Orientador: Raquel Fernanda Gerlach / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T11:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_GlauceReginaCostade_D.pdf: 2702175 bytes, checksum: 662776089e445cabdc4c43cd85b1ff92 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Devido ao aumento das evidências de que o desenvolvimento mental das crianças pode ser afetado quando elas apresentam concentrações de chumbo no sangue < 10 $g/dL, estudos a respeito de novos biomarcadores de dose interna são necessários, principalmente para se obter informações em relação à exposição de populações residentes em áreas sem contaminação conhecida pelo chumbo. No Brasil, não existe programa nacional para detecção de crianças contaminadas por este metal, as quais são as mais vulneráveis aos efeitos neurológicos resultantes da exposição crônica a baixas concentrações de chumbo, entretanto, alguns estudos mostraram altas concentrações de chumbo no esmalte superficial de dentes decíduos de crianças brasileiras. Os objetivos deste estudo foram: 1) determinar e correlacionar a concentração de chumbo de crianças residentes no Bairro Campos Elíseos de Ribeirão Preto, no sangue total, soro, saliva e amostras de esmalte superficial in vivo; 2) comparar a concentração de chumbo encontrada nos diferentes biomarcadores de acordo com a presença ou ausência de anemia; 3) avaliar a influência dos polimorfismos da ALAD e VDR nos níveis de chumbo dos diferentes biomarcadores. 444 crianças, com idades entre 6 e 8 anos, participaram deste estudo. Amostras de sangue, soro, saliva total, saliva submandibular e da parótida foram coletadas. Duas microbiópsias de esmalte sucessivas foram realizadas em dente decíduo e permanente, nas quais o fósforo foi determinado colorimetricamente, para calcular sua profundidade. As concentrações de chumbo no sangue, soro, saliva e esmalte dental foram determinadas por espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICPMS). O limite de detecção (LD) do método foi 0,03 $g/L e 0,02 $g/L para o soro e saliva, respectivamente. A concentração de hemoglobina foi determinada pelo contador de células Micros - ABX. Os genótipos para os polimorfismos da ALAD e VDR foram determinados por PCR e enzimas de restrição. Para a realização das análises de correlação, as crianças foram divididas em 2 grupos de acordo com a concentração de chumbo no sangue (< 4 and = 4 $g/dL) e no esmalte dental (< 400 e = 400 $g/g). O nível de significância utilizado em cada uma das estatísticas foi de 0,05. Os níveis de chumbo no sangue e no soro variaram de 0,2 a 9,4 (mediana, 2,1) $g/dL e < LD a 2,6 (mediana, 0,4) $g/L, respectivamente. Dez por cento das crianças apresentaram concentração de chumbo no sangue = 4 $g/dL. Os meninos mostraram quantidades de chumbo no sangue total significantemente maiores do que as meninas (2,3 versus 2,0 $g/dL, p<0.0003). As concentrações de chumbo na saliva total, sublingual e parótida foram 1,7; 1,4 e 1,3 $g/L, respectivamente. Não houve correlação entre a concentração de chumbo no sangue e soro e nem entre chumbo no sangue e saliva. Também não encontramos correlação entre concentração de chumbo no soro e saliva. Nas profundidades de 3,1 e 7,0 $m, a mediana da concentração de chumbo, para a primeira e segunda microbiópsias nos decíduos, foi 109,3 e 45,9 $g/g, respectivamente. Para a primeira e segunda microbiópsias nos permanentes, a mediana da concentração de chumbo foi de 308,3 e 99,7 $g/g, respectivamente, e a mediana de suas profundidades 2,9 e 6,0 $m, respectivamente. Não houve correlação entre concentração de chumbo no sangue e no esmalte dental. Nove (n= 35) e 3% (n= 12) das crianças apresentaram concentração de chumbo = 400 $g/g na superfície do esmalte decíduo, para a primeira e segunda microbiópsias, respectivamente, e 33 (n= 92) e 7% (n= 18) tiveram chumbo = 400 $g/g no esmalte permanente, para a primeira e segunda microbiópsias, respectivamente. Uma forte e significante correlação entre chumbo no plasma e no esmalte foi encontrada apenas para crianças que possuíam concentração de chumbo no esmalte superficial = 400 $g/g (r= 0,65, p< 0,0001, para decíduos e 0,51, p< 0,0001, para permanentes). Além disso, não encontramos correlação entre chumbo no esmalte e chumbo nas salivas. Nenhuma diferença estatística foi encontrada entre a distribuição dos alelos da ALAD e VDR (para os polimorfismos BsmI, ApaI e FokI) e chumbo no sangue, soro e esmalte. Nossos resultados mostram uma exposição indevida ao metal na população de 6-8 anos, residente no bairro dos Campos Elíseos (Ribeirão Preto, SP), com 10% das crianças com concentração de chumbo no sangue entre 4,0 e 9,4 $g/dL. Uma forte e significativa correlação foi encontrada somente entre a concentração de chumbo no soro e no esmalte dental, nas crianças que foram mais expostas ambientalmente ao metal. Os dados sugerem que as fontes em que as crianças estão expostas ao chumbo merecem mais estudos no Brasil, assim como dados de concentrações do metal no sangue total de crianças mais novas, pois já está descrito que os níveis de chumbo no sangue < 10 $g/dL podem causar danos neurológicos às crianças. / Abstract: With increasing evidence of adverse health effects of lower levels of lead (below 10 $g/dL in whole blood), studies on novel internal dose biomarkers are needed. In Brazil, some studies showed high amounts of lead in the superficial enamel of deciduous enamel. The aim of this study was 1) to determine and to correlate the lead concentration in children living in Campos Elíseos district (in Ribeirao Preto, SP, Brazil), in whole blood (BL), serum, saliva, and surface enamel; 2) to correlate lead concentrations found using these biomarkers with anemia; 3) to evaluate the influence of ALAD and VDR polymorphisms on lead concentrations in these biomarkers. 444 children aged 6-8 years were enrolled in this study. BL, serum, parotid, submandibular and whole saliva were collected in trace element free tubes. Two successive acid etch enamel microbiopsies were performed on one deciduous and one permanent teeth. Phosphorus was colorimetrically determined to calculated microbiopsy depth. Lead concentrations were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS). The detection limit (DL) was 0.03 $g/L (serum) and 0.02 $g/L (saliva). The hemoglobin level was determined by an automated cell counter (Micros - ABX). Genotypes for the ALAD and VDR polymorphism were determined by PCR and restriction fragment length digestion. For correlations, children were subdivided in two groups according to BL concentration (< 4 and = 4 $g/dL) and enamel lead concentration (< 400 and = 400 $g/g). Statistical significance was accepted when p< 0.05. BL and serum lead levels ranged from 0.2 to 9.4 (median, 2.1) $g/dL and < DL to 2.6 (median, 0.4) $g/L, respectively. 10% of the children showed BL above 4 $g/dL. Boys showed higher BL concentrations than girls (2.3 versus 2.0 $g/dL, p< 0.0003). Lead concentrations in whole, sublingual and parotid saliva were 1.7, 1.4 and 1.3 $g/L, respectively. No correlations between BL and serum, and between BL and saliva lead concentrations were found, nor between serum lead versus whole, sub and parotid lead values. The median lead concentrations found in the first and second deciduous tooth enamel microbiopsy were 109.3 and 45.9 $g/g, respectively, when median biopsy depths were 3.1 and 7.0 $m. For the first and second microbiopsies in permanent teeth, median lead concentrations were 308.3 and 99.7 $g/g, respectively, and median biopsy depths were 2.9 and 6.0 $m, respectively. There was no correlation between BL and enamel lead. Nine % (n= 35) and 3% (n= 12) of the children showed surface enamel lead levels in the first and second deciduous enamel microbiopsy = 400 $g/g, respectively, and 33% (n= 92) and 7% (n= 18) had lead = 400 $g/g in the first and second permanent enamel microbiopsies, respectively. A significant correlation between serum and enamel lead levels was found for children with surface enamel lead concentrations = 400 $g/g (r= 0.65, p< 0.0001 for deciduous and 0.51, p< 0.0001 for permanent teeth). No correlation was found between lead content in enamel and saliva. No difference between the distribution of ALAD alleles and among VDR alleles (for BsmI, ApaI and FokI polymorphisms) and BL, serum and enamel lead levels was found. In conclusion, our data showed an undue exposure in the study population of 6-8-yearsold children living in Campos Elíseos (Ribeirão Preto, SP), as observed in the BL and enamel samples. We found a strong correlation between serum and enamel lead levels only for children who were probably more exposed to lead. Our data suggests that sources of exposure to lead by children deserve further studies in Brazil, as well as the BL lead levels of younger children. / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Celio Kenji Miyasaka / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-08T22:13:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_ElisvaniaFreitasdos_M.pdf: 2673339 bytes, checksum: 01f9989c4a79dc7f5bd8198db02dde80 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O câncer gástrico é o crescimento desordenado de células malignas nos tecidos do estômago e a cirurgia de ressecção gástrica parcial ou total é a principal alternativa terapêutica. Em decorrência deste procedimento cirúrgico podem ocorrer deficiências na absorção de alguns minerais como o cálcio e o ferro, podendo levar a osteoporose e a anemia, respectivamente. Os galactooligossacarídeos (GOS) e a polidextrose (POLI) são componentes fermentáveis que diminuem o pH intestinal favorecendo a absorção de minerais, melhorando a biodisponibilidade. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi verificar o efeito da suplementação desses compostos na absorção do mineral cálcio e ferro em ratos gastrectomizados. Ratos adultos foram submetidos a um procedimento cirúrgico de gastrectomia associado à vagotomia troncular anterior sendo divididos em dois grupos: gastrectomizados (GXT) e falso gastrectomizados (SHAM). Após 15 dias de pós-operatório foram divididos em oito sub-grupos:(G1= GXT / C1=Sham: dieta sem prebiótico; G2=GXT / C2=Sham: GOS 5%; G3=GXT / C3=Sham: POLI 5%; G4=GXT /C4=Sham: GOS 2,5% + POLI 2,5%). Os animais gastrectomizados apresentaram menor consumo de dieta, porém sem diferença com relação ao peso. As dosagens de cálcio sérico e urinário foram menores nos animais gastrectomizados. A gastrectomia diminuiu a absorção aparente de cálcio, sendo que, a administração diária de GOS 5% e a POLI 5% aumentaram a absorção aparente de cálcio em C2 (48%) e C3 (52%) comparados ao C1. O procedimento cirúrgico diminuiu a absorção aparente de ferro em 60%. No entanto, em relação aos tratamentos a associação do GOS + POLI 2,5% aumentou em 52% a absorção de ferro no grupo C4 e 100% no G4. Além disso, o G4 apresentou a mesma absorção dos ratos que não sofreram nenhum tipo de tratamento e nem a cirurgia (C1). A POLI 5% também aumentou a absorção aparente de ferro em 73% em ratos GXT. Os animais do grupo Sham mantiveram os níveis de hematócrito e hemoglobina durante o período experimental. Já nos animais GXT, todos os tratamentos apresentaram redução de 14% nos níveis de hematócrito do tempo inicial à quarta semana. A partir da quarta semana, todos animais GXT apresentaram uma leve tendência de recuperação, contudo os animais do grupo Poli 5% (G3) apresentaram uma plena recuperação. As dosagens de VCM e HCM foram menores nos animais GXT vs CO durante as 8 semanas do experimento, caracterizando uma anemia por deficiência de ferro (microcítica e hipocrômica), respectivamente. A concentração de ferro sérico foi menor nos animais GXT. A suplementação dos dois prebióticos aumentou em 15% o ferro sérico dos animais C4 em relação ao C1. Nos animais GXT o G3 em 51% e G4 em 94% foram maiores do que o G1. A ressecção gástrica parcial não apresentou grandes alterações no metabolismo de cálcio, sugerindo que esse protocolo experimental não seja o melhor modelo para a depleção de cálcio. A ressecção gástrica parcial induziu à má absorção de ferro, comprovando a eficiência do nosso modelo experimental para estudos relacionados ao metabolismo do ferro e há fortes evidências que a junção dos dois prebióticos GOS e POLI atuem como sinergistas, potencializando o efeito prebiótico / Abstract: The gastric cancer is a uncontrolled growth of the cells of the stomach, where the total or parcial gastric surgical resection is the main therapeutic alternative. Due to this procedure, the deficiencies in the absorption of some minerals such as calcium and iron could lead to an osteoporosis and anemia, respectively. The galactooligossacharides (GOS) and the polidextrose (POLI) are fermentable compounds that reduce the intestinal pH increasing the mineral absorption. Thus the purpose of this study was to verify the effects of supplementation of this compound in the absorption of calcium and iron in gastrectomized rats. Adult male rats were submitted to a gastrectomized surgical procedure associated to an anterior troncular vagotomy, them shared in two groups: gastrectomized (GXT) and Sham operated (SHAM) rats. After 15 days of surgery, the rats were shared in 8 sub-groups with the following diets: G1= GTX /C1=Sham: diet without prebiotics; G2= GTX /C2=Sham: 5% GOS diet; G3= GTX /C3=Sham: 5% POLI diet and G4= GTX /C4=Sham: 2.5% GOS + 2.5 POLI diet. The gastrectomized animals ingested a minor amount of feed, however this tow groups not showed differences in the body weight. The calcium in the serum and in the urine in the gastrectomized animals were reduced. The gastrectomy reduced the calcium apparent absorption, the daily administration of 5% GOS and 5% POLI increased the calcium apparent absorption in C2 (48%) and C3 (52 %) as compared to C1 group. The surgical procedure reduced the iron apparent absorption in 60%. However, the associated treatment with GOS + POLI 2,5% increased (52%) the absorption of iron in the C4 group and in the G4 group in 100%, as compared to C1 and G1 group respectively. This group also shoed the same absorption of rats which did not suffer any kind of surgery nor treatment (C1). The 5% POLI also presented an increased iron apparent absorption (73%) in GXT rats. The animals of Sham group sustained the hematocrit and hemoglobin during the experimental period. The GXT animals of all of the different diets showed a reduced hematocrit in 14% from the surgery to the 4th week. From the 4th to the 8th week all of the GXT animals showed a slight trend of recuperation, but the animals of 5% POLI group (G3) presented a full replenishment. The mean corpuscular volume (MCV) and the mean hemoglobin volume (MHV) were reducer in the GXT vs Sham animals during the 8 weeks of experimental period, this is a characteristic of anemia by an iron deficiency (microcitic and hypocromic). The concentration of iron in the serum was lower in the GXT animals. The supplementation of these two prebiotics (C4) increased (15%) the iron in the serum, also the GXT animals the G3 (51%) and G4 (94%) higher than the G1 group. The partial gastric resection did not showed sensible alteration in the calcium metabolism, suggesting that this protocol may not be the best model to the calcium depletion, however, it induced to a poor iron absorption proving the efficiency of our experimental model to the studies related to the iron metabolism and there are strong evidences that the association of GOS and POLI could have a synergistic effect increasing the effects of the prebiotics / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Introdução: Anemias hemolíticas induzidas por fármacos (AHIF) são caracterizadas por uma anemia hemolítica imune após exposição a um fármaco. Testes sorológicos têm o potencial de confirmar a presença de anticorpo contra fármacos, mas a realização destes testes ainda é um desafio. Os anticorpos IgM e IgG envolvidos na AHIF são principalmente de dois tipos: fármaco-dependentes e fámaco-independentes. Os anticorpos fármaco-independentes reagem com os eritrócitos \"in vitro\" sem a presença do fármaco, e os resultados imunohematológicos são idênticos aos encontrados nas anemias hemolíticas autoimunes idiopáticas. Anticorpos fármaco-dependentes resultam em teste da antiglobulina direto (TAD) positivo e eluato negativo, os anticorpos só reagem \"in vitro\" com os eritrócitos na presença do fármaco. Indivíduos saudáveis podem desenvolver anticorpos contra fármacos, mesmo na ausência de anemia hemolítica. Os indivíduos podem ser sensibilizados durante exposição prévia a fármacos, exposição a antibióticos usados em ração animal, tanques de piscicultura, berçários de criação de suínos ou tratamento de mastite em bovinos. Estes indivíduos apresentam um maior risco de desenvolvimento de AHIF grave na ocasião de uma segunda exposição ao fármaco. Objetivos: Padronizar testes imunohematológicos para a detecção de anticorpos dirigidos contra fármaco-dependentes. Materiais e métodos: Amostras de 162 doadores de sangue foram submetidas a pesquisa de anticorpos fármaco-dependentes anti-cefalexina, anti-rifampicina e anti-diclofenaco de sódio. Amostra de um doador de plaquetas colhidas por aférese com TAD positivo foi investigada para detecção de anticorpos fármaco-dependentes anti-valsartana. Amostras de 8 pacientes com suspeita diagnóstica de AHIF foram investigadas para a presença de anticorpos contra os fármacos que foram prescritos ao paciente no período de duas semanas prévias ou até o momento em que a hemólise aguda foi constatada. Anticorpos fármaco-dependentes que reagem na presença do fármaco ligado covalentemente à membrana da hemácia, ou na presença do fármaco em solução, foram investigados em doadores de sangue (técnicas em gel) e em pacientes (técnicas em tubo e em gel). Resultados: Os testes laboratoriais detectaram a presença de anticorpo anti-valsartana no eluato de um doador de plaquetas colhidas por aférese com TAD positivo e a presença de anticorpo anti-ceftazidima no soro de um paciente com suspeita clínica de AHIF. A investigação de anticorpo anti-cefalexina e anti-rifampicina foi negativa em amostras de doadores de sangue. O teste laboratorial para investigação de anticorpo anti-diclofenaco de sódio não foi finalizado devido a presença de hemólise em hemácias sensibilizadas com o fármaco e após a adição do fármaco na solução de hemácias. Conclusão: A detecção de anticorpo anti-valsartana em um doador de plaquetas colhidas por aférese evidenciou a presença de anticorpo anti-fármaco na ausência de hemólise. A detecção de anticorpo anti-ceftazidima em amostra de um paciente com anemia hemolítica confirmou a suspeita clínica de AHIF. Reconhecer os sinais clínicos da AHIF precocemente e a disponibilidade de testes sorológicos é essencial para confirmação diagnóstica, orientação terapêutica e prevenção de uma hemólise potencialmente fatal. / Introduction: Drug-induced immune hemolytic anemia (DIHA) is characterized by immune hemolytic anemia following exposure to a drug. Serological testing has the potential to confirm the presence of anti-drug antibodies, but the testing is still a challenge. The IgM and IgG antibodies involved in DIHA comprise mainly two types: drug-dependent and drug-independent. Drug-independent antibodies react with erythrocytes in vitro without the presence of the drug, and the immunohematologic results are identical to those found in idiopathic autoimmune hemolytic anemias. Drugdependent antibodies induce positive direct antiglobulin tests (DAT) and negative eluates, and in vitro antibody reactions with erythrocytes are only detected in presence of the drug. Healthy individuals can develop antibodies against drugs even in the absence of hemolytic anemia. Individuals may be sensitized during previous exposure to drugs, exposure to antibiotics used in animal feed, fish culture ponds, swine nurseries or mastitis treatment in bovines. These individuals present higher risk of developing severe DIHA on the second exposition. Aims: To standardize immunohematological tests for detection of anti-drug dependent antibodies. Materials and methods: Samples from 162 blood donors were tested for anti-cephalexin, anti-rifampicin and antidiclofenac antibodies. Sample from one platelet apheresis donor with positive DAT was investigated for anti-valsartan drug-dependent antibody. Samples from 8 patients with suspected DIHA were investigated for the presence of antibodies directed against the drugs that were prescribed to the patient in the period of two weeks prior to or until the time when acute hemolysis was detected. Drug-dependent antibodies that react in presence of the drug covalently attached to the erythrocyte membrane, or in presence of the drug in solution were investigated in samples from blood donors (gel techniques) and from patients (tube and gel techniques). Results: Laboratory tests detected antivalsartan antibody in the eluate of an platelet apheresis donor with positive TAD and anti-ceftazidime antibody in the serum of a patient with clinical suspicion of DIHA. Investigation of anti-cephalexin and anti-rifampicin antibody was negative in blood donor samples. The laboratory test for anti-diclofenac antibody was not possible due to the presence of hemolysis in erythrocytes sensitized with the drug and when the drug in solution was added to the erythrocyte. Conclusion: The detection of anti-valsartan antibody in an platelet apheresis donor revealed the presence of an anti-drug antibody in the absence of hemolysis. Detection of anti-ceftazidime antibody in a patient with hemolytic anemia confirmed the clinical suspicion of DIHA. It is essential to recognizing early clinical signs of DIHA and have serological tests available for diagnostic confirmation, therapeutic guidance and prevention of potentially fatal hemolysis.

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:46:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_ClaudiaEstela_M.pdf: 1883480 bytes, checksum: 5c9ad07b778588f38de1f644ecd18847 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A Anemia de Fanconi (AF) é uma doença que apresenta herança autossômica recessiva. É caracterizada por múltiplas anomalias congênitas, progressiva falha da medula óssea e alto risco para desenvolvimento de câncer. A mais importante das características clínicas é a manifestação hematológica, responsável pelo grande número de morbidade e mortalidade em portadores de AF. Também é chamada de síndrome da instabilidade cromossômica por apresentar hipersensibilidade a agentes clastogênicos como a mitomicina C e diepoxibutano. A incidência da AF em todo o mundo é de aproximadamente, três por milhão e a frequência de heterozigotos é estimada em um para 300 na Europa e Estados Unidos. No Brasil não há dados sobre a prevalência da doença. Foram descobertos até o momento 13 grupos de complementação (FANCA, B, C, D1, D2, E, F, G, I, J, L, M e N), e os 13 genes foram clonados e pelo menos 11 genes estão relacionados ao distúrbio. O presente estudo teve como objetivo a análise das principais mutações (IVS4+4A>T, Q13X, W22X, DG322, R185X, L496R, L554P, e R548X) do gene FANCC em pacientes com quadro clínico de AF. Foram analisados 121 indivíduos com clínica compatível à AF e com DEB teste positivo. Na amostra encontramos 14% de indivíduos heterozigotos e 4% de indivíduos homozigotos para as mutações mais freqüentes do gene FANCC. As mutações mais prevalentes foram: IVS4+4A>T com 6,6% dos alelos analisados, com freqüência similar à encontrada na literatura, W22X com 2.47% dos cromossomos analisados e Q13X com 1.23% dos cromossomos analisados. Na triagem de mutações pela técnica de SSCP, encontramos alterações nos éxons 1, 4 e 6. / Abstract: Fanconi anaemia (FA) is an autosomal recessive disease characterized by congenital abnormalities, progressive bone marrow failure and high risk of developing cancer. The most important of the clinic feature is hematologic, and too the most important cause of morbidity and mortality in FA. It's also called Chromosomal Instability Syndrome to the fact of cells presents hipersensibility to DNA cross-linking agents like mitomycin C and diepoxybutane. The incidence of FA is approximately three per million and the heterozygote frequency is estimated at 1 in 300 in Europe and United States. In Brazil there's no data about prevalence of FA. It was discovered at least 13 complementation groups (FANCA, B, C, D1, D2, E, F, G, I, J, L, M e N), and 13 genes have been cloned and there are at least 11 that are related to the disease. The study had as general objective the analysis of the main mutations (IVS4+4A>T, Q13X, W22X, DG322, R185X, L496R, L554P, and R548X) of FANCC gene in patients with clinic compatible of FA. We analyzed 121 patients with compatible clinic and positive DEB test. In the sample we found 14% of individuals heterozygous and homozygous individuals of 4% for the most frequent mutations of the gene FANCC. Mutations were more prevalent: IVS4 4 A> T with 6.6% of alleles tested, often similar to that found in the literature, W22X with 2.47% of chromosomes analyzed and Q13X with 1.23% of chromosomes analyzed. In screening for mutations by the technique of SSCP, we found changes in exons 1, 4 and 6. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto, Fernando Ferreira Costa / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T19:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garrido_VanessaTonin_D.pdf: 6610754 bytes, checksum: 9b799d90821835bae6ac5d806b1d2f1c (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A anemia falciforme (AF) é uma hemoglobinopatia hereditária resultante de uma mutação no gene que codifica a subunidade ?-globina, levando à produção da hemoglobina S (HbS) nos eritrócitos. Com a polimerização da HbS, durante a desoxigenação, ocorre a deformação e fragilização das células vermelhas, resultando em anemia hemolítica e eventos vaso-oclusivos. As crises vaso-oclusivas são a principal causa de morbidade nos pacientes com anemia falciforme e as plaquetas parecem ter um papel importante nesse processo, pois uma vez ativadas elas secretam e expressam mediadores que induzem uma resposta inflamatória tanto em leucócitos como em células endoteliais. A proposta deste trabalho foi investigar a produção e expressão dos mediadores inflamatórios derivados de plaquetas, LIGHT e CD40L, em controles (indivíduos saudáveis; CON), pacientes com anemia falciforme (AF) e pacientes com anemia falciforme em terapia com hidroxiureia (AFHU). Também avaliamos o envolvimento das plaquetas e seus mediadores na ativação de leucócitos e células endoteliais. Os níveis plasmáticos de ambas citocinas foram significativamente maiores em indivíduos AF e AFHU do que nos indivíduos controle e, curiosamente, apesar da hidroxiureia ser capaz de diminuir a concentração plasmática de algumas citocinas inflamatórias, a terapia com essa droga não foi associada com qualquer alteração nos níveis de LIGHT ou CD40L. Foi observada uma correlação expressiva da concentração de LIGHT com níveis plasmáticos de CD40L, IL-8, ICAM-1, Trombospondina-1 e TNF-?, enquanto que a concentração plasmática de CD40L correlacionou-se com os níveis de TNF-? e principalmente com Trombospondina-1, indicando que tanto LIGHT como CD40L podem estar participando ou então refletindo a inflamação crônica presente na anemia falciforme. A expressão proteica de LIGHT foi significativamente maior na superfície de plaquetas de indivíduos AF e AFHU em comparação com plaquetas CON e apresentou uma correlação com marcadores de ativação plaquetária. A secreção de LIGHT pelas plaquetas foi determinada por ELISA e concentrações significativas dessa citocina puderam ser detectadas no sobrenadante de plaquetas CON e AF, sugerindo que essas células podem ser uma fonte importante de LIGHT na circulação. Apesar da expressão de CD40L não ter sido detectada na superfície das plaquetas de pacientes e controles, as plaquetas de pacientes AF secretaram uma quantidade maior de CD40L em comparação aos controles e foi observada uma correlação significativa entre a liberação de LIGHT e CD40L em plaquetas de pacientes AF, indicando que pode existir uma associação na secreção dessas duas citocinas. A expressão dos receptores de LIGHT (HVEM e LT?R) e de CD40L (CD40) foi avaliada por citometria de fluxo em plaquetas, neutrófilos, linfócitos e monócitos. Foi observado que o receptor HVEM estava mais expresso em plaquetas e linfócitos de pacientes com anemia falciforme, enquanto que a expressão do receptor CD40 estava elevada nas plaquetas, nos neutrófilos, nos linfócitos e nos monócitos de pacientes, comparando com o grupo controle. Esses dados mostram que a via de sinalização de LIGHT e CD40L pode estar alterada na anemia falciforme, contribuindo com a ativação dos leucócitos. Quando avaliamos a participação das plaquetas na ativação dos leucócitos, observamos que as plaquetas de indivíduos com anemia falciforme foram eficientes em aumentar a expressão do marcador de ativação, CD69, nos linfócitos e também em induzir o fenótipo pró-inflamatório nos monócitos. Enquanto que a co-cultura de HUVECs com plaquetas demonstrou que as plaquetas de pacientes com anemia falciforme possuem uma capacidade maior de induzir a expressão de ICAM-1 em células endoteliais do que as plaquetas de indivíduos controle. Na presença de anticorpos anti-CD40L observamos uma redução drástica no aumento da expressão de ICAM-1 pelas plaquetas e apesar dessa expressão também ter sido reduzida na presença de anticorpos anti-LIGHT, esses resultados não foram estatísticamente significativos. Interessantemente, altas concentrações plasmáticas de LIGHT estavam associadas com a elevada velocidade de regurgitação tricúspide, um indicativo de hipertensão pulmonar na anemia falciforme e uma associação significativa também foi encontrada entre níveis elevados de CD40L e pacientes com histórico de Síndrome Torácica Aguda. Essas evidências sugerem que LIGHT e CD40L parecem estar contribuindo com a ativação dos leucócitos e do endotélio, exercendo um papel importante na fisiopatogenia da anemia falciforme e aparentemente nas manifestações clínicas desta doença. Os resultados encontrados neste estudo evidenciam a importância que as plaquetas e seus mediadores inflamatórios, LIGHT e CD40L, podem ter na propagação da inflamação vascular presente na anemia falciforme, se tornando possíveis alvos para novas abordagens terapêuticas / Abstract: Sickle cell disease results from a single amino acid substitution in the gene encoding the ?-globin subunit, leading to hemoglobin S production in red blood cells. Polymerization of deoxygenated sickle hemoglobin leads to decreased deformability of red blood cells, resulting in hemolytic anemia and vaso-occlusive events. Platelets appear to play an important role in the vaso-occlusive process, as following their activation they express and secrete mediators that induce an inflammatory response in endothelial cells and leukocytes. The purpose of this study was to investigate the production and expression of LIGHT and CD40L on platelets, the presence of this protein in the plasma of controls (healthy subjects; CON), sickle cell anemia patients (AF) and sickle cell anemia patients on hydroxyurea therapy (AFHU). In addition, this study evaluated the involvement of platelets and their mediators, LIGHT and CD40L, in the activation of leukocytes and endothelial cells. Plasma levels of both cytokines were significantly higher in AF and AFHU individuals than in control individuals and interestingly, HU therapy was not associated with a reduction in these levels. A significant correlation was observed between levels of LIGHT with plasma levels of CD40L, IL-8, ICAM-1, Thrombospondin-1 and TNF-?, whereas the plasma concentration of CD40L correlated with levels of TNF-? and especially with plasma Thrombospondin-1. LIGHT expression was significantly higher on the surface of platelets from AF and AFHU subjects, compared with CON individuals and this expression demonstrated a correlation with markers of platelet activation. LIGHT secretion was determined by ELISA and significant concentrations of this cytokine could be detected in the supernatant of platelets from CON and AF individuals, indicating that platelets may be an important source of LIGHT. Although CD40L expression was not detected on the platelet surface in patients or controls, sickle platelets secreted an increased amount of CD40L, compared to controls. A significant correlation was observed between CD40L and LIGHT release in sickle cell patients, indicating that the production of these two proteins may be tightly coupled. The expression of LIGHT (HVEM and LT?R) and CD40L (CD40) receptors was evaluated by flow cytometry on the surface of platelets, neutrophils, lymphocytes and monocytes. An increased HVEM receptor expression was observed on the platelets and lymphocytes of sickle cell patients, whereas the expression of the CD40 receptor was elevated on platelets, neutrophils, lymphocytes and monocytes from sickle cell patients, compared to control subjects. Evaluating the contribution of platelets to leukocyte activation, we observed that platelets from sickle cell anemia individuals increased the expression of the activation marker, CD69, on lymphocytes and also induced a pro-inflammatory phenotype on monocytes. Co-culture of HUVEC with platelets demonstrated that sickle cell platelets have an increased ability to induce ICAM-1 expression on endothelial cells than platelets from control subjects. Furthermore, in the presence of anti-CD40L antibodies, a drastic reduction was observed in this increase. Although the expression of endothelial ICAM -1 was also reduced in the presence of anti-LIGHT antibodies, these results were not statistically significant. Interestingly, high plasma concentrations of LIGHT were associated with elevated tricuspid regurgitant velocity, indicative of pulmonary hypertension in sickle cell anemia. A significant association was also found between high levels of CD40L and patients with a lifetime history of acute chest syndrome. LIGHT and CD40L appear to contribute to leukocyte and endothelial activation, playing an important role in the pathophysiology of sickle cell anemia and apparently in the clinical manifestations of this disease. These results highlight the important role that platelets and their inflammatory mediators may play in the vascular inflammation that is known to occur in sickle cell anemia / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Orientador: André Fattori / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T14:36:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_JoaoCarlose_M.pdf: 3394200 bytes, checksum: 8d2a029f1ee7e0d42f602adc20337a62 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Estudos demonstram a importância da anemia no contexto da senilidade, tanto por sua relação com perdas funcionais e redução da sobrevida, como também por ser identificada como um fator adicional para o desenvolvimento do fenótipo. De fato, a fragilidade e a anemia em indivíduos idosos parecem compartilhar alguns eventos fisiopatogênicos comuns relacionados ao processo inflamatório crônico. Doenças associadas ao envelhecimento, como aterosclerose, diabetes, doenças renais, alterações cardiovasculares e osteodegenerativas cursam com inflamação crônica e podem ter o seu impacto clínico agravado pelaconcomitância com a anemia. Os modelos mais utilizados no entendimento da fisiopatologia da fragilidade baseiam-se na interpretação da síndrome como resultado do acúmulo de déficits ao longo da vida33, resultando em maior vulnerabilidade biológica ou, ainda, como um estado de decréscimo do metabolismo global do individuo, associado a desregularão neuroendócrina e imunológica, que, também neste caso, cursa com redução da capacidade homeostática. Neste trabalho sugerimos que as alterações hematimétricas contribuem para o fenótipo como um agente estressor, mas também, representa um componente equivalente das perdas relacionadas à sarcopenia no modelo proposto por Friedet al. OBJETIVO GERAL:Este trabalho foi conduzido usando os dados do estudo multicêntrico populacional sobre fragilidade designada pela sigla FIBRA, acrônimo de Fragilidade em Idosos Brasileiros, em uma amostra de 255 idosos recrutados no domicilio, na urbana de Campinas. O fenótipo de fragilidade foi determinado utilizando os critérios do Cardiovascular Health Study e no Women Health andAgingStudy, já demonstrados e validados em publicações anteriores; os pontos de corte das variáveis de fragilidade, ajustados para a população brasileira, foram anteriormente publicados por nosso grupo.As amostras de sangue foram coletadas por de punção venosa utilizando material estéril, e acondicionadas protegidas da luz em tubo seco e tubo de EDTA. O material foi encaminhado ao laboratório de Hematologia do Hospital Universitário da Unicamp para a realização de hemograma e contagem de reticulócitos. Resultados: No modelo I da regressão multivariada, no qual foram incluídas apenas as variáveis hematimétricas, a classificação geral de fragilidade esteve relacionada à idade e o nível de HGB sérica; a contagem de RETAbs (contagem de reticulocitos absolutos) apareceu associada aos critérios individuais perda ponderal e atividade física (dados não mostrados em tabelas). No modelo II, no qual se introduziram as quantificações de citocinas inflamatórias, foram selecionadas como variáveis significativas a idade e a PCRus (proteína C reativa ultra sensível), sendo que cada um ano de avanço etário representou aumento de 1,20 vezes na chance de ser frágil, e cada aumento de 1 unidade no nível de PCRus sérica significou uma elevação de 5,56 vezes na chance de apresentar o fenótipo. Também no modelo II da análise multivariada verificou-se que para a diminuição de 10x106/mL na contagem de RETAbs, o grupo apresentou aumento de 40% na chance de ser frágil, enquanto que a cada elevação de 10x106/mL na contagem de RETAbs houve também aumento de 30% da chance de ser frágil. CONCLUSAO: estes achados sugerem que no conjunto de fragilidade, queda da concentração de hemoglobina, diminuição da contagem absoluta de reticulócitos e níveis séricos de PCRus talvez devam ser compreendidos como um componente constitutivo da fragilidade, estreitamente correlacionada ao processo de sarcopenia evidenciado pela perda ponderal. Neste sentido, os valores reduzidos dos índices hematimétricos, não somente indicam a participação da baixa oxigenação tecidual no processo fisiopatogênico da fragilidade, como também podem ser utilizados como mais um critério definidor do fenótipo. Este estudo FIBRA indica que futuras pesquisas de caráter longitudinal possam indicar os valores de hemoglobina e de reticulócitos absolutos que possam ser utilizados como critério definidor de fragilidade / Abstract: Studies have shown the importance of anemia in the context of senility both because of its relationship with functional loss and reduced survival and because it has been identified as an additional factor leading to the development of the phenotype. In fact, frailty and anemia in the elderly appear to share certain common pathophysiological events related to chronic inflammatory processes. Diseases associated with aging, such as atherosclerosis, diabetes, kidney disease, cardiovascular changes and osteodegenerative diseases, progress with chronic inflammation and their clinical impact may be aggravated if they occur concomitantly with anemia. The models most commonly used to understand the pathophysiology of frailty are based on an interpretation of the syndrome as the result of an accumulation of deficits during an individual's life, resulting in greater biological vulnerability or even a reduction in an individual's overall metabolism associated with neuroendocrine and immune dysregulation, which in this case is also accompanied by reduced homeostatic capacity19,34. We suggest that abnormal red cell indices contribute to the phenotype as a stressor but also play a similar role to that of sarcopenia in the model proposed by Fried et al., 2001. GENERAL OBJECTIVE: The study data were collected from a sample of residents in urban Campinas as part of the FIBRA (Frailty in Brazilian Seniors) multicenter population-based study. The frailty phenotype was determined using the criteria in the Cardiovascular Health Study and the Women's Health and Aging Study, which were described and validated in previous publications; the cut-off points for frailty variables adjusted for the Brazilian population were published previously by our group. Blood samples were collected by venipuncture using sterile material and stored away from light in dry collection tubes and EDTA tubes. The samples were sent to the Hematology Laboratory at Unicamp University Hospital for complete blood counts and reticulocyte counts. RESULTS: In multivariate regression model I, which included only red cell variables, the general frailty classification was related to age and serum hemoglobin (Hb) level. Absolute reticulocyte count (RetAbs) was associated with the individual criteria weight loss and reduced physical activity (data not shown in the tables). In model II, which also included inflammatory cytokine levels, age and hsCRP (high sensible C Reactive Protein) were selected as significant variables. Each additional year of age represented a 1.2-fold increase in the chance of being frail, and each 1-unit increase in serum hsCRP represented a 5.56-fold increase in the chance of having the frailty phenotype. Multivariate analysis using model II revealed that a reduction of 10x106/mL in RetAbs count resulted in a 40% increase in the chance of being frail, and that each 10x106/mL increase in this parameter also led to an increase (30%) in the chance of being frail. CONCLUSION: Our findings suggest that reduced Hb (hemoglobin) concentration, reduced RetAbs count and elevated serum hsCRP levels should perhaps be considered components of frailty, which is closely correlated with sarcopenia, as evidenced by weight loss. In this context, reduced red cell indices not only indicate that poor tissue oxygenation plays a role in the pathophysiology of frailty but can also be used as another criterion to define the phenotype. This FIBRA study has shown that future longitudinal studies may help determine Hb levels and RetAbs counts that can be used as criteria to define frailty / Mestrado / Gerontologia / Mestre em Gerontologia

Foram estudadas 363 gestantes de primeira consulta, que não faziam uso de medicamentos que continham ferro, ácido fólico, vitamina B12 ou associação destes, na ocasião da coleta do material, em Centros de Saúde do Estado, no Subdistrito de Paz do Butantã, município de São Paulo. A prevalência de anemia (concentração de hemoglobina inferior a 11,6 g/dl) foi de 12,4%. As médias das concentrações de hemoglobina e as prevalências de anemia, segundo o trimestre de gestação, foram respectivamente: 13,47 g/dl e 3,57% no primeiro, 12,47 g/dl e 20,86% no segundo e 12,25 g/dl e 32,14% no terceiro trimestre. Não encontramos diferença. estatisticamente significativa entre as médias das concentrações de hemoglobina e entre as prevalências de anemia nas gestantes primigestas e multigestas. O mesmo aconteceu com as médias e as prevalências das gestantes multigestas com intervalo do último parto até dois anos e maior que dois anos. Na amostra estudada, encontramos maior prevalência de anemia naquelas gestantes que pertenciam às famílias que tinham renda per capita até 0,5 SMPC (salário mínimo per capita). As prevalências de verminose e de ancilostomídeos nas 300 gestantes foram respectivamente: 64,7% e 14,0%. Nas gestantes anêmicas foram respectivamente: 73,7% e 7,9%. Nas gestantes anêmicas, a prevalência de deficiência de ferro foi de 42,2% (concentração de ferro sérico <50 &#181;g/dl) ou 46,7% (saturação da transferrina <15% ou 40,0% (concentração de ferro sérico <50 &#181;g/dl e saturação de transferrina <15%). A prevalência de deficiência de ácido fólico foi 44,4%. A prevalência de deficiência de ferro e ácido fólico foi de 17,8%. Não encontramos deficiência de vitamina B<SUB<12 nas gestantes anêmicas. / Abstract not available

Por ser um parasita hematófago, Haemonchus contortus é modelo para estudo da anemia verminótica em ovinos. A presente pesquisa objetivou analisar as diferenças hematológicas e bioquímicas entre ovinos resistentes, resilientes e sensíveis, e propor a utilização das variações do hematócrito e do teor de hemoglobina durante o período de infecção com H. contortus para agrupar os animais nessas categorias. Para tal, 32 ovinos adultos da raça White Dorper foram infectados com 10.000 larvas L3 de H. contortus em bolus. Nos dias 0, 1, 4, 7, 14, 21, 28 e 34 após a infecção foram realizados: exames clínicos, hemograma, leucograma, perfil bioquímico e contagem de ovos por grama de fezes (OPG). O abate dos animais ocorreu no dia 35 para contagem de parasitas no abomaso. Utilizou-se a variação entre o hematócrito inicial e o final associada à contagem total de parasitas adultos no abomaso para classificar 21 animais em resistentes, resilientes e sensíveis. Verificou-se que as variações do hematócrito e do teor de hemoglobina ao longo do período de parasitismo são mais eficazes em descrever as respostas dos ovinos do que os valores do hematócrito e hemoglobina em si. Durante os primeiros 30 dias de hemoncose os ovinos resilientes mantém o equilíbrio entre produção e perda de hemácias, não ocorrendo envio de células imaturas para a corrente sanguínea. Em oposição, os sensíveis desenvolvem anemia sem sinais de regeneração e sem diminuição do ferro sérico o que denota uma possível falta ou insuficiência de resposta da medula óssea. Nesse período, o leucograma não apresenta especificidades que possam ser atribuídas a características de resistência, resiliência ou sensibilidade. Ocorreu diminuição de proteína total, albumina, beta-hidroxibutirato, triglicérides e movimentos ruminais, portanto menor produtividade, em todos os animais, incluído os resistentes, o que permite recomendar que os ovinos sejam mantidos em ausência de verminose / Haemonchus contortus is a hematophagous parasite, it is a model for the study of verminous anemia in sheep. The present study aimed to analyze the hematological and biochemical differences between resistant, resilient and sensitive sheep and to propose the use variations of hematocrit and hemoglobin content during the infection period with H. contortus to group the animals in these categories. For this, 32 adult White Dorper sheep were infected with 10,000 L3 larvae of H. contortus on bolus. On days 0, 1, 4, 7, 14, 21, 28 and 34 post-infection were performed: clinical exams, hemogram, leukogram, biochemical profile and fecal egg count (FEC). The slaughter of the animals occurred on day 35 for counting parasites in the abomasum. The variation between the initial and final hematocrit associated to the total adult parasite count in the abomasum was used to classify 21 animals as resistant, resilient and sensitive. Variations in hematocrit and hemoglobin content over the period of parasitism have been found to be more effective in describing ovine responses than hematocrit and hemoglobin values per se. During the first 30 days of hemonchosis, the resilient sheep maintains the balance between production and loss of red blood cells, and there is no release of immature cells into the bloodstream. In contrast, the susceptible individuals develop anemia with no signs of regeneration and no decrease in serum iron, which indicates a possible lack or insufficiency of bone marrow response. In this period, the leukogram does not present specificities that can be attributed to characteristics of resistance, resilience or sensitivity. There was decrease in total protein, albumin, beta-hydroxybutyrate, triglycerides and ruminal movements, thus lower productivity, in all animals, including the resistant ones, which allows to recommend keep sheep in the absence of verminose

The objectives of this study were to characterize the hematological and productive pattern during the peripartum in cows with and without anemia, as well as to evaluate the erythrogram in animals that presented metritis puerperal acute (MPA), lameness, acetonemia, increased non-esterified fatty acids (NEFA) and cows with different categorization of body condition score (BCS). In study 1, 50 Holstein cows (29 multiparous and 21 primiparous) were used. Blood samples and physical examination were performed at 13 different times: 18 &#177; 3, 12 &#177; 2, 5 &#177; 1, and 2 &#177; 1 before calving, and 7, 14, 21, 30, 45 and 60 days postpartum. Erythrogram evaluations were performed, and red blood cell count (RBC), hemoglobin concentration, packed cell volum (PCV), and absolute hematimetric values of mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC), mean corpuscular hemoglobin, RDW, serum concentrations of iron, betahydroxybutyrate (BHBA), AGNE and total bilirubin (TBIL) were determined for the biochemical analyzes. Anemia was classified according to hemoglobin values &lt;7 g / dL and globular volume &lt;24%. The prevalence of anemia was higher in the period 60 days postpartum affecting 18.3% of the animals, the pattern of anemia presented was normocytic, normochromic, regenerative. RBC, PCV and hemoglobin were lower (P &lt;0.05) for animals with anemia. While the animals with MPA and lameness the value of the erythrogram was very similar throughout the postpartum period. No difference was observed between the groups according to the values of NEFA, BCS and loss of BCS during the periods performed in the postpartum period. In conclusion the anemic animals presented the values of the physical examination according to the physiological limits, the anemia did not cause productive losses in the affected animals. It was not evidenced that animals with MPA and claudicants presented a greater reduction of blood crass, excluding the occurrence of inflammatory anemia, and although the prevalence of anemia increased during postpartum, it was not possible to characterize the main cause of the reduction of hematological values between the categorizations. In the second study, blood was sampled from 336 animals (252 multiparous and 84 primiparous) between 21 and 30 days in lactation (DEL) on 7 farms in the State of São Paulo with the objective of characterizing the prevalence of anemia in dairy cows, prevalence of anemia in different categorizations such as: lactation number, BCS at the time of collection, dystocia, retention of fetal membranes, mastitis, digestive problem, lameness and acetonemia, , as well as the analysis erythrogram, biochemical profile, BCS, and milk production among animals with and without anemia. In conclusion, the prevalence of anemia was low (16.3%) and no association with the categorizations performed in this study, it was not possible to characterize the cause of anemia through biochemical analysis. / Os objetivos deste estudo foi caracterizar o padrão hematológico e produtivo durante o periparto em vacas com e sem anemia, assim como avaliar o eritrograma em animais que apresentaram metrite puerperal aguda (MPA), claudicação, acetonemia, valores de ácidos graxos não esterificados aumentados (AGNE) e vacas com diferentes categorizações de escore de condição corporal (ECC). No estudo 1, foram utilizadas 50 vacas Holandesas (29 multíparas e 21 primíparas), foram realizadas colheitas sanguíneas e exame físicos em 13 momentos diferentes: 18 &#177; 3, 12 &#177; 2, 5 &#177; 1, e 2 &#177; 1 antes do parto, parto, e 7, 14, 21, 30, 45 e 60 dias após o parto. Foram realizadas avaliações do eritrograma sendo mensurado a contagem de hemácias (RBC), concentração de hemoglobina, volume globular, além dos valores hematimétricos absolutos do volume corpuscular médio (VCM), concentração hemoglobínica corpuscular média (CHCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e RDW, para as análises bioquímicas foram determinadas a concentração sérica de ferro, betahidróxidobutirato (BHBA), AGNE e bilirrubina total (TBIL). Anemia foi classificada de acordo com os valores de hemoglobina &lt; 7 g/dL e o volume globular &lt; 24 %. A prevalência de anemia foi maior no período 60 dias após o parto afetando 18.3% dos animais, o padrão da anemia apresentado foi normocítica, normocrômica, regenerativa. Os valores das contagens de hemácias, volume globular e hemoglobina foram menores (P &lt; 0.05) para os animais com anemia. Enquanto os animais com MPA e com claudicação, o valor do eritrograma foi muito semelhante ao longo do pós-parto. Não foi observado diferença entre os grupos de acordo com os valores de AGNE, ECC e perda de ECC durante as coletas realizadas no pós-parto. Em conclusão os animais anêmicos apresentaram os valores do exame físico de acordo com os limites fisiológicos, a anemia não provocou perdas produtivas nos animais afetados. Não foi evidenciado que animais com MPA e claudicantes apresentassem maior redução da crase sanguínea, excluindo a ocorrência de anemia inflamatória, sendo que embora a prevalência de anemia aumentasse durante o pós-parto não foi possível caracterizar a causa principal da redução dos valores hematológicos entre as categorizações realizadas. No estudo 2, foram realizadas coletas sanguíneas em 336 animais (252 multíparas e 84 primíparas) entre 21 e 30 dias em lactação (DEL) em 7 fazendas no Estado de São Paulo com objetivo de caracterizar a prevalência de anemia nos animais, prevalência de anemia em diferentes categorizações realizadas como: distocia, retenção dos anexos fetais, mastite, problema digestivo, claudicação, acetonemia, ECC no momento da coleta e número de parto, assim como a análise do eritrograma, bioquímico e ECC e produção de leite entre os animais com e sem anemia. Em conclusão a prevalência de anemia foi baixa prevalência (16.3 %) e nenhuma associação com as categorizações realizadas nesse estudo, adicionalmente não foi possível caracterizar por meio de análises bioquímicas a causa da anemia.

Orientadores: Sara T. O. Saad, Carlos Lenz Cesar / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:05:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brandao_MarceloMendes_D.pdf: 5903908 bytes, checksum: 0c74a8c1fd4bd94885347577c4ae2bde (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Lasers têm sido uma ferramenta cada vez mais utilizada na área da Biologia Celular e Medicina para medidas, diagnóstico e manipulação. Dentre essas utilizações destaca-se o trabalho pioneiro de A. Ashkin e colaboradores em 1986 que demonstraram o uso de uma técnica baseada na transferência de momentum dos fótons para capturar partículas dielétricas. Logo a seguir eles utilizaram essa técnica para capturar e manipular partículas biológicas com tamanhos variando de décimos a centenas de micra, demonstrando, desta forma, que este sistema funciona como uma "pinça óptica" para realizar manipulações intra e extracelulares sem causar prejuízo algum ao organismo vivo. Neste trabalho, a pinça óptica foi empregada para a análise do comportamento mecânico de hemácias normais, portadoras de hemoglobina 5 (homozigotos e heterozigotos) no estado normal e em crise falcêmica, esferocitose hereditária e anemia ferropriva. Foi ainda estudada a ação da hidroxiureia na reologia dos eritrócitos, da irradiação gama e da heterozigose para hemoglobina 5 em células estocadas em bolsas de doação de sangue. As análises foram feitas com um feixe de laser fortemente focado por uma objetiva de x100 de um microscópio, acoplado a um sistema de vídeo utilizado para gravar as imagens e posteriormente envia-Ias para análise em um computador. Pelo menos 20 células de cada participante foi pinçada pelo laser e arrastada contra plasma humano AS + com viscosidade conhecida em 6 velocidades constantes variando de 150 J.1m1s a 250J.1m1s (150, 170, 190, 210, 230, 250J.1m1s). A análise da deformação celular em razão da velocidade nos permitiu ter uma visão da elasticidade celular. A pinça óptica apresenta uma vantagem em relação as técnicas comumente utilizadas para aferir a deformabilidade celular, a análise das células é individual, levando em consideração a interação do citoplasma e da membrana. Os resultados sugerem que alterações na membrana da hernácia ou da hemoglobina causam um distúrbio no comportamento mecânico normal dos eritrócitos,. tomando-os mais rígidos, algumas vezes ultrapassando a capacidade de medida da metodologia. Com a pinça foi possível caracterizar a ação da HU no comportamento mecânico das células HbSS. A metodologia de pinça óptica pode ser muito útil para se verificar o efeito de outras drogas na deformabilidade de hemácias normais ou em pacientes com alterações da hemoglobina ou da membrana celular e também, estudar o efeito de diferentes conservantes para estocagem de hemácias / Abstract: The deformability of erythrocytes is a critical determinant of blood flow in microcirculation. By capturing red blood cells with optical tweezers and dragging them through a viscous fluid we were able to measure their overall elasticity. Laser optical tweezers, based on photon momentum transfer, have been used successfully in a variety of biological applications. This technique is capable of measuring the whole red blood cell elasticity and viscosity. The optical trap was performed with a Nd:YAG laser strongly focused in a microscope connected to a CCD camera. A computer captured the images, where they were quantitatively and qualitatively analyzed. The elasticity measurement was obtained by dragging the RBC with the optical tweezers through the plasma fluid with a known viscosity. It should be pointed out that the laser does not exert any pressure or photo-damage on the cell. The analysis of the cell deformation vs velocity allowed us to obtain cell elasticity expressed in dyn/cm. The model we used to extract the values for the membrane elasticity and viscosity assumed that the cell is a parallelepiped with length lo, width W and negligible thickness which is located at distance Z1 trom the bottom of the Neubauer chamber and Z2 trom the cover slip. We assumed that the elastic response to an applied force is given by F=J.1(WILo)~L, where F is the force, J.1 is the elasticity and ~L is the cell length deformation. We assumed a drag force F given by F=TI(Wl.o(kq)V, where TI is the plasma viscosity, (1/Zeq)= (11Z1)+ (11Z2) and Vis the drag velocity. The equilibrium occurs when one force cancels the other. Therefore the elongation ~L as a function of drag velocity is given by ~L= (Tllo 1(J.1Zeq)] V, which can be used to extract a value for J.1 provided by the plasm viscosity TI, length lo and Zeq which are easily measured. We measured, and compared, the red blood cell deformability trom normal contrais (HbAA) , patients with: homozygous (HbSS) and heterozygous (HbAS) sickle hemoglobin, HbSS subjects on sickling crisis, hereditary spherocytosis and with iron deficiency anemia. We also studied ,the action of hydroxyurea on rheologic behavior of HbSS cells, the gamma irradiation and the heterozygosis for sickle hemoglobin on cells storage on blood donation bags. Our results showed that the red blood cell deformability was significantly lower in HbS subjects (HbSS and HbAS) , except for HbSSIHU cells, whose deformability was similar to the normal controls. Our data showed that the laser optical tweezers technique is able to detect differences in HbS red blood cells trom subjects taking hyd,roxyurea as well as to differentiate red blood cells trom normal controls and HbAS, indicating that this is a very sensitive method and can be applied for detection of drug-response in sickle cell disease. The sensitivity of the laser optical tweezers method showed that there is no significant change in elasticity over time up to 14 days of storage, regardless of whether the unit was irradiated or not. However, beyond 21 days of storage, irradiated units demonstrate decreased elasticity. RBCs elasticity trom AS units stored for 1, 14 and 21 days presented significantly lower elasticity when compared to HbAA cells stored for the same period. Mostly of RBcs trom HbAS units stored for 28 and 35 days, Hereditary spherocytosis cells and sickle crisis cells were very rigid or escaped trom the optical trapo So these cells did not stay in the trap when the velocities were increased. Hence, the accuracy of elasticity measurement was impaired. / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica