombospondin type 1 domains). The aim of this study was to investigate if ADAMTS-13 activity and VWF subunit fragments were altered by hypoxia in cyanotic congenital heart disease. Fiftysix patients (age 1 to 7 years) with cyanotic congenital heart disease admitted to the Heart Institute for heart surgery were included in this longitudinal study. Patients were evaluated before (baseline) corrective surgery, postoperative 48 hours and postoperative 30 days. Patients were classified in two groups (A and B) based on the peripheral oxygen saturation after 30 days surgery. VWF antigenic concentration, VWF subunit composition, ADAMTS-13 activity and presence of ADAMTS-13 inhibitors were determined. Peripheral oxygen saturation, VWF:Ag and ADAMTS-13 activity were all increased significantly in both groups, in postoperative 48 hours and postoperative 30 days in comparison with baseline moment. Normalized density of VWF main subunit (225 kDa) and proteolytic fragment with 176 kDa tended to increase in postoperative 48 hours and postoperative 30 days in both groups. The rate between ADAMTS-13 activity and VWF:Ag was lower than 1 in postoperative 48 hours, an indicating of enzyme consumption; however, in the postoperative 30 days the rate was 1:1 and VWF:Ag values were near those of reference. 29% of patients presented ADAMTS-13 inhibitors at the baseline moment. A study of correlation among variables as peripheral oxygen saturation, VWF:Ag, VWF subunit composition and ADAMTS-13 was done. It was observed that ADAMTS-13 correlated slightly positively with VWF:Ag and with VWF fragments 176 and 140 kDa, mainly in group B; in group A, the correlation at postoperative 48 hours tended to be negative. Most of the patients improved their peripheral oxygen saturation. The increased value of variables observed in postoperative 48 hours can be explained by the endothelial injury and inflammation caused by the surgery itself. This indicates an equilibrium between VWF:Ag and ADAMTS-13 in physiological conditions. However, this equilibrium could disappear when VWF is increased, probably by enzyme consumption. We conclude that ADAMTS-13 can act as a protective mechanism in these patients with thrombotic tendency

Na atualidade, uma das causas importantes de lesão encefálica em neonatos é a anóxia neonatal. Este é um problema grave nos serviços de perinatologia dos hospitais em todo o mundo sendo ainda pior em países subdesenvolvidos, devido à carência de precauções e cuidados requeridos. Modelos animais de anóxia vêm sendo empregados para avaliar seus efeitos, tanto em nível neurológico, como em nível comportamental. A anóxia neonatal tem sido estudada pelo laboratório de Neurociências do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, com modelos de estudo já desenvolvidos, adaptados e validados. Para investigar se a anóxia neonatal afeta o desenvolvimento motor somático e sensorial, ratos foram submetidos a um modelo não invasivo de anóxia global (Takada et. al., 2011). Ratos Wistar com 30 h de idade (6-8 gramas), machos e fêmeas, foram expostos por 25 minutos a gás nitrogênio 100% num fluxo de 3L/min, pressão 101.7 kPa e temperatura de 37ºC em câmara semi-hermética de policarbonato. O grupo controle foi submetido às mesmas condições porem com o ar ambiente normal. Os animais foram avaliados durante o período de aleitamento (P2 a P21) quanto a parâmetros do desenvolvimento somático; desenvolvimento ontogenético e quanto a reflexos sensório motores. Os resultados indicaram que o grupo Anoxia macho(AM) apresentou aumento no peso corporal {AM(42.25±3.62);CM(38.76±5.60);AF(40.64±5.08);CF(41.33±5.45)}e diminuição do eixo longitudinal do corpo {AM(10.15±0.27);CM(10.39±0.50);AF(9.82±0.44);CF(10.82±0.46)} em relação ao grupo Controle macho(CM) e Anoxia fêmea(AF), AF foi menor em relacao ao Controle fêmea (CF). AM apresentou maior eixo látero-lateral do crânio em relação CM e AF {AM (3.18 ±0.10); CM (3.17 ±0.13); AF(3.06 ±0.16); CF(3.00 ±0.15)} No desenvolvimento ontogenético houve retardo na abertura do canal auditivo {AM (13.79± 0.58); CM (13.75±0.83); AF(14.21±1.01); CF(13.36±0.50)} e abertura dos olhos {AM (14.00± 0.88); CM (14.64±1.28); AF(15.14±0.86); CF(13.79±0.42)} no grupo AF em relação a CF e AM, mas no grupo AM não houve diferença significante. Na erupção dos incisivos superiores {AM (10.79± 0.43); CM(11.71±1.68); AF(11.43±0.65); CF(10.07±0.27)} o grupo AM adiantou enquanto o AF atrasou em relação ao grupo controle. A avaliação dos reflexos sensóriais mostrou que a anoxia adiantou a colocação pelas vibrissas {AM (8.80± 1.21); CM (9.50±1.56); AF (9.93±1.14); CF(10.14±1.28) no AF e AM. Apenas o AM adiantou {AM (10.93± 2.09); CM(13.43±0.94); AF(10.50±0.85); CF(9.57±0.76)} no reflexo de aversão ao precipício. Nos relfexos de geotaxia negativa {AM (14.87± 1.30); CM (13.57±2.34); AF(14.57±1.40);CF (12.00±2.11)} e sobressalto ao susto {AM (14.00±0.53); CM (13.21±1.31); AF (13.29±0.61); CF (11.93±0.27)} e preensão palmar {AM (6.60±0.83); CM (4.71±0.47); AF(10.14±0.83); CF(4.71±0.47)} a anóxia provocou atraso tanto em macho quanto em fêmeas motores. Houve atraso na ontogênese da maioria dos testes de reflexos dos filhotes do grupo Anóxia. Os resultados deste estudo demonstraram que a anóxia causa danos persistentes na maioria dos parâmetros avaliados em relação aos grupos controle, e diminuição no número de neurônios do córtex sensóriomotor {M2: AM (46.84±1.72); CM (52±1.66); AF (45.55±1.80); CF (52±1.55)M1: AM (23.70±1.33); CM (41.89±1.49); AF (25.69±0.83); CF (43.88±1.46) S1HL: AM (27.93±2.69); CM (30.19±1.31); AF(23.42±2.38); CF (38.88±1.48) S1FL: AM (31.85±1.09); CM (33.88±0.48); AF(27.66±1.36); CF(32.28±1.70)}, com diferença de gênero o que evidencia a importância de que estratégias e procedimentos para minimizar os efeitos desse estímulos sejam consideradas em relação ao gênero / At present, one of the important causes of brain injury is the neonatal anoxia. This is a serious problem in the perinatology services of hospitals around the world being even worse in underdeveloped countries because of the lack of precautions and care required. Animal models of anoxia have been employed to assess their effects, both at the neurological level and at the behavioral level. Neonatal anoxia has been studied by the Neuroscience Laboratory of the Biomedical Sciences Institute of the University of São Paulo, with animal models already developed, adapted and validated. To investigate whether neonatal anoxia affects somatic and sensory motor development, rats were subjected to a non-invasive model of global anoxia (Takada et al., 2011). Male and female 30-h old (6-8 grams) Wistar rats were exposed for 25 minutes to 100% nitrogen gas in a flow of 3 L/min, pressure 101.7 kPa and temperature of 37ºC in a semi-hermetic chamber of polycarbonate. The control group was subjected to the same conditions but with normal ambient air. The animals were evaluated during the lactation period (P2 to P21) for parameters of somatic development; Ontogenetic development and for sensorimotor reflexes. The results indicated that the male Anoxia (AM) group presented increase in body weight (AM (42.25 ± 3.62), CM (38.76 ± 5.60), FA (40.64 ± 5.08), CF (41.33 ± 5.45)) and decrease in the longitudinal (10.82 ± 0.46), in relation to the male control group (CM) and the female Anoxia (AF), AF was lower in relation to the control group (AM) (10.15 ± 0.27), CM (10.39 ± 0.50), AF (9.82 ± 0.44) Female control (CF). AM increase in the cranio-lateral axis in relation to CM and AF (AM (3.18 ± 0.10); CM (3.17 ± 0.13); AF (3.06 ± 0.16); CF (3.00 ± 0.15). Concerning the ontogenetic development there was delay in opening the (13.79 ± 0.58), and the eyes {AM (14.00 ± 0.88); CM (14.64 ± 1.28), AF (15.14 ± 0.86), CF (13.79 ± 0.42)} in the AF group in relation to CF and AM, but in the AM group there was no significant difference. In the eruption of maxillary incisors (AM (10.79 ± 0.43), CM (11.71 ± 1.68), AF (11.43 ± 0.65), CF (10.07 ± 0.27), the AM group advanced while the AF delayed in control ration. The evaluation of the sensory reflexes showed that anoxia improved the placement of vibrissae (AM (8.80 ± 1.21), CM (9.50 ± 1.56), AF (9.93 ± 1.14), CF (10.14 ± 1.28) in AF and AM. Only AM advanced (AM (10.93 ± 2.09), CM (13.43 ± 0.94), AF (10.50 ± 0.85), CF (9.57 ± 0.76) in the reflex of aversion to the precipice. In negative geotaxia relays (AM (14.87 ± 1.30); CM (13.57 ± 2.34), AF (14.57 ± 1.40), CF (12.00 ± 2.11)} and startle reflex {AM (14.00 ± 0.53); CM (13.21 ± 1.31); AF (13.29 ± 0.61); CF (11.93 ± 0.27) and palmar grip (AM (6.60 ± 0.83); CM (4.71 ± 0.47), AF (10.14 ± 0.83), CF (4.71 ± 0.47)), anoxia caused delay in both male and female groups. There was a delay in the ontogenesis of most of the reflex tests of the puppies of the anoxia group. The results of this study demonstrated that anoxia causes persistent damage in most of the parameters evaluated in relation to the control groups, and a decrease in the number of sensory motor cortex neurons (M2: AM (46.84 ± 1.72), CM (52 ± 1.66), AF 1.80), CF (52 ± 1.55) M1: AM (23.70 ± 1.33), CM (41.89 ± 1.49), AF (25.69 ± 0.83), CF (43.88 ± 1.46) S1HL: AM (27.93 ± 2.69), CM (30.19 (31.88 ± 1.48), FA (27.66 ± 1.36), CF (32.28 ± 1.70), , which shows that strategies and procedures to minimize the effects of such stimuli should be considered in relation to gender

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-12-18T18:47:09Z No. of bitstreams: 2 Caroline_Covatti2016.pdf: 1272706 bytes, checksum: 2b328da4ea5385205d047b1e31662783 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T18:47:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Caroline_Covatti2016.pdf: 1272706 bytes, checksum: 2b328da4ea5385205d047b1e31662783 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cerebral palsy (CP) is characterized by movement and postural disorders that limit the individual‘s activity, and is attributed to the occurrence of non-progressive disturbances during the development of the fetal or infant brain. Animal models have been used in an attempt to reproduce the lesions and characteristics of CP. However, there is still no intervention capable of reproducing the characteristics of this pathology in the experimental area. Thus, the objective of this study was to verify the effects of a CP model that combines prenatal exposure to lipopolysaccharide (LPS), perinatal anoxia and sensorimotor restriction on the muscle fibers and neuromuscular junctions (NMJs) of the extensor digitorum longus (EDL) of rats. Male Wistar pups were separated into two groups: Control group (CTL - n = 10) - pups of mothers injected with saline during pregnancy and Cerebral Palsy Group (CP - n = 10) - pups of mothers injected with LPS during pregnancy. submitted to perinatal anoxia and sensorimotor restriction. On the day of birth, the offspring of the CP group were placed in a closed chamber with nitrogen flow (100%) to perform the perinatal anoxia. Additionally, from the first postnatal day (P1) to P30, those pups were also submitted to sensorimotor restriction by immobilizing the hind limbs. Motor performance was assessed in both groups during open field tests on P29 and P45. After euthanasia, EDL muscle samples were processed for morphological and morphometric analysis of the muscle fibers and NMJs. Regarding motor performance, the time of locomotion and the number of rearings were significantly lower in the CP group compared to CTL group at 29 days of age (p <0.001 and p <0.01, respectively). At 45 days of age, the time of locomotion of the animals in the CP group was also lower in relation to the CTL group (p <0.05). The total body weight, weight and length of the EDL muscle were 18%, 17% and 15% lower, respectively, in the CP group in relation to the CTL. The animals in the CP group presented hypertrophy of the type IIB fibers. However, regarding the other fibers there was no difference between groups. There were no differences between groups in the number of muscle fiber types I, IIA and IIB. The nuclei/fiber ratio, and the capillary/fiber ratio, were significantly higher in the CP group (21% and 18%, respectively). Regarding the intrafusal fibers, the animals from the CP group presented atrophy in 26% of the cross-sectional area and a reduction of 26% in the muscle spindle area. Intramuscular collagen increased by 34% in the animals from the CP group. The ultrastructural study of the EDL muscle in the CP group showed myofibrillar disruption and Z-line disorganization and dissolution. The NMJs in the CP group presented an increase of 22% in area and 11% in diameter when compared to the CTL group. In conclusion, the CP animal model that uses injections of LPS, perinatal anoxia and sensorimotor restraint produces motor deficits that are also observed in children with CP. / A paralisia cerebral (PC) caracteriza-se por desordens do movimento e da postura, por isso causam limitação na atividade do indivíduo, as quais são atribuídas por distúrbios não progressivos que ocorreram no desenvolvimento cerebral fetal ou infantil. Modelos animais têm sido utilizados na tentativa de reproduzir as lesões e características da PC. Porém, ainda não existe uma intervenção capaz de reproduzir as características desta patologia no âmbito experimental. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos de um modelo de PC que associa exposição pré-natal ao lipopolissacarídeo (LPS), anóxia perinatal e restrição sensório-motora sobre as fibras musculares e junções neuromusculares (JNMs) do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de ratos. Filhotes Wistar machos foram separados em dois grupos: Grupo controle (CTL - n = 10) - filhotes de mães injetadas com solução salina durante a gestação e Grupo Paralisia Cerebral (PC - n = 10) - filhotes de mães injetadas com LPS durante a gestação, submetidos à anóxia perinatal e à restrição sensório-motora. No dia do nascimento, os filhotes do grupo PC foram colocados em câmara fechada com fluxo de nitrogênio (100%) para a realização da anóxia perinatal. A partir do primeiro dia pós-natal (P1) até o P30, esses filhotes também foram submetidos à restrição sensório-motora por imobilização das patas pélvicas. Avaliações do desempenho motor foram realizadas em um campo aberto no P29 e P45 para os dois grupos. Após a eutanásia, amostras do músculo EDL foram processadas para análise morfológica e morfométrica das fibras musculares e JNMs. Quanto à performance motora, o tempo de locomoção e o número de erguidas (rearing) foi significativamente menor no grupo PC em comparação ao CTL aos 29 dias de idade (p< 0,001 e p< 0,01, respectivamente). Aos 45 dias de idade, o tempo de locomoção dos animais do grupo PC também foi menor em relação ao grupo CTL (p < 0,05). O peso corporal, peso e comprimento do músculo EDL foram 18%, 17% e 15% menores, respectivamente, no grupo PC em relação ao CTL. Os animais do grupo PC apresentaram hipertrofia das fibras do tipo IIB, todavia, não houve diferença entre os grupos nas demais fibras. Não teve diferenças entre os grupos estudados quanto ao número de fibras musculares dos tipos I, IIA e IIB. A relação núcleo/fibra, e a relação capilar/fibra, foi significativamente maior no grupo PC (21% e 18%, respectivamente). Quanto às fibras intrafusais, os animais do grupo PC apresentaram atrofia de 26% na área de secção transversal e redução de 26% na área do fuso muscular. O colágeno intramuscular aumentou 34% nos animais do grupo PC. O estudo ultraestrutural do músculo EDL do grupo PC mostrou desarranjo miofibrilar, desorganização e dissolução da linha Z. As JNMs do grupo PC apresentaram aumento de 22% na área e de 11% no diâmetro maior quando comparado ao grupo CTL. Em conclusão, o modelo animal de PC que utiliza injeções de LPS, anóxia perinatal e restrição sensório-motora produz déficits motores que também são observados em crianças com PC.

Na atualidade, uma das causas importantes de lesão encefálica em neonatos é a anóxia neonatal. Este é um problema grave nos serviços de perinatologia dos hospitais em todo o mundo sendo ainda pior em países subdesenvolvidos, devido à carência de precauções e cuidados requeridos. Modelos animais de anóxia vêm sendo empregados para avaliar seus efeitos, tanto em nível neurológico, como em nível comportamental. A anóxia neonatal tem sido estudada pelo laboratório de Neurociências do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, com modelos de estudo já desenvolvidos, adaptados e validados. Para investigar se a anóxia neonatal afeta o desenvolvimento motor somático e sensorial, ratos foram submetidos a um modelo não invasivo de anóxia global (Takada et. al., 2011). Ratos Wistar com 30 h de idade (6-8 gramas), machos e fêmeas, foram expostos por 25 minutos a gás nitrogênio 100% num fluxo de 3L/min, pressão 101.7 kPa e temperatura de 37ºC em câmara semi-hermética de policarbonato. O grupo controle foi submetido às mesmas condições porem com o ar ambiente normal. Os animais foram avaliados durante o período de aleitamento (P2 a P21) quanto a parâmetros do desenvolvimento somático; desenvolvimento ontogenético e quanto a reflexos sensório motores. Os resultados indicaram que o grupo Anoxia macho(AM) apresentou aumento no peso corporal {AM(42.25±3.62);CM(38.76±5.60);AF(40.64±5.08);CF(41.33±5.45)}e diminuição do eixo longitudinal do corpo {AM(10.15±0.27);CM(10.39±0.50);AF(9.82±0.44);CF(10.82±0.46)} em relação ao grupo Controle macho(CM) e Anoxia fêmea(AF), AF foi menor em relacao ao Controle fêmea (CF). AM apresentou maior eixo látero-lateral do crânio em relação CM e AF {AM (3.18 ±0.10); CM (3.17 ±0.13); AF(3.06 ±0.16); CF(3.00 ±0.15)} No desenvolvimento ontogenético houve retardo na abertura do canal auditivo {AM (13.79± 0.58); CM (13.75±0.83); AF(14.21±1.01); CF(13.36±0.50)} e abertura dos olhos {AM (14.00± 0.88); CM (14.64±1.28); AF(15.14±0.86); CF(13.79±0.42)} no grupo AF em relação a CF e AM, mas no grupo AM não houve diferença significante. Na erupção dos incisivos superiores {AM (10.79± 0.43); CM(11.71±1.68); AF(11.43±0.65); CF(10.07±0.27)} o grupo AM adiantou enquanto o AF atrasou em relação ao grupo controle. A avaliação dos reflexos sensóriais mostrou que a anoxia adiantou a colocação pelas vibrissas {AM (8.80± 1.21); CM (9.50±1.56); AF (9.93±1.14); CF(10.14±1.28) no AF e AM. Apenas o AM adiantou {AM (10.93± 2.09); CM(13.43±0.94); AF(10.50±0.85); CF(9.57±0.76)} no reflexo de aversão ao precipício. Nos relfexos de geotaxia negativa {AM (14.87± 1.30); CM (13.57±2.34); AF(14.57±1.40);CF (12.00±2.11)} e sobressalto ao susto {AM (14.00±0.53); CM (13.21±1.31); AF (13.29±0.61); CF (11.93±0.27)} e preensão palmar {AM (6.60±0.83); CM (4.71±0.47); AF(10.14±0.83); CF(4.71±0.47)} a anóxia provocou atraso tanto em macho quanto em fêmeas motores. Houve atraso na ontogênese da maioria dos testes de reflexos dos filhotes do grupo Anóxia. Os resultados deste estudo demonstraram que a anóxia causa danos persistentes na maioria dos parâmetros avaliados em relação aos grupos controle, e diminuição no número de neurônios do córtex sensóriomotor {M2: AM (46.84±1.72); CM (52±1.66); AF (45.55±1.80); CF (52±1.55)M1: AM (23.70±1.33); CM (41.89±1.49); AF (25.69±0.83); CF (43.88±1.46) S1HL: AM (27.93±2.69); CM (30.19±1.31); AF(23.42±2.38); CF (38.88±1.48) S1FL: AM (31.85±1.09); CM (33.88±0.48); AF(27.66±1.36); CF(32.28±1.70)}, com diferença de gênero o que evidencia a importância de que estratégias e procedimentos para minimizar os efeitos desse estímulos sejam consideradas em relação ao gênero / At present, one of the important causes of brain injury is the neonatal anoxia. This is a serious problem in the perinatology services of hospitals around the world being even worse in underdeveloped countries because of the lack of precautions and care required. Animal models of anoxia have been employed to assess their effects, both at the neurological level and at the behavioral level. Neonatal anoxia has been studied by the Neuroscience Laboratory of the Biomedical Sciences Institute of the University of São Paulo, with animal models already developed, adapted and validated. To investigate whether neonatal anoxia affects somatic and sensory motor development, rats were subjected to a non-invasive model of global anoxia (Takada et al., 2011). Male and female 30-h old (6-8 grams) Wistar rats were exposed for 25 minutes to 100% nitrogen gas in a flow of 3 L/min, pressure 101.7 kPa and temperature of 37ºC in a semi-hermetic chamber of polycarbonate. The control group was subjected to the same conditions but with normal ambient air. The animals were evaluated during the lactation period (P2 to P21) for parameters of somatic development; Ontogenetic development and for sensorimotor reflexes. The results indicated that the male Anoxia (AM) group presented increase in body weight (AM (42.25 ± 3.62), CM (38.76 ± 5.60), FA (40.64 ± 5.08), CF (41.33 ± 5.45)) and decrease in the longitudinal (10.82 ± 0.46), in relation to the male control group (CM) and the female Anoxia (AF), AF was lower in relation to the control group (AM) (10.15 ± 0.27), CM (10.39 ± 0.50), AF (9.82 ± 0.44) Female control (CF). AM increase in the cranio-lateral axis in relation to CM and AF (AM (3.18 ± 0.10); CM (3.17 ± 0.13); AF (3.06 ± 0.16); CF (3.00 ± 0.15). Concerning the ontogenetic development there was delay in opening the (13.79 ± 0.58), and the eyes {AM (14.00 ± 0.88); CM (14.64 ± 1.28), AF (15.14 ± 0.86), CF (13.79 ± 0.42)} in the AF group in relation to CF and AM, but in the AM group there was no significant difference. In the eruption of maxillary incisors (AM (10.79 ± 0.43), CM (11.71 ± 1.68), AF (11.43 ± 0.65), CF (10.07 ± 0.27), the AM group advanced while the AF delayed in control ration. The evaluation of the sensory reflexes showed that anoxia improved the placement of vibrissae (AM (8.80 ± 1.21), CM (9.50 ± 1.56), AF (9.93 ± 1.14), CF (10.14 ± 1.28) in AF and AM. Only AM advanced (AM (10.93 ± 2.09), CM (13.43 ± 0.94), AF (10.50 ± 0.85), CF (9.57 ± 0.76) in the reflex of aversion to the precipice. In negative geotaxia relays (AM (14.87 ± 1.30); CM (13.57 ± 2.34), AF (14.57 ± 1.40), CF (12.00 ± 2.11)} and startle reflex {AM (14.00 ± 0.53); CM (13.21 ± 1.31); AF (13.29 ± 0.61); CF (11.93 ± 0.27) and palmar grip (AM (6.60 ± 0.83); CM (4.71 ± 0.47), AF (10.14 ± 0.83), CF (4.71 ± 0.47)), anoxia caused delay in both male and female groups. There was a delay in the ontogenesis of most of the reflex tests of the puppies of the anoxia group. The results of this study demonstrated that anoxia causes persistent damage in most of the parameters evaluated in relation to the control groups, and a decrease in the number of sensory motor cortex neurons (M2: AM (46.84 ± 1.72), CM (52 ± 1.66), AF 1.80), CF (52 ± 1.55) M1: AM (23.70 ± 1.33), CM (41.89 ± 1.49), AF (25.69 ± 0.83), CF (43.88 ± 1.46) S1HL: AM (27.93 ± 2.69), CM (30.19 (31.88 ± 1.48), FA (27.66 ± 1.36), CF (32.28 ± 1.70), , which shows that strategies and procedures to minimize the effects of such stimuli should be considered in relation to gender

A hipóxia é capaz de alterar muitos mecanismos bioquímicos nas células endoteliais. Dentre eles, a indução da expressão endotelial de moléculas de adesão, como o fator de von Willebrand (FVW) que, em resposta ao estímulo, é secretado em sua forma mais ativa na interação com as plaquetas, o que pode resultar em trombose. Nas condições fisiológicas, o padrão multimérico do FVW no plasma é essencialmente determinado pela ADAMTS-13 (uma desintegrina e metaloproteinase com domínios trombospondina). Este estudo teve como objetivo verificar se a atividade da enzima ADAMTS-13, assim como as características do FVW relacionáveis a ela, poderiam estar alteradas na presença de hipoxemia comparativamente à condição de oxigenação normal. Este estudo longitudinal envolveu 56 pacientes portadores de cardiopatias congênitas cianogênicas, em idades entre um e sete anos, candidatos ao tratamento cirúrgico. Os pacientes foram avaliados no pré-cirúrgico (basal), no pós-operatório imediato (pós 48 horas) e após 30 dias de cirurgia, e foram divididos em dois grupos (A e B) baseado na saturação periférica de oxigênio (SpO2) no momento pós 30 dias. Foram determinados o antígeno do FVW e a análise das suas subunidades, a atividade da ADAMTS-13 e a presença de inibidores da ADAMTS-13. Os pacientes de ambos os grupos apresentaram aumento significante da SpO2, da concentração antigênica do FVW e da atividade da ADAMTS-13 nos momentos pós 48 horas e pós 30 dias em comparação com o momento pré (basal). As densidades normalizadas da subunidade principal do FVW (225 kDa) e do fragmento de 176 kDa apresentaram tendência ao aumento nos momentos pós 48 horas e pós 30 dias nos dois grupos. A razão entre a atividade da ADAMTS-13 e o FVW estava menor do que 1 no momento pós 48 horas, indicando consumo da enzima; entretanto, no momento pós 30 dias a razão fica 1:1, e o FVW se aproxima dos valores de referência. Verificamos ainda que 29% destes pacientes apresentaram inibidores contra a ADAMTS-13 no momento pré-operatório. Ainda explorando as variáveis SpO2, FVW:Ag, atividade da ADAMTS-13 e a composição das subunidades do FVW, foi feito um estudo de correlação linear entre estas variáveis. Observamos uma baixa correlação entre a enzima ADAMTS-13 e o FVW:Ag, e da enzima com os fragmentos do FVW de 176 e 140 kDa, principalmente no grupo B. No grupo A, esta correlação no momento pós 48 horas mostrou tendência a ser negativa. A maioria dos pacientes apresentou melhoras na saturação periférica de oxigênio. O aumento das variáveis estudadas no pós-operatório imediato pode ter ocorrido em função da cirurgia, que provavelmente ocasionou um quadro de lesão endotelial com inflamação, indicando que pode existir um equilíbrio entre o FVW e a ADAMTS-13 em níveis fisiológicos. Entretanto, este equilíbrio pode ser quebrado quando ocorre aumento do FVW, provavelmente por consumo da enzima. Parece-nos, portanto, que a ADAMTS-13 pode funcionar como um mecanismo de proteção a estes pacientes com tendência à trombose / Hypoxia has been shown to alter several biochemical mechanisms in endothelial cells. In addition, hypoxia induces the endothelial expression of adhesion molecules, including von Willebrand factor (VWF). Increased release of high-molecular-weight VWF multimers is associated with higher risk for thrombotic events. In physiological conditions, the multimeric pattern of plasma VWF is essentially determined by the action of ADAMTS-13 (a desintegrin and metalloprotease with thrombospondin type 1 domains). The aim of this study was to investigate if ADAMTS-13 activity and VWF subunit fragments were altered by hypoxia in cyanotic congenital heart disease. Fiftysix patients (age 1 to 7 years) with cyanotic congenital heart disease admitted to the Heart Institute for heart surgery were included in this longitudinal study. Patients were evaluated before (baseline) corrective surgery, postoperative 48 hours and postoperative 30 days. Patients were classified in two groups (A and B) based on the peripheral oxygen saturation after 30 days surgery. VWF antigenic concentration, VWF subunit composition, ADAMTS-13 activity and presence of ADAMTS-13 inhibitors were determined. Peripheral oxygen saturation, VWF:Ag and ADAMTS-13 activity were all increased significantly in both groups, in postoperative 48 hours and postoperative 30 days in comparison with baseline moment. Normalized density of VWF main subunit (225 kDa) and proteolytic fragment with 176 kDa tended to increase in postoperative 48 hours and postoperative 30 days in both groups. The rate between ADAMTS-13 activity and VWF:Ag was lower than 1 in postoperative 48 hours, an indicating of enzyme consumption; however, in the postoperative 30 days the rate was 1:1 and VWF:Ag values were near those of reference. 29% of patients presented ADAMTS-13 inhibitors at the baseline moment. A study of correlation among variables as peripheral oxygen saturation, VWF:Ag, VWF subunit composition and ADAMTS-13 was done. It was observed that ADAMTS-13 correlated slightly positively with VWF:Ag and with VWF fragments 176 and 140 kDa, mainly in group B; in group A, the correlation at postoperative 48 hours tended to be negative. Most of the patients improved their peripheral oxygen saturation. The increased value of variables observed in postoperative 48 hours can be explained by the endothelial injury and inflammation caused by the surgery itself. This indicates an equilibrium between VWF:Ag and ADAMTS-13 in physiological conditions. However, this equilibrium could disappear when VWF is increased, probably by enzyme consumption. We conclude that ADAMTS-13 can act as a protective mechanism in these patients with thrombotic tendency

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-09-29T20:17:35Z No. of bitstreams: 1 josehenriquemferreira_dissert.pdf: 1670640 bytes, checksum: 3707d57cc4f4e98d8edb6594786c1b7e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-29T20:17:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 josehenriquemferreira_dissert.pdf: 1670640 bytes, checksum: 3707d57cc4f4e98d8edb6594786c1b7e (MD5) Previous issue date: 2014-10-20 / Introduction: Mammary neoplasms are the most common type of tumor in dogs. Some proteins play an important role in tumor progression, thus are candidate prognosis markers. During tumor growth, the transcription factor induced by hypoxia (HIF-1α) activates the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), promoting angiogenesis. Interleukin-8 (IL-8) is a pro-inflammatory and pro-angiogenic cytokine and has been associated with tumor progression. Objectives: To evaluate the prognostic value of HIF-1α, VEGF and IL-8 proteins in tumor tissue in dogs with mammary tumors, correlating them with clinicopathological parameters, clinical outcome and survival. Material and Methods: The concentrations of HIF-1α, VEGF and IL-8 proteins were evaluated by ELISA (Enzyme-linked immunosorbent) in macerated tumor of 25 bitches with mammary tumors and control samples and compared statistically. Results: The levels of HIF-1α, VEGF and IL-8 were higher in dogs over the age of 10 years and that had died (p <0.05). Moreover, HIF-1α concentrations were elevated in the tumors of dogs who developed metastases (p = 0.04), while VEGF levels were highest in tumors with clinical stages III and IV (p = 0.03) and IL-8 tumors in tumor with development greater than six months (p = 0.03). Still, high levels of HIF-1α, VEGF and IL-8 were also related to shorter overall survival (p <0.05). Conclusions: High levels of HIF-1α, VEGF and IL-8 are associated with features of poor prognosis, suggesting that the assessment of these proteins in tumor macerated has important prognostic value. / Introdução: As neoplasias mamárias são o tipo mais comum de tumor na espécie canina. Algumas proteínas exercem importante papel na progressão tumoral e portanto, são candidatos marcadores de prognóstico. Durante o crescimento tumoral, o fator de transcrição induzido por hipóxia (HIF-1α) ativa a expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), promovendo a angiogênese. A interleucina-8 (IL-8) é uma citocina pró-inflamatória e pró-angiogênica e tem sido associada à progressão tumoral. Objetivos: Avaliar o valor prognóstico das proteínas HIF-1α, VEGF e IL-8 no tecido tumoral em cadelas com neoplasia mamária, relacionando-os com os parâmetros clínico-patológicos, evolução clínica e sobrevida. Material e Métodos: As concentrações das proteínas HIF-1α, VEGF e IL-8 foram avaliadas pelo método de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent Assay) no macerado tumoral de 25 cadelas com neoplasia mamária e amostras controle e comparadas estatisticamente. Resultados: Os níveis de HIF-1α, VEGF e IL-8 foram maiores em cadelas com idade superior a 10 anos e que vieram a óbito (p < 0,05). Além disso, concentrações de HIF-1α foram elevadas nos tumores de cadelas que desenvolveram metástase (p = 0,04), enquanto os níveis de VEGF foram maiores em tumores com estadiamento clínico III e IV (p = 0,03), e de IL-8 em tumores com evolução tumoral maior que seis meses (p = 0,03). Ainda, níveis elevados de HIF-1α, VEGF e IL-8 também foram relacionados com menor tempo de sobrevida global (p < 0,05). Conclusões: Altas concentrações de HIF-1α, VEGF e IL-8 estão associadas com características de pior prognóstico, sugerindo que a avaliação dessas proteínas no macerado tumoral possui importante valor prognóstico.

Hipóxia é definida como a baixa teor de oxigênio. Nos tumores a principal causa da hipóxia é a isquemia, que ocorre em função do rápido crescimento da massa tumoral e diminuição ou obstrução dos vasos sanguíneos que irrigam o interior dos tumores. Como a hipóxia é uma das causas do aumento da resistência à radioterapia de radiação e algumas formas de quimioterapia, a identificação de tumores com regiões de hipóxia é de elevada relevância e a utilização de radiofármacos tem sido muito promissora, por ser um método não invasivo e que podem mapear diferentes alterações fisiológicas associadas à hipóxia. Neste trabalho sintetizamos o ligante [[99mTc](O)2HL91], com rendimento final de síntese de 82,6% e preparamos o respectivo complexo de tecnécio, com eficiência de marcação maior que 97 %; também foi preparado o radiofármaco (18F)FAZA, com eficiência de marcação de 17,9% e pureza radioquímica, após purificação, maior que 86 %. Estudos de captação em células de melanoma murino B16F10, apresentaram taxa de captação de 0,73%, em condições de normóxia e de 8,5 % em condições de hipóxia para o [[99mTc](O)2HL91] , sobe as mesmas condições, de 0,73% e 0,98%, para o (18F)FAZA, respectivamente. Estudos de biodistribuição ex vivo mostraram taxa de captação em tumores da ordem de 4,3% para o [[99mTc](O)2HL91] e de 0,56% para o (18F)FAZA, a relação tumor/sangue foi de 2,6% e 2,5%, respectivamente. Para ambos os rins são a principal via de excreção. Análise, por autorradiografia, de cortes dos tumores mostraram claramente a concentração do [[99mTc](O)2HL91] em regiões de hipóxia/necrose. Imagem da distribuição dos radiofármacos em camundongos C57/Bl6, com tumores de células B16F10, utilizando sistema hibrido PET/SPECT/CT dedicado a pequenos animais, mostraram que a concentração do [[99mTc](O)2HL91] permitiu visualizar captação difusa em regiões do tumor, o mesmo foi observado para o (18F)FAZA, mas em uma taxa menor. Em conclusão, os resultados obtidos apresentam as possibilidades de preparação e utilização de dois radiofármacos, o [[99mTc](O)2HL91] e o (18F)FAZA, como agentes marcadores para hipóxia, utilizando as técnicas de SPECT e PET para imagem. Todavia, novos estudos deverão ser realizados para determinação da especificidade desses radiofármacos em diferentes linhagens tumorais / Hypoxia is a deficiency of oxygen in the cell. In tumors the primary cause of hypoxia is ischemia, which occurs due to the rapid growth of the tumor mass and reduction or blockage of the blood vessels decreasing nutrients and oxygen supply in more internal regions of the tumors. Once hypoxia is one cause of the increased resistance to radiation therapy and some forms of chemotherapy, their identification in tumors is highly relevant and use of radiopharmaceuticals has been very promising, because it is a noninvasive and can map different physiological changes associated with hypoxia. In this work, we synthesized the ligand [[99mTc](O)2HL91] given a final synthesis yield of 82.6% and prepared their technetium complex with the labeling efficiency greater than 97%, the (18F)FAZA radiopharmaceutical was also prepared with labeling yield of 17.9% and marking radiochemical purity higher of 86 %, after purification. Uptake studies in murine B16F10 melanoma cells showed uptake rate of 0.73% in normoxic conditions and 8.5% in hypoxic conditions, for [[99mTc](O)2HL91], and, under same conditions, 0.73% and 0.98%, for (18F)FAZA. Ex vivo biodistribution study showed uptake rate in tumors of approximately 4.3% for [[99mTc](O)2HL91] and 0.56% for (18F)FAZA, the tumor/blood ratio was 2.6% and 2.5% respectively. For both products the main route 16 of excretion was by the kidneys. Analysis by autoradiography of tumors sections clearly showed the concentration of [[99mTc](O)2HL91] in hypoxia/necrosis regions. The distribution of radiopharmaceuticals in C57/Bl6 mice implanted with tumor B16F10 cells, using dedicated small animals hybrid system PET/SPECT/C, permitted to observe the uptake of the [[99mTc](O)2HL91] in diffuses points in the tumor regions, the same was observed for the (18F)FAZA, but with lower intensity. In conclusion, the results obtained show possibilities for preparation and use of both radiopharmaceuticals, the [[99mTc](O)2HL91] and (18F)FAZA as agents for hypoxia marker, using the SPECT and PET image techniques. However, further studies should be conducted to determine the specificity of these radiopharmaceuticals in different tumor cell lines

Hipóxia é definida como a baixa teor de oxigênio. Nos tumores a principal causa da hipóxia é a isquemia, que ocorre em função do rápido crescimento da massa tumoral e diminuição ou obstrução dos vasos sanguíneos que irrigam o interior dos tumores. Como a hipóxia é uma das causas do aumento da resistência à radioterapia de radiação e algumas formas de quimioterapia, a identificação de tumores com regiões de hipóxia é de elevada relevância e a utilização de radiofármacos tem sido muito promissora, por ser um método não invasivo e que podem mapear diferentes alterações fisiológicas associadas à hipóxia. Neste trabalho sintetizamos o ligante [[99mTc](O)2HL91], com rendimento final de síntese de 82,6% e preparamos o respectivo complexo de tecnécio, com eficiência de marcação maior que 97 %; também foi preparado o radiofármaco (18F)FAZA, com eficiência de marcação de 17,9% e pureza radioquímica, após purificação, maior que 86 %. Estudos de captação em células de melanoma murino B16F10, apresentaram taxa de captação de 0,73%, em condições de normóxia e de 8,5 % em condições de hipóxia para o [[99mTc](O)2HL91] , sobe as mesmas condições, de 0,73% e 0,98%, para o (18F)FAZA, respectivamente. Estudos de biodistribuição ex vivo mostraram taxa de captação em tumores da ordem de 4,3% para o [[99mTc](O)2HL91] e de 0,56% para o (18F)FAZA, a relação tumor/sangue foi de 2,6% e 2,5%, respectivamente. Para ambos os rins são a principal via de excreção. Análise, por autorradiografia, de cortes dos tumores mostraram claramente a concentração do [[99mTc](O)2HL91] em regiões de hipóxia/necrose. Imagem da distribuição dos radiofármacos em camundongos C57/Bl6, com tumores de células B16F10, utilizando sistema hibrido PET/SPECT/CT dedicado a pequenos animais, mostraram que a concentração do [[99mTc](O)2HL91] permitiu visualizar captação difusa em regiões do tumor, o mesmo foi observado para o (18F)FAZA, mas em uma taxa menor. Em conclusão, os resultados obtidos apresentam as possibilidades de preparação e utilização de dois radiofármacos, o [[99mTc](O)2HL91] e o (18F)FAZA, como agentes marcadores para hipóxia, utilizando as técnicas de SPECT e PET para imagem. Todavia, novos estudos deverão ser realizados para determinação da especificidade desses radiofármacos em diferentes linhagens tumorais / Hypoxia is a deficiency of oxygen in the cell. In tumors the primary cause of hypoxia is ischemia, which occurs due to the rapid growth of the tumor mass and reduction or blockage of the blood vessels decreasing nutrients and oxygen supply in more internal regions of the tumors. Once hypoxia is one cause of the increased resistance to radiation therapy and some forms of chemotherapy, their identification in tumors is highly relevant and use of radiopharmaceuticals has been very promising, because it is a noninvasive and can map different physiological changes associated with hypoxia. In this work, we synthesized the ligand [[99mTc](O)2HL91] given a final synthesis yield of 82.6% and prepared their technetium complex with the labeling efficiency greater than 97%, the (18F)FAZA radiopharmaceutical was also prepared with labeling yield of 17.9% and marking radiochemical purity higher of 86 %, after purification. Uptake studies in murine B16F10 melanoma cells showed uptake rate of 0.73% in normoxic conditions and 8.5% in hypoxic conditions, for [[99mTc](O)2HL91], and, under same conditions, 0.73% and 0.98%, for (18F)FAZA. Ex vivo biodistribution study showed uptake rate in tumors of approximately 4.3% for [[99mTc](O)2HL91] and 0.56% for (18F)FAZA, the tumor/blood ratio was 2.6% and 2.5% respectively. For both products the main route 16 of excretion was by the kidneys. Analysis by autoradiography of tumors sections clearly showed the concentration of [[99mTc](O)2HL91] in hypoxia/necrosis regions. The distribution of radiopharmaceuticals in C57/Bl6 mice implanted with tumor B16F10 cells, using dedicated small animals hybrid system PET/SPECT/C, permitted to observe the uptake of the [[99mTc](O)2HL91] in diffuses points in the tumor regions, the same was observed for the (18F)FAZA, but with lower intensity. In conclusion, the results obtained show possibilities for preparation and use of both radiopharmaceuticals, the [[99mTc](O)2HL91] and (18F)FAZA as agents for hypoxia marker, using the SPECT and PET image techniques. However, further studies should be conducted to determine the specificity of these radiopharmaceuticals in different tumor cell lines