Made available in DSpace on 2011-03-23T21:19:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Item created via OAI harvest from source: http://www.bdtd.ufpa.br/tde_oai/oai2.php on 2011-03-23T21:19:37Z (GMT). Item's OAI Record identifier: oai:bdtd.ufpa.br:272 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study of medicinal plants it makes possible the discovery of new bioactive components in the search for promising drugs. The increase of infections and the appearance of the microbial resistance strengthen this research. The Objective of this study it was evaluate the antimicrobial activity of the extracts of six medicinal plants of the Amazonia: Psidium guajava (guava), Bryophyllum calycinum Salisb (pirarucu), Eleutherine plicata Herb (marupazinho), Uncaria guianensis (Cats claw), Arrabideae chica (pariri) e Mansoa alliacea (Lam.) A.H. Gentry (cipó d'alho) against ATCC strains of fungi and bacteria.The collection and the identification of the plant were performed in EMBRAPA/CPATU and the phytochemical analysis in the Laboratory of FACFAR/UFPA and CESUPA in agreement with the methodologies established in these laboratories. The crude ethanolic extract of leaves and the underground parts of marupazinho were submitted to the antimicrobial activity evaluation though the ágar disc diffusion method and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) though microdilution in plate and ágar disc diffusion methods. The extracts were used in concentrations of 500, 250, 125, 62,5 and 31,25 mg/mL using as solvent Dimethyl Sulfoxide (DMSO). The Guava extract was effective against S. aureus, P. aeruginosa and C. albicans (MIC 125mg\mL), pirarucu was effective against S aureus (MIC= 500 mg/mL) and P. aeruginosa (MIC= 250 mg/mL), marupazinho against S.aureus (MIC= 500mg/mL) and C. albicans (MIC= 250mg/mL), Cats claw against S. aureus (MIC= 62,5mg/mL) and pariri was effective against S. aureus (MIC= 62,5 mg/mL), E. coli (MIC=250 mg/mL) and C. albicans (MIC 500 mg/mL). The fractions of U. guianensis extracts was obtained though fractioned dissolution methods and show that only the methanolic fraction presented antimicrobial activity. The results show that Amazonia medicinal plants presents antimicrobial activity and. This promissory extracts open the possibility of finding new clinically effective antimicrobial compounds. / O estudo de plantas medicinais possibilita a descoberta de novos compostos bioativos na procura de drogas promissoras. O aumento de infecções e o aparecimento da resistência microbiana reforçam essa pesquisa. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de extratos de seis espécies de plantas medicinais que ocorrem na Amazônia: Psidium guajava (goiabeira), Bryophyllum calycinum Salisb (pirarucu), Eleutherine plicata Herb (marupazinho), Uncaria guianensis (unha-de-gato), Arrabideae chica (pariri) e Mansoa alliacea (Lam.) A.H. Gentry (cipó d'alho) frente a cepas ATCC de bactérias e fungos. A coleta e a identificação das plantas foram realizadas na EMBRAPA/CPATU e a análise fitoquímica no Laboratório de Fitoquímica da FACFAR/UFPA e CESUPA obedecendo às metodologias estabelecidas nestes laboratórios. Os extratos etanólicos seco das folhas frescas das plantas e bulbo do marupazinho foram submetidos à avaliação da atividade antimicrobiana pelo método de disco difusão em ágar e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) através do método de microdiluição em placas e disco difusão em ágar. Os extratos foram utilizados em concentrações de 500, 250, 125, 62,5 e 31,25 mg/mL utilizando como solvente o Dimetil-Sulfóxido (DMSO). O extrato de goiabeira teve atividade frente a S. aureus, P. aeruginosa e C. albicans (CIM125mg\mL), o de pirarucu frente a S. aureus (CIM= 500 mg/mL) e P. aeruginosa (CIM= 250 mg/mL), o de marupazinho para S. aureus (CIM= 500mg/mL) e C. albicans (CIM= 250mg/mL), o de unha-de-gato contra S. aureus (CIM= 62,5 mg/mL) e o de pariri inibiu S. aureus (62,5 mg/mL), E. coli (250 mg/mL) e C. albicans (500 mg/mL). O fracionamento do EEB de U. guianensis através da técnica de dissolução fracionada demonstrou que a fração metanólica teve ação antimicrobiana. Os resultados comprovaram que estas plantas possuem atividade antimicrobiana. Estes extratos abrem uma possibilidade de descobertas de novos compostos antimicrobianos clinicamente efetivos.

Os fungos endofíticos tornam-se valiosa fonte para descoberta de novas moléculas de interesse terapêutico e biotecnológico. O objetivo deste trabalho consistiu em avaliar o potencial bioativo do produto da fermentação do fungo endofítico Gibberella moniliformis 99(3) e identificar as moléculas responsáveis por essa bioatividade. Inicialmente, o endófito isolado das folhas de Laguncularia racemosa foi submetido ao processo de fermentação em caldo Czapeck por 20 dias/ 28ºC em condições estáticas. Após, o caldo fermentado foi particionado com diferentes solventes, gerando os extratos acetato de etila (JAc: 238 mg) e n-butanólico (JBu: 27,2 mg). Estes foram biomonitorados pelo ensaio de difusão em ágar frente diferentes patógenos (S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 25922 e C. albicans ATCC 10231) e, diante do potencial antimicrobiano observado, foi determinada também a concentração inibitória mínima (CIM) e microbicida mínima (CMM). É pertinente destacar os resultados para JAc (CIM: 125-250 µg/mL) e para JBu (CIM: 25-50 µg/mL; CMM: 100-200 µg/mL) contra C. albicans ATCC 10231. Procedeu-se estudo de fracionamento bioguiado com o extrato JAc, obtendo 27 frações. Estas foram reagrupadas em quatro (J1, J2, J3 e J4), às quais foram biomonitoradas quanto ao potencial antimicrobiano, sendo o maior destaque evidenciado pela fração J3. No estudo cromatográfico, J3 revelou-se positivo com reagente de Dragendorff e luz UV 254 nm. Os estudos espectroscópicos com esta fração (H¹ RMN, C¹³ RMN, COSY, HSQC, HMBC, EM e IV), permitiram a caracterização de um alcaloide piridínico denominado Ácido 5-butilpiridina-2-carboxílico, também conhecido como Ácido fusárico. Investigou-se o potencial biológico deste composto por meio de seis ensaios biológicos in vitro. No estudo de viabilidade celular, pelo ensaio do MTS frente quatro linhagens humanas tumorais (A549, Hep G2, HT 144 e MCF 7), observou-se seletividade moderada para duas linhagens (MCF 7 e HT 144) e baixa seletividade para a linhagem normal (CCD-1059Sk). A redução da viabilidade celular de 60 % (MCF 7) e 50 % (HT 144), ocorreu por efeito antiproliferativo (IC50: 60 µg/mL), conforme constatado no ensaio por exclusão com o azul de tripano. Nos estudos antimicrobianos, o alcaloide piridínico evidenciou forte potencial antifúngico frente C. albicans ATCC 10231 (CIM: 25-50 µg/mL; CFM: 200-400 µg/mL). Neste sentido, o conjunto dos dados permitiu sugerir tratamento tópico seguro para o paciente com candidíase, uma vez que a CIM esteve bem abaixo de uma possível concentração tóxica para os fibroblastos de pele (CCD-1059Sk). Ainda, diante do perfil antifúngico observado contra linhagens provenientes de ambiente hospitalar, este composto poderia ser indicado como higienizador em fontes secundárias de contaminação (CIM contra C. albicans isoladas de lençol e jaleco: 50-100 µg/mL). Também foi constatado forte potencial bacteriostático contra E. coli (CIM: 50-100 µg/mL) e moderado contra S. aureus (CIM: 200-400 µg/mL). Por meio das imagens de MEV foi possível observar que a bactéria S. aureus sofreu evidentes alterações morfológicas quando tratada com 200 e 400 µg/mL de Ácido fusárico. Ao investigar o efeito sinérgico da associação do composto com antimicrobianos de uso comercial, verificou-se frente a E. coli efeito parcialmente sinérgico (ICIF = 0,625), com potencialização em oito vezes da atividade antimicrobiana da estreptomicina. Frente S. aureus foi verificado efeito aditivo na associação do alcaloide e amoxicilina (ICIF = 1). Em estudo da ação antituberculose, observou-se CIM90 > 25 µg/mL. Conclui-se que o fungo endofítico G. moniliformis é promissor na produção de compostos de interesse e os estudos realizados no presente trabalho abrem novas perspectivas de conhecimento para o Ácido fusárico que até então não haviam sido explorados na literatura. / The endophytic fungi become valuable sources for discovering new molecules with therapeutic and biotechnological interest. The present study aimed to evaluate the bioactive potential of the products obtained in the fermentation of Gibberella moniliformis 99(3) endophytic fungus and to identify the molecules responsible for this bioactivity. Initially, the endophyte isolated from leaves of Laguncularia racemosa (Brazilian mangrove) was submitted to the fermentation in Czapek broth for 20 days / 28°C, under static conditions. Then, the fermented broth was partitioned with different solvents resulting in the ethyl acetate (JAc: 238 mg) and n-BuOH (JBu: 27.2 mg) extracts. These extracts were biologically monitored by agar diffusion assay against different pathogens (S. aureus ATCC® 6538™, E. coli ATCC® 25922™ and C. albicans ATCC® 10231™). Since an antimicrobial potential was observed, the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal microbicidal concentration (MMC) were also determined. It is pertinent to highlight the results of JAc (CIM: 125-250 µg/mL) and to JBu (CIM: 50-100 µg/mL; CMM: 100-200 µg/mL) against C. albicans ATCC 10231. A bioguided fractionation study was realized with JAc extract obtaining 27 fractions, which were grouped into four fractions (J1, J2, J3 e J4). The antimicrobial potential was biomonitored, with more emphasis to J3. In chromatographic study, the J3 fraction was positive to Dragendorff reagent and UV 254 nm. In the spectroscopic studies with J3 (H¹ NMR, C¹³ NMR, COSY, HSQC, HMBC, MS and IR) was possible the characterization of a pyridine alkaloid called 5-butylpyridine-2-carboxylic acid also known as fusaric acid. The bioactive potential of this compound was investigated applying six biological assays in vitro. The cell viability study was realized by colorimetric assay MTS, using four human tumor lines (A549, Hep G2, HT 144 and MCF 7), was observed a moderate selectivity for the lines MCF 7 and HT 144 and low selectivity was assessed on normal fibroblast strains (CCD-1059Sk). The reduction of cellular viability of 60 % (MCF 7) and 50 % (HT 144) occurs by antiproliferative effect (IC50: 60 µg/mL), according to test by exclusion with trypan blue. In antimicrobials studies, the pyridine alkaloid showed strong antifungic potential against C. albicans ATCC 10231 (MIC: 25-50 µg/mL; MFC: 200-400 µg/mL). In this sense, a safe and topical treatment for patients with candidiasis could be suggested based on data set, once the MIC was well below toxic concentration for a possible skin fibroblasts (CCD-1059Sk ). Besides that, this compound could be suitable for use as a sanitizer on secondary sources of hospital infection due to the fungistatic profile observed in C. albicans isolated from lab coat and sheet (MIC : 50-100 µg/mL). It was also observed strong bacteriostatic potential against E. coli (MIC: 50-100 µg/mL) and moderate against S. aureus (MIC: 200-400 µg/mL). With the SEM images was noted that S. aureus suffered obvious morphological changes when treated with 200 and 400 µg/mL of fusaric acid. Investigating the synergistic potential of the combination between fusaric acid and commercially used antimicrobials, it was observed partially synergistic effect (ICIF = 0,625) for E. coli, with eight times potentiation of the streptomycin antimicrobial activity. It was checked for S. aureus an additive effect in the combination of alkaloid and amoxicillin (ICIF = 1). Studying antimycobacterial activity, the compound was tested against Mycobacterium tuberculosis, with MIC90 > 25 µg/mL. The present work consistently demonstrated that the fungus endophyte G. moniliformis is promising in the production of compounds of interest and the data presented in this study open up new avenues of knowledge for fusaric acid which until then had not been explored in the literature.

Orientador: Jacqueline Teixeira Caramori / Coorientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Pasqual Barretti / Banca: Alessandro Mondelli / Banca: Ronaldo D'Ávila / Banca: Carlos Henrique Camargo / Resumo: Peritonites e infecções do orifício de saída do cateter de diálise representam as principais complicações infecciosas relacionadas à diálise peritoneal, frequentemente respondem pela falência deste método dialítico, portanto com importante impacto na morbidade e mortalidade dos pacientes. Existem associações entre o portador de S. aureus e aumento no risco de infecções nos pacientes tratados por diálise peritoneal. Entretanto, desconhecemos estudos que avaliaram a virulência de Staphylococcus spp. carreados. Fatores de virulência são descritos como responsáveis pelos sintomas e gravidade de diversas infecções causadas por S. aureus. Esses fatores incluem as hemolisinas α, β, γ e δ, lipases, lecitinases, proteases, toxina 1 da Síndrome do Choque tóxico (TSST-1) e as enterotoxinas estafilocócicas (EEs), desoxirribonuclease (DNAse) e de desoxirribonuclease termoestável (TNAse). Este estudo teve como objetivo avaliar se fatores de virulência produzidos por Staphylococcus spp. e as características clinicas e epidemiológicas dos pacientes podem influenciar na ocorrência de infecções relacionadas ao tratamento. Para tal, foram incluídos 32 pacientes tratados por diálise peritoneal na Unidade de Diálise do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu- UNESP, avaliados primariamente quanto à colonização (culturas de coletas nasais e pele pericateter, em três momentos distintos no período de 12 meses) e subsequentemente foram observados quanto ao risco para a ocorrência de infecções, acompanhados por até 36 meses confirmados com culturas do efluente peritoneal na ocorrência de peritonites e secreção da pele pericateter na vigência de infecção de orifício de saída do cateter. As amostras de Staphylococcus spp. carreadas depois de devidamente identificadas, foram reavaliadas usando como critério de similaridade o método de susceptibilidade com ... / Abstract: Peritonitis and infections in the exit orifice of the dialysis catheter represent the main infectious complications related to peritoneal dialysis, and are often responsible for the failure in this dialysis method, therefore with a significant impact on morbidity and mortality of patients. There are associations between the carrier of S. aureus and increased risk of infection in peritoneal dialysis patients. However, studies that evaluated the virulence of Staphylococcus spp. carried are not aware. Virulence factors are described as responsible for the symptoms and severity of different infections caused by S. aureus. These factors include hemolysins α, β, and δ, lipases lecithinases, proteases, toxin 1 in Toxic Shock Syndrome (TSST-1) and staphylococcal enterotoxins (SEs), deoxyribonuclease (DNase) and thermostable deoxyribonuclease (TNAse). This study aimed to evaluate whether virulence factors produced by Staphylococcus spp. and the clinical and epidemiological characteristics of patients may influence the occurrence of infections related to the treatment. In order to do this, 32 patients treated by peritoneal dialysis at the Dialysis Unit of the University Hospital, Botucatu School of Medicine, UNESP, Brazil were included, evaluated primarily by the colonization (cultures collected from the nose and pericatheter skin, at three different times during 12 months) and subsequently were observed regarding the risk for the occurrence of infections, followed by at least 36 months confirmed with cultures from peritoneal effluent in the occurrence of peritonitis and secretion of the pericatheter skin in the occurrence of infection in the outlet orifice of the catheter. Samples of Staphylococcus spp. carriers after being properly identified, were reevaluated using similarity criteria from the method of susceptibility agar drug diffusion technique (Kirby-Bauer method), thus allowing strains selection of ... / Doutor

Título original: Fungos isolados do solo da Antártica : avaliação da atividade contra bactérias fitopatogênicas / Orientador: Daiane Cristina Sass / Banca: Ben-Hur Mattiuz / Banca: Patricia Giovanella Grazziotin / Resumo: As bactérias fitopatogênicas do gênero Xanthomonas são capazes de atingir diversos cultivares de interesse comercial, causando anualmente perdas severas na produção. Um exemplo deste gênero é a Xanthomonas citri subsp. citri, causadora do cancro cítrico em diversas espécies de citros. O controle desta doença atualmente conta com o uso de quebraventos, erradicação de plantas contaminadas e desinfecção de equipamentos, embora o modo mais eficiente seja o uso de produtos químicos a base de cobre. Outra bactéria pertencente ao mesmo gênero é a X. albilineans, causadora da escaldadura-das-folhas na cana-de-açúcar. O controle dessa doença ainda é pouco efetivo, sendo aconselhada a desinfecção de equipamentos e mudas. Pensando no problema fitossanitário relacionado a essas bactérias e nos efeitos negativos associados aos produtos químicos à base de metais pesados, torna-se indispensável a busca por compostos naturais capazes de controlar estas doenças e que possam ser menos nocivos ao ambiente. Neste contexto, micro-organismos de ambientes extremos podem produzir metabólitos secundários ainda desconhecidos. Assim, o objetivo deste trabalho foi obter extratos brutos de fungos filamentosos isolados do solo antártico e avaliar seu potencial de bioatividade contra X. citri e X. albilineans através de ensaios de viabilidade celular. Foram testados 122 extratos contra ambas as bactérias. Nove destes extratos inibiram de forma satisfatória (>90%) o crescimento celular de X. citri e dois ex... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Phytopathogenic bacteria of the genus Xanthomonas able of attain several cultivars of commercial interest, causing yearly severe production losses. An example of bacterium of this genus is Xanthomonas citri subsp. citri, which causes citrus canker in various species of citrus. The control of this disease currently counts on the use of windbreaks, eradication of contaminated plants and disinfection of equipment, although the most efficient way is the use of copper-based chemicals. Another bacterium belonging to the same genus is X. albilineans, which causes leaf scald in sugarcane. The control of this disease is still not very effective, being advised the disinfection of equipment and seedlings. Thinking about the phytosanitary problem related to these bacteria and the negative effects associated with heavy metal chemicals, it is essential to search for natural compounds capable of controlling these diseases and that are less harmful to the environment. In this sense, microorganisms from extreme environments can produce secondary metabolites that are still unknown. Thus, the aim of this work was to obtain crude extracts of filamentous fungi isolated from the Antarctic soil and to evaluate their bioactivity potential against X. citri and X. albilineans through cell viability assays. In total, 122 extracts were tested against both bacteria. Nine of the 122 extracts inhibited satisfactorily (>90%) the cell growth of X. citri and two of the 122 extracts showed satisfactory inhibit... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Coorientador: João Manoel Theotonio dos Santos / Banca: Luciane Dias Oliveira / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Resumo: A resistência adquirida pelas bactérias aos antibióticos de amplo espectro tornou-se uma ameaça à saúde global. A necessidade de encontrar fármacos que consigam combater micro-organismos multirresistentes tem se tornado um grande desafio. Neste cenário, as plantas medicinais são promissoras por terem propriedades antimicrobianas eficazes, devido à presença de compostos fitoquímicos com atividades biológicas diversas. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação antimicrobiana dos extratos glicólicos de Hamamelis virginiana (hamamélis) e de Persea americana (abacateiro) sobre cepas multirresistentes de Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa. A avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos vegetais foi realizada em sete cepas clínicas de K. pneumoniae e de P. aeruginosa, em comparação com uma cepa de referência de K. pneumoniae (ATCC 4352) e de P. aeruginosa (ATCC 15442). Para a determinação das concentrações inibitórias mínimas (CIM) e bactericida mínima (CBM) dos extratos de abacateiro e de hamamélis foi utilizado o método de microdiluição em caldo, segundo NCCLS. Após obtenção destes resultados, foi verificada a ação dos extratos sobre biofilmes monomicrobianos de oito cepas de K. pneumoniae e de P. aeruginosa (1 cepa ATCC e 7 cepas clínicas resistentes). Após o período de 48 horas para a formação do biofilme, os extratos foram adicionados separadamente, pelo período de cinco minutos, na concentração efetiva pré-determinada (CBM) e concentrações superiores. Poster... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : The resistance created by bacteria to broad-spectrum antibiotics has become a threat to global health. The need to find drugs that can combat multidrug-resistant microorganisms has become a major challenge. In this scenario, medicinal plants are promising because they have effective antimicrobial properties due to the presence of phytochemical compounds with diverse biological activities. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial action of the glycolic extracts of Hamamelis virginiana (hamamelis) and Persea americana (avocado) on multiresistant strains of Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa. The evaluation of the antimicrobial activity of the plant extracts was carried out in seven clinical strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa, compared to an strain of K. pneumoniae (ATCC 4352) and P. aeruginosa (ATCC 15442). The broth microdilution method, according to NCCLS, was used to determine the minimum inhibitory (MIC) and bactericidal (MBM) concentrations of the extracts of avocado and witch hazel. After obtaining these results, the extracts on monomicrobial biofilms of eight strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa (1 strain ATCC and 7 resistant clinical strains) were verified. After the 48 hour period for biofilm formation, the extracts were removed, with a five-minute interval, in the effective exercise session (MBC) and in the upper sets. Afterwards, the biofilms were washed and measured by two different testicles, in which the biofilm biomass was evaluated by the violet glass and the viability of the microorganisms by the MTT test. The experiments were performed with n = 10, using two replicates for each strain / extract. The data were analyzed statistically by the ANOVA method, complemented by the Tukey test, with a significance level of 5% (p≤0.05). The results demonstrated an antibacterial activity of both extracts against the standard strain and as the clinical .... / Mestre

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-10. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:54:55Z : No. of bitstreams: 1 000863160.pdf: 2766481 bytes, checksum: c82e010be8ff17e9bea4e42451484ce0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Vários experimentos têm comprovado que compostos naturais podem ter sua atividade biológica alterada devido à presença ou ausência de halogênios ligados. Os antibióticos glicopeptídicos, como a vancomicina e teicoplanina são produtos naturais halogenados que apresentam destacada importância. Halogenases são enzimas que catalizam a transferência de halogênios para um determinado substrato, porém são muito pouco estudadas, principalmente aquelas envolvidas na biossíntese de produtos naturais, como antibióticos glicopeptídicos, mesmo com o seu potencial de aplicação em biologia sintética. Cepas produtoras de glicopeptideos foram obtidas da coleção NRRL e crescidas em meio TSB. O DNA foi extraído e os genes de 3 diferentes halogenases (staI e staK de Streptomyces toyocaensis, composto 47934 and Orf8* de Actinoplanes teichomyceticus, Teicoplanina) foram clonados em pET28a e pET20a. Um gene sintético foi obtido para enzima ComH (biossíntese de complestatina) e clonado em pET28a. A expressão desses genes foi induzida por IPTG e a purificação se deu em colunas de afinidade e gel filtração. Foram realizados estudos biofísicos (CD e DLS da StaI), bem como modelagem molecular e ensaios de complementação para proteínas StaK e StaI. Três halogenases foram purificadas, StaI, StaK e ComH e apresentaram coloração amarela indicando a co-purificação com FAD. Orf8* apresentou-se somente na fração insolúvel. Análises de CD indicam a presença de -hélices e folhas-β e foi possível observar o estado de oligomerização e polidispersividade em diferentes condições para halogenase StaI. Os modelos moleculares deram insights sobre uma possível diferença de padrão de halogenação catalizada pela StaI e StaK, devido à diferença de resíduos hidrofóbicos que formam os sulcos do sítio ativo. Tentativas de ensaios de cristalização para as enzimas StaI, StaK e ComH foram realizadas. No entanto, apenas a... / Various experiments have shown that natural compounds may have their biologic activity altered by presence or absence of halogens. Glycopeptide antibiotics, such as vancomycin and teicoplanin are halogenated natural products and they have substantial importance in the medicine. Halogenases, are enzymes that catalyses the attachment of halogens to a substrate, howerver they are not well understood mainly those ones in glycopeptide biosynthesis. Producing glycopeptides strains were obtained from NRRL collection, they were grown in liquid TSB medium and the DNA was extracted. Three different genes for halogenases [(staI and staK from Streptomyces toyocaensis (compound 47934) and Orf8* from Actinoplanes teichomyceticus (Teicoplanin)] were amplified and cloned into pET28a and pET20a. A synthetic gene for comH from the biosynthesis of complestatin was obtained and also cloned in the pET28a. The expression of these four genes was carried out with the induction by IPTG and the purification was performed by affinity and molecular exclusion. Samples of soluble and insoluble fractions and chromatographic peaks were analyzed on SDS-PAGE gel. Circular Dichroism (CD) and Dynamic Light Scattering (DLS) studies were performed for StaI and ComH. We have also performed molecular modelling for StaI and StaK enzymes because attempts to crystallise all the soluble halogenases did not return any result (only StaI had a single crystal which showed not reproduzible). ComH, StaI and StaK were purified and they had an yellow colour indicating the co-purification with FAD.Orf8* was predominantly insoluble. SDS-PAGE gel showed that StaI had high purity already after the affinity purification and the molecular exclusion indicates that it had a tendency to aggregate. By the analysis of CD was possible to observe the structural integrity of StaI and ComH, which shows, as expected, the presence of -helixes and β-sheets. The DLS analysis shows the oligomerization ...

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:55:48Z : No. of bitstreams: 1 000863358_20171127.pdf: 671716 bytes, checksum: 06abdb9a8506b377cfb35cd6a6a0a48c (MD5) Bitstreams deleted on 2017-11-29T13:07:49Z: 000863358_20171127.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-11-29T13:08:40Z : No. of bitstreams: 1 000863358.pdf: 3362145 bytes, checksum: 588e01358a7898877beceed2f3a6af28 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Em virtude da incidência de doenças veiculadas por alimentos e do interesse crescente no emprego de conservantes naturais para substituir os aditivos químicos, esta pesquisa objetivou avaliar os efeitos in vitro e in situ do óleo essencial de orégano (OEO), empregado individualmente e em combinação com sal (cloreto de sódio), sobre duas bactérias contaminantes de alimentos, Escherichia coli (ATCC 8739) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Para tanto, empregou-se uma amostra comercial de óleo essencial de orégano (Origanum vulgare L.), que foi caracterizada por cromatografia gasosa. Os ensaios de resistência in vitro foram efetuados por meio do procedimento de difusão em ágar por disco. A contagem microbiana foi padronizada em 108 UFC.mL-1. O efeito do OEO e do sal foi avaliado em planejamento fatorial 22 com um ponto central. Para o estudo in situ foi proposto como sistema alimentício um condimento preparado de orégano, composto por leite em pó integral, água, óleo vegetal de soja, extrato de soja em pó, OEO e sal, sendo os dois últimos constituintes os fatores cujos níveis foram avaliados. Para tanto, empregou-se um delineamento composto central rotacional, com 4 pontos fatoriais, 4 pontos axiais e 3 repetições do ponto central. A aceitação sensorial dos condimentos formulados com diferentes quantidades de OEO e de sal foi avaliada em relação aos seguintes atributos sensoriais: aparência, aroma, textura, sabor e aceitação global, empregando uma escala hedônica de nove pontos. A intenção de compra foi pesquisada por uma escala de cinco pontos estruturada. As distintas formulações do condimento preparado de orégano foram avaliadas centesimalmente por meio de análises dos teores de cinzas, lipídeos, proteínas e umidade. A caracterização cromatográfica do OEO revelou que o produto composto majoritariamente por carvacrol (65,1 %) e ρ- cimeno (12,0 %). Não houve diferença significante na aceitação das... / Due to the incidence of foodborne illnesses and the increasing interest in the use of natural preservatives to replace chemical additives, this research aimed to evaluate in vitro and in situ effects of oregano essential oil (OEO), used individually and in combination with salt (sodium chloride) against two foodborne pathogens, Escherichia coli (ATCC 8739) and Staphylococcus aureus (ATCC 25923). It was employed a commercial sample of oregano essential oil (Origanum vulgare L.), which was characterized by gas chromatography. The in vitro antibacterial assays were conducted by the disc diffusion method. Microbial counts were standardized to 108 CFU.mL-1. The effect of OEO and salt was evaluated in factorial design 22 with a central point. For the in situ study was proposed as food system a oregano salad dressing, composed of powdered whole milk, water, vegetable soybean oil, soybean powder extract, OEO and salt. The latter two constituents were factors whose levels were evaluated. For this, it was used a central composite design with four factorial points, four axial points and three repetitions of the central point. Sensory assessment of salad dressing with OEO was evaluated in relation to the following attributes: appearance, aroma, consistence, flavour and overall acceptability. A nine point hedonic scale was employed, besides purchase intent by a structured five point scale. Chromatographic characterization of OEO revealed that the oil was composed mainly of carvacrol (65.1 %) and ρ-cymene (12.0 %). There was no significant difference in the acceptance of the samples (P < 0.05). Cluster analysis showed that formulation with intermediate quantities of salt and OEO was preferred by the judges. Oregano essential oil salad dressings with low salt content, regardless of OEO amount, presented higher intention to purchase. The distinctive oregano salad dressings formulations showed similar profiles, especially lipids present in levels from ...

Staphylococcus aureus é reconhecidamente causador de infecções humanas e um dos principais patógenos alimentares. O regulador gene acessório (Agr) é um sistema central que controla a expressão de diversos fatores de virulência. O polimorfismo do locus agr divide S.aureus em grupos genéticos distintos associados a determinados perfis patogênicos. O objetivo deste estudo foi comparar fenotipicamente e genotipicamente isolados clínicos e alimentares de S.aureus. Um total de 63 S.aureus (34 isolados de cateter venoso central (CVC) e 29 de carne de frango) foram selecionados para o estudo. O gene sea foi encontrado em 44,1% (15/34), seb em 5,9% (2/34) e sec em 8,8% (3/34) dos isolados de CVC. Em isolados de frango, apenas o gene sea foi detectado e foi observado em 31% (9/29). Somente 6% (2/34) dos isolados de CVC formaram biofilme. Já, em isolados de frango, 93% (27/29) foram formadores de biofilme (P<0,01). Nos isolados de CVC, os genes icaA, atlA e sasG envolvidos com a formação de biofilme estiveram presentes em 100% (34/34), 97% (33/34) e 100% (34/34), das amostras respectivamente, enquanto que, em isolados de carne de frango os mesmos genes foram detectados em 93% (27/29), 52% (15/29) e 100% (29/29), respectivamente. Cepas resistentes à penicilina foram detectas em 86,2% dos isolados de carne de frangos e em 88,2%, dos isolados de CVC. Isolados de CVC foram resistentes a oxacilina e multirresistentes em 17,6% (6/34). Com relação ao polimorfismo do locus agr, os S.aureus isolados de CVC foram dividos em 3 grupos, onde 44% (15/34) tiveram o polimorfismo I, 38% (13/34) o II e 18% (6/34) o III. Os S.aureus isolados de carne de frangos, também foram divididos em 3 grupos, onde 86% (25/29) dos isolados tiveram o polimorfismo I, 10% (3/29) o II e 4%o III (1/29) (P<0,05). Entre os isolados de CVC, 88,2% (30/34) produziram a δ-hemolisina, ou seja, expressavam o sistema Agr, já entre os isolados de frangos, apenas 3,3% eram δ-hemoliticos (P<0,05). Conclui-se que os isolados diferiram quanto à capacidade de formação de biofilme, polimorfismo Agr e produção da δ-hemolisina. No entanto, resultados similares foram observados quanto à detecção dos genes das enterotoxinas e os envolvidos com formação de biofilme. A análise molecular mostrou uma elevada similaridade entre os grupos o que pode indicar uma mesma origem destes isolados. / Staphylococcus aureus is recognized as cause of human infections and a one of the important foodborne pathogens. The accessory gene regulator (Agr) is a central system that controls the expression of several virulence factors. The polymorphism of the agr locus divided S. aureus into distinct genetic group associated with determinats of pathogenic profiles. The aim of this study was to the phenotypic and genotypic patterns of S.aureus isolated from clinical and food samples. A total of 63 S. aureus (34 from central venous catheter (CVC) and 29 from poultry meat) were selected for the study. The sea gene was found in 44.1% (15/34), seb in 5.9% (2/34) and sec in 8.8% (3/34) of CVC isolates. In poultry meat isolates, only sea gene was detected and it was observed in 31% (9/29). Only 6% (2/34) of CVC isolates formed biofilm. Further, 93% (27/29) of poultry meat isolates were biofilm formers (P<0.01). In CVC isolates, the icaA, atlA and sasG genes involved in biofilm formation were present in 100% (34/34), 97% (33/34) and 100% (34/34) of the isolates respectively, while in poultry meat isolates the same genes were detected in 93% (27/29), 52% (15/29) and 100% (29/29), respectively.Strains penicillin resistant was detected in 86.2% of poultry meat and 88.2 % CVC isolates. CVC isolates were also oxacillin resistant and multiresistants in 17.6% (6/34). In regard to the polymorphism of agr locus, the CVC isolates were divided into 3 groups, where 44% (15/34) belong to polymorphism I, 38% (13/34) to II and 18% (6/34) to III. The S. aureus strains isolated from poutry meat were also divided into 3 groups, where 86% (25/29) showed the polymorphism I, 10% (3/29) the II and 4% (1/29) the III (P<0.05). Among the CVC isolates 88.2% (30/34) produced δ-hemolysin, i.e., expressed the Agr system, in addition among the poultry meat isolates, only 3.3% were δ-hemolytic (P<0.05). In conclusion, S.aures isolated from CVC and poultry meat showed differences in their ability to form biofilm, Agr polymorphism and production of δ-hemolysin. In conclusion, S.aures isolated from CVC and poultry meat showed differences in their ability to form biofilm, Agr polymorphism and production of δ-hemolysin. However, similar results were observed in relation to enterotoxin genes and those involved in biofilm formation.The molecular analysis show high genotypic similarity to S.aures isolated from CVC and poultry meat, suggesting a common origin of these isolates, possible the human microbiota.

Enterococcus faecalis estão entre as principais causas de infecções hospitalares em todo o mundo e é uma das mais importantes na área clínica devido à presença de inúmeros fatores de virulência que reforçam sua patogenicidade. Estudos mostram que concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem alterar a resposta transcricional e fenotípica de bactérias, porém pouco se sabe sobre como a vancomicina pode afetar a expressão gênica nos microrganismos portadores de seus genes de resistência (genes van). Portanto, este trabalho objetivou avaliar presença e expressão de genes vanC em E. faecalis vancomicina-susceptíveis e avaliar o comportamento de isolados Enterococos Vancomicina-Resistentes (EVR) na ausência e presença de concentrações subinibitórias de vancomicina por PCR quantitativa. Identificamos a presença e a expressão de genes vanC em E. faecalis vancomicina-susceptíveis, sendo estes genes específicos para as espécies Enterococcus gallinarum e Enterococcus casseliflavus, sugere-se que o E. faecalis possa tê-los adquirido por transferência horizontal. Verificamos que a presença de vancomicina in vitro é capaz de interferir na modulação de genes de virulência em isolados EVR, porém não interfere na formação de biofilme destes isolados. Embora os dados aqui apresentados refiram-se a testes in vitro, podemos inferir que os genes vanC estão sendo transferidos para outras espécies e que a vancomicina pode estar contribuindo para o aumento na expressão de fatores de virulência in vivo, levando ao agravamento de quadros clínicos. / Enterococcus faecalis are among the leading causes of nosocomial infections worldwide and is one of the most important in the clinical area due to the presence of numerous virulence factors that enhance the pathogenicity. Studies show that sub-inhibitory concentrations of antibiotics can alter the transcriptional and phenotypic response of bacteria, but little is known about the effect of vancomycin in gene expression in microorganism bearers of their resistance genes (genes van). Therefore, this study aimed to evaluate the presence and expression of vanC genes in E. faecalis vancomycin susceptible and evaluate the behavior of vancomycin resistant enterococci (VRE) strains in the absence and presence of sub-inhibitory concentrations of vancomycin for Quantitative-PCR. We have identified the presence and expression of vanC genes in E. faecalis which are specific to Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus species, it is suggested that the E. faecalis may have acquired these genes by horizontal gene transfer. We found that the presence of vancomycin in vitro is able of interfering with modulation of expression of virulence genes in VRE strains but does not interfere in the biofilm formation of these isolates. Although the data presented here were obtained from in vitro tests, we can infer that the vanC genes are being transferred to other species and that vancomycin may be contributing to the increase in the expression of virulence factors in vivo, leading to worseres clinical outcomes.

A ação química, obtida pelo emprego de substâncias auxiliares de instrumentação, aliada à ação mecânica, promove a limpeza do sistema de canais radiculares. Determinadas propriedades das substâncias químicas, como a ação antimicrobiana, têm contribuído para a eliminação de microrganismos encontrados em dentes com necrose pulpar e infecção. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana do hipoclorito de cálcio [Ca(OCl)2] em diferentes concentrações (0,5%, 1%, 2,5% e 5%) frente ao Enterococcus faecalis e compará-la com a ação do hipoclorito de sódio (NaOCl) pelos métodos de Difusão em Ágar e de Contato em Meio Líquido. A ampicilina 10 μg e água destilada foram utilizadas como controle positivo e negativo, respectivamente, no método de difusão em Ágar. No contato em meio líquido o microrganismo entrou em contato com a substância teste em períodos pré-determinados (15 segundos, 30 segundos, 1 minuto, 5 minutos e 10 minutos). O efeito da presença de dentina humana, albumina sérica bovina e endotoxina de Escherichia coli O55:B5 sobre as propriedades antimicrobianas das soluções foi avaliado. Os componentes teciduais e microbianos permaneceram em contato com a solução por 2 minutos, 30 minutos ou 6 horas. Os halos de inibição do crescimento microbiano verificados no Ágar foram mensurados. A presença ou ausência de turvação no meio líquido, indicando crescimento microbiano, foi determinada para cada tempo experimental, no método de contato em meio líquido. O número de unidades formadoras de colônia (UFC) por mililitro foi quantificado, após a exposição do microrganismo às substâncias químicas auxiliares, na presença dos componentes teciduais. Os resultados foram tabulados e realizou-se análise estatística. Observou-se que os maiores halos de inibição foram produzidos pelo Ca(OCl)2 5% (17,38 mm ±3,71), sendo inferior ao produzido pela ampicilina (30,35 mm ±1,64). Soluções de NaOCl e Ca(OCl)2, na mesma concentração, não apresentaram diferenças significativas entre si. Os diâmetros dos halos de inibição produzidos por NaOCl ou Ca(OCl)2 foram proporcionais ao aumento da concentração. O tempo de inibição para o crescimento do E. faecalis, em meio líquido, é menor em concentrações mais elevadas de Ca(OCl)2 e NaOCl. As soluções de NaOCl 2,5%, NaOCl 5% e Ca(OCl)2 2,5% e Ca(OCl)2 5.0% foram iguais entre si. A dentina e a endotoxina de E. coli não interferiram na ação antimicrobiana das soluções de hipoclorito testadas. A soluções de NaOCl 0,5%, 1% e 2,5% e de Ca(OCl)2 0,5% quando expostas à albumina, por 2 minutos, apresentaram seu efeito antimicrobiano reduzido. Concluiu-se que soluções de hipoclorito de cálcio apresentaram ação antimicrobiana frente ao E. faecalis, em concentrações similares às do hipoclorito de sódio empregadas em Endodontia. O efeito antimicrobiano demonstrado pelas soluções é proporcional a sua concentração, podendo ser modulado pela albumina, em curtos períodos de exposição. / The chemical action produced by the auxiliary substances can promotes the cleaning of the root canal system. Certain properties of chemical substances, such as their antimicrobial activity, have contributed to the elimination of microorganisms in infected pulp tissues. The aim of this study was to evaluate, in vitro, the antimicrobial activity of calcium hypochlorite [Ca(OCl)2] in different concentrations (0.5%, 1%, 2.5% and 5%) over Enterococcus faecalis and compare it to sodium hypochlorite (NaOCl) through the ágar diffusion method and the broth dilution method. Ampicillin 10 μg and distilled water were used as positive and negative control, respectively in the ágar diffusion method. In the broth dilution method, E. faecalis cells were exposed to the auxiliary chemical substances for (15 sec, 30 sec, 1 min, 5 min or 10 min). The effect of human dentin powder, 18% bovine serum albumin and Escherichia coli O55:B5 endotoxin over the antimicrobial properties of the solutions was evaluated, after 2 minutes, 30 minutes or 6 hours. The inhibition zones were measured. The presence of broth turbidity was recorded, for each time period, after 24 hours, in the Broth dilution method. The colony forming units (CFU) per milliliter were counted after the exposure of the E. faecalis to the tested tissue or bacterial components. Statistical analysis was carried out. The Ca(OCl)2 5% had the largest inhibition zones (17.38 mm ±3.71), however they were shorter than ampicillin zones (30.35 mm ±1.64). There was no statistical difference between NaOCl and Ca(OCl)2 solutions with the same concentration. It was observed that the highest the NaOCl or Ca(OCl)2 concentration, the largest the inhibition zone. In the broth dilution method, the time required for E. faecalis growth inhibition was shorter in highly concentrated solutions than in low concentrated solutions. There was no statistical difference among 2.5% NaOCl, 5% NaOCl, 2.5% Ca(OCl)2 and 5% Ca(OCl)2. The human dentin powder and E. coli endotoxin were not able to modulate the antimicrobial effect of the tested irrigants. In a 2 minute-period, the antimicrobial effect of 0.5% NaOCl, 1% NaOCl, 2.5% NaOCl and 0.5% Ca(OCl)2 was inhibited by bovine serum albumin. It was possible to conclude that calcium hypochlorite solutions were able to inhibit E. feacalis growth, in vitro, when diluted to concentrations that were usually employed in Endodontics. The antimicrobial effect of the solutions was proportional to their concentration and can be modulated by bovine serum albumin, in short periods of exposition.