A proteína Anexina A1 (ANXA1), sintetizada e liberada por fagócitos pela ação de glicocorticóides, é uma proteína anti-inflamatória, pois inibe o influxo de neutrófilos para o foco da inflamação, e induz os mecanismos de eferocitose em neutrófilos e macrófagos. Nosso grupo mostrou que a ANXA1 regula a expressão do receptor ativado por proliferadores de peroxissomos (PPAR) em macrófagos. Em continuidade, o presente trabalho investigou o mecanismo da ANXA1 sobre a expressão de PPARγ em macrófagos, e se este controle ocorre em demais leucócitos e tecido adiposo. Para tanto, macrófagos, neutrófilos peritoneais, linfócitos do baço, tecido adiposo epididimal foram obtidos de camundongos machos Balb/c selvagens (wild type, WT) ou geneticamente deficientes para ANXA1 (ANXA1-/-). Os resultados obtidos mostraram que a ANXA1 controla a expressão proteica e gênica de PPARγ em macrófagos, já que os níveis proteico (Western Blot, WB) e de RNAm (Real-time PCR) para PPARγ constitutivo, bem como induzidos pelos tratamentos in vitro com bezafibrato ou pioglitazona estavam reduzidos em macrófagos de animais ANXA1-/- em comparação com os níveis de macrófagos de animais WT, e o efeito parece ser dependente de CREB (WB), já que os níveis constitutivos deste fator de transcrição estavam maiores em macrófagos de animais ANXA1-/-. O tratamento in vitro com cicloheximida (CHX), um inibidor da síntese proteica, reduziu a expressão de PPARγ estimulada por bezafibrato ou LYSO-7 em macrófagos de animais WT, reforçando o papel da ANXA1 na expressão gênica de PPARγ. O FPR2 parece não estar envolvido no efeito, uma vez que o pré-tratamento de macrófagos com o antagonista de FPR2 (WRW4) não modificou a expressão de PPARγ em macrófagos de animais WT. O efeito modulador da ANXA1 ocorre em neutrófilos, mas não em tecido adiposo e linfócitos de animais ANXA1-/-. Ademais, a deficiência de ANXA1 não alterou a apoptose espontânea de neutrófilos. Em conjunto, os resultados obtidos mostram uma possível via adicional da ANXA1 sobre a resolução da inflamação, controlando a expressão de PPARγ em fagócitos. / Annexin A1 (ANXA1), is a protein synthetized and released by phagocytes due to the action of glucocorticoids, and an anti-inflammatory protein that inhibits neutrophil influx to site of inflammation and induces the mechanisms of efferocytosis in neutrophils and macrophages. Our group has already demonstrated that ANXA1 regulates the expression of peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) in macrophages. The present work aimed to investigate the role of ANXA1-dependent mechanisms on the expression of PPARγ in macrophages, and if said role also extends to other leukocytes and adipose tissue. For such, macrophages, peritoneal neutrophils, spleen lymphocytes, epididymal adipose tissue were obtained from male Balb/c wild type mice or from mice lacking ANXA1 genetically (ANXA-/-). Obtained results have demonstrated that ANXA1 regulates both proteic and genic expression of PPARγ in macrophages, as protein (Western Blotting, WB) and mRNA (Real-Time PCR) levels of constitutive PPARγ were reduced in macrophages from ANXA1-/- mice in comparison with the observed levels of macrophages from WT mice; the same is true for increased protein and mRNA levels as induced by in vitro treatments with bezafibrate or pioglitazone. This effect appears to be CREB-dependent (WB), as the constitutive levels of this transcription factor were found to be increased in macrophages from ANXA1-/- mice. In vitro treatment with cycloheximide (CHX), an inhibitor of proteic synthesis, reduced the bezafibrate or LYSO-7 (PPAR pan agonist, 10 µM / 2h) induced expression of PPARγ in WT mice, which further suggests a role for ANXA1 in PPARγ genic expression. FPR2 does not seem to be involved with these effects of ANXA1, as pre-treatment of macrophages from WT mice with an FPR2-antagonist (WRW4) did not alter expression of PPARγ. The modulating effect of ANXA1 can be verified in neutrophils of ANXA-/- mice, but not in adipocytes and lymphocytes from the same animals. Moreover, deficiency of ANXA1 did not affect spontaneous apoptosis of neutrophils. Altogether, the obtained results show the existence of a probable additional pathway with which ANXA1 promotes inflammation resolution, also controlling the expression of PPARγ in phagocytes.

Orientador: Ana Paula Girol / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Eliane Gonçalves de Freitas / Banca: Carla Patrícia Carlos / Resumo: O processo inflamatório causado pelo tabagismo está relacionado a diferentes tipos de doenças como enfisema pulmonar, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) e aterosclerose. Neste cenário, a proteína anti-inflamatória AnxA1 pode representar uma alternativa terapêutica. Por essas razões, o objetivo da pesquisa foi avaliar os efeitos do peptídeo mimético Ac2-26 da proteína AnxA1, em modelo de tabagismo. Ratas Wistar foram divididas em 3 grupos (n=10/grupo): expostos ao fumo não tratados (F) e tratados com o peptídeo (F+Ac2-26) e controles (C). Os grupos de animais expostos ao fumo foram colocados em um equipamento específico da Unidade Didática e de Pesquisa Experimental (UDPE) das Faculdades Integradas Padre Albino (FIPA), e expostos à queima de 10 cigarros comerciais, um após o outro, 2x/dia, por 5 semanas. O grupo C foi mantido no mesmo regime, porém na ausência da fumaça do cigarro e tratamento. Para avaliar a eficácia do Ac2-26, animais F+Ac2-26 foram administrados intraperitonealmente com o peptídeo (1mg/kg), 1x/dia, antes da primeira exposição ao cigarro. As ratas foram pesadas e tiveram a pressão arterial aferida no início e final do experimento. No período final, a ventilação pulmonar foi verificada por meio da pletismografia e também foram realizadas imagens de raios-X. Os animais foram eutanasiados e coletados o lavado bronco alveolar (LBA) para quantificações de células inflamatórias e citocinas, o sangue para dosagens bioquímicas de citocinas e hemoglobina e os... / Abstract: The inflammatory process caused by smoking is related to different kinds of diseases such as pulmonary emphysema, chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and atherosclerosis. In this scenario, an anti-inflammatory protein AnxA1 may represent a therapeutic alternative. For these reasons, the objective of this research was to analyze the effects of the mimetic peptide Ac2-26 of the AnxA1 protein, in a smoking model. Wistar rats were divided into 3 groups (n = 10/group). The groups of animals exposed to smoke were placed in a specific equipment of the Didactic and Experimental Research Unit (UDPE) of the Integrated Colleges Padre Albino (FIPA), and exposed to the burning of 10 cigarettes, one after another, 2x / day for 5 weeks. To evaluate the efficacy of Ac2-26, CS+Ac2-26 animals were administered intraperitoneally with peptide (1mg / kg), 1x / day, prior to first exposure to the cigarette. Group C was maintained in the same regimen, but in the absence of cigarette smoke or treatment. The rats were weighed and had blood pressure measured at the beginning and ending of the experiment. In the final period, pulmonary ventilation was verified through plethysmography and also performed ray-X images. The animals were euthanized and collected the alveolar bronchus (BAL) for quantification of inflammatory cells and cytokines, the blood for biochemical measurements of cytokines and hemoglobin and organs, lung and trachea, for histopathological and immunohistochemical studies. The physiological analyzes showed weight loss, increased blood pressure, reductions and in the pulmonary frequency and ventilation, as well as macroscopic alternative in the lung dimensions by X-ray images in group CS. While, in CS+Ac2-26, these values were similar to controls. The histopathological analyzes showed enlargement of the intra-alveolar spaces and increased lymphoid tissue (BALT), and loss of the ... / Mestre

A proteína Anexina A1 (ANXA1), sintetizada e liberada por fagócitos pela ação de glicocorticóides, é uma proteína anti-inflamatória, pois inibe o influxo de neutrófilos para o foco da inflamação, e induz os mecanismos de eferocitose em neutrófilos e macrófagos. Nosso grupo mostrou que a ANXA1 regula a expressão do receptor ativado por proliferadores de peroxissomos (PPAR) em macrófagos. Em continuidade, o presente trabalho investigou o mecanismo da ANXA1 sobre a expressão de PPARγ em macrófagos, e se este controle ocorre em demais leucócitos e tecido adiposo. Para tanto, macrófagos, neutrófilos peritoneais, linfócitos do baço, tecido adiposo epididimal foram obtidos de camundongos machos Balb/c selvagens (wild type, WT) ou geneticamente deficientes para ANXA1 (ANXA1-/-). Os resultados obtidos mostraram que a ANXA1 controla a expressão proteica e gênica de PPARγ em macrófagos, já que os níveis proteico (Western Blot, WB) e de RNAm (Real-time PCR) para PPARγ constitutivo, bem como induzidos pelos tratamentos in vitro com bezafibrato ou pioglitazona estavam reduzidos em macrófagos de animais ANXA1-/- em comparação com os níveis de macrófagos de animais WT, e o efeito parece ser dependente de CREB (WB), já que os níveis constitutivos deste fator de transcrição estavam maiores em macrófagos de animais ANXA1-/-. O tratamento in vitro com cicloheximida (CHX), um inibidor da síntese proteica, reduziu a expressão de PPARγ estimulada por bezafibrato ou LYSO-7 em macrófagos de animais WT, reforçando o papel da ANXA1 na expressão gênica de PPARγ. O FPR2 parece não estar envolvido no efeito, uma vez que o pré-tratamento de macrófagos com o antagonista de FPR2 (WRW4) não modificou a expressão de PPARγ em macrófagos de animais WT. O efeito modulador da ANXA1 ocorre em neutrófilos, mas não em tecido adiposo e linfócitos de animais ANXA1-/-. Ademais, a deficiência de ANXA1 não alterou a apoptose espontânea de neutrófilos. Em conjunto, os resultados obtidos mostram uma possível via adicional da ANXA1 sobre a resolução da inflamação, controlando a expressão de PPARγ em fagócitos. / Annexin A1 (ANXA1), is a protein synthetized and released by phagocytes due to the action of glucocorticoids, and an anti-inflammatory protein that inhibits neutrophil influx to site of inflammation and induces the mechanisms of efferocytosis in neutrophils and macrophages. Our group has already demonstrated that ANXA1 regulates the expression of peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) in macrophages. The present work aimed to investigate the role of ANXA1-dependent mechanisms on the expression of PPARγ in macrophages, and if said role also extends to other leukocytes and adipose tissue. For such, macrophages, peritoneal neutrophils, spleen lymphocytes, epididymal adipose tissue were obtained from male Balb/c wild type mice or from mice lacking ANXA1 genetically (ANXA-/-). Obtained results have demonstrated that ANXA1 regulates both proteic and genic expression of PPARγ in macrophages, as protein (Western Blotting, WB) and mRNA (Real-Time PCR) levels of constitutive PPARγ were reduced in macrophages from ANXA1-/- mice in comparison with the observed levels of macrophages from WT mice; the same is true for increased protein and mRNA levels as induced by in vitro treatments with bezafibrate or pioglitazone. This effect appears to be CREB-dependent (WB), as the constitutive levels of this transcription factor were found to be increased in macrophages from ANXA1-/- mice. In vitro treatment with cycloheximide (CHX), an inhibitor of proteic synthesis, reduced the bezafibrate or LYSO-7 (PPAR pan agonist, 10 µM / 2h) induced expression of PPARγ in WT mice, which further suggests a role for ANXA1 in PPARγ genic expression. FPR2 does not seem to be involved with these effects of ANXA1, as pre-treatment of macrophages from WT mice with an FPR2-antagonist (WRW4) did not alter expression of PPARγ. The modulating effect of ANXA1 can be verified in neutrophils of ANXA-/- mice, but not in adipocytes and lymphocytes from the same animals. Moreover, deficiency of ANXA1 did not affect spontaneous apoptosis of neutrophils. Altogether, the obtained results show the existence of a probable additional pathway with which ANXA1 promotes inflammation resolution, also controlling the expression of PPARγ in phagocytes.

Orientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Paula Rahal / Banca: Jorge Chahine / Banca: Carla Patrícia Carlos / Banca: Érika Cristina Pavarino / Resumo: Os avanços recentes nos mecanismos de inflamação e a descoberta de vários mediadores endógenos anti-inflamatórios levaram a novas investigações sobre as possibilidades terapêuticas. A demonstração, em estudos científicos, da ação anti-inflamatória da proteína anexina A1 (ANXA1) e do seu peptídeo mimético Ac2-26, têm sido fonte de sucesso para o desenvolvimento de novos fármacos. A descoberta da interação biofísica da piplartina (PL) com a região N-terminal da ANXA1 abriu um novo e instigante campo de investigação para o nosso grupo de pesquisa. Diante destas considerações, o objetivo do presente trabalho foi investigar a atuação da PL nas células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC), ativadas pelo lipopolissacarídeo (LPS). Ainda, se a interação Ac2-26/PL influência nas ações anti-inflamatórias da PL, favorecendo ou atenuando os seus efeitos nos processos inflamatórios. Inicialmente foi utilizada a Espectroscopia de Absorbância UV-Vis e de Fluorescência para investigar as interações entre o ligante PL e Ac2-26. In vitro, as células HUVEC foram ativadas pelo LPS (10 μg/mL), nos tempos de 8, 24, 48 e 72 horas, seguido pelos tratamentos com Ac2-26 (1µM) e/ou PL (10µM), demonstrando resultados expressivos em 24 e 72 horas. Os efeitos foram avaliados nos seguintes aspectos: proliferação celular, viabilidade celular, dosagens da quimiocina MCP-1 e das citocinas IL-8 e IL-1β e expressão da proteína α-tubulina. A presença de um anel trimetoxiaromático na estrutura da PL, o... / Abstract: Recent advances in inflammation mechanisms and the discovery of several endogenous anti-inflammatory mediators have led to further investigations into the therapeutic possibilities. The demonstration, in scientific studies, of the annexin A1 protein (ANXA1) anti-inflammatory action and its peptide mimetic Ac2-26, have been a source of success for the development of new drugs. The discovery of the biophysical interaction of piplartin (PL) with the N-terminal region of ANXA1 opened a new and exciting field of investigation for our research group. In view of these considerations, the objective of the present study was to investigate the role of PL in lipopolysaccharide (LPS) activated human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Also, if the interaction Ac2-26/PL influences the anti-inflammatory actions of PL, favoring or attenuating its effects on inflammatory processes. Initially, UV-Vis Absorbance Spectroscopy and Fluorescence were used to investigate the interactions between the PL ligand and Ac2-26. In vitro, HUVEC cells were activated by LPS (10 μg/mL) at 8, 24, 48 and 72 hours, followed by treatments with Ac2-26 (1μM) and/or PL (10μM), demonstrating expressive results in 24 and 72 hours. The effects were evaluated in the following aspects: cell proliferation, cell viability, MCP-1 chemokine and IL-8 and IL-1β cytokines and α-tubulin protein expression. The presence of a trimethoxyaromatic ring in the PL structure, which may favor an interaction with tubulin, motivated ... / Doutor

INTRODUCTION: Endometriosis is a disease characterized by the presence of extrauterine endometrial implants. Its etiopathogenesis isn’t fully understood, it’s believed that immunological and hormonal factors influence the peritoneal environment, preventing the elimination of refluxed endometrial cells during the menstrual period. In addition, endometriosis has been reported as an inflammatory process and some studies have demonstrated the inflammatory resolutive mediators involvement in endometrial physiology and suggest that they may be involved in the endometriosis progression by anti-inflammatory and antiangeogenic action. OBJECTIVE: To characterize Annexin A1 (ANXA1), FPR2/ALX and cytokines expression in peritoneal endometriosis and to clarify their role in its etiology. METHODS: A laboratory analysis was performed human samples with forty women in reproductive age (22 patients with endometriosis and 18 control women) that had undergone laparoscopic surgery. Peritoneal biopsy e fluid aspirations from endometriosis and control samples were analyzed for the expression of ANXA1, FPR2/ALX and cytokines. ANXA1 and FPR2 / ALX levels were measured by Western blotting and interleukin 1ß (IL-1ß), 4 (IL-4), 6 (IL-6) e 10 (IL-10) were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: The present study identified the presence in human peritoneal tissue of ANXA1 and FPR2 / ALX both in healthy condition and in women with peritoneal endometriosis, however, was lower in endometriosis samples than in control samples. By quantifying the IL-6 and IL-1β cytokines in the peritoneal fluid by ELISA, this study identified a higher IL-6 concentration in endometriosis group, but no significative difference in IL-1ß levels. In all samples, levels of IL-4 and IL-10 cytokines were below the detection level of the method used. CONCLUSION: These results indicate that the reduction of the inflammatory resolution mediators may be responsible for the inflammatory process perpetuation, maintenance and worsening of endometriosis. / Submitted by Lia Karina Volpato (lia.volpato@unisul.br) on 2018-03-13T15:25:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Lia Karina Volpato.pdf: 23378759 bytes, checksum: c029f98522ccc30394074d42329f7c3b (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2018-03-13T18:35:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Lia Karina Volpato.pdf: 23378759 bytes, checksum: c029f98522ccc30394074d42329f7c3b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-13T18:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Lia Karina Volpato.pdf: 23378759 bytes, checksum: c029f98522ccc30394074d42329f7c3b (MD5) Previous issue date: 2017 / Endometriose é uma doença caracterizada pela presença de implantes endometriais extrauterinos. Sua etiopatogenia não está totalmente esclarecida, acredita-se que fatores imunológicos e hormonais influenciam o ambiente peritoneal, impedindo a eliminação das células endometriais refluídas durante o período menstrual. Além disso, a endometriose tem sido relacionada como um processo inflamatório e alguns estudos têm demonstrado o envolvimento de mediadores pró-resolutivos da inflamação na fisiologia endometrial e sugerem que possam estar envolvidos na progressão da endometriose por ação anti-inflamatória e antiangeogênica. OBJETIVO: Caracterizar a densidade de anexina A1 (ANXA1), FPR2 / ALX e citocinas na endometriose peritoneal e esclarecer seu papel etiológico. MÉTODOS: Foi realizado um estudo de análise laboratorial com amostras humanas de quarenta mulheres em idade reprodutiva (22 pacientes com endometriose e 18 mulheres controle) submetidas à cirurgia laparoscópica. Foram realizadas biópsia peritoneal e aspiração de fluido peritoneal em amostras de endometriose e de controle, que foram analisadas quanto à densidade de ANXA1, FPR2 / ALX e citocinas. Os níveis de ANXA1 e FPR2 / ALX foram medidos por Western blott e as interleucinas 1ß (IL-1ß), 4 (IL-4), 6 (IL-6) e 10 (IL-10) foram quantificadas por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). RESULTADOS: O presente estudo identificou a presença no tecido peritoneal humano de ANXA1 e FPR2 / ALX em condições saudáveis e em mulheres com endometriose peritoneal, no entanto, a densidade foi menor nas amostras de endometriose do que nas amostras de controle. Este estudo identificou uma maior concentração de IL-6 no fluido peritoneal do grupo com endometriose, mas não houve diferença significativa nos níveis de IL-1β. Em todas as amostras, os níveis de citocinas IL- 4 e IL- 10 estiveram abaixo do nível de detecção do método utilizado. CONCLUSÃO: Estes resultados indicam que a redução dos mediadores de resolução inflamatória pode ser responsável pela perpetuação, manutenção e agravamento do processo inflamatório da endometriose.

Orientador: Ana Paula Girol / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ana Cláudia Polli Lopes / Banca: Wanessa Silva Garcia Medina / Resumo: O processo de reparo de lesões térmicas pode ser dividido nas fases de inflamação, proliferação e remodelação. No seu processo de desgranulação, os mastócitos (MCs) liberam fatores quimiotáticos, citocinas e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz lesada e síntese de uma nova. Além disso, estudos indicam que os MCs armazenam a proteína anti-inflamatória anexina A1 (AnxA1), envolvida na inflamação, apoptose, crescimento e diferenciação celular. Contudo, não se conhecem relatos da expressão e função da AnxA1 no reparo de queimaduras. Diante disso, os objetivos desse estudo foram quantificar e avaliar a ativação, acúmulo de histamina e heterogeneidade para triptase e quimase dos MCs, bem como, verificar a expressão da AnxA1, quantificar macrófagos, e dosar as citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e a quimiocina MCP-1 em modelo de queimadura de segundo grau em ratos Wistar. Para o desenvolvimento da lesão os animais foram anestesiados e submetidos à aplicação de um bloco metálico aquecido no dorso. Os animais foram divididos em grupos controles e tratados com pomada de sulfadiazina de prata a 1% (SDP 1%). As análises foram realizadas em 3, 7, 14 e 21 dias após injúria, e também em fragmentos de pele normal. Avaliações macroscópicas e histopatológicas da cicatrização confirmaram as características de queimadura de segundo grau e a melhor evolução da cicatrização nos animais tratados. A quantificação dos MCs mostrou grande quantidade de células intactas na pele normal e redução significante dessas células nas fases de inflamação (dia 3) e de proliferação (dia 7). Nas fases de proliferação de matriz (dia 14) e remodelação (dia 21) foi verificada maior quantidade de MCs nos animais controles e essas células foram observadas, principalmente, desgranuladas no dia 14 e... / Abstract: The repair process of thermal injury can be divided into phases of inflammation, proliferation and remodeling. The mast cells (MCs) in their degranulation process, release chemotactic factors, cytokines and proteases, as tryptase and chymase, to the extracellular environment contributing to the degradation of damaged matrix and synthesis of a new one. Moreover, studies indicate that MCs store the antiinflammatory protein annexin A1 (AnxA1) which involved in inflammation, apoptosis, growth and cell differentiation. However, there are no known reports of the expression and function of AnxA1 in burns repair. Thus, the objectives of this study were to quantify, assess the activation, histamine accumulation and heterogeneity for tryptase and chymase of MCs, as well as, check the expression of AnxA1, associated with macrophages quantification and the levels of TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and MCP-1 in a second degree burn model in rats. For the development of the lesions, animals were anesthetized for applying a water-heated metal block in the dorso. The animals were divided into control and treated or not with the cream of silver sulfadiazine 1% (SDP 1%). The analyzes were performed on 3, 7, 14 and 21 days after injury, and also in normal skin fragments. Macroscopic and histopathological evaluations of healing confirmed the burning characteristics of second degree and the better progress of wound repair in treated animals. Quantification of MCs showed large amount of intact cells in normal skin and a significant reduction of these cells in the stages of inflammation (day 3) and proliferation (day 7). In the phases of matrix proliferation (day 14) and remodeling (day 21) it was observed increased amount of MCs, only in the control animals, and these cells were mainly degranulated on day 14, but intact on day 21. Also, in the treated group on day 7 and in both groups on day 14, it was ... / Mestre

Orientador: Ana Paula Girol / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ayder Anselmo Gomes Vivi / Banca: Cristiane Damas Gil / Resumo: As lesões uterinas são causas importantes de desconforto, infertilidade e óbito entre as mulheres no Brasil e no mundo. O câncer de endométrio é um tumor maligno frequente e sua incidência vem aumentando nas últimas décadas. Enquanto, o tumor uterino benigno mais comum, o leiomioma, acomete cerca de 40% das mulheres na idade reprodutiva, sendo relacionado à menorragia, dismenorreia e infertilidade. Investigações indicam que o microambiente tumoral é crucial para o avanço do câncer, sendo caracterizado, principalmente, pela composição alterada da matriz extracelular, alta densidade de microvasos e abundância de células inflamatórias, como mastócitos (MCs). MCs desgranulados liberam fatores quimiotáticos e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz extracelular, promoção da angiogênese, propiciando ambiente favorável para invasão tumoral e remodelação tecidual por meio de proteólises seletivas na matriz e ativação de metaloproteinases. Outro aspecto importante no crescimento tumoral é a proteína anti-inflamatória Anexina A1 (ANXA1), relacionada à regulação dos processos de crescimento e migração/invasão celular, sendo seus efeitos mediados por receptores para peptídeos formilados (FPRs), especialmente FPR1 e FPR2. Diante da importância dos MCs e da ANXA1/FPR no desenvolvimento tumoral, o objetivo desta investigação foi analisar a heterogeneidade dos MCs e a expressão das proteínas ANXA1, FPR1 e FPR2 em biópsias humanas da... / Abstract: Uterine lesions are important causes of discomfort, infertility and death among women in Brazil and in the world. Endometrial cancer is a frequent malignant tumor and its incidence has been increasing in the last decades. Besides, the most common benign uterine tumor, leiomyoma, affects about 40% of women at reproductive age, being related to menorrhagia, dysmenorrhea and infertility. Investigations indicate that the tumor microenvironment is crucial for the advancement of cancer, being characterized mainly by the altered composition of the extracellular matrix, high microvessel density and abundance of inflammatory cells, such as mast cells (MCs). Degranulated MCs release chemotactic and protease factors, such as tryptase and chymase, to the extracellular medium, contributing to the degradation of the extracellular matrix, promoting angiogenesis, providing a favorable environment for tumor invasion and tissue remodeling through selective proteolysis in the matrix and activation of metalloproteinases. Another important aspect of tumor growth is the anti-inflammatory protein Annexin A1 (ANXA1), related to the regulation of growth and migration / invasion processes, and its effects mediated by receptors for formylated peptides (FPRs), especially FPR1 and FPR2. The objective of this investigation was to analyze the heterogeneity of the MCs and the expression of the ANXA1, FPR1 and FPR2 proteins in human biopsies of clinical-pathological variables of normal uterus: simple endometrial hyperplasia (HES), adenomyosis, leiomyomas and endometrial adenocarcinoma (ADC) of grades I and II. MCs were quantified according to their state of activation and expression of tryptase and chymase proteases. Expression of ANXA1 and its FPR1 and FPR2 receptors in the MCs and uterine tissues were analyzed in the different biopsies studied. Our results showed intact and degranulated MCs in the normal ... / Mestre

Orientador: Ana Elizabete Silva / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Henrique César Santejo Silveira / Banca: Patricia Maluf Cury / Banca: Dorotéia Rossi S. Souza / Banca: Debora Ap. Pires de C. Zuccari / Resumo: Apesar do declínio da incidência, o câncer gástrico ocupa ainda a terceira posição em causa de morte por câncer no mundo, tendo como principal fator de risco a bactéria Helicobacter pylori. Esta bactéria pode levar a uma inflamação persistente através da produção de citocinas pró-inflamatórias e de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, estimulando a proliferação celular bem como outros processos envolvidos na carcinogênese. Ainda envolvidos nestes processos tem sido observada a participação de microRNAs, que exercem papel importante na regulação pós-transcricional, influenciando processos fisiológicos normais da célula bem como aqueles ligados às doenças, como por exemplo o câncer gástrico. Alguns miRNAs podem atuar como oncogenes, genes supressores de tumor e biomarcadores para diversas patologias, podendo alvejar genes relacionados com inflamação e câncer como o gene ANXA1 (Anexina-A1). A Anexina-A1 é uma proteína anti-inflamatória e com ação anti-proliferativa, que se liga à receptores do tipo formil peptídeo como por exemplo FPR1 e FPR2, ambos sabidamente relacionados com a progressão de doenças como o câncer. Desta forma o presente trabalho teve como objetivos avaliar a expressão da proteína Anexina A1 e seus receptores FPR1 e FPR2, bem como avaliar a expressão do RNAm da ANXA1 e de miRNAs que possam modular a expressão desse gene (hsa-mir-27a, hsa-mir-196a e hsa-mir-222) em adenocarcinoma gástrico e correlacionar estes resultados com os aspectos clínico-patológicos. Foram avaliadas 31 amostras de adenocarcinoma gástrico, assim como as regiões metaplásica ou normal adjacentes ao tumor. A quantificação relativa (RQ) do RNAm da ANXA1 e miRNAs foi realizada por PCR quantitativo em tempo real utilizando ensaio TaqMan, e a expressão proteica da AnxA1, FPR1 e FPR2 por imuno-histoquímica e análise densitométrica. Em... / Abstract:Gastric cancer still ranks third in cause of cancer death worldwide, despite the decline in its incidence, being Helicobacter pylori the main risk factor for this disease. This bacterium can lead to persistent inflammation via the production of proinflammatory cytokines and reactive oxygen and nitrogen species, stimulating cell proliferation and other processes involved in carcinogenesis. Still involved in this process, it has been observed the participation of miRNAs, which play an important role in post- transcriptional regulation, influencing normal physiological processes of the cell as well as those linked to diseases such as gastric cancer. Some miRNAs can act as oncogenes, tumor suppressor genes and biomarkers for various diseases, can targetting genes linked to inflammation and cancer such as ANXA1 gene (Annexin A1). Annexin A1 is an anti-inflammatory protein with anti-proliferative action that binds to formyl peptide receptors such as, FPR1 and FPR2, both known to be related to the progression of diseases such as cancer. Thus, the present study aimed to evaluate the expression of Annexin A1, FPR1 and FPR2 receptors, and the expression of mRNA ANXA1 and miRNAs (hsa-mir-27a, hsa-mir-196a and hsa-miR 222) in gastric adenocarcinoma, also correlate these results to the clinicopathological features. 31 adenocarcinoma samples were evaluated, as well as normal or metaplastic region adjacent to the tumor. Relative quantification (RQ) of miRNA and mRNA ANXA1 was evaluated by TaqMan assay and protein expression AnxA1, FPR1 and FPR2 by immunohistochemistry and densitometry analysis. Regarding the relative expression the following results were observed, increased expression in tumors of ANXA1 (RQ = 1.374; p < 0.001) and miR- 196a that showed increased expression it he metaplastic tissue (RQ = 4.784; p = 0.0016) and tumor (RQ = 16.99; p < 0.001) compared to normal tissue. The miR- 27a did not appear differentially expressed in different tissues ... / Doutor

Orientador: Flávia Cristina Rodrigues-Lisoni / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Sandra Helena Poliselli Farsky / Banca: Wilson Araujo da Silva Júnior / Banca: Joice Matos Biselli Périco / Banca: Marilia de Freitas Calmon Saiki / Resumo: O câncer cervical é uma das principais neoplasias ginecológicas em todo o mundo. O microambiente tumoral influencia no processo tumorigênico. Nas diferentes fases da tumorigênese as inflamações crônicas estão envolvidas. Assim, a proteína anti-inflamatória anexina A1 (ANXA1), que é expressa pelas células tumorais, tem sido relacionada ao processo tumorigênico. Diante dessas considerações, o objetivo do presente trabalho foi investigar a ação do peptídeo mimético da proteína ANXA1 em células de carcinoma de colo de útero. As metodologias utilizadas foram Análise de proliferação, migração, viabilidade e apoptose celular, além da modulação da expressão de genes relacionados à inflamação por PCR quantitativa. No primeiro modelo, foi utilizado o Meio Condicionado da linhagem HUVEC (endotélio) (HMC) para realizar o cultivo celular junto as linhagens HaCat (normal) e HeLa (câncer). Nossos resultados mostram que as células de câncer cervical apresentam diminuição da proliferação, enquanto na morfologia, migração, viabilidade e apoptose celular não foram observadas mudanças. A análise dos genes, MMP2 e MMP9 mostrou aumento de expressão, enquanto os genes COX2, EP3 e EP4 diminuição, após estímulo com HMC. No segundo modelo, foi realizada comparação de duas linhagens tumorigênicas (HeLa e SiHa) com a linhagem HaCaT. A ANXA1 aumentou a expressão de EP4 e MMP9 e diminuiu a proliferação celular e a apoptose. Nesse contexto sugerimos que o peptídeo pode modular mecanismos celulares e... / Abstract: Cervical cancer is one of the main gynaecological cancers around the world. The tumor microenvironment influences in the tumor process. In the different tumour phases the chronic inflammations are associated. Thus, the anti-inflammatory protein annexin A1 (ANXA1), which is expressed by tumour cells, has been linked to the tumourigenesis. In view of this, the aim of the present work was to investigate the ANXA1 mimetic peptide action in the uterus carcinoma cells. The methodologies used were cellular proliferation, migration, viability and apoptosis assay, besides the gene expression modulation of genes related to inflammatory pathways by quantitative PCR. In the first model was used the conditioned medium of HUVEC cells (endothelium) (HMC) to performed the co-culture with HaCaT cell line (normal) and HeLa cell line (cancer). Our results showed that the cervical cancer cells had a decrease in proliferation, while changes in cellular morphology, migration, viability and apoptosis were not observed. The analysis of the MMP2 and MMP9 genes showed an upregulation, while the COX2, EP3 and EP4 presented a downregulation, after the HMC stimulus. In the second model was performed a comparison between two tumor cell lines (HeLa and SiHa) with the HaCaT cell line. The ANXA1 upregulated EP4 and MMP9 and decreased the cellular proliferation and apoptosis. That way, we suggest that the peptide may modulate cellular and molecular mechanisms in the cervical carcinogenesis, however its use as a possible therapeutic alternative should be better explored / Doutor

Orientador: Cristiane Damas Gil / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Eloísa Amália Vieira Ferro / Banca: Newton Antonio Bordin Jr / Resumo: A endometriose é uma doença inflamatória crônica, de etiologia multifatorial caracterizada pela implantação e crescimento do endométrio fora da cavidade uterina (endométrio ectópico). Nas lesões de endometriose, os mastócitos aparecem em elevado número, no entanto, poucos estudos investigaram seus mediadores inflamatórios na patogênese dessa doença. Entre os mediadores dos mastócitos ressaltamos a anexina A1 (ANXA1), proteína de 37 kDa com múltiplas ações biológicas como inibição da transmigração de leucócitos, proliferação celular e apoptose. Tais efeitos são mediados por receptores para peptídeos formilados (FPRs), especialmente FPR1. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar o papel das células inflamatórias, particularmente a ativação e heterogeneidade dos mastócitos, sua correlação com a expressão e o mecanismo de ação da ANXA1 em biópsias de endométrios eutópicos (controle, n=10) e ectópicos (endometriose de parede abdominal, n=18). As amostras de endométrio ectópico foram coletadas entre julho de 2003 e janeiro de 2012, incluídas em parafina e cedidas pelo Departamento de Patologia da FAMERP. As biópsias de endométrios eutópicos foram coletadas de pacientes sem quadro clínico de endometriose, entre junho de 2011 e junho de 2012, com a colaboração do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia da FAMERP. Essas biópsias foram processadas para: (i) análises histopatológicas, (ii) quantificação de células inflamatórias (neutrófilos e mastócitos) e (iii) imuno-histoquímica utilizando anticorpos específicos para estudo da heterogeneidade dos mastócitos (triptase e quimase), da expressão da ANXA1 e do receptor FPR1 nos tecidos. A análise histopatológica das lesões de endometriose mostrou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometriosis is a chronic inflammatory disease of multifactorial etiology, characterized by implantation and growth of endometrium outside the uterine cavity (ectopic endometrium). Endometriotic lesions presented a high number of mast cells, however, few studies have investigated their inflammatory mediators in the pathogenesis of this disease. Among these mediators we emphasize annexin A1 (ANXA1), a 37 kDa protein with multiple biological actions like inhibition of leukocyte transmigration, cellular proliferation and apoptosis. Such effects are mediated by formyl peptide receptors (FPRs), especially FPR1. Thus, the purpose of this study was to investigate the role of inflammatory cells, particularly the activation and heterogeneity of mast cells, and its correlation with expression and mechanism of action of ANXA1 in biopsies of eutopic (control, n = 10) and ectopic endometrium (abdominal wall endometriosis; n = 18). The samples of ectopic endometrium were collected between July 2003 and January 2012, embedded in paraffin and provided by the Department of Pathology of FAMERP. Biopsies of eutopic endometrium were collected from patients without clinical features of endometriosis, between June 2011 and June 2012, with the contribution of the Department of Obstetrics and Gynecology of FAMERP. These biopsies were processed for: (i) histopathology, (ii) the quantification of inflammatory cells (neutrophils and mast cells) and (iii) immunohistochemistry using specific antibodies to study the heterogeneity of mast cells (chymase and tryptase), and expression of ANXA1 and FPR1 receptor in tissues. Histopathological analysis of endometriotic lesions showed two morphological patterns: glandular pattern of mixed differentiation (presence of differentiated glands with simple prismatic epithelium and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre