A anóxia neonatal é uma das causas mais importantes de lesão encefálica em neonatos. Várias espécies de mamíferos têm contribuído no estudo dos mecanismos patogênicos envolvidos no prejuízo da anóxia/hipóxia, em particular roedores tem sido utilizado com sucesso como modelo da anóxia em humanos. Fatores como a maturidade do encéfalo no momento da deficiência de oxigênio, a duração da asfixia, vulnerabilidade regional e celular específica, apresentam grande influência no surgimento de problemas neurológicos, déficit sensoriomotor, prejuízo no aprendizado e memória. Alterações em processos atentivos e ansiedade também podem afetar as funções cognitivas. Em roedores, tem-se observado marcada hiperatividade na idade infantil, acompanhada por significativa hipoatividade na idade adulta. Os objetivos deste estudo foram avaliar as possíveis alterações comportamentais, tais como memória de referência espacial, memória operacional, alterações sensoriais, ansiedade e aquisição do medo condicionado ao som e ao contexto, em ratos, submetidos à anóxia neonatal. Foram utilizados 25 ratos albinos (Rattus norvegicus, linhagem Wistar) machos, neonatos, divididos em dois grupos experimentais: Anóxia (n = 13) e Controle (n = 12). Nos testes envolvendo a memória de referência espacial e memória operacional, o grupo experimental evidenciou que a anóxia neonatal causa prejuízo na capacidade de aprendizagem e navegação espacial no labirinto aquático de Morris, porém verificou-se que ambos os grupos conseguiram valer-se das suas experiências prévias para melhorarem seu desempenho na medida em que passavam pelos diferentes testes (memória de referência espacial, memória operacional com intervalo entre as tentativas de 10, 30 e 0) demonstrados por meio da diminuição na latência e no comprimento do trajeto, sendo esta melhora no desempenho inferior nos animais anóxia. Os animais anóxia, também necessitaram de mais dias de testes, para atingirem desempenho próximo ao encontrado nos animais do outro grupo. Observou-se variação na velocidade do nado ao longo dos dias de testes em ambos os grupos, porém verificou-se que os animais anóxia demonstraram velocidade inferior aos animais controle. No teste do labirinto em cruz elevado os animais anóxia mostraram-se menos ansiosos, tendo permanecido menor tempo em congelamento no teste do medo condicionado ao contexto, porém não ao som. Portanto, estes dados indicam que o modelo de anóxia neonatal utilizado promove alterações neuronais que modificam o comportamento do animal na vida adulta, verificados por meio das alterações comportamentais. Espera-se, com estes resultados, favorecer a compreensão das alterações comportamentais após anóxia neonatal e se possível, abrir caminho para novas abordagens e perspectivas terapêuticas / Neonatal anoxia is a major cause of brain injury in newborns. Several species of mammals have contributed to the study of pathogenic mechanisms involved in the injury caused by anoxia / hypoxia; particularly rodents have been used successfully as a model for the study of anoxia in humans. Factors such as maturity of the brain when oxygen deficiency, the duration of asphyxia, specific regional and cell vulnerability, have great influence on the rise of neurological disorders, sensory motor deficit, and impaired learning and memory. Changes in attentional processes and anxiety can also affect cognitive functions. In rodents, there has been marked hyperactivity at young age, accompanied by a significant hypoactivity in adult life. The objectives of this study were to evaluate the possible behavioral changes, such as spatial reference memory, working memory, sensory disturbance, anxiety and acquisition of conditioned fear to the sound and context in rats subjected to neonatal anoxia. We used 25 albino rats (Rattus norvegicus, Wistar) male neonates, divided into two groups: Anoxia (n = 13) and control (n = 12). In tests involving spatial reference memory and working memory, the experimental group showed that neonatal hypoxia adversely affects the ability of spatial learning and navigation in the Morris water maze, but it was found that both groups were able to draw on their experiences prior to improve its performance as they passed through various tests (spatial reference memory, working memory at an interval timing between attempts of 10, 30 and 0) shown by the decrease in latency and path length, and this improvement in underperform on anoxic animals. Anoxic animals also required more days of testing to achieve performance close to that found in animals of the other group. There was variation in the speed of swimming during the days of testing in both groups, but it was found that the anoxic animals showed lower speed than the control animals. In the elevated plus-maze test, the anoxic animals were less anxious and reminded less time freezing in the conditioned fear test to the context but not to the sound. Therefore, these data indicate that the used neonatal anoxia model promotes neuronal alterations that modify the behavior of the animal in adult life, verified through behavioral changes. It is expected, with these results, to promote understanding of the behavioral alterations after neonatal anoxia and, if possible, to make way for new approaches and therapeutic perspectives

Glicose e oxigênio desempenham um importante papel na regulação do metabolismo celular. Dada a importância de ambos no metabolismo - o primeiro como fonte de carbono preferencial da maior parte das células, e o segundo como aceptor final de elétrons na cadeia respiratória, em diversos organismos desenvolveram-se métodos adequados para detectar sua presença de modo a ajustar o metabolismo em função de sua disponibilidade. Neste trabalho foi realizado o estudo da expressão, no nível transcricional, dos genes envolvidos nas vias metabólicas primárias e genes envolvidos em morte celular, em células humanas, com o intuito de determinar as alterações no metabolismo energético em resposta a condições de hipóxia e anóxia, por meio da técnica de microarrays de cDNA. Utilizamos, inicialmente, células normais de fibroblasto humano ASl98 e células de fibroblasto humano MRC-5 imortalizadas por transfecção por SV40, e por fim células provenientes de ilhotas pancreáticas humanas, para a elaboração de um protocolo de cultura celular em que as mesmas crescessem aderidas a microcarregadores Cytodex I. Numa segunda etapa, células de ilhotas pancreáticas humanas foram cultivadas em suspensão, aderidas aos microcarregadores, num biorreator, sendo então realizada a análise do perfil transcricional dos genes escolhidos, frente às condições de baixa tensão de oxigênio. É apresentada a análise da expressão gênica de aproximadamente 160 genes na qual foram verificados um comportamento de indução daqueles envolvidos no metabolismo de lipídios e alguns na morte celular e um comportamento inicial de indução, e posterior inibição, do metabolismo primário como um todo. Em vista dos dados obtidos é de interesse ressaltar que essas células deveriam ser mantidas em saturações de oxigênio acima de 5% para evitar o efeito deletério observado na baixa concentração de oxigênio sobre a viabilidade celular, em termos da indução de alguns genes envolvidos na morte celular e da repressão geral dos relacionados ao metabolismo energético. Também foi verificado que, em saturações de oxigênio de até 10%, as células adotaram um padrão transcricional que indicou uma resposta ao estresse por falta de oxigênio, este por sua vez reflete-se na viabilidade celular, característica crucial para o sucesso do transplante clínico de ilhotas. / Glucose and oxygen have important roles on the regulation of cellular metabolism. Due to their importance in metabolism, the former as the preferential carbon source and the later as the final electron acceptor of the respiratory chain, many organisms have developed suitable processes to detect their presence in order to adjust the cellular metabolism to their availability. In this work, we have studied, in human cells and at the transcriptional level, the expression of genes involved in primary metabolism pathways and some of those related to cell death, aiming to resolve alterations in the energetic metabolism as a response to hypoxic and anoxic conditions, by means of cDNA microarrays. We initially used AS198 human fibroblastic normal cells and MRC-5 human fibroblastic cells immortalized by SV40, and later on cells from human pancreatic islets, to develop a cell culture protocol in which they would grow on the surface of Cytodex 1 microcarriers. As a second step, cells from human pancreatic islets were cultured on microcarriers in suspension inside a bioreactor. This culture was then used to carry out the transcriptional profile analysis of selected genes in response to low levels of oxygen. This work presents the analysis of gene expression of approximately 160 genes that can be divided into two distinct groups. The first group, the expression of which is induced, comprises genes involved in lipid metabolism and some of those related to cell death. The expression of the second group, consisting of diverse genes of the primary metabolism, suffers an initial induction followed by repression. Given the data acquired it is interesting to note that the human pancreatic islets should be maintained under at least 5% dissolved oxygen to avoid the deleterious effects on cell viability observed at lower oxygen concentrations, resulting in the induction of some genes involved in cell death and the repression of those related to energetic metabolism. It was also verified that, under oxygen saturation of at least 10%, these cells adopted a transcriptional profile that indicated a response to the stress created by the lack of oxygen, which would in turn reflect on cell viability, a crucial characteristic for success in clinical islet transplantation.

Uma das causas mais importantes de lesão encefálica em neonatos na atualidade é a anóxia neonatal. Este é um dos problemas mais graves e comuns nos serviços de perinatologia dos hospitais no mundo, sendo ainda pior em países subdesenvolvidos, devido à carência de precauções e cuidados requeridos. Há relativamente pouco tempo estudos têm indicado que a hipotermia promove um importante efeito neuroprotetor, podendo ser usada como tratamento alternativo promissor para danos causados pela anóxia neonatal. Porém, embora diversas pesquisas mostrem a ação neuroprotetora da hipotermia, não existem evidencias consistentes do seu papel preventivo em relação as alterações comportamentais decorrentes da anóxia neonatal. O objetivo deste trabalho foi avaliar se a hipotermia previne alterações comportamentais decorrentes da anóxia neonatal, incluindo funções de memória espacial, condicionamento aversivo e ansiedade. Foram incluídos no estudo 91 ratos Wistar machos organizados em 4 grupos: anóxia com hipotermia (AH), anóxia sem hipotermia (AC), controle (para anóxia) com hipotermia (CH) e controle sem hipotermia (CC). O protocolo de anóxia neonatal foi iniciado 24 horas após o nascimento dos ratos, usando uma câmara semi-hermética saturada com nitrogênio gasoso. A temperatura da câmera foi mantida a 37°C e o tempo de exposição à anóxia foi de 25 minutos. Animais controle para anóxia foram expostos à mesma câmera, exceto pelo nitrogênio que foi substituído por ar. O tratamento com hipotermia foi iniciado imediatamente após da anóxia em uma câmara a 30°C, onde os animais permaneceram durante 5 horas. O tratamento controle para hipotermia envolveu o mesmo protocolo, exceto pela temperatura da câmera que foi mantida a 37°C. No final do período, os neonatos foram colocados em uma câmara aquecida a 37°C por 40 minutos até se recuperarem. Quando os animais atingiram 70 dias de idade foram submetidos ao paradigma teste-reteste no labirinto em cruz elevado, para avaliar níveis de ansiedade, atividade locomotora e memória aversiva. Subsequentemente, quando os animais fizeram 75 dias, iniciou-se o teste de memória espacial no Labirinto Aquático de Morris. Finalmente, quando os animais atingiram 115 dias de idade, realizou-se o teste de condicionamento de medo ao som e ao contexto. A anóxia neonatal e a hipotermia não interferiram nos níveis de ansiedade no Labirinto em cruz elevado. Porém, a hipotermia aumentou a atividade locomotora e comportamentos de avaliação de risco. Os resultados obtidos no Labirinto Aquático de Morris indicam que a hipotermia previne prejuízos na memória espacial induzidos pela anóxia neonatal. Finalmente, a anóxia neonatal reduziu a taxa de extinção de memória aversivas, efeito que foi prevenido pela hipotermia. No conjunto, esses resultados mostram, por um lado, que a hipotermia previne alterações da memória espacial e de medo condicionado. Por outro lado, eles mostram que a hipotermia induz aumento da atividade locomotora e de comportamentos de avaliação de risco em ratos / Neonatal anoxia is one of the main causes of brain injury in newborns. This is among the most serious problems in many hospitals around the world and is even worse in developing countries due to the lack of required precautions and care. Recent studies have indicated that hypothermia promotes important neuroprotective effects. Thus, it could constitute a promising alternative treatment to dysfunctions caused by neonatal anoxia. Although there have been studies demonstrating that hypothermia promotes neuroprotection following neonatal anoxia, there is no solid evidence showing to which extent this neuroprotection prevents behavioral changes. This study aimed at evaluating to which extent behavioral changes induced by neonatal anoxia are prevented by hypothermia, focusing on anxiety, spatial memory and fear conditioning, in rats. The study included 91 male Wistar rats organized in 4 groups: anoxia with hypothermia (AH), anoxia without hypothermia (AC), control (for anoxia) with hypothermia (CH) and control without hypothermia (CC). Neonatal anoxia protocol started 24 hours after birth, using a semi-hermetic chamber saturated with nitrogen gas. The chamber temperature was maintained at 37°C and the time of exposure to anoxic conditions was 25 minutes. Hypothermia treatment started immediately after the anoxia protocol, within a chamber at 30°C, where the newborns remained for 5 hours. At the end of this period, newborns were transferred to a chamber at 37°C for 40 minutes until its recovery. Control treatment for anoxia involved the same protocol except for the nitrogen that was substituted for air. Control treatment for hypothermia involved to maintain the subjects in the same chamber at 37°C for 5 hours. When the animals were 70 days old, they were subjected to the elevated plus maze, in order to evaluate their anxiety, locomotor activity and aversive memory. Subsequently, when the animals were 75 days old, their spatial memory was evaluated in the Morris Water Maze. Finally, when the animals were 115 days old, they were subjected to an auditory and contextual fear conditioning task. Neonatal anoxia did not interfere with anxiety as evaluated in the elevated plus maze. In contrast, hypothermia by itself increased risk assessment behavior in the elevated plus maze. Performance in the Morris water maze task indicated that hypothermia prevents anoxia-induced disruption of spatial memory. Extinction of both auditory and contextual fear conditioning were slowed by anoxia, and this effect was prevented by hypothermia treatment. Therefore, the present experiments show that hypothermia prevents anoxia-induced (1) disruption of spatial memory and (2) slowing of extinction of fear conditioning; however, by itself, hypothermia increases risk assessment, in rats

O trauma constitui importante problema de saúde pública, com grande impacto sócio-econômico e muitas mortes. Visto que poucos pesquisadores traçam perfil epidemiológico e fatores preditores de óbito de forma integrada e prospectiva, este estudo foi idealizado com o objetivo de identificar preditores independentes de mortalidade em trauma e seu mapeamento populacional, visando melhorar o atendimento a politraumatizados graves. Após aprovação da comissão de ética em pesquisa institucional, estudo longitudinal, prospectivo e observacional foi conduzido entre 2010 e 2013 na região metropolitana da Grande São Paulo/Brasil com vítimas de politrauma grave (Injury Severity Score >15). A coleta de dados clínico-laboratoriais foi realizada em 4 momentos: 1- pré-hospitalar, 2- sala de emergência, 3- após 3 horas da admissão e 4- após 24 hs da admissão. O desfecho principal foi mortalidade em 30 dias. Os dados foram analisados com teste t de Student ou Mann-Whitney, ANOVA não paramétrica, e Equações de Estimação Generalizadas (EEG) para medidas repetidas (p < 0,05). A população total do estudo foi de 334 pacientes, sendo excluídos 124 por não adequação ao protocolo e incluídos 200 indivíduos na análise final. Os preditores independentes de mortalidade encontrados foram: saturação arterial de oxigênio de hemoglobina (OR=0,989; IC 95% 0,982-0,995- p < 0,001), pressão arterial diastólica (OR=0,998; IC 95% 0,995-0,998- p < 0,001), nível sérico de lactato (OR=1,046; IC 95% 1,012-1,082- p < 0,004), pontuação na escala de coma de Glasgow (OR=0,973;IC 95% 0,965-0,982-p < 0,001), quantidade de cristalóides infundidos (OR=1,013; IC 95% 1,000-1,025- p < 0,023 - a cada 1000 ml). Através das análises realizadas neste estudo foi possível concluir que os preditores independentes de mortalidade foram: hipoxemia, hipotensão arterial diastólica, hiperlactatemia, baixa pontuação na escala de coma de Glasgow e aumento de volume de cristalóides infundidos / Trauma is an important public health problem, with high socioeconomic impact and major adverse clinical outcomes. The epidemiological profile and predictors of death in trauma patients have not been addressed in an integrated and prospective way. Therefore, the present study was designed to identify independent predictors of mortality in trauma patients and their populational mapping to improve the care of severe polytrauma patients. After approval by the ethics in institutional research committee, the present longitudinal, prospective and observational study was conducted between 2010 and 2013 in the metropolitan area of São Paulo/Brazil with victims of severe polytrauma (Injury Severity Score >15). The collection of clinical and laboratory data was performed at 4 different time points: 1, pre-hospital; 2, in the emergency room; 3, at 3 hours after admission; and 4, at 24 hours after admission. The primary outcome was mortality within 30 days. The data were analyzed with Student\'s t-test or the Mann-Whitney test, nonparametric ANOVA and Generalized Estimating Equations (GEE) for repeated measures (p < 0.05). The total study population consisted of 334 patients. In total, 124 patients were excluded for not fitting the protocol, and 200 individuals were included in the final analysis. The independent predictors of mortality were as follows: arterial hemoglobin oxygen saturation (OR=0.989, 95% CI 0.982-0.995, p < 0.001); diastolic blood pressure (OR=0.998, 95% CI 0.995-0.998, p < 0.001); serum lactate level (OR=1.046, 95% CI 1.012- 1.082, p < 0.004); score on the Glasgow coma scale (OR=0.973, 95% CI 0.965-0.982, p < 0.001); and the amount of infused crystalloid (OR=1.013, 95% CI 1.000-1.025, p < 0.023 - each 1000 ml). Through the analyses performed in this study, it was concluded that the independent predictors of mortality at any given time were as follows: hypoxemia; diastolic arterial hypotension; hyperlactatemia; a low score on the Glasgow coma scale; and volume of infused crystalloid

Introdução: Pneumopatias que cursam com hipóxia crônica, como a doença pulmonar obstrutiva crônica, podem ser acompanhadas por alterações cognitivas secundárias a queda prolongada da saturação de oxigênio. Objetivo: 1) Averiguar se existem alterações cognitivas nos pacientes com fibrose pulmonar idiopática; 2) Caso estejam presentes, avaliar o seu perfil neuropsicológico e 3) Verificar se há correlação entre a gravidade da doença e desempenho cognitivo. Métodos: Vinte e um pacientes com diagnóstico de fibrose pulmonar idiopática foram selecionados do Ambulatório de Doenças do Interstício Pulmonar da Divisão de Pneumologia do Hospital das Clínicas da USP e foram submetidos a exame neurológico convencional, testes laboratoriais, neuroimagem, avaliação neuropsicológica abrangente e prova de função pulmonar. O grupo controle consistiu de vinte indivíduos não dementes clinicamente saudáveis equiparados por sexo, idade, escolaridade e nível sócio-econômico com o grupo anterior. Resultados: Os resultados do Mini-exame do estado mental, fluência verbal (categoria frutas), Teste de memória de figuras-aprendizado, Teste de dígito-símbolo e o Teste de trilhas parte B apresentaram diferença entre os dois grupos (p < 0,05). Conclusões: O estudo mostrou que os pacientes com fibrose pulmonar idiopática apresentam desempenho pior que o grupo controle em testes de funções executivas e velocidade de processamento mental, o que vai ao encontro com a hipótese de uma encefalopatia do tipo subcortical, semelhante àquela encontrada em pacientes com outras doenças pulmonares que cursam com hipóxia. É necessária a confirmação desses resultados com testes de tempo de reação mais precisos / Background: Lung disease with hypoxaemia as chronic pulmonary obstructive disease may be associated with cognitive impairment caused by continuous fall in oxygen saturation. Objective: 1) to identity if there is cognitive impairment in patients with idiopathic pulmonary fibrosis; 2) if present, to evaluate the neuropsychological profile of these alterations and 3) to verify if there is correlation of disease severity and cognitive performance. Methods: Twenty-one patients with idiopathic pulmonary fibrosis were selected from the Interstitial Lung disease Out-patient Clinic and were submitted throughout conventional neurological exam, blood lab, neuroimaging, broad neuropsychological and lung function evaluation. The control group consisted of twenty non-demented healthy subjects paired by gender, age, schooling and socio-economic level. Results: The Mini-mental state examination, Semantic verbal fluency (fruit category), learning item of the Brief Cognitive Battery, Digit symbol test and Trail making part B results were different between both groups (p < 0.05). Conclusions: This study showed that patients with IPF performed worse in tests of executive functions and mental speed, which is congruent with the hypotheses of encephalopathy of subcortical type similar to the one found in patients with other lung hypoxaemic disease. These results should be confirmed with more accurate reaction time tests

Agressões nos períodos críticos do crescimento do sistema nervoso podem modificar os eventos de desenvolvimento. Entre os vários fatores nocivos está a anóxia. O organismo do neonato tem suprimento de energia anaeróbica relativamente rica, foi observado que a acidose ocorre com menor facilidade, propiciam sobrevivência. A proteína de astrócitos, S100<font face=\"Symbol\">b, exerce efeitos parácrinos e autócrinos em neurônios e glia. Sua estimulação promove sobrevivência e proteção neuronal, atuando como fator trófico e neurotrófico. Modelo animal de anóxia neonatal desenvolvido em nosso laboratório, nos revelou ativação neural pela expressão de Fos e alterações comportamentais, o que nos instigou a explorar os efeitos da anóxia nas células da glia no Hipocampo e Núcleo do Trato Solitário. Para sua exposição à anoxia, durante 25 minutos, foi utilizada câmara, saturada com nitrogênio gasoso 100%. Grupos P2 e P7 nas condições: Basal (B), sem estimulo; Sham (S) como controle experimental e Anóxia (A) com falta de oxigênio, foram analisados por S100<font face=\"Symbol\">b-IR com técnicas ABC/DAB e Western blot. Observamos significante diferença de S100<font face=\"Symbol\">b-IR no núcleo do trato solitário, somente no grupo P2 A 2 h em relação ao grupo P2 S 2 h. A reatividade glial de S100<font face=\"Symbol\">b na formação hipocampal (CA1, CA3+CA2 e DG), apresentou diferença significante no grupo anoxia de acordo com o estágio de maturação do animal. A técnica por Western blot em toda a formação hipocampal, apresentou aumento de S100<font face=\"Symbol\">b no grupo A em ambos P2 e P7, a avaliação de um todo foi diferente daquela de áreas especificas. / Attacks to the nervous system at critical growth periods can modify developmental events. Among the various harmful factors at is anoxia. The high anaerobic energy supply to the newborn and a less easily acidosis occurrence provides survival. The astrocyte S100<font face=\"Symbol\">b protein exerts paracrine and autocrine effects on neurons and glia. Its stimulation promotes neuronal survival and protection, as a trophic and neurotrophic factor. An animal model of neonatal anoxia improved in our lab revealed neural activation by Fos expression and behavioral changes, which prompted us to explore the anoxia effects on glial cells in the Hypocampus and Nucleus of Solitary Tract. For their exposure to anoxia, a chamber, saturated with 100% nitrogen gas, for 25 minutes were used. Groups with P2 and P7, conditions: Baseline, without stimulation; Sham as the experimental control, and Anoxia with lack of oxygen, were evaluated by S100<font face=\"Symbol\">b-IR by ABC/DAB and Western blot techniques. The nucleus of solitary tract, significant different S100<font face=\"Symbol\">b-IR observed, only in the P2 A 2 h compared to P2 S 2 h. The glial S100<font face=\"Symbol\">b-IR at the hippocampal formation (CA1, CA2 + CA3 and DG) presented significant difference in the anoxic group according to the maturational stage of the animal. Western blot technique of the entire hippocampal formation, showed increase of S100<font face=\"Symbol\">b at the group A at both P2 and P7, the whole evaluation was different from of that of specific areas.

A anóxia neonatal considerada relevante condição clínica mundial e vem sendo estudada no laboratório de Neurociências, ICB-USP, desde 2008. Agressões em períodos críticos de maturação do organismo, em especial do sistema nervoso, devido à sua alta demanda metabólica, podem modificar ou mesmo comprometer eventos ontogenéticos com complicações persistentes na vida adulta, sendo relacionada a retardo cognitivo e comportamental, tais como: epilepsia, déficit de atenção, hiperatividade, problemas de aprendizado, entre outros. Em ratos adultos ocorreu morte neuronal por apoptose e necrose, decréscimo da neurogênese e do volume no hipocampo após anóxia neonatal. Experimentos comportamentais evidenciaram alterações também na capacidade de aprendizagem, navegação espacial e ansiedade. Foi observado, que esse estímulo provoca retardo no desenvolvimento sensório-motor, além de ganho de peso em relação ao controle, e aumento do diâmetro rostro-caudal e naso-anal. A fim de avaliar as causas de alterações somáticas e de desenvolvimento, decidiu-se aprofundar, neste estudo, a análise da relação do hipotálamo e da leptina com as mesmas, e com o metabolismo energético assim como, com o crescimento do organismo. Para tanto, foram utilizados camundongos leptin reporters, os quais apresentam os receptores para leptina naturalmente fluorescentes. Foi adaptado modelo para indução de anóxia em camundongos machos por meio de testes de avaliação da ontogenia de reflexos; da pressão de oxigênio no sangue; da frequência cardíaca e dos níveis na Escala de Apgar. Tais testes evidenciaram prejuízos dos animais anoxiados no aparecimento dos reflexos de aceleração, geotaxia negativa, recuperação de decúbito e resposta ao susto; diminuições significativas de pressão de oxigênio e batimentos cardíacos durante período de exposição ao ambiente anóxico, além de níveis indicativos de ausência de oxigênio quando avaliados os fatores que compõe a escala de Apgar, em relação aos animais controle, validando o modelo para este estudo. Em seguida, foram analisados grupos anóxia macho e fêmea e controle macho e fêmea com relação a parâmetros corpóreos durante 60 dias de vida dos animais. Foi evidenciado que a anóxia neonatal afeta os parâmetros de maneiras distintas, porém em todas as análises, o grupo anóxia macho apresentou dimensões aumentadas em relação aos outros grupos. Quando comparada a co-localilzação de fos com receptores de leptina fluorescentes ativados, os resultados obtidos sugerem que apesar de não ter sido detectado diferença de valores de leptina circulante no sangue, houve alteração de peso corpóreo nos animais anóxia, em relação ao seu controle, o que se atribui a possível resistência dos receptores de leptina dos núcleos arqueado e dorsomedial, hipótese que deve ser explorada em experimentos futuros. / Neonatal anoxia is considered a relevant clinical condition and has been studied in the Neuroscience Laboratory, ICB-USP, since 2008. Damage caused to an organism during its maturation, particularly the damage that affects the high-metabolic nervous system, can modify or even compromise ontogenetic events with persistant complications in adulthood. Such complications are related to cognitive and behavioral retardation, and some known examples are: epilepsy, attention deficit, hyperactivity and learning problems. In adult rats, neuronal death occurs due to apoptosis, necrosis, decreased neurogenesis and decreased volume in the hippocampus after neonatal anoxia. Behavioral experiments also revealed changes in learning ability, spatial navigation and anxiety. It was also observed that neonatal anoxia causes delay in sensorimotor development, besides weight gain in relation to the control, and increase in the rostrocaudal and naso-anal diameter. In order to evaluate the causes of such somatic and developmental changes, this study analyzed the relationship between the hypothalamus and leptin, as well as their relationship with energy metabolism and the growth of the organism. Leptin reporter mice were used, which present naturally fluorescent leptin receptors. The anoxia model was adapted for male mice by means of the following tests: evaluation of the ontogeny of reflexes, the oxygen pressure in the blood, the heart rate and the levels on the Apgar Scale. These tests revealed damages to the anoxic animals by the appearance of different reflexes: acceleration, negative geotaxis, recovery of decubitus and response to scare; there was significant decrease in oxygen pressure and heart rate during exposure to the anoxic environment, in addition to levels in the Apgar scale which are indicative of oxygen absence when contrasted with control. Male and female anoxic groups and control were analyzed with respect to body parameters for a period of 60 days, and evaluated of leptin levels, Nissl staining and c-fos cell count by stereology performed. It was verified that neonatal anoxia affected the parameters in different ways, but overall the male anoxic group presented increased dimensions in relation to the other groups. Results obtained from the co-localization of fos and activated fluorescent leptin receptors suggest that, although it is not possible to observe differences in leptin values in the blood, the change in body weight of anoxic animals was due to a lack of activation of leptin receptors in arched and dorsomedial nuclei, suggesting a resistance to the effects of this hormone, hypothesis that should be explored in future experiments.

O trauma constitui importante problema de saúde pública, com grande impacto sócio-econômico e muitas mortes. Visto que poucos pesquisadores traçam perfil epidemiológico e fatores preditores de óbito de forma integrada e prospectiva, este estudo foi idealizado com o objetivo de identificar preditores independentes de mortalidade em trauma e seu mapeamento populacional, visando melhorar o atendimento a politraumatizados graves. Após aprovação da comissão de ética em pesquisa institucional, estudo longitudinal, prospectivo e observacional foi conduzido entre 2010 e 2013 na região metropolitana da Grande São Paulo/Brasil com vítimas de politrauma grave (Injury Severity Score >15). A coleta de dados clínico-laboratoriais foi realizada em 4 momentos: 1- pré-hospitalar, 2- sala de emergência, 3- após 3 horas da admissão e 4- após 24 hs da admissão. O desfecho principal foi mortalidade em 30 dias. Os dados foram analisados com teste t de Student ou Mann-Whitney, ANOVA não paramétrica, e Equações de Estimação Generalizadas (EEG) para medidas repetidas (p < 0,05). A população total do estudo foi de 334 pacientes, sendo excluídos 124 por não adequação ao protocolo e incluídos 200 indivíduos na análise final. Os preditores independentes de mortalidade encontrados foram: saturação arterial de oxigênio de hemoglobina (OR=0,989; IC 95% 0,982-0,995- p < 0,001), pressão arterial diastólica (OR=0,998; IC 95% 0,995-0,998- p < 0,001), nível sérico de lactato (OR=1,046; IC 95% 1,012-1,082- p < 0,004), pontuação na escala de coma de Glasgow (OR=0,973;IC 95% 0,965-0,982-p < 0,001), quantidade de cristalóides infundidos (OR=1,013; IC 95% 1,000-1,025- p < 0,023 - a cada 1000 ml). Através das análises realizadas neste estudo foi possível concluir que os preditores independentes de mortalidade foram: hipoxemia, hipotensão arterial diastólica, hiperlactatemia, baixa pontuação na escala de coma de Glasgow e aumento de volume de cristalóides infundidos / Trauma is an important public health problem, with high socioeconomic impact and major adverse clinical outcomes. The epidemiological profile and predictors of death in trauma patients have not been addressed in an integrated and prospective way. Therefore, the present study was designed to identify independent predictors of mortality in trauma patients and their populational mapping to improve the care of severe polytrauma patients. After approval by the ethics in institutional research committee, the present longitudinal, prospective and observational study was conducted between 2010 and 2013 in the metropolitan area of São Paulo/Brazil with victims of severe polytrauma (Injury Severity Score >15). The collection of clinical and laboratory data was performed at 4 different time points: 1, pre-hospital; 2, in the emergency room; 3, at 3 hours after admission; and 4, at 24 hours after admission. The primary outcome was mortality within 30 days. The data were analyzed with Student\'s t-test or the Mann-Whitney test, nonparametric ANOVA and Generalized Estimating Equations (GEE) for repeated measures (p < 0.05). The total study population consisted of 334 patients. In total, 124 patients were excluded for not fitting the protocol, and 200 individuals were included in the final analysis. The independent predictors of mortality were as follows: arterial hemoglobin oxygen saturation (OR=0.989, 95% CI 0.982-0.995, p < 0.001); diastolic blood pressure (OR=0.998, 95% CI 0.995-0.998, p < 0.001); serum lactate level (OR=1.046, 95% CI 1.012- 1.082, p < 0.004); score on the Glasgow coma scale (OR=0.973, 95% CI 0.965-0.982, p < 0.001); and the amount of infused crystalloid (OR=1.013, 95% CI 1.000-1.025, p < 0.023 - each 1000 ml). Through the analyses performed in this study, it was concluded that the independent predictors of mortality at any given time were as follows: hypoxemia; diastolic arterial hypotension; hyperlactatemia; a low score on the Glasgow coma scale; and volume of infused crystalloid

Infusões de células T e células NK (Natural Killer) de sangue periférico estão sendo realizadas para tratamento de malignidades. Os linfócitos propagados ex vivo, em normóxia (20% O2), são intravenosamente infundidos e precisam sobreviver a hipóxia associada a circulação venosa, da medula óssea (5% O2) e do microambiente tumoral (1% O2). O objetivo principal deste estudo foi determinar a capacidade proliferativa das células humanas T e NK em normóxia (20% O2) versus hipóxia (1% O2), por 28 dias, utilizando uma célula apresentadora de antígeno artificial (aAPC) para propagação em grau clínico. As células T expostas a hipóxia cresceram 100 vezes menos que as células T cultivadas em normóxia, enquanto que houve uma diminuição de 1000 vezes na taxa proliferativa das células NK hipóxicas, que exibiram um aumento na apoptose bem como um prejuízo na citotoxicidade. Hipóxia também induziu uma diminuição na expressão dos receptores KIR, NCR e NKG2D das células NK. Nesta mesma condição, a produção de IL-2 e IFNγ nas células T estavam diminuídas, sendo que nas células NK esse efeito foi mais acentuado. Hipóxia aumentou a expressão de genes relacionados com apoptose, angiogênese e metabolismo glicolítico, os quais estavam moderadamente aumentados nas células T, mas profundamente super-regulados nas células NK. Os níveis de ATP nas células T foram muito similares em ambas as condições de oxigênio, mas intensamente diminuídos nas células NK cultivadas em hipóxia. Também se observou, que a expressão do miR-210 induzido por hipóxia, estava super regulada nas células NK hipóxicas correlacionando com a perda da expressão da molécula NCAM/CD56. Em conjunto, os resultados deste estudo demonstram um maior impacto da hipóxia sobre as atividades proliferativas e citotóxicas das células NK estimuladas por aAPCs. Estudos adicionais são necessários para o entendimento do impacto deste comportamento das células NK em condições hipóxicas sobre a imunoterapia celular adotiva. / Infusions of T cells and natural killer (NK) cells from peripheral blood (PB) are being undertaken for the treatment of malignancies. Lymphocytes are propagated ex vivo in normoxia (20% O2) and intravenously infused and must survive hypoxia associated with venous blood and bone marrow (5% O2), and the tumor environment (1% O2). The objective this study was to determine the ability of T and NK cells to proliferate under normoxia (20% O2) versus hypoxia (1% O2) over 28 days using an artificial antigen presenting cells (aAPC) to propagate clinical-grade lymphocytes. T cells continuously exposed to 4 weeks of hypoxia grew at a rate of 100-fold less than T cells cultured in normoxia while the proliferative rate of NK cells lagged by 1,000-fold, behind normoxic conditions. Hypoxic cultured NK cells exhibit an increase in apoptosis as well as a correspondent impairment in cytotoxicity. In low oxygen tension the expression of KIR, NCR, and NKG2D receptors were decreased in NK cells. In hypoxia, the production of IL-2 and IFNγ were decreased in T cell and more so in NK cell. Chronic hypoxia increased the expression of related apoptosis, glycolytic metabolism and angiogenesis genes which were moderately increased in T cells but profoundly upregulated in NK cells. ATP levels in T cell were very similar in both oxygen conditions, but profoundly diminished in NK cells under hypoxia. We also noted that hypoxia inducible miR-210 levels are up regulated in hypoxic NK cells correlating with loss of CD56 expression. Taken together, this data show that a greater impact of hypoxia on proliferative and cytotoxic activity of NK cells activated by artificial antigen-presenting cells. More studies are needed to understand the impact of this behavior on the cell adoptive immunotherapy.

Introdução: Apneia do sono é uma doença respiratória crônica com alta prevalência que causa múltiplas interrupções respiratórias, levando à hipóxia intermitente (HI). A HI culmina com a geração de radicais livres, estresse oxidativo, inflamação e esteatose hepática. A Melatonina (MEL) e N-acetilcisteína (NAC), são potentes antioxidantes, capazes de inibir esses radicais livres e o estresse oxidativo. Objetivos: Investigar o mecanismo de inflamação em um modelo de hipóxia intermitente que simule a apneia do sono, avaliando-se o fígado e o pulmão, as respostas aos tratamentos com MEL e NAC frente às alterações oxidativas e inflamatórias no fígado de camundongos. Métodos: Utilizamos 120 camundongos machos, adultos, divididos em três experimentos: avaliação do modelo experimental (n=36), avaliação inflamatória molecular em fígado e pulmão (n=12) e avaliação molecular em camundongos com uso de antioxidantes (n=72). Para a hipóxia intermitente foi utilizado o sistema de câmaras que mantêm os roedores em um equipamento que simula a apneia do sono, durante oito horas diárias. No primeiro experimento avaliaram-se as alterações hepáticas em dois momentos, com 21 dias de exposição e 35 dias de exposição à HI. Nos demais experimentos foram utilizados o mesmo sistema durante 35 dias de exposição. No terceiro experimento, a partir do 21° dia iniciaram-se a administração intraperitoneal dos antioxidantes (MEL-200uL/Kg) e NAC-10mg/Kg). Resultados: Foi verificado que o tempo de 21 dias de exposição, não foi encontrado alterações nos fígados dos camundongos. Nos animais expostos durante 35 dias à HI, contatou-se a presença de estresse oxidativo, com aumento de dano oxidativo a lipídios e ao DNA e a redução das defesas antioxidantes, e aumento significativo de metabólitos de óxido nítrico (NO), além da presença de lesão tecidual na histologia hepática. Nos pulmões e nos fígados dos camundongos submetidos à HI, contatou-se a presença de estresse oxidativo, e aumento de expressão de fatores de transcrição: hipóxia induzível (HIF-1α), nuclear (NF-κB) e necrose tumoral (TNF-α), como mediadores inflamatórios, bem como elevação da expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e fator de crescimento vascular endotelial (VEGF), como mediadores de resposta vascular, e Caspase 3 clivada, como enzima responsável pela apoptose. Nos animais que foram tratados com MEL e NAC, houve redução significativa, nos fígados, de todas proteínas que apresentaram-se elevadas expressões do grupo exposto sem tratamento, assemelhando-se aos controles. Conclusão: Sugerimos que o tempo necessário de hipóxia intermitente, que simule a apneia do sono, para lesão hepática e estresse oxidativo seja de 35 dias, nesse tempo de exposição sabemos que tanto o pulmão quanto o fígado possuem estresse oxidativo, inflamação e apoptose, e que o uso de Melatonina e N-acetilcisteína foram capazes de proteger os fígados dessas agressões. / Introduction: Sleep apnea is a chronic respiratory disease with high prevalence causing multiple interruptions in breathing, leading to intermittent hypoxia (IH). The IH culminates with the generation of free radicals, oxidative stress, inflammation and hepatic steatosis. Melatonin (MEL) and N-acetylcysteine (NAC) are potent antioxidants, capable of inhibiting these free radicals and oxidative stress. Objectives: To investigate the mechanism of inflammation in a model of intermittent hypoxia that simulates sleep apnea, evaluating the liver and lung, responses to treatment with MEL and NAC front of oxidative and inflammatory changes in the liver of mice. Methods: We used 120 male mice, adults, divided into three experiments: evaluation of the experimental model (n = 36), inflammatory molecular assessment in liver and lung (n = 12) and molecular evaluation in mice with antioxidants (n = 72) . For intermittent hypoxia was used to maintain camera system rodents in a device that simulates sleep apnea during eight hours. The first experiment evaluated the hepatic changes in two stages, with 21 days of exposure and 35 days of exposure to IH. In other experiments we used the same system for 35 days of exposure. In the third experiment, from day 21 began intraperitoneally administration of antioxidants (MEL-200uL/Kg and NAC-10mg/Kg). Results: It was found that the time of exposure of 21 days, no changes were found in the livers of mice. In animals exposed for 35 days to IH, contacted the presence of oxidative stress, with increased oxidative damage to lipids and DNA and reduction of antioxidant defenses, and a significant increase of metabolites of nitric oxide (NO), and the presence of tissue injury in liver histology. In the lungs and livers of mice subjected to IH, contacted the presence of oxidative stress, and increased expression of transcription factors: hypoxia inducible (HIF-1α), nuclear (NF-κB) and tumor necrosis factor (TNF-α), such as inflammatory mediators and increase the expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and vascular endothelial growth factor (VEGF), vascular response mediators, and cleaved Caspase 3 as enzyme responsible for apoptosis. In animals treated with NAC and MEL, a significant reduction in the livers of all proteins that were elevated expression of the exposed untreated, similarly to controls. Conclusion: We suggest that the time required for intermittent hypoxia, simulating sleep apnea, to liver damage and oxidative stress is 35 days exposure at this time we know that both the lungs and the liver have oxidative stress, inflammation and apoptosis, and the use of Melatonin and N-acetylcysteine were able to protect the livers of these aggressions.