CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Um relevante nÃmero de espÃcies vegetais à descrito como plantas produtoras de um fluido leitoso comumente denominado de lÃtex. Nestas espÃcies, o lÃtex à sintetizado e armazenado sob pressÃo em um sistema de canais formados por cÃlulas altamente especializadas denominadas de laticÃferas, em cujos citoplasmas estÃo presentes todas as estruturas eucariontes em meio à Ãgua, borracha e inÃmeras molÃculas, muitas das quais especÃficas deste conteÃdo. Muitos estudos tÃm sugerido que molÃculas produzidas nestes fluidos participam da defesa vegetal. Neste trabalho, o lÃtex de 5 espÃcies foi coletado e processado em laboratÃrio para obtenÃÃo de suas fraÃÃes protÃicas e estas foram avaliadas quanto a atividade sobre fungos fitopatogÃnicos atravÃs de ensaios de inibiÃÃo da germinaÃÃo de esporos e crescimento de hifas. ProteÃnas do lÃtex de C. procera (PLCp), Cryptostegia grandiflora (PLCg) e Carica candamarcensis (P1 G10) apresentaram atividade antifÃngica enquanto que Plumeria rubra (PLPr) e Euphorbia tirucalli (PLEt) nÃo apresentaram atividade sobre qualquer dos fungos avaliados (Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. e Aspergillus niger). A atividade inibitÃria das fraÃÃes protÃicas se correlacionou diretamente com a presenÃa de atividade proteolÃtica do tipo cisteÃnica presente nas amostras de PLCp, PLCg e P1G10. A atividade antifÃngica foi aumentada na presenÃa de DTT, um ativador destas proteases e foi diminuÃda ou eliminada quanto Ãs amostras foram prÃ-tratadas com iodoacetamida (IAA), um inibidor especÃfico de proteases cisteÃnicas. AlÃm disso, a atividade antifÃngica foi observada quando papaÃna, uma protease cisteÃnica purificada do lÃtex de Carica papaya foi avaliada, mas tripsina e quimotripsina, duas proteases serÃnicas nÃo apresentaram atividade. AtravÃs de cromatografia em coluna de Mono-S Sepharose acoplada ao sistema de FPLC, uma protease cisteÃnica foi isolada de PLCg. A proteÃna purificada (Cg24-I) apresentou massa molecular de 24,118 KDa. A Cg24-I apresentou atividade proteolÃtica mÃxima em pH 8,0 e foi inibida por IAA e E-64, utilizando azocaseÃna e BANA como substratos, respectivamente. Cg24-I inibiu a germinaÃÃo de F. solani e foi capaz de alterar a permeabilidade das membranas dos esporos na concentraÃÃo de 90 ng/ml. Esse conjunto de resultados sugere que proteinases cisteÃnicas de fluidos laticÃferos participam da defesa das plantas contra fungos fitopatogÃnicos e que o provÃvel mecanismo de aÃÃo destas proteÃnas seja a alteraÃÃo da permeabilidade da membrana plasmÃtica destes microrganismos. A descriÃÃo de atividade antifÃngica de proteases cisteÃnicas oriundas de fluidos laticÃferos nÃo à ainda descrita em detalhes na literatura, sendo este um trabalho com carÃter original. / Canal systems containing secretions, such as latex, are widely disseminated in the plant kingdom. These fluids are chemically complex and exhibit intense metabolism. Despite their origin, latex is the cytoplasm of specialized cells growing intrusively into organized tissues and organs, forming an interconnected network allowing latex exudation immediately after tissue damage. Insecticidal effects of latex proteins have been described, however minor studies were devoted to investigate antifungal activities in latex. In this study proteins extracted from latex of Calotropis procera (Ait.) R.Br (PLCp), Plumeria rubra L.(PLPr), Carica candamarcensis Hook F.(P1 G10), Cryptostegia grandiflora (PLCg), and Euphorbia tirucalli L. (PLEt) were tested for antifungal activity against six phytopathogens (Fusarium solani, F. oxysporium, Aspergilus niger, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. and Colletrotricum gloerosporioides). PLCp, PLCg and P1G10 exhibited antifungal activity and PLPr and PLEt were not efetive. Inhibitory activity of the protein fractions correlated with the cysteine-type proteolytic activity found in these fractions. The endogenous proteolytic activity and inhibitory activity on fungal growth were both increased when samples were first activated with DTT, a cysteine proteinase activator. Conversely, pre-treatment of samples with iodoacetamide, an inhibitor of these proteases rendered all samples deficient of both, proteolytic and antifungal activities. Antifungal of activity of cysteine proteinases of latex origin was also confirmed when papain, obtained from latex of Caryca papaya was tested while purified trypsin and chemotrysin, two serine-type proteases were not antifungal. A cysteine proteinase was thus, purified form PLCg by ion exchange chromatography on a Mono-S Sepharose matrix monitored by a FPLC system. The protein, named Cg24-I exhibited molecular mass of 26.118 KDa determined by MALDI spectrometry; maximum of proteolysis at pH 8.0 and inhibited by iodoacetamide and E-64 when assayed with azocazein or BANA as substrates. Cg24-I inhibited germination of F. solani and altered membrane permeability of spores at a minimum concentration of 90 ng/ml. Results present here suggest that cysteine proteinases of laticifer fluids are proteins with antifungal activity capable of damaging spore structure and inhibiting hyphae growth. Reports of antifungal activity of latex proteases are still scarce in literature and this work appears as an important contribution to this field. Furthermore, this work gives important evidence for the multiple defensive role of latex in plants.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Moringa oleifera Lam. à uma planta originÃria do Noroeste da Ãndia, bem adaptada Ãs regiÃes tropicais. De suas sementes foi isolada uma nova proteÃna ligante à quitina, a Mo-CBP3, com propriedades coagulantes e atividade antifÃngica contra o fitopatÃgeno Fusarium solani. As proteÃnas foram extraÃdas da farinha delipidada de sementes com o tampÃo Tris-HCl 0,05 M, pH 8,0, contendo NaCl 0,15 M. O teor mÃdio de proteÃna da farinha correspondeu a 216,44 mgP/gF. O extrato total foi fracionado em albuminas e globulinas por diÃlise contra Ãgua seguida de centrifugaÃÃo. As albuminas foram concentradas com sulfato de amÃnio a 90% de saturaÃÃo. A F0-90% foi submetida à cromatografia de afinidade em coluna de quitina, previamente equilibrada com o tampÃo de extraÃÃo. Foram obtidos um pico nÃo retido e dois picos retidos, correspondentes Ãs proteÃnas ligantes à quitina (CBP). O primeiro destes foi eluÃdo com soluÃÃo de N-acetil-D-glucosamina 0,1 M (PNAG), e o segundo, com Ãcido acÃtico 0,05 M, pH 3,0 (PAC). PNAG foi aplicado em coluna de troca catiÃnica, Resource S, acoplada a um sistema de FPLC, equilibrada com tampÃo acetato de sÃdio 0,05 M, pH 5,2. Dos picos obtidos, o terceiro correspondeu à proteÃna Mo-CBP3 - eluÃda com 0,5 M de NaCl no tampÃo de equilÃbrio. O teor protÃico mÃdio calculado para a proteÃna purificada Mo-CBP3 foi de 1,17 mgP/gF, representando um rendimento final de 0,54% das proteÃnas do extrato total. A massa molecular aparente por SDS-PAGE foi de 18,0 kDa sem o agente redutor e, de 9,0 kDa, na presenÃa deste. O resultado sugere que Mo-CBP3 seja uma proteÃna dimÃrica formada de subunidades idÃnticas, unidas por pontes dissulfeto. A massa molecular de Mo-CBP3, por cromatografia de exclusÃo molecular, foi de 14,34 kDa, e o pI de 10,8. Trata-se de uma glicoproteÃna com 2,5% de carboidratos, que nÃo apresenta atividade hemaglutinante ou quitinÃsica. Sua seqÃÃncia NH2-Terminal obtida foi CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, com 22 aminoÃcidos, confirmando sua caracterÃstica bÃsica. Mo-CBP3 mostrou-se tÃo eficiente quanto o AlK(SO4)2 na capacidade de coagular matÃria em suspensÃo na Ãgua. Mo-CBP3 foi fungicida para esporos de Fusarium solani a 0,1 mg/mL. O aquecimento da proteÃna a 98 ÂC, por 1 h, e a prÃ-incubaÃÃo com o aÃÃcar N-acetil-D-glucosamina, nÃo reverteram sua aÃÃo. Mo-CBP3 mostrou-se capaz de retardar o crescimento micelial do fungo ainda na menor dose testada, 0,05 mg/mL. Mo-CBP3 à inativa contra o oomiceto Pythium oligandrum, que apresenta celulose no lugar da quitina na parede celular. A proteÃna foi, ainda, capaz de inibir cerca de 80% da acidificaÃÃo do meio, por esporos de F. solani, induzida por glicose, o que sugere a influÃncia de Mo-CBP3 sobre as bombas de prÃtons (H+ATPases) presentes na membrana celular dos esporos deste fungo. / Moringa oleifera Lam. is native from Northwest India, well adapted to tropical regions. From its seeds it was isolated a new chitin binding protein, Mo-CBP3, which has coagulant properties and antifungal activity against the phytopathogen Fusarium solani. Proteins were extracted from defatted seeds flour by 0.05 M Tris-HCl buffer, pH 8.0, containing 0.15 M NaCl. The average protein content of the flour was 216.44 mgP/gF. The crude extract was fractionated in albumins and globulins by dialysis and centrifugation. Albumins were concentrated by 90% ammonium sulfate saturation. This fraction was applied into a chitin column, previously equilibrated with the same buffer. An unadsorbed and two adsorbed peaks were obtained. The first adsorbed peak was eluted with 0.1 M N-acetyl-D-glucosamine (PNAG), and the second one, with 0.05 M acetic acid, pH 3.0 (PAC). PNAG was applied into a cation exchange column, Resource S, equilibrated with 0.05 M sodium acetate buffer, pH 5.2. The third peak corresponded to Mo-CBP3 â eluted with 0.5 M NaCl in equilibrium buffer. The protein content of Mo- CBP3 was 1.17 mgP/gF. It represents a final yield of 0.54% of crude extract proteins. Apparent molecular mass by SDS-PAGE was 18.0 kDa in the absence of β-ME, and 9.0 kDa, in its presence. Results suggest that Mo-CBP3 is a dimeric protein, made of identical subunits, linked by disulfide bonds. By molecular exclusion chromatography, calculated molecular mass was 14.34 kDa, pI 10.8. Mo-CBP3 is a glycoprotein with 2.5% of carbohydrates, which has not hemagglutinating or chitinase activities. Its NH2- terminal sequence was CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, with 22 amino acids, conffirming its basic character. Mo-CBP3 was as efficient as AlK(SO4)2 in the capacity of coagulating suspended material in water. Mo-CBP3 (0.1 mg/mL) was fungicide to Fusarium solani spores. Heat treatment of the protein at 98 ÂC, du ring 1 h, and pre incubation with N-acetyl-D-glucosamine, did not reverse its action. Mo-CBP3 was able to retard the mycelial growth of the fungus even at the lowest tested dose of 0.05 mg/mL. Mo-CBP3 was inactive against the oomycete Pythium oligandrum, which has cellulose in spite of chitin in cell wall. Protein was also able to inhibit about 80% of medium acidification, induced by glucose, by F. solani spores, that suggests the influence of Mo-CBP3 over the proton pumps (H+ATPases) present in cellular membranes of F. solani spores.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-08-26T13:52:36Z No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-29T14:47:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-29T14:49:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T14:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Loretta Ennes Sabóia de Melo- Tese de doutorado.pdf: 6738719 bytes, checksum: f6dcfd30112022295372a5129cd38479 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The waste of raw materials is one of the main bottlenecks in the wood industry and much of the waste generated in the processing of wood is discarded in inappropriate places, causing damage to the environment. The production of small objects from wood residues is a socio-economic way to add value to these wastes and for this, wood residues of Bignoniaceae and Fabaceae species have been used, which are often not chemically studied because of the difficulties inherent to the wood acquisition. Considering the availability of wood residues through the INCT Project – Madeiras da Amazônia, this study evaluated the wood residue of Tabebuia serratifolia (Bignoniaceae), Acacia mangium and Dipteryx polyphylla (Fabaceae). Fractionation of methanolic extract of T. serratifolia allowed the isolation and identification of naphthoquinones dehydro-α-lapachone, dehydro-iso-α-lapachone and α-lapachone, in addition to lignans paulownin and cycloolivil. The studies on the A. mangium specie allowed the identification of steroids sitosterol, stigmasterol and a spinasterol derivative, 3-methoxy-4-hydroxy-cinnamic acid, methylparaben, 4- hydroxybenzaldehyde and flavonoid 3,4',7,8-tetrahydroxyflavone. With fractionation of the methanolic extract of D. polyphylla it was possible to isolate four isoflavans, with 3', 7-dihydroxy-4'-methoxy-isoflavan and 3',8-dihyd roxy-4',7-dimethoxy-isoflavan unprecedented in literature. Considering the biological potential of the isolated compounds classes, it was performed the antifungal test in the strains of Cryptococcus neoformans (VN1PCN6) and Candida albicans (ATCC 36232) and the naphthoquinone dehydro -iso-α-lapachone distinguished among the tested substances. / O desperdício de matéria- prima é um dos principais gargalos do setor madeireiro e grande parte dos resíduos gerados no processamento da madeira é descartado em locais inapropriados, causando danos ao meio -ambiente. A produção de pequenos objetos a partir de resíduos madeireiros é uma forma sócio-econômica de agregar valor a esses rejeitos e para isso tem sido utilizados resíduos de espécies de Bignoniaceae e Fabaceae, que muitas vezes não são estudadas quimicamente devido às dificuldades inerentes à obtenção de madeira. Considerando a disponibilidade de resíduos madeireiros por meio do projeto INCT-Madeiras da Amazônia, neste trabalho avaliou-se os resíduos madeireiros de Tabebuia serratifolia (Bignoniaceae), Acacia mangiume Dipteryx polyphylla (Fabaceae). O fracionamento do extrato metanólico de T. serratifolia permitiu o isolamento e identificação das naftoquinonas desidro-α-lapachona, desidro-iso-α-lapachona e α-lapachona, além das lignanas paulownina e cicloolivil. Os estudos com a espécie A. mangium permitiram a identificação dos esteroides sitosterol, estigmasterol e um derivado esterificado do espinasterol, do ácido 3-metoxi-4-hidroxi-cinâmico, metilparabeno, 4-hidroxibenz aldeído e do flavonoide 3,4’,7,8-tetrahidroxiflavona. Com o fracionamento do extrato metanólico de D. polyphylla foi possível o isolamento de quatro isoflavanas, sendo 3’,7-dihidroxi-4’-metoxi-isoflavana e 3’,8-dihidroxi-4’,7-dimetoxi-isoflavana inéditas na literatura. Considerando o potencial biológico das classes das substâncias isoladas, foi realizado o ensaio antifúngico frente às cepas de Cryptococcus neoformans (VN1PCN6) e Candida albicans (ATCC 36232) e a naftoquinona desidro-iso -α-lapachona destacou-se entre as substâncias testadas.

Os peptídeos Antimicrobianos são componentes da imunidade inata de organismos procariotos e eucariotos, e são utilizados na primeira linha da defesa imune desses organismos. Neste trabalho, nós avaliamos os efeitos da peçonha de Tityus serrulatus (PTs) e de sua principal toxina, a TsTX-I, uma -neurotoxina, no crescimento dos fungos. A TsTX-I foi isolada da PTs por cromatografia de troca iônica. Sua pureza foi confirmada por cromatografia líquida de alta eficiência em coluna de fase reversa (C18). A inibição do crescimento de diferentes fungos filamentosos (Neurospora crassa, Penicillum ochrochloron, Penicillum verrucosum, Penicillum waksmanii, Penicillum corylophilum, Penicillum veridicatum, Aspergillus terreus, Aspergillus niger, Aspergillus phoenix, Aspergillus fumigatus e Talaromyces flavus) foi avaliada por ensaio quantitativo em leitor de microplacas como descrito por (Broekaert et al., 1990). A PTs (100 e 500 g) foi mais ativa na inibição do crescimento de A. nidulans, A. terreus, P. verrucosum e P. corylophilum. A TsTX-I (6, 3, 1,5 e 0,7 g) mostrou atividade antifúngica dose-dependente contra A. nidulans, inibindo até 100% o crescimento em concentrações superiores a 3 g/poço. A inibição do crescimento de A. nidulans foi mais intensa quando a TsTX-I foi adicionada ao meio de cultura no tempo inicial do que após 6 h de germinação livre. A adição de íons Ca++ ao meio de cultura potencializou a ação da TsTX-I contra A. nidulans, P. verrucosum e P.corylophilum. Ensaios realizados na presença de um conhecido bloqueador de canais para Na+, a Tetrodotoxina, mostraram que esta não foi capaz de interferir na atividade antifúngica da TsTX-I. A TsTX-I induz despolarização em terminações nervosas por alterar o mecanismo de ativação de canais para sódio e peptídeos da peçonha de escorpiões que atuam como desestabilizadores de membrana parecem ser parte de um sistema de defesa antibacteriano e antifúngico destes animais. É provável que a TsTX-I induza a despolarização das membranas dos fungos e este efeito pode estar, pelo menos em parte, relacionado à sua atividade antifúngica. / Antimicrobial peptides appear to be ubiquitous and multipotent components of the innate immune defense arsenal used by both prokaryotic and eukaryotic organisms. They are used in the first line of immune defense. In this work, we evaluate the effects of Tityus serrulatus venom (Tsv) and its major toxin TsTX-I, a -neurotoxin, on fungi growth. TsTX-I was isolated from Tsv by ion-exchange chromatography. Its purity was confirmed by reverse-phase (C18) high performance liquid chromatography. The growth inhibition of different filamentous fungi (Neurospora crassa, Penicillum ochrochloron, Penicillum verrucosum, Penicillum waksmanii, Penicillum corylophilum, Penicillum veridicatum, Aspergillus terreus, Aspergillus niger, Aspergillus phoenix, Aspergillus fumigatus, and Talaromyces flavus ) was evaluated by quantitative microplate reader assay (Broekaert et al., 1990). Tsv (100 g and 500 g) was more active in inhibiting growth of A. nidulans, A. terreus, P. verrucosum and P. corylophilum. TsTX-I (6 g, 1.5 g and 0.7 g) showed dose-dependent antifungal activity against A. nidulans, inhibiting 100% of fungal growth at concentration of 3 g/well. The growth inhibition of A. nidulans was more intense when TsTX-I was added to culture medium at the initial time than after 6 h of free germination. The addition of Ca++ ions on culture medium increased TsTX-I action against A. nidulans, P. verrucosum and P. corylophilum. Assays carried out in the presence of tetrodotoxin, a known Na+ channel blocker, showed that it was not able to interfere on TsTX-I antifungal activity against A. nidulans. TsTX-I induces depolarization on nerve endings and it is known that the action of membrane destabilizing peptides in scorpion venoms seems to be part of an antibacterial and antifungal defense system. It is probably that TsTX-I induces depolarization of fungi membranes and this effect is, at least in part, responsible for its antifungal activity.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-11-06T12:40:20Z No. of bitstreams: 1 rafaeldeoliveiracorrea.pdf: 2314461 bytes, checksum: f68d67f14fca4892ff6a3da834575d63 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-11-09T14:20:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rafaeldeoliveiracorrea.pdf: 2314461 bytes, checksum: f68d67f14fca4892ff6a3da834575d63 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-09T14:20:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rafaeldeoliveiracorrea.pdf: 2314461 bytes, checksum: f68d67f14fca4892ff6a3da834575d63 (MD5) Previous issue date: 2017-08-28 / A candidíase acomete a cavidade oral e é uma doença ocasionada pela Candida albicans e por outras espécies relacionadas, tais como: C. glabrata, C. krusei, C. guilliermondii. As infecções por cândida consistem atualmente em um problema de Saúde Pública. Isto se deve ao aumento de hospedeiros imunodeprimidos, tratamento prolongado com antibacterianos dentre outros. O uso de agentes antifúngicos eficientes contra leveduras é um importante meio de controle destas infecções bucais. Vários agentes antimicrobianos de origem vegetal estão sendo investigados devido as suas possíveis propriedades farmacológicas. O uso de plantas medicinais é uma prática usual pela população atual sendo que muitas plantas apresentam atividade biológica benéfica ao ser humano. Os extratos vegetais podem contribuir para a produção de medicamentos eficazes. Espécies vegetais como Ficus insipida Willd (caxinguba ou cuaxinguba), Brosimum parinarioides Ducke (amapá), Byrsonima intermedia A. Juss (saratudo), Curatella americana (caimbé), Anacardium spp (cajuí), apresentam notáveis propriedades antibacterianas, antifúngicas, anti-inflamatórias e antineoplásicas e por isso, neste estudo foram avaliados seus extratos etanólicos (brutos). Os principais objetivos foram: determinar o potencial antifúngico destes cinco extratos secos dessas espécies vegetais, frente às principais linhagens causadoras de candidíase oral (Candida albicans, C. glabrata, C. krusei e C. guilliermondii) além de estabelecer a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM); verificar as alterações morfológicas e estruturais nas linhagens de Candida por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV); avaliar a toxicidade desses extratos em modelos de células de fibroblastos de camundongos (L929) e queratinócitos (HaCaT) e modelo de Artemia salina. Os extratos vegetais demonstraram potencial antifúngico com CIM e CFM de 0,0097µg/mL e 5µg/mL. Por meio das eletromicrografias foi possível evidenciar alterações morfológicas nas estruturas fúngicas das quatro espécies submetidas à ação dos extratos secos selecionados, o que demonstra sua ação sobre os fungos avaliados. Os extratos revelaram baixa toxicidade frente as células L929 e HaCaT e tóxicos para Artemia salina (IC50 = 80,70µg/mL). Por meio dos resultados apresentados neste trabalho é possível atribuir aos extratos ação antifúngica frente aos principais fungos causadores da candidíase oral. O extrato de Byrsonima intermedia apresentou melhor perfil antifúngico, demonstrando ser o mais promissor deles / Candidiasis affects the oral cavity and is a disease caused by Candida albicans and other related species, such as C. glabrata, C. krusei, C. guilliermondii. Candida infections are currently a public health problem. This is due to the increase of immunosuppressed hosts, prolonged treatment with antibacterial among others. The use of effective antifungal agents against yeasts is an important means of controlling these oral infections. Several antimicrobial agents of vegetable origin are being investigated because of their possible pharmacological properties. The use of medicinal plants is a common practice by the current population and many plants have biological activity that is beneficial to humans. Plant extracts can contribute to the production of effective medicines. Plant species such as Ficus insipida Willd (Caxinguba or Cuaxinguba), Brosimum parinarioides Ducke (amapá), Byrsonima intermedia A. juss (saratudo), Curatella americana (caimbe), Anacardium spp (cajuí), present remarkable antibacterial, antifungal, antiinflammatory properties and antineoplastic and therefore, in this study were evaluated their (crude) ethanol extracts. The main objectives were: to determine the antifungal potential of these five dry extracts of these plant species, against the main oral Candida albicans (Candida albicans, C. glabrata, C. krusei and C. guilliermondii) lines, besides establishing the minimum inhibitory concentration ) and the minimum fungicidal concentration (CFM); to verify the morphological and structural alterations in Candida strains by scanning electron microscopy (SEM); to evaluate the toxicity of these extracts in mouse fibroblast cell (L929) and keratinocyte (HaCaT) models and Artemia saline model. Plant extracts showed antifungal potential with MIC and CFM of 0.0097 μg / mL and 5 μg / mL. By means of the electromicrographs it was possible to show morphological changes in the fungal structures of the four species submitted to the action of the selected dry extracts, which demonstrates their action on the evaluated fungi. The extracts showed low toxicity to L929 and HaCaT cells and toxic to Artemia saline (IC 50 = 80.70 μg / ml). Through the results presented in this work it is possible to attribute antifungal extracts to the main fungi causing oral candidiasis. The extract of Byrsonima intermedia presented better antifungal profile, proving to be the most promising of them

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:29:57Z No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: ver departamento on 2018-06-14T11:42:19Z (GMT) / Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-14T11:47:12Z No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-06-14T11:47:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-14T11:47:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marianylopesdacostafolly.pdf: 3168369 bytes, checksum: de896015afed496005f9be77af62d0e0 (MD5) Previous issue date: 2018-03-01 / O constante aumento da incidência de doenças fúngicas oportunistas tem se tornado um importante problema de saúde pública, principalmente após o advento da SIDA quando o número de indivíduos imunocomprometidos aumentou drasticamente. A criptococose é uma importante micose sistêmica causada por fungos do gênero Cryptococcus, com estimativa global de um milhão de novos casos e aproximadamente 600.000 mortes por ano. As opções terapêuticas atuais de criptococose são restritas, tanto pelo aumento da resistência dessas leveduras frente aos fármacos utilizados quanto pela elevada toxicidade dos antifúngicos para o organismo humano sendo necessária a busca contínua por novas entidades químicas para o tratamento de infecções. Nesse contexto, os produtos naturais e derivados constituem uma fonte inestimável de substâncias com potencial biológico. Xylosma ciliatifolia, popularmente conhecida como sucará, é uma árvore semidecídua, nativa do Brasil, podendo também ser encontrada em outros países. O presente trabalho avaliou a atividade antifúngica das folhas de X. ciliatifolia, in vitro, frente à C. gattii e C. neoformans. Foi determinada a CIM do extrato etanólico e das frações hexano, diclorometano, acetato de etila, butanol e resíduo aquoso. A fração acetato de etila (FAXC) apresentou atividade promissora e foi selecionada para os ensaios subsequentes. Através do ensaio de atividade fungicida/fungistática observou-se que FAXC possui ação fungicida. No ensaio de interação com fluconazol e anfotericina B, in vitro, não foi observada interferência na ação dos fármacos e o ensaio de curva de morte demonstrou que FAXC apresenta um comportamento dose dependente. FAXC não alterou o valor de CIM na presença de sorbitol, indicando que sua ação possivelmente não se dá diretamente através de parede celular. Através da quantificação de ergosterol foi possível observar que FAXC interfere na biossíntese do esteroide, podendo esse ser um dos mecanismos de ação. Foi avaliada a produção de EROs e PRNs nas células fúngicas pela emissão de fluorescência e após tratamento com FAXC houve um aumento da produção de peroxinitrito, que causa danos celulares. Foram medidos os produtos da peroxidação lipídica como substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), onde evidenciou-se a peroxidação lipídica nas membranas celulares fúngicas em uma maior concentração. O tamanho do diâmetro celular e cápsula de Cryptococcus foi avaliado através da comparação da contagem de células tratadas e não tratadas coradas com a tinta da índia. Após exposição à concentração equivalente à metade da CIM o diâmetro celular diminuiu sugerindo uma tentativa de defesa, mas não houve alteração no tamanho da cápsula. A carga da superfície celular foi avaliada por potencial zeta que também não demonstrou alteração. A interação entre FAXC e os fungos, avaliada por ITC, é provavelmente fraca como as interações não polares. Por fim, verificou-se pelo ensaio colorimétrico de MTT, que FAXC não apresenta citotoxicidade nas concentrações ativas, sendo esta dose dependente. / The steady increase in the incidence of opportunistic fungal diseases has become a major public health problem, especially after the advent of AIDS when the number of immunocompromised individuals increased dramatically. Cryptococcosis is an important systemic mycosis caused by fungi of the genus Cryptococcus, with a global estimate of one million new cases and approximately 600,000 deaths per year. The current therapeutic options of cryptococcosis are restricted, both by the increase of the resistance of these yeasts to the drugs used and by the high toxicity of the antifungal to the human organism being necessary the continuous search for new chemical entities for the treatment of infections. In this context, natural products and derivatives are an invaluable source of substances with biological potential. Xylosma ciliatifolia, popularly known as Sucará, is a semi-deciduous tree, native to Brazil, and can also be found in other countries. The present work evaluated the antifungal activity of X. ciliatifolia leaves, in vitro, against C. gattii and C. neoformans. The MIC of the ethanolic extract and the fractions hexane, dichloromethane, ethyl acetate, butanol and aqueous residue were determined. The ethyl acetate fraction (FAXC) showed promising activity and was selected for subsequent trials. Through the fungistatic / fungistatic activity assay it was observed that FAXC has fungicidal action. In the interaction test with fluconazole and amphotericin B, in vitro, no interference was observed in the action of the drugs and the death curve assay demonstrated that FAXC shows a dose-dependent behavior. FAXC didn't change the MIC value in the presence of sorbitol, indicating that its action possibly don´t occur directly through the cell wall. Through the quantification of ergosterol it was possible to observe that FAXC interferes in the biosynthesis of the steroid, being this one of the mechanisms of action. The production of ROS and RNS in fungal cells was evaluated by the emission of fluorescence and after treatment with FAXC there was an increase in peroxynitrite production, which causes cell damage. Lipid peroxidation products were measured as thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), where lipid peroxidation was evidenced in fungal cell membranes in a higher concentration. Cell size and capsule size of Cryptococcus was evaluated by comparing the count of treated and untreated cells stained with the India ink. After exposure to the concentration equivalent to half of the MIC, the cell diameter decreased suggesting a defense attempt, but there wasn't change in capsule size. Cell surface loading was evaluated by zeta potential, which also showed no change. The interaction between FAXC and fungi, as assessed by ITC, is probably weak as non-polar interactions. Finally, it was verified by the MTT colorimetric assay that FAXC didn't present cytotoxicity in the active concentrations, being this dose dependent.

Dans le cadre d’une convention de thèse CIFRE en collaboration de recherche entre la société Pollenergie et le Centre de Coopération Internationale en Recherche Agronomique pour le Développement (CIRAD), le potentiel antifongique de la propolis a été étudié. A cet effet, six échantillons de propolis provenant de régions géographiques différentes (France et Brésil) et d’origines botaniques variées (genre Populus, Dalbergia ecastophyllum et Baccharis dracunculifolia) ont été analysés.Les Extraits Ethanoliques de Propolis (EEP) mis au point, riches en composéspolyphénoliques (de 12,8 ± 0,4 à 16,2 ± 0,3 g EAG.l-1) présentent une grande diversité de classes de molécules bioactives selon leur origine botanique. Les polyphénols identifiés dans les extraits de propolis de Populus (France) sont principalement des flavonoïdes et leurs dérivés (galangine, pinobanksine, chrysine) et des acides-phénols (acides p-coumarique et caféique) et dans les extraits de propolis verte de Baccharis dracunculifolia et rouge de Dalbergia ecastophyllum (Brésil) ce sont respectivement des acides-phénols et leur dérivés prénylés (artépilline C, acide p-coumarique) et des composés isoflavonoïdiques (vestitol, médicarpine).Tous les EEP ont démontré un potentiel antifongique in vitro, variable selon les espèces botaniques, à deux stades de développement d’une souche phytopathogène (Colletotrichum musae), isolée de la pourriture de couronne de la banane. Deux extraits de Populus (France) en particulier ont montré la plus forte efficacité contre C. musae.Un extrait aqueux de propolis rouge de Dalbergia ecastophyllum a démontré la plus grande efficacité in vitro. Cet extrait, testé ensuite in vivo sur trois maladies de conservation de la banane a prouvé tout son potentiel antifongique comme traitement alternatif et son efficacité en augmentant la durée de conservation des bananes à l’export. / In the framework of a CIFRE thesis agreement in collaboration between Pollenergie and the Center for International Cooperation in Agronomic Research for Development (CIRAD), the antifungal potential of propolis has been studied. For this purpose, six samples of propolis from different geographical regions (France and Brazil) and various botanical origins (genus Populus, Dalbergiaecastophyllum and Baccharis dracunculifolia) were analyzed.The Ethanolic Extracts of Propolis (EEP) finalized, rich in polyphenolic compounds (from 12.8 ± 0.4 to 16.2 ± 0.3 g EAG.L-1), exhibit a great diversity of classes of bioactive molecules according to their botanical origin. The polyphenols identified in propolis extracts of Populus (France) are mainlyflavonoids and their derivatives (galangin, pinobanksin, chrysin) and acids-phenols (p-coumaric and caffeic acids). In contrast, the extracts of green propolis of Baccharis dracunculifolia and red from Dalbergia ecastophyllum (Brazil) they are respectively phenol acids and their prenylated derivatives(artepillin C, p-coumaric acid) and isoflavonoid compounds (vestitol, medicarpin).All EEPs have demonstrated an in vitro antifungal potential, which varies according to botanical species, at two stages of development of a phytopathogenic strain (Colletotrichum musae), isolated from the crown rot of banana. Two extracts of Populus (France) in particular showed the greatest efficacy against C. musae.An aqueous extract of red propolis from Dalbergia ecastophyllum demonstrated the greatest efficiency in vitro. This extract, which was then tested in vivo on three banana conservation diseases, proved its antifungal potential as an alternative treatment and its effectiveness in increasing the shelf life of bananas for export.

In the present study, in vitro antifungal activity of essential oils obtained from Origanum vulgare (oregano), Cinnamomum zeylanicum (cinnamon), Lippia graveolens (Mexican oregano), Thymus vulgaris (thyme), Salvia officinalis (sage), Rosmarinus officinalis (rosemary), Ocimum basilicum (basil) e Zingiber officinale (ginger) was assessed against Candida glabrata isolates. A group of 36 fluconazole-susceptible C. glabrata isolates were used and another group, derived from the first, obtained after in vitro induction of the fluconazole-resistance, totalizing 72 isolates tested. The methodology used was broth microdilution, cancentrations of 50 μg/mL, 100 μg/mL, 200 μg/mL, 400 μg/mL, 800 μg/mL, 1600 μg/mL and 3200 μg/mL were used, through which Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Fungicidal Concentration (MFC) were determined. Thyme, sage, rosemary, basil and ginger essential oils showed no antifungal activity on the tested concentrations. Antimicrobial activity lower than or equal to 3200 μg/mL was observed for oregano, Mexican oregano and cinnamon essential oils, being oregano essential oil the most potent. Oregano essential oil has shown the best antifungal activity against fluconazole-susceptible C. glabrata group. Likely, Mexican oregano essential oil has shown the best antifungal activity against fluconazole-susceptible C. glabrata group. And cinnamon essential oil has shown the best antifungal activity against fluconazole-resistant isolates of C. glabrata. / No presente estudo, avaliou-se a atividade antimicrobiana in vitro dos óleos essenciais obtidos de Origanum vulgare (orégano), Cinnamomum zeylanicum (canela), Lippia graveolens (orégano mexicano), Thymus vulgaris (tomilho), Salvia officinalis (sálvia), Rosmarinus officinalis (alecrim), Ocimum basilicum (manjericão) e Zingiber officinale (gengibre) frente aos isolados de Candida glabrata. Foi utilizado um grupo de 36 isolados de C. glabrata sensíveis ao fluconazol e outro grupo, derivado do primeiro, obtido após indução a resistência ao fluconazol in vitro, totalizando 72 isolados testados. Empregou-se a metodologia de microdiluição em caldo, utilizando-se concentrações de 50 μg/mL, 100 μg/mL, 200 μg/mL, 400 μg/mL, 800 μg/mL, 1600 μg/mL e 3200 μg/mL, através do qual se determinou Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM). Os óleos essenciais de tomilho, sálvia, alecrim, manjericão e gengibre não evidenciaram atividade antifúngica nas concentrações testadas. Atividade antimicrobiana inferior ou igual à máxima testada (3200 μg/mL) foi observada para os óleos essenciais de orégano, orégano mexicano e canela. O óleo essencial de orégano apresentou a atividade antimicrobiana mais potente. Quando analisada a diferença entre os dois grupos de micro-organismos, C. glabrata sensível ao fluconazol mostrou-se mais suscetível ao óleo essencial de orégano e orégano mexicano, e C. glabrata resistente ao fluconazol mostrou-se mais suscetível ao óleo essencial de canela.

Orientadores: Susanne Rath, Sonia Claudia do Nascimento de Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-27T01:49:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Porto_RafaelSilveira_M.pdf: 1983268 bytes, checksum: f89fcb853911e559df9889c577be5a8e (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O Brasil é um dos maiores produtores de frutas do mundo, no entanto, estima-se que doenças pós-colheita possam gerar perdas de até 50% em sua produção. A forma mais comum de tratamento para essas doenças envolve a aplicação de fungicidas sintéticos. Contudo, nos últimos anos, a demanda por tratamentos alternativos tem crescido, com destaque para o uso de biopesticidas, produtos desenvolvidos a partir de plantas, microrganismos e insetos. Este trabalho teve como objetivo investigar a presença dos compostos bioativos (4Z)-lachnophyllum lactona, (4Z,8Z)-matricaria lactona e (2Z,8Z)-matricaria ester nos espécimes brasileiros da planta Conyza canadensis, bem como avaliar a atividade antifúngica dessas substâncias isoladas contra diversos fungos associados a doenças pós-colheita de frutas. Por cromatografia flash preparativa foi possível isolar a (4Z)-lachnophyllum lactona e a (4Z,8Z)-matricaria lactona a partir de extratos da planta obtidos com diclorometano. Os compostos foram caracterizados por GC-MS/MS, NMR 1H e 13C, 1H-1H COSY e 1H-13C HSQC. Foram realizados ensaios de difusão em disco com 10 fungos filamentosos causadores de doenças pós-colheita em frutas. Os fungos Aspergillus niger, Cladosporium spp. e Penicillium digitatum se mostraram susceptíveis ao tratamento e, para eles, a concentração mínima inibitória dos compostos variou de 32 a 64 µg mL-1. Também foi desenvolvido um método de extração empregando água quente pressurizada, no qual foram otimizados os parâmetros de temperatura (100 °C), tempo de ciclo (1 min) e número de ciclos (quatro). Com essa técnica foi possível obter um rendimento de 1,46 mg g-1 e 0,24 mg g-1 para a (4Z)-lachnophyllum lactona e a (4Z,8Z)-matricaria lactona, respectivamente. O extrato aquoso da Conyza canadensis pode ser aplicado diretamente nos frutos com a vantagem de não conter resíduos de solventes orgânicos tóxicos / Abstract: razil is one of the largest fruit producers in the world. Nevertheless, it is estimated that postharvest diseases can lead to losses of up to 50% in its production. The most common treatment for these diseases involves the application of synthetic fungicides. Nonetheless, in recent years, the demand for alternative treatments has increased, especially for the use of biopesticides, products developed from plants, microorganisms and insects. This study aimed to investigate the presence of the bioactive compounds (4Z)-lachnophyllum lactone, (4Z,8Z)-matricaria lactone and (2Z,8Z)-matricaria ester in Brazilian specimens of the weed Conyza canadensis, as well as to evaluate the antifungal activity of these isolated substances against several fungi associated with postharvest diseases of fruits. With the use of preparative flash chromatography it was possible to isolate (4Z)-lachnophyllum lactone and (4Z,8Z)-matricaria lactone from plant extracts obtained with dichloromethane. The compounds were characterized by GC-MS/MS, NMR 1H e 13C, 1H-1H COSY and 1H-13C HSQC. Disk diffusion assays were performed in order to investigate the activity of the isolated compounds against 10 filamentous fungi regarded as common postharvest pathogens of fruits. Aspergillus niger, Cladosporium spp. and Penicillium digitatum proved susceptible to the treatment and, for them, the minimum inhibitory concentration of the compounds varied from 32 to 64 µg mL-1. An extraction method using pressurized hot water was also developed, in which the parameters of temperature (100 ° C), cycle time (1 min) and number of cycles (four) were optimized. By using this technique, it was possible to obtain a yield of 1.46 mg g-1 and 0.24 mg g-1 for the (4Z)-lachnophyllum lactone and (4Z,8Z)-matricaria lactone, respectively. The aqueous extract of Conyza canadensis can be applied directly on fruits with the advantage of not containing residues of toxic organic solvents / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-27T13:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_GustavoSteffende_M.pdf: 767493 bytes, checksum: c194394bcc80ba1852de47976dba16ad (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A cultura do morango é de grande importância no contexto agrícola mundial, com uma produção anual que supera 4,5 milhões de toneladas. Porém, as características desta fruta a tornam altamente susceptível a fatores físicos e biológicos de deterioração, tornando-a altamente perecível e acarretando altos níveis de perdas no campo e na pós-colheita. Dentre os fatores biológicos tem destaque a ação de fungos fitopatogênicos, dentre os quais o 'Botrytis cinerea' e o' Colletotrichum gloeosporioides' tem papel principal. Dentre as alternativas naturais para controle destes fitopatógenos, os óleos essenciais de plantas medicinais e aromáticas vêm sendo investigados. Neste contexto, no presente trabalho a atividade antifúngica de óleos essenciais de nove espécies de 'Citrus' e de 'Cymbopogon citratus' foi avaliada in vitro contra 'B. cinerea' e' C. gloeosporioides'. Os óleos de 'Citrus sinensis' e 'C. citratus' foram os mais ativos in vitro (MIC ¿ 0,25 e 0,06 mg.mL-1, respectivamente) e, portanto, selecionados para os ensaios com morangos in natura, visando manter sua qualidade pós-colheita. Os ensaios foram conduzidos sob duas condições ambientais, ou seja, sob condições ambiente de armazenamento (25 ºC) e em armazenamento refrigerado (10 ºC). Aplicados na concentração 1,0 mg.mL-1 , o óleo essencial de 'C. sinensis' mostrou-se mais eficaz sob condições ambiente de armazenamento, e a mistura dos dois óleos em partes iguais em armazenamento refrigerado. Em ambas as condições, melhores resultados foram obtidos através da aplicação por contato direto. Os óleos essenciais foram ainda incorporados a um filme de revestimento composto por matriz de metil-celulose e testados in vitro quanto ao seu potencial de inibição de 'B. cinerea'. Nestas condições, o óleo essencial de 'C. sinensis' mostrou-se o mais eficiente. Através dos resultados foi possível concluir que os óleos essenciais são uma opção viável para o controle de fitopatógenos em morango e para manutenção de sua qualidade pós-colheita / Abstract: The strawberry crop has great importance in agricultural world wide context, with an annual production exceeding 4.5 million tons. However, the characteristics of this fruit make it highly susceptible to physical and biological damage, making it easily perishable and causing losses in field and postharvest. Among the biological factors, the action of phytopathogenic fungi such as 'Botrytis cinerea' and "Colletotrichum gloeosporioides" have a main role. Natural alternatives have been proposed in order to replace synthetic products currently used in control of these plant pathogens, of which the essential oils from medicinal and aromatic plants have demonstrated good potential. In this context, the present study evaluated the in vitro antifungal activity of the essential oils from nine 'Citrus' species and from' Cymbopogon citratus' against 'B. cinerea' and 'C. gloeosporioides'. 'Citrus sinensi's and 'C. citratus' essential oils showed highest activities (MIC values 0.25 mg.mL-1 and 0.06 mg.mL-1, respectively) and were selected for the assays with in natura strawberries aiming at maintaining its postharvest quality. The tests were conducted under two simulated environmental conditions, ie, environment conditions of storage (25 ºC) and refrigerated storage (10 ºC). The crude essential oil of 'C. sinensis' (1.0 mg.mL-1) was the more effective in environmental conditions of storage, and the mixture of the two oils (1:1 ¿ 1.0 mg.mL-1) in refrigerated storage. In both conditions, best results were obtained when the oils were applied by direct contact. The essential oils were also incorporated into a coating film consisting of methyl cellulose matrix and tested to their 'in vitro' inhibitory potential against 'B. cinerea'. Accordingly, the essential oil of 'C. sinensis' proved to be the most effective as antifungal. The results allowed conclude that essential oils are a viable option for controlling phytopathogenic fungi in strawberry and for continuing postharvest quality / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos